本發(fā)明涉及一種含有微生物菌劑的復(fù)混肥的制備方法。

背景技術(shù)：

海藻肥料以天然海藻為原料，經(jīng)過特殊生化工藝處理，提取并保留海藻天然活性成分，精煉濃縮而形成的一種新型有機肥料。海藻肥料具有提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)，抵抗病蟲害及不良環(huán)境以及改良土壤保持水土的功效，其應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)有巨大的市場需求和良好的發(fā)展前景。但是，要保障海藻肥料的質(zhì)量，就必須把握好海藻原料和提取工藝兩個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

首先，海藻肥料質(zhì)量的優(yōu)劣取決于所用的原料。目前，海藻肥生產(chǎn)企業(yè)所用的原料主要以褐藻為主，包括泡葉藻、昆布、海帶、馬尾藻等。其他藻類如墨角藻、滸苔、石莼、卡帕藻等也有少數(shù)企業(yè)在用。國外海藻肥企業(yè)絕大多數(shù)使用褐藻為原料，其中尤以泡葉藻應(yīng)用最為廣泛如Seasol、Maxicrop等知名品牌，實際作用效果也表明泡葉藻是優(yōu)質(zhì)的海藻原料。但是，我國沿海沒有泡葉藻分布，國內(nèi)企業(yè)采用的原料種類繁雜，品質(zhì)參差不一，造成海藻肥產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，甚至有些廠家打著“海藻肥”的幌子，直接勾兌褐藻酸，黃腐酸、氮磷鉀等冒充海藻肥，影響了海藻肥質(zhì)量，擾亂了海藻肥市場。

其次，決定海藻肥質(zhì)量的第二個因素是提取工藝。不同的提取工藝對海藻肥活性成分的種類和含量影響巨大。目前，海藻活性成分的提取方法主要有化學(xué)法、物理法以及生物法。化學(xué)法主要是利用酸、堿及有機溶劑處理海藻細胞，使細胞消解或內(nèi)源物質(zhì)增溶，該方法操作簡單，容易實現(xiàn)，也是國內(nèi)外絕大多數(shù)海藻肥生產(chǎn)企業(yè)采用的方法。但是，化學(xué)試劑對海藻細胞內(nèi)的活性物質(zhì)成分的破壞是相當大的，并且殘留的有機試劑對環(huán)境也是潛在的危害。物理法的原理是控制壓力，溫度等物理環(huán)境條件，利用機械力使海藻細胞破碎，內(nèi)容物釋放。該方法雖然工藝清潔、環(huán)境友好，但是對于儀器設(shè)備的要求嚴苛，反應(yīng)條件變化劇烈，成本較高，難以實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。生物法包括酶法降解和微生物發(fā)酵兩種方法，其主要原理是破壞海藻細胞壁結(jié)構(gòu)并降解大分子物質(zhì)為植物容易吸收利用的小分子物質(zhì)，該方法反應(yīng)溫和，產(chǎn)物多元化，整個生產(chǎn)過程安全環(huán)保無污染，是理想的海藻肥生產(chǎn)方法。

利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)海藻肥料的研究相對較少，僅有的幾例研究是選用多種微生物對海藻原料進行類似堆肥發(fā)酵或好氧發(fā)酵處理，存在發(fā)酵過程可控性差，發(fā)酵周期長，目標產(chǎn)物不明確等問題，難以滿足工業(yè)化生產(chǎn)要求的統(tǒng)一，穩(wěn)定，可控的標準，產(chǎn)品的質(zhì)量難以保障。

針對農(nóng)業(yè)用微生物的評價指標主要包括菌劑的純度和單位質(zhì)量中的菌劑數(shù)量。因此，作為現(xiàn)有技術(shù)的菌劑制備方法一般是：在微生物適宜生存的溫度和pH條件下進行一次發(fā)酵工藝，以達到菌在單位質(zhì)量中數(shù)量的最大化，相當于溫室培養(yǎng)。

由于目前土壤板結(jié)酸化嚴重，外界氣溫變化無常，溫室培養(yǎng)的微生物菌劑直接投放到土壤中，因不能適應(yīng)惡劣的土壤環(huán)境造成大量死亡，即使有少量存活因無法形成種群效應(yīng)，也無法發(fā)揮微生物菌劑的效果。

