專利名稱：：用于紡織品染色的酶促方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及染色物質(zhì)的方法，該方法包括(a)在包含一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物的水溶液中浸泡所說的物質(zhì)；和(b)在水溶液中用(ⅰ)過氧化氫源和表現(xiàn)出過氧化物酶活性的酶或(ⅱ)對所說的一種或多種芳族或雜芳族化合物表示出氧化酶活性的酶處理浸濕的物質(zhì)；其中所說的物質(zhì)是由毛皮、獸皮、皮革、絲綢或羊毛制造的織物、紗線、纖維、衣服或薄膜。發(fā)明背景紡織品的染色經(jīng)常被認(rèn)為是在紡織品和衣服的制造中最重要和最昂貴的單一步驟。在紡織業(yè)中，目前有兩種主要類型的工藝用于染色，即分批染色和連續(xù)染色。在分批工藝中，使用噴嘴、滾筒，以及還原染色器等。在連續(xù)工藝中，使用軋染系統(tǒng)等。參見，例如I．D．Rattee、InC.M．Carr(Ed．)，“紡織品工業(yè)化學(xué)”，Blackic學(xué)術(shù)和專業(yè)出版社，格拉斯哥，1995，p．276。染料的主要種類是偶氮染料(單-，二-，三-等)，羰基染料(蒽醌和靛藍(lán)衍生物)，花青染料，二-和三苯基甲烷和酞菁染料。所有這些染料都包含有產(chǎn)生顏色的發(fā)色團(tuán)。有三種類型涉及氧化／還原機(jī)制的染料，即還原染料、硫化染料和偶氮染料。在這些染色中，氧化／還原步驟的目的在于使染料在可溶性形式和不溶性形式之間變化。氧化還原酶(例如，氧化酶和過氧化物酶)是本領(lǐng)域熟知的。一類氧化還原酶是漆酶(苯二醇氧氧化還原酶)，它們是包含多酮的酶，其催化酚類和相關(guān)化合物的氧化。漆酶介導(dǎo)的氧化作用導(dǎo)致從合適底物產(chǎn)生芳香基中間產(chǎn)物，這些中間產(chǎn)物的最終偶聯(lián)給出二聚反應(yīng)產(chǎn)物、寡聚反應(yīng)產(chǎn)物和多聚反應(yīng)產(chǎn)物的結(jié)合體。這些反應(yīng)本質(zhì)上對生物合成途徑重要，它們導(dǎo)致黑色素、安哥斯吐那生物堿類、毒素、木質(zhì)素，以及腐殖酸的形成。另一類氧化還原酶是在過氧化氫存在下氧化化合物的過氧化物酶。對于染發(fā)來說，發(fā)現(xiàn)漆酶是有用的。參見，例如PCT申請No．PCT／US95／06815和PCT／US95／06816。歐洲專利No．0504005公開了漆酶可以用于在6.5和8．0之間的pH范圍對毛織物染色。Saunders等，過氧化物酶，倫敦，1964，p．10ff公開了過氧化物酶作用于各種氨基化合物和酚化合物，導(dǎo)致顏色的產(chǎn)生。日本專利申請出版物No．6-316874公開了對棉花進(jìn)行染色的一種方法，這種方法包括用包含氧的介質(zhì)處理棉花，其中氧化還原酶選自由抗壞血酸氧化酶、膽紅素氧化酶、過氧化氫酶、漆酶、過氧化物酶和多酚氧化酶組成的組，這些酶用于產(chǎn)生氧。WO91／05839公開了氧化酶和過氧化物酶對抑制紡織物染料的轉(zhuǎn)移是有用的。本發(fā)明的目的是提供一種對紡織品織物進(jìn)行染色的酶促方法。發(fā)明概要本發(fā)明涉及一種使物質(zhì)著色的方法，該方法包括(a)在包含一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物的水溶液中浸泡所說的物質(zhì)，每種這樣的化合物可以是可以不是被一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)或取代基取代的，其中，每一個(gè)官能團(tuán)或取代基選自由鹵素、磺基、磺酸根合、磺氨基、硫烷基、氨基、酰氨基、硝基、偶氮基、亞氨基、羧基、氰基、甲酰基、羥基、鹵羰基、氨基甲?；㈦寤?、膦酸根合、膦?；?、C1-18-烷基、C1-18-鏈烯基、、C1-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-氧羰基、C1-18-氧代烷基、C1-18-烷基硫烷基、C1-18-烷基磺?；⒂梢粋€(gè)，二個(gè)或三個(gè)C1-18烷基基團(tuán)取代的C1-18-烷基亞氨基或氨基組成的組；和(b)在水溶液中用(ⅰ)過氧化氫源和表現(xiàn)出過氧化物酶活性的酶或(ⅱ)對所說的一種或多種芳族化合物或雜芳族化合物表現(xiàn)出氧化酶活性的酶處理浸濕的物質(zhì)；其中所說的物質(zhì)是由毛皮、獸皮、皮革、絲綢或羊毛制造的織物、紗線、纖維、衣服或薄膜。發(fā)明詳述對于染色物質(zhì)利用氧化還原酶有幾個(gè)重要的優(yōu)點(diǎn)。例如，本發(fā)明的方法中所使用的染色系統(tǒng)是利用廉價(jià)的有色前體。此外，在該方法中的溫和條件將導(dǎo)致更少的織物破壞。本發(fā)明的方法可用于染色物質(zhì)如織物、紗線、纖維、衣服和薄膜。優(yōu)選地，該物質(zhì)是由毛皮制造的。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該物質(zhì)是由獸皮制造的。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該物質(zhì)是由皮革制造的。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該物質(zhì)是由絲綢制造的。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該物質(zhì)是由羊毛制造的。在本發(fā)明的方法中，在包含一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族合物或雜芳族化合物的水溶液中浸泡所說的物質(zhì)，每種這樣的化合物可以是可以不是被一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)或取代基取代的，其中，每一個(gè)官能團(tuán)或取代基選自由鹵素、磺基、磺酸根合、磺氨基、硫烷基、氨基、酰氨基、硝基、偶氮基、亞氨基、羧基、氰基、甲酰基、羥基、鹵羰基、氨基甲酰基、脲基、膦酸根合、膦?；1-18-烷基、C1-18-鏈烯基、、C1-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-氧羰基、C1-18-氧代烷基、C1-18-烷基硫烷基、C1-18-烷基磺?；⒂梢粋€(gè)，二個(gè)或三個(gè)C1-18烷基基團(tuán)取代的C1-18-烷基亞氨基或氨基組成的組。所有的C1-18-烷基、C1-18-鏈烯基和C1-18炔基基團(tuán)可以是被任何前面的官能團(tuán)或取代基單-，二-或多取代的。為了本發(fā)明目的的多環(huán)化合物具有2，3或4個(gè)芳香環(huán)。這些單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物的例子包括(但不限于)；吖啶、蒽、天藍(lán)烴、苯、苯并呋喃、苯并噻唑、苯并噻唑啉、咔啉、咔唑、噌啉、苯并二氫吡喃、苯并吡喃、chrysene、富烯、呋喃、咪唑、吲唑、茚、吲哚、二氫吲哚、中氮茚、異噻唑、異喹啉、異噁唑、萘、亞萘、萘基吡啶、噁唑、北菲、吩嗪、酞嗪，喋啶、嘌呤、吡喃、吡唑、芘、噠嗪、噠酮、吡啶、嘧啶、吡咯、喹唑啉、喹啉、喹喔啉、磺酰基、噻吩和三嗪，每種化合物可以是可以不是取代的。這些化合物的例子包括(但不限于)芳族二胺、氨基苯酚、酚類和萘酚。