晶衍射準(zhǔn)確地了解其結(jié)構(gòu)特征;
3)本發(fā)明目標(biāo)化合物對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116(IC50 = 9.45 土 1.30 μΜ)和人肝癌細(xì)胞H印G2 (IC50 = 9.52 土 1.07 μΜ)的生長抑制作用較強(qiáng),顯著地超過了砷鎢酸鹽原料K14 [As2W19O67 (H2O)]和銅鹽 CuCl2.2Η20 ;
4)本發(fā)明目標(biāo)化合物制備方法簡單,易于操作,產(chǎn)率高且成本較低,有潛在的應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0018]圖1為目標(biāo)化合物的分子單元及三維拓展堆積圖,為了解其藥物活性的結(jié)果提供了前提條件;
圖2為目標(biāo)化合物紅外光譜圖,顯示出目標(biāo)化合物中W - O,As - O及水分子的特征振動(dòng)吸收帶;
圖3為目標(biāo)化合物的熱重曲線,表明失重過程主要?dú)w屬于結(jié)晶水和配位水的失去;
圖4為目標(biāo)化合物對(duì)人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞HCT-116、人肝癌細(xì)胞H印G2的抑制率柱狀圖;此圖說明該化合物對(duì)人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞HCT-116 (IC50 = 9.45 土 1.30 μΜ)和人肝癌細(xì)胞H印G2 (IC50 = 9.52 土 1.07 μΜ)的生長具有明顯的抑制作用,優(yōu)于砷鎢酸鹽原料K14 [As2W19O67 (H2O) ] (As2W19)和銅鹽 CuCl2.2Η20 ;
圖5為Annexin-V Cy-3/Hoechst 33342雙染高內(nèi)涵檢測(cè)目標(biāo)化合物致H印G2細(xì)胞凋亡的影響;高內(nèi)涵檢測(cè)目標(biāo)化合物激活H印G2細(xì)胞內(nèi)caspase-3的情況,對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞接種于96孔板過夜,不同濃度的目標(biāo)化合物作用48h后,Annexin-V Cy-3或加入caspase-3相應(yīng)的一抗、二抗后,高內(nèi)涵檢測(cè)兩者變化情況;圖中可看出紅色熒光強(qiáng)度隨劑量增加而增強(qiáng),證實(shí)了目標(biāo)化合物激活了 caspase-3蛋白酶,最終誘導(dǎo)了 !fepG2細(xì)胞的凋亡,且隨著化合物濃度的增大,凋亡程度增加;
圖6為Rhl23和Hoechst 33342雙染色目標(biāo)化合物導(dǎo)致HepG2細(xì)胞線粒體膜電位的改變;圖中可看出綠色熒光強(qiáng)度隨劑量增加而減弱;說明目標(biāo)化合物作用于人肝癌細(xì)胞HepG2后線粒體通透性增加、膜電位降低,從而說明該目標(biāo)化合物可以顯著降低線粒體膜電位及促使人肝癌細(xì)胞IfepG2發(fā)生凋亡。
[0019]具體實(shí)施方法
以下通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明,但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。
[0020]實(shí)施例1:
一種銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽,其化學(xué)式為=Na2K3.5Eu0.5[Eu(H2O)7] [As2W19Cu2O67(H2O)3].22H20o
[0021]上述的銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽采用傳統(tǒng)的水溶液法合成得到,其制備方法具體包括如下步驟:
1)制備砷鎢酸鹽前驅(qū)體K14[As2W19O67(H2O)];具體可參見文獻(xiàn)(U.Kortz, M.G.Savelieffj B.S.Bassilj Μ.H.Dickman, Angew.Chem.1nt.Ed.2001, 40, 3384一3386)進(jìn)行制備;
2)在25 mL 燒杯中,在攪拌條件下將 0.263 g (0.050 mmol)K14 [As2W19O67 (H2O) ]、0.075g (0.440 mmol) CuCl2.2Η20、0.056 g (0.217 mmol) EuCl3和 0.060 g (1.027 mmol) NaCl溶于15 mL (833 mmol)蒸飽水中,室溫?cái)嚢? h以形成均勾的混合相,然后置于80 °C水浴中加熱1.5 h,取出,冷卻至室溫,過濾,濾液靜置2周后析出綠色片狀晶體,過濾,晶體室溫自然晾干得87.4 mg (產(chǎn)率30%)目標(biāo)化合物。
[0022]實(shí)施例2:
一種銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽,其化學(xué)式為=Na2K3.5Eu0.5[Eu(H2O)7] [As2W19Cu2O67(H2O)3].22H20o
