專利名稱:Myt1激酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及膜締合酪氨酸和蘇氨酸激酶(“myt1激酶”)抑制劑,含有這種化合物的藥用組合物,以及鑒定所述組合物的方法和用所述組合物治療各種形式的癌癥和過度增殖疾病的方法。
進(jìn)入有絲分裂是由促M(fèi)期因子(MPF)啟動(dòng)的,該因子是含有cdc2蛋白激酶和細(xì)胞周期蛋白B的復(fù)合物。正確調(diào)節(jié)MPF能確保有絲分裂只能在細(xì)胞周期的初期階段結(jié)束之后出現(xiàn)。在Tyr-15和Thr-14上對(duì)cdc2進(jìn)行磷酸化,可以在分裂間隙(G1、S和G2)抑制所述活性。在G2-M過渡期,在Tyr-15和Thr-14位置上對(duì)cdc2進(jìn)行脫磷酸化,使MPF能對(duì)其有絲分裂底物進(jìn)行磷酸化。已知一個(gè)獨(dú)特的cdc-調(diào)節(jié)激酶家族(Weel)控制cdc Tyr-15的磷酸化。最近報(bào)導(dǎo)了該家族的一個(gè)新成員Myt1是Thr-14和Tyr-15-專一性cdc2激酶,并證實(shí)它是cdc2/細(xì)胞周期蛋白B激酶活性的重要調(diào)節(jié)物(“科學(xué)”27086-90,1995;“分子細(xì)胞生物學(xué)”,17卷571,1997)。抑制cdc2的磷酸化作用對(duì)于進(jìn)入有絲分裂的定時(shí)來說是重要的。研究已經(jīng)證實(shí),cdc2的提前激活會(huì)導(dǎo)致有絲分裂的徹底失敗和細(xì)胞死亡。Myt1的抑制預(yù)計(jì)能夠?qū)е耤dc2的提前激活,并因此能殺死快速增殖的細(xì)胞。另外,預(yù)計(jì)Myt1抑制作用能降低對(duì)傳統(tǒng)DNA破壞性化療的耐受性,因?yàn)楸苊饧?xì)胞死亡的機(jī)制,涉及細(xì)胞周期G2期抑制作用,并在分裂之前修復(fù)DNA損傷。通過阻斷cdc2的Myt1抑制磷酸化作用,可以防止所述抑制作用。因此,強(qiáng)制細(xì)胞提前進(jìn)入有絲分裂。
Myt1激酶是一種重要的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)物,特別是G2/M期的調(diào)節(jié)物。因此,抑制劑有希望用于治療癌癥。現(xiàn)有的癌癥療法包括外科手術(shù)、輻射、和化療,這些方法通常在治愈這種疾病方面是不成功的?;颊呷后w很大,例如,僅結(jié)腸癌一項(xiàng)在美國每年有160,000個(gè)新的病歷,并有60,000人死亡。在世界上每年新增600,000個(gè)結(jié)腸癌病歷,而肺癌患者的數(shù)量是結(jié)腸癌的兩倍。對(duì)大型固體腫瘤進(jìn)行化療的最大的缺陷是大多數(shù)患者沒有反應(yīng)。這是因?yàn)榧?xì)胞周期調(diào)節(jié)和隨后的DNA損傷或有絲分裂器官、大多數(shù)有效化療劑靶的修復(fù)。Myt1激酶提供了一個(gè)介入點(diǎn),該介入點(diǎn)位于腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生抗性的機(jī)制的下游。Myt1的抑制本身是具有減弱腫瘤增殖的作用。此外,還可用于與傳統(tǒng)的化療法結(jié)合,以便克服抗藥性。
根據(jù)以上說明,有必要鑒定有效的myt1激酶抑制劑,用于治療各種適應(yīng)癥,包括癌癥,這些疾病與本發(fā)明的受體相關(guān)。
本發(fā)明涉及由下面的式(Ⅰ)所表示的化合物,含有該化合物的藥用組合物和用該化合物拮抗myt1激酶受體的方法。
