專利名稱：新化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在哺乳動(dòng)物中治療其中發(fā)生不適宜的、過度或不需要的血管生成和/或其中出現(xiàn)過度的Tie2受體活性的疾病。
背景技術(shù)：
慢性增殖性疾病經(jīng)常伴隨發(fā)生極度的血管生成，這種血管生成能夠促進(jìn)或維持炎性和/或增殖狀態(tài)，或者它可導(dǎo)致通過血管侵襲增殖造成的組織破壞。(Folkman，EXS 791-8，1997；Folkman，NatureMedicine 127-31，1995；Folkman和Shing，J.Biol.Chem.26710931，1992)。
血管生成一般用于描述新的或替代血管的發(fā)生或新生血管形成。它是必要和生理的正常過程，通過該過程得以在胚胎中建立脈管結(jié)構(gòu)。通常，在除排卵、月經(jīng)和傷口愈合部位以外的大多數(shù)正常成人組織中，血管生成并不發(fā)生。然而，許多疾病的特征在于持續(xù)的和不受控制的血管生成。例如，在關(guān)節(jié)炎中，新的毛細(xì)血管侵襲關(guān)節(jié)并破壞軟骨(Colville-Nash和Scott，Ann.Rheum.Dis.，51，919，1992)。在糖尿病(和在許多不同的眼疾)中，新生血管侵襲視網(wǎng)膜黃斑或視網(wǎng)膜或其它的眼結(jié)構(gòu)，并可引起視覺缺失(Brooks等，Cell，79，1157，1994)。動(dòng)脈粥樣硬化的過程與血管生成有聯(lián)系(Kahlon等，Can.J.Cardiol.8，60，1992)。已發(fā)現(xiàn)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移是依賴血管生成的(Folkman，Cancer Biol，3，65，1992；Denekamp，Br.J.Rad.66181，1993；Fidler和Ellis，Cell，79，185，1994)。
為鑒定和開發(fā)血管生成抑制劑，通過研究已完成血管生成在主要疾病中參與的認(rèn)識(shí)。這些抑制劑通常根據(jù)對(duì)如下血管生成級(jí)聯(lián)中分開的靶的應(yīng)答分類例如內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)血管生成信號(hào)活化、裂解酶的合成和釋放、內(nèi)皮細(xì)胞遷移、內(nèi)皮細(xì)胞增殖和毛細(xì)血管形成。因此，血管生成發(fā)生在多個(gè)階段，發(fā)現(xiàn)和開發(fā)在多個(gè)這樣的階段起阻斷血管生成作用的化合物的嘗試正在進(jìn)行中。
有出版物描述了血管生成抑制劑，它們通過不同的機(jī)制發(fā)揮作用，在以下疾病中是有益的，包括例如癌癥和腫瘤轉(zhuǎn)移(O’Reilly等，Cell，79，315，1994 Ingber等，Nature，348555，1990)、眼部疾病(Friedlander等，Science，270，1500，1995)、關(guān)節(jié)炎(Peacock等，Exp.Med.175，1135，1992；Peacock等，Cell.Immun.160，178，1995)和血管瘤(Taraboletti等，J.Natl.Cancer Inst.87293，1995)。
血管生成信號(hào)產(chǎn)生于特異性配體與其受體的相互作用。Tie1和Tie2受體為單跨膜酪氨酸激酶受體(Tie代表具有免疫球蛋白(immunoglobulin)和EGF同源區(qū)的酪氨酸激酶受體(Tyrosine kinasereceptors))。最近，這兩種受體被克隆且由幾個(gè)小組給予了報(bào)道(Dumont等，Oncogene 81293-1301，1993；Partanen等，Mol.Cell Biol.121698-1707，1992；Sato等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 909355-9358，1993)。
基于Tie2受體在血管生成中的重要性，預(yù)期抑制Tie2激酶活性可中斷血管生成，提供對(duì)疾病的特異性治療作用。最近，Lin等(J.Clin.Invest.1002072-2078，1997)已表明外原性給予可溶解的Tie2受體可抑制動(dòng)物模型中的血管生成和腫瘤生長(zhǎng)。因此期待通過其它方法，例如抑制Tie2受體激酶活性抑制Tie2受體在涉及血管生成的增殖性疾病中具有治療益處。
本申請(qǐng)描述新的發(fā)現(xiàn)，即特殊結(jié)構(gòu)的化合物能夠抑制Tie2受體的激酶活性，阻斷其信號(hào)傳導(dǎo)，因此可通過抑制血管生成的信號(hào)有效用于增殖性疾病。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及新的式(I)化合物和包含式(I)化合物和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體的藥用組合物。
本發(fā)明的另一方面為式(I)化合物作為Tie2受體激酶抑制劑的用途。Tie2受體激酶抑制劑在需要它們的哺乳動(dòng)物中可用于抑制血管生成、慢性炎性或增殖性或血管生成疾病或紊亂的治療(包括預(yù)防)，這些疾病通過過度的或不適宜的血管生成引發(fā)。
新的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽由下面的結(jié)構(gòu)表示 其中V為CH或N；Ar為萘-2-基、萘-1-基、二環(huán)或三環(huán)雜芳環(huán)，其中環(huán)可任選被取代；Y為NR10R11、NR10C(Z)NR10R11、NR10C(Z)NR10C(Z)OR11、NR10COOR11或NR10SO2R11；n為0、1、2、3或4；X為O、CH2、S或NH；Z為氧或硫；R1獨(dú)立為氫、X-R4、鹵素、羥基、任選取代的C1-6烷基、任選取代的C1-6烷基亞硫酰基、CH2OR5、氨基、一或二-C1-6烷基氨基、N(R6)C(O)R7、N(R6)S(O)2R8、或任選包含另一個(gè)選自O(shè)、S和NR9的雜原子的5-7元N-雜環(huán)基環(huán)；R2和R3獨(dú)立表示任選取代的C1-6烷基，或R2和R3與它們連接的碳原子一起形成任選取代的C3-7環(huán)烷基或C5-7環(huán)烯基環(huán)，或R2和R3與它們連接的碳原子一起形成包含最多可達(dá)3個(gè)選自N、O和S的雜原子的任選取代的5-7元雜環(huán)基環(huán)；R4獨(dú)立為C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、雜芳基或雜芳基C1-6烷基部分，且其中這些部分中的任一部分可任選被取代；R5為氫、C(Z)R12或任選取代的C1-6烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-6烷基或S(O)2R8；R6為氫或C1-6烷基；R7為氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜芳基、雜芳基C1-6烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-6烷基；R8為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜芳基、雜芳基C1-6烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-6烷基；R9為氫、C1-4烷基、C3-7環(huán)烷基或芳基；R10和R12獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷基C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、雜芳基和雜芳基C1-6烷基，其中任何一個(gè)可任選被取代；和R11為氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷基C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、雜芳基或雜芳基C1-6烷基，其中任一個(gè)可任選被取代；或R10和R11與氮一起可形成任選包含另一個(gè)選自O(shè)、S或NR9的雜原子的5-7元環(huán)。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及能夠抑制Tie2激酶的新化合物，以及這些化合物在需要此種治療的哺乳動(dòng)物中治療慢性炎性疾病或增殖性疾病或血管生成的疾病中抑制血管生成的用途，所述疾病由過度的或不合適的血管生成引起。
在式(I)化合物中，V適宜為CH或N，優(yōu)選為碳。
吡啶或嘧啶環(huán)適宜獨(dú)立由R1任選獨(dú)立取代一至兩次。
R1適宜獨(dú)立為氫、X-R4、鹵素、羥基、任選取代的C1-6烷基、任選取代的C1-6烷基亞硫?；?、CH2OR5、氨基、一或二-C1-6烷基氨基、N(R6)C(O)R7、N(R6)S(O)2R8、或其中任選包含另一個(gè)選自O(shè)、S和NR9的雜原子的5-7元N-雜環(huán)基環(huán)。吡啶基或嘧啶優(yōu)選在2-位被取代。R1優(yōu)選為氫或X-R4。
X適宜為O、CH2、S或NH。X優(yōu)選為氧或氮。
R4獨(dú)立為C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、雜芳基或雜芳基C1-6烷基部分，且其中這些部分中的任一部分可任選被取代。R4優(yōu)選為任選取代的烷基、芳基或芳基烷基。
當(dāng)R4為芳基時(shí)，它優(yōu)選為任選取代的苯基。當(dāng)R4為芳基烷基時(shí)，它優(yōu)選為任選取代的芐基或苯乙基。
這些R4部分可獨(dú)立由以下基團(tuán)任選取代一或多次，優(yōu)選取代1-3次，包括鹵素、C1-4烷基例如甲基、乙基、丙基、異丙基或叔丁基，鹵代烷基例如CF3，羥基，羥基取代的C1-4烷基，C1-4烷氧基例如甲氧基或乙氧基，S(O)m烷基和S(O)m芳基(其中m為0、1或2)，C(O)OR11例如C(O)C1-6烷基或C(O)OH部分C(O)R11，OC(O)R8，O-(CH2)s-O-，如在縮酮或二氧基亞烷基橋(s為具有值1-5的數(shù)字)、氨基、一-和二-C1-6烷基取代的氨基、N(R10)C(O)R7、C(O)NR10R11、氰基、硝基或具有5-7元環(huán)且任選包含另一個(gè)選自氧、硫或NR9的雜原子的N-雜環(huán)基環(huán)、任選取代的芳基例如苯基、任選取代的芳基烷基例如芐基或苯乙基、芳氧基例如苯氧基，或芳基烷氧基例如芐氧基；這些芳基和芳基烷基部分可用鹵素、烷基、烷氧基、S(O)m烷基、氨基或一-和二-C1-6烷基取代的氨基取代。
優(yōu)選R4部分由氨基、一-或二-C1-6烷基取代的氨基或具有5-7元環(huán)且任選包含另一個(gè)選自氧、硫或NR9的雜原子的N-雜環(huán)基環(huán)取代。
