專利名稱：二肽基肽酶iv抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一系列屬于二肽基肽酶IV抑制劑的新化合物、涉及包括這些抑制劑的藥物組合物并涉及這類組合物在治療人體疾病中的用途。
背景技術(shù)：
本文縮寫為DP-IV(且其它處縮寫為DAP-IV或DPP-IV)且還已知分類為EC.3.4.14.5的酶即二羰基肽酶IV是一種從以序列H-Xaa-Pro(其中Xaa是任意的氨基酸、不過優(yōu)選一種親脂性氨基酸且Pro是脯氨酸)開始的肽類中裂解N-末端二肽的絲氨酸蛋白酶。它也可作為以序列H-Xaa-Ala(其中Ala是丙氨酸)開始的底物肽類被接受。首先將DP-IV鑒定為膜結(jié)合蛋白。近來(lái)已經(jīng)鑒定了一種可溶形式。
最初對(duì)DP-IV的關(guān)注集中在它對(duì)激活T淋巴細(xì)胞中的作用上。DP-IV與T細(xì)胞蛋白CD26相同。提出DP-IV抑制劑能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞反應(yīng)性且由此可以將其開發(fā)為新型免疫調(diào)節(jié)劑。進(jìn)一步提示CD26是HIV所必需的共同受體且由此DP-IV抑制劑可以用于治療AIDS。
注意到了在免疫系統(tǒng)外部的DP-IV的作用。認(rèn)為DP-IV在降解包括生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)和胰升糖素樣肽-1和-2(GLP-1和GLP-2)在內(nèi)的幾種肽激素中具有關(guān)鍵作用。由于已知GLP-1對(duì)胰島素在控制膳食后血糖水平的功能方面具有強(qiáng)化作用，所以顯然DP-IV抑制劑也能夠用于治療II型糖尿病和葡萄糖耐量異常。目前至少有兩種DP-IV抑制劑正在處于臨床試驗(yàn)中以研究這種可能性。
已經(jīng)公開了幾組DP-IV抑制劑。盡管已經(jīng)從隨機(jī)篩選程序中發(fā)現(xiàn)了一些指導(dǎo)內(nèi)容，但是本領(lǐng)域中的大部分工作已經(jīng)定向于研究底物類似物。屬于底物類似物的DP-IV抑制劑例如公開在US 5,462,928、US5,543,396、WO95/15309(與US 5,939,560和EP 0731789同族)、WO98/19998(與US 6,011,155同族)、WO99/46272和WO99/61431中。最有效的抑制劑是氨基酰基吡咯烷硼酸類，但它們是不穩(wěn)定的且傾向于環(huán)化，而更穩(wěn)定的吡咯烷和噻唑烷衍生物對(duì)所述酶具有較低的親和力且由此可能在臨床情況中需要大劑量?？雌饋?lái)吡咯烷腈類提供了一種良好的折中方案，因?yàn)樗鼈儗?duì)所述酶具有高親和力且作為游離堿在溶液中具有合理的長(zhǎng)半衰期。然而，存在對(duì)具有改善特性的DP-IV抑制劑的需求。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明涉及一系列對(duì)所述酶具有改善的親和力的DP-IV抑制劑。這些化合物可以用于治療包括葡萄糖耐量異常和II型糖尿病在內(nèi)的許多人體疾病。因此，本發(fā)明進(jìn)一步涉及所述化合物在制備藥物組合物中的用途、涉及這類組合物本身并涉及這類組合物在人體療法中的用途。本發(fā)明的化合物由通式1描述。 在通式1中，R1是H或CN，X1是S、O、SO2或CH2，X2是羰基、CH2或不存在，n為1-5，且Het是可以任意地被含氮芳香雜環(huán)取代。
發(fā)明詳述本發(fā)明在第一個(gè)方面中包括一系列屬于酶DP-IV抑制劑且用于治療某些人體疾病的新型化合物。這些化合物由通式1描述。

在該通式中，R1代表氫原子或腈基(nitrile group)(-C≡N)。X1代表硫原子、氧原子、磺酰基(-SO)或亞甲基(-CH2-)。X2代表羰基(＞C＝O)、亞甲基(-CH2-)或共價(jià)鍵。變量n可以是1-5之間的任意整數(shù)值。Het代表含氮芳香雜環(huán)，這些雜環(huán)選自吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基及其苯并稠合類似物，諸如喹啉基、異喹啉基、噌啉基、2，3-二氮雜萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、苯并噁唑基和苯并異噁唑基。這種雜環(huán)可以任意地在一個(gè)或多個(gè)碳原子上被取代。合適的取代基是低級(jí)烷基、羥基、低級(jí)烷氧基、氨基、低級(jí)烷氨基、二(低級(jí)烷基)氨基、氟、氯、溴、硝基、三氟甲基、氰基、羧基和低級(jí)烷氧基羰基。
在本說明書的上下文中，術(shù)語(yǔ)低級(jí)烷基本身或作為低級(jí)烷氧基的這類組合形式用以包括1-6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈和環(huán)狀飽和烴基。低級(jí)烷基的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、異丙基、叔丁基、新戊基、環(huán)己基、環(huán)戊基甲基、2-(環(huán)丙基)乙基、3，3-二甲基環(huán)丁基和二環(huán)[3.1.0]己基。
通式1的化合物帶有至少一個(gè)立體(stereogenic)中心且由此可以顯示出旋光異構(gòu)現(xiàn)象。所有包括對(duì)映體、非對(duì)映異構(gòu)體和差向異構(gòu)體的這類異構(gòu)體包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。此外，本發(fā)明包括作為單一異構(gòu)體和作為包括外消旋物在內(nèi)的混合物的這類化合物。包括Het基團(tuán)攜帶羥基或氨基取代基在內(nèi)的一般通式1的某些化合物可以作為互變體存在。也將這些獨(dú)立的或作為混合物形式的這些互變體看作屬于本通式1的化合物帶有至少一個(gè)堿性官能基。它們由此可以與酸形成加成的鹽。與藥學(xué)上可接受的酸形成的那些加成鹽包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。合適的酸的實(shí)例包括乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、富馬酸、苯甲酸、雙羥萘酸、甲磺酸、鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸等。
通式1的某些化合物帶有酸性基團(tuán)且由此能夠與堿形成鹽。這類鹽的實(shí)例包括通過使酸與相應(yīng)金屬的氫氧化物、氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽反應(yīng)而形成的鈉鹽、鉀鹽和鈣鹽。類似地，可以通過使酸與四烷基氫氧化銨反應(yīng)而形成四烷基銨鹽。伯胺、仲胺和諸如三乙胺這樣的叔胺可以與酸形成加成的鹽。這種特定情況可以是相同分子的酸性基團(tuán)與伯胺基團(tuán)之間形成的內(nèi)加成鹽，也稱作兩性離子。只要它們是藥學(xué)上可接受的，所有這些鹽均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是腈基。在該實(shí)施方案中，優(yōu)選腈基的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)如通式2中所示。 按照標(biāo)準(zhǔn)術(shù)語(yǔ)，當(dāng)X1是亞甲基時(shí)，它是S構(gòu)型，而當(dāng)X1是硫、氧或磺酰基時(shí)，它是R構(gòu)型。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，與伯胺相鄰的中心上的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)是通式3中所示的S構(gòu)型。 在該實(shí)施方案中，更優(yōu)選R1應(yīng)是腈基且更優(yōu)選它應(yīng)帶有通式4中所描繪的絕對(duì)構(gòu)型。

在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，X1是硫原子或亞甲基。
在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，n是3或4。