本發(fā)明提供了下面的式(Ⅰ)所示的化合物 式(Ⅰ)其中A表示共價(jià)鍵,或1,2、1,3或1,4-二取代芳香胺環(huán),選自下列一組 其中R獨(dú)立地選自H、OMe、Cl、Br、F、NO2和CN;n是1-4的整數(shù);每一個(gè)X獨(dú)立地選自H、Br、CH3、NO2、CN和NR1R2;每一個(gè)Ar各自是視需要取代的苯基或視需要取代的五或六員雜環(huán),包括選自N、O和S的一個(gè)或幾個(gè)雜原子;和R1和R2各自是H或C1-4烷基,分支的或環(huán)狀的,視需要含有O或N。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物選自下列一組二[2-(4-苯基-5-甲基)噻唑基]胺,二[2-(4-(2-吡啶基)噻唑基]胺,二[2-[4-(3-吡啶基)噻唑基)胺,N,N-二(5(3,4-二氯苯基)-2-噻唑基)胺,N,N-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基)胺,1,4-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基氨基)苯,1,3-二[4-(3-吡啶基)-2-噻唑基氨基]苯,1,4-二[4-氟苯基-2-噻唑基氨基]苯;和1,4-二(4-(4-甲氧基苯基)-2-噻唑基氨基)苯。
本發(fā)明更優(yōu)選的化合物選自下列一組二[2-(4-苯基-5-甲基)噻唑基]胺,1,4-二(4-(4-甲氧基苯基)-2-噻唑基氨基)苯,N,N-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基)胺,1,4-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基氨基)苯,1,4-二[4-氟苯基-2-噻唑基氨基]苯,二[2-(4-(2-吡啶基)噻唑基]胺,和二[2-[4-(3-吡啶基)噻唑基)胺。本發(fā)明的最優(yōu)選的化合物選自下列一組二[2-(4-苯基-5-甲基)噻唑基]胺,1,4-二(4-(4-甲氧基苯基)-2-噻唑基氨基)苯,N,N-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基)胺,和1,4-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基氨基)苯氫溴化物。
在本文中,“烷基”是指視需要取代過的通過碳-碳單鍵連接在一起的烴基。烷基烴基可以是線型的、分支的或環(huán)狀的,飽和的或不飽和的。所述基團(tuán)優(yōu)選為飽和的線型或環(huán)狀的。
本發(fā)明的化合物可以含有一個(gè)或幾個(gè)不對(duì)稱碳原子,并可以外消旋和光學(xué)活性形式存在。上述所有化合物及非對(duì)映體都屬于本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明化合物還可以制成可以藥用的鹽及其復(fù)合物。可以藥用的鹽在給藥量和濃度下是無毒的鹽。
可以藥用的鹽包括酸加成鹽,如包括硫酸鹽、氫氯酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、磷酸鹽、氨基磺酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、環(huán)己基氨基磺酸鹽、奎尼酸鹽等鹽??梢运幱玫柠}可以從酸獲得,如氫氯酸、馬來酸、硫酸、磷酸、氨基磺酸、乙酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、馬來酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、環(huán)己基氨基磺酸、富馬酸和奎尼酸。
