一種復(fù)合光合菌肥的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明是屬于一種微生物菌肥技術(shù)范圍，具體的說(shuō)是設(shè)及到一種復(fù)合光合菌肥的 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 光合細(xì)菌列為細(xì)菌n，真細(xì)菌綱，紅螺菌目，下分為紅螺菌亞目和綠菌亞目，其中 紅螺菌目下又分為紅螺菌科(紫色非硫光合細(xì)菌)和著色菌科(紫硫光合細(xì)菌)。歸屬于紅螺 菌目的光合細(xì)菌能在厭氧條件下進(jìn)行光合作用，且不釋放氧。細(xì)胞中含有細(xì)菌葉綠素和多 種類胡蘿h素，及細(xì)胞色素、泛酬和鐵氧化還原型的非血紅素鐵蛋白。根據(jù)《伯杰細(xì)菌手 冊(cè)》第八版，紅螺菌科的光合細(xì)菌能光合同化簡(jiǎn)單的有機(jī)物質(zhì)，大多數(shù)種不能W硫化物作為 唯一光合電子供體而生長(zhǎng)，當(dāng)硫化物或硫代硫酸鹽作為電子供體時(shí)，元素硫不是一個(gè)中間 的氧化產(chǎn)物。當(dāng)由硫化物形成元素硫時(shí)，元素硫不能進(jìn)一步氧化為硫酸鹽。所有的種都不 能利用元素硫作為電子供體。主要包括=個(gè)屬；紅螺菌屬，紅假單胞菌屬，紅微菌屬。紅螺 菌屬中比較有代表性的菌種為；深紅紅螺菌，纖細(xì)紅螺菌，黃楊紅螺菌，莫氏紅螺菌，度光紅 螺菌。紅假單胞菌屬中比較有代表性的菌種為：沼澤紅假單胞菌，綠色紅假單胞菌，嗜酸紅 假單胞菌，膠質(zhì)紅假單胞菌，英膜紅假單胞菌，球形紅假單胞菌等。紅微菌屬主要代表菌種 為萬(wàn)巧氏紅微菌。
[0003] 著色菌科(紫硫細(xì)菌）在光照下，能利用硫化氨、硫代硫酸鹽、分子氨及其他無(wú)機(jī)或 有機(jī)還原劑把二氧化碳還原成有機(jī)物，同時(shí)能固定大氣中的氮。大多數(shù)種是嚴(yán)格厭氧的（只 有一個(gè)種一桃紅英硫菌能在黑暗中微好氧生長(zhǎng))，在有元素硫和硫化物時(shí)，具有光自養(yǎng)同化 二氧化碳的能力，元素硫在細(xì)胞內(nèi)居中地W球狀積累，有一個(gè)屬(外硫紅螺菌屬積累在細(xì)胞 外面。硫酸鹽是硫化合物的最終氧化產(chǎn)物。許多菌株能利用分子氨作為電子供體。所有的 菌株能光合同化一些簡(jiǎn)單的有機(jī)物質(zhì)，其中最廣泛被利用的是醋酸鹽和丙酬酸鹽。沒(méi)有同 化型硫酸還原作用的菌株僅在有硫化物或其它還原的硫化合物作為細(xì)胞硫來(lái)源時(shí)，才能利 用有機(jī)物質(zhì)，絕大多數(shù)菌株在無(wú)硫化氨或硫時(shí)，可利用有機(jī)物質(zhì)，因此所有的類型都是潛在 的混合營(yíng)養(yǎng)菌。
[0004] 著色園科內(nèi)包括著色園屬，囊硫園屬，八球硫園屬，硫螺旋園屬，夾硫園屬，閃囊園 屬，板硫菌屬，可變桿菌屬，外硫紅螺菌屬。
[0005] 光合細(xì)菌是一類能利用光能作為能量來(lái)源的細(xì)菌。由于其既能促進(jìn)±壤物質(zhì)轉(zhuǎn) 化，提高±壤肥力，又能促進(jìn)作物生長(zhǎng)，增強(qiáng)作物抗病防病能務(wù)，降解農(nóng)藥殘留和固定有毒 有害重金屬，所W農(nóng)作物施用光合菌肥，能收到增產(chǎn)增質(zhì)的效果。單一光合細(xì)菌其作用有 限，復(fù)合光合細(xì)菌成為了研究的趨勢(shì)與熱點(diǎn)。
