專利名稱：降壓劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及降壓劑、臟器肥大抑制劑和動脈肥厚抑制劑以及它們的篩選方法。
背景技術(shù)：
已知腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)與血壓的上升有關(guān)〔東女醫(yī)大雜志60(4)342～350，1990〕。也就是說，由肝臟分泌的血管緊張素原通過來源于腎臟的腎素的作用轉(zhuǎn)變?yōu)檠芫o張素I(以下稱為AI)，再通過血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin Converting Enzyme)(ACE)的作用轉(zhuǎn)變?yōu)檠芫o張素II(以下稱為AII)。AII直接作用于血管，引起血管收縮，并作用于腎上腺皮質(zhì)，促進醛固酮的生物合成和分泌，引起Na和水的潴留，從而引起血壓上升。
因此，作為針對血壓上升的治療方法，目前作用于腎素-血管緊張素系統(tǒng)的藥物作為最新型的降壓劑占有一定的地位，ACE抑制劑得到了實用化。同時，對于腎素抑制劑也進行了作為降壓劑的研究，但是由于其副作用放棄了開發(fā)。ACE抑制劑是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的特異性抑制劑，通用名卡托普利是很有名的。但是，ACE抑制劑也有干咳等副作用，且臨床有效性并不能達到體外試驗中酶活性抑制效果的程度，因此嘗試了與具有其他作用機理的腎素-血管緊張素系統(tǒng)抑制劑并用的療法。因此，對以前報道或使用的降壓劑以外的效果高的降壓劑、血管肥厚抑制劑以及臟器肥大抑制劑的需求高。
腎素主要在腎臟中作為其前體——406個氨基酸構(gòu)成的前腎素原(pre-pro-renin)進行生物合成，切斷N末端的23個氨基酸生成腎素原(pro-renin)，接著再由N末端切斷43個氨基酸，得到340個氨基酸構(gòu)成的腎素。腎素是特異性地水解血管緊張素原生成AI的蛋白質(zhì)分解酶。但是腎素的前體——腎素原通常不顯示這種酶活性。因此，盡管腎素原的血中存在量為腎素的約10倍，但是認為腎素-血管緊張素系統(tǒng)中的作用物質(zhì)仍是腎素或腎素原水解生成的腎素。
本發(fā)明人等已經(jīng)使用抗人腎素原pf抗體，發(fā)現(xiàn)惰性型腎素前體腎素原如果與特異性識別由腎素原生成腎素時切斷的N末端的43個氨基酸片斷(以下稱為“原片斷(profragment)”或“pf”)的抗體在體外結(jié)合形成免疫復(fù)合體，則在生理條件下非酶地表達蛋白功能即酶活性(腎素活性)，且不改變一維結(jié)構(gòu)(特開平10-279600號公報、美國專利第5945512號)。迄今為止作為活化腎素原的手段，已知不利用蛋白分解酶向腎素轉(zhuǎn)化、不在酸性和低溫狀態(tài)下改變一維結(jié)構(gòu)進行活化的方法(Nature，288，702-705，1980)、(J，Biol.Chem.，262，2472-2477，1987)、(Clin.Chem.，37，1811-1819，1991)、(J.Biol.Chem.，267，11753-11759，1992)，以及使低分子的腎素抑制劑結(jié)合在腎素原的三維結(jié)構(gòu)的深溝中隱藏的酶活性部位形成開放型的方法(J.Biol.Chem.，267，22837-22842，1992)等。但是，機體內(nèi)腎素原活化的機理及其作用尚不明確。
發(fā)明公開本發(fā)明人等考慮上述情況進行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過將能夠活化腎素原的抗pf抗體或該抗體的抗原即來源于腎素原原片斷的部分肽給予高血壓病理模型動物，能夠獲得降壓效果、臟器肥大抑制效果和動脈肥厚抑制效果。也就是說，發(fā)現(xiàn)通過抑制腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用，能夠在體內(nèi)抑制腎素原的活化，初次證實腎素原的活化在體內(nèi)進行。基于上述知識，發(fā)現(xiàn)通過使用控制機體內(nèi)腎素原活化的物質(zhì)，可以提供降壓劑、臟器肥大抑制劑和動脈肥厚抑制劑以及它們的篩選方法，從而完成了本發(fā)明。