用于本發(fā)明中的芳族化合物和雜芳族化合物包括(但不限于)3，4-二乙氧基苯胺，2-甲氧基-對-苯二胺，1-氨基-4-b-甲氧基乙氨基苯(N-b-甲氧基乙基-對-苯二胺)，1-氨基-4-二-(b-羥乙基)-氨基苯(N，N-二-(b-羥乙基)-對-苯二胺)，2-甲基-1，3-二氨基-苯(2，6-二氨基甲苯)，2，4-二氨基甲苯，2，6-二氨基吡啶，1-氨基-4-磺酸根合-苯，1-N-甲基磺酸根合-4-氨基苯，1-甲基-2-羥基-4-氨基-苯(3-氨基鄰-甲酚)，1-甲基-2-羥基-4-b-羥乙基氨基-苯(2-羥基-4-羥基乙氨基-甲苯)，1-羥基-4-甲基氨基-苯(對-甲基氨基苯酚)，1-甲氧基-2，4-二氨基-苯(2，4-二氨基苯甲醚)，1-乙氧基-2，3-二氨基-苯(2，4-二氨基苯乙醚)，1-b-羥乙氧基-2，4-二氨基-苯(2，4-二氨基苯氧基乙醇)，1，3-二羥基-2-甲基苯(2-甲基間苯二酚)，1，2，4-三羥基苯，1，2，4-三羥基-5-甲基苯(2，4，5-三羥基甲苯)，2，3，5-三羥基甲苯，4，8-二磺酸根合-1-萘酚，3-磺酸根合-6-氨基-1-萘酚(J酸)，6，8-二磺酸根合-2-萘酚，1，4-苯二胺，2，5-二氨基甲苯，2-氯代-1，4-苯二胺，2-氨基酚，3-氨基酚，4-氨基酚，1，3-苯二胺，1-萘酚，2-萘酚，4-氯代間苯二酚，1，2，3-苯三醇(1，2，3-苯三酚)，1，3-苯二醇(間苯二酚)，1，2-苯二醇(鄰苯二酚)，2-羥基-肉桂酸，3-羥基-肉桂酸，4-羥基-肉桂酸，2，3-二氨基苯甲酸，2，4-二氨基苯甲酸，3，4-二氨基苯甲酸，3，5-二氨基苯甲酸，2，3-二氨基苯甲酸甲酯，2，3-二氨基苯甲酸乙酯，2，3-二氨基苯甲酸異丙酯，2，4-二氨基苯甲酸甲酯，2，4-二氨基苯甲酸乙酯，2，4-二氨基苯甲酸異丙酯，3，4-二氨基苯甲酸甲酯，3，4-二氨基苯甲酸乙酯，3，4-二氨基苯甲酸異丙酯，3，5-二氨基苯甲酸甲酯，3，5-二氨基苯甲酸乙酯，3，5-二氨基苯甲酸異丙酯，N，N-二甲基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，N，N-二乙基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，N，N-二丙基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，N，N-二丁基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，4-氯代-1-萘酚，N-苯基-對-苯二胺，3，4-二羥基苯甲醛，吡咯，吡咯-2-異咪唑，1，2，3-三唑，苯并三唑，苯并咪唑，咪唑，吲哚，1-氨基-8-羥基萘-4-磺酸(S酸)，4，5-二羥基萘-2，7-二磺酸(鉻變酸)，鄰氨基苯甲酸，4-氨基苯甲酸(PABA)，2-氨基-8-萘酚-6-磺酸(咖馬酸)，5-氨基-1-萘酚-3-磺酸(M酸)，2-萘酚-3，6-二磺酸(R酸)，1-氨基-8-萘酚-2，4-二磺酸(芝加哥酸)，1-萘酚-4-磺酸(奈溫酸)，迫位酸，N-苯甲?；鵍酸，N-苯基J酸，1，7-克列氏酸，1，6-克列氏酸，Bon酸，萘酚AS，分散黑9，萘酚ASOL，萘酚ASPH，萘酚ASKB，萘酚ASBS，萘酚ASD，萘酚ASB1，媒染劑黑3CI14640(羊毛鉻藍(lán)綠B)，4-氨基-5-羥基-2，6萘二磺酸(H酸)，油性棕RR溶劑棕1(CI11285)，對苯二酚，苯乙醇酸，三聚氰胺，鄰-硝基苯甲醛，1，5-二羥基萘，2，6-二羥基萘，2，3-二羥基萘，芐基咪唑，2，3-二氨基萘，1，5-二氨基萘，1，8-二氨基萘，水楊酸，3-氨基水楊酸，4-氨基水楊酸，5-氨基水楊酸，甲基-3-氨基水楊酸酯，甲基-4-氨基水楊酸酯，甲基-5-氨基水楊酸酯，乙基-3氨基水楊酸酯，乙基-4-氨基水楊酸酯，乙基-5-氨基水楊酸酯，丙基-3-氨基水楊酸酯，丙基-4-氨基水楊酸酯，丙基-5-氨基水楊酸酯，水楊酰胺，4-氨基苯硫酚，4-羥基苯硫酚，苯胺，4，4’-二氨基二苯胺硫酸酯，4-苯基偶氮苯胺，4-硝基苯胺，N，N-二甲基-1，4-苯二胺，N，N-二乙基-1，4-苯二胺，分散橙3，分散黃9，分散藍(lán)1，N-苯基-1，2-苯二胺，6-氨基-2-萘酚，3-氨基-2-萘酚，5-氨基-1-萘酚，1，2-苯二胺，2-氨基嘧啶，4-氨基喹啶，2-硝基苯胺，3-硝基苯胺，2-氯代苯胺，3-氯代苯胺，4-氯代苯胺，4-(苯基偶氮)間苯二胺(蘇丹橙G，CI11920)，蘇丹紅B，CI26110，蘇丹紅7B，CI26050，4’-氨基-N-乙酰苯胺，1，2-二羥基蒽醌，1-蒽胺(1-氨基蒽)，1-氨基蒽醌，蒽醌，2，6-二羥基蒽醌，1，5-二羥基葸醌(蒽降酚)，3-酰氨基吡啶(尼克酰胺)，吡啶-3-羧酸(煙酸)，媒染劑黃1，茜素黃GG，CI，14025，考馬斯灰，酸性黑48，CI65005，宮殿堅(jiān)牢黑，WAN，酸性黑52，CI15711，宮殿鉻黑，6BN，CI15705，羊毛鉻藍(lán)黑R，媒染劑黑11，羊毛鉻黑T，萘酚藍(lán)黑，酸性黑1，CI20470，1，4-二羥基蒽醌(醌西)，4-羥基香豆素，散形酮，7-羥基香豆素，七葉亭，6，7-二羥香豆素，香豆素，鉻變素2B酸性紅176，CI1657，鉻變素2R酸性紅29，CI16570，鉻變素FB酸性紅14，CI14720，2，6-二羥基異尼克酸，檸嗪酸，2，5-氯代苯胺，2-氨基-4-氯代甲苯，2-硝基-4-氯代甲苯，2-甲氧基-4-硝基苯胺和，對-溴苯酚。在含有一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族或雜芳族化合物的水溶液中浸泡所說的物質(zhì)后，在水溶液中用過氧化氫源和表現(xiàn)出過氧化物酶活性的酶或?qū)σ环N或多種芳族或雜芳族化合物表現(xiàn)出氧化酶活性的酶處理所說的物質(zhì)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，用同樣的水溶液浸泡和染色所說的物質(zhì)。在本發(fā)明方法中用于染色所說的物質(zhì)的水溶液，即染液可以具有在約0．5∶1到約200∶1，優(yōu)選地在約5∶1到約20∶1范圍的水／物質(zhì)比率。在本發(fā)明的方法中，一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物可以是被以下物質(zhì)氧化的(a)過氧化氫源和表現(xiàn)出過氧化物酶活性的酶或(b)對一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物(例如酚類和相關(guān)底物)表現(xiàn)出氧化酶活性的酶。表現(xiàn)出過氧化物酶活性的酶包括(但不限于)過氧化物酶(EC1．11．1．7)和鹵代過氧化物酶，例如氯代-(EC1．11．1．10)，溴代-(EC1．11．1)和碘代過氧化物酶(EC1．11．1．8)。表現(xiàn)出氧化酶活性的酶包括(但不限于)膽紅素氧化酶(EC1．33．5)，兒茶酚氧化酶(EC1．10．3．1)，漆酶(EC1．10．3．2)，鄰-氨基苯酚氧化酶(EC1．10．3．4)和多酚氧化酶(EC1．10．3．2)。用于測定這些酶活性的分析方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。優(yōu)選地，這種酶是從選自下組的微生物獲得的漆酶曲霉屬、葡萄孢屬、金錢霉屬、香菇屬、毀絲霉屬、鏈孢霉屬、灰側(cè)菌屬、束柄霉屬、多孔菌屬、Scytalidium、栓菌屬以及絲核菌屬。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，這種漆酶是從選自下組的微生物獲得的Humicolabrevisvar．thermoidea，Humicolabrevispora，灰腐質(zhì)霉thermoidea變種，Humicolainsolens和Humicolalanuginosa(也稱為Thermomyceslanuginosus)，Myceliophthorathermophila，Myceliophthoravellerea，Polyporuspinsitus，Scytalidiumthermophila，Scytalidiumindonesiacum和嗜熱色串孢。