本發(fā)明涉及一種腐植酸鉀的制備方法。
背景技術(shù)：
：海藻中不但含有植物所需的大量元素、微量元素和多種礦物質(zhì)，而且含有陸生植物少有的海藻酸以及天然植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)等有效成分，以海藻為原料經(jīng)過特殊生化工藝處理，提取并保留海藻天然活性成分，精煉濃縮而形成海藻肥料具有提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)，抵抗病蟲害及不良環(huán)境以及改良土壤保持水土的功效，其應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)有巨大的市場需求和良好的發(fā)展前景。決定海藻肥質(zhì)量的一個關(guān)鍵因素是提取工藝。不同的提取工藝對海藻肥活性成分的種類和含量影響巨大。目前，海藻活性成分的提取方法主要有化學(xué)法、物理法以及生物法?；瘜W(xué)法主要是利用酸、堿及有機(jī)溶劑處理海藻細(xì)胞，使細(xì)胞消解或內(nèi)源物質(zhì)增溶，該方法操作簡單，容易實(shí)現(xiàn)，也是國內(nèi)外絕大多數(shù)海藻肥生產(chǎn)企業(yè)采用的方法。但是，化學(xué)試劑對海藻細(xì)胞內(nèi)的活性物質(zhì)成分的破壞是相當(dāng)大的，并且殘留的有機(jī)試劑對環(huán)境也是潛在的危害。物理法的原理是控制壓力，溫度等物理環(huán)境條件，利用機(jī)械力使海藻細(xì)胞破碎，內(nèi)容物釋放。該方法雖然工藝清潔、環(huán)境友好，但是對于儀器設(shè)備的要求嚴(yán)苛，反應(yīng)條件變化劇烈，成本較高，難以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。生物法包括酶法降解和微生物發(fā)酵兩種方法，其主要原理是破壞海藻細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)并降解大分子物質(zhì)為植物容易吸收利用的小分子物質(zhì)，該方法反應(yīng)溫和，產(chǎn)物多元化，整個生產(chǎn)過程安全環(huán)保無污染，是理想的海藻肥生產(chǎn)方法。利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)海藻肥料的研究相對較少，僅有的幾例研究是選用多種微生物對海藻原料進(jìn)行類似堆肥發(fā)酵或好氧發(fā)酵處理，存在發(fā)酵過程可控性差，發(fā)酵周期長，目標(biāo)產(chǎn)物不明確等問題，難以滿足工業(yè)化生產(chǎn)要求的統(tǒng)一，穩(wěn)定，可控的標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品的質(zhì)量難以保障。腐植酸是動植物遺骸經(jīng)過微生物的分解和轉(zhuǎn)化，以及地球化學(xué)的一系列過程積累起來的一類有機(jī)物質(zhì)。腐植酸廣泛存在于泥炭、褐煤、風(fēng)化煤中，其主要元素組成為碳、氫、氧、氮、硫和少量的磷。腐植酸類物質(zhì)具有改良土壤理化性能、提高肥料利用效率、刺激作物生長、增強(qiáng)作物抗逆性、改善農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)的功能。腐植酸鉀采用天然含腐植酸的風(fēng)化煤經(jīng)化學(xué)提煉而成，它是多功能的高分子化合物，含有羥基，醌基，羧基等較多的活性基團(tuán)，具有很大的內(nèi)表面積，有較強(qiáng)的吸附，交換，絡(luò)合，螯合能力。在農(nóng)業(yè)中作為復(fù)合肥料，可改變土壤結(jié)構(gòu)，對農(nóng)作物起到防病抗病增產(chǎn)增收的效果。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種含海藻活性成分的腐植酸鉀的制備方法，制備過程穩(wěn)定可控，發(fā)酵周期短，產(chǎn)物功效顯著，適于規(guī)模化生產(chǎn)。該方法將海藻中活性成分與肥料、腐植酸鉀結(jié)合，可提高作物抗病、抗逆性，提高作物產(chǎn)量。本發(fā)明生產(chǎn)的腐植酸鉀水溶性好，質(zhì)量穩(wěn)定，水不溶物小于0.5%，水溶性腐植酸含量大于70%，可以用作多種水溶性肥料的原料。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種含海藻活性成分的腐植酸鉀的制備方法，其特征在于按照以下步驟進(jìn)行：1）、制備海藻粉末：將烘干后的海藻磨成粉末；2）、制備產(chǎn)品A和種子液：將海藻粉末與水按照質(zhì)量比1～10:100分別裝入發(fā)酵罐中，在100～150℃條件下滅菌15～35min，得到產(chǎn)品A；將巨大芽孢桿菌活化與擴(kuò)培，制備巨大芽孢桿菌種子液X；將嗜糖芽孢桿菌活化與擴(kuò)培，制備嗜糖芽孢桿菌種子液Y；3）、制備產(chǎn)品B：將種子液X接種到產(chǎn)品A中，種子液X用量為產(chǎn)品A質(zhì)量的1%～10%，發(fā)酵溫度為30～37℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為5～8，發(fā)酵時間為8～24h，得到產(chǎn)品B；4）、制備產(chǎn)品C：調(diào)整產(chǎn)品B的pH至4.0～5.5，發(fā)酵罐內(nèi)溫度至0℃～5℃，保存2～5天，然后將溫度調(diào)整至20℃～35℃，得到產(chǎn)品C；5）、制備產(chǎn)品D：將種子液Y接種到產(chǎn)品C中，種子液Y用量為產(chǎn)品C質(zhì)量的1%～10%，發(fā)酵溫度為30～34℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為5～8