也就是說，本發(fā)明的方式可以是1)能夠控制腎素原活化的物質(zhì)的篩選方法，以由于該腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的調(diào)節(jié)能力作為指標(biāo)進行，2)能夠控制腎素原活化的物質(zhì)的篩選方法，以對腎素原的原片斷區(qū)域的抗體引起的腎素原活化的調(diào)節(jié)能力作為指標(biāo)進行，3)如上述1)或2)的篩選方法，作為篩選對象的物質(zhì)是以腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列中至少3個氨基酸序列的信息為基礎(chǔ)設(shè)計的物質(zhì)，4)如上述1)或2)的篩選方法，作為篩選對象的物質(zhì)是以腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列的N末端起第1至第19的氨基酸序列或第27至第41的氨基酸序列中至少3個氨基酸序列的信息為基礎(chǔ)設(shè)計的物質(zhì)，5)如上述1)或2)的篩選方法，作為篩選對象的物質(zhì)是以腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列的N末端起第5至第19的氨基酸序列中至少3個氨基酸序列的信息為基礎(chǔ)設(shè)計的物質(zhì)，6)如上述3)至5)中任意一項的篩選方法，作為篩選對象的物質(zhì)是肽，7)如上述3)至5)中任意一項的篩選方法，作為篩選對象的物質(zhì)是低分子化合物，8)如上述1)至7)中任意一項的篩選方法，腎素原是人腎素原，9)如上述1)至7)中任意一項的篩選方法，腎素原是大鼠腎素原，10)腎素原活化控制物質(zhì)，具有控制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，11)按照上述1)至9)中任意一項的方法篩選的腎素原活化控制物質(zhì)，具有控制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，12)腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，13)腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且不具有腎素抑制活性，14)按照上述1)至9)中任意一項的方法篩選的腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，15)按照上述1)至9)中任意一項的方法篩選的腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且不具有腎素抑制活性，16)腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由具有從腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列中選擇的部分序列的肽或其等價肽構(gòu)成，17)腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由具有從腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列中選擇的連續(xù)3個至10個的部分序列的肽構(gòu)成，18)腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由具有從腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列中選擇的連續(xù)3個至8個的部分序列的肽構(gòu)成，19)腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由具有從腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列中選擇的連續(xù)3個至6個的部分序列的肽構(gòu)成，20)腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由從序列表中序列號7至14記載的肽中選擇的肽構(gòu)成，21)腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由從序列表中序列號3、序列號4和序列號15至20記載的肽中選擇的肽構(gòu)成，22)腎素原活化控制物質(zhì)，是根據(jù)腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列的信息設(shè)計的低分子化合物，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，23)如上述16)至22)中任意一項的腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且不具有腎素抑制活性，24)如上述12)至23)中任意一項的腎素原活化控制物質(zhì)，抑制腎素原活化