該漆酶也可以從蛾柱霉屬的其他物種獲得，例如Scytalidiumacidophilum，Scytalidiumalbum，Scytalidiumaurantiacum，Scytalidiumcircinatum，Scytalidiumflaveobrunneum，Scytalidiumhyalinum，Scytalidiumlignicola和Scytalidiumuredinicolum。該漆酶也可以從多孔菌屬的其他物種獲得，例如環(huán)紋多孔乙菌，Polyporusalveolaris，Polyporusarcularius，Polyporusaustraliensis，Polyporusbadius，二形多孔菌，冬生多孔菌，Polyporusciliatus，Polyporuscolensoi，Polyporuseucalyptorum，Polyporusmeridionalis，黑柄多孔菌，Polyporuspalustris，喜根多孔菌，Polyporusrugulosus，鱗多孔菌，莖形多孔菌和Polyporustumulosus。該漆酶也可以從絲核菌屬的物種獲得，例如茄屬絲核菌。這種漆酶也可以是在I型(T1)銅位點(diǎn)上被至少一個(gè)氨基酸殘基修飾的修飾漆酶，其中這種修飾的氧化酶具有相對于野生型氧化酶的改變的pH和／或比活性。例如，修飾漆酶能夠在T1銅位點(diǎn)的片段(a)上被修飾?？梢杂糜诒景l(fā)明的過氧化物酶可以從植物中分離出來并且可由植物產(chǎn)生(例如辣根過氧化物酶)或從微生物(如真菌或細(xì)菌)中分離出來并且可由微生物產(chǎn)生。一些優(yōu)選的真菌包括屬于半知菌亞門絲孢綱的菌株，例如鐮刀菌屬、腐質(zhì)霉屬、木霉屬、漆斑菌屬、輪枝孢屬、Arthromyces、卡爾黑霉屬、Ulocladium、Embellisia、枝孢屬或Dreschlera，特別是尖鐮孢(DSM2672)、Humicolainsolens、黑氏木霉、疣孢漆斑菌(IFO6113)、棉黃萎輪枝孢、大麗花輪枝孢、Arthromycesramosus(FERMP-7754)，煙色卡爾黑霉、Ulocladiumchartarum、Embellisiaalii或Dreschlerahalodes。其它優(yōu)選的真菌包括屬于擔(dān)子菌亞門，擔(dān)子菌綱的菌株，例如鬼傘屬、展齒革菌屬、革蓋菌屬或栓蓖屬、特別是灰蓋鬼傘f．microsporus(IFO8371)、長根鬼傘，Phanerochaetechrysosporium(如NA-12)或雜色革蓋菌(如PR428-A)。更優(yōu)選的真菌包括屬于接合菌亞門，圓孔腔菌科的菌株，例如，根霉屬或毛霉屬，特別是凍土毛霉。一些優(yōu)選的細(xì)菌包括屬于放線菌目的菌株，例如嗜熱紫鏈霉菌(IFO12382)，渾球鏈霉菌(ATCC23965)或StreptoverticillumVerticilliumssp．verticillium。其它優(yōu)選的細(xì)菌包括短小芽孢桿菌(ATCC12905)，嗜熱脂肪芽孢桿菌，球形紅細(xì)菌，Rhodomonaspalustri，乳鏈球菌，Pseudomonaspurrocinia(ATCC15958)或熒光假單胞菌(NRRLB-11)。B．C.Saunders等，同上pp．41-43中列出了過氧化物酶其它潛在的來源。文獻(xiàn)中描述了按照本發(fā)明所使用的酶的生產(chǎn)方法。例如，F(xiàn)EBS通信，1625，173(1)，應(yīng)用環(huán)境微生物學(xué)，1985年2月，pp．273-278，應(yīng)用微生物生物技術(shù)26，1987，pp．158-163，生物技術(shù)通信9(5)，1987，pp．357-360，自然326，1987年4月2日FEBS通信4270，209(2)，p．321，EP179486，EP200565，GB2167421，EP171074和農(nóng)業(yè)生物化學(xué)50(1)，1986，p．247。特別優(yōu)選的酶是那些pH在約2．5到約12．0范圍內(nèi)有活性的酶，優(yōu)選的是在約4到約10范圍內(nèi)，最優(yōu)選的是在約4．0到約7．0范圍內(nèi)和約7．0到約10．0范圍內(nèi)?？梢酝ㄟ^篩選嗜堿微生物產(chǎn)生的相關(guān)的酶來分離這種酶，例如，使用在RE．Childs和W．G．Bardsley，生物化學(xué)雜志，145，1975，pp．93-103中描述的ABTS測定法。其它優(yōu)選的酶是那些表現(xiàn)出良好的熱穩(wěn)定性以及對通常所使用的染色添加劑(如非離子、陽離子或陰離子表面活性劑、螯合劑、鹽、聚合物等)良好的穩(wěn)定性的酶。所說酶也可以經(jīng)以下方法產(chǎn)生，該方法包括在使得這種酶可以表達(dá)的條件下，在培養(yǎng)基中培養(yǎng)用重組DNA載體轉(zhuǎn)化過的宿主細(xì)胞，并從培養(yǎng)液中回收所說的酶，其中所說的載體攜帶有編碼所說的酶的DNA序列以及編碼使得編碼該酶的DNA序列可以表達(dá)的功能的DNA序列。例如編碼所說的酶的DNA片段可以通過建立產(chǎn)生這種興趣酶的微生物(如前面提到的一種微生物)的cDNA或基因組文庫和通過常規(guī)方法(如與以這種酶的整個(gè)或部分氨基酸序列為基礎(chǔ)合成的寡核苷酸探針雜交或選擇表達(dá)合適的酶活性的克隆或選擇產(chǎn)生與天然酶的抗體反應(yīng)性的蛋白質(zhì)的克隆)篩選陽性克隆來分離。一旦被選擇，就可以將DNA序列插入到包含恰當(dāng)?shù)膯?dòng)子、操縱子和終止子序列(允許酶在特定的宿主生物中表達(dá))以及復(fù)制起點(diǎn)(能使載體在正被討論的宿主微生物中復(fù)制)的合適的可復(fù)制的表達(dá)載體中。然后，將所形成的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到合適的宿主細(xì)胞，例如真菌細(xì)胞中，優(yōu)選的例子是曲霉屬的菌種，最優(yōu)選的是米曲霉或黑曲霉。通過牽涉到原生質(zhì)體形成和轉(zhuǎn)化的過程，接著是細(xì)胞壁再生用已知的方法轉(zhuǎn)化真菌細(xì)胞。曲霉屬作為宿主微生物的應(yīng)用在EP238023(NovoIndustriA／S的)中已經(jīng)描述過，本文一并參考。另外，宿主生物體可以是細(xì)菌，特別是鏈霉菌屬，芽孢桿菌屬或大腸桿菌的菌株。通過常規(guī)方法可以完成細(xì)菌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，例如通過在T．Maniatis等，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊、冷泉港，1982所描述的方法。通過標(biāo)準(zhǔn)方法(參見T．Maniatis等，同上)也可以進(jìn)行合適DNA序列的篩選和載體的構(gòu)建。用于培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的培養(yǎng)基可以是適合于正被討論的宿主細(xì)胞生長的任何常規(guī)培養(yǎng)基。所表達(dá)的酶可以方便地分泌到培養(yǎng)基中，并且可以用眾所周知的方法從中回收，這一方法包括用離心法或過濾法從培養(yǎng)基中分離出細(xì)胞，借助鹽(如硫酸銨)沉淀出蛋白質(zhì)組分；接著采用色譜方法(如采用離子交換色譜法，親合色譜法或類似的方法)回收這種酶。當(dāng)本發(fā)明所采用的酶是過氧化物酶時(shí)，必須使用過氧化氫源，如過氧化氫本身。過氧化氫源在方法的開始或中間可以以0．001-5mM的量添加，特別是以0．01-1mM的量添加。一種過氧化氫源包括過氧化氫的前體，例如過硼酸鹽或過碳酸鹽。另一種過氧化氫源包括能夠使分子氧和有機(jī)或無機(jī)底物分別轉(zhuǎn)化成過氧化氫和氧化底物的酶。