專利名稱：檢測22q11微缺失綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生物技術領域的基因芯片及使用方法、試劑盒，具體涉及一種檢測22qll微缺失綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒。
背景技術：
22qll微缺失綜合征(22qllDQ是最常見的遺傳綜合征之一，在新生兒中的發(fā)生率約為1/9804 1/5950，其發(fā)生是由于22號染色體長臂近著絲粒段qll. 21 qll. 23雜合性缺失所致。主要包括以臨床表型特征定義的DiGeorge綜合征(DGS)、腭-心-面綜合征(VCre)、圓錐動脈干-異常面容綜合征(CAFS)、Cayler心面綜合征和部分單純性先天性心臟病(CHD)。盡管22qllDS表型廣泛且多樣，但大多數(shù)患有CHD，由于他們經(jīng)常合并低鈣血癥、免疫功能低下、后鼻孔堵塞等異常，手術成功率及預后遠不如非綜合征型CHD患者， 所以產前診斷、二級干預將成為預防嚴重出生缺陷的主要手段。先天性心臟病CHD是22qll最常見的表型，大約75% 85%的22qllDS患者都會發(fā)生CHD，并且所涉及的CHD表型并不特異，換言之，幾乎所有CHD類型的患者都有可能存在 22qll微缺失。除CHD外，22qllDS患者還可能存在多個系統(tǒng)的異常，文獻報道的有180多種，比較常見的有典型的面容(瞼裂狹小、盔狀眼瞼、鼻根部凸出、鼻尖肥大、方形外耳郭、口及下巴較小)、細胞免疫缺陷、低鈣血癥、腭裂、胃腸道功能紊亂和喂養(yǎng)困難、生殖泌尿器官畸形、骨骼異常、內分泌紊亂、語言和學習障礙、行為和精神異常等。嬰兒常常由于顯著的喂養(yǎng)困難而導致生長發(fā)育停滯；較大的兒童則往往會因一系列行為問題如注意力不集中、多動癥、孤獨癥而在學校中經(jīng)歷困難；成人則會出現(xiàn)反復性的呼吸道感染、自身免疫紊亂、心理異常、 精神分裂癥。嬰兒期持續(xù)的低鈣血癥是由于甲狀旁腺功能低下所致，通常在1歲時恢復正常，但兒童期和成人期容易復發(fā)。由于CHD是22qllDS常見的表型，涉及類型多種多樣，且隨著國際婦產科超聲協(xié)會 “胎兒心臟篩查指南”的頒布，對妊娠中晚期胎兒心臟篩查進行指導，規(guī)范了篩查切面，提高了篩查效率，使得大部分復雜先心病在產前得以診斷。因而，對超聲篩查發(fā)現(xiàn)的CHD胎兒進行22qll微缺失產前診斷，及早進行出生缺陷干預及再發(fā)生育風險評估，將成為產前診斷的重要課題；此外，由于10 % 15 %的22ql 1微缺失來自遺傳，有22ql 1微缺失生育史和夫婦雙方中有22qll微缺失者再次妊娠時也需進行產前診斷。目前對22qllDS的檢測有以下幾種方法染色體核型分析，一般作為初篩手段；熒光原位雜交(FISH)，檢出率為90 %-95%;多重PCR，但是必須有父母的DNA作為對照；以及多重連接探針擴增(MLPA)、實時熒光定量PCR(RT-PCR)等。然而尚無一種快速、低成本、大通量和自動化檢測22qll微缺失綜合征基因突變的方法。比較基因組雜交(CGH)芯片分析技術是一種突破性技術，能夠支持研究人員通過微陣列準確研究與疾病有關的染色體的變化。比較基因組雜交(CGH)芯片分析的原理是在一張芯片上用兩份標記不同熒光素的樣品(檢測樣品和對照樣品)同時進行雜交，從而快速而又直觀地檢測實驗樣品和對照樣品之間基因組DNA的拷貝數(shù)量的差異。CGH應用于疾病遺傳學的研究，可以提供一個全基因組的掃描圖，提示樣本DNA在整個染色體組的哪個特定位置存在擴增或缺失，那些發(fā)生擴增的區(qū)域，極有可能存在致病基因，而缺失區(qū)域即可能包含一些抑制基因。因此，需要一種新的技術方案來克服現(xiàn)有技術的上述不足和缺點。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種檢測22qll微缺失綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒。本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩(wěn)定性好，時間短，成本低的特點。本發(fā)明還提供了前述檢測22qll微缺失綜合征的基因芯片的使用方法和試劑盒。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)第一方面，本發(fā)明提供一種檢測22qll微缺失綜合征的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。優(yōu)選地，所述固相載體選自載玻片、硅片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。第二方面，本發(fā)明還涉及前述檢測22qll微缺失綜合征的基于芯片的使用方法， 包括以下步驟(a)制備樣品DNA片段；(b)熒光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產物；(d)將標記產物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測基因芯片的雜交信號，獲得結果。