專利名稱：檢測x連鎖魚鱗病的基因芯片及使用方法、試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種生物技術(shù)領(lǐng)域的基因芯片及使用方法、試劑盒，具體涉及ー種檢測X連鎖魚鱗病的基因芯片及使用方法、試劑盒。
背景技術(shù)：
魚鱗病是ー組以皮膚干燥大片狀鱗屑為特征的遺傳角化障礙性皮膚病，X連鎖隱性遺傳魚鱗病(x-linked recessive ichthy0SiS，XLRI)是其中重要的一型，主要是男性發(fā)病，女性為致病基因攜帯者，一般不發(fā)病。臨床上以四肢和軀干部位大塊狀，多角形，深褐色鱗屑為主要表現(xiàn)，四肢伸側(cè)尤甚。X連鎖隱性遺傳魚鱗病男性發(fā)病率約1/6000-1/2000，沒有顯著的種族和地理差異。除皮膚表現(xiàn)外，文獻(xiàn)報道XLRI可伴有其他癥狀和系統(tǒng)異常。角膜混濁和隱睪是其特征性的伴發(fā)癥狀。1978年，Siapiro等首先發(fā)現(xiàn)X-連鎖隱性遺傳魚鱗病的發(fā)生與類固醇硫酸酯酶 (STS)缺乏有關(guān)。STS(sterol sulphate sulphohydrolase)基因的缺失導(dǎo)致皮膚角質(zhì)層的類同醇硫酸酯酶缺乏，其底物膽同醇硫酸鹽水解減少，皮膚中的膽固醇硫酸鹽含量増加，高比例的膽固醇硫酸鹽改變角質(zhì)層細(xì)胞膜間的物理特性，増加了細(xì)胞膜的穩(wěn)定性和細(xì)胞間的凝聚程度，導(dǎo)致角質(zhì)層細(xì)胞持久性黏著，從而導(dǎo)致皮膚正常脫屑過程延遲，形成鱗屑。目前診斷XLRI較直接的生化檢測就是測定血清、白細(xì)胞以及皮膚成纖維細(xì)胞中的類固醇硫酸酯酶(STQ活性。基因診斷包括PCR擴(kuò)增整個基因片段檢測缺失和點(diǎn)突變， Southern印跡，熒光原位雜交(FISH，檢出率為85% )等，可以確定家族中的男性患者，也可以用于產(chǎn)前診斷。然而尚無ー種快速、低成本、大通量和自動化檢測X連鎖魚鱗病基因突變的方法。比較基因組雜交(CGH)芯片分析技術(shù)是ー種突破性技木，能夠支持研究人員通過微陣列準(zhǔn)確研究與疾病有關(guān)的染色體的變化。比較基因組雜交(CGH)芯片分析的原理是在一張芯片上用兩份標(biāo)記不同熒光素的樣品(檢測樣品和對照樣品)同時進(jìn)行雜交，從而快速而又直觀地檢測實(shí)驗(yàn)樣品和對照樣品之間基因組DNA的拷貝數(shù)量的差異。CGH應(yīng)用于疾病遺傳學(xué)的研究，可以提供ー個全基因組的掃描圖，提示樣本DNA在整個染色體組的哪個特定位置存在擴(kuò)增或缺失，那些發(fā)生擴(kuò)增的區(qū)域，極有可能存在致病基因，而缺失區(qū)域即可能包含ー些抑制基因。因此，需要一種新的技術(shù)方案來克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足和缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種檢測X連鎖魚鱗病的基因芯片及使用方法、試劑盒。本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩(wěn)定性好，時間短， 成本低。本發(fā)明還提供了前述檢測X連鎖魚鱗病的基因芯片的使用方法和試劑盒。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)第一方面，本發(fā)明提供了一種檢測X連鎖魚鱗病的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸CN 102533973 A序列。優(yōu)選地，所述固相載體選自載玻片、硅片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。第二方面，本發(fā)明還涉及前述檢測X連鎖魚鱗病的基因芯片的使用方法，包括以下步驟(a)制備樣品DNA片段；(b)熒光標(biāo)記上述DNA片段；(c)洗脫上述標(biāo)記產(chǎn)物；(d)將標(biāo)記產(chǎn)物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測基因芯片的雜交信號，獲得結(jié)果。第三方面，本發(fā)明還涉及ー種用于檢測X連鎖魚鱗病的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求1所述的基因芯片。優(yōu)選地，所述試劑盒還包括標(biāo)記物，所述標(biāo)記物為Cy3_dUTP。優(yōu)選地，該試劑盒還包括標(biāo)記物，所述標(biāo)記物為Cy5_dUTP。本發(fā)明具有如下的有益效果本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩(wěn)定性好，該芯片多次試驗(yàn)重復(fù)性高；時間短，從樣本抽提到得到掃描結(jié)果可在一天內(nèi)完成。