目前無產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌和復(fù)混肥最經(jīng)濟的條件下發(fā)揮最大肥效的最佳質(zhì)量比。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種含有巨大芽孢桿菌菌劑的復(fù)混肥的制備方法，利用巨大芽孢桿菌制備復(fù)混肥，該方法通過調(diào)節(jié)發(fā)酵條件使菌具有較好的環(huán)境適應(yīng)能力，易于在惡劣的土壤環(huán)境中發(fā)揮菌的優(yōu)勢；通過確定巨大芽孢桿菌和復(fù)混肥的最佳質(zhì)量比達到最經(jīng)濟的條件下發(fā)揮最大肥效。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種含有巨大芽孢桿菌菌劑的復(fù)混肥的制備方法，其特征在于按照以下步驟進行：

將氮肥、磷肥、鉀肥和輔料按照質(zhì)量比10～90:10～90:10～90:50～70加入到造粒滾筒中造粒，然后經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，得到復(fù)混肥料；在包裹滾筒中，將包裹油和巨大芽孢桿菌菌劑噴入到復(fù)混肥表面，得到含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌復(fù)混肥，其中復(fù)混肥、包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑的質(zhì)量比是55～99.8:0.1～5:0.1～40；

所述氮肥是尿素、氯化銨、硝銨磷和硫酸銨中的一種或任意比例的兩種以上；

所述磷肥是磷酸一銨、磷酸二銨和磷酸二氫鉀中的一種或任意比例的兩種以上；

所述鉀肥是硫酸鉀、硝酸鉀和氯化鉀中的一種或任意比例的兩種以上；

所述輔料為膨潤土、高嶺土和滑石粉中的一種或任意比例的兩種以上；

其中巨大芽孢桿菌菌劑按照以下步驟制備而成：

1）、制備海藻粉末：將烘干后的海藻磨成粉末；

2）、制備產(chǎn)品A：海藻粉末與水按照質(zhì)量比1～10:100裝入發(fā)酵罐中，在100～150℃條件下滅菌15～35min，得到產(chǎn)品A；

并制備種子液：將巨大芽孢桿菌接種至液體培養(yǎng)基，在25℃～40℃培養(yǎng)20～30小時；巨大芽孢桿菌與培養(yǎng)基之間的體積比為1～10:100；

3）、制備產(chǎn)品B：將種子液加入到產(chǎn)品A中得到產(chǎn)品B，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為1～10:100；

4）、制備產(chǎn)品C：在溫度為25℃～40℃，pH5～9的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為6～10天，得到產(chǎn)品C；

5）、制備產(chǎn)品D：調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.0～6.0，溫度至3～10℃，保存3h～72h，得到產(chǎn)品D；

6）、制備產(chǎn)品E:調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至25℃～40℃，pH至5～9，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為1～10:100，保存3h～72h，得到產(chǎn)品E；

7）、制備產(chǎn)品F：調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.0～6.0，溫度至3～10℃，保存3h～72h，得到產(chǎn)品F；

8）、制備產(chǎn)品G：調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至25℃～40℃，pH至5～9，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為1～10:100，保存3h～72h，得到產(chǎn)品G；

9）、制備巨大芽孢桿菌菌劑：將產(chǎn)品G風(fēng)干后得到巨大芽孢桿菌菌劑。

所述液體培養(yǎng)基按照以下質(zhì)量比配成：海藻酸鈉5份、硫酸銨5份、硫酸鎂1份、磷酸氫二鉀2份、硫酸亞鐵0.01份、瓊脂20份和蒸餾水1000份。

步驟2）所述海藻粉末和水的質(zhì)量比為4:100；滅菌溫度115℃，滅菌時間25min；制備種子液時，巨大芽孢桿菌接種至液體培養(yǎng)基中，在30℃培養(yǎng)24小時，得到種子液，巨大芽孢桿菌和培養(yǎng)基的體積比例為5:100；步驟3）中，種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為10:100；步驟5）和步驟7）中，溫度為5℃，保存時間為12h。

步驟4）、步驟6）和步驟8）中，溫度為30℃，pH為6.5～7.0；步驟4）發(fā)酵時間為8天；步驟6）和步驟8）保存時間為12h；步驟6）中補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比以及步驟8）中補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比均為5:100。