本發(fā)明中特別優(yōu)選的化合物包括(2S)-1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈；(2S)-1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈；(2S)-1-[(2’S)-2’-氨基-4’-(吡嗪基-2″-羰基氨基)丁酰基]吡咯烷-2-腈；(4R)-3-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈；1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷；3-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷；1-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷；(2S)-1-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈；3-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷；3-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]噻唑烷；(2S)-1-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈；(2S)-1-[Nω-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈；3-[Nω-(2-喹啉基甲基)-L-賴氨酸基]噻唑烷；3-[Nω-(2-喹啉基甲基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷；3-[Nω-(2-喹喔啉?；?-L-賴氨酸基]噻唑烷；3-[Nω-(2-喹喔啉?；?-L-鳥氨酸基]噻唑烷；(2S)-1-[Nω-(2-喹喔啉?；?L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈；3-[Nω-(6-甲基吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷；3-[Nω-(異喹啉-3-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷；和3-[Nω-(6-三氟甲基煙酰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷。
本發(fā)明在第二個(gè)方面中包括一種用于人體治療應(yīng)用的藥物組合物。該組合物的特征在于它含有至少一種上述化合物作為活性劑。這類組合物用于治療人體疾病。該組合物通常包括選自藥學(xué)上可接受的賦形劑和非本發(fā)明的那些藥物活性劑的一種或多種其它成分。
可以將該組合物制成固體或液體制劑，這取決于所用的給藥途徑。固體制劑的實(shí)例包括用于口服給藥的丸劑、片劑、膠囊和粉劑；用于直腸或陰道給藥的栓劑；用于鼻部或肺部給藥的粉劑；和用于經(jīng)皮或經(jīng)粘膜(諸如頰)給藥的貼劑。液體制劑的實(shí)例包括用于靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)注射和口服、鼻部或肺部給藥的溶液和混懸劑。特別優(yōu)選的劑型是用于口服給藥的片劑。特別用于急診和危重護(hù)理的另一種優(yōu)選劑型是用于靜脈內(nèi)注射的無(wú)菌溶液。
該組合物包括至少一種上述化合物。該組合物可以含有一種以上的這類化合物，但一般優(yōu)選它僅應(yīng)包括一種化合物。所述化合物在該組合物中的用量使得可以以1-4個(gè)適宜的劑量單位的形式給予活性劑的每日總劑量。例如，該組合物可以是含有化合物用量等于必需的每日總劑量的片劑，將所述的片劑每天服用一次。另一方面，該片劑可以含有一半(或三分之一或四分之一)的每日劑量、每天服用兩次(或三次或四次)。還可以給這類片劑刻痕以有利于分次給藥，例如使得可以將包括全部每日劑量的片劑分成兩半并分兩部分給藥。優(yōu)選1片或其它單位劑型含有0.1mg-1g的活性化合物。更優(yōu)選它含有1mg-250mg的活性化合物。
這種組合物一般包括一種或多種選自認(rèn)為是藥學(xué)上可接受的那些賦形劑。合適的賦形劑包括但不限于填充劑、粘合劑、稀釋劑、溶劑、防腐劑和調(diào)味劑。在本發(fā)明的上下文中還將改變所述組合物釋放特性的試劑、諸如選擇性溶于腸中的聚合物(″腸溶包衣材料″)看作適宜的賦形劑。
該組合物除包括本發(fā)明的化合物外還可以包括第二種藥物活性劑。例如，該組合物可以包括抗糖尿病藥、生長(zhǎng)促進(jìn)劑、消炎藥或抗病毒藥。然而，一般優(yōu)選該組合物僅包括一種活性劑。
本發(fā)明在第三個(gè)方面中包括上述化合物和組合物在治療人體疾病中的用途。同樣地將該方面看作包括這類疾病的治療方法。對(duì)治療敏感的疾病是那些DP-IV或CD26的抑制可直接或間接產(chǎn)生臨床有益效果的疾病。直接作用包括阻斷T淋巴細(xì)胞的活化。間接作用包括通過防止這些激素降解而強(qiáng)化肽激素的活性。疾病的實(shí)例包括但不限于自身免疫病和諸如腸炎疾病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎這樣的炎癥疾病、導(dǎo)致身材矮小的生長(zhǎng)激素缺乏、多囊性卵巢綜合征、葡萄糖耐量異常和2型糖尿病。特別優(yōu)選的是所述化合物和組合物在治療葡萄糖耐量異常和2型糖尿病中的用途以及同樣地是一種通過給予有效量的如上所述的化合物或組合物治療這些疾病的方法。
包括給藥方案在內(nèi)的明確的詳細(xì)治療方法將由考慮患者一般狀況和疾病嚴(yán)重程度的參與的臨床醫(yī)師來(lái)確定。就具有被靜止期分隔開的疾病活躍的急性期的腸炎疾病而言，臨床醫(yī)師可以在急性期中選擇相對(duì)高的劑量，而在靜止期中選擇較低的維持劑量。就諸如2型糖尿病和葡萄糖耐量異常這樣的慢性病而言，可能需要將相同水平的給藥維持延長(zhǎng)期限。在這類情況中，每天1-4片各自包括0.1mg-1g(且優(yōu)選1mg-250mg)活性化合物的給藥方案可能是典型的。
可以通過本領(lǐng)域中公知的方法來(lái)制備本發(fā)明的化合物。所選擇的途徑取決于靶分子中存在的取代基的特定性質(zhì)。原料通常為α，ω-二氨基酸衍生物5。 PG1和PG2是″正交″保護(hù)基，這些基團(tuán)掩蓋胺基反應(yīng)性且可以在有另一保護(hù)基存在的情況下各自被選擇性地除去。合適的基團(tuán)在文獻(xiàn)中是眾所周知的。通式5的二氨基酸衍生物是商購(gòu)產(chǎn)品或描述在文獻(xiàn)中，所有的n值均在1-5的范圍且結(jié)構(gòu)為R和S立體異構(gòu)體。
就某些合成策略而言，優(yōu)選用上述二氨基酸的酯、諸如二氨基酸芐酯、二氨基酸甲酯或二氨基酸叔丁酯作為原料。對(duì)所述的酯進(jìn)行選擇以便它不被可以裂解PG1和PG2的試劑所水解。
如果以5作為原料，那么必須發(fā)揮進(jìn)入靶分子的吡咯烷酰胺衍生物的酸的功能且必須發(fā)揮進(jìn)入所需雜芳基衍生物的ω-胺的功能。實(shí)施這兩個(gè)步驟的順序并非重要。
反應(yīng)流程A 可以使二氨基酸衍生物5與吡咯烷衍生物6反應(yīng)而得到酰胺7。實(shí)現(xiàn)這種轉(zhuǎn)化的反應(yīng)條件在文獻(xiàn)中是眾所周知的。合適的試劑包括碳化二亞胺類、磷試劑和氯甲酸烷基酯且該反應(yīng)通常由諸如三乙胺或二甲氨基吡啶這樣的叔胺催化。
反應(yīng)流程A中所述的反應(yīng)可用于R1和X1的所有組合。然而，就R1是腈基或X1是磺?；那闆r而言，有利的是如反應(yīng)流程B和C中所述改變策略。 反應(yīng)流程C 在反應(yīng)流程B中，引入R1基團(tuán)成為伯酰胺且隨后通過諸如三氟乙酸酐這樣的脫水劑的作用將其轉(zhuǎn)化成腈。在反應(yīng)流程C中，引入X1基團(tuán)成為硫醚且隨后通過諸如高碘酸鈉這樣的氧化劑的作用將其轉(zhuǎn)化成砜。
反應(yīng)流程D 在反應(yīng)流程D中，化合物5D是除去ω-保護(hù)基后的二氨基酸衍生物5。Y可以代表OH，但更通常的是代表吡咯烷環(huán)或酯的O-烷基。使游離胺基與雜芳基羰基氯反應(yīng)而產(chǎn)生酰胺11，使其與本發(fā)明化合物的官能基連接，其中X2是羰基。易于由相應(yīng)的屬于眾所周知的化合物的羧酸來(lái)制備雜芳基羰基氯。反應(yīng)流程D的反應(yīng)一般適用于Het基團(tuán)的所有變化形式，條件是Het上的某些取代基可能需要保護(hù)。這類基團(tuán)和適宜的保護(hù)一般對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。
當(dāng)X2是共價(jià)鍵時(shí)，仍然能夠通過與雜芳基氯或雜芳基氟的直接反應(yīng)而由胺5D獲得靶官能基。在某些情況中，雜芳基氯或雜芳基氟可能易受影響或可能不足以反應(yīng)，并且然后使用諸如還原氨基化這樣的另一種途徑是必不可少的。在反應(yīng)流程E中解釋了該反應(yīng)過程。
反應(yīng)流程E 還原氨基化也是X2為亞甲基時(shí)選擇的方法。在這種情況中，存在如反應(yīng)流程F中所解釋的兩種選擇。
反應(yīng)流程F 當(dāng)已經(jīng)處理了所有基團(tuán)時(shí)，除去最終的保護(hù)基并且使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離和純化產(chǎn)物。
