本發(fā)明涉及一種磁珠的制備方法，具體是一種具有間隔臂的微米級(jí)超順磁磁珠的制備方法。

背景技術(shù)：

微米級(jí)磁珠由于具有超順磁特性，只有在外加磁場(chǎng)作用下顯示條件性磁性，而且形狀規(guī)則，尺寸小、比表面積大和表面可以進(jìn)行各種修飾改性等特點(diǎn)，在生物試劑和醫(yī)療用品等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用，特別在高通量生物科學(xué)領(lǐng)域等技術(shù)前沿地帶具有明顯的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。但是蛋白質(zhì)等生物大分子由于具有很大的分子量，會(huì)附加一定的空間結(jié)構(gòu)，因此都具有較大的分子體積。在以磁珠為載體的表面偶聯(lián)生物大分子時(shí)，其空間結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的空間位阻，從而降低磁珠表面生物大分子的加載量和生物活性，目前市場(chǎng)中存在的微米級(jí)磁珠都存在加載量不足的問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種具有間隔臂的微米級(jí)超順磁磁珠的制備方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種具有間隔臂的微米級(jí)超順磁磁珠的制備方法，具體步驟如下：

步驟一，超順磁Fe₃O₄微米磁珠的制備：采用共沉淀法合成超順磁Fe₃O₄微米磁珠：將FeCl₃·6H₂O和FeSO₄·7H₂O分別溶于HCl溶液中，濃度均為1mol/L，將兩種溶液進(jìn)行機(jī)械攪拌混合，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入氨水，使溶液pH值達(dá)到11，在室溫下劇烈攪拌20-30分鐘，以釹鐵硼磁鐵進(jìn)行磁分離，分別用高純水和無(wú)水乙醇依次清洗各2-5次，50-60℃真空干燥10-14小時(shí)；

步驟二，磁珠表面活化：將步驟一中的微米磁珠用電位滴定法測(cè)定微球羥基密度，分別加入與測(cè)得的羥基密度等量的1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基二亞胺鹽酸鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺，室溫反應(yīng)20-60分鐘，將磁珠表面的羥基活化；

步驟三，偶聯(lián)間隔臂分子：向步驟二中制得的磁珠中加入間隔臂分子，其加入量為磁珠羥基密度的1-3倍，在35-40℃反應(yīng)3-12小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)水透析除去剩余的底物，收集此微米磁珠，于0-4℃保存。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：間隔臂分子中含有碳原子的數(shù)量為8個(gè)，間隔臂分子為帶有氨基和羧基的化合物。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：該制備工藝在納米微球的表面引入了間隔臂，降低了偶聯(lián)大分子的空間位阻，提高了大分子的活性和利用率，減少了大分子和磁珠表面的非特異性相互作用，同時(shí)該磁珠的粒徑通過(guò)配比設(shè)定可以實(shí)現(xiàn)在一定范圍內(nèi)的可控制備（2-5微米），制備工藝所用儀器設(shè)備簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)，粒徑可調(diào)且分散性好，不易聚集；表面羥基密度可以調(diào)節(jié)，進(jìn)而可以調(diào)節(jié)間隔臂的長(zhǎng)度和表面密度；間隔臂末端為羧基基團(tuán)，可以與含有氨基、羥基等分子發(fā)生反應(yīng)，克服了磁珠反應(yīng)活性低的缺點(diǎn)，擴(kuò)大了此微米磁珠的范圍，使用效果好。

附圖說(shuō)明

圖1為具有間隔臂的微米級(jí)超順磁磁珠的制備方法中制備的微米磁珠的結(jié)構(gòu)式圖。

圖2為具有間隔臂的微米級(jí)超順磁磁珠的制備方法中平均粒徑為2.8微米的磁珠的粒度分布圖。

其中：M為微米級(jí)超順磁磁珠，n=1-3。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本專(zhuān)利的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明。

實(shí)施例1

一種具有間隔臂的微米級(jí)超順磁磁珠的制備方法，具體步驟如下：

步驟一，超順磁Fe₃O₄微米磁珠的制備：采用共沉淀法合成超順磁Fe₃O₄微米磁珠：將FeCl₃·6H₂O和FeSO₄·7H₂O分別溶于HCl溶液中，濃度均為1mol/L，將兩種溶液進(jìn)行機(jī)械攪拌混合，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入氨水，使溶液pH值達(dá)到11，在室溫下劇烈攪拌20分鐘，以釹鐵硼磁鐵進(jìn)行磁分離，分別用高純水和無(wú)水乙醇依次清洗各3次，50℃真空干燥14小時(shí)；

步驟二，磁珠表面活化：將步驟一中的微米磁珠用電位滴定法測(cè)定微球羥基密度，分別加入與測(cè)得的羥基密度等量的1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基二亞胺鹽酸鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺，室溫反應(yīng)20分鐘，將磁珠表面的羥基活化；