，發(fā)酵時間為8～24h，得到產(chǎn)品D；6）、制備產(chǎn)品E：調(diào)整產(chǎn)品D的pH至4.0～5.5，發(fā)酵罐內(nèi)溫度至0℃～5℃，保存2～7天，然后將溫度調(diào)整至25℃～35℃，得到產(chǎn)品E；7）、制備海藻提取液：將產(chǎn)品E壓濾得到海藻渣及濾液，其中濾液為海藻提取液；8）、制備含腐植酸鉀的海藻提取液：將腐植酸原料和硫酸鉀分別加入海藻提取液中，腐植酸原料與海藻提取液固液比為2~5:10，硫酸鉀與海藻提取液固液比為1~2:10，用氫氧化鉀調(diào)整混合反應(yīng)體系pH值至7.5~9.5；在1.5~2.0個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓、58~62℃恒溫條件下，攪拌反應(yīng)2~3h，過濾除渣得到含腐植酸鉀的海藻提取液；9）、制備含海藻活性成分的腐植酸鉀：含腐植酸鉀的海藻提取液經(jīng)濃縮、干燥、粉碎之后得到含海藻活性成分的腐植酸鉀。步驟2）中巨大芽孢桿菌的活化與擴(kuò)培：液體培養(yǎng)基按照以下質(zhì)量比配成：羧甲基纖維素鈉10份、胰蛋白胨10份、磷酸氫二鉀3份、磷酸二氫鈉3份、氯化鐵3份、氯化鈉0.5份和蒸餾水1000份；巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100，發(fā)酵溫度為32℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為6.5，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為20h；步驟2）中嗜糖芽孢桿菌的活化與擴(kuò)培：液體培養(yǎng)基按照以下質(zhì)量比配成：海藻酸鈉5份、硫酸銨5份、硫酸鎂1份、磷酸氫二鉀2份、硫酸亞鐵0.01份和蒸餾水1000份；嗜糖芽孢桿菌接種至液體培養(yǎng)基中，嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3和培養(yǎng)基的體積比例為5:100，，發(fā)酵溫度為30℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為7.2，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為20h。步驟2）中所述海藻粉末和水的質(zhì)量比為4:100，滅菌溫度115℃，滅菌時間25min。步驟4）中，調(diào)整產(chǎn)品B的pH至5.0，發(fā)酵罐內(nèi)溫度至5℃，保存3天，然后將溫度調(diào)整至20℃。步驟6）中，調(diào)整產(chǎn)品D的pH至5.0，發(fā)酵罐內(nèi)溫度至5℃，保存3天，然后將溫度調(diào)整至25℃。所述的酸堿調(diào)節(jié)劑為檸檬酸，草酸，醋酸，磷酸氫二鉀，碳酸鈉，醋酸鈉中的一種或任意比例的兩種以上。所用的腐植酸原料是腐植酸含量大于50%的風(fēng)化煤、褐煤，且粉碎至60-80目的煤粉。步驟1）中的海藻為銅藻、海帶、鼠尾藻和馬尾藻中的一種或者任意比例的兩種以上。所述巨大芽孢桿菌是巨大芽孢桿菌YIC～BM1，保藏號為CGMCCNo.12156。所述嗜糖芽孢桿菌是嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3，保藏號為CGMCCNo.12155。發(fā)明具有以下有益技術(shù)效果：本產(chǎn)品海藻活性成分采用生物提取，所得海藻成分破壞少，提取率高，產(chǎn)品中所含海藻酸能夠?qū)ν寥乐兄亟饘倨鸬解g化作用，微生物降解產(chǎn)生的褐藻寡糖具有促生長與誘導(dǎo)植物抗逆的活性，能夠在植物生長調(diào)節(jié)與誘導(dǎo)植物抗逆領(lǐng)域發(fā)揮重要作用，此寡糖分子量較小，能夠在自然界中自行降解，不會對環(huán)境造成污染，而且此寡糖的有效劑量很低，適宜大范圍使用。本發(fā)明還具有以下特點(diǎn)：1、本發(fā)明采用巨大芽孢桿菌YIC～BM1以及嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3對海藻發(fā)酵，能夠破壞海藻細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)促使海藻體內(nèi)更多營養(yǎng)物質(zhì)得以釋放，嗜糖芽孢桿菌具有降解褐藻酸的能力，能夠降解褐藻酸生成小分子量的褐藻寡糖等易于植物吸收利用的營養(yǎng)成分，發(fā)酵過程穩(wěn)定可控，發(fā)酵周期短，產(chǎn)物功效顯著，適于規(guī)?；a(chǎn)。2、本發(fā)明采用復(fù)合菌種發(fā)酵，各類菌株發(fā)揮協(xié)同作用，效果肥效均明顯優(yōu)于單一的菌種發(fā)酵，而且純生物發(fā)酵，保證了海藻活性成分不受破壞。3、本發(fā)明采用的復(fù)合菌種發(fā)酵不同于簡單的將不同的菌種種子液混合發(fā)酵，而是根據(jù)微生物的作用不同，按照先后次序依次分級發(fā)酵，避免了微生物菌群間的相互競爭拮抗，減少內(nèi)耗，將各自菌群的作用發(fā)揮到最大化，保證了最好的效果。4、該產(chǎn)品將肥料、腐植酸鉀與海藻有效成分結(jié)合，在提高作物的抗逆性和抗病性方面有顯著效果，另外該產(chǎn)品全水溶，可以滿足現(xiàn)代農(nóng)業(yè)需求。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例1將洗凈烘干后的新鮮鼠尾藻磨成50～60目粉末。海藻粉末與水按照質(zhì)量比4:100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌25min，得到產(chǎn)品A。