在下面的非限制性實(shí)施例中進(jìn)一步解釋這些一般方法。
實(shí)施例縮寫使用下列縮寫。
DMFN，N-二甲基甲酰胺h小時(shí)HPLC高效液相層析min分鐘pet.ether在60-80℃下沸騰的石油醚級(jí)分PyBOP(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷并磷鎓六氟磷酸鹽PyBroP溴三吡咯烷并磷鎓六氟磷酸鹽TFA三氟乙酸實(shí)施例1(2S)-1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽 A.N-(2-硝基苯次磺?；?2-Nitrobenzenesulphenyl))-L-脯氨酸將L-脯氨酸(25g，217mmol)溶于2M NaOH(110mL，220mmol)和二噁烷(120mL)。在加入2M NaOH(110mL，220mmol)的同時(shí)緩慢加入2-硝基苯次磺酰基氯(42g，222mmol)溶于二噁烷(60mL)所得到的溶液。在室溫下2小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物傾入水(500mL)并過濾出固體。用2M HCl將濾液的pH調(diào)節(jié)至pH為3并將該溶液用乙酸乙酯(3×500mL)提取。將合并的有機(jī)提取物用水(4×200mL)和鹽水(1×200mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)至得到橙色固體，鑒定其為N-(2-硝基苯次磺?；?-L-脯氨酸(58.1g，217mmol，100％)。
B.N-(2-硝基苯次磺?；?-L-脯氨酸琥珀酰亞胺酯將N-(2-硝基苯次磺酰基)-L-脯氨酸(57.9g，216mmol)溶于CH2Cl2/DMF(9∶1，500mL)。加入N-羥基琥珀酰亞胺(37.3g，324mmol)和水溶性碳化二亞胺(51.8g，260mmol)。在室溫下18小時(shí)后，在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(1000mL)。將該溶液用水(4×200mL)和鹽水(1×200mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)而得到黃色固體，鑒定其為N-(2-硝基苯次磺?；?-L-脯氨酸琥珀酰亞胺酯(78.9g，216mmol，100％)。
C.N-(2-硝基苯次磺?；?-L-脯氨酰胺將N-(2-硝基苯次磺酰基)-L-脯氨酸琥珀酰亞胺酯(78.5g，215mmol)溶于二噁烷(500mL)。加入氨水(35％，100mL)。在室溫下攪拌2小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物傾入水(700mL)。過濾出沉淀、用水(200mL)洗滌、用P2O5干燥并使其從乙酸乙酯/pet.ether中重結(jié)晶而得到黃色固體，鑒定其為N-(2-硝基苯次磺酰基)-L-脯氨酰胺(49.6g，185mmol，86％)。
D.(2S)-N-(2-硝基苯次磺?；?吡咯烷-2-腈將N-(2-硝基苯次磺酰基)-L-脯氨酰胺(49g，183mmol)溶于干THF(300mL)。將該溶液冷卻至0℃，加入三乙胺(36.7g，367mmol)，隨后緩慢加入三氟乙酸酐(77g，367mmol)。用三乙胺將pH調(diào)節(jié)至pH為9。30分鐘后將該反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(500mL)稀釋、用水(1×200mL)和鹽水(1×200mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)而得到一種橙色油狀物，將其通過急驟層析法純化(洗脫劑80％pet ether，20％乙酸乙酯)而得到黃色固體，鑒定其為(2S)-N-(2-硝基苯次磺?；?吡咯烷-2-腈(38.9g，150mmol，82％)。
E.(2S)-吡咯烷-2-腈鹽酸鹽將(2S)-N-(2-硝基苯次磺?；?吡咯烷-2-腈(38.5g，149mmol)溶于乙醚(200mL)。緩慢加入4M HCl/二噁烷(150mL，600mmol)。在室溫下2小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物傾入乙醚(1000mL)。過濾出固體、用乙醚(500mL)洗滌并使其從甲醇/乙醚中重結(jié)晶而得到白色固體，鑒定其為(2S)-吡咯烷-2-腈鹽酸鹽(18.9g，142.5mmol，96％)。
F.(2S)-1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈將Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸(2.5g，7.4mmol)溶于CH2Cl2(50mL)。將該溶液冷卻至0℃，加入(2S)-吡咯烷-2-腈鹽酸鹽(1.2g，9.1mmol)和PyBOP(4.3g，8.23mmol)并用三乙胺將pH調(diào)節(jié)至pH為9。在0℃-室溫下18小時(shí)后，在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(200mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×50mL)、飽和NaHCO3(2×50mL)、水(2×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)而得到黃色油狀物。將其通過急驟層析法純化(洗脫劑80％乙酸乙酯，20％pet.ether)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(2S)-1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈(2.98g，7.16mmol，97％)。
G.(2S)-1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽將(2S)-1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈(2.8g，6.7mmol)溶于三氟乙酸(5mL)。在室溫下1小時(shí)后，在真空中除去溶劑。通過制備型HPLC(Vydac C18，5-50％ 0.1％TFA/乙腈-0.1％TFA/水、40分鐘內(nèi)、以3mL/分鐘的流速)純化殘余物。將含有產(chǎn)物的級(jí)分凍干而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(2S)-1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽(1.5g，3.48mmol，52％)。
+＝317.3實(shí)施例2(2S)-1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽 A.(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基)-L-脯氨酰胺將Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲基氧基羰基)-L-賴氨酸(5g，10.7mmol)溶于CH2Cl2(100mL)。將該溶液冷卻至0℃，加入L-脯氨酰胺(1.78g，11.7mmol)和PyBOP(6.7g，12.8mmol) 并用三乙胺將pH調(diào)節(jié)至pH為9。在0℃-室溫下18小時(shí)后，在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(200mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×50mL)、飽和NaHCO3(2×50mL)、水(2×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑2％甲醇，98％氯仿)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基)-L-脯氨酰胺(4.05g，7.2mmol，67％)。
B.(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基)-吡咯烷-2-腈將(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基)-L-脯氨酰胺(3.95g，7.02mmol)溶于干THF(100mL)。將該溶液冷卻至0℃，加入三乙胺(1.4g，14mmol)，隨后緩慢加入三氟乙酸酐(2.97g，14.1mmol)。用三乙胺將pH調(diào)節(jié)至pH為9。30分鐘后將該反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(100mL)稀釋、用水(1×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)而得到一種橙色油狀物。通過急驟層析法純化該殘余物(洗脫劑60％pet ether，40％乙酸乙酯)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基)吡咯烷-2-腈(3.3g，6.11mmol，87％)。
