本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥的制備方法。

背景技術(shù)：

化肥的大規(guī)模使用對過去30年我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的快速增長起到了重要作用。化肥大量使用在提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的同時，也對環(huán)境產(chǎn)生了嚴(yán)重的負(fù)面影響，并威脅到我國農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展?；瘜W(xué)肥料的不合理施用使得農(nóng)作物品質(zhì)降低，引起土壤板結(jié)、有機(jī)質(zhì)下降、土壤及作物根系微生態(tài)結(jié)構(gòu)被破壞，并導(dǎo)致土傳作物病害泛濫。為了保證農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全及農(nóng)業(yè)可持續(xù)性發(fā)展，研究新型有機(jī)肥料來取代或減少化肥的施用迫在眉睫。生物有機(jī)肥養(yǎng)分全面，既有多種無機(jī)元素，又有多種有機(jī)養(yǎng)分，還含有大量的微生物和酶，可以提高作物產(chǎn)量、改善作物品質(zhì)和土壤微生態(tài)系統(tǒng)、減少和降低作物病蟲害的發(fā)生。

草莓枯萎病是嚴(yán)重影響草莓產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)效益與可持續(xù)發(fā)展的主要病害之一，以往使用化學(xué)殺菌劑控制草莓枯萎病，但化學(xué)殺菌劑的大面積使用易帶來環(huán)境污染、生態(tài)失衡、藥物殘留、食品安全等問題，所以利用低成本、高效率、環(huán)境友好和無藥物殘留的生物學(xué)方法防控草莓枯萎病倍受關(guān)注。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于通過建立靜態(tài)好氧堆肥體系，實現(xiàn)農(nóng)業(yè)廢物的無害化處理和資源化利用，制備一種草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥，優(yōu)化生物有機(jī)肥的生產(chǎn)工藝，降低生產(chǎn)成本。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥的制備方法，以豬糞及玉米秸稈為堆料，接種由枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌及膠質(zhì)芽孢桿菌組成的復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和地衣芽孢桿菌ABTNL-1號生防菌劑，發(fā)酵，制得具有抗草莓枯萎病功能的生物有機(jī)肥。

所述枯草芽孢桿菌ABTNL-2號保藏編號：CGMCC NO.10038，蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號保藏編號：CGMCC NO.10036，地衣芽孢桿菌ABTNL-1號保藏編號：CGMCC NO.10037；巨大芽孢桿菌和膠質(zhì)芽孢桿菌可從中國普通微生物菌種保藏管理中心獲得，也可以通過自行分離得到，除特殊菌株情況外，普遍的這2種菌劑都適用于本發(fā)明。

優(yōu)選方式下，上述草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥的制備方法，具體步驟為：

S1、堆肥原材料的預(yù)處理：將豬糞與粒徑≤1cm玉米秸稈按3～4.5:1～1.5的質(zhì)量比混合均勻，控制C/N為20～25:1，晾曬2～3天，至含水率達(dá)50～60％，得到堆料，備用；

S2、復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑的制備：

將枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌ABTNL-1號分別單獨進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，至菌液濃度達(dá)到10⁸～10⁹CFU·ml^-1；

將發(fā)酵后的枯草芽孢桿菌ABTNL-2號菌液、蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號菌液、巨大芽孢桿菌菌液及膠質(zhì)芽孢桿菌菌液按體積百分比1～2:1～2：0.5～1:0.5～1混合，得到復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑；

所述地衣芽孢桿菌ABTNL-1號菌液即為生防菌劑；

S3、靜態(tài)好氧堆肥體系的建立及生物有機(jī)肥的制備：

將步驟S2制得的復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑，同時接種到步驟S1制得的堆料中，建立靜態(tài)好氧堆肥體系，腐熟發(fā)酵20～30天，得到草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥；

所述復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑體積與所述堆料質(zhì)量比為2.0～5.0:100(g/ml)；

所述生防菌劑體積與所述堆料質(zhì)量比為2.0～5.0:100(g/ml)。

進(jìn)一步優(yōu)化，步驟S2所述發(fā)酵過程的培養(yǎng)基分別為：

復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑中枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌及膠質(zhì)芽孢桿菌的培養(yǎng)基成分為蛋白胨10.0g/L、牛肉浸出粉3.0g/L、氯化鈉5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.4；

生防菌劑地衣芽孢桿菌ABTNL-1號的培養(yǎng)基成分為氯化鈉10.0g/L、胰蛋白胨10.0g/L、酵母粉提取物5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.0。

