一種以腺病毒穿梭載體-gfp為模板合成鉑納米球殼的方法
【專利摘要】一種以腺病毒穿梭載體-GFP為模板合成鉑納米球殼的方法，其主要是將滴度為1×1011～1×1012VP/mL的腺病毒穿梭載體-GFP水溶液與濃度為5.0～10.0mM的PtCl4水溶液進(jìn)行等體積的溶液混合后進(jìn)行水浴恒溫?fù)u床共孵育，轉(zhuǎn)數(shù)：100～200rpm，溫度：15～25℃，保溫：20～30h；向上述孵育好的混合溶液中逐滴加入現(xiàn)配制的NaBH4水溶液對(duì)共孵育后的混合溶液進(jìn)行還原，使混合溶液顏色由淺黃色變?yōu)楹诨疑?，制備得到鉑納米球殼。本發(fā)明反應(yīng)條件溫和，制備工藝簡(jiǎn)單，效率高，成本低；制備的鉑納米球殼，球殼直徑可控，大小均一，分散性好。
【專利說(shuō)明】一種以腺病毒穿梭載體-GFP為模板合成鉑納米球殼的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于納米材料【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種鉬納米球殼的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]通常對(duì)細(xì)胞活性和生物功能的研究，采用顯微鏡或是生物技術(shù)試驗(yàn)來(lái)實(shí)現(xiàn)。然而這些技術(shù)經(jīng)常應(yīng)用到有毒試劑，對(duì)人體及環(huán)境有著不可避免的傷害。細(xì)胞的各項(xiàng)生理活動(dòng)伴有電荷的定向傳遞、傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)移，使得細(xì)胞的活性及生理功能與電化學(xué)息息相關(guān)。
[0003]鉬納米材料因具有納米材料的特性而獲得高催化活性和特殊的電學(xué)性質(zhì)，這些性質(zhì)使得鉬納米材料作為電極材料一直受到眾多研究者的關(guān)注。此外，鉬元素作為貴金屬，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易受生物溶液的腐蝕，對(duì)生物體無(wú)毒副作用。鉬納米材料的這些優(yōu)點(diǎn)使其成為了生物電極材料的理想選擇。而在眾多鉬納米材料中，空納米球殼結(jié)構(gòu)比堆積或分散的納米結(jié)構(gòu)具有更優(yōu)異的金屬性能，使其在電化學(xué)應(yīng)用上擁有更高的靈敏度。因此，鉬納米球殼在生物電化學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域成為了一種具有優(yōu)越的生物相容性、體積小、靈敏度高、性質(zhì)穩(wěn)定的生物電極材料。
[0004]目前，在制備鉬納米球殼方面，多用聚合物聚集、二氧化硅、金屬球殼為模板，但是這些聚合物、無(wú)機(jī)材料在生物體內(nèi)的后期消除存在一定的缺點(diǎn)，容易造成生物體中毒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種反應(yīng)條件溫和、簡(jiǎn)單，球殼直徑可控，生物相容性良好的以腺病毒穿梭載體-GFP為模板水相制備鉬納米球殼的方法。本發(fā)明主要是以腺病毒穿梭載體-GFP(Adv)為生物模板，以氯化鉬(PtCl4)作為鉬納米球殼的前驅(qū)體，以硼氫化鈉(NaBH4)作為還原劑，制備特定球殼形貌的鉬納米球殼(Adv-PtNSs)。
[0006]本發(fā)明的制備方法如下:
[0007](I)將滴度為I X IO11?I X 1012VP/mL的腺病毒穿梭載體_GFP (Adv)水溶液與濃度為5.0?10.0mM的PtCl4水溶液進(jìn)行等體積的溶液混合后進(jìn)行水浴恒溫?fù)u床共孵育，轉(zhuǎn)數(shù):100 ?200rpm，溫度:15 ?25°C，保溫:20 ?30h。
[0008](2)按照NaBH4水溶液與腺病毒穿梭載體-GFP水溶液的體積比為1:1?2的比例，向上述孵育好的混合溶液中逐滴加入現(xiàn)配制的3?IOmM的NaBH4水溶液對(duì)共孵育后的混合溶液進(jìn)行還原，使混合溶液顏色由淺黃色變?yōu)楹诨疑?，制備得到鉬納米球殼(Adv-PtNSs)。
[0009]上述制備方法中所需各種溶液均由去離子水配制。
[0010]腺病毒穿梭載體-GFP，是在腺病毒的基礎(chǔ)上進(jìn)行DNA改造而攜帶上綠色熒光蛋白基因的無(wú)感染能力的基因載體，已用于臨床應(yīng)用。腺病毒穿梭載體-GFP結(jié)構(gòu)為二十面體，直徑70-90nm，表面無(wú)囊膜且能耐受pH3_4的酸性環(huán)境。腺病毒穿梭載體-GFP為鉬納米球殼的形成提供了穩(wěn)定的球殼模板。