R2和R3適宜獨(dú)立表示任選取代的C1-6烷基，或R2和R3與它們連接的碳原子一起形成任選取代的C3-7環(huán)烷基或C5-7環(huán)烯基環(huán)，或R2和R3與它們連接的碳原子一起形成包含最多可達(dá)3個(gè)選自N、O和S的雜原子的任選取代的5-7元雜環(huán)基環(huán)。R2和R3優(yōu)選獨(dú)立表示任選取代的C1-6烷基。
n適宜為0、1、2、3或4。n優(yōu)選為1。
Y適宜為NR10R11、NR10C(Z)NR10R11、NR10C(Z)NR10C(Z)OR11、NR10COOR11或NR10SO2R11。
R11適宜為氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷基C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、雜芳基或雜芳基C1-6烷基，其中任一個(gè)可任選被取代；或R10和R11與它們連接的氮一起形成任選包含另一個(gè)選自O(shè)、S或NR9的雜原子的5-7元雜環(huán)基環(huán)。
當(dāng)R11如在說明書中定義被任選取代時(shí)，它優(yōu)選為未取代或取代的烷基、C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷基C1-6烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、雜芳基或雜芳基C1-6烷基。烷基如果被取代，則優(yōu)選由以下基團(tuán)取代一或多次，包括鹵素例如CF3、CH2CF3、(CH2)2Cl，或(CH2)3Cl，或由C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基亞硫?；駽1-6烷基磺?；〈?；如果R11為C3-7環(huán)烷基C1-6烷基，它優(yōu)選為5或6元環(huán)，例如環(huán)己基甲基；如果R11為雜環(huán)基C1-6烷基，它優(yōu)選為嗎啉基C1-6烷基、或哌啶C1-6烷基；或者如果是雜芳基C1-6烷基部分，則優(yōu)選為任選取代的異噁唑基。
R10和R12適宜獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷基C1-6烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基，雜芳基或雜芳基C1-6烷基，其中任一個(gè)可任選被取代。R10基團(tuán)和R12部分可如在烷基術(shù)語(yǔ)中定義那樣被任選取代。
R5適宜為氫、C(Z)R12或任選取代的C1-6烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-6烷基或S(O)2R8。
R6適宜為氫或C1-6烷基。
R7適宜為氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜芳基、雜芳基C1-6烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-6烷基。
R8適宜為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜芳基、雜芳基C1-6烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-6烷基。
R9適宜為氫、C1-4烷基、C3-7環(huán)烷基或芳基。
R10和R12適宜獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜芳基或雜芳基C1-6烷基，其中任一個(gè)可任選被取代。
Z適宜為氧或硫。
Ar適宜為萘-2-基、萘-1-基、二環(huán)或三環(huán)雜芳環(huán)，所述環(huán)可在任何環(huán)上任選被取代。二環(huán)或三環(huán)雜芳環(huán)系統(tǒng)為可包含碳環(huán)的稠合環(huán)系。這樣環(huán)系的實(shí)例包括喹啉、異喹啉、苯并咪唑、苯并噻吩或苯并呋喃、苯并噁唑、苯并噻唑、二苯并呋喃、二苯并噻吩、苯并噻二唑、苯并三唑或吲哚基。
Ar環(huán)可獨(dú)立在任何環(huán)上任選被取代一或多次，優(yōu)選1-3次。適宜的取代基包括鹵素、C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、芳基C1-6烷氧基、(CR13R14)tOR12、硝基、氰基、(CR13R14)tNR10R11、(CR13R14)tNR10C(Z)R12、(CR13R14)tC(Z)NR10R11、(CR13R14)tCOR12、(CR13R14)tZC(Z)R12、(CR13R14)tC(Z)OR12、(CR13R14)tC(O)NR10R11、(CR13R14)tNR10C(Z)NR10R11、(CR13R14)tNR10C(＝NH)NR10R11、(CR13R14)tC(＝NH)-NR10R11、(CR13R14)tNR10S(O)2R8、(CR13R14)tS(O)2NR10R11、(CR13R14)tS(O)mR12、雜環(huán)基、雜芳基、雜環(huán)基C1-6烷基或雜芳基C1-6烷基。
t適宜為0或具有值1-10的整數(shù)。t優(yōu)選為0或1，更優(yōu)選為0。
R13和R14適宜獨(dú)立為氫或C1-6烷基。
Ar優(yōu)選由以下基團(tuán)取代一或多次，包括鹵代基、氰基、(CR13R14)tC(Z)NR10R11、(CR13R14)tC(Z)OR12、(CR13R14)tCOR12、(CR13R14)tS(O)mR12、(CR13R14)tOR12、鹵代C1-6烷基、C1-6烷基、(CR13R14)tNR10C(Z)R12、(CR13R14)tNR10S(O)2R8、(CR13R14)tS(O)2NR10R11、(CR13R14)tZC(Z)R12或(CR13R14)tNR10R11。
Ar環(huán)優(yōu)選由以下基團(tuán)取代一或多次，包括鹵代基、羥基、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、羥基C1-6烷基和C1-6烷氧基。更優(yōu)選取代基為C1-6烷氧基例如甲氧基、C1-6烷基例如甲基，或鹵素例如氟或氯。
Ar環(huán)優(yōu)選為萘環(huán)，更優(yōu)選為萘-2-基環(huán)。如果Ar為二環(huán)雜芳環(huán)，則它優(yōu)選為苯并噻吩或苯并呋喃環(huán)。對(duì)萘-2-基環(huán)優(yōu)選環(huán)取代位置為6-位。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“烷基”和“鏈烯基”各自或作為更大基團(tuán)例如“烷氧基”的部分時(shí)，可為包含最多可達(dá)6個(gè)碳原子的直形或分支鏈基團(tuán)，除非另外限定，包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基等。如在此定義那樣，烷基和鏈烯基可任選被取代。
在此使用的“環(huán)烷基”包括具有3-8個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)狀基團(tuán)，包括(但不限于)環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。如在此定義那樣，環(huán)烷基可任選被取代。
在此使用的“環(huán)烯基”包括具有至少一個(gè)鍵的環(huán)狀基團(tuán)，優(yōu)選5-8個(gè)碳，包括(但不限于)環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基等。如在此定義那樣，環(huán)烯基可任選被取代。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“芳基”(在其本身或其任何組合上，例如“芳烷基”或“芳氧基”)包括單環(huán)或稠合環(huán)系，每環(huán)適宜包含4-7個(gè)，優(yōu)選5或6個(gè)環(huán)原子，這些環(huán)每一個(gè)可為未取代的或獨(dú)立由例如最多可達(dá)三個(gè)取代基取代。稠合環(huán)系可包括脂環(huán)，例如飽和或部分飽和的環(huán)，且需要時(shí)僅包括一個(gè)芳環(huán)。適宜的芳基包括苯基和萘基例如1-萘基或2-萘基。除非另外指明，如在此定義那樣，芳環(huán)可任選被取代。
除非另外指明，在此使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”(在其本身或其任何組合上，例如“雜環(huán)基烷基”或“雜環(huán)基氧基”)適宜包括非芳族的、單環(huán)和稠合環(huán)，每個(gè)環(huán)適宜包含最多可達(dá)4個(gè)雜原子，每個(gè)雜原子獨(dú)立選自O(shè)、N和S，且這些環(huán)可為未取代的或獨(dú)立由例如最多可達(dá)三個(gè)取代基取代。每個(gè)雜環(huán)適宜具有4-7個(gè)，優(yōu)選5或6個(gè)環(huán)原子。稠合雜環(huán)系統(tǒng)可包括碳環(huán)且需要時(shí)僅包括一個(gè)雜環(huán)。雜環(huán)基的實(shí)例包括吡咯烷、哌啶、哌嗪、嗎啉、咪唑烷和吡唑烷。除非另外指明，如在此定義那樣，雜環(huán)基和雜環(huán)可任選被取代。
當(dāng)在此使用時(shí)，除非另外定義，術(shù)語(yǔ)“雜芳基”(在其本身或其任何組合上，例如“雜芳氧基”或“雜芳基烷基”)適宜包括包含最多可達(dá)4個(gè)，優(yōu)選1或2個(gè)獨(dú)立選自O(shè)、N和S的雜原子的一-和二環(huán)雜芳環(huán)系。每環(huán)可具有4-7個(gè)，優(yōu)選5或6個(gè)環(huán)原子。二環(huán)雜芳環(huán)系可包括碳環(huán)。雜芳基的實(shí)例包括吡咯、喹啉、異喹啉、吡啶、嘧啶、噁唑、噻唑、噻二唑、三唑、咪唑、苯并咪唑、異噁唑、噻吩、苯并噻吩、呋喃和苯并呋喃。除非另外指明，如在此定義那樣，雜芳環(huán)可任選被取代。
適宜地，當(dāng)在此使用術(shù)語(yǔ)“任選被取代”時(shí)，除非另外定義，例如在烷基、鏈烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、雜芳基和雜芳基烷基上，應(yīng)指基團(tuán)可任選取代一或多次，優(yōu)選由1-3個(gè)取代基取代，每一個(gè)獨(dú)立選自鹵素、C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、芳基C1-6烷氧基、(CR13R14)tOR12、硝基、氰基、(CR13R14)tNR10R11、(CR13R14)tNR10C(Z)R12、(CR13R14)tC(Z)NR10R11、(CR13R14)tCOR12、(CR13R14)tZC(Z)R12、(CR13R14)tC(Z)OR12、(CR13R14)tC(O)NR10R11、(CR13R14)tNR10C(Z)NR10R11、(CR13R14)tNR10C(＝NH)NR10R11、(CR13R14)tC(＝NH)-NR10R11、(CR13R14)tNR10S(O)2R8、(CR13R14)tS(O)2NR10R11、S(O)mR12、雜環(huán)基、雜芳基、雜環(huán)基C1-6烷基或雜芳基C1-6烷基。另外，兩個(gè)相鄰的環(huán)碳原子可連接形成二環(huán)系。