[0006] 但現(xiàn)有有關(guān)光合細(xì)菌的研究主要是針紫色非硫光合細(xì)菌進(jìn)行研究，盡管也有些是 一些復(fù)合光合細(xì)菌，但其主要是針對(duì)紫色非硫光合細(xì)菌(紅螺菌科）內(nèi)進(jìn)行混合培養(yǎng)，如專 利號(hào)200910039525. 5 "-種農(nóng)用光合細(xì)菌制劑的生產(chǎn)方法"使用的菌種為沼澤紅假單胞菌 和球形紅細(xì)菌。專利號(hào)201210255225. 2 "高活菌數(shù)光合細(xì)菌原代菌種的制種方法"使用的 菌種為沼澤紅假單胞菌。專利號(hào)200410048678. 3 "高濃度光合細(xì)菌制劑的制備方法"使用 的菌種為沼澤紅假單胞菌，英膜紅假單胞菌和球形紅假單胞菌；專利號(hào)201310734863. 7"- 種復(fù)合光合菌劑及其制備方法"使用的菌種為球形紅假單胞菌，沼澤紅假單胞菌及深紅紅 螺菌菌種；從現(xiàn)有文獻(xiàn)上來(lái)看，大部份復(fù)合光合細(xì)菌只是對(duì)紅螺菌科中的菌進(jìn)行混合培養(yǎng)， 還未有報(bào)道紅螺菌科與著色菌科的菌之間進(jìn)行混合培養(yǎng)。
[0007]國(guó)內(nèi)對(duì)紫硫光合細(xì)菌(著色菌科）的研究?jī)H見(jiàn)于少數(shù)幾篇文獻(xiàn)，劉蔚等分離到一株 桃紅英硫菌，認(rèn)為其具有較好的凈水能力及生物肥料的能力，特別可W解決我國(guó)大部份± 壤內(nèi)因缺硫而影響農(nóng)作物生長(zhǎng)W至減產(chǎn)的問(wèn)題。四川大學(xué)的馮疆對(duì)紫硫細(xì)菌中的桃紅英硫 菌進(jìn)行了研究，他認(rèn)為桃紅英硫菌適于應(yīng)用到制作菌肥和處理含硫污染物方面。但要投入 實(shí)際運(yùn)用，首要要解決的問(wèn)題是，該菌的生長(zhǎng)速度緩慢，一般要培養(yǎng)兩周W后才會(huì)有明顯的 生長(zhǎng)趨勢(shì)，培養(yǎng)20-40天才能做為菌劑使用，且0D650的值不高于1，活菌含量低于1億/毫 升，較長(zhǎng)的生長(zhǎng)周期不利于大規(guī)模的應(yīng)用。而到目前為止，還未見(jiàn)有關(guān)桃紅英硫菌肥制備方 法技術(shù)方案公開(kāi)。也未有著色菌科(較強(qiáng)硫化氨的降解能力，促進(jìn)硫元素的物質(zhì)循環(huán)）與紅 螺菌科中的菌進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng)作為菌肥的技術(shù)方案進(jìn)行公開(kāi)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種紫硫光合細(xì)菌中的桃紅英硫菌與紫色非硫 光合細(xì)菌中的球形紅假單胞菌兩種菌混合培養(yǎng)，菌體生長(zhǎng)速度快，菌含量高，培養(yǎng)時(shí)間短， 肥效活性高、穩(wěn)定性高、作用效果快的復(fù)合光合細(xì)菌肥的制備方法。