C.(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-L-賴氨酸基)吡咯烷-2-腈將(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基)吡咯烷-2-腈(3.1g，5.7mmol)溶于THF(80mL)。加入二乙胺(20mL)。在室溫下2小時(shí)后，在真空中除去溶劑。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑90％氯仿、7％甲醇、3％三乙胺)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-L-賴氨酸基)吡咯烷-2-腈(1.63g，5.03mmol，89％)。
D.(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基)-吡咯烷-2-腈將(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-L-賴氨酸基)吡咯烷-2-腈(100mg，0.31mmol)溶于CH2Cl2/DMF(9∶1，20mL)。在0℃下向該溶液中加入1-羥基苯并三唑水合物(84mg，0.62mmol)、水溶性碳化二亞胺(76mg，0.38mmol)、2-吡嗪甲酸(43mg，0.35mmol)和三乙胺(65mg，0.65mmol)。在0℃-室溫下18小時(shí)后，在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(70mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、水(2×20mL)和鹽水(1×20mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)而得到一種黃色油狀物。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑2％甲醇，98％氯仿)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基)-吡咯烷-2-腈(124mg，0.29mmol，93％)。
E.(2S)-1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽將(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基)-吡咯烷-2-腈(110mg，0.26mmol)溶于三氟乙酸(5mL)。通過制備型HPLC純化殘余物(Vydac C18，5-50％0.1％TFA/乙腈-0.1％TFA/水、40分鐘內(nèi)、以3mL/分鐘的流速)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分凍干至得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(2S)-1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽(66mg)。
+＝331.1實(shí)施例3(4R)-3-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈三氟乙酸鹽 A.(4R)-3-(叔丁氧基羰基)噻唑烷-4-甲酰胺將(4R)-3-(叔丁氧基羰基)噻唑烷-4-羧酸(12.5g，54.1mmol)溶于CH2Cl2/DMF(9∶1，150mL)。在0℃下向該溶液中加入1-羥基苯并三唑水合物(14.6g，108mmol)和水溶性碳化二亞胺(13.0g，65mmol)。在0℃下1小時(shí)后加入氨水(35％，50mL)。在0℃-室溫下18小時(shí)后，在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(500mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×100mL)、飽和NaHCO3(2×100mL)、水(2×100mL)和鹽水(1×100mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)而得到一種黃色油狀物。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑2％甲醇，98％氯仿)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(4R)-3-(叔丁氧基羰基)噻唑烷-4-甲酰胺(8.9g，38.4mmol，71％)。
B.(4R)-噻唑烷-4-甲酰胺鹽酸鹽將(4S)-3-(叔丁氧基羰基)噻唑烷-4-甲酰胺(8.6g，37.1mmol)溶于4M HCl/二噁烷(50mL)。在室溫下1小時(shí)后在真空中蒸發(fā)溶劑而得到一種白色固體，鑒定其為(4R)-噻唑烷-4-甲酰胺鹽酸鹽(6.2g，36.8mmol，99％)。
C.(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基]-噻唑烷-4-甲酰胺將Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲基氧基羰基)-L-賴氨酸(5g，10.7mmol)溶于CH2Cl2(100mL)。將該溶液冷卻至0℃，加入(4R)-噻唑烷-4-甲酰胺鹽酸鹽(1.78g，11.7mmol)和PyBOP(6.7g，12.8mmol)并用三乙胺將pH調(diào)節(jié)至pH為9。在0℃-室溫下18小時(shí)后，在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(200mL)。將該溶液用0.3MKHSO4(2×50mL)、飽和NaHCO3(2×50mL)、水(2×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)而得到一種黃色油狀物。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑2％甲醇，98％氯仿)而得到一種無(wú)色油狀物，將其鑒定為(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-甲酰胺(2.81g，4.8mmol，44％)。
D.(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基]-噻唑烷-4-腈將(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-甲酰胺(2.7g，4.7mmol)溶于干THF(100mL)。將該溶液冷卻至0℃，加入三乙胺(1.0g，10mmol)，隨后緩慢加入三氟乙酸酐(2.0g，9.5mmol)。用三乙胺將pH調(diào)節(jié)至pH為9。30分鐘后將該反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(100mL)稀釋、用水(1×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑60％pet ether，40％乙酸乙酯)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈(2.14g，3.81mmol，82％)。
E.(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈將(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈(1.9g，3.4mmol)溶于THF(40mL)。加入二乙胺(10mL)。在室溫下2小時(shí)后在真空中除去溶劑。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑90％氯仿、7％甲醇、3％三乙胺)而得到一種無(wú)色油狀物，將其鑒定為(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-L-賴氨酸基]-噻唑烷-4-腈(863mg，2.5mmol，75％)。