根據(jù)本發(fā)明的具體化合物包括那些在實(shí)施例中提及的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
應(yīng)該意識(shí)到，用于藥物的式(I)化合物的鹽應(yīng)為藥學(xué)上可接受的。適宜的藥學(xué)上可接受的鹽應(yīng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的且包括那些在J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19中描述的鹽，例如與以下無機(jī)酸形成的酸加成鹽，包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸或磷酸；和與有機(jī)酸形成的酸加成鹽，包括例如琥珀酸、馬來酸、乙酸、富馬酸、枸櫞酸、酒石酸、苯甲酸、對(duì)-甲苯磺酸、甲磺酸或萘磺酸。其它的鹽例如草酸鹽可在例如式(I)化合物的分離中使用，且包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本發(fā)明化合物可以結(jié)晶或非結(jié)晶形式存在，如果結(jié)晶，可任選為水合物或溶劑合物。本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括化學(xué)計(jì)量的水合物以及包含不同量的水的化合物。
本發(fā)明拓展至包括式(I)化合物的立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體在內(nèi)的所有的異構(gòu)體形式，包括對(duì)映體和其混合物例如外消旋體。通過常規(guī)方法，可將一種不同的異構(gòu)體形式與其它異構(gòu)體形式分離或拆分，或通過常規(guī)合成方法或通過立體特異性或不對(duì)稱合成可得到任何所給定的異構(gòu)體。
因?yàn)槭?I)化合物打算用于藥用組合物，容易理解它們的每一個(gè)優(yōu)選以基本上純的形式提供，例如至少60％純度，更適宜至少75％純度且優(yōu)選至少85％，特別是至少98％純度(％為基于重量計(jì)的重量)。不純化合物的制備可用于制備在藥用組合物中使用的更純的形式。
式(I)化合物為咪唑衍生物，它們可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法和例如在Comprehensive Heterocyclic Chemistry，編輯者Katritzky和Rees，Pergamon Press，1984，5，457-497中描述的方法，從市場(chǎng)上可得到的起始原料或能夠用與熟知的方法類似的方法從這樣的原料制備的起始原料而容易地制備。在許多這樣的合成中關(guān)鍵步驟是中心咪唑核的形成，以得到式(I)化合物。這些專利描述α-酮肟(ketooximes)和α-羥基酮(苯偶姻)的合成及其隨后在制備咪唑和N-羥基咪唑中的用途。此后，使用常規(guī)官能團(tuán)互變方法，通過以基團(tuán)HetAr、Ar和Y1中任一個(gè)處理取代基，可得到其它的式(I)化合物。
具體地說，在第一個(gè)方法中，通過使式(II)α-二酮
HetArCOCOAr(II)其中Ar如式(I)所定義，或?yàn)槠涞葍r(jià)物且HetAr定義為式(I)的片段 (應(yīng)該注意到，在以下流程中R1表示為X-R4，僅為了舉例說明的目的)，與式(III)的醛縮合， 其中Y1為可轉(zhuǎn)化為Y的基團(tuán)且R2和R3如在上文所定義或?yàn)槠涞葍r(jià)物，如果必要，在咪唑環(huán)形成條件下與氨或其來源縮合，可制備式(I)化合物。
在這些流程中使用的基團(tuán)Y1是可轉(zhuǎn)化為Y的基團(tuán)。使用易于得到的技術(shù)，轉(zhuǎn)化為Y對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是熟知的。例如，Y1可為保護(hù)的胺，例如CBZ或/和S-BOC胺，其脫除保護(hù)且轉(zhuǎn)化為Y；或者Y1可為羧酸或羧酸酯，它可經(jīng)熟知的方法轉(zhuǎn)化為胺、溴化物或疊氮化物(即a1碳降解)且進(jìn)一步官能化；或者Y1可為保護(hù)的醇，且使用標(biāo)準(zhǔn)官能團(tuán)互換轉(zhuǎn)化為胺，例如疊氮化物并經(jīng)還原等轉(zhuǎn)化為基團(tuán)Y。
α-二酮適宜的等價(jià)物為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的且包括相應(yīng)的α-酮基-肟和α-二肟。式(III)醛的適宜等價(jià)物為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的且包括相應(yīng)的肟和縮酮。
氨或其來源優(yōu)選過量使用，在α-二酮的情況下使用至少兩摩爾的量和在α-酮基-肟的情況下使用至少等摩爾的量。
適宜的氨源包括有機(jī)羧酸的銨鹽如三氟乙酸銨、或C1-6鏈烷酸銨，例如乙酸銨和甲酸銨，優(yōu)選乙酸銨，以及羧酰胺特別是甲酸的酰胺，例如甲酰胺。通常以大過量使用銨鹽且在酸例如其中酸也可用作反應(yīng)溶劑的C1-6羧酸存在下使用。如果使用甲酰胺，它作為反應(yīng)溶劑可過量使用?？墒褂闷渌娜軇┤缫掖蓟蚨谆鶃嗧?Lantos等，JHet Chem，19，1375，1982)。也可使用另外的溶劑，例如二甲基甲酰胺可與甲酰胺一起使用。一般在升高的溫度下，例如在回流條件下進(jìn)行反應(yīng)，如果需要，任選在壓力和/或惰性氣氛如氮?dú)庵杏诿芊夤苤羞M(jìn)行。在熔融的鹽含有氨源的鹽，例如三氟乙酸銨中，在升高的溫度下，進(jìn)行該反應(yīng)也是可能的。
胺另外的適宜來源為羥胺，其中最初形成的咪唑?yàn)镹-羥基-N-氧化物咪唑。然后，按照Akange和Allan，Chem and Ind.1975年1月5日，38的方法，在合適的溶劑例如甲醇中，通過用適宜的還原劑例如硼氫化鈉處理可將其還原為相應(yīng)的N-羥基咪唑。通過用常規(guī)脫氧合劑例如三氯化鈦、三氯化磷或亞磷酸三烷基酯如亞磷酸三甲基酯或亞磷酸三乙基酯處理，可將N-羥基咪唑依次轉(zhuǎn)化為式(I)咪唑。在質(zhì)子催化下，通過用具有大約2當(dāng)量羥胺或相應(yīng)醛肟和大約1當(dāng)量羥胺的式(III)醛處理式(II)α-二酮，可易于得到N-羥基-N-氧化物咪唑?；蛘撸ㄟ^相應(yīng)的α-二肟或α-酮基-肟與式(III)醛的醛肟的酸催化的縮合，可得到N-氧化物。
當(dāng)以上式(II)化合物為α-酮基-肟衍生物時(shí)，應(yīng)意識(shí)到最初得到的產(chǎn)物應(yīng)為式(I)化合物，其中咪唑被N-羥基化且如上描述的那樣可轉(zhuǎn)化為式(I)化合物。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識(shí)到在一些情況下，提供分開的氨源是不必要的，因?yàn)棣?二酮或醛等價(jià)物可能已經(jīng)包含這樣的來源。這樣的實(shí)例包括α-二肟或α-酮基-肟和醛肟。
在流程I-III中概述了制備本發(fā)明化合物的優(yōu)選方法。
在流程I中，經(jīng)用強(qiáng)堿例如二-異丙基氨化鋰處理，從1(具體實(shí)例為V＝CH，X＝S，R1＝Me)制備的陰離子與芳醛縮合，除去保護(hù)基團(tuán)后得到二醇2。然后通過Swern氧化，可將其轉(zhuǎn)變?yōu)棣?二酮3，其中任何數(shù)量的潛在的有用的變體(variations)為已知并可以使用。在作為氨源的乙酸銨和合適的溶劑例如乙酸或DMSO的混合物中，通過使3與式(III)的取代醛一起加熱，那么可將α-二酮3環(huán)合為咪唑4。使用常規(guī)官能團(tuán)互換方法，可將具有基團(tuán)Y1的咪唑4轉(zhuǎn)化為基團(tuán)Y，得到式I化合物咪唑5。官能團(tuán)轉(zhuǎn)化在本領(lǐng)域中是熟知的并在以下文獻(xiàn)中有描述，包括例如Comprehensive Organic Functional GroupTransformations，編輯者A.R.Katritzky，O.Meth-Cohn和C.W.Rees(Elsevier Science Ltd.Oxford，1995)，Comprehensive Organic Chemistry，編輯者D.Barton和W.D.Ollis(Pergamon Press，Oxford，1979)和Comprehensive Organic Transformations，R.C.larock(VCH PublishersInc.，紐約，1989)。優(yōu)選Y1基團(tuán)的實(shí)例為CH2NH2或其保護(hù)形式，例如CH2NHBoc。流程I也闡述保護(hù)的α-羥基酮6的制備，即通過使1的陰離子與合適的取代苯甲酰胺的活化羰基衍生物如N-甲氧基-N-甲酰胺縮合，得到保護(hù)的α-羥基酮。然后使用作為氧化劑的銅(II)鹽例如乙酸銅(II)和作為氨源的乙酸銨的組合，將加成物6直接轉(zhuǎn)變?yōu)檫溥?。α-羥基酮6也可脫除保護(hù)，然后經(jīng)氧化，例如采用Swern氧化反應(yīng)得到α-二酮3。
流程I流程II闡述α-酮基-肟制備式(I)化合物的用途。通過將2-甲硫基-6-甲基嘧啶陰離子(經(jīng)用烷基鋰?yán)缯』囂幚碇苽?加入到N-烷基-O-烷氧基苯甲酰胺中，可制備雜環(huán)酮7(例如，V＝N，X＝S，R1＝Me)。或者，所述陰離子可與苯甲醛縮合，得到醇，然后將其氧化為酮7。然后，使用標(biāo)準(zhǔn)條件，例如與亞硝酸鈉反應(yīng)，從7制備α-酮基-肟8，之后，可使其與式(III)醛反應(yīng)，得到N-羥基咪唑9。通過用脫氧合劑例如三氯化鈦、三氯化磷或亞磷酸三烷基酯如亞磷酸三甲基酯或亞磷酸三乙基酯處理，可使其轉(zhuǎn)變?yōu)?0。然后可使用官能團(tuán)互換轉(zhuǎn)變?yōu)?0的Y1，得到具有如上文定義的Y的式(I)化合物11。此外，5或11的硫(X＝S)經(jīng)氧化為亞砜或砜，隨后用氧、氮或硫親核試劑經(jīng)親核置換，得到式I化合物(X＝O，N或S；在流程I和II中的化合物5和11)。
流程II如在流程I或II中那樣，但用4-甲基-2-氯吡啶或4-甲基-2-氟吡啶代替起始的2-甲硫基-6-甲基嘧啶或吡啶(1)，可制備通式(V＝CH，X＝O、N、S)的化合物(Gallagher等，Bioorg.Med.Chem.5，49，1997)。按照在美國(guó)專利5,670,527中描述的方法，可進(jìn)行生成的2-鹵代吡啶基咪唑的親核取代。或者，硫(X＝S)經(jīng)氧化為亞砜或砜，隨后用氧、氮或硫親核試劑經(jīng)親核置換，得到式I化合物(在流程I和II中的化合物5和11)。
如在流程III中那樣，可制備另外的化合物，其中Ar基團(tuán)最后加入。(X、R2、R3和Y如對(duì)式(I)那樣定義且Y1為可轉(zhuǎn)化為Y的基團(tuán))。
流程III