的效果是通過腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用的拮抗作用產(chǎn)生的，25)腎素原活化控制物質(zhì)，其特征在于，基于對腎素原的原片斷區(qū)域的抗原抗體反應(yīng)除去腎素原，從而在機體內(nèi)抑制腎素原活化，26)腎素原活化控制物質(zhì)，基于對腎素原的原片斷區(qū)域的抗原抗體反應(yīng)除去腎素原，從而能夠在機體內(nèi)抑制腎素原活化，并由對腎素原的原片斷區(qū)域的抗體構(gòu)成，27)降壓劑，含有上述12)至26)中任意一項的腎素原活化控制物質(zhì)的至少1種作為有效成分，28)如上述27)所述的降壓劑，作為降壓效果，至少在機體內(nèi)給藥后第12小時，顯示10％程度以上的降壓率，29)如上述27)的降壓劑，僅對高血壓患者選擇性地發(fā)揮降壓效果，30)臟器肥大抑制劑，含有上述12)至26)中任意一項的腎素原活化控制物質(zhì)的至少1種作為有效成分，31)如上述30)所述的臟器肥大抑制劑，能夠在心臟和/或腎臟中抑制臟器肥大，32)動脈肥厚抑制劑，含有上述12)至26)中任意一項的腎素原活化控制物質(zhì)的至少1種作為有效成分，33)高血壓的治療方法，使用上述27)至29)中任意一項的降壓劑，34)心衰或腎衰的治療方法，使用上述30)或31)的臟器肥大抑制劑，35)伴有血管肥厚的疾病的治療方法，使用上述32)所述的動脈肥厚抑制劑。
發(fā)明的最佳實施方式以下詳細說明本發(fā)明，本說明書中使用的技術(shù)用語和科學(xué)用語只要沒有另外進行定義，均具有本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有常規(guī)知識的人通常理解的含義。在本說明書中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參照已知的各種方法。公開這種引用的公知方法的發(fā)行物等資料通過對其引用，將其全部作為完整記載的內(nèi)容引入本說明書中。
(機體內(nèi)抑制腎素原活化產(chǎn)生的效果)本發(fā)明人等已經(jīng)使用抗人pf抗體，發(fā)現(xiàn)通過對腎素原的pf區(qū)域的氨基酸片斷的特異抗體，能夠在體外將腎素原活化成顯示酶活性的開放型結(jié)構(gòu)，而不改變其的一維結(jié)構(gòu)(特開平10-279600號公報、美國專利第5945512號)?；谶@一發(fā)現(xiàn)，制作特異地識別大鼠pf肽的抗體(抗大鼠pf抗體)，所述大鼠pf肽是在大鼠腎素原的一維結(jié)構(gòu)上，與人腎素原的pf區(qū)域的肽(人pf肽)在氨基酸序列的順序上同一部位的大鼠pf肽，并將上述抗體給予高血壓病理模型動物即高血壓自然發(fā)病大鼠(SHR)。結(jié)果，該抗大鼠pf抗體盡管能夠在體外活化大鼠腎素原，而不改變其一維結(jié)構(gòu)，但是如試驗例所示在體內(nèi)顯示持續(xù)的降壓效果。一般，抗體在血液中與抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合體，接著該形成的抗原抗體復(fù)合體通過免疫系統(tǒng)從血液中除去。也就是說，可以認為腎素原或活化的腎素原通過抗pf抗體的結(jié)合從血液中除去，從而得到降壓效果?；蛘撸部梢哉J為通過抗pf抗體與血液中的腎素原或活化的腎素原結(jié)合，抑制腎素原或活化的腎素原與其作用部位結(jié)合，從而得到降壓效果。
另外，本發(fā)明人等合成了能夠在體外活化大鼠腎素原的上述抗大鼠pf抗體的抗原，即來源于大鼠腎素原原片斷的部分肽，并給予SHR。這些肽與人pf肽抑制抗人pf抗體引起的體外的人腎素原活化同樣，能夠拮抗抑制抗大鼠pf抗體引起的體外的大鼠腎素原活化。也就是說，這些肽能夠抑制由于蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有大鼠腎素原一維結(jié)構(gòu)改變但伴有多維結(jié)構(gòu)改變的活化。如果將這些肽給予SHR，如下所述，至少給藥后第12小時能夠獲得充分的降壓效果。但是，即使將這些肽給予正常大鼠，血壓也沒有變化。如下述實施例所示，這些肽的經(jīng)時降壓效果與腎素抑制劑H6137(Sigma公司)或腎素中和抗體產(chǎn)生的效果不同，由于確認降壓效果時間長，因此判斷這些肽產(chǎn)生的降壓效果不是抑制腎素產(chǎn)生的。另外，判斷出這些肽如果連續(xù)14天給予SHR，則抑制心臟和腎臟的肥大，而且也抑制動脈的肥厚即血管改型。通過給予上述肽獲得的這些效果推測是通過上述肽，抑制機體內(nèi)大鼠腎素原的蛋白質(zhì)間相互作用引起的伴有結(jié)構(gòu)改變的活化，或者抑制大鼠腎素原或活化的大鼠腎素原與其作用部位結(jié)合而獲得的效果。