可以藥用的鹽還包括堿加成鹽,如包括雙芐基亞乙基二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、麥格魯明、普魯卡因、鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、銨、烷基胺、和鋅等鹽,此時(shí)存在酸性官能團(tuán),如羧酸或苯酚。
優(yōu)選的鹽包括氫溴酸鹽、二氫溴酸鹽和雙三氟乙酸鹽。
本發(fā)明的化合物容易通過下面的方法制備方案1 相應(yīng)的二噻唑化合物是通過二硫代縮二脲(如反應(yīng)式1)或任何其它二硫代縮二脲,如1,3-苯基二硫代縮二脲(如反應(yīng)式2)與兩當(dāng)量的適當(dāng)取代過的溴酮,如2-溴-1-苯基丙-1-酮,在諸如乙醇或丙酮或任何其它合適溶劑中縮合而合成的。將反應(yīng)混合物加熱到70-50℃保持?jǐn)?shù)小時(shí)(4-12小時(shí))。冷卻該反應(yīng)混合物,得到二氫溴酸鹽形式的所需產(chǎn)物。二噻唑化合物的一溴化可以通過在有諸如氟硼酸或任何其它合適的質(zhì)子存在的條件下,在諸如乙腈或任何其它合適的溶劑中,讓N-溴琥珀酰亞胺反應(yīng)而完成的,該方法披露于有關(guān)文獻(xiàn)中(Oberhauser,T.有機(jī)化學(xué)雜志,1997,62,4504-4506)。二溴化作用可以通過任何已知的溴化反應(yīng)完成,如使二噻唑與N-溴琥珀酰亞胺在乙酸中回流DMSO或乙腈或溴進(jìn)行反應(yīng),或用本領(lǐng)域化學(xué)家所公知的任何其它方法進(jìn)行。
通過適當(dāng)操作和保護(hù)任何化學(xué)官能團(tuán),可以用與上文所述類似的方法合成式(Ⅰ)中的其余化合物。為了用式(Ⅰ)的化合物或其可以藥用的鹽治療人類和其它哺乳動(dòng)物,通常按照標(biāo)準(zhǔn)的藥理學(xué)方法將其制備成藥用組合物。
本發(fā)明的配體可以通過不同方式施用,包括靜脈、腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、口服、外用、表皮使用、或粘膜使用。對(duì)于系統(tǒng)性給藥來說,優(yōu)選口服。對(duì)于口服來說,例如,所述化合物可以制成常規(guī)的口服劑型,如膠囊、片劑,和液體制劑,如糖漿、酏劑和濃縮的滴劑。
另外,可以采用注射(腸胃外施用),例如,肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下注射。對(duì)注射來說,本發(fā)明的化合物被制成液體溶液,優(yōu)選溶解在生理學(xué)上相容的緩沖液或溶液中,如鹽水溶液、Hank′s溶液,或Ringer′s溶液,另外,所述化合物可以制成固體形式,并在使用之前重新溶解或懸浮。也可以生產(chǎn)冷凍干燥形式。
系統(tǒng)性給藥還可以經(jīng)粘膜或經(jīng)表皮方式。對(duì)于經(jīng)粘膜或經(jīng)表皮給藥來說,在該制劑中使用適于穿透阻隔層的穿透劑。所述穿透劑在本領(lǐng)域中是眾所周知的,并且例如包括,膽酸鹽和羧鏈孢酸的衍生物。另外,還可以用洗滌劑增強(qiáng)滲透性。經(jīng)粘膜的服用,例如,可以通過鼻腔噴霧、直腸栓劑、或陰道栓劑使用。
為了通過表皮給藥,本發(fā)明的化合物可以制成軟膏、敷膏、凝膠、或霜?jiǎng)?,如本領(lǐng)域所公知的。所服用的各種化合物的量可以通過標(biāo)準(zhǔn)方法確定,要考慮以下因素,如該化合物的IC50、EC50、該化合物的生物學(xué)半衰期、患者的年齡、體形和體重、以及患者所患的疾病。需要考慮的所述因素以及其它因素的重要性為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知。
給藥量還取決于給藥的途徑和口服生物利用率的程度。例如,對(duì)于具有較低的口服生物利用率的化合物來說,必須服用較大的劑量。