進(jìn)一步優(yōu)化，步驟S3腐熟發(fā)酵的具體過程為：當(dāng)堆料溫度首次出現(xiàn)明顯下降時進(jìn)行翻堆，并補充水分至含水率為35～45％，堆料溫度再一次升高，堆料溫度再次明顯下降時，再次翻堆，如此反復(fù)2～3次，直至堆料溫度接近或稍高于室溫、無異味，且經(jīng)測定堆料發(fā)芽指數(shù)大于等于80％、含水率為30％、蟲卵含量為0％時，即得到復(fù)合發(fā)酵產(chǎn)物。

堆料發(fā)芽指數(shù)大于80％時，表明堆肥已腐熟，堆料含水率約為30％；堆料作為生物有機(jī)肥前期產(chǎn)品，保存?zhèn)溆?；本發(fā)明腐熟發(fā)酵20-30天即可。

本發(fā)明堆料溫度下降≥5℃認(rèn)為為明顯下降；當(dāng)翻堆后，堆料溫度不再升高時，就無需再翻堆了。

本發(fā)明方法主要包括兩個步驟：

一是復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑的應(yīng)用，充分提高了發(fā)酵效率、縮短生物有機(jī)肥制備周期；同時提高了肥料的抗草莓枯萎病效果。

二是靜態(tài)好氧堆肥體系的建立和生物有機(jī)肥的制備，將上述制備的復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑在堆肥體系建立初期同時接入，通過一步貫通的生產(chǎn)工藝完成發(fā)酵過程，從而制得具有抗草莓枯萎病的生物有機(jī)肥。

綜上，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：

1、利用新鮮豬糞和玉米秸稈作為生產(chǎn)生物有機(jī)肥的原材料，可以同步實現(xiàn)農(nóng)業(yè)廢棄物的無害化處理和資源化利用，避免其處理不當(dāng)對環(huán)境造成的二次污染。

2、本發(fā)明在堆肥初期同時接種自制的復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑，其中，復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑能夠加快靜態(tài)好氧堆肥體系的腐熟進(jìn)程、縮短生物有機(jī)肥的制備周期；而且地衣芽孢桿菌是一種具有廣譜抑菌活性的細(xì)菌，具有較強的次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)生能力，能產(chǎn)生多種抑菌物質(zhì)，本發(fā)明加入生防菌所產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，可以有效對草莓枯萎病進(jìn)行生物防治，避免了使用化學(xué)殺菌劑所帶來的環(huán)境問題和食品安全問題。

3、本發(fā)明通過一步貫通堆肥發(fā)酵工藝制備生物有機(jī)肥，即在建堆初期同時接種復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑，相比二次發(fā)酵工藝，生產(chǎn)工藝更加簡單，將大大降低生物有機(jī)肥的生產(chǎn)成本。

4、本發(fā)明制得的生物有機(jī)肥具有改良土壤、增進(jìn)肥效、改善草莓根際微生態(tài)和草莓品質(zhì)、增強草莓抗逆性等優(yōu)點，對草莓種植產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展提供有力的保障。

附圖說明

圖1是靜態(tài)好氧堆肥體系溫度變化圖；

圖2是對比例3生物有機(jī)肥對草莓枯萎病的生防實驗結(jié)果

圖3是本發(fā)明實施例2生物有機(jī)肥對草莓枯萎病的生防實驗結(jié)果

保藏說明

本發(fā)明涉及的生物材料樣品的保藏信息：參據(jù)的微生物(株)為ABTNL-1，分類命名為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)，于2014年11月21日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)保藏，保藏編號CGMCC NO.10037。CGMCC地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。

本發(fā)明涉及的生物材料樣品的保藏信息：參據(jù)的微生物(株)為ABTNL-2，分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，于2014年11月21日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)保藏，保藏編號CGMCC NO.10038。CGMCC地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。

本發(fā)明涉及的生物材料樣品的保藏信息：參據(jù)的微生物(株)為ABTNL-4，分類命名為蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)，于2014年11月21日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)保藏，保藏編號CGMCC NO.10036。CGMCC地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例和對比例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明的具體效果。

實施例1

一種草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥，通過包括以下步驟的生產(chǎn)方法制得：

(1)堆肥原材料的預(yù)處理

將新鮮豬糞與粒徑≤1cm玉米秸稈按3:1的質(zhì)量比混合均勻，使其C/N為20，平攤在地面晾曬至含水率達(dá)50％備用(用手緊握一團(tuán)堆料，在手指間沒有液體流出，且松手后堆料呈團(tuán)狀不松散即可)。