并制備種子液：種子液X的制備實(shí)例：將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1接種至液體培養(yǎng)基，巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100，發(fā)酵溫度為32℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為6.5，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為20h；活化之后按同樣操作步驟擴(kuò)培，得到種子液X；種子液Y的制備實(shí)例：將嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3接種至液體培養(yǎng)基，嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3和培養(yǎng)基的體積比例為5:100，發(fā)酵溫度為30℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為7.2，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為20h；活化之后按同樣操作步驟擴(kuò)培，得到種子液Y；將種子液X加入到產(chǎn)品A中，其中種子液X與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為5:100，發(fā)酵溫度為32℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為6.5，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h，得到產(chǎn)品B；調(diào)整產(chǎn)品B的pH至5.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存3天，以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品的溫度至20℃，得到產(chǎn)品C；然后補(bǔ)充種子液Y，補(bǔ)充的種子液Y與產(chǎn)品C的質(zhì)量比為5:100，發(fā)酵溫度為30℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為7.2，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h，得到產(chǎn)品D；調(diào)整產(chǎn)品D的pH至5.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度溫度至5℃，保存3天，以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至25℃，得到產(chǎn)品E；將產(chǎn)品E壓濾后得到海藻提取液；向海藻提取液中加入液體比例20%的風(fēng)化煤粉，10%的硫酸鉀，用氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH至8.0，在1.5個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下攪拌反應(yīng)2.5小時，經(jīng)過濾濃縮干燥后粉碎即為本發(fā)明產(chǎn)品。所得腐植酸鉀產(chǎn)品：腐植酸含量為77.82%,K2O為13.55%，水不溶物為0.27%。實(shí)施例2將洗凈烘干后的新鮮銅藻磨成50～60目粉末；海藻粉末與水按照質(zhì)量比4:100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌25min，得到產(chǎn)品A。并制備種子液：種子液X的制備實(shí)例：將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1接種至液體培養(yǎng)基，巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100，發(fā)酵溫度為32℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為6.5，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h；活化之后按同樣操作步驟擴(kuò)培，得到種子液X；種子液Y的制備實(shí)例：將嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3接種至液體培養(yǎng)基，嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3和培養(yǎng)基的體積比例為5:100，發(fā)酵溫度為30℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為7.2，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h；活化之后按同樣操作步驟擴(kuò)培，得到種子液Y；將種子液X加入到產(chǎn)品A中，其中種子液X與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為5:100，發(fā)酵溫度為32℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為6.5，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h，得到產(chǎn)品B；調(diào)整產(chǎn)品B的pH至5.