專利名稱：一種用于體重控制的基因芯片、制備方法、使用方法及其試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于遺傳測試領域，具體涉及一種用于體重控制的基因芯片、制備方法、使用方法及其試劑盒。
背景技術：
世界衛(wèi)生組織(WHO)警告稱，超重和肥胖是全球引起死亡的第五大風險。全球有11億超重人群，3. 5億的肥胖人群。2007年，中國的肥胖人群已超過2億。人類肥胖是基因與環(huán)境共同作用的結果。缺乏運動和過度飲食是導致肥胖的主要外在因素。然而控制體重并非簡單的少吃多動。采取同樣的少吃多動的瘦身方式，有人成 功有人失敗。這主要是由于遺傳差異引起的。個人的遺傳信息決定了飲食和運動對其體重的影響。目前已有相關研究報道確定了單核苷酸多態(tài)性(SNPs)與飲食和運動的關系。比如，具有FABP2PPARG ADRB2-2AP0A2AP0A5基因單核苷酸多態(tài)性的人對飲食中的脂肪量敏感，此類人應采取低脂飲食減肥的策略；而具有ADRB3ADRB2LIPC PPARG基因單核苷酸多態(tài)性的人對運動敏感，此類人運動減肥效果明顯。因此具有不同單核苷酸多態(tài)性的人應采取不同的瘦身方式。因此如可通過對受測者的相關基因進行檢測，可分析得到導致其肥胖的遺傳因素及環(huán)境因素，從而為受測者獲得一個合適的減肥方案而提供更多的有用信息，以采取相應的策略避免對其無效的方法。DNA芯片技術是近年來新開發(fā)的一種基因檢測工具。其原理是將大量的寡核苷酸探針有規(guī)律地排列在一張玻片上，這些探針可以與信號顯示物質標記的樣品DNA的擴增序列的互補序列進行相結合，通過對信號物質進行檢測，對雜交結果進行計算機軟件處理分析，從而獲得雜交信號的強度及其分布模式圖。基于寡核苷酸芯片的方法為分析SNP提供了一種高通量的技術，為SNP或基因突變提供了一個高通量的檢測平臺，可用來平行分析已知基因在不同樣本中的單核苷酸多態(tài)性。經(jīng)檢索，利用肥胖相關基因多態(tài)性檢測的基因芯片至今還未見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是針對現(xiàn)有技術的不足而提供一種用于體重控制的基因芯片、制備方法、使用方法及其試劑盒。一種用于體重控制的基因芯片，其特征在于它包括固相載體和固定于該固相載體上用于與肥胖相關基因單核苷酸多態(tài)性位點檢測的特異性寡核苷酸探針，所述與肥胖相關基因單核苷酸多態(tài)性位點為與肥胖風險相關SNPs :rs3751812、rsl0871777與飲食有關的肥胖基因SNPs :rsl799883、rsl801282、rsl042714、rs5082、rs662799
與運動有關的肥胖基因SNPs :rs4994、rsl042713、rsl800588、rsl801282針對肥胖相關基因單核苷酸多態(tài)性位點，設計了一組寡核苷酸探針，所述的寡核苷酸探針的核苷酸序列如SEQ ID No. 1-20所示，具體見表I :表I用于體重控制的基因芯片的寡核苷酸探針序列
權利要求
1.一種用于體重控制的基因芯片，其特征在于它包括固相載體和固定于該固相載體上用于與肥胖相關基因單核苷酸多態(tài)性位點檢測的特異性寡核苷酸探針，所述與肥胖相關基因單核苷酸多態(tài)性位點為 與肥胖風險相關 SNPs :rs3751812、rsl0871777 與飲食有關的肥胖基因 SNPs :rsl799883、rsl801282、rsl042714、rs5082、rs662799 與運動有關的肥胖基因 SNPs :rs4994、rsl042713、rsl800588、rsl801282 所述的寡核苷酸探針的核苷酸序列如SEQ ID No. 1-20所示，具體見表I : 表I用于體重控制的基因芯片的寡核苷酸探針序列
2.根據(jù)權利要求I所述的用于體重控制的基因芯片，其特征在于所述固相載體為硝酸纖維素膜、尼龍膜或載玻片，所述的固相載體經(jīng)不同的化學修飾使其表面帶有可以固定核酸分子的活性基團。