(2)復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑的制備

將枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌ABTNL-1號分別單獨利用發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，使菌液濃度達(dá)到10⁸～10⁹CFU·ml^-1，發(fā)酵后的枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌和膠質(zhì)芽孢桿菌菌液按體積百分比2：2：1:1混合作為復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑，地衣芽孢桿菌ABTNL-1號發(fā)酵菌液作為生防菌劑。

復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑的制備所需培養(yǎng)基成分為蛋白胨10.0g/L、牛肉浸出粉3.0g/L、氯化鈉5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.4；生防菌劑的制備所需培養(yǎng)基成分為氯化鈉10.0g/L、胰蛋白胨10.0g/L、酵母粉提取物5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.0。

(3)靜態(tài)好氧堆肥體系的建立及生物有機(jī)肥的制備

將(1)預(yù)處理的堆肥原料人工充分混勻，裝入放有通氣管的堆肥反應(yīng)箱中(100cm×80cm×80cm)建立靜態(tài)好氧堆肥體系，同時接種(2)所制備的液態(tài)菌劑，復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑分別按2％和5％(體積質(zhì)量比)接種到靜態(tài)好氧堆肥體系中，具體方法如下：在堆肥反應(yīng)器中分層放置物料，并均勻噴灑液態(tài)菌劑后充分混合進(jìn)行微生物好氧發(fā)酵，溫度隨之上升，達(dá)到并維持60～75℃的高溫；當(dāng)堆料溫度首次出現(xiàn)明顯下降時進(jìn)行翻堆，并補充一定的水分，堆料溫度再一次升高，同樣，溫度明顯下降時，再次翻堆，如此反復(fù)2-3次，等到堆料溫度接近或稍高于室溫且無異味，測定發(fā)芽指數(shù)大于80％、含水率約為30％、蟲卵含量為0％時，表明生物有機(jī)肥前期產(chǎn)品已制備成功，將堆料進(jìn)行粉碎、過篩，制成粉料，可根據(jù)商業(yè)需要進(jìn)行造粒等，制得一種草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥。

經(jīng)檢測，本實施例得到的成品草莓專用抗枯萎生物有機(jī)肥的成分指標(biāo)如表1所示：

表1

實施例2

步驟1：堆肥原材料的預(yù)處理

將新鮮豬糞與粒徑≤1cm玉米秸稈按4.5:1.5的質(zhì)量比混合均勻，使其C/N在25，平攤在地面晾曬至含水率達(dá)60％備用。

步驟2：復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑的制備

將枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌ABTNL-1號分別單獨利用發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，使菌液濃度達(dá)到10⁸～10⁹CFU·ml-1，發(fā)酵后的枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌和膠質(zhì)芽孢桿菌菌液按體積百分比1：1：0.5:0.5混合作為復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑，地衣芽孢桿菌ABTNL-1號發(fā)酵菌液作為生防菌劑。

復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑的制備所需培養(yǎng)基成分為蛋白胨10.0g/L、牛肉浸出粉3.0g/L、氯化鈉5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.4；生防菌劑的制備所需培養(yǎng)基成分為氯化鈉10.0g/L、胰蛋白胨10.0g/L、酵母粉提取物5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.0。

步驟3：靜態(tài)好氧堆肥體系的建立和生物有機(jī)肥的制備

將預(yù)處理過的堆肥原材料加入到帶有攪拌功能的固態(tài)發(fā)酵倉中，通過機(jī)械攪拌使其充分混勻，在機(jī)械攪拌混勻的同時分別往固態(tài)發(fā)酵倉中接種5％(體積質(zhì)量比)復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和4％(體積質(zhì)量比)生防菌劑，進(jìn)行半封閉好氧發(fā)酵。

檢測堆肥溫度，檢測結(jié)果如圖1所示，堆肥第3d溫度即達(dá)到55℃以上，并在第5d達(dá)到最高的61.34℃，溫度55℃以上持續(xù)11d，達(dá)到了我國《糞便無害化衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB7959-87)》的標(biāo)準(zhǔn)(55℃以上持續(xù)3d以上)，23d左右堆肥完全腐熟。測定發(fā)芽指數(shù)大于80％、含水率約為30％時、蟲卵含量為0％時，表明生物有機(jī)肥前期產(chǎn)品已制備成功，將堆料進(jìn)行粉碎、過篩，制成粉料，可根據(jù)商業(yè)需要進(jìn)行造粒等，制得一種草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥。

生產(chǎn)得到的成品草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥的成分指標(biāo)如表2所示：