F.(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈將(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈(100mg，0.29mmol)溶于CH2Cl2(20mL)。在0℃下向該溶液中加入2-吡嗪甲酸(43mg，0.35mmol)和PyBOP(170mg，0.33mmol)并用三乙胺將pH調(diào)節(jié)至pH為9。在0℃-室溫下18小時(shí)后，在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(70mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、水(2×20mL)和鹽水(1×20mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑2％甲醇，98％氯仿)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈(112mg，0.25mmol，86％)。
G.(4R)-3-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈三氟乙酸鹽將(4R)-3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈(110mg，0.26mmol)溶于三氟乙酸(5mL)。在室溫下1小時(shí)后，在真空中除去溶劑。通過制備型HPLC純化殘余物(Vydac C18，5-50％ 0.1％TFA/乙腈-0.1％TFA/水、40分鐘、以3mL/分鐘的流速)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分凍干至得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(4R)-3-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈三氟乙酸鹽(57mg)。
+＝349.1實(shí)施例41-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷三氟乙酸鹽
A.1-[Nω-(芐氧基羰基)-Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷將Nω-(芐氧基羰基)-Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨酸(5.49g，15mmol)溶于CH2Cl2/DMF(9∶1，100mL)。在0℃下向該溶液中加入1-羥基苯并三唑水合物(3.37g，22mmol)、水溶性碳化二亞胺(3.46g，18mmol)、吡咯烷(1.28g，18mmol)和三乙胺(200mg，20mmol)。在0℃-室溫下18小時(shí)后，在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(200mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×50mL)、飽和NaHCO3(2×50mL)、水(2×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑90％乙酸乙酯，10％pet.ether)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為1-[Nω-(芐氧基羰基)-Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷(5.15g，12.3mmol，82％)。
B.1-[Nω-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷將1-[Nω-(叔丁氧基羰基)-Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷(2.15g，5.13mmol)溶于甲醇(80mL)。將該溶液用10％Pd/C(400mg)氫化。2小時(shí)后過濾出催化劑并用甲醇(50mL)洗滌。將合并的濾液在真空中蒸發(fā)而得到純白色固體，鑒定其為1-[Nω-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷(1.35g，4.74mmol，94％)。
C.1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷將1-[Nω-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷(100mg，0.35mmol)溶于CH2Cl2(20mL)。在0℃下向該溶液中加入PyBroP(195mg，0.4mmol)、2-吡嗪甲酸(50mg，0.4mmol)和三乙胺(100mg，1.0mmol)。在0℃-室溫下18小時(shí)后，在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(70mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、水(2×20mL)和鹽水(1×20mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑3％甲醇，97％氯仿)而得到一種粘性白色固體，鑒定其為1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷(90mg，0.25mmol，66％)。
D.1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷三氟乙酸鹽將1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷(90mg，0.23mmol)溶于4M HCl/二噁烷(15mL)。在室溫下45分鐘后在真空中除去溶劑。通過制備型HPLC純化殘余物(Vydac C18，5-50％ 0.1％TFA/乙腈-0.1％TFA/水、40分鐘內(nèi)、以3mL/分鐘的流速)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分凍干至得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷三氟乙酸鹽(51mg)。
+＝292.1實(shí)施例53-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷三氟乙酸鹽 A.3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷將Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-鳥氨酸(2.73g，6mmol)溶于CH2Cl2/DMF(9∶1，100mL)。在0℃下向該溶液中加入1-羥基苯并三唑水合物(1.53g，10mmol)、水溶性碳化二亞胺(1.34g，7mmol)、噻唑烷(1.28g，18mmol)和三乙胺(80mg，8mmol)。在0℃-室溫下18小時(shí)后，在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(100mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×25mL)、飽和NaHCO3(2×25mL)、水(2×25mL)和鹽水(1×25mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑75％乙酸乙酯，25％pet.ether)而得到一種白色固體，鑒定其為3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷(2.55g，4.85mmol，81％)。
B.3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷將3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(9-芴基甲氧基羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷(1.15g，2.13mmol)溶于乙腈(20mL)。加入二乙胺(5mL)。在室溫下90分鐘后在真空中除去溶劑并通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑90％氯仿、7％甲醇、3％三乙胺)而得到一種淡黃色油狀物，鑒定其為3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷(530mg，1.67mmol，78％)。
C.3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷將3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷(80mg，0.27mmol)溶于CH2Cl2(20mL)。在0℃下向該溶液中加入PyBroP(146mg，0.3mmol)、2-吡嗪羧酸(37mg，0.3mmol)和三乙胺(90mg，0.9mmol)。在0-室溫下18小時(shí)后在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(70mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、水(2×20mL)和鹽水(1×20mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑3％甲醇，97％氯仿)而得到一種粘性白色固體，將其鑒定為3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷(45mg，0.11mmol，41％)。
