專利名稱：巨噬細(xì)胞清除劑受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
在美國每年有超過一百萬人死于心血管疾病。動脈粥樣硬化是導(dǎo)致冠狀心臟病的主要原因，并在西方社會是非事故死亡的首要原因。由于防止動脈粥樣硬化需要大量的治療藥物，至今，在病因?qū)W定義和潛在的動脈粥樣硬化的治療和在其結(jié)果方面(包括心肌梗塞、絞痛、器官衰竭和發(fā)作)都作了大量工作。除了這些努力外，還存在許多未解決的問題，包括怎樣和什么時候動脈粥樣硬化損害開始威脅生命，最佳干預(yù)點和怎樣檢查和監(jiān)測損傷的發(fā)展。
已廣泛認(rèn)同有助于動脈粥樣硬化的多種危險因素包括高血壓、總血漿膽固醇升高、高水平低密度脂蛋白(“LDL”)膽甾醇、低水平高密度脂蛋白(“HDL”)膽甾醇、糖尿病、過度肥胖和吸煙。至今，動脈粥樣硬化的治療僅僅就集中在治療升高的膽甾醇和改善類脂水平為主要目的的治療和研究上。
但是，最近的研究顯示有40％的死亡是由于男性心血管疾病患者的總膽甾醇的水平低于220mg/dl。因此，顯然研究的重點就轉(zhuǎn)向類脂的降低。實際上，僅30％的動脈粥樣硬化患者的類脂水平升高，這顯示還存在其它的致病因素。因此，對于進(jìn)一步的治療和預(yù)防措施的邏輯學(xué)方案應(yīng)包括多學(xué)科的方法，包含減肥、抑制HMG-CoA還原酶和直接作用于斑的生長和牢固度的新療法。
動脈粥樣硬化的最初損傷是脂肪條痕，其由膽甾醇酯的升高引起，其由在巨噬細(xì)胞衍生的泡沫細(xì)胞內(nèi)的類脂小滴養(yǎng)護(hù)。巨噬細(xì)胞減少-調(diào)節(jié)它們的LDL受體和代替mRNA的表達(dá)并經(jīng)歷改性LDL新受體的新蛋白的合成。此受體識別所有低密度脂蛋白改性形式并已知為巨噬細(xì)胞清除劑受體(“MSR”)。如果巨噬細(xì)胞在存在于持續(xù)產(chǎn)生改性LDL環(huán)境中，將造成膽甾醇酯類脂小滴的積累并積累至由于類脂的毒性使巨噬細(xì)胞死亡。類脂釋放后形成動脈粥樣硬化損傷的非細(xì)胞壞死核。接著是成纖維細(xì)胞的募集。血管平滑肌細(xì)胞和循環(huán)單核細(xì)胞和T-淋巴細(xì)胞完成炎性反應(yīng)并形成成熟的動脈粥樣硬化斑。巨噬細(xì)胞衍生的泡沫細(xì)胞濃縮于斑的肩部，在那里它們分泌的蛋白酶和膠原酶可以引起斑破裂，并導(dǎo)致致命的血栓。
斑的消退、最初動力學(xué)平衡功能、進(jìn)展、穩(wěn)定和斑組織的清除，在人和多種動物模型中都已明確地證實。關(guān)于非人靈長動物的復(fù)合消退研究顯示當(dāng)停止動脈粥樣硬化的食物刺激或起動藥物治療方案，甚至在一段時間內(nèi)也有相對嚴(yán)重的損傷退化。
使用MSR抑制劑抑制巨噬細(xì)胞衍生的泡沫細(xì)胞中類脂的聚集，預(yù)期可以防止斑的最初形成，延緩斑的發(fā)展和通過“逆轉(zhuǎn)膽固醇運輸”至受體HDL的方法起動斑的退化。因此，MSR拮抗劑提供治療例如動脈粥樣硬化、冠狀動脈疾病、腎病、血栓形成、凝血所致局部缺血、發(fā)作、心肌梗塞、器官移植、器官衰竭和血膽甾醇過多的心血管疾病的藥物療法的唯一途徑。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及通式(I)的亞磺酰氨基苯甲酰苯胺化合物和它們作為巨噬細(xì)胞清除劑受體(“MSR”)拮抗劑的用途，其對于多種心血管疾病包括但不限于動脈粥樣硬化、冠狀心臟病、腎病、血栓形成、凝血所致局部缺血、發(fā)作、心肌梗塞、器官移植、器官衰竭和膽甾醇過多的心血管疾病的治療是有用的。
本發(fā)明還進(jìn)一步提供了動物包括人的巨噬細(xì)胞清除劑受體的拮抗方法，包括按下述方法給需要治療的動物服用有效量的通式(I)的化合物。
本發(fā)明還進(jìn)一步提供了抑制在巨噬細(xì)胞衍生的泡沫細(xì)胞內(nèi)的類脂積累。
發(fā)明詳述本發(fā)明的化合物選自通式(I) 其中R1和R2獨立地選自含氫、烷基、鏈烯基、芳烷基、酰基、芳酰基、鹵代烷基、鹵代、羧基、烷氧羰基、氨基甲?；?、烷基氨基甲?；?、芳基氨基甲?；?、氰基、烷氧基、羥基、苯偶氮基、氨基、硝基、烷基氨基、芳基氨基、芳基烷基氨基、酰氨基、芳酰氨基、烷硫基、芳基烷硫基、芳硫基、烷基亞磺?；?、芳基亞磺?；?、芳烷基亞磺?；?、烷基磺?；⒎蓟酋；?、芳烷基磺?；被酋；⒎蓟鶃喕酋０被屯榛鶃喕酋０被?；或R1部分代表形成苯并噻吩、萘、喹啉或環(huán)被取代的異喹啉的稠環(huán)；或(R1)n和環(huán)取代基代表雜環(huán)，選自噻吩、呋喃、吡啶、嘧啶和吡嗪和其苯并類似物；和R3獨立地選自烷基、鹵代烷基、R1芳基和R1芳烷基，和R1取代的雜環(huán)基選自噻吩、呋喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、咪唑和噻唑和其苯并類似物；或R3和環(huán)的取代基代表R1取代的選自噻吩、呋喃、吡啶、嘧啶和吡嗪和其苯并類似物的雜環(huán)。
本文使用的術(shù)語“烷基”代表任意取代以碳-碳單鍵相連的烴基。優(yōu)選的烷基取代基是本文給出的。烷基烴基可以是直鏈、支鏈或環(huán)狀的、飽和或不飽和的。
本文所用術(shù)語“芳基”代表任意取代的至少一個環(huán)具有共軛π-電子體系的芳香基，包括多至兩個共軛或稠合環(huán)體系?！胺蓟卑梢匀我馊〈奶辑h(huán)芳基、雜環(huán)芳基和聯(lián)芳基基團。優(yōu)選的芳基取代基在文中給出。