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存3天，以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品的溫度至20℃，得到產(chǎn)品C；然后補(bǔ)充種子液Y，補(bǔ)充的種子液Y與產(chǎn)品C的質(zhì)量比為5:100，發(fā)酵溫度為30℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為7.2，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h，得到產(chǎn)品D；調(diào)整產(chǎn)品D的pH至5.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度溫度至5℃，保存3天，以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至25℃，得到產(chǎn)品E；將產(chǎn)品E壓濾后得到海藻提取液；向海藻提取液中加入液體比例30%的風(fēng)化煤粉，10%的硫酸鉀，用氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH至8.5，在1.5個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下攪拌反應(yīng)2.5小時，經(jīng)過濾濃縮干燥后粉碎即為本發(fā)明產(chǎn)品。所得腐植酸鉀產(chǎn)品：腐植酸含量為79.66%,K2O為13.72%，水不溶物為0.25%。實(shí)施例3將洗凈烘干后的新鮮銅藻和新鮮馬尾藻按照質(zhì)量比1:1復(fù)配，磨成50～60目粉末；海藻粉末與水按照質(zhì)量比4:100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌25min，得到產(chǎn)品A。并制備種子液：種子液X的制備實(shí)例：將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1接種至液體培養(yǎng)基，巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100，發(fā)酵溫度為32℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為6.5，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h；活化之后按同樣操作步驟擴(kuò)培，得到種子液X；種子液Y的制備實(shí)例：將嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3接種至液體培養(yǎng)基，嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3和培養(yǎng)基的體積比例為5:100，發(fā)酵溫度為30℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為7.2，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h；活化之后按同樣操作步驟擴(kuò)培，得到種子液Y；將種子液X加入到產(chǎn)品A中，其中種子液X與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為5:100，發(fā)酵溫度為32℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為6.5，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h，得到產(chǎn)品B；調(diào)整產(chǎn)品B的pH至5.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存3天，以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品的溫度至20℃，得到產(chǎn)品C；然后補(bǔ)充種子液Y，補(bǔ)充的種子液Y與產(chǎn)品C的質(zhì)量比為5:100，發(fā)酵溫度為30℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為7.2，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h，得到產(chǎn)品D；調(diào)整產(chǎn)品D的pH至5.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度溫度至5℃，保存3天，以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至25℃，得到產(chǎn)品E；將產(chǎn)品E壓濾后得到海藻提取液；向海藻提取液中加入液體比例40%的風(fēng)化煤粉，15%的硫酸鉀，用氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH至8.5，在1.5個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下攪拌反應(yīng)2.5小時，經(jīng)過濾濃縮干燥后粉碎即為本發(fā)明產(chǎn)品。所得腐植酸鉀產(chǎn)品：腐植酸含量為82.32%,K2O為13.93%，水不溶物為0.37%。實(shí)施例4將洗凈烘干后的海帶磨成50～60目粉末；海藻粉末與水按照質(zhì)量比4:100裝入發(fā)酵罐中，在115℃條件下滅菌25min，得到產(chǎn)品A。