步驟三，偶聯(lián)間隔臂分子：向步驟二中制得的磁珠中加入間隔臂分子，間隔臂分子中含有碳原子的數(shù)量為8個(gè)，間隔臂分子為帶有氨基和羧基的化合物，其加入量為磁珠羥基密度的2倍，在35℃反應(yīng)5小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)水透析除去剩余的底物，收集此微米磁珠，于2℃保存。

實(shí)施例2

一種具有間隔臂的微米級(jí)超順磁磁珠的制備方法，具體步驟如下：

步驟一，超順磁Fe₃O₄微米磁珠的制備：采用共沉淀法合成超順磁Fe₃O₄微米磁珠：將FeCl₃·6H₂O和FeSO₄·7H₂O分別溶于HCl溶液中，濃度均為1mol/L，將兩種溶液進(jìn)行機(jī)械攪拌混合，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入氨水，使溶液pH值達(dá)到11，在室溫下劇烈攪拌25分鐘，以釹鐵硼磁鐵進(jìn)行磁分離，分別用高純水和無(wú)水乙醇依次清洗各4次，55℃真空干燥10小時(shí)；

步驟二，磁珠表面活化：將步驟一中的微米磁珠用電位滴定法測(cè)定微球羥基密度，分別加入與測(cè)得的羥基密度等量的1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基二亞胺鹽酸鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺，室溫反應(yīng)40分鐘，將磁珠表面的羥基活化；

步驟三，偶聯(lián)間隔臂分子：向步驟二中制得的磁珠中加入間隔臂分子，間隔臂分子中含有碳原子的數(shù)量為8個(gè)，間隔臂分子為帶有氨基和羧基的化合物，其加入量為磁珠羥基密度的3倍，在40℃反應(yīng)8小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)水透析除去剩余的底物，收集此微米磁珠，于4℃保存

實(shí)施例3

一種具有間隔臂的微米級(jí)超順磁磁珠的制備方法，具體步驟如下：

步驟一，超順磁Fe₃O₄微米磁珠的制備：采用共沉淀法合成超順磁Fe₃O₄微米磁珠：將FeCl₃·6H₂O和FeSO₄·7H₂O分別溶于HCl溶液中，濃度均為1mol/L，將兩種溶液進(jìn)行機(jī)械攪拌混合，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入氨水，使溶液pH值達(dá)到11，在室溫下劇烈攪拌30分鐘，以釹鐵硼磁鐵進(jìn)行磁分離，分別用高純水和無(wú)水乙醇依次清洗各5次， 60℃真空干燥10-14小時(shí)；

步驟二，磁珠表面活化：將步驟一中的微米磁珠用電位滴定法測(cè)定微球羥基密度，分別加入與測(cè)得的羥基密度等量的1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基二亞胺鹽酸鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺，室溫反應(yīng)60分鐘，將磁珠表面的羥基活化；

步驟三，偶聯(lián)間隔臂分子：向步驟二中制得的磁珠中加入間隔臂分子，間隔臂分子中含有碳原子的數(shù)量為8個(gè)，間隔臂分子為帶有氨基和羧基的化合物，其加入量為磁珠羥基密度的1倍，在35-40℃反應(yīng)10小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)水透析除去剩余的底物，收集此微米磁珠，于3℃保存

實(shí)施例4

一種具有間隔臂的微米級(jí)超順磁磁珠的制備方法，具體步驟如下：

步驟一，超順磁Fe₃O₄微米磁珠的制備：采用共沉淀法合成超順磁Fe₃O₄微米磁珠：將FeCl₃·6H₂O和FeSO₄·7H₂O分別溶于HCl溶液中，濃度均為1mol/L，將兩種溶液進(jìn)行機(jī)械攪拌混合，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入氨水，使溶液pH值達(dá)到11，在室溫下劇烈攪拌20-30分鐘，以釹鐵硼磁鐵進(jìn)行磁分離，分別用高純水和無(wú)水乙醇依次清洗各2次，60℃真空干燥14小時(shí)；

步驟二，磁珠表面活化：將步驟一中的微米磁珠用電位滴定法測(cè)定微球羥基密度，分別加入與測(cè)得的羥基密度等量的1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基二亞胺鹽酸鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺，室溫反應(yīng)60分鐘，將磁珠表面的羥基活化；

步驟三，偶聯(lián)間隔臂分子：向步驟二中制得的磁珠中加入間隔臂分子，間隔臂分子中含有碳原子的數(shù)量為8個(gè)，間隔臂分子為帶有氨基和羧基的化合物，其加入量為磁珠羥基密度的3倍，在38℃反應(yīng)12小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)水透析除去剩余的底物，收集此微米磁珠，于4℃保存。

偶聯(lián)間隔臂分子后的磁珠粒徑為2-5微米。

上面對(duì)本專(zhuān)利的較佳實(shí)施方式作了詳細(xì)說(shuō)明，但是本專(zhuān)利并不限于上述實(shí)施方式，在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所具備的知識(shí)范圍內(nèi)，還可以在不脫離本專(zhuān)利宗旨的前提下做出各種變化。