優(yōu)選的組合物為單位劑型。對(duì)于口服使用來說,例如可以片劑或膠囊形式,對(duì)于鼻腔使用來說,可以施用計(jì)量過的氣溶膠劑,對(duì)于經(jīng)表皮使用來說,可以使用外用制劑或膏貼,而對(duì)于經(jīng)粘膜使用來說,可以使用口腔含片。在每一種情況下,用藥方案是這樣的,使患者可以取用單一劑量。
用于口服的每一個(gè)劑量單位包括0.01-500mg/Kg是合適的,優(yōu)選0.1-50 mg/Kg式(Ⅰ)的化合物或其可以藥用的鹽,該數(shù)字是以游離堿形式計(jì)算的。腸胃外、鼻腔、口腔吸入、經(jīng)粘膜或經(jīng)表皮途徑施用的日用劑量,合適的是0.01-100 mg/Kg的式(Ⅰ)化合物。外用制劑含有0.01-5.0%的式(Ⅰ)化合物是合適的。每天可以服用活性成分1-6次,優(yōu)選1次,足于表現(xiàn)出所需要的活性,正如本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易理解的。
在本文中,疾病的“治療”包括(但不限于)疾病的避免、阻滯和預(yù)防。在本文中,可以用本發(fā)明化合物治療的“疾病”包括(但不限于)白血病、固體腫瘤癌、轉(zhuǎn)移癌、軟組織癌、腦癌、食道癌、胃癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、膀胱癌、骨癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮癌、宮頸癌、睪丸癌、腎癌、頭癌和頸癌、慢性炎性增殖疾病,如牛皮癬和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎;增殖性心血管疾病,如再狹窄、增殖性視覺疾病,如糖尿病性視網(wǎng)膜病和良性過度增殖病,如血管瘤。
口服有活性的式(Ⅰ)的組合物及其可以藥用的鹽,可以制成糖漿、片劑、膠囊和錠劑。糖漿制劑通常包括將所述化合物或鹽懸浮在液體載體中組成的懸浮液或溶液,所述載體如乙醇、花生油、橄欖油、甘氨酸或水以及香味劑或著色劑。當(dāng)所述組合物是片劑形式時(shí),可以使用通常被用于制備固體制劑的任何藥用載體。所述載體的例子包括硬脂酸鎂、石膏粉、滑石、凝膠、阿拉伯膠、硬脂酸、淀粉、乳糖和蔗糖。當(dāng)所述組合物是膠囊形式時(shí),任何膠囊化方法都可以采用,例如,將上述載體用于硬的凝膠膠囊殼中。當(dāng)所述化合物是軟的凝膠殼膠囊形式時(shí),通常用于制備分散劑或懸浮劑的任何藥用載體都可以使用,例如含水膠、纖維素、硅酸鹽或油,并將其填入軟的凝膠膠囊中殼。
典型的腸胃外組合物包括一種化合物或鹽溶解在無菌水或非水載體中的溶液或懸浮液,視需要含有可以腸胃外使用的油,例如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、花生油和芝麻油。
用于吸入的典型組合物為溶液、懸浮液或乳液形式,以上劑型可以干粉形式或氣溶膠形式用常規(guī)的推進(jìn)劑,如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷服用。
典型的栓劑配方包括適宜的化合物或其有活性的可以藥用的鹽,該化合物在以這種方式服用時(shí)可加入結(jié)合劑和/或潤滑劑,例如聚乙二醇、凝膠、可可油或其它低熔點(diǎn)植物蠟或脂肪或其合成類似物。
典型的表皮和透皮制劑含有傳統(tǒng)的含水或無水載體,例如,栓劑、軟膏、洗液或糊劑或者是膏藥、膏貼或膜。
所述組合物優(yōu)選為單位劑量形式,例如片劑、膠囊或計(jì)量的氣溶膠劑型,以便患者可以服用一個(gè)劑量。
當(dāng)本發(fā)明的化合物用本發(fā)明的方法服用時(shí),不會(huì)出現(xiàn)不可接受的毒理學(xué)作用。