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)ー步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解為這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊見New York Cold Spring Harbor Laboratory出版社1989年版中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例本實(shí)施例的基因芯片由固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列，所述固相載體為玻片。本實(shí)施例基因芯片的固相載也可選用硝酸纖維素膜、硅片、尼龍膜或聚本乙烯。本實(shí)施例的寡核苷酸探針由安捷倫公司生產(chǎn)，同時本實(shí)施例的基因芯片也由安捷倫公司按照常規(guī)方法生產(chǎn)。本實(shí)施例基因芯片的使用方法，步驟如下(1)樣品DNA片段的制備取患者、正常人血液，采用常規(guī)方法抽提全基因組DNA(gDNA)。將水浴鍋溫度調(diào)到37で和65で，溶化10ズ8吐デ吐C (見下表)，短暫渦旋震蕩后離心數(shù)秒。對每個反應(yīng)來說，將gDNA加入到適當(dāng)?shù)臒o核酸酶的PCR管中，并加入無核酸酶的水使反應(yīng)體積達(dá)到10. 1 μし在冰上準(zhǔn)備酶切混合母液，按順序加入以下試劑
權(quán)利要求
1.一種檢測X連鎖魚鱗病的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，其特征在干，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測X連鎖魚鱗病的的基因芯片，其特征在干，所述固相載體選自載玻片、硅片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。
3.ー種使用權(quán)利要求1所述檢測X連鎖魚鱗病的基因芯片的使用方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(a)制備樣品DNA片段；(b)熒光標(biāo)記上述DNA片段；(c)洗脫上述標(biāo)記產(chǎn)物；(d)將標(biāo)記產(chǎn)物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測基因芯片的雜交信號，獲得結(jié)果。
4.ー種用于檢測X連鎖魚鱗病的試劑盒，其特征在干，所述試劑盒包括權(quán)利要求1所述的基因芯片。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于檢測X連鎖魚鱗病的試劑盒，其特征在干，所述試劑盒還包括標(biāo)記物，所述標(biāo)記物為Cy3-dUTP。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于檢測X連鎖魚鱗病的試劑盒，其特征在于，該試劑盒還包括標(biāo)記物，所述標(biāo)記物為Cy5-dUTP。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測X連鎖魚鱗病的基因芯片及使用方法、試劑盒，所述基因芯片包括固相載體和固定在該固相載體上的探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO.1-50所示的核苷酸序列；所述使用方法包括如下步驟(a)制備樣品DNA片段；(b)熒光標(biāo)記上述DNA片段；(c)洗脫上述標(biāo)記產(chǎn)物；(d)將標(biāo)記產(chǎn)物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測基因芯片的雜交信號，獲得結(jié)果；本發(fā)明還涉及包含前述基因芯片的試劑盒。本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩(wěn)定性好，從樣本抽提到得到掃描結(jié)果可在一個工作日內(nèi)完成，成本低，適用于臨床患者基因突變檢測、產(chǎn)前診斷和正常人雜合子攜帶者檢測。
文檔編號C40B40/06GK102533973SQ201110410049
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月9日
發(fā)明者吳茜, 李笑天, 秦勝營, 賀林, 郭奇桑, 龔小會 申請人:上海交通大學(xué), 復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院