本發(fā)明涉及一種表面增強(qiáng)拉曼檢測(cè)，特別涉及一種3d納米銀樹(shù)/海膽狀金的制備方法及其在尿酸sers檢測(cè)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、尿酸是人體嘌呤分解代謝的產(chǎn)物，是診斷嘌呤代謝紊亂所導(dǎo)致痛風(fēng)（gout）的最佳生化標(biāo)志物，同時(shí)也是心腦血管疾病、糖尿病、高血壓、腎臟衰竭等疾病的重要標(biāo)志物，此外，還可作為子癇前期的重要指標(biāo)。在正常情況下，尿液中尿酸的濃度為160～1000?mg/l，血液中尿酸的濃度為35～70?mg/l。血液中尿酸的飽和值為70?mg/l，一旦達(dá)到或超過(guò)該水平，尿酸即以結(jié)晶形式析出，沉積于腎臟、皮下、肌腱、軟骨、關(guān)節(jié)囊及滑膜等部位，導(dǎo)致一系列并發(fā)癥，影響人體細(xì)胞的正常功能，并被診斷為高尿酸血癥（hyperuricemia）。當(dāng)尿酸濃度大于0.4?mmol/l時(shí)，表明患有嚴(yán)重的子癇前期（preeclampsia）。并且，隨著人們生活水平的不斷提高，由高尿酸血癥所導(dǎo)致的痛風(fēng)等疾病的發(fā)病率也逐漸上升，且發(fā)病人群越發(fā)年輕化。因此，尿酸含量的檢測(cè)在臨床診斷方面具有重要的意義。目前，有關(guān)尿酸主要檢測(cè)方法包括磷鎢酸還原法、酶檢測(cè)法、液相色譜法、電化學(xué)方法等，但這些方法存在一些不足，如多適用于晚期子癇前期測(cè)試，或操作繁瑣耗時(shí)，或較低的靈敏度等。因此，有必要發(fā)展快速、簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確的尿酸檢測(cè)方法。

2、中國(guó)發(fā)明專利201110129164.0公開(kāi)了一種基于表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)的尿酸定量檢測(cè)方法，將naoh、鹽酸羥胺添加到agno3溶液中得到銀膠；將銀膠離心后得到高濃度銀膠；把不同濃度尿酸溶液與高濃度銀膠混合并添加k2so4溶液進(jìn)行拉曼光譜測(cè)試得到尿酸sers光譜；取高濃度銀膠進(jìn)行測(cè)試得銀膠本底sers譜圖；用銀膠本底拉曼信號(hào)作為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行強(qiáng)度歸一化，建立尿酸sers光譜譜線相對(duì)強(qiáng)度-濃度標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖；把未知濃度尿酸溶液sers譜圖與尿酸sers光譜相對(duì)強(qiáng)度-濃度標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)照，推斷尿酸濃度。該技術(shù)方案是以常見(jiàn)的銀膠聚集體作為sers基底，檢測(cè)尿酸的靈敏度不高，且制備過(guò)程需要利用電解質(zhì)k2so4引發(fā)銀膠聚集，制備過(guò)程繁雜。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是：提供一種3d納米銀樹(shù)/海膽狀金的制備方法及其在尿酸sers檢測(cè)中的應(yīng)用，利用化學(xué)還原法制備了3d納米銀樹(shù)/海膽狀金，其具有3d納米結(jié)構(gòu)，作為sers基底具有制備簡(jiǎn)單、靈敏度高、穩(wěn)定性和均一性好等優(yōu)點(diǎn)，在尿酸檢測(cè)中具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

2、解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案是：一種3d納米銀樹(shù)/海膽狀金的制備方法，包括以下步驟：

3、a、銅片預(yù)處理：銅片裁剪成（1-1.5）×（1-1.5）cm規(guī)格，用砂紙打磨拋光，再置于無(wú)水乙醇、超純水中各自超聲處理；

4、b、3d銀納米樹(shù)的制備：將經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的銅片放置于硝酸銀溶液中室溫浸泡反應(yīng)5-10分鐘，靜待銀納米樹(shù)的生成，最后用超純水洗滌，吹干，得到3d銀納米樹(shù)銅片備用；

5、c、海膽狀金納米粒子的制備：在燒杯中加入10-20ml的超純水、250-350μl濃度12-17mmol/l的氯金酸溶液及350-450μl濃度?58-62mmol/l的鹽酸羥胺溶液，磁力攪拌使其均勻混合后再加入1000-1100μl?濃度38-42mmol/l氫氧化鈉溶液，室溫下磁力攪拌15-25min制得海膽狀金納米粒子；

6、d、銀納米樹(shù)/海膽狀金納米粒子的組裝：采用物理沉積的方式將海膽狀金納米粒子組裝到3d銀納米樹(shù)上，即將3d銀納米樹(shù)銅片置于坩堝中，恰好覆蓋坩堝底部，再加入10-15?ml步驟c所制的海膽狀金納米粒子的溶液，室溫下靜置45-55min，取出室溫干燥后，用up水和乙醇交替清洗，得到3d納米銀樹(shù)/海膽狀金。