根據(jù)上述結(jié)果，可以判斷出SHR存在腎素原通過與腎素原結(jié)合性蛋白質(zhì)相互作用表達酶活性，使腎素-血管緊張素系統(tǒng)活化，引發(fā)高血壓的可能性，腎素原的pf肽和抗pf肽抗體對于腎素-血管緊張素系統(tǒng)活化引起的高血壓顯示降壓作用。這種腎素原與高血壓的關(guān)系以及腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的體內(nèi)的腎素原活化是在這里首次確認的。另外，還發(fā)現(xiàn)能夠抑制腎素原的蛋白質(zhì)間相互作用引起的伴有結(jié)構(gòu)改變的活化以及腎素原或活化的腎素原與其作用部位的蛋白質(zhì)間相互作用的腎素原活化控制物質(zhì)作為降壓劑、臟器肥大抑制劑、動脈肥厚抑制劑等有用。
大鼠腎素原的pf肽與人腎素原pf肽的氨基酸殘基數(shù)相同，但是構(gòu)成氨基酸不同。盡管如此，如上所述與在體外能夠活化人腎素原的抗人pf抗體的表位肽即人pf肽在一維結(jié)構(gòu)上的氨基酸序列順序中同一部位的大鼠pf肽以及對該pf肽的特異抗體在大鼠高血壓病理模型中顯示降壓效果。因此，可以說與高血壓有關(guān)的腎素原的藥理作用、腎素原活化涉及的其結(jié)構(gòu)上的部位以及其活化的機理不存在種的差異。也就是說，雖然上述肽的降壓效果是通過大鼠高血壓病理模型動物確認的，但是考慮人腎素原的pf肽的氨基酸序列，選擇適當(dāng)?shù)碾?，?dāng)然對于人的高血壓也可以期待同樣的效果。
而且，如上所述，在體外惰性型酶前體與其抗pf肽特異抗體相互作用表達酶活性即蛋白功能時，由于其機理超越種的差異而存在，因此pf肽、對該pf肽的抗體以及病理模型動物等作為用于篩選蛋白功能表達引起的病態(tài)的治療劑的篩選方法有用。
(腎素原活化控制物質(zhì)的篩選方法)本發(fā)明的能夠控制腎素原活化的物質(zhì)的篩選方法特征在于，以腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的腎素原活化的調(diào)節(jié)能力作為指標(biāo)進行。其中，腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的腎素原活化是指，由于pf區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用產(chǎn)生的，不伴有腎素原的一維結(jié)構(gòu)改變，但伴有多維結(jié)構(gòu)改變的酶活性部位的開放。因此，由于該蛋白質(zhì)間相互作用活化的腎素原保持與活化前的腎素原的一維結(jié)構(gòu)相同的氨基酸序列，但能夠顯示腎素樣的酶活性。作為具有pf區(qū)域上的蛋白質(zhì)間相互作用的蛋白質(zhì)，例如識別pf肽活化的抗體、作為機體內(nèi)腎素原或活化的腎素原的作用部位的蛋白質(zhì)以及能夠與腎素原結(jié)合并將其活化的血液中的蛋白質(zhì)等。
上述腎素原活化控制物質(zhì)的篩選方法可以利用自身公知的藥物篩選系統(tǒng)構(gòu)筑。例如，使用腎素原和能夠活化腎素原的抗pf抗體，通過測定腎素原與該抗pf抗體的結(jié)合，能夠篩選抑制腎素原活化的物質(zhì)。另外，例如使用腎素原和能夠活化腎素原的抗pf抗體，通過測定活化的腎素原的酶活性，可以篩選抑制腎素原活化的物質(zhì)或者抑制腎素原的酶活性的物質(zhì)。當(dāng)然篩選方法并不限于這些。另外，如上所述，由于腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列的構(gòu)成氨基酸因種的不同而不同，因此人腎素原活化控制物質(zhì)的篩選使用人腎素原和例如對人腎素原的pf肽的抗體進行是1種優(yōu)選的方式。
具體而言，例如利用按照特開平10-279600號公報和美國專利第5945512號的記載制備的能夠特異地識別人腎素原以及人腎素原pf肽活化人腎素原的抗體，可以構(gòu)筑篩選系統(tǒng)。
上述腎素原活化控制物質(zhì)的篩選方法中，作為篩選對象的物質(zhì)可以廣泛利用低分子化合物、來源于天然物的化合物或肽等在自身公知的藥物篩選系統(tǒng)中使用的作為篩選對象的候補物質(zhì)。
另外，以腎素原特別是人腎素原的pf區(qū)域的氨基酸序列信息為基礎(chǔ)設(shè)計的肽和低分子化合物也可以作為篩選對象。