本發(fā)明的化合物可以含一個或多個手性碳原子并可以存在外消旋和任意的活性形式。所有這些化合物和預(yù)期的非對映異構(gòu)體都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物選自以下N-苯基-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(3，4-二氯苯基)-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(4-氯苯基)-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(3-三氟甲基苯基)-2-(5-氯-2-噻吩基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-氯-N-(4-氯苯基)-2-(5-氯-2-噻吩基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-(4-甲氧基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-苯基-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(4-氯苯基-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-苯基-2-(4-甲氧基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(4-氯苯基-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)-4-甲氧基苯甲酰胺，N-(3-氯-4-甲氧基苯基-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)-4-甲氧基苯甲酰胺，N-(3，4-二氯苯基)-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)-5-甲氧基苯甲酰胺，N-(4-氯苯基)-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)-5-甲氧基苯甲酰胺，5-氯-N-(4-氯苯基)-2-(4-氯苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-氯-N-(4-氯苯基)-2-(3，3，3-三氟乙基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(3，4-二氯苯基)-2-(苯基亞磺酰氨基)-5-甲氧基苯甲酰胺，2-(4-氯苯基亞磺酰氨基)-N-(4-乙氧基羰基苯基)苯甲酰胺，5-溴-N-苯基-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-苯基-2-苯基亞磺酰氨基苯甲酰胺，5-溴-N-苯基-2-(5-氯-2-噻吩基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-氯苯基-2-(5-氯-2-噻吩基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-苯基-2-(4-甲氧基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-氯苯基)-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-硝基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(5-二甲基氨基-1-萘基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3，4-二氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(正丁基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(芐基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(8-異喹啉基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2，1，3-苯并噻二唑-4-基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-氯苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-4-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-2-甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，和5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2，4，6-三甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-碘代苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯丙基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(4-溴苯基)-5-氯-2-(4-三氟甲氧基苯基)苯甲酰胺，5-溴-N-(3-三氟甲基苯基)-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-氯苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-4-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-2-甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2，4，6-三甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3，4-二甲氧基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-苯偶氮基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2-甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2-萘基