式(Ⅰ)化合物的生物學(xué)活性通過下面所述的試驗(yàn)證實(shí)。體外測(cè)定可以用下文所述的體外測(cè)定和細(xì)胞測(cè)定鑒定能夠抑制myt1激酶的化合物。所述測(cè)定的變化形式對(duì)本發(fā)明技術(shù)人員來說是顯而易見的。GST-Myt1的表達(dá)構(gòu)建GST-Myt1表達(dá)載體,該載體具有通過一個(gè)接頭與Myt1激酶的氨基末端融合的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因,所述接頭含有凝血酶裂解位點(diǎn),該克隆在Myt1的362號(hào)氨基酸上被截短,該位點(diǎn)正好處在跨膜域的前面。將該結(jié)構(gòu)克隆到桿狀病毒表達(dá)載體pFASTBAC上,并且將其制備用于隨后感染的病毒菌株。用表達(dá)GST-Myt1的病毒感染草地貪夜蛾細(xì)胞(Sf21),并讓所述細(xì)胞生長3天,然后收獲并冷凍。GST-Myt1的純化按如下方法純化GST-Myt1蛋白將表達(dá)GST-Myt1的Sf21細(xì)胞沉淀物在冰上重新懸浮于10毫升的溶胞緩沖液(50mM Tris-HCl,pH7.5,250mM NaCl,1mM二硫蘇糖醇(DTT),0.1%NP-40,5%(v/v)蛋白酶抑制劑混合物,1mM原礬酸鈉)中,通過超聲波使細(xì)胞溶解,并以100,000×g的速度離心30分鐘。將上清液加至5毫升的(包裝體積)谷胱甘肽Sepharose4B上,用洗滌緩沖液(20mM Tris-HCl,pH7.0,10mM MgCl2,100mM NaCl,1mM DTT,0.5%(v/v)蛋白酶抑制劑混合物,1mM原礬酸鈉)平衡。將該混合物振動(dòng)30分鐘。以500×g的速度離心5分鐘使所述樹脂和結(jié)合的GST-Myt1沉淀,并用14毫升洗滌緩沖液洗滌。按上述方法使珠粒旋轉(zhuǎn),并重新懸浮在另外14毫升洗滌緩沖液中。將懸浮液轉(zhuǎn)移到一個(gè)柱上,并進(jìn)行充填,然后讓洗滌緩沖液通過重力的作用流動(dòng)。用10mM谷胱甘肽將GST-Myt1從所述柱上洗脫,洗脫液是用50mM Tris-HCl,pH8.0制備的,洗脫物的餾分為500微升。用Bio-Rad′s蛋白測(cè)定試劑盒按照說明書的說明測(cè)定所述組分的蛋白濃度。收集含有GST-Myt1的餾分,并稀釋到大約0.5mg/ml的濃度,并在4℃下透析緩沖液(20mM HEPES,pH7.0,1mM乙酸鎂,100mM NaCl,0.05%Brij-35,10%甘油,1mM DTT,0.2%(v/v)蛋白酶抑制劑混合物,1mM原礬酸鈉)透析4小時(shí)。將所述蛋白等分,并保存在-80℃下。酶測(cè)定GST-Myt1自磷酸化-DELFIA測(cè)定在96孔NUNC maxisorp板上進(jìn)行延遲熒光免疫測(cè)定(DELFIA),每孔添加50微升0.25微克GST-Myt1溶解在緩沖液A(50mM HEPES,pH7.4,2mM乙酸錳,5μM ATP,1mM DTT)的溶液。為了測(cè)定最佳pH值,使用二價(jià)陽離子,而ATP的Km,合適的成分按照附圖
所示改變。通過添加溶解在緩沖液中的GST-Myt1開始自磷酸化反應(yīng),并在室溫下,讓該反應(yīng)在搖動(dòng)條件下進(jìn)行20分鐘。添加終濃度為20mM的EDTA終止所述反應(yīng)。并讓所述蛋白與所述孔繼續(xù)結(jié)合40分鐘。用300微升TBS/Tween(50mM Tris,pH7.4,150mM NaCl,0.2%Tween-20)洗滌所述孔3次。洗滌之后用溶解在TBS中的Pierce′s Superblock封閉所述板,其濃度為100微升/孔。馬上傾出封閉溶液,并再重復(fù)兩次封閉。然后再次用300微升/孔的TBS-Tween洗滌所述板3次。然后將100微升Eu-標(biāo)記的抗磷酸酪氨酸抗體在含有0.15mg/ml BSA的TBS/Tween中稀釋到0.125微克/毫升,并添加到所述孔中,在室溫下,在搖動(dòng)條件下培養(yǎng)30分鐘。