表2

對比例1(實施例2缺少枯草芽孢桿菌ABTNL-2)：

步驟1：堆肥原材料的預(yù)處理

將新鮮豬糞與粒徑≤1cm玉米秸稈按4.5:1.5的質(zhì)量比混合均勻，使其C/N在25之間，平攤在地面晾曬至含水率達(dá)60％備用。

步驟2：復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑的制備

將蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌ABTNL-1號分別單獨利用發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，使菌液濃度達(dá)到10⁸～10⁹CFU·ml-1，發(fā)酵后的蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌和膠質(zhì)芽孢桿菌菌液按體積百分比1：0.5:0.5混合作為復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑，地衣芽孢桿菌ABTNL-1號發(fā)酵菌液作為生防菌劑。

復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑的制備所需培養(yǎng)基成分為蛋白胨10.0g/L、牛肉浸出粉3.0g/L、氯化鈉5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.4；生防菌劑的制備所需培養(yǎng)基成分為氯化鈉10.0g/L、胰蛋白胨10.0g/L、酵母粉提取物5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.0。

步驟3：靜態(tài)好氧堆肥體系的建立和生物有機(jī)肥的制備

將預(yù)處理過的堆肥原材料加入到帶有攪拌功能的固態(tài)發(fā)酵倉中，通過機(jī)械攪拌使其充分混勻，在機(jī)械攪拌混勻的同時分別往固態(tài)發(fā)酵倉中接種5％(體積質(zhì)量比)復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和4％(體積質(zhì)量比)生防菌劑，進(jìn)行半封閉好氧發(fā)酵。

堆肥第5d溫度即達(dá)到55℃以上，并在第6d達(dá)到最高的60.98℃，溫度55℃以上持續(xù)7d，達(dá)到了我國《糞便無害化衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB7959-87)》的標(biāo)準(zhǔn)(55℃以上持續(xù)3d以上)，27d左右堆肥完全腐熟。測定發(fā)芽指數(shù)大于80％、含水率約為30％、蟲卵含量為0％時，表明生物有機(jī)肥前期產(chǎn)品已制備成功，將堆料進(jìn)行粉碎、過篩，制成粉料，可根據(jù)商業(yè)需要進(jìn)行造粒等，制得一種草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥。

總結(jié)：通過上述對比可知：缺少枯草芽孢桿菌ABTNL-2號菌的復(fù)合菌劑使堆肥的高溫持續(xù)時間縮短了4d，腐熟時間延長了4d，說明其在復(fù)合菌劑中發(fā)揮重要作用。

對比例2(實施例2缺少蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4)：

步驟1：堆肥原材料的預(yù)處理

將新鮮豬糞與粒徑≤1cm玉米秸稈按4.5:1.5的質(zhì)量比混合均勻，使其C/N在25，平攤在地面晾曬至含水率達(dá)60％備用。

步驟2：復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑的制備

將枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌ABTNL-1號分別單獨利用發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，使菌液濃度達(dá)到10⁸～10⁹CFU·ml-1，發(fā)酵后的枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、巨大芽孢桿菌和膠質(zhì)芽孢桿菌菌液按體積百分比1：0.5:0.5混合作為復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑，地衣芽孢桿菌ABTNL-1號發(fā)酵菌液作為生防菌劑。

復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑的制備所需培養(yǎng)基成分為蛋白胨10.0g/L、牛肉浸出粉3.0g/L、氯化鈉5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.4；生防菌劑的制備所需培養(yǎng)基成分為氯化鈉10.0g/L、胰蛋白胨10.0g/L、酵母粉提取物5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.0。

步驟3：靜態(tài)好氧堆肥體系的建立和生物有機(jī)肥的制備

將預(yù)處理過的堆肥原材料加入到帶有攪拌功能的固態(tài)發(fā)酵倉中，通過機(jī)械攪拌使其充分混勻，在機(jī)械攪拌混勻的同時分別往固態(tài)發(fā)酵倉中接種5％(體積質(zhì)量比)復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和4％(體積質(zhì)量比)生防菌劑，進(jìn)行半封閉好氧發(fā)酵。

堆肥第4d溫度即達(dá)到55℃以上，并在第7d達(dá)到最高的60.48℃，溫度55℃以上持續(xù)6d，達(dá)到了我國《糞便無害化衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB7959-87)》的標(biāo)準(zhǔn)(55℃以上持續(xù)3d以上)，26d左右堆肥完全腐熟。測定發(fā)芽指數(shù)大于80％、含水率約為30％、蟲卵含量為0％時，表明生物有機(jī)肥前期產(chǎn)品已制備成功，將堆料進(jìn)行粉碎、過篩，制成粉料，可根據(jù)商業(yè)需要進(jìn)行造粒等，制得一種草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥。

