專利名稱：3,6支化的甘露五糖的簡(jiǎn)易合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于有生物活性的寡糖的制備領(lǐng)域，特別是涉及能用于藥物篩選的寡糖的合成方法。
與天冬酰胺連接的寡糖鏈簡(jiǎn)稱N-糖鏈，它通常具有一個(gè)含7-9個(gè)甘露糖基的甘露寡糖，而這個(gè)甘露寡糖總含有一個(gè)3，6支化的甘露核心五糖，如下結(jié)構(gòu)式所示 N-糖鏈的結(jié)構(gòu)特征為包含有至少一個(gè)在甘露糖上3，6支化的寡糖二天線，此外，帶有5-9個(gè)甘露糖的高甘露糖型N-糖鏈?zhǔn)菑?fù)雜型N-糖鏈合成的前身，故腫瘤糖蛋白中高甘露糖型糖鏈的出現(xiàn)或增多是提示由于細(xì)胞惡性增殖、糖蛋白合成速度增加的需要而致糖鏈加工不完全、不成熟。合成甘露核心五糖是制備相關(guān)抗原或診斷試劑的基礎(chǔ)，是糖生物學(xué)研究必備的基本原料。另外，甘露核心五糖與CoA的結(jié)合可應(yīng)用于該蛋白的分離提純，具有潛在的工業(yè)應(yīng)用前景。
本發(fā)明的目的在于將上述甘露核心五糖的合成用一步法的模式完成，以1，2-乙叉基-β-D-甘露糖苷為受體，以α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯為糖基供體，以路易斯酸為催化劑，簡(jiǎn)易合成甘露五糖。較已報(bào)道的方法大大簡(jiǎn)化，適于批量制備。
本發(fā)明的合成方法在于
以甘露糖苷1為糖基受體，以α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯2為糖基供體，一步法縮合成3，6位連接的甘露五糖3，脫掉異丙叉基和乙酰基即得到甘露五糖4。如下反應(yīng)式所示 Bz＝苯甲酰基，Ac＝乙酰基α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯的糖基供體2由甘露糖原酸酯7縮合，得到α1→2連接的甘露雙糖8，脫掉烯丙基后再用三氯乙睛活化1位即得到2，而糖的原酸酯7由乙酰基溴代甘露糖5制備，如下反應(yīng)式所示 Bz＝苯甲?；珹c＝乙?；? All＝烯丙基所述的縮合反應(yīng)需用有機(jī)溶劑鹵代烷烴，醚或酰胺類做溶劑，需用路易斯酸做催化劑。
所用的有機(jī)溶劑最好是二氯甲烷，所用的路易斯酸最好是三甲基硅三氟甲磺酸酯或三氟化硼。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。
(1)保護(hù)的甘露核心五糖3的合成將1，2乙叉基甘露糖1(1.03克，5毫摩爾)，α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯的糖基供體2(11.5克，10毫摩爾)溶于100毫升二氯甲烷中，冷卻至-10℃，在攪拌下加入三甲基硅三氟甲磺酸酯100微升，然后使反應(yīng)物自然升溫到室溫，五小時(shí)后加200微升三乙胺結(jié)束反應(yīng)，減壓下蒸掉溶劑，柱層析分離后得中間物3(16.5克，77％)。m.p141-144℃；[α]D-11.5°(c 1.1，CHCl3)；1H NMRδ7.98-7.25(m，60H，Bz-H)，5.67(dd，1H，J 3.0Hz，J 1.7Hz)，5.64(dd，1H，J 3.1Hz，J 1.7Hz)，5.53(s，1H)，5.26(q，1H，CH3-CH)，5.20(s，1H)，5.12(d，1H，J 1.6Hz)，5.08(d，1H，J 1.7Hz)，5.05(d，1H，J 1.7Hz)，2.01(s，3H，CH3CO)，2.00(s，3H，CH3CO)，1.50(d，3H，CH3-CH).(2)甘露核心五糖4的合成將保護(hù)的甘露核心五糖3(520毫克，0.26毫摩爾)溶于10毫升90％的三氟乙酸中，在室溫下攪拌，用TLC(乙酸乙酯/石油醚1/1)監(jiān)測(cè)反應(yīng)，反應(yīng)完成后減壓下蒸掉溶劑，柱層析分離后得中間物，將此中間物溶于50毫升用氨飽和的甲醇中，一周后反應(yīng)完成，減壓下蒸掉溶劑，得到的粉狀物用乙酸乙酯洗滌，得到甘露核心五糖4 89毫克，產(chǎn)率69％。1H NMR(D2O)δ5.32，5.20，5.15，5.13，4.85。(3)3，4，6-三-O-苯甲?；?β-D-甘露糖1，2-烯丙基原酸酯(7)將2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-甘露糖溴(8.22克，20毫摩爾)加入到烯丙醇(40mL)中，在攪拌下加入2，4-二甲基吡啶(2.3mL，20mmol)，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行，用TLC檢測(cè)(1∶1石油醚/乙酸乙酯)。反應(yīng)完成后，減壓下濃縮，殘余物懸浮于無(wú)水甲醇中MeOH(20mL)，加入甲醇鈉的甲醇溶液(2M，0.4mL)，混合物攪拌過(guò)夜，反應(yīng)完成將反應(yīng)液減壓濃縮，殘余物用柱層析分離，得到粉末狀6(4.72g，90％)。將6溶于吡啶(30mL)中，在攪拌下滴加苯甲酰氯(8.2mL，70mmol)。三小時(shí)后反應(yīng)完成，用常規(guī)方法對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行后處理，用柱層析(3/1石油醚/乙酸乙酯)精制。得到結(jié)晶的化合物7(10.33g，～100％)。(4)2-O-乙?；?3，4，6-三-O-苯甲?；?α-D-甘露糖-(1→2)-3，4，6-三-O-苯甲?；?α-D-甘露糖烯丙基苷(8)