并制備種子液：種子液X的制備實(shí)例：將產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC～BM1接種至液體培養(yǎng)基，巨大芽孢桿菌YIC～BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100，發(fā)酵溫度為32℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為6.5，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h；活化之后按同樣操作步驟擴(kuò)培，得到種子液X；種子液Y的制備實(shí)例：將嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3接種至液體培養(yǎng)基，嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3和培養(yǎng)基的體積比例為5:100，發(fā)酵溫度為30℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為7.2，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h；活化之后按同樣操作步驟擴(kuò)培，得到種子液Y；將種子液X加入到產(chǎn)品A中，其中種子液X與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為5:100，發(fā)酵溫度為32℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為6.5，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h，得到產(chǎn)品B；調(diào)整產(chǎn)品B的pH至5.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度至5℃，保存3天，以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品的溫度至20℃，得到產(chǎn)品C；然后補(bǔ)充種子液Y，補(bǔ)充的種子液Y與產(chǎn)品C的質(zhì)量比為5:100，發(fā)酵溫度為30℃，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為7.2，溶氧控制在20%，轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量在800L/min，發(fā)酵罐壓應(yīng)維持在0.03Mpa，發(fā)酵時間為24h，得到產(chǎn)品D；調(diào)整產(chǎn)品D的pH至5.0，并以每小時3℃的溫度變化調(diào)整溫度溫度至5℃，保存3天，以每小時3℃的溫度變化調(diào)整產(chǎn)品D的溫度至25℃，得到產(chǎn)品E；將產(chǎn)品E壓濾后得到海藻提取液；向海藻提取液中加入液體比例50%的風(fēng)化煤粉，20%的硫酸鉀，用氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH至9.0，在1.5個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下攪拌反應(yīng)3小時，經(jīng)過濾濃縮干燥后粉碎即為本發(fā)明產(chǎn)品。所得腐植酸鉀產(chǎn)品：腐植酸含量為86.22%,K2O為14.25%，水不溶物為0.33%。上述實(shí)施例中所用富含腐植酸原料為腐植酸含量為52%的風(fēng)化煤。本發(fā)明所述巨大芽孢桿菌YIC～BM1的保藏號為CGMCCNo.12156；保藏單位名稱是：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址是：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；保藏日期：2016年3月2日；拉丁文分類命名為：Bacillusmegaterium。所述巨大芽孢桿菌YIC～BM1的生物特性如下：YIC～BM1菌株在纖維素培養(yǎng)基平板上生長48h后，菌落圓形，白色，表面平整。顯微鏡觀察菌株為革蘭氏陽性，桿狀，能運(yùn)動，產(chǎn)芽孢。生長溫度范圍20～40℃，PH范圍6-10，NaCl濃度范圍0～20%，菌株最適生長溫度37℃，最適生長pH7.5。觸酶，氧化酶，半乳糖苷酶陽性，吲哚，VP實(shí)驗(yàn)陰性，不還原硝酸；能夠利用葡萄糖，甘露糖，乳糖，棉子糖，蔗糖，阿拉伯糖，木糖，甘露醇，山梨醇。根據(jù)其生理生化特征，基因序列及系統(tǒng)發(fā)育樹信息，將該菌株鑒定為巨大芽孢桿菌Bacillusmegaterium。本發(fā)明所述嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3的保藏號為CGMCCNo.12155；保藏單位名稱是：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址是：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；保藏日期：2016年3月2日；拉丁文分類命名為：Bacillushalosaccharovorans。所述嗜糖芽孢桿菌YIC～Alg3的生物特性如下：YIC～Alg3菌株在褐藻酸唯一碳源平板上生長48h后，菌落不規(guī)則，淡黃色，中間不透明，邊緣半透明，表面褶皺。顯微鏡觀察菌株為桿狀，在末端或近末端可產(chǎn)生芽孢，革蘭氏陽性，能運(yùn)動，生長后期菌體易聚集成團(tuán)。生長溫度范圍20～45℃，PH范圍6～9，NaCl濃度范圍0～15%，菌株最適生長溫度37℃，最適生長pH7.5。觸酶，氧化酶，VP試驗(yàn)陽性，能夠利用葡萄糖，甘露糖，甘露醇，果糖，乳糖，半乳糖，淀粉；不能利用山梨醇，纖維素。根據(jù)其生理生化特征，基因序列及系統(tǒng)發(fā)育樹信息，將該菌株鑒定為嗜糖芽孢桿菌Bacillushalosaccharovorans。生化特性結(jié)果生化特性結(jié)果觸酶+乳糖～氧化酶+半乳糖～VP試驗(yàn)+淀粉～葡萄糖+山梨醇～甘露糖+維生素～甘露醇+果糖+注：+表示可以利用，～表示不能利用。當(dāng)前第1頁1 2 3