第三方面，本發(fā)明還涉及一種用于檢測22qll微缺失綜合征的試劑盒，所述試劑盒包括權利要求1所述的基因芯片。優(yōu)選地，所述試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy3_dUTP。優(yōu)選地，該試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy5_dUTP。本發(fā)明具有如下的有益效果本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩(wěn)定性好，該芯片多次試驗重復性高；時間短，從樣本抽提到獲得掃描結果可在一天內完成。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解為這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等分子克隆實驗室手冊見New York Cold Spring Harbor Laboratory出版社1989年版中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例本實施例的基因芯片由固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列，所述固相載體為玻片。本實施例基因芯片的固相載也可選用硝酸纖維素膜、硅片、尼龍膜或聚本乙烯。本實施例的寡核苷酸探針由安捷倫公司生產，同時本實施例的基因芯片也由安捷倫公司按照常規(guī)方法生產。
本實施例基因芯片的使用方法，步驟如下(1)樣品DNA片段的制備取患者、正常人血液，采用常規(guī)方法抽提全基因組DNA(gDNA)。將水浴鍋溫度調到371和651，溶化10\8吐作『C (見下表)，短暫渦旋震蕩后離心數(shù)秒。對每個反應來說，將gDNA加入到適當?shù)臒o核酸酶的PCR管中，并加入無核酸酶的水使反應體積達到10. 1 μ L0在冰上準備酶切混合母液，按順序加入以下試劑
權利要求
1.一種檢測22qll微缺失綜合征的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，其特征在于，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。
2.根據(jù)權利要求1所述的檢測22qll微缺失綜合征的的基因芯片，其特征在于，所述固相載體選自載玻片、硅片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。
3.—種如權利要求1所述檢測22qll微缺失綜合征的基因芯片的使用方法，其特征在于，包括以下步驟(a)制備樣品DNA片段；(b)熒光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產物；(d)將標記產物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測基因芯片的雜交信號，獲得結果。
4.一種用于檢測22qll微缺失綜合征的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括權利要求1 所述的基因芯片。
5.根據(jù)權利要求4所述的用于檢測22qll微缺失綜合征的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy3-dUTP。
6.根據(jù)權利要求5所述的檢測22qll微缺失綜合征的試劑盒，其特征在于，該試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy5-dUTP。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測22q11微缺失綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒，所述基因芯片包括固相載體和固定在該固相載體上的探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO.1-50所示的核苷酸序列；所述使用方法包括如下步驟(a)制備樣品DNA片段；(b)熒光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產物；(d)將標記產物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測基因芯片的雜交信號，獲得結果；本發(fā)明還涉及包含前述基因芯片的試劑盒。本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩(wěn)定性好，從樣本抽提到得到掃描結果可在一個工作日內完成，成本低，適用于臨床患者基因突變檢測、產前診斷和正常人雜合子攜帶者檢測。
文檔編號C40B40/06GK102533974SQ20111041018
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月9日 優(yōu)先權日2011年12月9日
發(fā)明者吳茜, 李笑天, 秦勝營, 賀林, 郭奇桑, 龔小會 申請人:上海交通大學, 復旦大學附屬婦產科醫(yī)院