步驟5）、步驟6）步驟7）和步驟8）中，調(diào)整溫度均為每小時調(diào)整3℃。

所述復(fù)混肥、包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑的質(zhì)量比是99.5:0.2:0.3。

所述海藻是指鼠尾藻，銅藻和馬尾藻中的一種或任意比例的兩種以上。

所述巨大芽孢桿菌是巨大芽孢桿菌YIC～BM1，保藏號為CGMCC No.12156。

本發(fā)明具有以下有益技術(shù)效果：

1、采用本發(fā)明的巨大芽孢桿菌對海藻發(fā)酵，發(fā)酵過程穩(wěn)定可控，發(fā)酵周期短，產(chǎn)物功效顯著，適于規(guī)?；a(chǎn)。

2、本發(fā)明得到的發(fā)酵液具有水溶性好，易于植物吸收利用，同時作為一種重要的信號分子，能夠參與植物的生長調(diào)節(jié)和誘導(dǎo)抗病過程促進植物的生長，提高植物對不良環(huán)境及病蟲害的抵抗力。

3、本發(fā)明通過調(diào)節(jié)發(fā)酵條件使發(fā)酵出的菌具備適應(yīng)惡劣的土壤環(huán)境的能力，有利于菌功能的發(fā)揮。

4、本發(fā)明通過緩慢的溫度調(diào)節(jié)，使產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌適應(yīng)溫度的變化，避免溫度變化過快，產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌不能適應(yīng)而大量死亡。

5、本發(fā)明通過包裹油將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌和復(fù)混肥阻隔，并且利用包裹油的粘性將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌均勻的粘結(jié)在肥料的表面，可以有效避免產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌與高鹽分的復(fù)混肥直接接觸，防止因復(fù)混肥鹽分過高導(dǎo)致產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌細胞失水，造成產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌大量死亡。

6、本發(fā)明通過大量實驗確定了產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌和復(fù)混肥的最佳質(zhì)量比。

附圖說明

圖1是顯微觀察YIC～BM1菌株的革蘭氏染色及聚集成團現(xiàn)象圖。

圖2基于16SrDNA序列構(gòu)建的YIC～BM1菌株系統(tǒng)發(fā)育樹示意圖。

圖3是不同溫度對YIC～BM1菌株產(chǎn)酶的影響的示意圖。

圖4是不同pH對YIC～BM1菌株產(chǎn)酶的影響示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實例進一步說明本發(fā)明。

以下是本發(fā)明海藻液制備實施例。

實施例1

將洗凈烘干后的新鮮鼠尾藻磨成50～60目粉末；

海藻粉末與水按照質(zhì)量比4:100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌25min，得到產(chǎn)品A；并制備種子液：將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1接種至液體培養(yǎng)基，在35℃培養(yǎng)24小時；所述產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156；產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100。將種子液加入到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為10:100，得到產(chǎn)品B；在溫度為35℃，pH6.0～6.5的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為8天，得到產(chǎn)品C；調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.5～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品D；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至35℃，pH至6.0～6.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為6:100，保存12h，得到產(chǎn)品E；調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.5～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品F；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至35℃，pH至6.0～6.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為6:100，保存12h，得到產(chǎn)品G；將產(chǎn)品G風(fēng)干后得到產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑；將氮肥、磷肥、鉀肥和輔料按照質(zhì)量比20:20:10:50加入到造粒滾筒中造粒，產(chǎn)品經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，進入到包裹滾筒，得復(fù)混肥料；在包裹滾筒中，將包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑噴入到復(fù)混肥表面，復(fù)混肥料、包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑的質(zhì)量比為99.5:0.2:0.3，得到含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥。