3.根據(jù)權利要求I所述的用于體重控制的基因芯片，其特征在于所述用于體重控制的基因芯片包括陽性對照探針和陰性對照探針，所述的陽性對照探針序列如SEQ ID No. 21所示，所述的陰性對照探針序列如SEQ ID No. 18所示。
4.一種用于體重控制的基因芯片的制作方法，其特征在于它包括以下步驟 (1)將固相載體預處理，待用； (2)根據(jù)表I所設計的探針序列，如SEQID No. 1_20所示，人工合成每條寡核苷酸芯片探針； (3)將上述各寡核苷酸芯片探針溶解在點樣液中，點樣固化即得。
5.根據(jù)權利要求4所述的用于體重控制的基因芯片的制作方法，其特征在于所述固相載體為載玻片，所述的預處理為將載玻片用鉻酸洗液洗滌，浸泡過夜，水洗，20% 25%氨水浸泡中過夜，水洗，然后浸入氨丙基三甲氧基硅烷的乙醇溶液中，用冰醋酸調節(jié)pH值至4. O 6. 0，乙醇超聲清洗，烘干4 5小時，戊二醛醛基化處理； 所述每條寡核苷酸芯片探針在合成時5’端經(jīng)氨基基團修飾； 所述點樣時每點點樣體積約為O. 4 O. 6nL,點心間距為500 600 μ m,點直徑為200 300 μ m，每條探針重復點樣2 3次；所述的固化處理為室溫放置24 26小時固化。
6.一種試劑盒，其特征在于包括權利要求1-3中任一項所述的用于體重控制的基因-H-* I I心/T O
7.根據(jù)權利要求6所述的試劑盒，其特征在于它還包括用于與肥胖相關基因多態(tài)性位點擴增對應所需的引物，其序列如SEQ ID No. 22-39所示，和陽性對照擴增對應所需的引物，其序列如SEQ ID No. 40-41所示，具體見表2 表2PCR擴增對應所需的引物序列
8.權利要求1-3任一項所述的用于體重控制的基因芯片的使用方法，其特征在于它包括以下步驟 1、待測樣本的制備 (1)提取樣品DNA； (2)采用各與肥胖相關基因多態(tài)性位點及陽性對照肌動蛋白擴增對應所需的引物分別進行PCR擴增； (3)PCR結束后經(jīng)電泳檢測確認，然后回收目的片段條帶； 2、熒光素標記 對步驟I中回收得到的目的片段和陰性對照品即點樣液進行熒光標記； 3、芯片雜交實驗 將步驟2中標記后的目的片段和陰性對照品對應滴加到基因芯片上，與固定于上述基因芯片上的寡核苷酸芯片探針進行雜交，然后進行洗滌處理； 4、掃描和結果判定 掃描分析獲取雜交信號，判定得到結果。
9.根據(jù)權利要求8所述的用于體重控制的基因芯片的使用方法，其特征在于步驟1(2)中用于肥胖基因多態(tài)性位點擴增對應所需的引物序列如SEQ ID No. 22-39所示，陽性對照探針擴增所需的引物序列如SEQ ID No. 40-41所示，見表2。
10.根據(jù)權利要求8所述的用于體重控制的基因芯片的使用方法，其特征在于它還包括將步驟4得到的各位點結果按照與肥胖風險相關的基因位點、與飲食有關的肥胖基因位點、與運動有關的肥胖基因位點對結果進行分類統(tǒng)計分析。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于體重控制的基因芯片、制備方法、使用方法及其試劑盒。它包括固相載體和固定于該固相載體上用于與肥胖相關基因單核苷酸多態(tài)性位點檢測的特異性寡核苷酸探針，所述的寡核苷酸探針的核苷酸序列如SEQ ID No.1-20所示。本發(fā)明還公開了該基因芯片的制作方法，使用方法，以及包括該基因芯片的試劑盒。它提供了肥胖各相關基因多態(tài)性檢測系統(tǒng)，可快速、準確檢測待測樣本中與肥胖基因相關SNPs，靈敏度高，對于科學減肥控制體重有重要的意義，可廣泛用于欲減肥人群；本基因位點選取中國人特有的SNPs，對中國人更具有針對性；PCR引物特異性好，可很好地保證實驗的成功率。
文檔編號C40B50/06GK102912452SQ20121036779
公開日2013年2月6日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權日2012年9月28日
發(fā)明者徐謀勝, 李兵, 王珊, 袁雅燕, 王寧 申請人:湖北維達健基因技術有限公司