人腎素原的pf區(qū)域的氨基酸序列是已知的，由特開平8-285852所示的43個氨基酸序列(序列表中的序列號1)構(gòu)成。腎素原的pf肽的氨基酸序列是對于設(shè)計篩選腎素原活化控制物質(zhì)的對象物質(zhì)有用的信息。特別是腎素原pf區(qū)域的N末端起第1～第19(pf1-19)，特別是第5～第19(pf5-19)，以及第27～第41(pf27-41)的氨基酸序列中至少3個，更優(yōu)選至少4個連續(xù)的氨基酸序列的信息對于設(shè)計腎素原活化控制物質(zhì)有用。來源于人的pf1-19、來源于人的pf5-19、來源于人的pf27-41、來源于大鼠的pf1-19、來源于大鼠的pf5-19以及來源于大鼠的pf27-41的氨基酸序列分別如序列表中的序列號2、3、4、6、7和8所示。以下，將pf區(qū)域的N末端起例如第M～第N的肽記做pfM-N。
如上所述，腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列即使種不同，氨基酸殘基數(shù)也相同，但是其構(gòu)成氨基酸不同。在試驗例中，例舉大鼠腎素原的pf肽的氨基酸序列(序列表中的序列號5)作為對于設(shè)計用于篩選腎素原活化控制物質(zhì)的對象物質(zhì)有用的信息。在實施例中合成了大鼠腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列片斷，即pf1-11(序列表中的序列號9)、pf5-19(序列表中的序列號7)、pf1-4(序列表中的序列號10)、pf1-7(序列表中的序列號11)、pf5-11(序列表中的序列號12)、pf12-19(序列表中的序列號13)、pf11-15(序列表中的序列號14)和pf27-41(序列表中的序列號8)，確認了其抑制腎素原活化產(chǎn)生的降壓效果、臟器肥大抑制效果以及動脈肥厚抑制效果，但是未必限于這些序列。只要是本領(lǐng)域技術(shù)人員，就可以按照自身公知的方法適當(dāng)合成至少3個的肽，以該合成肽作為基礎(chǔ)設(shè)計合成作為篩選對象的物質(zhì)。
另外，如上所述，對與能夠在體外活化人腎素原的抗人pf抗體的表位即人pf肽在一維結(jié)構(gòu)上的氨基酸序列順序中同一部位的大鼠pf肽的特異抗體在大鼠高血壓病理模型中顯示降壓效果，因此可以容易地推測與大鼠pf肽在一維結(jié)構(gòu)上的氨基酸序列順序相同的人腎素原pf肽對于人能夠獲得同樣的效果。作為優(yōu)選方式之一，將人腎素原的pf肽作為用于設(shè)計作為篩選對象的物質(zhì)的信息。
作為篩選對象的物質(zhì)只要是肽，如上所述就能夠以腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列的信息為基礎(chǔ)適當(dāng)設(shè)計，供于選擇。構(gòu)成該肽的氨基酸不一定必須與腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列相同，只要具有與該肽同樣的功能，可以是在該肽的氨基酸序列中適當(dāng)導(dǎo)入缺失、替換、添加、插入等變異得到的肽(以下，有時也稱為等價肽)。
另外，作為篩選對象的物質(zhì)也可以是根據(jù)基于pf區(qū)域的氨基酸序列的二維和/或三維結(jié)構(gòu)的信息，以其結(jié)構(gòu)上的互補性為基礎(chǔ)進行藥物設(shè)計得到的低分子化合物。
在上述方法中，可以得到能夠抑制抗人pf肽抗體引起的人腎素原活化的物質(zhì)。而且，以具有從pf區(qū)域的氨基酸序列中選擇的部分序列的肽、已知的降壓劑等為基礎(chǔ)收集信息，并通過使用動物模型的試驗等，能夠由得到的物質(zhì)選擇具有降壓效果、臟器肥大抑制效果、動脈肥厚抑制效果的物質(zhì)。
(腎素原活化控制物質(zhì))因此本發(fā)明也提供腎素原活化控制物質(zhì)，該物質(zhì)能夠控制基于腎素原的pf區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的腎素原活化。
本發(fā)明的1種方式是能夠控制人腎素原活化的腎素原活化控制物質(zhì)。
本發(fā)明的腎素原活化控制物質(zhì)可以是競爭性抑制活化腎素原的蛋白質(zhì)間相互作用的物質(zhì)、在腎素原或活化的腎素原的作用部位拮抗性抑制其結(jié)合的物質(zhì)、對腎素原或活化的腎素原具有抗原抗體反應(yīng)性的物質(zhì)、或者作用于腎素原或活化的腎素原的作用部位抑制腎素原或活化的腎素原作用的物質(zhì)等。
優(yōu)選方式之一是上述腎素原活化控制物質(zhì)具有抑制基于腎素原的pf區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的腎素原活化的功能，并且是不具有腎素抑制活性的腎素原活化控制物質(zhì)。也就是說，上述腎素原活化控制物質(zhì)作為其作用機理不顯示對腎素的直接抑制作用。因此，能夠抑制病態(tài)時活化的腎素原的活性，而不會象腎素抑制劑等那樣抑制在機體的生命維持機理中承擔(dān)重要作用的腎素-血管緊張素系統(tǒng)。這是本發(fā)明的腎素原活化控制物質(zhì)的重要特征。