[0009] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：采用紫硫光合細(xì)菌中的桃紅英 硫菌菌種與紫色非硫光合細(xì)菌中的球形紅假單胞菌按W下步驟進(jìn)行培養(yǎng)： (1)、桃紅英硫菌半固體種子活化培養(yǎng)；將桃紅英硫菌種穿刺在半固體桃紅英硫菌培養(yǎng) 基中，25-30°C光照培養(yǎng)7-10天，待穿刺的菌線變紅并長(zhǎng)出菌苔，即可為活化的桃紅英硫菌 種； 口)、球形紅假單胞菌平板活化；將球形紅假單胞菌菌種在平板上劃線活化，溫度 25-35C活化培養(yǎng)3-5天，挑取大個(gè)菌落作為活化種子； 口 )、桃紅英硫菌種子培養(yǎng)：將活化的菌種接種至桃紅英硫菌種子液體培養(yǎng)基中，溫度 25-35°C，光照強(qiáng)度為；1000-30001ux，光照厭氧培養(yǎng)7-10天，檢測(cè)種子的0D650 > 1. 2,活 菌數(shù)> 6億C化/ml即為種子培養(yǎng)液； (4)、球形紅假單胞菌種子培養(yǎng)；將挑取大個(gè)球形紅假單胞菌菌落作為活化種子接種到 種子培養(yǎng)基中，溫度25-35°C，光照強(qiáng)度為；1000-30001UX，光照靜置培養(yǎng)3-5天，檢測(cè)種子 的0D660 > 2,活菌數(shù)> 15億C化/ml即為種子培養(yǎng)液； 腳、發(fā)酵培養(yǎng)；將桃紅英硫菌種子培養(yǎng)液與發(fā)酵培養(yǎng)基W 1 ;3-1 ;5的接種量接種，同時(shí) 將球形紅假單胞菌種子培養(yǎng)液與發(fā)酵培養(yǎng)基按1 ; 10-1 ;20的接種量接入，在光照培養(yǎng)罐中 厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25-35°C，光照強(qiáng)度為；1000-40001ux，攬拌速度為120轉(zhuǎn)/分鐘，待培 養(yǎng)至第二天，開(kāi)始流加300 g/L的硫代硫酸鋼至硫代硫酸鋼的濃度至1-3 g/l，培養(yǎng)5-7天， 待檢測(cè)其OD650 > 6,活菌數(shù)> 50億C化/ml,其中桃紅英硫菌不低于25億C化/ml,球形紅 假單胞菌含量不低于20億C化/ml,即可放罐，灌裝，包裝成品。
[0010] 所述的半固體桃紅英硫菌培養(yǎng)基為；氯化錠0. 4-1. 2g/l，磯酸二氨鐘0. 5-lg/L， 二水氯化巧0. 05-0. 2g/l，氯化儀0. 1-0. 5g/l，蘋(píng)果酸鋼1-3 g/l，果糖2-5g/l，九水硫化鋼 0. 1-lg/L，瓊脂8-lOg/L，氯化鋼0. 5-4g/L，121°C滅菌15分鐘，用蘋(píng)果酸調(diào)PH至7. 0-7. 2， 其中九水硫化鋼先配制成0.1 g/mL單獨(dú)滅菌； 所述的桃紅英硫菌種子液體培養(yǎng)基為；氯化錠0. 4-1. 2g/l，磯酸二氨鐘0. 5-lg/L， 二水氯化巧0. 05-0. 2g/L，氯化儀0. 1-0. 5g/l，果糖2-10 g/l，甘油l-3g/l，九水硫化鋼 0. 1-lg/L，氯化鋼0. 5-4g/L，121°C滅菌15分鐘，用醋酸調(diào)PH至7. 0-7. 2,其中九水硫化鋼 先配制成0.1 g/mL單獨(dú)滅菌； 所述的球形紅假單胞菌種子液體培養(yǎng)基為：氯化錠0. 8-1. 2g/l，磯酸二氨鐘0. 5-l