化合物7在高真空下干燥二小時(shí)，然后溶于二氯甲烷(80mL)中。在-42℃氮?dú)獗Ｗo(hù)下滴加TMSOTf(100微升)，2小時(shí)后，TLC(3/1石油醚/乙酸乙酯)指示反應(yīng)完成.用三乙胺中和，減壓濃縮，柱層析精制得到固體的8(6.72g，66％).m.p 148-150℃；[α]D+3.0°(c 1.3，CHCl3)；1H NMRδ8.07-7.33，5.99，5.90-5.85，5.70，5.28-5.18，5.16，5.11，4.61-4.47，4.39-4.36，4.15-4.13，3.95-3.92，2.03.計(jì)算值C59H52O18C，67.56；H，4.96.實(shí)測(cè)值C，67.60；H，4.92(5)2-O-乙酰基-3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖-(1→2)-3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖三氯乙酰亞胺酯(2)將化合物8(524mg，0.5mmol)加入到含乙酸鈉(293毫克，3毫摩爾)的90％乙酸(10毫升)中，再加入PdCl2(89毫克，0.5毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，TLC(2/1石油醚/乙酸乙酯)指示反應(yīng)完成，用二氯甲烷(30mL)稀釋，用水、飽和碳酸氫納溶液洗滌，減壓濃縮有機(jī)相，用柱層析精制，得到2-O-乙?；?3，4，6-三-O-苯甲?；?α-D-甘露糖-(1→2)-3，4，6-三-O-苯甲?；?α-D-甘露糖(456mg)，將其溶于二氯甲烷(20mL)中，加入CCl3CN(0.1毫升，2毫摩爾)及DBU(14微升，0.18毫摩爾)，反應(yīng)6小時(shí)后完成，減壓下濃縮反應(yīng)液，柱層析精制得到結(jié)晶的化合物2(473毫克，兩步收率90％)，m.p 139-142℃；[α]D-1.5°(c 1.1，CHCl3)；1HNMRδ8.64，8.02-7.26，6.59，6.09，5.95-5.87，5.70，5.20，4.68-4.48，2.03。計(jì)算值C58H48O18Cl3NC，60.31；H，4.16.實(shí)測(cè)值C，60.34；H，4.15。
權(quán)利要求
1.一種以1，2-乙叉基-β-D-甘露糖苷為受體，以α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯為糖基供體，以路易斯酸為催化劑的簡(jiǎn)易甘露五糖合成法。其特征在于以甘露糖苷1為糖基受體，以α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯2為糖基供體，一步法縮合成3，6位連接的甘露五糖3，脫掉異丙叉基和乙酰基即得到甘露五糖4。如下反應(yīng)式所示 Bz＝苯甲?；珹c＝乙?；?br> 2.一種以1，2-乙叉基-β-D-甘露糖苷為受體，以α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯為糖基供體，以路易斯酸為催化劑的簡(jiǎn)易甘露五糖合成法。其特征在于α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯的糖基供體2由甘露糖原酸酯7縮合，得到α1→2連接的甘露雙糖8，脫掉烯丙基后再用三氯乙睛活化1位即得到2，而糖的原酸酯7由乙酰基溴代甘露糖5制備，如下反應(yīng)式所示 Bz＝苯甲酰基，Ac＝乙?；? All＝烯丙基
3.權(quán)利1，2中所述的縮合反應(yīng)需用有機(jī)溶劑鹵代烷烴，醚或酰胺類做溶劑，需用路易斯酸做催化劑。
4.權(quán)利3中所用的有機(jī)溶劑最好是二氯甲烷，所用的路易斯酸最好是三甲基硅三氟甲磺酸酯或三氟化硼。
全文摘要
本發(fā)明涉及哺乳動(dòng)物和寄生蟲體內(nèi)起重要生物學(xué)作用的甘露核心五糖α－D－甘露糖1→2－α－D－甘露糖1→6－(α－D－甘露糖1→2－α－D－甘露糖1→3)－D－甘露糖的簡(jiǎn)便化學(xué)合成法。
文檔編號(hào)C07H3/00GK1381458SQ0111076
公開日2002年11月27日 申請(qǐng)日期2001年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月20日
發(fā)明者孔繁祚, 朱玉亮 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心