實施例2

將洗凈烘干后的新鮮鼠尾藻磨成50～60目粉末；

海藻粉末與水按照質(zhì)量比4:100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌25min，得到產(chǎn)品A；并制備種子液：將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1接種至液體培養(yǎng)基，在35℃培養(yǎng)24小時；所述產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156；產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100。將種子液加入到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為10:100，得到產(chǎn)品B；在溫度為35℃，pH6.0～6.5的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為8天，得到產(chǎn)品C；調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.5～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品D；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至35℃，pH至6.0～6.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為6:100，保存12h，得到產(chǎn)品E；調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.5～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品F；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至35℃，pH至6.0～6.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為6:100，保存12h，得到產(chǎn)品G；將產(chǎn)品G風(fēng)干后得到產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑；將氮肥、磷肥、鉀肥和輔料按照質(zhì)量比20:20:10:50加入到造粒滾筒中造粒，產(chǎn)品經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，進入到包裹滾筒，得復(fù)混肥料；在包裹滾筒中，將包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑噴入到復(fù)混肥表面，復(fù)混肥料、包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑的質(zhì)量比為99.7:0.2:0.1，得到含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥。

實施例3

將洗凈烘干后的新鮮鼠尾藻磨成50～60目粉末；

海藻粉末與水按照質(zhì)量比4:100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌25min，得到產(chǎn)品A；并制備種子液：將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1接種至液體培養(yǎng)基，在35℃培養(yǎng)24小時；所述產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156；產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100。將種子液加入到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為10:100，得到產(chǎn)品B；在溫度為35℃，pH6.0～6.5的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為8天，得到產(chǎn)品C；調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.5～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品D；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至35℃，pH至6.0～6.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為6:100，保存12h，得到產(chǎn)品E；調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.5～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品F；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至35℃，pH至6.0～6.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為6:100，保存12h，得到產(chǎn)品G；將產(chǎn)品G風(fēng)干后得到產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑；將氮肥、磷肥、鉀肥和輔料按照質(zhì)量比20:20:10:50加入到造粒滾筒中造粒，產(chǎn)品經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，進入到包裹滾筒，得復(fù)混肥料；在包裹滾筒中，將包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑噴入到復(fù)混肥表面，復(fù)混肥料、包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑的質(zhì)量比為99.6:0.2:0.2，得到含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥。

實施例4

將洗凈烘干后的新鮮鼠尾藻磨成50～60目粉末；

海藻粉末與水按照質(zhì)量比4:100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌25min，得到產(chǎn)品A；并制備種子液：將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1接種至液體培養(yǎng)基，在35℃培養(yǎng)24小時；所述產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156；產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100。將種子液加入到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為10:100，得到產(chǎn)品B；在溫度為35℃，pH6.0～6.5的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為8天，得到產(chǎn)品C；調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.5～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品D；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至35℃，pH至6.0～6.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為6:100，保存12h，得到產(chǎn)品E；調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.5～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品F；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至35℃，pH至6.0～6.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為6:100，保存12h，得到產(chǎn)品G；將產(chǎn)品G風(fēng)干后得到產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑；將氮肥、磷肥、鉀肥和輔料按照質(zhì)量比20:20:10:50加入到造粒滾筒中造粒，產(chǎn)品經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，進入到包裹滾筒，得復(fù)混肥料；在包裹滾筒中，將包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑噴入到復(fù)混肥表面，復(fù)混肥料、包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑的質(zhì)量比為99.4:0.2:0.4，得到含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥。

實施例5

將洗凈烘干后的新鮮鼠尾藻磨成50～60目粉末；

海藻粉末與水按照質(zhì)量比4:100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌25min，得到產(chǎn)品A；并制備種子液：將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1接種至液體培養(yǎng)基，在35℃培養(yǎng)24小時；所述產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156；產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100。將種子液加入到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為10:100，得到產(chǎn)品B；在溫度為35℃，pH6.0～6.5的條件下對產(chǎn)品B進行發(fā)酵，發(fā)酵時間為8天，得到產(chǎn)品C；調(diào)整產(chǎn)品C的pH至5.5～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品D；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至35℃，pH至6.0～6.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品D的質(zhì)量比為6:100，保存12h，得到產(chǎn)品E；調(diào)整產(chǎn)品E的pH至5.5～6.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存12h，得到產(chǎn)品F；以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品F的溫度至35℃，pH至6.0～6.5，然后補充種子液，補充的種子液與產(chǎn)品F的質(zhì)量比為6:100，保存12h，得到產(chǎn)品G；將產(chǎn)品G風(fēng)干后得到產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑；將氮肥、磷肥、鉀肥和輔料按照質(zhì)量比20:20:10:50加入到造粒滾筒中造粒，產(chǎn)品經(jīng)烘干、冷卻和篩分后，進入到包裹滾筒，得復(fù)混肥料；在包裹滾筒中，將包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑噴入到復(fù)混肥表面，復(fù)混肥料、包裹油和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌菌劑的質(zhì)量比為99.3:0.2:0.5，得到含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥。