[0023]上述的銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽采用傳統(tǒng)的水溶液法合成得到,其制備方法具體包括如下步驟:
1)制備砷鎢酸鹽前驅(qū)體K14[As2W19O67(H2O)];具體可參見文獻(xiàn)(U.Kortz, M.G.Savelieffj B.S.Bassilj Μ.H.Dickman, Angew.Chem.1nt.Ed.2001, 40, 3384一3386)進(jìn)行制備;
2)在25 mL 燒杯中,在攪拌條件下將 0.263 g (0.050 mmol)K14 [As2W19O67 (H2O) ]、0.025g (0.147 mmol) CuCl2.2Η20、0.043 g (0.166 mmol) EuCl3和 0.060 g (1.027 mmol) NaCl溶于15 mL (833 mmol)蒸飽水中,室溫?cái)嚢? h以形成均勾的混合相,然后置于80 °C水浴中加熱1.5 h,取出,冷卻至室溫,過濾,濾液靜置2周后析出綠色片狀晶體,過濾,晶體室溫自然晾干得67.0 mg (產(chǎn)率23%)目標(biāo)化合物。
[0024]實(shí)施例3:
一種銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽,其化學(xué)式為=Na2K3.5Eu0.5[Eu(H2O)7] [As2W19Cu2O67(H2O)3].22H20o
[0025]上述的銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽采用傳統(tǒng)的水溶液法合成得到,其制備方法具體包括如下步驟:
1)制備砷鎢酸鹽前驅(qū)體K14[As2W19O67(H2O)];具體可參見文獻(xiàn)(U.Kortz, M.G.Savelieffj B.S.Bassilj Μ.H.Dickman, Angew.Chem.1nt.Ed.2001, 40, 3384一3386)進(jìn)行制備;
2)在25 mL 燒杯中,在攪拌條件下將 0.263 g (0.050 mmol)K14 [As2W19O67 (H2O) ]、0.070g (0.411 mmol) CuCl2.2Η20、0.048 g (0.186 mmol) EuCl3和 0.120 g (2.054 mmol) NaCl溶于15 mL (833 mmol)蒸飽水中形成均勾的混合相,然后置于80 °C水浴中加熱1.5 h,取出,冷卻至室溫過濾,濾液靜置2周后析出綠色片狀晶體,過濾,晶體室溫自然晾干得78.7mg (產(chǎn)率27%)目標(biāo)化合物。
[0026]應(yīng)用試驗(yàn)I
將人肝癌細(xì)胞H印G2、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116均在內(nèi)含100 U/mL青霉素(盤尼西林)和100 μ g/mL鏈霉素的10%胎牛血清液的RPM1-640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)液在37 V、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞毒性采用噻唑藍(lán)法確定。試驗(yàn)以每孔中細(xì)胞數(shù)為5X10 3個(gè)接種于96孔塑料培養(yǎng)板中,次日,在每個(gè)孔中加入200 UL溶解在培養(yǎng)液中的不同濃度的K14 [As2W19O67 (H2O)] (As2W19), CuCl2.2H20 及 Na2K3.5Eu0.5 [Eu (H2O)7] [As2W19Cu2O67 (H2O) 3].22H2O溶液。48 h后,20 μ L溶解于小牛血清中的濃度為0.5 mg/mL的ΜΤΤ(3_ (4,5_ 二甲基-2-噻唑)-2,5- 二苯基溴化四唑)被加入每個(gè)培養(yǎng)孔中。再培養(yǎng)4 h,依次加入200UL 二甲基亞砜于每個(gè)培養(yǎng)孔中,以溶解被還原的MTT的藍(lán)紫色晶體。用酶標(biāo)儀測(cè)定570nm的吸光度(0D值),依據(jù)公式計(jì)算出細(xì)胞生長抑制率。作圖求出抑制率為50 %時(shí)的濃度(即半數(shù)抑制濃度IC5tl),結(jié)果見圖4。
[0027]細(xì)胞生長抑制率=[(空白對(duì)照OD值一給藥組的OD值)/空白對(duì)照OD值]X 100%。每組濃度各做3次,求平均半數(shù)抑制濃度IC5(I。
[0028]由圖4 可知:目標(biāo)化合物 Na2K3.5Eu0.5 [Eu (H2O) 7] [As2W19Cu2O67 (H2O) 3].22 H2O 對(duì)人肝癌細(xì)胞H印G2、人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞HCT-116的生長表現(xiàn)出很好抑制作用。尤其是砷離子的引入,與過渡金屬離子起到協(xié)同作用,使該過渡-稀土異金屬砷鎢酸鹽對(duì)人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞 HCT-116 (IC50 = (9.45 ±1.30) μΜ)和人肝癌細(xì)胞 H印G2 (IC50 = (9.52 ±1.07) μΜ)的生長抑制作用明顯增強(qiáng),超過了原料砷鹽K14 [As2W19O67 (H2O)]和銅鹽CuCl2.2Η20ο