這些酶僅僅產(chǎn)生低水平的過氧化氫，但是由于過氧化物酶的存在確保了產(chǎn)生的過氧化氫的有效利用，因而這些酶在本發(fā)明方法中發(fā)揮了很大的作用。能夠產(chǎn)生過氧化氫的酶的例子包括(但不限于)葡萄糖氧化酶、尿酸氧化酶、半乳糖氧化酶、醇氧化酶、胺氧化酶、氨基酸氧化酶和膽固醇氧化酶、在本發(fā)明方法中，染色物質(zhì)所使用的溫度范圍是約5到約120℃，優(yōu)選的范圍是約5到約80℃，更優(yōu)選的范圍是約15到約70℃；pH范圍是約2．5到約12，優(yōu)選的是在約4到約10之間，更優(yōu)選的范圍是約4．0到約7．0或約7．0到約10．0。更優(yōu)選地，使用低于6．5的pH(例如pH范圍為3-6，優(yōu)選的是4-6，更優(yōu)選的是4．5-5．5)或高于8．0的pH(例如pH范圍為8-10，優(yōu)選的是8．5-10，最優(yōu)選的是9-10)。令人驚奇的是，用本發(fā)明的方法在pH低于6．5和高于8．0下物質(zhì)被染上的顏色與用本發(fā)明的方法在pH6．5-8．0下同樣物質(zhì)被染上的顏色不同。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，分別使用鄰近酶的最適溫度和最適pH的溫度和pH。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明方法還包括將一價(jià)或二價(jià)離子，聚合物和表面活性劑(10mg-5g／l)加入到水溶液中，這些離子包括(但不限于)鈉、鉀、鈣和鎂離子(0-3M，優(yōu)選地為25mM-1M)，這些聚合物包括(但不限于)聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚天冬氨酸酯、聚乙烯酰胺、聚環(huán)氧乙烷(0-50g／l，優(yōu)選地為1-500mg／l)。這些表面活性劑的例子是如羧酸鹽之類的陰離子表面活性劑，例如長鏈脂肪酸的金屬羧酸鹽；N-?；“彼猁}；磷酸與脂肪族醇乙氧基化物的單酯或二酯或這些酯的鹽；如十二烷基硫酸鈉、十八烷基硫酸鈉或十六烷基硫酸鈉的脂肪族醇硫酸鹽；乙氧基化的脂肪族醇硫酸鹽；乙氧基化的烷基酚硫酸鹽；木素磺酸鹽；石油磺酸鹽；如烷基苯磺酸鹽或低級烷基萘磺酸鹽(如丁基-萘磺酸鹽)的烷基芳基磺酸鹽；鹽或磺酸化萘-甲醛縮合物；磺酸化的酚-甲醛縮合物的鹽；或如酰胺磺酸鹽的更復(fù)雜的磺酸鹽(例如油酸和N-甲基?；撬岬幕撬峄s合產(chǎn)物或二烷基磺基琥珀酸酯(例如，磺酸鈉，或二辛基琥珀酸酯))。這些表面活性劑的其他例子是如脂肪酸酯、脂肪族醇、脂肪酸酰胺或脂族烷基-或鏈烯基取代酚類與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷的嵌段共聚物，炔屬二醇類(如2，4，7，9-四乙基-5-癸炔-4，7-二醇)，或乙氧基炔屬二醇類的非離子表面活性劑。這樣的表面活性劑的其他例子是如脂肪族單-，雙-或多胺(如乙酸酯、環(huán)烷酸酯或油酸酯)，含氧胺類(如聚氧乙烯烷基胺的胺氧化物)，通過羧酸與二或多胺的縮合制備的連接酰胺的胺類，或季銨鹽之類的陽離子表面活性劑。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法還包括將提高表現(xiàn)出過氧化物酶活性的酶的活性或表現(xiàn)出氧化酶活性的酶的活性的增強(qiáng)劑加入到水溶液中。增強(qiáng)劑是本領(lǐng)域已知的。例如，已知在WO95／01426中公開的有機(jī)化合物可增強(qiáng)漆酶的活性。此外，已知在WO94／12619和WO94／12621中公開的化合物可增強(qiáng)過氧化物酶的活性。下列非限制性實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例1漆酶活性的測定在有氧條件下氧化丁香醛連氮來測定漆酶活性。用分光光度法在530nm處測量生成的紫羅蘭色。分析條件是19μM丁香醛連氮，23．2mM乙酸鹽緩沖液(pH5．5)，30℃，以及1分鐘反應(yīng)時(shí)間。一個(gè)漆酶單位(LACU)是指在上述條件下每分鐘催化1微摩爾丁香醛連氮的轉(zhuǎn)化所需要的漆酶的量。過氧化物酶活性的測定一個(gè)過氧化物酶單位(POXU)指在下列分析條件下每分鐘催化1微摩爾過氧化氫的轉(zhuǎn)化所需要的酶量0．88mM過氧化氫，1．67mM2．2’-連氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸酯)，0．1M磷酸鹽緩沖液(包含TritonX405(1．5g／1000ml))，pH7．0，30℃下溫育，在418nm處測定光度值(ABTS的消光系數(shù)設(shè)定在3．6l／mmol＊mm)。織物的染色將5mg第一種化合物(對-苯二胺(“A”)，對-甲苯二胺(“B”)，或鄰-氨基苯酚(“C”))和5mg第二種化合物(間-苯二胺(“D”)，α-萘酚(“E”)或4-氯代間苯二酚(“F”)(或10mg實(shí)驗(yàn)中的第一種化合物而沒有第二種化合物)溶解在10ml0．1MK2HPO4緩沖溶液(pH7．0)中。將具有71．7LACU／ml活性的Polyporuspinsitus漆酶(“PpL)(保藏在真菌菌種保藏中心，保藏號為CBS678．70)或具有690LACU／ml活性的Myceliophthorathermophila漆酶(“MtL”)(保藏在真菌菌種保藏中心，保藏號為CBS117．65)用同樣的緩沖液稀釋成10LACU／ml活性。將從TestFabricsInc．(Middlesex，新澤西)得到的多纖維布樣樣式10A(4×10cm)卷起放到試管中。這種布樣包含由棉花，雙乙酸酯、聚丙烯酸、聚酰胺和聚酯制造的不同纖維的條。將4．5ml前體／成色劑溶液和1ml漆酶溶液添加到所說的試管中。將試管封住、混合并且安裝在試管搖動(dòng)器上，在黑暗的柜櫥中溫育60分鐘。在溫育之后，將布樣在連續(xù)的熱自來水中沖洗約30秒。下列表中提供了本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表1表2表3</tables>本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在前體和Polyporuspinsitus漆酶存在下羊毛被染上顏色。以Myceliophthorathermophila漆酶獲得類似的結(jié)果。實(shí)施例2在阿托拉斯洗滌槽-O-計(jì)量器(“LOM”)中，在pH4-10范圍內(nèi)30℃下對各種物質(zhì)染色1小時(shí)。所染的物質(zhì)(都是從TestFabricsInc．獲得的)是精紡羊毛(樣式526，7cm×7cm)和氯化精紡羊毛(樣式530，7cm×7cm)。通過混合溶液A(0．1MH3PO4，0．1MCH3COOH，0．1MH3BO3)和溶液B(0．5MNaOH)在合適的pH下制備0．1M的Britten-Robinson緩沖溶液。為了制得pH分別為4，5，6，7，8，9和10的緩沖溶液，將806ml，742ml，706ml，656ml，624ml，596ml和562ml的溶液A用溶液B稀釋到1升。以0．5mg／ml的量將選自對-苯二胺，鄰-氨基苯酚和間-苯二胺的化合物添加到75ml每種緩沖溶液中。如果必要的話，檢測和調(diào)整pH。將75ml緩沖液／化合物溶液混合成各150ml的緩沖液／化合物混合溶液，并將這種混合溶液添加到LOM燒杯中。然后，將所說物質(zhì)的布樣浸泡在每種緩沖液／化合物混合溶液中。接下來抽取相應(yīng)于將要添加的漆酶的體積的體積。將具有690LACU／ml活性的Myceliophthorathermophila漆酶(“MtL”)用緩沖溶液稀釋成300LACU／ml活性。在每種pH(除pH7．0以外)的溶液中添加2LACU／ml的酶。供定量給料分布之用，在pH7．