用亞硝酸鈉氧化4-乙?；〈倪拎ぱ苌?V＝CH，X＝S，R1＝Me)得到酮肟。在乙酸中將該產(chǎn)物與烷基醛和乙酸銨一起加熱，可得到咪唑核。伴隨與亞磷酸三烷基酯一起加熱或在環(huán)境溫度下與三氯化鈦一起攪拌，可實(shí)現(xiàn)羥基咪唑的還原。用N-碘代琥珀酰亞胺處理咪唑得到碘代咪唑，然后在鈀催化劑下可與各種硼酸反應(yīng)，得到芳基或雜芳基咪唑。也可使用其它的聯(lián)芳基偶合反應(yīng)。
在合成式(I)化合物期間，中間體化合物中的不穩(wěn)定的官能團(tuán)，例如羥基、羧基和氨基可受到保護(hù)。在例如有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)(Protective Groups in Organic Chemistry)，T.W.Greene和P.G.M Wuts，(Wiley-Interscience，紐約，第2版，1991)中給出其中各種不穩(wěn)定的官能團(tuán)可被保護(hù)和裂解生成的保護(hù)衍生物的方法的綜合討論。
可單獨(dú)或作為包含至少兩個(gè)式(I)化合物，例如5-1000個(gè)化合物且更優(yōu)選10-100個(gè)式(I)化合物的化合物庫(kù)(libraries)制備式(I)化合物。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，使用液相或固相化學(xué)經(jīng)組合的“分開和混合(split and mix)”法或經(jīng)多平行合成(multiple parallelsynthesis)，可制備式(I)化合物庫(kù)。
因此，本發(fā)明另一方面提供包含至少兩個(gè)式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的化合物庫(kù)。
通過與合適的酸或酸衍生物反應(yīng)，可常規(guī)制備藥學(xué)上可接受的鹽。
治療方法Tie受體為大約125kDa的蛋白，具有單一推定的跨膜區(qū)域。這些受體的細(xì)胞外功能域分為幾個(gè)區(qū)域在EGF樣功能域發(fā)現(xiàn)三個(gè)區(qū)域具有半胱氨酸表達(dá)模式；有兩個(gè)區(qū)域具有與免疫球蛋白樣功能域的一些弱的同源性和結(jié)構(gòu)特性；以及有三個(gè)區(qū)域與纖連蛋白III重復(fù)結(jié)構(gòu)的同源性。這種細(xì)胞外功能域的特殊組合對(duì)Tie受體是獨(dú)特的。Tie2的細(xì)胞內(nèi)部分與FGF-R1、PDGF-R和c-kit的激酶功能域是最密切相關(guān)的(～40％同一性)。Tie2的細(xì)胞內(nèi)部分包含酪氨酸激酶的所有特征，包括GXGXXG ATP結(jié)合位點(diǎn)共有序列和一般酪氨酸激酶基元(即HRDLAARN和DFGL)。
由于它們是僅有的受體酪氨酸激酶，而非血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)的那些受體，即在其表達(dá)中很大程度上受限于內(nèi)皮細(xì)胞，這些受體已引起興趣。在以下段落中詳述的幾種證據(jù)顯示Tie2在血管生成中是重要的。
a.Tie1和Tie2受體定位i.胚胎學(xué)血管發(fā)育大批研究者使用原位雜交研究Tie受體在胚胎中的定位。Korhonen等(Blood 802548-2555，1992)顯示Tie受體的mRNA定位在所有形成血管的內(nèi)皮細(xì)胞和小鼠胚胎的心內(nèi)膜中。在胚胎發(fā)育期間，在成血管細(xì)胞和所有發(fā)育的維管結(jié)構(gòu)中觀察到Tie受體的表達(dá)。在小鼠胚胎發(fā)生期間，主要VEGF受體、Flk-1表達(dá)12-24小時(shí)后Tie受體表達(dá)，或許提示這些受體系統(tǒng)連續(xù)和不同的作用(Schnurch和Risau，Development 119957-968，1993)。Tie2的1.2Kb基因組5’側(cè)翼區(qū)的克隆偶合于lacZ基因且在轉(zhuǎn)基因小鼠中表達(dá)，證實(shí)胚胎發(fā)育期間在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的選擇模式(Schlaeger等，Development 1211089-1098，1995)。因此，Tie2啟動(dòng)子起作用確保內(nèi)皮細(xì)胞特異性表達(dá)Tie2。
ii.在成人組織中胚胎血管生成與病理血管生成之間的相似性得到假設(shè)，例如在腫瘤或慢性炎性疾病中阻斷Tie2功能，可阻斷血管生成，因此可阻斷進(jìn)一步的細(xì)胞增殖并提供治療益處。除在激活傷口愈合部位以外，在成人皮膚中不能觀察到Tie mRNA，其中肉芽組織中的增殖毛細(xì)管包含豐富的Tie mRNA(Korhonen等，Blood 802548-2555，1992)。從正常皮膚的cDNA的PCR擴(kuò)增無法顯示Tie受體的信號(hào)(Kaipainen等，Cancer Res.546571-6577，1994)。相反，用來自轉(zhuǎn)移黑素瘤的cDNA觀察到強(qiáng)烈的信號(hào)，其中原位研究將該信號(hào)定位在血管內(nèi)皮上。當(dāng)Tie受體表達(dá)在已建立的維管結(jié)構(gòu)中向下調(diào)節(jié)時(shí)，在排卵期間的卵巢、傷口和腫瘤(乳腺癌、黑素瘤和腎細(xì)胞瘤)的維管結(jié)構(gòu)中發(fā)生血管生成向上調(diào)節(jié)，這與當(dāng)前流行的觀點(diǎn)，即在成人中的血管生成借用了胚胎血管生成的機(jī)制相一致。
b.Tie剔除動(dòng)物具有Tie2剔除或攜帶轉(zhuǎn)基因編碼的“顯性失活的”Tie2受體的同型接合小鼠證實(shí)Tie2受體對(duì)胚胎發(fā)育是至關(guān)重要的(Dumont等，Genes Dev.81897-1909，1994；Sato等，Nature 37670-74，1995)。由于血管機(jī)能不全和內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目的顯著減少，在這些小鼠中發(fā)生胚胎死亡。血管生成-即內(nèi)皮細(xì)胞分化和就地形成血管-在缺乏Tie2的小鼠中似乎相對(duì)正常。在Tie2突變型小鼠胚胎中，導(dǎo)致血管分支形成(血管生成)的萌發(fā)和再造顯著地減少。這種萌發(fā)的缺乏和血管生成導(dǎo)致實(shí)際上的生長(zhǎng)停滯，具體地說就是腦、神經(jīng)管和心臟，導(dǎo)致生存力缺乏。這例證性地說明了Tie2在血管生成中至關(guān)重要的作用。當(dāng)血管生成受到多種生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)時(shí)，這是很明顯的。令人感興趣的是，在比Tie2破壞的那些小鼠更早發(fā)生的血管生成中Flk1(VEGF受體)剔除小鼠呈現(xiàn)胚胎的致死缺損。破壞Tie1受體產(chǎn)生更大的差異，之后得到缺損的表型；由于另外良好形成的維管結(jié)構(gòu)的整體性缺損導(dǎo)致的出血，小鼠胚胎在發(fā)育中終究會(huì)死亡。這些研究共同提示VEGF/Flk1和Tie系統(tǒng)以序貫方式操作，而Tie2在血管生成中具有至關(guān)重要的作用。
c.Tie2配體最近，已報(bào)道了Tie2受體的兩個(gè)配體。血管形成素(angiopoietin)-1結(jié)合并誘導(dǎo)Tie2的酪氨酸磷酸化，其體內(nèi)表達(dá)與生長(zhǎng)的血管密切相關(guān)(Davis等，Cell 871161-1169，1996)。經(jīng)基因工程改造的缺乏血管形成素-1的小鼠呈現(xiàn)血管生成的不足，這使人聯(lián)想起先前在缺乏Tie2受體的小鼠中觀察到的那些結(jié)果，證實(shí)血管形成素-1為Tie2的主要生理學(xué)配體且Tie2對(duì)體內(nèi)血管生成作用是至關(guān)重要的(Suri等，Cell871171-1180，1996)。血管形成素-2經(jīng)同源性篩查鑒定并顯示為一種天然來源的Tie2受體拮抗劑。血管形成素-2的轉(zhuǎn)基因過度表達(dá)破壞在小鼠胚胎中的血管形成(Maisonpierre等，Science 27755-60，1997)。這些結(jié)果共同支持Tie2受體在血管生成中的作用。
為在治療中使用式(I)化合物，通常將它們配制成符合標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐的藥用組合物。
本發(fā)明另一方面提供包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物。
當(dāng)以如上提及的劑量范圍給予式(I)化合物時(shí)，表明/期望無毒理學(xué)作用。
通過任何常規(guī)用于給予藥物的途徑，例如口服、局部、非腸道或經(jīng)吸入，可便利給予式(I)化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽和包含這樣物質(zhì)的藥用組合物。按照常規(guī)方法，通過使式(I)化合物與標(biāo)準(zhǔn)藥用載體混合，可以以如此制備的常規(guī)劑型給予式(I)化合物。也可以與已知的第二種治療活性化合物聯(lián)合的常規(guī)劑型給予式(I)化合物。這些方法可包括將成分適當(dāng)混合、制粒和壓制或溶解為所需的制劑。應(yīng)該意識(shí)到藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的形式和性質(zhì)由與之聯(lián)合給予的活性成分的量、給藥途徑和其它的已知變量確定。在與制劑的其它成分相適配的意義上，這些載體必須是“可接受的”且對(duì)其接受者無害。
所使用的藥用載體可例如為固體或液體。固體載體的實(shí)例為乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸等。液體載體的實(shí)例為糖漿、花生油、橄欖油、水等。類似地，載體或稀釋劑可包括本領(lǐng)域熟知的時(shí)間延遲材料，例如單獨(dú)或含有蠟的單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
能夠使用各種藥物形式。因此，如果使用固體載體，制劑可以為壓片，以粉末或小丸的形式放入硬明膠膠囊中或?yàn)樘清V劑或錠劑的形式。固體載體的量將在寬范圍內(nèi)變化，但優(yōu)選為大約25mg至大約1g。當(dāng)使用液體載體時(shí)，制劑將為糖漿劑、乳劑、軟明膠膠囊劑、滅菌注射液例如安瓿或非水液體混懸劑的形式。
式(I)化合物可以局部給藥，即通過非全身給藥。這包括式(I)化合物外用于表皮或口腔，及將這樣的化合物滴注到耳、眼和鼻中，以使化合物不明顯進(jìn)入到血流中。相反，全身給藥指的是口服、靜脈、腹膜內(nèi)和肌內(nèi)給藥。
適用于局部給藥的制劑包括適用于穿透皮膚到達(dá)炎癥部位的液體或半液體制劑，例如搽劑、洗劑、霜?jiǎng)?、軟膏劑或糊劑和適用于給予眼、耳或鼻的滴劑。為局部給藥，活性成分可包含0.001％-10％w/w，例如1％-2％重量的制劑。然而，活性成分可包括多達(dá)10％w/w，但將優(yōu)選包含小于5％w/w，更優(yōu)選0.1％-1％w/w的制劑。