作為具體實例，可以例舉具有從腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列中選擇的部分序列的肽、該肽的等價肽、根據(jù)腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列的信息設(shè)計的低分子化合物以及對腎素原pf區(qū)域的抗體等，但是并不限于這些。
作為優(yōu)選方式之一，上述肽是具有從人腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列中選擇的部分序列的肽或該肽的等價肽。例如，作為來源于人腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列的肽，可以例舉以下的肽。
hp1人腎素原pf1-11(序列表中的序列號15)hp2人腎素原pf5-11(序列表中的序列號16)hp3人腎素原pf5-19(序列表中的序列號3)hp4人腎素原pf1-4(序列表中的序列號17)hp5人腎素原pf1-7(序列表中的序列號18)hp6人腎素原pf12-19(序列表中的序列號19)hp7人腎素原pf11-15(序列表中的序列號20)hp8人腎素原pf27-41(序列表中的序列號4)控制腎素原活化時，可以使用這些肽中的1種，也可以2種以上混合使用。
另外，作為優(yōu)選方式之一，上述抗體是對人腎素原pf區(qū)域的抗體。例如，可以例舉使用來源于人腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列的下述肽作為抗原得到的抗人pf抗體。
hp9人腎素原pf1-15(序列表中的序列號21)hp10人腎素原pf18-30(序列表中的序列號22)hp11人腎素原pf30-41(序列表中的序列號23)控制腎素原活化時，可以僅使用1種抗體，也可以2種以上混合使用。將上述抗體作為腎素原活化控制物質(zhì)用于藥物時，該抗體優(yōu)選按照公知方法得到的單克隆抗體，更優(yōu)選以該抗體作為人源化抗體制作。人源化抗體的制作方法可以利用自身公知的方法(J.Immunol.Methods，100，5-40，1987)。
(降壓劑)作為本發(fā)明的1種方式，本發(fā)明提供含有上述腎素原活化控制物質(zhì)中至少1種作為有效成分的降壓劑。該降壓劑特征在于至少在機體內(nèi)給藥后第12小時還發(fā)揮充分的降壓效果，效果的持續(xù)時間非常長。例如在高血壓病理模型大鼠的試驗中，在給藥后第12小時，作為SBP(Systolic Blood Pressure)值(％)顯示至少10％程度的降壓率。該數(shù)值作為降壓劑未必很高，但是只要是本領(lǐng)域技術(shù)人員，在給藥量、給藥時間和/或給藥方法等方面下工夫，就能夠容易地得到更高的效果。另一方面，現(xiàn)有降壓劑即腎素抑制劑的體內(nèi)效果在給藥之后立即出現(xiàn)，之后以每分鐘為單位消失。另外，ACE抑制劑的體內(nèi)效果雖然在給藥后持續(xù)6～8小時，但是之后便消失。因此，在考慮改善高血壓時，本發(fā)明降壓劑的長時間持續(xù)的降壓效果可以說是非常有用的特征。
另外，本發(fā)明的降壓劑通過與現(xiàn)有的高血壓治療藥，例如ACE抑制劑或腎素抑制劑不同的機理，顯示降壓效果，在高血壓的治療中，也可以與現(xiàn)有的高血壓治療藥等聯(lián)用。
而且，上述降壓劑僅選擇性地對高血壓患者發(fā)揮其降壓效果。在正常大鼠和高血壓病理模型大鼠的比較試驗中，證明上述降壓劑僅對高血壓病理模型大鼠發(fā)揮作用。也就是說，本發(fā)明的降壓劑對于高血壓的治療有用。
(臟器肥大抑制劑)本發(fā)明還提供含有上述腎素原活化控制物質(zhì)中至少1種作為有效成分的新型臟器肥大抑制劑。本發(fā)明的臟器肥大抑制劑可以在心臟和/或腎臟中抑制臟器肥大。因此，該臟器肥大抑制劑可以期待對心衰或腎衰的效果。
(動脈肥厚抑制劑)本發(fā)明提供含有上述腎素原活化控制物質(zhì)中至少1種作為有效成分的新型動脈肥厚抑制劑。本發(fā)明的動脈肥厚抑制劑可以抑制肺動脈、大腿動脈等的肥厚即血管改型。因此，該動脈肥厚抑制劑對動脈硬化等伴有血管肥厚即血管改型的疾病有效。
(制劑化)將上述降壓劑、臟器肥大抑制劑和動脈肥厚抑制劑制成制劑時，可以根據(jù)肽或低分子化合物的物性，適當(dāng)使用公知的方法。例如可以利用片劑、膠囊制劑、水溶液制劑、乙醇溶液制劑、脂質(zhì)體制劑、脂肪乳劑、環(huán)糊精等的包合物等的制劑方法。