0下，向溶液中添加0，1，2和4LACU／ml的酶。然后將LOM燒杯安裝在LOM中。在30℃，42RPM下1小時(shí)后，停止LOM。倒掉液體，同時(shí)在燒杯中用連續(xù)去離子水沖洗布樣約15分鐘。干燥布樣，利用ColorEye7000儀器測量CIELAB值。在表4-7中給出了CIELAR結(jié)果。表4用前體對-苯二胺和間-苯二胺染色(pH-分布，2LACU／ml)pH4pH5pH6pH7pH8pH9pH10精紡羊毛L*41．5728．2120．2514．7318．9435．0613．52a*2．711．240．431．633．56-1．921．79b*-0．75-2．09-5.76-5．84-17．52-14．05-4．28氯化羊毛L*18．4616．0515．0414．1915．4731．4413．84a*2．321．010．881．832．78-3．052．97b*0．090．871．031．53-11．43-13．272．06表5用前體對-苯二胺和間苯二胺染色(劑量分布-pH7)0LACU1LACU4LACU精紡羊毛L*54．9714.5214．27a*1．481．551．49b*1．26-6．09-5.6氯化羊毛L*43．214．4214．33a*1．791．751．69b*1．611．51．65表6用前體鄰-氨基苯酚和間-苯二胺染色(pH-分布，2LACU／ml)pH4pH5pH6pH7pH8pH9pH10精紡羊毛L*33．6833．0535.9637．4242．5559．2449．65a*3．775.358．5610．078．7510．538．63b*8．2611.0318．8322．3322．8237．234．81氯化羊毛L*21．0719．1121．0124．734．4259．948．74a*3．142.774．827．226．8810．0810．4b*4.234.318.0412.6418.0836．7834．76表7用前體鄰-氨基苯酚和間-苯二胺染色(劑量分布-pH7)0LACU1LACU4LACU精紡羊毛L*80．2338．5736.18a*1.19.2110．8b*20.0921．3322．76氯化羊毛L*77.3627.126.33a*0．867.926.92b*19．5314．813.5這些表中所用的參數(shù)“L”、“a”和“b”用來量化顏色，并且為顏色科學(xué)領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員所熟知。參見例如，Billmeyer和Saltzman，顏色技術(shù)原理，第二版，JohnWiley和Sons，紐約，1981，p．59。結(jié)果表明，精紡羊毛和氯化精紡羊毛在所有pH下均被染色，由對-苯二胺和間-苯二胺的混合液染色，得到的深顏色范圍從低pH下的灰色到高pH下的海藍(lán)色和黑色，而由鄰-氨基苯酚和間-苯二胺的混合液染色，得到的顏色范圍從低pH下的褐色到高pH下的橙／黃色。在所有的定量給料實(shí)驗(yàn)中，沒有從定量給料1，2或4LACU／ml中看到顯著的區(qū)別。0LACU／ml的對照實(shí)驗(yàn)清楚地表明了這種漆酶催化染色過程。實(shí)施例3除了本實(shí)驗(yàn)僅僅在pH5．0和8．0下時(shí)間間隔為0，5，15，35和55分鐘外，使用實(shí)施例2所描述的方法測定供染色的時(shí)間分布。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中，添加2LACU／mlMyceliophthorathermophila漆酶。表8-11顯示了實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表8用前體對-苯二胺和間-苯二胺染色時(shí)間分布，2LACU／ml．pH50min5min15min35min55min精紡羊毛L*76.4852.0836.327.0226.56a*0.021.351.961.31.18b*8-0.02-1.39-1.68-2.03氯化羊毛L*63.7319.2316.8116.4816.75a*0.11.861.280.771.11b*10.3-0．680.491.041.03表9用前體對-苯二胺和間-苯二胺染色時(shí)間分布，2LACU／ml，pH80min5min15min35min55min精紡羊毛L*64．4323．6614．5713．1113．06a*-3．031．052．141．491．2b*-3．32-15.45-8．72-4．52-3．68氯化羊毛L*58．9617.3614．0913．8913．66a*-1．660．571．92．712．64b*2．68-3．980．142．211．99表10用前體鄰-氨基苯酚和間-苯二胺染色時(shí)間分布，2LACU／ml，pH50min5min15min35min55min精紡羊毛L*79．450．6735.9432．432．89a*1．546．477．116．085．98b*16．0220．8818．4314．2812．52氯化羊毛L*76．7239.5322.1218．8219.58a*2.336．814.212．883．1b*18．2616．488．234．894．77表11用前體鄰-氨基苯酚和間-苯二胺染色時(shí)間分布，2LACU／ml，pH80min5min15min35min55min精紡羊毛L*80．0663．0349．3742．5141．24a*1．6315.7117．112．329．97b*25．8743.3738.6930．2625．78氯化羊毛L*79．662．8747.8836．7233．62a*0．5713．1714．4610．267．88b*24．6341.6434.3424.4719.7結(jié)果顯示大多數(shù)顏色在頭15分鐘內(nèi)形成。精紡羊毛和氯化精紡羊毛在兩種pH下被染色。實(shí)施例4在阿托拉斯洗滌槽-O-計(jì)量器(“LOM”)中pH5．5下于30℃染色1小時(shí)，所染的物質(zhì)(都是從TestFabrics，Inc．獲得的)是精紡羊毛(樣式526，8cm×8cm)。以合適量的0．1MCH3COONa緩沖液(pH5．5)溶解所說的化合物來制備0．5mg／ml的第一種化合物(對-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二種化合物(L-萘酚，“B”)溶液。每個(gè)LOM燒杯使用100ml總體積。一個(gè)燒杯添加100ml“A”，另一個(gè)燒杯添加50ml“A”和50ml“B”混合形成100ml。將上文列出的物質(zhì)的布樣用DI水浸濕并在前體溶液中浸透。具有690LACU／mg(80LACU／mg)活性的Myceliophthorathermophila漆酶(“MtL”)以12．5mg／l的濃度添加到每個(gè)燒杯中。將LOM燒杯密封并安裝在LOM中。在30℃，42RPM下1小時(shí)后，停止LOM。倒掉廢液并且將布樣在冷自來水下沖洗約15分鐘。在室溫下干燥布樣，使用MacbethColorEye7000測定所有布樣的CIELAB值。結(jié)果在表12和表13給出表12-用前體對-苯二胺染色(pH5．5，12．5mg／lMtL表13-用前體p-苯胺和1-萘酚染色(pH5．5，12．5mg／lMtL結(jié)果顯示使用前體和Myceliophthorathermophila漆酶可以對羊毛進(jìn)行染色(用A表示褐色，而用A／B表示紫色)。實(shí)施例5在阿托拉斯洗滌槽-O-計(jì)量器(“LOM”)中，在pH5．5下于30℃染色1小時(shí)。所染的物質(zhì)(都是從TestFabrics，Inc．獲得的)是精紡羊毛(樣式526，8cm×8cm)。以合適量的0．1MCH3COONa緩沖液(pH5．5)溶解所說的化合物來制備0．5mg／ml的第一種化合物(對-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二種化合物(1-萘酚，“B”)溶液。