本發(fā)明的洗劑包括那些適用于皮膚或眼睛的制劑。眼洗劑可包含滅菌水溶液，其中任選包含殺菌劑并可經(jīng)制備滴劑相似的方法制備。用于皮膚的洗劑或搽劑也可包含迅速干燥和冷卻皮膚的試劑，例如乙醇或丙酮，和/或潤(rùn)濕劑，例如甘油或油例如蓖麻油或花生油。
本發(fā)明的霜?jiǎng)?、軟膏劑或糊劑為外部使用的活性成分的半固體制劑。在合適的機(jī)械輔助下，使用油脂性或非油脂性基質(zhì)，單獨(dú)或在水或非水流體中的溶液或懸浮液中，通過使以細(xì)分散的或粉末形式的活性成分混合可制備它們?；|(zhì)可包括烴類例如硬、軟或液體石蠟、甘油、蜂蠟、金屬皂，膠漿，天然來源的油例如杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或橄欖油，羊毛脂或其衍生物或脂肪酸如硬脂酸或與醇例如丙二醇或大粒凝膠一起的油酸。制劑可摻入任何適宜的表面活性劑，例如陰離子、陽(yáng)離子或非離子表面活性劑如脫水山梨醇酯或其多氧乙烯衍生物。也可包括懸浮劑例如天然膠類、纖維素衍生物或無機(jī)材料如硅膠(silicaceous silicas)和其它的成分如羊毛脂。
本發(fā)明的滴劑可包含滅菌水或油溶液或混懸液，且可通過將活性成分溶于殺菌劑和/或殺真菌劑和/或任何其它合適防腐劑的合適的水溶液中制備，且優(yōu)選包含表面活性劑。然后，生成的溶液可經(jīng)過濾澄清、轉(zhuǎn)移至合適的容器中，之后把容器密封并經(jīng)高壓滅菌法或在98-100℃下維持半小時(shí)滅菌?；蛘?，經(jīng)過濾可將溶液滅菌并通過無菌技術(shù)轉(zhuǎn)移至容器中。適用于包含在滴劑中的殺菌劑和殺真菌劑的實(shí)例為硝酸苯基汞或乙酸苯基汞(0.002％)、苯扎氯銨(0.01％)和乙酸氯己定(0.01％)。用于制備油性溶液的合適的溶劑包括甘油、稀乙醇和丙二醇。
可經(jīng)非腸道給予式(I)化合物，即通過靜脈、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)、陰道內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥。非腸道給藥的皮下和肌內(nèi)形式通常為優(yōu)選。通過常規(guī)技術(shù)可制備用于這樣給藥的合適劑型。通過吸入，即通過鼻內(nèi)和口腔吸入給藥，也可給予式(I)化合物。通過常規(guī)技術(shù)可制備用于這樣給藥的合適劑型，例如氣溶膠制劑或計(jì)量劑量吸入劑。
式(I)化合物也可局部使用以治療或預(yù)防經(jīng)過度或不適宜的血管生成惡化的疾病。
以足以抑制Tie2受體活性的量給予式(I)化合物以向下調(diào)節(jié)其至正常水平，或在一些情況下調(diào)節(jié)至低于正常的水平，以便改善或預(yù)防疾病。
具有不合適的血管生成成分的慢性疾病為各種眼的新血管生成，例如糖尿病視網(wǎng)膜病和黃斑退化。
具有維管結(jié)構(gòu)過度或增加的增殖的其它慢性疾病為腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移、動(dòng)脈粥樣硬化和一些關(guān)節(jié)炎疾病。因此，Tie2酪氨酸激酶受體抑制劑具有阻斷這些疾病狀態(tài)的血管生成成分的用途。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“維管結(jié)構(gòu)不適宜的血管生成過度或增加的增殖”包括(但不限于)其特征在于血管瘤和眼病的疾病。在此使用的術(shù)語(yǔ)“不適宜的血管生成”包括(但不限于)其特征在于伴隨組織增生的血管增殖，例如發(fā)生于癌癥、腫瘤轉(zhuǎn)移、關(guān)節(jié)炎、牛皮癬和動(dòng)脈粥樣硬化中的血管增殖的疾病。
對(duì)在此公開的所有用于式(I)化合物的方法，每天口服劑量方案將優(yōu)選為總體重的大約0.1-大約80mg/kg，優(yōu)選為大約0.2-30mg/kg，更優(yōu)選為大約0.5mg-15mg。每天非腸道劑量方案將為總體重的大約0.1-大約80mg，優(yōu)選為大約0.2-大約30mg/kg，且更優(yōu)選為大約0.5mg-15mg/kg。每天局部劑量方案將優(yōu)選為大約0.1mg-大約150mg，每天給藥1-4次，優(yōu)選2或3次。每天吸入劑量方案將優(yōu)選為每天大約0.01mg/kg-大約1mg/kg。本領(lǐng)域技術(shù)人員也將意識(shí)到根據(jù)受治療疾病的性質(zhì)和程度、給藥形式、途徑及部位、和受治療的具體患者確定式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的個(gè)體給藥的最適量和間隔，并且通過常規(guī)技術(shù)能夠測(cè)定這樣的最適量。本領(lǐng)域技術(shù)人員也將意識(shí)到使用治療測(cè)定試驗(yàn)常規(guī)方法本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定治療的最適療程，即在所定義的天數(shù)內(nèi)每天給予式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的劑量數(shù)。
藥理試驗(yàn)方法A.Tie2激酶活性的測(cè)量使用Tie2受體的部分cDNA克隆制備用于Tie激酶研究的蛋白質(zhì)。為建立初步篩選試驗(yàn)，構(gòu)成桿狀病毒表達(dá)的Tie2激酶功能域的GST融合并使用商業(yè)載體pAcG1(Pharmingen)表達(dá)。
將最終構(gòu)成物(construct)轉(zhuǎn)染至用于篩選試驗(yàn)的桿狀病毒和可溶性的GST融合產(chǎn)物。前期工作已證實(shí)桿狀病毒表達(dá)的GST融合用于鼠Tie2激酶功能域以篩選候選靶/信號(hào)分子的用途(Huang等，Oncogene 112097-2103，1995)。
Tie2激酶活性測(cè)定一般以如下描述的兩種方法之一進(jìn)行Tie2激酶活性測(cè)定。測(cè)定中的微小變化給出相似結(jié)果。
1.自動(dòng)磷酸化閃爍板(flashplate)試驗(yàn)材料激酶緩沖液(最終20mM Tris-HCl，pH7.0，100mM NaCl，12mMMgCl2，1mM DTT)。
Gamma33p-ATP(一般最終量為0.5-1uCi/孔)ATP(最終30uM，或其它所需濃度)閃爍板(具有塑料閃爍劑包衣孔的96孔聚苯乙烯微量培養(yǎng)板)TopCount(微量培養(yǎng)板閃爍計(jì)數(shù)器)方法開動(dòng)震蕩培養(yǎng)器并將溫度調(diào)至30℃。
向閃爍板每孔加入20ul的3×激酶緩沖液除背景外每孔加入20ul蛋白。在1-2ul下加入一般在DMSO儲(chǔ)備液中的化合物。
每孔加入20ul的gamma33p-ATP和冷的ATP混合物。
總體積為60ul。
用透明的聚酯薄膜覆蓋。
在30℃下，于震蕩器上孵育2小時(shí)或所需的時(shí)間。
從震蕩器上取出閃爍板，沖洗5次(例如，每孔用300ul在1×PBS中的10uM ATP沖洗)。
在TopCount或其它的計(jì)數(shù)裝置上讀板。計(jì)算作為％抑制率的結(jié)果和使用正常計(jì)算方法計(jì)算IC50。
在測(cè)定中，發(fā)現(xiàn)式(I)的代表性化合物(實(shí)施例1)為活性的，具有＜1uM的IC50。
2.Tie2激酶的熒光極化最終測(cè)定條件50mM HEPES pH7.52％DMSO(當(dāng)篩選化合物時(shí))250uM ATP2mM MgCl21mM DTT50uM 釩酸(Vanidate)鈉10uM 肽底物活化的tie2激酶*參見以下活化方法肽底物RFWKYEFWR-OHMW(TFA鹽)＝1873Da制備1mM肽儲(chǔ)備液并在-20℃下貯存。
臨用前稀釋至100uM。
9×激酶緩沖液450mM HEPES pH7.5900mM NaCl450uM 釩酸鈉18mM MgCl2100mM DTT可以提前制備并以等分試樣于-20℃貯存。
ATP儲(chǔ)備液制備25mM ATP儲(chǔ)備液并在-20℃下以等分試樣貯存直到需要。
臨用前稀釋至2.5mM方法將50ul反應(yīng)液加入到以下96孔半面暗色區(qū)域(black half-area)的板(Costar，編號(hào)3694)上1.在20％DMSO中的5ul化合物。
2.5ul 9×激酶緩沖液。
3.5ul 2.5mM ATP。
4.5ul 100uM肽底物。
5.25ul PTK檢測(cè)混合物(Panvera，P-2652，50ml-UK分配器為Cambridge Bioscience)6.在1×緩沖液中稀釋5ul活化的tie2激酶(方法如下)以啟動(dòng)反應(yīng)。
7.在FP裝置上，于30-50分鐘的周期內(nèi)讀取與酶活性相一致的極化。
在該熒光測(cè)定中，發(fā)現(xiàn)式(I)的代表性化合物(實(shí)施例1)是有活性的，具有＜1uM的IC50。
Tie2激酶活化方法最終緩沖液條件20mM Tris-HCl，pH7.512mM MgCl2100mM NaCl20uM 釩酸鈉1mM DTT300uM ATP方法1.在300uM ATP和以上描述的緩沖條件下，孵育5uM的Tie2激酶。
2.在27℃下，孵育2小時(shí)。
3.向在20mM Tris-HCl(pH7.5)、100mM NaCl中預(yù)先平衡的NAP-25脫鹽柱(Pharmacia Biotech目錄號(hào)17-0852-02)中加入2.5ml反應(yīng)液，以從酶中分離ATP。
4.用5.0ml的20mM Tris-HCl(pH7.5)、100mM NaCl稀釋酶，在此點(diǎn)蛋白濃度應(yīng)為2.5uM。
5.將酶等分且盡快在-80℃下貯存。
B.Tie2受體信號(hào)傳導(dǎo)的測(cè)量-細(xì)胞測(cè)定在用2mM谷氨酰胺和10％FBS作為懸浮培養(yǎng)物補(bǔ)充的RPMI-1640培養(yǎng)基中，于1-5×105ml下培養(yǎng)HEL細(xì)胞(ATCC#TIB180)。實(shí)驗(yàn)前16-36小時(shí)，將必需數(shù)量的細(xì)胞傳代到0.5％FBS/RPMI培養(yǎng)基中。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，收獲細(xì)胞且在0.5％FBS RPMI中于0.5-1.0×107個(gè)細(xì)胞ml的密度下重懸浮，并在6孔板中以2-3ml/孔接種。
或者，人臍內(nèi)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)(Clonetics-Walkersville，MD)可用于這個(gè)測(cè)定。以每孔2×105-1×106個(gè)細(xì)胞，將傳代2-12代之間的HUVECs鋪到EGM(Clonetics)補(bǔ)充的6孔板中。24小時(shí)后，將培養(yǎng)基更換為包含3％BSA(Clonetics)的EBM，培養(yǎng)細(xì)胞過夜并用于第二天的測(cè)定。