然后用300微升TBS/Tween洗滌所述孔3次,每孔添加200微升增強(qiáng)溶液,并在搖動(dòng)條件下培養(yǎng)10分鐘。然后用購自Wallac公司的1420VICTOR平板記數(shù)器對(duì)所述平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在進(jìn)行抑制劑研究時(shí)使用相同的條件,所不同的是ATP的濃度為1μM,而抑制劑添加在二甲基亞砜(DMSO)中,最終濃度為1%。試驗(yàn)化合物預(yù)計(jì)能夠抑制myt1自磷酸化作用的濃度范圍為0.001-50μM。生理學(xué)研究細(xì)胞周期研究有關(guān)細(xì)胞作用的藥物研究是在Hela S3粘著細(xì)胞系上進(jìn)行的。以足夠低的濃度以細(xì)胞鋪板,以便在24小時(shí)之后這些細(xì)胞能達(dá)到10-20%的鋪滿度(通常為2×105/15cm e3)。然后通過重復(fù)的胸苷阻隔將細(xì)胞同步化在S期。簡(jiǎn)單地講,用2mM胸苷處理細(xì)胞18小時(shí),通過3次洗滌釋放8小時(shí),然后再用胸苷處理。在第二次除去胸苷之后,95%的細(xì)胞處在S期。然后將同步的細(xì)胞送回到含有DNA破壞藥物的完全培養(yǎng)基中,所述藥物如50mM topotecan(我們發(fā)現(xiàn)該劑量足于將細(xì)胞控制在G2期早期,而不會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞脫噬作用),并與試驗(yàn)化合物結(jié)合處理18小時(shí)。然后以細(xì)胞核進(jìn)行碘化丙錠染色法,針對(duì)細(xì)胞周期曲線進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。(Vindelov等,細(xì)胞計(jì)量第3卷,No.5,1983,323-327)預(yù)計(jì)Myt1抑制劑能夠逆轉(zhuǎn)由所述DNA破壞劑導(dǎo)致的G2控制。所述活性的典型濃度范圍為0.001-10μM。增殖/細(xì)胞脫噬作用研究增殖研究是在各種粘著和非粘著細(xì)胞系上進(jìn)行的,包括Hela S3,HT29和Jurkat(刪除***)。增殖研究使用比色變化進(jìn)行,這種變化是由于由代謝的活細(xì)胞產(chǎn)生生成甲簪產(chǎn)物而使四唑制劑XTT減少造成的(Scudiero等,“癌癥研究”,48,1981,4827-4833)。將細(xì)胞以100微升的體積接種到96孔板上,達(dá)到大致10%的鋪滿度(細(xì)胞濃度隨細(xì)胞系而變化并生長24小時(shí))。然后加入帶有或不帶有足夠的含載體培養(yǎng)基的化合物,以便將細(xì)胞增加到200微升含化學(xué)試劑的最終體積,其中有0.2%DMSO。讓細(xì)胞接受多種濃度的DNA破壞抗增殖藥物,如topotecan,本發(fā)明試驗(yàn)化合物及組合處理在37℃下,5%二氧化碳條件下進(jìn)行。72小時(shí)之后,將50微升XTT/吩嗪甲磺酸鹽混合物加到每個(gè)孔中,并培養(yǎng)細(xì)胞90分鐘。在450nm下對(duì)板進(jìn)行計(jì)數(shù),并與載體處理的細(xì)胞比較抗增殖效果。預(yù)計(jì)Myt1抑制劑能夠抑制所述癌細(xì)胞系的增殖和/或增強(qiáng)DNA破壞化療藥物的細(xì)胞毒性。所述活性物的典型濃度范圍為0.001-10μM。還可以用試驗(yàn)化合物進(jìn)行細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性的其它研究,而且,這些研究為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知。