每個(gè)LOM燒杯使用100ml的總體積。一個(gè)燒杯中添加100ml“A”，另一個(gè)燒杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。將上文列出的物質(zhì)的布樣在DI水中浸濕并在前體溶液中浸透。將具有70LACU／ml(100LACU／mg)活性的Polyporuspinstus漆酶(“PpL”)以12．5mg／l的濃度添加到每個(gè)燒杯中。將LOM燒杯密封并安裝在LOM中。在30℃，42RPM下1小時(shí)后停止LOM。倒掉廢液，并且將布樣在冷自來水下沖洗約15分鐘。室溫下干燥布樣，使用MacbethColorEye7000測定所有布樣的CIELAB值。其結(jié)果在表14和表15中給出。表14-用前體對-苯二胺染色(pH5．5，12．5mg／lPpL)表15-用前體對-苯二胺和1-萘酚染色(pH5．5，12．5mg／lPpL)結(jié)果顯示使用前體和PolyporusPinsitus漆酶可以對羊毛進(jìn)行染色(用A表示褐色，而用A／B表示紫色)。實(shí)施例6在阿托拉斯洗滌槽-O-計(jì)量器(“LOM”)中，在pH5.5下于30℃對物質(zhì)染色1小時(shí)，所染的物質(zhì)(都是從TestFabrics，Inc．獲得的)是精紡羊毛(樣式526，8cm×8cm)。以合適量的0．1MCH3COONa緩沖液(pH5.5)溶解所說的化合物來制備0．5mg／ml的第一種化合物(對-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二種化合物(1-萘酚，“B”)溶液。每個(gè)LOM燒杯使用100ml的總體積。一個(gè)燒杯中添加100ml“A”，另一個(gè)燒杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。將上文列出的物質(zhì)的布樣在DI水中浸濕再在前體溶液中浸透。將具有0．04LACU／mg(1mg／ml)活性的Myrotheciumverrucaria膽紅素氧化酶(“BiO”)以12．5mg／l的濃度添加到每只燒杯中。將LOM燒杯密封并安裝在LOM中。在30℃，42RPM下經(jīng)過1小時(shí)后停止LOM。倒掉廢液，并且將布樣在冷自來水下沖洗約15分鐘。室溫下干燥布樣，使用MacbethColorEye7000測定所有布樣的CIELAB值。結(jié)果在表16和表17中給出。表16-用前體對-苯二胺染色表17-用前體對-苯于胺和1-萘酚染色結(jié)果表明使用前體和膽紅素氧化酶可以對羊毛進(jìn)行染色(用A表示褐色，而用A／B表示紫色)。實(shí)施例7在阿托拉斯洗滌槽-O-計(jì)量器(“LOM”)中，在pH5．5下于30℃對物質(zhì)染色1小時(shí)，所染的物質(zhì)(都是從TestFabrics，Inc．獲得的)是精紡羊毛(樣式526，8cm×8cm)。以合適量的0．1MCH3COONa緩沖液(pH5．5)溶解所說的化合物來制備0．5mg／ml的第一種化合物(對-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二種化合物(1-萘酚，“B”)溶液。每個(gè)LOM燒杯使用100ml的總體積。一個(gè)燒杯中添加100ml“A”，另一個(gè)燒杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。將上文列出的物質(zhì)的布樣在DI水中浸濕再在前體溶液中浸透。將具有5．2LACU／mg(2mg／ml)活性的立枯絲核菌漆酶(“RsL”)以12．5mg／l的濃度添加到每只燒杯中。將LOM燒杯密封并安裝在LOM中。在30℃，42RPM下經(jīng)過1小時(shí)后停止LOM。倒掉廢液，并且將布樣在冷自來水下沖洗約15分鐘。室溫下干燥布樣，使用MacbethColorEye7000測定所有布樣的CIELAB值。結(jié)果在表18和表19中給出。表18-用前體對-苯二胺染色(pH5．5，12．5mg／lRsL表19-用前體對-苯二胺和1-萘酚染色(pH5．5，12．5mg／lRsL結(jié)果顯示使用前體和立枯絲核菌漆酶可以對羊毛進(jìn)行染色(用A表示褐色，而用A／B表示紫色)。實(shí)施例8在阿托拉斯洗滌槽-O-計(jì)量器(“LOM”)中，在pH5．5下于60℃進(jìn)行染色，所染的物質(zhì)(從TestFabricInc．得到)是精紡羊毛(樣式526，8cm×8cm)。以合適量的2g／LCH3COONa緩沖液(pH5．5)溶解所說的化合物來制備0．25mg／ml的第一種化合物(對-苯胺，“A”)溶液和0．25mg／ml的第二種化合物(2-氨基苯酚，“B”)溶液。每個(gè)LOM燒杯使用100ml的總體積。一個(gè)LOM燒杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。將上文列出的物質(zhì)的布樣在DI中浸濕，再在前體溶液中浸透。將LOM燒杯密封并安裝在LOM中。在LOM(42RPM)中溫育10分鐘后，停止LOM并且將具有690LACU／ml(80LACU／mg)活性的Myceliophthorathermophila漆酶(“MtL”)以1LACU／ml的濃度添加到這只燒杯中。在60℃，42RPM下50，45或30分鐘后，停止LOM并撤除樣品。將前體溶液，布樣和酶添加到LOM燒杯中，制得兩個(gè)沒有經(jīng)過預(yù)溫育的對照。將這兩只燒杯安裝在LOM中。在60℃，42RPM下30分鐘后，撤除一個(gè)燒杯。另一個(gè)對照在60℃，42RPM下經(jīng)過總計(jì)60分鐘后撤除。倒掉廢液，并將樣品和布樣在冷自來水下沖洗約15分鐘。室溫下干燥布樣，使用MacbethColorEye7000測定所有布樣的CIELAB值。結(jié)果在表20-24中給出。表20-用前體A和B對照染色，0分鐘／30分鐘表21-用前體A和B對照染色，0分鐘／60分鐘表22-用前體A和B染色，10分鐘／50分鐘表23-用前體A和B染色，15分鐘／45分鐘表24-用前體A和B染色，30分鐘／30分鐘利用美國紡織化學(xué)家和著色師協(xié)會(huì)(AATCC)測試方法61-1989，2A估計(jì)這些布樣對清洗的耐色牢度(耐洗牢度)。將洗滌槽-O-計(jì)量器預(yù)熱到49℃，同時(shí)將200ml0．2％AATCC標(biāo)準(zhǔn)參考去污劑WOB(不含光學(xué)增白劑)和50個(gè)鋼球放置到每個(gè)LOM燒杯中。將這些燒杯密封并安裝在LOM中，在42RPM下運(yùn)行2分鐘預(yù)熱這些燒杯至試驗(yàn)溫度。停止旋轉(zhuǎn)并松開燒杯。將布樣添加到燒杯中，LOM運(yùn)行45分鐘。撤走燒杯，并且將布樣在熱自來水中在偶然擠榨下沖洗5分鐘。然后在室溫下干燥并用MacbethColorEye7000評估這些布樣。利用AATCC評估法1(色變的灰度)指定每種布樣的灰度等級(1-5)。結(jié)果在表25-29中給出。表25-對A和B的耐洗牢度結(jié)果，0分鐘／30分鐘表26-對A和B的耐洗牢度結(jié)果，0分鐘／60分鐘表27-對A和B的耐洗牢度結(jié)果，15分鐘／45分鐘表28-對A和B的耐洗牢度結(jié)果，10分鐘／50分鐘表29-對A和B的耐洗牢度結(jié)果，30分鐘／30分鐘結(jié)果顯示，利用前體和Myceliophthorathermophiila(MtL)漆酶，羊毛能夠染上色。從L＊和灰度分級二者都可以明顯地看出，添加酶前在前體溶液中溫育這些布樣可以提高顏色強(qiáng)度和耐洗牢度。實(shí)施例9將羊毛在阿托拉斯洗滌槽-O-計(jì)量器(“LOM”)中，在pH5．5下，于40℃染色1小時(shí)。所染的物質(zhì)(都是從TestFabricsInc．獲得的)是精紡羊毛(樣式526，7cm×7cm)和氯化精紡羊毛(樣式530，7cm×7cm)。