[0029]應(yīng)試實(shí)驗(yàn)2
取對(duì)數(shù)生長期的H印G2細(xì)胞,以每孔5X 15個(gè)細(xì)胞接種于96孔板。培養(yǎng)24 h后,分別加入2.5 μ Μ、5 μ M、10 μ M實(shí)施例3目標(biāo)化合物,每組設(shè)置三個(gè)復(fù)孔。在5% C02、37°C條件下培養(yǎng)48 h后,800 rpm離心5 min,棄去上清液,每孔加入30 μ L Rhl23,37 °0避光孵育30min后,棄去Rhl23工作液,PBS清洗I次;加入Hoechst 33342染色液50 μ L,37 °C避光染色15 min后;棄去上清液,PBS清洗I次,加入100 μ L PBS后Arrary Scan Vn HCS 600型高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞線粒體跨膜電位的變化,所測(cè)第二通道平均熒光強(qiáng)度值代表細(xì)胞線粒體膜電位高低,選擇的檢測(cè)波長為530 nm, Hoechst 33342選擇的檢測(cè)波長為460 nm。結(jié)果見圖5和6。
[0030]由圖5和6可知:目標(biāo)化合物作用于人肝癌細(xì)胞H印G2后線粒體通透性增加、膜電位降低,從而說明該目標(biāo)化合物可以顯著降低線粒體膜電位及促使人肝癌細(xì)胞H印G2發(fā)生凋亡。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽,其化學(xué)式為:Na 2K3.5Eua5 [Eu (H2O)7] [As2W19Cu2O67(H2O) 3].22H20o
2.權(quán)利要求1所述銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽的制備方法,其特征在于,包括如下步驟: 1)制備砷鎢酸鹽前驅(qū)體K14[As2W19O67 (H2O)]; 2)在攪拌條件下將K14[As2W19O67(H2O) ]、CuCl2.2H20、EuC13和NaCl溶解到蒸餾水中,室溫?cái)嚢? — 3 h以形成均勻的混合相,然后置于80±5°C水浴中加熱I 一 2 h,取出,冷卻至室溫,過濾,濾液靜置后析出綠色片狀晶體,過濾,晶體干燥后即為目標(biāo)化合物。
3.如權(quán)利要求2所述銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽的制備方法,其特征在于,所述步驟 2)中 K14[As2W19067 (H20)]、CuC12.2H20、EuCl3、NaCl 和水的摩爾比為 1.0: 2.9—8.8:3.3—4.4: 20.5—51.3: 16660。
4.權(quán)利要求1所述的銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求4所述的銅-銪異金屬取代砷鎢酸鹽在制備抗癌藥物中的應(yīng)用,其特征在于,所述抗癌藥物為抗肝癌藥物或抗結(jié)腸直腸癌藥物。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種銅–銪異金屬取代砷鎢酸鹽,其化學(xué)式為:Na2K3.5Eu0.5[Eu (H2O)7][As2W19Cu2O67(H2O)3]·22H2O。該化合物利用EuCl3、CuCl2·2H2O、NaCl與砷鎢酸鹽前驅(qū)體K14[As2W19O67(H2O)]在水溶液條件下反應(yīng)制得,制備方法簡單、易于操作、成本較低。本發(fā)明經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn):該化合物對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2和人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116的生長有明顯的抑制作用,可用于制備抗癌尤其是抗肝癌、抗結(jié)腸癌藥物,此研究結(jié)果對(duì)該化合物在藥物活性方面的應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【IPC分類】C01G41-00
【公開號(hào)】CN104609475
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510035099
【發(fā)明人】李明雪, 陳利娟, 羅婕, 趙俊偉, 劉建彩, 張芳
【申請(qǐng)人】河南大學(xué)
【公開日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2015年1月23日