本發(fā)明包括,但不限于下面的實(shí)施例,在300MHz下,用BrukerAM300光譜儀記錄核磁共振光譜。CDCl3是氘氯仿,DMSO-d6是六氘二甲基亞砜,而CD3OD是四氘甲醇?;瘜W(xué)變化表示以每百萬分之幾份數(shù)表示,是根據(jù)內(nèi)標(biāo)四甲基硅烷測(cè)定的。NMR數(shù)據(jù)的縮寫如下s=單峰,d=雙峰,t=三峰,q=四峰,m=多峰,dd=雙雙峰,dt=雙三峰,app=明顯,br=寬。J表示以赫茲計(jì)算的NMR偶聯(lián)常數(shù)。在Perkin-Elmer683紅外線光譜儀上記錄連續(xù)的紅外(IR)光譜,并在NicoletImpact400D紅外光譜儀上記錄Fourier轉(zhuǎn)化紅外(FTIR)光譜。用過渡模式記錄IR和FTIR光譜,而波帶的位置以波數(shù)的倒數(shù)形式表示(cm-1)。在VG70FE,PGSyxAPIIII,或VGZABHF儀上測(cè)定質(zhì)譜,使用快速原子轟擊(FAB)或電子噴射(ES)離子化技術(shù)。元素分析是用Perkin-Elmer240C元素分析儀進(jìn)行的。熔點(diǎn)是在Thomas-Hoover熔點(diǎn)裝置上測(cè)定的,并且不進(jìn)行修正。所有溫度均以攝氏度表示。
將Analtech SILICA Gel GF和E.Merek SILICA Gel60F-254薄層板用于薄層層析。在E.Merck Kieselge160(230-400目)硅膠上進(jìn)行快速和重力層析。在Rainin或Beckman層析儀上進(jìn)行分析和制備HPLC。ODS表示十八烷基甲硅烷基衍生的硅膠層析支持物。5μApex-ODS表示十八烷基甲硅烷基衍生的硅膠層析支持物,其公稱粒度為5μ,是由Jones色譜公司生產(chǎn)的,廠址為Littleton,克羅拉多。YMC ODS-AQ是ODS層析支持物,并且是YMC公司的注冊(cè)商標(biāo),產(chǎn)地為Kyoto,日本。PRP-1是聚合(苯乙烯二乙烯苯)層析支持物,它是Hamilton公司的注冊(cè)商標(biāo),產(chǎn)地為Reno,Nevada。Celite是過濾器輔助裝置,由酸洗硅藻土制成,并且是Manville公司的注冊(cè)商標(biāo),產(chǎn)地為丹佛,科羅拉多。
例1二[2-(4-苯基-5-甲基)噻唑基]胺氫溴酸MS(ES)m/e 363.7[M+H]+1H NMR(300MHz,DMSO-d) 7.74(d,J=10Hz,4H),7.52(t,J=6Hz,4H),7.39(t,J=11Hz,2H).
例2二[2-(4-(2-吡啶基)噻唑基]胺二氫溴酸MS(ES)m/e337.7[M+H]+1H NMR(300MHz,DMSO-d) 8.71(d,J=3Hz,2H),8.23(m,4H),8.05(s,2H),7.59(t,J=6Hz,2H)例3二[2-[4-(3-吡啶基)噻唑基)胺三氟乙酸MS(ES)m/e337.7[M+H]+1H NMR(300MHz,DMSO-d) 9.33(s,2H),9.04(d,J=10Hz,2H),8.75(d,J=5Hz,2H),8.08(t,J=11Hz,2H),7.88(s,2H)例4N,N-二(5(3,4-二氯苯)-2-噻唑基)胺二氫溴酸1H NMR(300MHz,DMSO-d) 8.33(s,1H),8.18(s,2H),7.94(d,J=8.2Hz,2H),7.82(s,2H),7.73(d,J=8.2Hz,2H).
例51,3-二[4-(3-吡啶基)-2-噻唑基氨基]苯二氫溴酸MS(ES)m/e428.8[M+H)+1H NMR(300MHz,DMSO-d) 10.44(s,2H),9.17(d,J=1.7Hz,2H),8.47(dd,J=1.7,4.7Hz,2H),8.23-8.29(m,4H),7.56(s.2H),7.39(dd,J=5.0,8.0Hz),7.32(s,2H).