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-苯基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯丙基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2-苯基乙烯基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-碘苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，和5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-叔丁基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物選自5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-氯苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-4-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-2-甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，和5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2，4，6-三甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺。
在堿性基團存在時可以使用的藥物可接受的鹽包括酸加成鹽，例如包括硫酸鹽、鹽酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、磷酸鹽、氨基磺酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、環(huán)己基氨基磺酸鹽和奎尼酸鹽。藥物可接受的鹽可以從例如鹽酸、馬來酸、硫酸、磷酸、氨基磺酸、醋酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環(huán)己基氨基磺酸、富馬酸和奎尼酸制得。
當(dāng)酸性官能團例如羧酸或酚存在時，藥物可接受的鹽也包括堿加成鹽，例如包括與benzathine、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、麥格魯明、普魯卡因、鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、銨、烷基胺和鋅形成的鹽。
本發(fā)明提供的上式(I)的化合物可以通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備。制備優(yōu)選化合物的全部方法都在本文描述并可以按描述的方法進(jìn)行。以下的實施例是為了解釋特定的化合物的合成。本文所描述的方案僅作為說明，本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員可以方便地制得本發(fā)明的其它化合物。方案1 方案2
將在150ml二噁烷中12.1g(50mmol)5-溴靛紅酸酐、9.4g(55mmol)4-溴苯胺和0.2g(5mmol)NaOH混合物回流18小時。將反應(yīng)混合物冷卻和過濾，真空濃縮。加入95％乙醇將殘余物結(jié)晶。過濾收集固體并用乙醇洗滌。樣品通過薄層色譜提純(硅膠，15％乙酸乙酯的正己烷溶液)，進(jìn)行NMR、MS和元素分析，為預(yù)期產(chǎn)物。
以5-氯靛紅酸酐和4-溴苯胺為起始物，按類似的操作可得到N-(4-溴苯基)-2-氨基-5-氯苯甲酰胺，進(jìn)行NMR、MS和元素分析，為預(yù)期產(chǎn)物。
以實施例2和3類似的操作法，以5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-氯苯基磺酰氨基)苯甲酰胺與以下磺酰氯反應(yīng)得到產(chǎn)物3-氯苯基-、4-氯苯基-、3，4-二氯苯基-、3-氯-4-氟-、2-氟苯基-、2，5-二甲氧基苯基-、3，4-二甲氧基苯基-、4-正丁氧基苯基-、2-三氟甲基苯基-、4-苯基偶氮苯基-、4-三氟甲基苯基-、3，5--三氟甲基苯基-、2-甲基苯基-、2，4，6-三甲基苯基-、2-萘基-、甲基-、三氟甲基-、2-噻吩基-、5-氯-2-噻吩基-、4-聯(lián)苯基-、3-氯丙基-、4-氰基苯基-、3，5-二氯苯基-、苯乙烯基-、2-甲氧基羰基-3-噻吩基-、4-碘苯基-、2，6-二氯苯基-、4-叔丁基苯基-和2，2，2-三氟乙基-。產(chǎn)物具有令人滿意的HPLC-MS分析結(jié)果。
以1.09g(8.6mmol)草酰氯和1滴DMF處理0.5g(1.7mmol)的此酸的25ml二氯甲烷懸浮液。4.5小時后，加入50ml甲苯，然后真空濃縮。將殘余物溶解在50ml甲苯中，并以3-氯-對茴香胺(0.33g(1.89mmol))和8g(8mmol)三乙胺處理，并放置18小時。以稀鹽酸稀釋反應(yīng)混合物并過濾收集固體，用水和甲苯洗滌，得到預(yù)期的產(chǎn)物結(jié)晶，mp 181-182℃，軟化173℃。
通常以N-磺?；彴被郊姿岷投喾N胺為起始物，以同樣的操作可制得多種N-取代的苯甲酰胺。
以適合的方式保護(hù)任何化學(xué)官能團，以上述類似的方法和在實驗部分的描述可以制得其余的通式(I)化合物。
為了使用通式(I)化合物或其可藥用鹽治療人和其它哺乳動物，一般通過標(biāo)準(zhǔn)制藥實踐制成藥物組合物。
本發(fā)明化合物可以通過包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、口服、局部(透皮)、或通過粘膜等不同給藥途徑給藥。對于多種給藥途徑，優(yōu)選口服給藥。對于口服給藥，例如化合物可以制成常用的口服劑型如膠囊、片劑和液體制劑如糖漿劑、醑劑和濃縮液滴。