總結(jié)：通過上述對比可知：缺少蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號的復(fù)合菌劑使堆肥的高溫持續(xù)時間縮短了5d，腐熟時間延長了3d，說明其在復(fù)合菌劑中發(fā)揮重要作用。

對比例3(實施例2其他地衣芽孢桿菌代替地衣芽孢桿菌ABTNL-1)：

步驟1：堆肥原材料的預(yù)處理

將新鮮豬糞與粒徑≤1cm玉米秸稈按4.5:1.5的質(zhì)量比混合均勻，使其C/N在25，平攤在地面晾曬至含水率達(dá)60％備用。

步驟2：復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和生防菌劑的制備

將枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌和普通地衣芽孢桿菌分別單獨利用發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，使菌液濃度達(dá)到10⁸～10⁹CFU·ml-1，發(fā)酵后的枯草芽孢桿菌ABTNL-2號、蘇云金芽孢桿菌ABTNL-4號、巨大芽孢桿菌和膠質(zhì)芽孢桿菌菌液按體積百分比1：1：0.5:0.5混合作為復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑，普通地衣芽孢桿菌發(fā)酵菌液作為生防菌劑。

復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑的制備所需培養(yǎng)基成分為蛋白胨10.0g/L、牛肉浸出粉3.0g/L、氯化鈉5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.4；生防菌劑的制備所需培養(yǎng)基成分為氯化鈉10.0g/L、胰蛋白胨10.0g/L、酵母粉提取物5.0g/L，用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.0。

步驟3：靜態(tài)好氧堆肥體系的建立和生物有機(jī)肥的制備

將預(yù)處理過的堆肥原材料加入到帶有攪拌功能的固態(tài)發(fā)酵倉中，通過機(jī)械攪拌使其充分混勻，在機(jī)械攪拌混勻的同時分別往固態(tài)發(fā)酵倉中接種5％(體積質(zhì)量比)復(fù)合微生物發(fā)酵菌劑和4％(體積質(zhì)量比)生防菌劑，進(jìn)行半封閉好氧發(fā)酵。

堆肥第3d溫度即達(dá)到55℃以上，并在第5d達(dá)到最高的62.04℃，溫度55℃以上持續(xù)10d，達(dá)到了我國《糞便無害化衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB7959-87)》的標(biāo)準(zhǔn)(55℃以上持續(xù)3d以上)，23d左右堆肥完全腐熟。測定發(fā)芽指數(shù)大于80％、含水率約為30％時、蟲卵含量為0％時，表明生物有機(jī)肥前期產(chǎn)品已制備成功，將堆料進(jìn)行粉碎、過篩，制成粉料，可根據(jù)商業(yè)需要進(jìn)行造粒等，制得一種草莓專用抗枯萎病生物有機(jī)肥。

應(yīng)用例1

將對比例3制得的生物有機(jī)肥與本發(fā)明實施例2含有相同量的地衣芽孢桿菌ABTNL-1制得的生物有機(jī)肥分別均勻拌入接有草莓枯萎病菌的病土中，盆栽實驗為期2個月，觀察發(fā)病率和生物防治效果如圖2、圖3所示，發(fā)現(xiàn)施用本發(fā)明有機(jī)肥的草莓沒有呈現(xiàn)發(fā)病癥狀，而施用含有對比例3普通地衣芽孢桿菌的生物有機(jī)肥的草莓，地上部分表現(xiàn)為心葉變黃綠、卷曲呈船形、兩邊不對稱，葉片無光澤，葉柄及根部維管束變褐色或黑褐色，地下根系黑褐色，不長新根，呈現(xiàn)草莓枯萎病癥狀。

對比例3普通地衣芽孢桿菌通過自行提取獲得，通過多次提取，進(jìn)行多次試驗，效果均類似，與本發(fā)明使用的地衣芽孢桿菌ABTNL-1，在效果上有顯著區(qū)別。

通過對生防菌劑中的地衣芽孢桿菌ABTNL-1號體內(nèi)抗生素合成基因進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，該菌株有合成Fengycin、Iturin或Bacillomycin的潛力，而Fengycin、Iturin和Bacillomycin均是強烈的真菌抑制劑，所以地衣芽孢桿菌ABTNL-1號可以有效的對草莓枯萎病進(jìn)行生物防治。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。