[0011]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn):[0012]1、反應(yīng)條件溫和，制備工藝簡(jiǎn)單，效率高，成本低；
[0013]2、腺病毒穿梭載體-GFP的二十面體結(jié)構(gòu)提供了理想的球殼模板，且無(wú)需對(duì)其進(jìn)行化學(xué)修飾；
[0014]3、制備的鉬納米球殼，球殼直徑可控，大小均一，分散性好。
[0015]4、可以保證制備的鉬納米球殼具有較高生物相容性，進(jìn)而可減小目前其他制備方法所造成的生物毒性影響，提高細(xì)胞電化學(xué)技術(shù)對(duì)細(xì)胞檢測(cè)的準(zhǔn)確度。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備的鉬納米球殼的透射電鏡圖。
[0017]圖2為本發(fā)明實(shí)施例2制備的鉬納米球殼的透射電鏡圖。
[0018]圖3為本發(fā)明實(shí)施例3制備的鉬納米球殼的透射電鏡圖。
【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例1:
[0020]將100 μ L滴度為I X 10nVP/mL的腺病毒穿梭載體-GFP水溶液與100 μ L濃度為5.0mM的PtCl4水溶液進(jìn)行混合，在水浴恒溫?fù)u床中共孵育，轉(zhuǎn)數(shù)為lOOrpm，溫度為15°C，保溫 30h。
[0021]向上述孵育好的混合液中逐滴加入100 μ L現(xiàn)配制的3mM NaBH4水溶液對(duì)共孵育好的混合液進(jìn)行還原，使混合液顏色由淺黃色變?yōu)楹诨疑?，制備得到鉬納米球殼(Adv-PtNSs)。
[0022]應(yīng)用透射電子顯微鏡對(duì)制備的鉬納米球殼進(jìn)行形貌表征，如圖1所示，鉬納米球殼的球殼形貌明顯，大小均一，分散性好，球殼直徑約在80_90nm左右。
[0023]實(shí)施例2:
[0024]將100 μ L滴度為5Χ 10nVP/mL的腺病毒穿梭載體-GFP(Adv)水溶液與100 μ L，7.5mM的PtCl4水溶液進(jìn)行混合，在水浴恒溫?fù)u床中共孵育:轉(zhuǎn)數(shù)為150rpm，溫度為20°C，保溫 25h。
[0025]向上述孵育好的混合液中逐滴加入現(xiàn)配制的80 μ L6mM NaBH4水溶液對(duì)共孵育好的混合液進(jìn)行還原，使混合液顏色由淺黃色變?yōu)楹诨疑?，制備得到鉬納米球殼(Adv-PtNSs)。
[0026]應(yīng)用透射電子顯微鏡對(duì)制備的鉬納米球殼進(jìn)行形貌表征，如圖2所示，鉬納米球殼的球殼形貌明顯，大小均一，分散性好，球殼直徑約在90_100nm左右。
[0027]實(shí)施例3:
[0028]將100 μ L滴度為I X 1012VP/mL的腺病毒穿梭載體_GFP (Adv)水溶液與100 μ L，7.5mM的PtCl4水溶液進(jìn)行混合，在水浴恒溫?fù)u床中共孵育:轉(zhuǎn)數(shù)為200rpm，溫度為25°C，保溫 20h。
[0029]向上述孵育好的混合液中逐滴加入現(xiàn)配制的50 μ LlOmM NaBH4水溶液對(duì)共孵育好的混合液進(jìn)行還原，使混合液顏色由淺黃色變?yōu)楹诨疑?，制備得到鉬納米球殼(Adv-PtNSs)。
[0030]應(yīng)用透射電子顯微鏡對(duì)制備的鉬納米球殼進(jìn)行形貌表征，如圖3所示，鉬納米球 殼的球殼形貌明顯，大小均一，分散性好，球殼直徑約在70_80nm左右。
【權(quán)利要求】
1.一種以腺病毒穿梭載體-GFP為模板合成鉬納米球殼的方法,其特征在于: (1)將滴度為IX IO11~I X 1012VP/mL的腺病毒穿梭載體-GFP水溶液與濃度為5.0~10.0mM的PtCl4水溶液進(jìn)行等體積的溶液混合后進(jìn)行水浴恒溫?fù)u床共孵育，轉(zhuǎn)數(shù):100~200rpm，溫度:15 ~25°C，保溫:20 ~30h ； (2)按照NaBH4水溶液與腺病毒穿梭載體-GFP水溶液的體積比為1:1~2的比例，向上述孵育好的混合溶液中逐滴加入現(xiàn)配制的3~IOmM的NaBH4水溶液對(duì)共孵育后的混合溶液進(jìn)行還原，使混合溶液顏色由淺黃色變?yōu)楹诨疑?，制備得到鉬納米球殼。
2.根據(jù)權(quán)利要求所述的一種以腺病毒穿梭載體-GFP為模板合成鉬納米球殼的方法，其特征在于:上述制備方法中所需各種溶液均由去離子水配制。
【文檔編號(hào)】B22F9/24GK104014809SQ201410233976
【公開日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2014年5月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月29日
【發(fā)明者】高大威, 周景, 高發(fā)明, 趙曉寧, 王梓, 薛偉利, 駱麗垚 申請(qǐng)人:燕山大學(xué)