另外，可以使用注射液(胃腸外給藥)，例如肌肉、靜脈、腹膜內(nèi)和皮下注射。對于注射液，本發(fā)明的化合物制成液體溶液優(yōu)選生理配伍的緩沖液或溶液，例如鹽溶液、Hank’溶液或Ringer’溶液。此外，化合物可以固體形式和在使用前再溶解或再懸浮。也可制成凍干形式。
系統(tǒng)給藥也可以通過透粘膜或透皮形式給藥。對于透粘膜或透皮形式給藥，滲透劑適于作為此制劑的滲透載體。這種滲透劑一般是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，包括例如對于透粘膜給藥，膽汁鹽和梭鏈孢酸衍生物。此外，也可以使用洗滌劑幫助滲透。透粘膜給藥，例如可以通過噴鼻、肛門栓或陰道栓給藥。
對于局部給藥，本發(fā)明化合物可以一般本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的軟膏、藥膏、膠凝劑或乳油劑形式給藥。
各種化合物的給藥量可以通過標(biāo)準(zhǔn)方法測定計算因素例如化合物的IC50、EC50、化合物的生物半衰期，患者的年齡、性別和體重和患者的疾病來給藥。這些和其它因素的重要性是本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員已知的。
給藥量也取決于給藥途徑和口服生物利用度。例如，化合物的口服生物利用度低，就相對增加給藥量。
優(yōu)選組合物的單位劑量形式。對于口服給藥，例如可以片劑或膠囊給藥，對于鼻腔給藥，可以定量的噴鼻劑給藥，對于透皮制劑，可以局部制劑或貼劑給藥和經(jīng)皮膚給藥，可以通過頰帖給藥。在此情況下，以單劑量給藥。
口服給藥的每個單劑量一般含0.01-500mg/kg，優(yōu)選0.1-50mg/kg的通式(I)化合物或其可藥用鹽，以游離堿計算。通式(I)化合物經(jīng)胃腸外、鼻、口服吸入、透粘膜或經(jīng)皮途徑的日劑量為0.01mg-100mg/kg。局部制劑含0.01-5.0％的通式(I)化合物?；钚越M分每天給藥1-6次，優(yōu)選一次，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易的獲得藥物所需的充分活性。
本文所用術(shù)語疾病的“治療”包括但不限于防止、延緩和預(yù)防疾病。
本申請描述的MSR受體在最近的分組中被定為SR-A組，其存在兩種形式，A-I型和A-II型。它們是由不同的exon連接的單基因產(chǎn)生的。在本申請中術(shù)語“MSR”和“SR-A”是可互換的。
包括動脈粥樣硬化、冠狀動脈心臟病、腎病、血栓形成、凝血所致局部缺血、發(fā)作、心肌炎、器官移植、器官衰竭和膽甾醇過多疾病和紊亂可以在受影響的細(xì)胞上加以治療或預(yù)防。
通式(I)組合物和它們的可藥用鹽在以口服制劑給藥時可制成糖漿劑、片劑、膠囊劑和錠劑。糖漿劑一般包含在例如乙醇、花生油、橄欖油、甘油或水和調(diào)味劑或著色劑的液體載體中的化合物或鹽的懸浮液或溶液。對于藥物組合物的片劑形式，可以使用制備固體制劑慣用的任意可藥用載體。載體實例包括硬脂酸鎂、石膏粉、滑石、明膠、阿拉伯膠、硬脂酸、乳糖和蔗糖。組合物的膠囊形式，任意慣用的制膠囊方法都適用，例如將上述載體填充入硬明膠膠囊殼中。對于組合物的軟膠囊殼形式，可以考慮使用制備分散劑或懸浮液慣用的藥用載體，例如樹膠溶液、纖維素、硅酸鹽或油，并填裝在軟明膠膠囊殼中。
典型的胃腸外給藥組合物包括在無菌水溶液或任意含胃腸外給藥可接受的油例如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、花生油或芝麻油非水載體中的化合物或鹽的溶液或懸浮液。
典型的吸入組合物是溶液、懸浮液或乳劑形式，可以干粉或用慣用的推進(jìn)劑如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷制成的氣霧劑形式給藥。
典型的栓劑包含通式(I)化合物或其可藥用鹽，其以此方式與粘合劑和/或潤滑劑共同給藥是有活性的。粘合劑和/或潤滑劑的實例包括聚乙二醇、明膠、可可酯或其它低熔點的植物蠟或脂肪或它們合成類似物。
典型的經(jīng)皮和透皮制劑包括慣用的水溶液或非水賦形劑。例如乳膏、油、洗劑或漿糊或含藥物的膏藥、貼劑或膜。
優(yōu)選組合物以單劑量形式使用，例如片劑、膠囊或可測量的噴霧劑，患者可以單劑量給藥。
按本發(fā)明服用本發(fā)明化合物時，沒有不可接受的毒副作用。
通式(I)化合物的生物活性通過以下試驗測定。
MSR活性測定，降解和粘合/內(nèi)在化采用Goldstein等“Receptor-mediated Endocytosis of Low-density Lipoproteinin cultured Cells，”酶方法，98241-260頁(1983)，將其全部引入本文作為參考。簡言之，將MSR I或II轉(zhuǎn)移的293細(xì)胞于在24井皿中，以2mM谷氨酰胺、10％FCS和0.4mg/ml遺傳霉素接種于Eagle’s最小必需介質(zhì)中的105細(xì)胞/ml/井中。2天后，以500μl含2mg/ml BSA和5μg/ml 125[I]-AcLDL(碘乙?；牡兔芏戎鞍?的新鮮游離血清代替介質(zhì)，并將細(xì)胞在37℃培養(yǎng)5小時。當(dāng)配位體降解適合的時間后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至4℃冷室中。將上清液轉(zhuǎn)移至三氯醋酸中，并將混合物離心。用氯仿萃取上清液以分離125[I]-AcLDL的降解產(chǎn)物125[I]-單碘酪氨酸，以此來計算降解活性。為了測定締合配位體的細(xì)胞，洗滌單層細(xì)胞并在4℃，以冰冷卻的含150mM NaCl、50mM Tris-HCl和2mg/ml BSA的緩沖液“A”(pH 7.4)培養(yǎng)，以除去非特定鍵。以1ml迅速洗滌細(xì)胞3次，每次在旋渦混合器上以1ml緩沖液A培養(yǎng)10分鐘，共兩次，然后以1ml不含BSA的緩沖液A迅速洗滌兩次。在抽出所有的洗滌液后，細(xì)胞置0.1N NaOH中，并轉(zhuǎn)移至記數(shù)瓶中進(jìn)行粘合/攝取測定和接著測定蛋白。(Pierec BCA蛋白測定)。目前的IC50活性，在降解測定中＜50um，而在粘合/攝取測定中＜100um。