D.3-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷三氟乙酸鹽將3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷(45mg，0.11mmol)溶于4M HCl/二噁烷(10mL)。室溫下45分鐘后在真空中除去溶劑。通過制備型HPLC純化殘余物(Vydac C18，5-50％ 0.1％TFA/乙腈-0.1％TFA/水、40分鐘內(nèi)、以3mL/分鐘的流速)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分凍干至得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為3-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷三氟乙酸鹽(14mg)。
+＝310.0實(shí)施例6(2S)-1-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽 A.(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨基)吡咯烷-2-腈通過實(shí)施例2中對(duì)賴氨酸衍生物所述的方法來(lái)制備(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨基)吡咯烷-2-腈。
B.(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨基)-吡咯烷-2-腈將(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨基)吡咯烷-2-腈(80mg，0.26mmol)溶于CH2Cl2(20mL)。向該溶液中加入2-氯吡啶-3-羰基氯(55mg，0.32mmol)并用三乙胺將pH調(diào)節(jié)至pH為9。在室溫下18小時(shí)后在真空中除去溶劑且將殘余物溶于乙酸乙酯(70mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、水(2×20mL)和鹽水(1×20mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑95％乙酸乙酯，5％pet.ether)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨基)-吡咯烷-2-腈(60mg，0.14mmol，53％)。
C.(2S)-1-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽將(2S)-1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨基]吡咯烷-2-腈(60mg，0.14mmol)溶于三氟乙酸(5mL)。在室溫下1小時(shí)后在真空中除去溶劑。通過制備型HPLC純化殘余物(Vydac C18，5-50％ 0.1％TFA/乙腈-0.1％TFA/水、40分鐘內(nèi)、以3mL/分鐘的流速)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分凍干至得到一種白色固體，鑒定其為(2S)-1-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽(52mg)。
+＝350.1實(shí)施例71-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷鹽酸鹽 A.1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨?；?ornithyl))-吡咯烷將1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨?；?-吡咯烷(20mg，0.069mmol)溶于CH2Cl2(5mL)。向該溶液中加入2-氯吡啶-3-羰基氯(14mg，0.076mmol)并用三乙胺將pH調(diào)節(jié)至pH為9。在室溫下1小時(shí)后在真空中除去溶劑且將殘余物溶于乙酸乙酯(70mL)。將該溶液用0.3M KHSO4(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、水(2×20mL)和鹽水(1×20mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑10％甲醇，90％二氯甲烷)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為1-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨?；?吡咯烷(19mg，0.045mmol，63％)。
B.1-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷鹽酸鹽將1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷(19mg，0.045mmol)溶于4M HCl/二噁烷(10mL)。室溫下45分鐘后在真空中除去溶劑而得到一種白色固體，鑒定其為1-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷鹽酸鹽(15mg)。
+＝325.1實(shí)施例83-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽 A.3-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨?；?-噻唑烷將3-(Nα-(叔丁氧基羰基)-L-鳥氨?；?噻唑烷(136mg，0.45mmol)溶于CH2Cl2(10mL)。向該溶液中加入2-氯吡啶-3-羰基氯(88mg，0.5mmol)并用三乙胺將pH調(diào)節(jié)至pH為9。在室溫下1小時(shí)后在真空中除去溶劑且將殘余物溶于乙酸乙酯(70mL)。將該溶液用0.3MKHSO4(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、水(2×20mL)和鹽水(1×20mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并在真空中蒸發(fā)。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑1.5％甲醇，98.5％二氯甲烷)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為3-(Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨?；?噻唑烷(30mg，0.068mmol，15％)。
B.3-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽將3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷(30mg，0.068mmol)溶于4M HCl/二噁烷(10mL)。室溫下45分鐘后在真空中除去溶劑而得到一種白色固體，鑒定其為1-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽(25mg)。
+＝342.1實(shí)施例93-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽 A.3-(Nα-(叔丁氧基羰基)賴氨酸基)噻唑烷按照在實(shí)施例5中對(duì)相應(yīng)鳥氨酸衍生物所述的方法分兩步制備3-(Nα-(叔丁氧基羰基)賴氨酸基)噻唑烷。
B.3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]噻唑烷將3-(Nα-(叔丁氧基羰基)賴氨酸基)噻唑烷(52mg，0.165mmol)溶于DMF(10mL)。加入6-氯煙酰腈(22.8mg，0.165mmol)和碳酸鉀(45.8mg，0.3mmol)。將該反應(yīng)混合物在70℃下攪拌18小時(shí)并在真空中除去溶劑。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑97％氯仿，3％甲醇)而得到一種無(wú)色油狀物，將其鑒定為3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]噻唑烷(30mg，0.067mmol，43％)。