用在合適濃度下的抑制化合物將細(xì)胞處理30-45分鐘。在振蕩器上，短時(shí)間(大約30秒)內(nèi)將孔中內(nèi)容物混合，然后在37℃下孵育。然后，用天然配體源例如血漿或成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)基處理細(xì)胞10分鐘。
在10分鐘的孵育期結(jié)束時(shí)，將板放置于冰上。收獲細(xì)胞且移去培養(yǎng)基。在變性樣品緩沖液(Invitrogen-Carlsbad，CA)中，將細(xì)胞溶解。在培養(yǎng)基設(shè)定(medium setting)下將懸浮液超聲處理5個(gè)脈沖且返回至冰上。如以下所描述(Harlow，E.和Lane，D.P.，Antibodies-A LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Laboratory Press紐約，1988.)的那樣，經(jīng)抗-磷酸-Tie2抗體蛋白質(zhì)印跡法和檢測(cè)，測(cè)定Tie2受體的磷酸化狀態(tài)。將30ul賴氨酸鹽通過7.5％SDS/聚丙烯酰胺凝膠。然后把凝膠轉(zhuǎn)移至硝基纖維素或PVDF膜上，每一種方法參照制造商說明書的蛋白質(zhì)印跡法。
用-20之間的PBS(0.05％)沖洗印跡，然后在室溫下用3％BSA/PBS/Tween阻斷1小時(shí)。之后在PBS/0.05％Tween中，將所述印跡與1ug/ml抗磷酸-Tie2抗體(SmithKline Beecham)一起孵育1小時(shí)。用PBS/Tween將印跡沖洗四次，每次5分鐘。在PBS/Tween中，于制造商推薦的稀釋濃度下，將抗-鼠-HRP綴合二次抗體與印跡孵育1小時(shí)。在PBS/Tween中把印跡沖洗四次，每次5分鐘。最后一次沖洗后，經(jīng)ECL方法(Amersham)或一些等價(jià)方法展開印跡。
使用光密度計(jì)或圖像程序(例如ImageQuant-MolecularDynamics)，掃描每一個(gè)印跡。分離Tie2帶并“框注出(boxed out)”每一電泳泳道。分析每一個(gè)樣品的象素體積(pixel volume)或可比較測(cè)量。也測(cè)定每一個(gè)樣品相同大小的合適的背景區(qū)。調(diào)整背景后，磷酸化表達(dá)為相對(duì)于未處理對(duì)照組的磷酸酪氨酸染色的比率。
血管生成體內(nèi)模型體內(nèi)血管生成測(cè)量-小鼠氣囊(air pouch)肉芽腫模型以下描述的炎性血管生成模型用于顯示抑制Tie2將停止血管過度或不適宜的增殖的組織損傷。慢性炎癥的鼠氣囊肉芽腫模型(Kimura等，1985，J.Pharmacobio-Dyn.，8393-400；Colville-Nash等，1995，J.Pharm.and Exp.Ther，2741463-1472)特征在于炎性細(xì)胞內(nèi)流、纖維組織增生和廣泛的血管生成，其公開的全部?jī)?nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。這是典型的炎性血管生成并證實(shí)生血管成分可在藥理學(xué)上不受肉芽腫的生長(zhǎng)和大小的調(diào)節(jié)。另外，通過血管灌制(casting)方法能夠?qū)ρ苌蓽?zhǔn)確地定量。
第1天，使用Aerrane(異氟烷)氣體(5％)或其它允許的方法麻醉小鼠，之后，使用27g的針將3ml空氣注射到背部皮下組織中。使小鼠恢復(fù)。
第0天，使用Aerrane或其它允許的方法再次麻醉小鼠，一旦麻醉，將0.5ml含有0.1％(v/v)巴豆油的弗氏完全佐劑注射到前1天(Day-1)形成的氣囊中。使動(dòng)物局部接受在0.2ml的N，N-二甲基乙酰乙酰胺(DMA)(Sigma，St.Louis，Mo)/Cremephor E1(Sigma，St.Louis，Mo)、鹽水(10/10/80)或其它合適的媒介物中的化合物，也可開始對(duì)動(dòng)物的給藥方案(天數(shù)取決于研究)。使動(dòng)物恢復(fù)且在沒有麻醉的情況下對(duì)動(dòng)物進(jìn)行所有的后續(xù)給藥。
第1-5天，按照時(shí)間表對(duì)動(dòng)物給藥。
在第6天，再次麻醉動(dòng)物，此后進(jìn)行血管灌制(Kimura等，1986，J.Pharmacobio-Dyn.，9442-446)；這包括尾靜脈靜脈注射1ml胭脂紅(10％)(Sigma，St.Louis，Mo.)/明膠(5％)(Sigma，St.Louis，Mo.)溶液。然后通過給予致死劑量的麻醉劑處死動(dòng)物，在取出肉芽腫組織之前在4℃下冷卻2小時(shí)。
當(dāng)取出肉芽腫組織時(shí)，稱重，然后在45℃下干燥3天并再次稱重。然后，在57℃下，于0.9ml的0.05M含有12U/ml-1木瓜蛋白酶(Sigma，St.Louis，Mo.)和0.33g/L-1的N-乙?；?1-半胱氨酸(Sigma，St.Louis，Mo.)的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)中，將干燥的組織消化3天。消化3天后，經(jīng)加入0.1ml的5mM NaOH溶解胭脂紅。離心樣品，然后用0.2um acrodiscs過濾。然后對(duì)照從非胭脂紅治療的動(dòng)物提取的組織中生成的胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)曲線(0.5-2mg/ml)測(cè)定胭脂紅含量并在490nm下讀取數(shù)據(jù)。一般使用DeltaSoft Elisa分析軟件(Biometallics公司，Princeton，NJ)測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)值。然后將胭脂紅含量用于測(cè)定各種治療的血管指數(shù)，血管指數(shù)是mg胭脂紅染料/gm干組織。
誘發(fā)肉芽腫后，通常測(cè)量6天內(nèi)的化合物對(duì)血管密度的作用。測(cè)定該時(shí)間點(diǎn)處于或接近血管生成的峰值。使用甲羥孕酮，一種血管擴(kuò)張甾體藥物(angiostatic ateroid)(Gross等，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，781176-1180)，作為陽(yáng)性對(duì)照，其公開的全部?jī)?nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。在這個(gè)模型中，該對(duì)照組證實(shí)最大50％的減少。如干重測(cè)量那樣，甲羥孕酮對(duì)肉芽腫大小無作用。
血管生成模型-體內(nèi)體內(nèi)血管生成測(cè)量-Matrigel模型通過將細(xì)胞外基質(zhì)凝膠置于小鼠皮膚下約一周，建立體內(nèi)血管生成模型，然后使用幾次測(cè)量對(duì)凝膠的生血管的侵襲作用進(jìn)行定量(Biancone，L等，Development of Inflammatory Angiogenesis by LocalStimulation of Fas In Vivo.J.Exp.Med.186147，1997)。簡(jiǎn)言之，還原性生長(zhǎng)因子，無內(nèi)毒素的Matrigel(Becton-Dickinson，Bedford，MA)在低溫下為凝膠。將抗體或血管生成劑與凝膠混合，以使它們不構(gòu)成總體積的2％以上。通過冷卻的注射器經(jīng)背側(cè)皮下注射給予8周齡或更大的C57雌性小鼠0.5ml的Matrigel。在生理溫度下，液體Matrigel迅速形成固體和粘結(jié)凝膠(cohesive gel)。在實(shí)驗(yàn)過程期間，小鼠接受如上描述的給予的試驗(yàn)化合物或?qū)φ掌贰?天后，處死小鼠且回收Matrigel柱。按照Drabkin的方法(Drabkin，DL和Austin，JHSpectrophotometric Studies II.Preparations from washed blood cells；nitric oxide hemoglobin and sulfhemoglobin.J Biol Chem 112；51，1935)(Sigma，St.Louis，MO)，通過分析凝膠中血紅蛋白的含量，或如上描述那樣通過用CD31染色劑染色和對(duì)血管定量，對(duì)血管生成進(jìn)行定量。
合成化學(xué)現(xiàn)在通過參照以下實(shí)施例來描述本發(fā)明，這些實(shí)施例僅為舉例說明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。除非另外指明，所有溫度以攝氏度給出，所有溶劑為可得到的最高純度并且所有反應(yīng)在氬氣氛中，于無水條件下進(jìn)行。
在實(shí)施例中，所有溫度以攝氏度(℃)表示。除非另外指明，使用快速原子轟擊，在VG Zab質(zhì)譜儀上進(jìn)行質(zhì)譜。使用Bruker AM 250或Am 400光譜儀，在250MHz下記錄1H-NMR(下文為“NMR”)譜。指定的多重性為s＝單峰，d＝雙峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰和br表示寬峰信號(hào)。Sat.表示飽和溶液，eq表示相對(duì)于主要反應(yīng)劑的試劑的摩爾當(dāng)量的比例。
快速層析法在Merck硅膠60(230-400目)上進(jìn)行。
實(shí)施例1(2-(4-(6-甲氧基萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-氨基甲酸叔丁基酯 a)6-甲氧基-萘-2-羧酸-N-甲氧基-N-甲基-酰胺將6-甲氧基萘甲酸(10.95克(此后為“g”)，0.05摩爾(此后為“mol”))、三乙胺(29.8毫升(此后為“mL”或“ml”)，0.2mol)在二氯甲烷(150ml)中的懸浮液冷卻至0℃并緩慢加入亞硫酰氯(4.35ml)，期間溶液變成棕色并均勻。移去冰浴并在室溫下繼續(xù)攪拌大約1小時(shí)(此后為“h”)，在此T點(diǎn)時(shí)加入甲氧基甲胺鹽酸鹽(7.02g，0.06mol)。在室溫下攪拌混合物3小時(shí)。濃縮該溶液并在二氯甲烷和飽和碳酸鉀溶液之間分配殘余物。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到為棕色固體的標(biāo)題化合物(9.65g，73％)；MS(ES)m/e 246[M+H]+。
b)4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基吡啶將4-吡啶基甲醇(8.5g，0.08mol)溶于N，N-二甲基甲酰胺和二氯甲烷的9∶1混合物(150ml)中。加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(13g，0.09mol)和咪唑(6.4g，0.09mol)并在室溫下攪拌溶液12小時(shí)。減壓濃縮反應(yīng)混合物并在乙酸乙酯和水之間分配殘余物。分離有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到為無色油的標(biāo)題化合物(17.4g，92％)；MS(ES)m/e 244[M+H]+。