實施例1至5中，所述氮肥是硫酸銨，磷肥是磷酸一銨，鉀肥是硫酸鉀，輔料是膨潤土。

1材料與方法：

1.1試驗地點：五洲豐農(nóng)業(yè)科技有限公司試驗基地，中性棕壤，中高肥力。

1.2番茄品種：煙粉2號。

1.3供試肥料：含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥，由五洲豐農(nóng)業(yè)科技有限公司提供；普通復(fù)混肥，由五洲豐農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。

1.4試驗設(shè)計：試驗設(shè)6個處理：

處理1：對比例（實施例氮、磷、鉀含量一致并且不加入巨大芽孢桿菌菌劑的普通復(fù)混肥）；

處理2：實施例1所述含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥；

處理3：實施例2所述含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥；

處理4：實施例3所述含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥；

處理5：實施例4所述含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥；

處理6：實施例5所述含有產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的海藻復(fù)混肥。

每個處理3次重復(fù)，隨機區(qū)組排列，小區(qū)面積15m²，定植75株，設(shè)保護行。小區(qū)單收分別計算產(chǎn)量。

1.5施肥方法：

各處理1畝施100kg復(fù)混肥作基肥，其他管理同常規(guī)。

2結(jié)果與分析

2.1番茄不同施肥處理肥料效應(yīng)分析

表1 不同處理對番茄產(chǎn)量的影響

由表1可以看出，各實施例與對比例比較，均有不同程度的增產(chǎn)。并且實施例1增產(chǎn)效果明顯好于實施例2和實施例3，而實施例4和實施例5雖然效果略好于實施例1，但增產(chǎn)效果提高不明顯。由實施例1至5效果可以看出，實施例2、實施例3和實施例1隨著產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌比例的增加肥效增加，而實施例1、實施例4和實施例5，雖然產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌添加比例在增加，但是在肥效上無明顯增產(chǎn)效果，從經(jīng)濟角度考慮實施例1中復(fù)混肥和產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌的比例最佳為0.3%。

所述巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCC No.12156保藏單位名稱是：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址是：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；保藏日期：2016年3月2日；拉丁文分類命名為：Bacillus megaterium。

所述巨大芽孢桿菌YIC～BM1的生物特性如下：

纖維素培養(yǎng)基：羥甲基纖維素鈉15g，硝酸銨1g，硫酸鎂1g，磷酸二氫鉀2g，瓊脂20g，蒸餾水1000ml。

液體發(fā)酵培養(yǎng)基：羥甲基纖維素鈉10g，蛋白胨3g，酵母粉0.5g，硝酸銨2g，硫酸鎂0.3g，磷酸二氫鉀2g，氯化鈣0.3g，蒸餾水1000ml，pH7.0-7.4。

YIC～BM1菌株在纖維素培養(yǎng)基平板上生長48h后，菌落圓形，白色，表面平整。顯微鏡觀察菌株為革蘭氏陽性，桿狀，能運動，產(chǎn)芽孢。生長溫度范圍20～40℃，PH范圍6-10，NaCl濃度范圍0～20%，菌株最適生長溫度37℃，最適生長pH 7.5。觸酶，氧化酶，半乳糖苷酶陽性，吲哚，VP實驗陰性，不還原硝酸；能夠利用葡萄糖，甘露糖，乳糖，棉子糖，蔗糖，阿拉伯糖，木糖，甘露醇，山梨醇。根據(jù)其生理生化特征，將該菌株鑒定為巨大芽孢桿菌Bacillus megaterium。

圖1看出，YIC～BM1菌株為革蘭氏陽性菌；

圖2看出，YIC～BM1菌株的親緣關(guān)系與巨大芽孢桿菌最近；

圖3看出，YIC～BM1菌株的最適產(chǎn)酶溫度為35℃；

圖4看出，YIC～BM1菌株的最佳產(chǎn)酶pH為6.0。