散劑、丸劑、膠囊劑和片劑可以使用乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇等賦形劑，淀粉、海藻酸鈉等崩解劑，硬脂酸鎂、滑石等潤滑劑，聚乙烯醇、羥丙基纖維素、明膠等粘合劑，脂肪酸酯等表面活性劑，甘油等增塑劑等進行制備。制備片劑或膠囊時，可以使用固體的制劑載體。
懸濁劑可以使用水、蔗糖、山梨醇、果糖等糖類，PEG等二醇類，油類進行制備。
注射用的溶液可以使用鹽溶液、葡萄糖溶液或者鹽水與葡萄糖溶液的混合物構(gòu)成的載體進行配制。
脂質(zhì)體化可以通過下述方法進行，即在將磷脂溶解于有機溶劑(氯仿等)得到的溶液中加入將該物質(zhì)溶解于溶劑(乙醇等)得到的溶液后，蒸餾除去溶劑，向其中加入磷酸緩沖液，振蕩、超聲波處理和離心分離后，過濾處理上清液，回收的方法。
脂肪乳劑化可以通過下述方法進行，即將該物質(zhì)、油成分(大豆油、芝麻油、橄欖油等植物油，MCT等)、乳化劑(磷脂等)等混合，加熱制成溶液后，加入必要量的水，使用乳化機(勻漿機，例如高壓噴射型、超聲波型等)，進行乳化、勻化處理的方法。另外，也可以將其冷凍干燥。另外，脂肪乳劑化時，也可以添加乳化助劑，作為乳化助劑，可以例舉甘油、糖類(例如葡萄糖、山梨醇、果糖等)。
環(huán)糊精包合化可以通過下述方法進行，即在將該物質(zhì)溶解于溶劑(乙醇等)得到的溶液中加入將環(huán)糊精加熱溶解于水等得到的溶液后，冷卻，過濾析出的沉淀，進行滅菌干燥的方法。這時使用的環(huán)糊精可以根據(jù)該物質(zhì)的大小，適當(dāng)選擇空隙直徑不同的環(huán)糊精(α、β、γ型)。
上述降壓劑、臟器肥大抑制劑或動脈肥厚抑制劑的給藥量可以根據(jù)患者的病癥、性別、年齡、體重適當(dāng)選擇。作為給藥途徑，可以是口服、非口服任意一種。優(yōu)選方式之一是制成口服劑的形態(tài)口服給藥。作為其給藥量，例如每天1～1000μg。
實施例以下結(jié)合實施例更具體地說明本發(fā)明，但是本發(fā)明并不受這些實施例的限定，在不脫離本發(fā)明的技術(shù)思想的范圍內(nèi)各種應(yīng)用均有可能。
(實施例1)(制備識別來源于大鼠腎素原pf區(qū)域的肽的抗體)采用固相法按照常規(guī)方法合成大鼠腎素原的pf肽，即pf1-15(序列表中的序列號24)、pf18-30(序列表中的序列號25)、pf30-41(序列表中的序列號26)，以這些寡肽作為抗原，按照特開平10-279600號公報和美國專利第5945512號的實施例的記載，制備對這些抗原的抗體，即Ab1、Ab2和Ab3。具體而言，將抗原即上述寡肽與佐劑一起對新西蘭白兔進行免疫，得到抗血清。得到的抗血清按照該公報中記載的方法進行純化。
Ab1特異地識別pf1-15的抗體Ab2特異地識別pf18-30的抗體Ab3特異地識別pf30-41的抗體另外，將這些抗體等量混合，得到Abmix。并且，按照該公報中記載的方法研究這些抗體引起的體外的腎素原活化，確認這些抗體能夠活化腎素原。
(實施例2)(制備來源于大鼠腎素原pf區(qū)域的肽)采用固相法按照常規(guī)方法合成來源于大鼠腎素原的pf區(qū)域的序列的下述肽。
p1pf1-11(序列表中的序列號9)p2pf5-19(序列表中的序列號7)p3pf27-41(序列表中的序列號8)p1apf1-4(序列表中的序列號10)p1bpf1-7(序列表中的序列號11)p1cpf5-11(序列表中的序列號12)p2apf12-19(序列表中的序列號13)p2bpf11-15(序列表中的序列號14)
另外，將p1、p2和p3等量混合，得到Pmix。
(試驗例1)(抗pf肽抗體和pf肽產(chǎn)生的降壓效果的研究)使用作為高血壓病理模型動物的SHR雄性大鼠(12～14周齡，體重258～310g)，每組3只。將實施例1制備的Abmix、實施例2制備并溶解于生理鹽水的Pmix以及作為比較試驗藥的抗腎素中和抗體與卡托普利分別以0.44mg/kg、0.6mg/kg、0.12mg/g和100mg/kg的給藥量靜脈給藥。血壓測定通過下述方法進行，即將插入總頸動脈和外頸動脈的導(dǎo)管與壓力轉(zhuǎn)換器(P23XL，Gould Electronics公司)連接，輸入壓力處理器信號調(diào)節(jié)器(Gould Electronics公司)，從試驗物質(zhì)給藥開始至1小時后，每隔10分鐘進行測定，之后每隔1小時進行測定，記錄在熱陣列記錄器(RS3400，Gould Electronics公司)上。
作為比較試驗藥的抗腎素中和抗體在給藥后第6小時之前未顯示血壓降低，在第6小時和第24小時分別確認了11％和14％的血壓降低趨勢。Pmix和Abmix在給藥后至試驗結(jié)束為止顯示持續(xù)的血壓降低，分別為最大9％和最大7％。陽性對照的卡托普利直到給藥后第6小時顯示最大的血壓降低(最大31％)，第24小時即試驗結(jié)束時確認沒有降壓作用。
