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純化CNTF的方法和制備修飾型CNTF的方法與流程

文檔序號:12342409閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種從液體混合物中純化重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的方法,所述液體混合物至少包含重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、核酸以及內(nèi)毒素,該方法包括以下步驟:

i)對所述液體混合物進行疏水層析,以獲得疏水層析洗脫液,其中所述疏水層析所采用的介質(zhì)為丁基-瓊脂糖;和

ii)對所述疏水層析所得的洗脫液進行陰離子交換層析,以獲得陰離子層析洗脫液,其中所述陰離子交換層析所采用的介質(zhì)為QHP。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述陰離子交換層析在pH為7.4-7.7的條件下進行。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,還包括對所述陰離子交換層析所得的洗脫液進行超濾。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述液體混合物為能表達重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的細胞的裂解液的上清液。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其中所述能表達重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的細胞為遺傳工程化的原核宿主細胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其中所述重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其中所述遺傳工程化的原核宿主細胞為大腸桿菌CNTFnew/CC22,所述上清液是對該宿主細胞的裂解液進行離心而獲得的。

8.一種制備經(jīng)化學(xué)修飾的重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的方法,該方法包括以下步驟:

a)利用化學(xué)修飾劑對重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子進行修飾,從而獲得包含修飾型重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的混合物,其中所述重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子為根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項所述方法純化得到的。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中在步驟a)中,所述重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子以濃度為1-4mg/ml,優(yōu)選為2mg/ml的溶液使用,該重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子與所述化學(xué)修飾劑的摩爾比為1:(1-4),優(yōu)選為1:2。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中在所述步驟a)中,所進行的修飾不需要進行終止反應(yīng)。

11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中所述化學(xué)修飾為聚乙二醇化修飾,所述修飾劑選自:聚乙二醇、甲氧基聚乙二醇、甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亞胺琥珀酸酯、甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亞胺碳酸酯、甲氧基聚乙二醇三氟乙基磺酸酯、甲氧基聚乙二醇-丙醛、甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亞胺丙酸酯、甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亞胺α甲基丁酸酯、甲氧基聚乙二醇-N-羥基琥珀酰亞胺、甲氧基聚乙二醇-馬來酰亞胺或甲氧基聚乙二醇-乙醛;優(yōu)選為甲氧基聚乙二醇-馬來酰亞胺。

12.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中所述方法還包括:

b)對所述包含修飾型重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的混合物進行陰離子交換層析,以獲得陰離子層析洗脫液。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法,其中所述陰離子交換層析所采用的介質(zhì)為QHP。

14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法,其中所述方法還包括:

c)對所得陰離子層析洗脫液進行超濾。

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