C.3-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽將3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]噻唑烷(30mg，0.067mmol)溶于4M HCl/二噁烷(20mL)。室溫下1小時(shí)后在真空中除去溶劑而得到一種白色固體，將其鑒定為3-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽(24mg，0.067mmol，100％)。
+＝348.2實(shí)施例10(2S)-1-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽 A.(2S)-1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈將(2S)-1-(Nα-(叔丁氧基羰基)賴氨酸基)吡咯烷-2-腈(150mg，0.46mmol)溶于DMF(10mL)。加入6-氯煙酰腈(70mg，0.51mmol)和碳酸鉀(130mg，0.94mmol)。將該反應(yīng)混合物在70℃下攪拌18小時(shí)并在真空中除去溶劑。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑97％氯仿，3％甲醇)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(2S)-1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈(71mg，0.17mmol，37％)。
B.(2S)-1-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽將(2S)-1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈(71mg，0.17mmol)溶于4M HCl/二噁烷(20mL)。室溫下1小時(shí)后在真空中除去溶劑而得到一種白色固體，鑒定其為(2S)-1-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈鹽酸鹽(62mg，0.17mmol，100％)。
+＝327.1實(shí)施例11(2S)-1-[Nω-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽 A.(2S)-1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈將(2S)-1-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈(140mg，0.45mmol)溶于DMF(10mL)。加入2-氯-5-(三氟甲基)吡啶(90mg，0.49mmol)和碳酸鉀(130mg，0.92mmol)。將該反應(yīng)混合物在70℃下攪拌18小時(shí)并在真空中除去溶劑。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑97％氯仿，3％甲醇)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為(2S)-1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈(58mg，0.13mmol，28％)。
B.(2S)-1-[Nω-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈三氟乙酸鹽將(2S)-1-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈(58mg，13mmol)溶于4M HCl/二噁烷(20mL)。室溫下1小時(shí)后在真空中除去溶劑而得到一種白色固體，鑒定其為(2S)-1-[Nω-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈鹽酸鹽(51mg，0.13mmol，100％)。
+＝356.2實(shí)施例123-[Nω-(2-喹啉基甲基)-L-賴氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽 A.3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-喹啉基甲基)-L-賴氨酸基]噻唑烷將3-[Nα-(叔丁氧基羰基)賴氨酸基]噻唑烷(100mg，0.32mmol)溶于甲醇(10mL)。加入2-喹啉甲醛(61mg，0.39mmol)。1小時(shí)后加入乙酰氧基硼氫化鈉(138mg，0.65mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)并在真空中除去溶劑。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑93％氯仿，7％甲醇)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-喹啉基甲基)-L-賴氨酸基]噻唑烷(38mg，0.083mmol，26％)。
B.3-[Nω-(2-喹啉基甲基)-L-賴氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽將3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-喹啉基甲基)-L-賴氨酸基]噻唑烷(38mg，0.083mmol)溶于4M HCl/二噁烷(20mL)。在室溫下1小時(shí)后在真空中除去溶劑而得到一種白色固體，將其鑒定為3-[Nω-(2-喹啉基甲基)-L-賴氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽(31mg，0.078mmol，94％)。
+＝358.2實(shí)施例133-[Nω-(2-喹啉基甲基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽 A.3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-喹啉基甲基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷將3-[Nα-(叔丁氧基羰基)鳥氨酸基]噻唑烷(98mg，0.33mmol)溶于甲醇(10mL)。加入2-喹啉甲醛(52mg，0.33mmol)。1小時(shí)后加入乙酰氧基硼氫化鈉(119mg，0.56mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)并在真空中除去溶劑。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑93％氯仿，7％甲醇)而得到一種無(wú)色油狀物，鑒定其為3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-喹啉基甲基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷(45mg，0.10mmol，36％)。
B.3-[Nω-(2-喹啉基甲基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽將3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-喹啉基甲基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷(45mg，0.1mmol)溶于4M HCl/二噁烷(20mL)。在室溫下1小時(shí)后在真空中除去溶劑而得到一種白色固體，將其鑒定為3-[Nω-(2-喹啉基甲基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽(38mg，0.098mmol，98％)。
+＝345.2實(shí)施例143-[Nω-(2-喹喔啉?；?-L-賴氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽 A.3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-喹喔啉?；?-L-賴氨酸基]噻唑烷將3-[N-(叔丁氧基羰基)賴氨酸基]噻唑烷(128mg，0.4mmol) 溶于CH2Cl2(10mL)。加入2-喹喔啉?；?85mg，0.44mmol)和碳酸鉀(45.8mg，0.3mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)并在真空中除去溶劑。通過急驟層析法純化殘余物(洗脫劑99.5％氯仿，0.5％甲醇)而得到一種無(wú)色油狀物，將其鑒定為3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-喹喔啉?；?-L-賴氨酸基]噻唑烷(140mg，0.296mmol，74％)。