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中評估兩個(gè)介體，將每個(gè)溶解在緩沖液中。三種緩沖溶液是2g／LCH3COONa，pH5．5緩沖液(“1”)，2g／LCH3COONa，pH5．5，包含100μM10-丙酸-吩噻嗪(PPT)(“2”)的緩沖液(“2”)，2g／LCH3COONa，pH5．5，包含100μM丁香酸甲酯的緩沖液(“3”)。將所說的化合物溶解在合適量的緩沖液(1，2或3)中來制備三種0．25mg／ml的第一種化合物(對-苯二胺，“A”)溶液和三種0．25mg／ml的第二種化合物(間-苯二胺，“B”)溶液。每個(gè)LOM燒杯使用120ml的總體積。將60mlA和60mlB混合成120ml(對于每種緩沖液1，2或3)。將上文列出的物質(zhì)的布樣在DI水中浸濕，再在前體溶液中浸透。將LOM燒杯密封并安裝在LOM中。在40℃，于42RPM下經(jīng)過10分鐘后停止LOM。將具有690LACU／ml(80LACU／mg)活性的Myceliophthorathermophila漆酶(“MtL”)以0．174LACU／ml活性添加到每只燒杯中。再次將燒杯密封并安裝在LOM中。在40℃，42RPM下運(yùn)行50分鐘。撤走燒杯，倒掉廢液并且將這些布樣在冷自來水中沖洗約15分鐘。室溫下干燥布樣，使用MacobethColorEye7000測定所有布樣的CIELAB值。結(jié)果在表30，31和32中給出。表30-用前體A和B染色(2g／LCH3COONa，pH5．5，MtL表31-用前體A和B染色(2g／LCH3COONa，pH5．5，100μMPPT，MtL表32-用前體A和B染色(2g／LCH3COONa，pH5．5，100μM丁香酸甲酯，MtL利用美國紡織化學(xué)家和著色師協(xié)會(huì)(AATCC)測試方法61-1989，2A估計(jì)這些布樣對清洗的耐色牢度(耐洗牢度)。將洗滌槽-O-計(jì)量器預(yù)熱到49℃，將200ml0．2％AATCC標(biāo)準(zhǔn)參考去污劑WOB(不含光學(xué)增白劑)和50個(gè)鋼球放置到每個(gè)LOM燒杯中。將這些燒杯密封并安裝在LOM中，在42RPM下運(yùn)行2分鐘預(yù)熱這些燒杯至試驗(yàn)溫度。停止旋轉(zhuǎn)并松開燒杯。將布樣添加到燒杯中使LOM運(yùn)行45分鐘。撤走燒杯并且將布樣在熱自來水中在偶然擠榨下沖洗5分鐘。然后在室溫下干燥，并用MacbethColorEye7000評估這些布樣。利用AATCC評估方法1(色變的灰度)指定每種布樣的灰度等級(1-5)。結(jié)果在表33-35中給出。表33-對前體A和B的耐洗牢度結(jié)果(2g／LCH3COONa，pH5．5，MtL表34-對前體A和B的耐洗牢度結(jié)果(2g／LCH3COONa，pH5．5，100μMPPT，MtL)<表35-對前體A和B的耐洗牢度結(jié)果(2g／LCH3COONa，pH5．5，100μMPPT，MtL重復(fù)同樣的實(shí)驗(yàn)，只是使用第三種化合物(2-氨基苯酚，“C”)和第四種化合物(間-苯二胺，“D”)。使用的溫度為50℃。結(jié)果在表36-41中給出。表36-用前體C和D染色(2g／LCH3COONa，pH5.5，MtL)<表37-用前體C和D染色(2g／LCH3COONa，pH5．5，100μMPPT，MtL表38-用前體C和D染色(2g／LCH3COONa，pH5．5，100μM丁香酸甲酯，MtL)表39-對前體C和D的耐洗牢度結(jié)果(2g／LCH3COONa，pH5．5，MtL)表40-對前體C和D的耐洗牢度結(jié)果(2g／LCH3COONa，pH5．5，100μMPPT，MtL)表41-對前體C的耐洗牢度結(jié)果(2g／LCH3COONa，pH5．5，100μM丁香酸甲酯，MtL)這兩組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，介體可以被用于染色和獲得提高的耐洗牢度。在兩組實(shí)驗(yàn)中，精紡羊毛和氯化精紡羊毛在CH3COONa緩沖液，包含有PPT的CH3COONa緩沖液以及包含有丁香酸甲酯的CH3COONa緩沖液中pH5．5下都被染上色。可是，介體僅僅在第二組實(shí)驗(yàn)中導(dǎo)致提高耐洗牢度。實(shí)施例10在阿托拉斯洗滌槽-O-計(jì)量器(“LOM”)中，在pH5．5，30℃下對羊毛染色1小時(shí)。所染的物質(zhì)(都是從TestFabrics，Inc．獲得的)是精紡羊毛(樣式526，8cm×8cm)。以合適量的0．1MCH3COONa緩沖液(pH5．5)溶解所說的化合物來制備0．5mg／ml的第一種化合物(對-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二種化合物(1-萘酚，“B”)溶液。每只LOM燒杯使用100ml的總體積。一個(gè)燒杯中添加100ml“A”，另一個(gè)燒杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。將上文列出的物質(zhì)的布樣在DI水中浸濕再在前體溶液中浸透。將具有180，000POXU／ml活性的灰蓋鬼傘過氧化物酶(“CiP”)以0．05POXU／ml的濃度添加到每只燒杯中。將200或500μM過氧化氫加入到每只LOM燒杯中。將LOM燒杯密封并安裝在LOM中。在30℃，42RPM下經(jīng)過1小時(shí)后停止LOM。倒掉廢液，并且將布樣在冷自來水中沖洗約15分鐘。室溫下干燥布樣，使用MacbethColorEye7000測定所有布樣的CIELAB值。結(jié)果在表42-45中給出。表42-用前體A染色，200μMH2O2表43-用前體A染色，500μMH2O2表44-用前體A和B染色，200μMH2O2表45-用前體A和B染色，500μMH2O2結(jié)果顯示使用前體，過氧化物和灰蓋鬼傘過氧化物酶(CiP)可以對羊毛進(jìn)行染色(用A和A／B表示紫色)。實(shí)施例11在試管中，在pH5，7和9下于室溫將鉻藍(lán)處理的原料皮革(PrimeTanningCorp．，St．Joseph，MO)染色16小時(shí)。以合適量的0．1MBritten-Robinson緩沖液(B-R緩沖液)溶解每種化合物來制備三種0．5mg／ml的第一種化合物(對-苯二胺，“A”)溶液(pH5，7和9)，三種0.5mg／ml的第二種化合物(1-萘酚，“B”)溶液，和三種0．5mg／ml的第三種化合物(4-羥基肉桂酸，“C”)溶液。將皮革被染物(1．5cm×4cm)卷起來，放入4英寸的試管中，每支試管中使用7ml的總體積。一支試管中添加6mlA(或6mlC)，另一支試管中添加3mlA和3mlB(或3mlA和3mlC)，混合形成6ml。將具有690LACU／ml(80LACU／mg)活性的Myceliophthorathermophila漆酶(“MtL”)以2LACU／ml的濃度添加到每支試管中(1ml酶溶液添加到每支試管中使得每支試管總共7ml)。將試管密封，混合并安裝在試管旋轉(zhuǎn)器上。于室溫在暗櫥中將試管溫育16小時(shí)。溫育后，將布樣在流動(dòng)的冷自來水中沖洗1分鐘并在室溫下干燥。實(shí)驗(yàn)結(jié)果在表46中給出。表46這些結(jié)果表明在Myceliophthorathermophila漆酶和不同類型前體存在下在一系列pH條件下在皮革上形成顏色。實(shí)施例12在試管中，在pH5，7和9下于室溫將絲綢染色。所染的物質(zhì)(從TestFabricInc．得到)是真絲雙縐(樣式601，1．5cm×4cm)。以合適量的0．1MBritten-Robinson緩沖液(B-R緩沖液)溶解每種化合物來制備三種0．5mg／ml的第一種化合物(對-苯二胺，“A”)溶液(pH5，7和9)和三種0．