7、進(jìn)一步的，步驟b中，硝酸銀溶液的濃度為0.006-0.008?mol/l，用量65-75?ml。

8、進(jìn)一步的，步驟a中，用砂紙打磨拋光，將表面氧化銅以及污點(diǎn)清除直至呈現(xiàn)玫瑰紅色，再置于無(wú)水乙醇、超純水中各自超聲4-6分鐘。

9、本發(fā)明的另一技術(shù)方案是：上述方法制備得到的3d納米銀樹(shù)/海膽狀金在尿酸sers檢測(cè)中的應(yīng)用，包括以下步驟：

10、（1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：將3d納米銀樹(shù)/海膽狀金作為sers基底，將多個(gè)sers基底分別浸泡于1.5?ml系列濃度的尿酸溶液中，取出，自然晾干后，檢測(cè)其拉曼信號(hào)，繪制尿酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；

11、（2）將3d納米銀樹(shù)/海膽狀金sers基底上浸泡于待測(cè)人血清中，取出，自然晾干后，檢測(cè)其拉曼信號(hào)，通過(guò)尿酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到人血清中尿酸含量。

12、進(jìn)一步的，步驟（1）中所述尿酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為： i sers=??890（log c）+8066， r2=0.983，其中， i sers表示基底材料上尿酸拉曼強(qiáng)度，log c表示尿酸質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)。

13、進(jìn)一步的，步驟（1）中，系列濃度尿酸溶液的濃度為5×10-4?～1×10-7?mol/l。

14、進(jìn)一步的，步驟（1）中，繪制尿酸標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，作為內(nèi)標(biāo)的譜峰為3d納米銀樹(shù)/海膽狀金sers基底拉曼光譜1400?cm-1譜峰。

15、?表面增強(qiáng)拉曼光譜（sers）具有靈敏度高、無(wú)損檢測(cè)、抗水干擾、指紋識(shí)別等的優(yōu)勢(shì)，被廣泛應(yīng)用于化學(xué)和生物分子的定性和定量。大多化學(xué)和生物分子具有拉曼活性，可以通過(guò)sers進(jìn)行免標(biāo)記檢測(cè)。sers檢測(cè)技術(shù)的關(guān)鍵在于制備高活性和均一性好的基底。米貴金屬（如銅、銀、金）為常見(jiàn)的sers基底，相關(guān)的研究表明，在基底的銳角、尖端及納米粒子間隙等部位可產(chǎn)生更強(qiáng)的局域電磁場(chǎng)，容易形成熱點(diǎn)（“hot?spot”)?，具有較強(qiáng)的拉曼增強(qiáng)效應(yīng)，其增強(qiáng)因子可高達(dá)10。與1?d、2?d的sers基底相比，3d?sers基底容易實(shí)現(xiàn)多維表面等離激元耦合，更易形成高密度熱點(diǎn)。相關(guān)的研究表明，納米銀與納米金相比，納米銀的sers活性更強(qiáng)，但納米金的生物兼容性好、穩(wěn)定性高。

16、本發(fā)明基于金、銀納米粒子的特性和3d?sers基底易形成更多“熱點(diǎn)”的優(yōu)勢(shì)，運(yùn)用簡(jiǎn)單、易控的置換還原法制備了3d納米銀樹(shù)/海膽狀金作為sers基底，并用于尿酸的檢測(cè)，原理如圖1所示。該sers基底具有制備簡(jiǎn)單、靈敏度高、穩(wěn)定性和均一性好等優(yōu)點(diǎn)，在尿酸檢測(cè)中具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

17、本發(fā)明考察了尿酸在該基底上的sers性能，結(jié)果表明：該sers基底對(duì)尿酸具有顯著的拉曼增強(qiáng)效應(yīng)。濃度在5×10-4?mol/l～1×10-7?mol/l濃度范圍之間，1400?cm-1處sers強(qiáng)度( i sers)與尿酸濃度對(duì)數(shù)值呈良好的線性關(guān)系，線性擬合方程為 i sers=890.56（log? c）+8066.99?(r2=0.987)，檢出限2.5×10-9?mol/l。在人血清中進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，回收率在82.86～125.13?%之間，rsd（n=3）<3.5%。

18、本發(fā)明利用化學(xué)還原法制備了3d納米銀樹(shù)/海膽狀金，其具有3d納米結(jié)構(gòu)，可以形成高密度的“熱點(diǎn)”，以進(jìn)一步提高拉曼光譜增強(qiáng)效應(yīng)和檢測(cè)的靈敏度。與中國(guó)發(fā)明專利201110129164.0相比，本發(fā)明為固態(tài)sers基底，而上述專利是以常見(jiàn)的銀膠聚集體作為sers基底；本發(fā)明的固態(tài)sers基底的形貌結(jié)構(gòu)為3d納米銀樹(shù)/海膽狀金，而上述專利是sers基底為銀膠聚集體，而且需要利用電解質(zhì)k2so4引發(fā)銀膠聚集；本發(fā)明方法檢測(cè)尿酸的靈敏度顯著高于上述專利。

19、下面，結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明之一種3d納米銀樹(shù)/海膽狀金的制備方法及其在尿酸sers檢測(cè)中的應(yīng)用的技術(shù)特征作進(jìn)一步的說(shuō)明。