熒光化合物DiI-AcLDL(1，1’-二十八烷基-3，3，3’，3-四甲基靛羰花青高氯酸鹽標(biāo)記的LDL)也顯示出作為巨噬細(xì)胞清除劑受體活性測定的有用工具(Freeman等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，884931-4935(1991)；Penman等，.J.Biol.Chem.，26623985-23993(1991))。我們也利用感染的HEK 293細(xì)胞攝取DiI-AcLDL來測定MSR拮抗作用。雖然對于所有研究，SR-AI和SR-AII都顯示相同的活性，但對于大多數(shù)測定，以SR-AI來感染HEK 293細(xì)胞。簡單地說，將HEK 293細(xì)胞以2×104細(xì)胞/井接種在含2mM谷氨酰胺、10％FCS和0.4mg/ml遺傳霉素的96井皿中。按標(biāo)準(zhǔn)化方案測定，試驗是在含2mg/ml牛血清白蛋白的游離EMEM的血清中進(jìn)行。在37℃下，在不存在或存在抑制劑(四倍井)下將融合的細(xì)胞以DiI-AcLDL(最終濃度2ug/ml)培養(yǎng)4小時。抽出溶液后以Lock’s緩沖液洗滌，結(jié)果以熒光板讀數(shù)儀(530nm exc/590nm em)定量。
在本說明書中引用的所有公開出版物，包括但不限于專利和專利申請都可引入本文作為參考。
權(quán)利要求
1.選自以下的化合物N-苯基-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(3，4-二氯苯基)-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(4-氯苯基)-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(3-三氟甲基苯基)-2-(5-氯-2-噻吩基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-氯-N-(4-氯苯基)-2-(5-氯-2-噻吩基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-(4-甲氧基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-苯基-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(4-氯苯基-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-苯基-2-(4-甲氧基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(4-氯苯基-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)-4-甲氧基苯甲酰胺，N-(3-氯-4-甲氧基苯基-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)-4-甲氧基苯甲酰胺，N-(3，4-二氯苯基)-2-(2-氟甲基苯基亞磺酰氨基)-5-甲氧基苯甲酰胺，N-(4-氯苯基)-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)-5-甲氧基苯甲酰胺，5-氯-N-(4-氯苯基)-2-(4-氯苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-氯-N-(4-氯苯基)-2-(3，3，3-三氟乙基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(3，4-二氯苯基)-2-(苯基亞磺酰氨基)-5-甲氧基苯甲酰胺，2-(4-氯苯基亞磺酰氨基)-N-(4-乙氧基羰基苯基)苯甲酰胺，5-溴-N-苯基-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-苯基-2-苯基亞磺酰氨基苯甲酰胺，5-溴-N-苯基-2-(5-氯-2-噻吩基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-氯苯基-2-(5-氯-2-噻吩基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-苯基-2-(4-甲氧基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-氯苯基)-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-硝基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(5-二甲基氨基-1-萘基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3，4-二氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(正丁基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(芐基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(8-異喹啉基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2，1，3-苯并噻二唑-4-基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-氯苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-4-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-2-甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，和5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2，4，6-三甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-碘代苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯丙基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，N-(4-溴苯基)-5-氯-2-(4-三氟甲氧基苯基)苯甲酰胺，5-溴-N-(3-三氟甲基苯基)-2-(3-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-氯苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-4-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-2-甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2，4，6-三甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3，4-二甲氧基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-苯偶氮基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-三氟甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2-甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2-萘基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-苯基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯丙基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2-苯基乙烯基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-碘苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，和5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-叔丁基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物選自以下5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(4-氯苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-4-氟苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(3-氯-2-甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺，和5-溴-N-(4-溴苯基)-2-(2，4，6-三甲基苯基亞磺酰氨基)苯甲酰胺。
3.含權(quán)利要求1化合物和其可藥用載體的藥物組合物。
4.治療心血管疾病或病癥的方法，包括給予需治療的主體治療有效量的通式(I)化合物 其中R1和R2獨立地選自含氫、烷基、鏈烯基、芳烷基、?；?、芳?；Ⅺu代烷基、鹵代、羧基、烷氧羰基、氨基甲?；⑼榛被柞；?、芳基氨基甲?；?、氰基、烷氧基、羥基、苯偶氮基、氨基、硝基、烷基氨基、芳基氨基、芳基烷基氨基、酰氨基、芳酰氨基、烷硫基、芳基烷硫基、芳硫基、烷基亞磺?；⒎蓟鶃喕酋；?、芳烷基亞磺?；⑼榛酋；⒎蓟酋；⒎纪榛酋；被酋；?、芳基亞磺酰氨基和烷基亞磺酰氨基；或R1部分代表形成苯并噻吩、萘、喹啉或環(huán)被取代的異喹啉的稠環(huán)；或(R1)n和環(huán)取代基代表雜環(huán)，選自噻吩、呋喃、吡啶、嘧啶和吡嗪和其苯并類似物；和R3獨立地選自烷基、鹵代烷基、R1芳基和R1芳烷基，和R1取代的雜環(huán)基選自噻吩、呋喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、咪唑和噻唑和其苯并類似物；或R3和環(huán)的取代基代表R1取代的選自噻吩、呋喃、吡啶、嘧啶和吡嗪和其苯并類似物的雜環(huán)。
5.權(quán)利要求4的方法，其中疾病或病癥選自動脈粥樣硬化、冠狀動脈疾病、腎病、血栓形成、凝血所致局部缺血、發(fā)作、心肌梗塞、器官移植、器官衰竭和膽甾醇過多的心血管疾病。
6.權(quán)利要求5的方法，其中要治療的疾病和病癥是動脈粥樣硬化。
7.拮抗巨噬細(xì)胞清除劑受體的方法，包括給予要治療的主體治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
8.通過給需要治療的主體治療有效量的權(quán)利要求1化合物來抑制巨噬細(xì)胞衍生的泡沫細(xì)胞內(nèi)類脂積累的方法。
全文摘要
提供巨噬細(xì)胞清除劑受體拮抗劑。治療心血管疾病的方法,包括給予本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的化合物抑制巨噬細(xì)胞衍生的泡沫細(xì)胞內(nèi)的類脂積累。
文檔編號C07D285/14GK1358062SQ00809389
公開日2002年7月10日 申請日期2000年6月21日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月24日
發(fā)明者J·溫斯托克, R·G·弗蘭茨, D·E·蓋塔諾普洛斯 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司