5mg／ml的第二種化合物(1-萘酚，“B”)溶液。將絲綢被染物卷起來，放入4英寸的試管中，每支試管中使用7ml的總體積。一支試管中添加6mlA，另一支試管中添加3mlA和3mlB，混合形成6ml。將具有690LACU／ml(80LACU／mg)活性的Myceliophthorathermophila漆酶(“MtL”)以2LACU／ml的濃度添加到每支試管中(1ml酶溶液添加到每支試管中使得每支試管總共7ml)。將試管密封，混合并安裝在試管旋轉(zhuǎn)器上。于室溫在暗櫥中將試管溫育16小時(shí)。溫育后，將布樣在流動(dòng)的冷自來水中沖洗1分鐘并在室溫下干燥。實(shí)驗(yàn)結(jié)果在表47中給出。表47實(shí)施例13在0．1M磷酸鈉緩沖液(pH5．5)中溶解5mg／ml對苯二胺和添加2．5％阿拉伯樹膠制得印花糊狀物。這種印花糊狀物利用印花篩框和刮板人工轉(zhuǎn)移到尼龍織物上。將被印花的織物部分用遮蓋物覆蓋起來。然后，將織物在蒸汽室中汽蒸10分鐘并且使其干燥。將織物浸入2LACU／ml漆酶溶液中，溫育1小時(shí)后顏色顯現(xiàn)出來。實(shí)施例14單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物可以通過浸軋施用于物質(zhì)上。例如，將0．5mg／ml對-苯二胺溶解在500ml0．1MK2PO4緩沖液(pH7)中。漆酶也在同樣的緩沖液中稀釋。在60℃下利用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室襯墊將對-苯二胺浸軋?jiān)谒f的物質(zhì)上。將這種織物汽蒸10分鐘。然后，用酶溶液可以將汽蒸的物質(zhì)進(jìn)行第二次浸軋。在40℃時(shí)通過溫育這些布樣使染料顯色。溫育后，將布樣用連續(xù)的熱自來水沖洗約30秒鐘。權(quán)利要求1．一種使物質(zhì)著色的方法，該方法包括(a)在包含一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物的水溶液中浸泡所說的物質(zhì)，每種這樣的化合物可以是可以不是被一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)或取代基取代的，其中，每一個(gè)官能團(tuán)或取代基選自由鹵素、磺基、磺酸根合、磺氨基、硫烷基、氨基、酰氨基、硝基、偶氮基、亞氨基、羧基、氰基、甲?；⒘u基、鹵羰基、氨基甲酰基、脲基、膦酸根合、膦?；?、C1-18-烷基、C1-18-鏈烯基、C1-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-氧羰基、C1-18-氧代烷基、C1-18-烷基硫烷基、C1-18-烷基磺?；?、由一個(gè)，二個(gè)或三個(gè)C1-18烷基基團(tuán)取代的C1-18-烷基亞氨基或氨基組成的組，其中的每一C1-18-烷基、C1-18-鏈烯基和C1-18炔基基團(tuán)可以是被前面的官能團(tuán)或取代基單-，二-或多取代的；和(b)在水溶液中用(ⅰ)過氧化氫源和表現(xiàn)出過氧化物酶活性的酶或(ⅱ)對所說的一種或多種芳族化合物或雜芳族化合物表現(xiàn)出氧化酶活性的酶處理浸濕的物質(zhì)；其中所說的物質(zhì)是由毛皮、獸皮、皮革、絲綢或羊毛制造的織物、紗線、纖維、衣服或薄膜。2．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說的一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物是萘酚。3．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說的一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物是芳族二胺。4．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說的一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物是氨基苯酚。5．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說的一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物是苯酚。6．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說的物質(zhì)是由毛皮制造的。7．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說的物質(zhì)是由獸皮制造的。8．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說的物質(zhì)是由皮革制造的。9．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說的物質(zhì)是由絲綢制造的。10．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說的物質(zhì)是由羊毛制造的。11．按照權(quán)利要求1的方法，其中用對所說的一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物表現(xiàn)出過氧化物酶活性的酶和過氧化氫源處理浸濕的物質(zhì)。12．按照權(quán)利要求11的方法，其中所說的酶是過氧化物酶或鹵過氧化物酶。13．按照權(quán)利要求1的方法，其中用對所說的一種或多種單-，二-或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物表現(xiàn)出氧化酶活性的酶處理浸濕的物質(zhì)。14．按照權(quán)利要求13的方法，其中所說的酶選自由膽紅素氧化酶、兒茶酚氧化酶、漆酶、鄰-氨基苯酚氧化酶以及多酚氧化酶組成的組。15．按照權(quán)利要求1的方法，其中對所說的物質(zhì)進(jìn)行染色的溫度范圍是約5℃到約120℃。16．按照權(quán)利要求1的方法，該方法還包括將選自由鈉、鉀、鈣和鎂離子組成的組的一價(jià)或二價(jià)離子加入到步驟(b)的水溶液中。17．按照權(quán)利要求1的方法，該方法還包括將選自由聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，聚天冬氨酸酯，聚乙烯酰胺和聚環(huán)氧乙烷組成的組的聚合物加入到步驟(b)的水溶液中。18．按照權(quán)利要求1的方法，該方法還包括將陰離子、非離子或陽離子表面活性劑加入到步驟(b)的水溶液中。19．按照權(quán)利要求1的方法，其中在pH2．5-12下對物質(zhì)進(jìn)行染色。20．按照權(quán)利要求1的方法，該方法還包括將增強(qiáng)酶活性的增強(qiáng)劑加入到步驟(b)的水溶液中。21．按照權(quán)利要求1的方法，其中在步驟(a)和(b)中所用的水溶液是相同的。全文摘要本發(fā)明涉及使物質(zhì)著色的方法,該方法包括(a)在包含一種或多種單－,二—或多環(huán)芳族化合物或雜芳族化合物的水溶液中浸泡所說的物質(zhì);和(b)在水溶液中用(i)過氧化氫源和表現(xiàn)出過氧化物酶活性的酶或(ii)對所說的一種或多種芳族或雜芳族化合物表示出氧化酶活性的酶處理浸濕的物質(zhì);其中所說的物質(zhì)是由毛皮、獸皮、皮革、絲綢或羊毛制造的織物、紗線、纖維、衣服或薄膜。文檔編號D06P1/651GK1205755SQ96199197公開日1999年1月20日申請日期1996年12月20日優(yōu)先權(quán)日1995年12月22日發(fā)明者O·科特,M·巴弗德申請人:諾沃挪第克生物化學(xué)北美公司,諾沃挪第克公司