B.3-[Nω-(2-喹喔啉?；?-L-賴氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽將3-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nω-(2-喹喔啉?；?-L-賴氨酸基]噻唑烷(140mg，0.296mmol)溶于4M HCl/二噁烷(20mL)。在室溫下1小時(shí)后在真空中除去溶劑而得到一種白色固體，鑒定其為3-[Nω-(2-喹喔啉?；?-L-賴氨酸基]噻唑烷鹽酸鹽(128mg，0.296mmol，100％)。
+＝374.2通過與上述方法類似的方法制備下表中列出的實(shí)施例。表1-實(shí)施例15-36 表2-實(shí)施例37-58 表3-實(shí)施例59-91 表4-實(shí)施例92-115 表5-實(shí)施例116-120 實(shí)施例121體外活性的測(cè)定按照WO95/15309中所述的方法檢測(cè)作為DP-IV抑制劑的化合物。上述實(shí)施例中所述的全部化合物均為具有小于300nM Ki值的DP-IV競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。
實(shí)施例122體內(nèi)活性的測(cè)定使用標(biāo)準(zhǔn)口服葡萄糖耐量試驗(yàn)在Zucker肥胖型大鼠中證實(shí)了所選擇化合物的抗糖尿病作用。給對(duì)照組大鼠通過口服飼喂給予葡萄糖溶液并測(cè)定血糖水平。這些大鼠表現(xiàn)出顯著的血糖過高。以不同濃度將本發(fā)明的化合物溶于葡萄糖溶液，使得可以在用葡萄糖攻擊的同時(shí)給予大鼠不同劑量的所述化合物。在接受0.1-100mg/kg的DP-IV抑制劑的動(dòng)物中，血糖過高的移動(dòng)以劑量依賴性方式減少。
實(shí)施例123藥物制劑由下列組分制備含有100mg實(shí)施例1化合物作為活性劑的片劑
實(shí)施例1的化合物 200.0g玉米淀粉71.0g羥丙基纖維素18.0g羧甲基纖維素鈣 13.0g硬脂酸鎂3.0g乳糖195.0g總計(jì)500.0g將所述物質(zhì)混合且然后壓制成2000片250mg的片劑，它們各自含有100mg的實(shí)施例1的化合物。
上述實(shí)施例證明本發(fā)明的化合物在體外是DP-IV的抑制劑且在體內(nèi)是有效的抗血糖過高藥物。因此，預(yù)計(jì)它們可用作治療葡萄糖耐量異常、II型糖尿病和這種酶的抑制使得基礎(chǔ)病理學(xué)情況或癥狀得到改善的其它疾病的治療劑。
本發(fā)明進(jìn)一步在下列權(quán)利要求中定義。
權(quán)利要求
1.選自通式1的衍生物、其互變體及其立體異構(gòu)體的化合物和所述衍生物、互變體和異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽 其中R1是氫原子或腈基；X1選自硫原子、氧原子、磺?；蛠喖谆?；X2是羰基、亞甲基或共價(jià)鍵；Het是選自吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基及其苯并稠合類似物的含氮芳香雜環(huán)，它們均可以任意地在一個(gè)或多個(gè)碳原子上被取代且其中所述的取代基選自C1-C6烷基、羥基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷氨基、二(C1-C6烷基)氨基、氟、氯、溴、三氟甲基、硝基、氰基、羧基和C1-C6烷氧基羰基；且n為1-5。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是腈基。
3.權(quán)利要求的化合物，其中所述腈基的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)如通式2所示
4.權(quán)利要求1或2的化合物，其中與伯胺相鄰的中心的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)是如通式3所示的S構(gòu)型
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R1是腈基且所述腈基的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)如通式4所示
6.上述任意一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中X1選自硫原子和亞甲基。
7.上述任意一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中n為3或4。
8.上述任意一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，它選自(2S)-1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈；(2S)-1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈；(2S)-1-[(2’S)-2’-氨基-4’-(吡嗪基-2″-羰基氨基)丁?；鵠吡咯烷-2-腈；(4R)-3-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-賴氨酸基]噻唑烷-4-腈；1-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷；3-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷；1-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷；(2S)-1-[Nω-(2-氯吡啶基-3-羰基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈；3-[Nω-(吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷；3-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]噻唑烷；(2S)-1-[Nω-(5-氰基-2-吡啶基)-L-賴氨酸基]吡咯烷-2-腈；(2S)-1-[Nω-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈；3-[Nω-(2-喹啉基甲基)-L-賴氨酸基]噻唑烷；3-[Nω-(2-喹啉基甲基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷；3-[Nω-(2-喹喔啉?；?-L-賴氨酸基]噻唑烷；3-[Nω-(2-喹喔啉?；?-L-鳥氨酸基]噻唑烷；(2S)-1-[Nω-(2-喹喔啉?；?L-鳥氨酸基]吡咯烷-2-腈；3-[Nω-(6-甲基吡嗪基-2-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷；3-[Nω-(異喹啉-3-羰基)-L-鳥氨酸基]噻唑烷；和3-[Nω-(6-三氟甲基煙?；?-L-鳥氨酸基]噻唑烷。
9.用于人體治療應(yīng)用的藥物組合物，它包括至少一種上述任意一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物。
10.權(quán)利要求9的組合物，用于治療2型糖尿病或葡萄糖耐量異常。
11.權(quán)利要求9的組合物，用于治療生長(zhǎng)激素缺乏或多囊性卵巢綜合征。
12.權(quán)利要求9的組合物，用于治療自身免疫病或炎癥疾病。
13.權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)的化合物在制備用于治療2型糖尿病、葡萄糖耐量異常、生長(zhǎng)激素缺乏、多囊性卵巢綜合征以及自身免疫病和炎癥疾病中的至少一種疾病的藥物組合物中的用途。
14.權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)的化合物在治療2型糖尿病、葡萄糖耐量異常、生長(zhǎng)激素缺乏、多囊性卵巢綜合征以及自身免疫病和炎癥疾病中的至少一種疾病中的用途。
15.2型糖尿病、葡萄糖耐量異常、生長(zhǎng)激素缺乏、多囊性卵巢綜合征以及自身免疫病和炎癥疾病中的至少一種疾病的治療方法，該方法包括給予需這種治療的患者治療有效量的權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)的化合物。
全文摘要
通式(1)的化合物是新的，其中R
文檔編號(hào)C07D277/20GK1426409SQ0180867
公開日2003年6月25日 申請(qǐng)日期2001年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月26日
發(fā)明者D·M·伊萬(wàn)斯, G·R·W·皮特 申請(qǐng)人:費(fèi)林股份公司