c)1-(叔丁基-二甲基甲硅烷氧基)-2-(6-甲氧基-萘-2-基)-1-吡啶-4-基-乙-2-酮在0℃下，向攪拌著的二異丙基胺(5.01mL，0.035mol)的四氫呋喃(50ml)溶液中加入正丁基鋰(15.5mL，0.039mol)以就地生成二異丙基氨化鋰。向冷卻的-78℃LDA溶液中加入4-叔丁基-二甲基甲硅烷氧基吡啶(7.84g，0.035mol)并繼續(xù)攪拌30分鐘，此時(shí)加入6-甲氧基萘-2-羧酸-N-甲氧基-N-甲基-酰胺(5.51g，0.023mol)。使反應(yīng)物逐漸溫?zé)嶂潦覝?。用乙酸乙酯提取反?yīng)混合物并合并有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，經(jīng)快速層析法純化并分離出為黃色固體的標(biāo)題化合物；MS(ES)m/e 377[M+H]+。
d)(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-氨基甲酸叔丁基酯將乙酸(15ml)加入到(2，2-二甲基-3-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁基酯(Y.Guindon等，J.Am.Chem.Soc.，1997，119，9289)(0.26g，1.2mmol)、乙酸銨(0.98g，12.0mmol)，和2-(叔丁基-二甲基硅烷基氧基)-2-(6-甲氧基-萘-2-基)-1-吡啶-4-基-乙酮(0.26g，0.6mmol)的混合物中。在90℃下，把生成的溶液加熱過夜，然后冷卻至0℃，并伴隨攪拌下向溶液中緩慢加入NH4OH。過濾生成的沉淀，干燥得到標(biāo)題化合物；MS(ES)m/e 472[M+H]+。
實(shí)施例22-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基胺 將實(shí)施例1的產(chǎn)物(200毫克(此后為“mg”)，0.4毫摩爾(此后為“mmol”))溶于三氟乙酸和二氯甲烷的1∶1混合物(5mL)中并在室溫下攪拌4小時(shí)。減壓濃縮溶劑。經(jīng)柱層析法純化粗產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物(50mg，32％)；MS(ES)m/e 373[M+H]+。
實(shí)施例3正丙基-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-(3-甲硫基-丙基)-胺 用碳酸鉀(10mg，0.07mmol)和1-溴代丙烷(9mg，0.07mmol)處理實(shí)施例2(20mg，0.05mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2ml)中的溶液。在室溫下，攪拌溶液4小時(shí)。用水稀釋混合物并用乙酸乙酯提取。分離水層并用另外的乙酸乙酯提取，合并有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。在Gilson HPLC上層析殘余物，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物(3mg，13％)；MS(ES+)m/e 415[M+H]+。
實(shí)施例4(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-甲磺酰胺 將實(shí)施例2的產(chǎn)物(15mg，0.04mmol)在含有Hunig’s堿(9μL，0.05mmol)的四氫呋喃和二氯甲烷的1∶1混合物(2mL)中的溶液用甲磺酰氯(4μL，0.05mmol)處理并在室溫下攪拌8小時(shí)。用水稀釋混合物并用二氯甲烷提取。分離水層并用另外的二氯甲烷提取，合并有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。在Gilson HPLC上層析殘余物，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物(8mg，44％)；MS(ES)m/e451[M+H]+。
實(shí)施例51，1，1-三氟-N-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-甲磺酰胺
使用在實(shí)施例4中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和1，1，1-三氟甲磺酰氯開始制備標(biāo)題化合物(9mg，33％)；MS(ES)m/e 505[M+H]+。
實(shí)施例62，2，2-三氟-N-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-乙磺酰胺 使用在實(shí)施例4中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和2，2，2-三氟乙磺酰氯開始制備標(biāo)題化合物(12mg，43％)；MS(ES)m/e 519[M+H]+。
實(shí)施例7(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-丙磺酰胺 使用在實(shí)施例4中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和丙磺酰氯開始制備標(biāo)題化合物(7mg，27％)；MS(ES)m/e 479[M+H]+。
實(shí)施例83-氯-N-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-丙磺酰胺 使用在實(shí)施例4中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和3-氯-丙磺酰氯開始制備標(biāo)題化合物(11mg，40％)；MS(ES)m/e 514[M+H]+。
實(shí)施例9(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-丁磺酰胺 使用在實(shí)施例4中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和丁磺酰氯開始制備標(biāo)題化合物(8mg，30％)；MS(ES)m/e 493[M+H]+。
實(shí)施例101-乙基-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-脲
將實(shí)施例2的產(chǎn)物(20mg，0.05mmol)在含有Hunig’s堿(10μL，0.07mmol)的二氯甲烷(2mL)中的溶液用異氰酸乙酯(6μL，0.07mmol)處理并在室溫下攪拌8小時(shí)。用水稀釋混合物并用二氯甲烷提取。分離水層并用另外的二氯甲烷提取，合并有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。在Gilson HPLC上層析殘余物，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物(12mg，50％)；MS(ES)m/e 444[M+H]+。
實(shí)施例111-(2-氯乙基)-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和異氰酸3-氯乙酯開始制備標(biāo)題化合物(13mg，51％)；MS(ES)m/e 478[M+H]+。
實(shí)施例121-正丙基-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和異氰酸正丙酯開始制備標(biāo)題化合物(12mg，49％)；MS(ES)m/e 458[M+H]+。
實(shí)施例131-異丙基-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和異氰酸正丙酯開始制備標(biāo)題化合物(12mg，49％)；MS(ES)m/e 458[M+H]+。
實(shí)施例141-叔丁基-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和異氰酸叔丁酯開始制備標(biāo)題化合物(10mg，39％)；MS(ES)m/e 472[M+H]+。
實(shí)施例151-甲基甲酰基-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-脲
使用在實(shí)施例4中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和甲基甲酰基異氰酸酯開始制備標(biāo)題化合物(13mg，51％)；MS(ES)m/e 474[M+H]+。
實(shí)施例161-(3，5-二甲基-異噁唑-4-基)-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和異氰酸叔丁酯開始制備標(biāo)題化合物(11mg，40％)；MS(ES)m/e 511[M+H]+。
實(shí)施例171-正丙基-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-硫脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和硫代異氰酸(thioisocyanate)正丙酯開始制備標(biāo)題化合物(7mg，28％)；MS(ES)m/e 474[M+H]+。
實(shí)施例181-正丁基-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-硫脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和硫代異氰酸正丁基酯開始制備標(biāo)題化合物(8mg，31％)；MS(ES)m/e 488[M+H]+。
實(shí)施例191-異丙基-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-硫脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和硫代異氰酸仲丁酯開始制備標(biāo)題化合物(6mg，23％)；MS(ES)m/e 488[M+H]+。
實(shí)施例201-乙基-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-硫脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，由實(shí)施例2的產(chǎn)物和硫代異氰酸乙酯制備標(biāo)題化合物(12mg，49％)；MS(ES+)m/e 460[M+H]+。
實(shí)施例211-甲基-3-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-硫脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，由實(shí)施例2的產(chǎn)物和硫代異氰酸甲酯制備標(biāo)題化合物(8mg，30％)；MS(ES+)m/e 446[M+H]+。
實(shí)施例221-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-3-(2-甲氧基乙基)-硫脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，由實(shí)施例2的產(chǎn)物和異硫氰酸2-甲氧基乙酯制備標(biāo)題化合物(7mg，27％)；MS(ES+)m/e 490[M+H]+。