用于本發(fā)明合物的藥用制劑可以各種形式制備,并含有各種賦形劑。所述制劑的例子如下例6吸入式制劑從一個(gè)定量吸入器將式(Ⅰ)化合物(1-100毫克)氣溶膠化,每次使用時(shí)輸送所需量的藥物。
例7片狀制劑片劑/成分 每片1.活性成分40mg(式(Ⅰ)化合物)2.玉米淀粉20mg3.藻酸20mg
4.藻酸鈉 20mg5.硬脂酸鎂 1.3mg片劑的制備方法在合適的攪拌器/混合器中將成分1、2、3和4混合。分批向該混合物中加入足量的水,并在每次加水之后小心混合,直到該混合物的團(tuán)塊稠度使其能夠轉(zhuǎn)化成濕的顆粒。通過讓所述濕團(tuán)塊通過具有8號(hào)網(wǎng)眼(2.38mm)的篩震動(dòng)造粒機(jī)將其轉(zhuǎn)變成顆粒。然后在140°F(60℃)的烘箱中將所述濕顆粒烘干直到干燥為止。用5號(hào)成分對(duì)干燥的顆粒進(jìn)行潤滑,并將潤滑過的顆粒放在合適的壓片機(jī)上壓縮。
例8腸胃外制劑將合適量的式(Ⅰ)化合物溶解在聚乙二醇中并加熱制備用于腸胃外給藥的藥用組合物,然后對(duì)該溶液進(jìn)行稀釋以用于注射(至100毫升)。然后通過0.22微米的濾膜過濾對(duì)該溶液進(jìn)行消毒,并密封在無菌容器中。
本說明書所引用的所有文獻(xiàn),包括,但不限于專利和專利申請(qǐng),都被收作本文的參考文獻(xiàn),就如同每一份文件被專門和分別指明收作本文的參考文獻(xiàn)一樣。
權(quán)利要求
1.一種如下面式(Ⅰ)所示的化合物 其中A表示共價(jià)鍵,或1,2、1,3或1,4-二取代芳香胺環(huán),選自下列一組 其中R獨(dú)立地選自H、OMe、Cl、Br、F、NO2和CN;n是1-4的整數(shù);每一個(gè)X獨(dú)立地選自H、Br、CH3、NO2、CN和NR1R2;每一個(gè)Ar各自是視需要取代的苯基或視需要取代的五或六員雜環(huán),該雜環(huán)含有選自N、O和S的一個(gè)或多個(gè)雜原子;和R1和R2各自是H或C1-4烷基,分支的或環(huán)狀的,視需要含有O或N。
2.如權(quán)利要求1的化合物,選自下列一組二[2-(4-苯基-5-甲基)噻唑基]胺,二[2-(4-(2-吡啶基)噻唑基]胺,二[2-[4-(3-吡啶基)噻唑基)胺,N,N-二(5(3,4-二氯苯基)-2-噻唑基)胺,N,N-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基)胺,1,4-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基氨基)苯,1,3-二[4-(3-吡啶基)-2-噻唑基氨基]苯,1,4-二[4-氟苯基-2-噻唑基氨基]苯;和1,4-二(4-(4-甲氧基苯基)-2-噻唑基氨基)苯。
3.如權(quán)利要求2的化合物,選自下列一組二[2-(4-苯基-5-甲基)噻唑基]胺,1,4-二(4-(4-甲氧基苯基)-2-噻唑基氨基)苯,N,N-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基)胺,1,4-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基氨基)苯,1,4-二[4-氟苯基-2-噻唑基氨基]苯,二[2-(4-(2-吡啶基)噻唑基]胺,和二[2-[4-(3-吡啶基)噻唑基)胺。
4.如權(quán)利要求3的化合物,選自下列一組二[2-(4-苯基-5-甲基)噻唑基]胺,1,4-二(4-(4-甲氧基苯基)-2-噻唑基氨基)苯,N,N-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基)胺,和1,4-二(4-(4′-聯(lián)苯基)-2-噻唑基氨基)苯氫溴化物。
5.一種拮抗myt1激酶受體的方法,該方法包括給需要治療的對(duì)象施用有效量的如權(quán)利要求1所述的化合物。
6.一種治療選自下列疾病或病癥的方法白血病、固體腫瘤癌、轉(zhuǎn)移癌、軟組織癌、腦癌、食道癌、胃癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、膀胱癌、骨癌、前列腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、睪丸癌、腎癌、頭癌和頸癌、慢性炎性增殖疾病,增殖性心血管疾病,增殖性視覺疾病,和良性過度增殖病,該方法包括給需要治療的對(duì)象施用有效量的如權(quán)利要求1所述的化合物。
7.如權(quán)利要求4的方法,其中,所治療的疾病或病癥選自下列一組牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病和血管瘤。
全文摘要
提供了新型myt1激酶受體拮抗劑以及使用該拮抗劑的方法。
文檔編號(hào)C07D417/04GK1322719SQ00108199
公開日2001年11月21日 申請(qǐng)日期2000年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月10日
發(fā)明者M·A·拉戈 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司