實(shí)施例231-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-3-(2-嗎啉-4-基-乙基)-硫脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，由實(shí)施例2的產(chǎn)物和硫代異氰酸仲丁酯制備標(biāo)題化合物(10mg，34％)；MS(ES+)m/e 545[M+H]+。
實(shí)施例241-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-3-(2-哌啶-4-基-乙基)-硫脲 使用在實(shí)施例10中描述的方法，由實(shí)施例2的產(chǎn)物和硫代異氰酸仲丁酯制備標(biāo)題化合物(9mg，31％)；MS(ES+)m/e 543[M+H]+。
實(shí)施例25環(huán)己基甲基-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-胺 用環(huán)己醛(3mg，0.07mmol)和三甲氧基硼氫化鈉(9mg，0.07mmol)處理實(shí)施例2的產(chǎn)物(20mg，0.05mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液。在室溫下攪拌該溶液4小時(shí)。用水稀釋混合物并用乙酸乙酯提取。分離水層并用另外的乙酸乙酯提取，合并有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。在Gilson HPLC上層析殘余物，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物(10mg，40％)；MS(ES)m/e 469[M+H]+。
實(shí)施例26雙正丁基-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-胺 使用在實(shí)施例25中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和丁醛開始制備標(biāo)題化合物(12mg，47％)；MS(ES)m/e 485[M+H]+。
實(shí)施例27雙環(huán)己基甲基-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-胺 使用在實(shí)施例25中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和環(huán)己醛開始制備標(biāo)題化合物(4mg，13％)；MS(ES)m/e 565[M+H]+。
實(shí)施例28(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-(3-甲硫基-丙基)-胺
使用在實(shí)施例25中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和1-甲硫基丙醛開始制備標(biāo)題化合物(4mg，16％)；MS(ES)m/e 461[M+H]+。
實(shí)施例29(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-雙-(3-甲硫基-丙基)-胺 使用在實(shí)施例25中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和1-甲硫基丙醛開始制備標(biāo)題化合物(11mg，46％)；MS(ES)m/e 549[M+H]+。
實(shí)施例30異丁基-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-(3-甲硫基-丙基)-胺 使用在實(shí)施例25中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和異丙醛開始制備標(biāo)題化合物(11mg，48％)；MS(ES)m/e 429[M+H]+。
實(shí)施例31雙-異丁基-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-(3-甲硫基-丙基)-胺 使用在實(shí)施例25中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和異丙醛開始制備標(biāo)題化合物(11mg，42％)；MS(ES)m/e 485[M+H]+。
實(shí)施例32(2，2-二甲基丙基)-(2-(4-(6-甲氧基-萘-2-基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基)-2-甲基-丙基)-(3-甲硫基-丙基)-胺 使用在實(shí)施例25中描述的方法，從實(shí)施例2的產(chǎn)物和叔丁醛開始制備標(biāo)題化合物(16mg，67％)；MS(ES)m/e 443[M+H]+。
所有的出版物，包括(但不局限于)在本說明書中引用的專利和專利申請(qǐng)，通過引用結(jié)合到本文中，好象每一個(gè)單獨(dú)的出版物被專門和分別指定通過引用其全部?jī)?nèi)容而結(jié)合到本文中。
以上描述充分公開了本發(fā)明，包括其優(yōu)選實(shí)施方案。在此具體公開的實(shí)施方案的修飾和改進(jìn)處于以下權(quán)利要求的范圍內(nèi)。不需進(jìn)一步的詳盡闡述，應(yīng)確信本領(lǐng)域技術(shù)人員可采用先前的描述、最大限度地充分利用本發(fā)明。因此，本文的實(shí)施例將僅作為舉例說明，并且無論如何不以任何方式構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。其中獨(dú)占權(quán)或優(yōu)先權(quán)要求得到保護(hù)的本發(fā)明實(shí)施方案定義如下。
權(quán)利要求
1.一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中V為CH或N；Ar為萘-2-基、萘-1-基、二環(huán)或三環(huán)雜芳環(huán)，所述環(huán)可任選被取代；Y為NR10R11、NR10C(Z)NR10R11、NR10C(Z)NR10C(Z)OR11、NR10COOR11或NR10SO2R11；n為0、1、2、3或4；X為O、CH2、S或NH；Z為氧或硫；R1獨(dú)立為氫、X-R4、鹵素、羥基、任選取代的C1-6烷基、任選取代的C1-6烷基亞硫?；?、CH2OR5、氨基、一或二-C1-6烷基氨基、N(R6)C(O)R7、N(R6)S(O)2R8、或任選包含另一個(gè)選自O(shè)、S和NR9的雜原子的5-7元N-雜環(huán)基環(huán)；R2和R3獨(dú)立表示任選取代的C1-6烷基，或R2和R3與它們連接的碳原子一起形成任選取代的C3-7環(huán)烷基或C5-7環(huán)烯基環(huán)，或R2和R3與它們連接的碳原子一起形成包含最多可達(dá)3個(gè)選自N、O和S的雜原子的任選取代的5-7元雜環(huán)基環(huán)；R4獨(dú)立為C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、雜芳基或雜芳基C1-6烷基部分，且其中這些部分中的任一部分可任選被取代；R5為氫、C(Z)R12或任選取代的C1-6烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-6烷基或S(O)2R8；R6為氫或C1-6烷基；R7為氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜芳基、雜芳基C1-6烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-6烷基；R8為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜芳基、雜芳基C1-6烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-6烷基；R9為氫、C1-4烷基、C3-7環(huán)烷基或芳基；R10和R12獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷基C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、雜芳基和雜芳基C1-6烷基，其中任何一個(gè)可任選被取代；和R11為氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷基C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-6烷基、雜芳基或雜芳基C1-6烷基，其中任一個(gè)可任選被取代；或R10和R11與氮原子一起可形成任選包含另一個(gè)選自O(shè)、S或NR9的雜原子的5-7元環(huán)。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中V為CH。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中V為N。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的化合物，其中R1為氫，或部分X-R4。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中X為氧或氮。
6.權(quán)利要求4或5的化合物，其中R4為任選取代的烷基、芳基或芳基C1-6烷基。
7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其中Ar為任選取代的萘基、苯并噻吩或苯并呋喃環(huán)。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中Ar環(huán)由最多可達(dá)3個(gè)獨(dú)立選自鹵代基、羥基、羥基C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代。
9.權(quán)利要求8的化合物，其中Ar為任選由C1-6烷氧基取代的萘-2-基。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于在哺乳動(dòng)物中治療其中發(fā)生不適宜的、過度或不需要的血管生成和/或其中出現(xiàn)過度的Tie2受體活性的疾病的式(I)新化合物。
文檔編號(hào)C07D403/04GK1543346SQ00815949
公開日2004年11月3日 申請(qǐng)日期2000年11月20日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月22日
發(fā)明者J·L·亞當(dāng)斯, N·W·約翰森, J·H·墨累, J L 亞當(dāng)斯, 墨累, 約翰森 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆有限公司