結(jié)果，判斷出Pmix和Abmix顯示與抗腎素中和抗體以及作為ACE抑制劑的卡托普利不同的經(jīng)時降壓效果。也就是說，判斷出Pmix和Abmix在給藥后具有非常長時間的持續(xù)的降壓能力。另外，由此推測出Pmix和Abmix的降壓效果不是抑制腎素活性產(chǎn)生的。
(試驗例2)以試驗例1得到的數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，對Pmix增加給藥量(2mg/kg)，使用SHR 5例與試驗例1同樣進行試驗。對照組使用生理鹽水溶液。結(jié)果，確認給藥之后立即有11％的一時性降壓作用，給藥后5分鐘恢復(fù)，之后再緩慢出現(xiàn)血壓降低，確認最大至9％，與對照組相比，給藥后1～6小時有顯著差異。也就是說，確認Pmix具有二重性的降壓作用。
(試驗例3)對于實施例2制備的p1(pf1-11)、p2(pf5-19)、p3(pf27-41)，使用SHR2例或4例與試驗例1同樣進行試驗。結(jié)果，p1在給予2mg/kg時，確認給藥之后立即有6％程度的一時性血壓上升作用，給藥5分鐘后恢復(fù)，之后緩慢出現(xiàn)血壓降低，確認最大至6％，并確認直到24小時均有持續(xù)的效果。另外，給予10mg/kg時，確認給藥6小時后有約7％的血壓降低，并確認直到24小時均有持續(xù)的效果，最大10％的程度。p2在給予2mg/kg時，確認給藥之后立即有35％程度的一時性血壓降低，給藥5分鐘后恢復(fù)，并確認之后直到24小時均有持續(xù)的降壓作用，最大6％的程度。p3在給予2mg/kg時，確認給藥之后立即有14％程度的一時性血壓上升，給藥5分鐘后恢復(fù)，之后確認沒有作用。給予10mg/kg時，確認2小時后有7％的血壓降低，并確認直到24小時均有持續(xù)的降壓作用，最大為11％。
也就是說，判斷出大鼠腎素原pf區(qū)域的N末端起第1～第11或第5～第19的氨基酸序列構(gòu)成的肽、以及相當(dāng)于大鼠腎素原pf區(qū)域的C末端側(cè)的第27～第41的氨基酸序列構(gòu)成的肽具有持續(xù)的降壓作用。
另外，該結(jié)果表明Pmix產(chǎn)生的給藥之后的一時性血壓降低是p2的作用，之后的持續(xù)降壓作用是p1、p2和p3的相互作用。
(試驗例4)作為比較試驗，使用相同周齡的正常血壓大鼠(WKY大鼠)5例代替SHR，進行與試驗例2同樣的試驗。除Pmix給藥之后的一時性血壓降低以外，確認一切血壓降低均沒有。因此，確認Pmix對于正常大鼠不顯示持續(xù)的血壓降低作用。
(試驗例5)對于實施例2制備的p1(pf1-11)、p1a(pf1-4)、p1b(pf1-7)、p1c(pf5-11)、p2a(pf12-19)和p2b(pf11-15)，使用SHR各2例與試驗例1同樣進行試驗，p2a(pf12-19)和p2b(pf11-15)分別以給藥量1mg/kg進行，其他肽以給藥量10mg/kg進行。
結(jié)果，p1直到給藥后24小時均顯示最大14％的持續(xù)血壓降低。p1a在給藥之后立即顯示13％的一時性血壓上升，之后直到給藥后24小時均顯示最大13％的持續(xù)血壓降低。p1b在給藥之后立即顯示17％的一時性血壓上升，之后直到給藥后24小時均顯示最大13％的持續(xù)血壓降低。p1c在給藥之后立即顯示21％的一時性血壓上升，之后直到給藥后24小時均顯示最大16％的持續(xù)血壓降低。p2a在給藥之后立即顯示6％的一時性血壓上升，之后直到給藥后24小時均顯示最大14％的持續(xù)血壓降低。另外，使用p2b也能夠得到同等的效果。
結(jié)果，判斷出來源于大鼠腎素原pf區(qū)域的氨基酸序列N末端起第1～第19的氨基酸序列的肽具有持續(xù)的降壓作用。
(試驗例6)使用實施例2制備的p2a(pf12-19)和作為腎素抑制荊的H6137(D-His·Pro·Phe·His·Leu·ψ·CH2NH·Leu·Val-Tyr，Sigma公司)，分別以給藥量1mg/kg由外頸靜脈通過插管給藥，按照實施例1記載的方法測定經(jīng)時血壓變化。
結(jié)果，p2a在給藥后5～8小時顯示最大11％的持續(xù)血壓降低，其效果持續(xù)至給藥后至少12小時。另一方面，H6137在給藥后3～8小時顯示最大9％的持續(xù)血壓降低，但給藥6小時以后確認其效果有消失的趨勢。
可以得知p2a發(fā)揮作用需要時間，但是作用時間長，H6137發(fā)揮作用時間快，但是作用時間短。根據(jù)這種經(jīng)時降壓效果之間的差異，可以推測p2a代表的腎素原活化控制物質(zhì)的降壓效果不是抑制腎素引起的。
(試驗例7)將實施例2制備的p1c(pf5-11)給予SHR，每組4只，以1.6mg/kg1日1次，連續(xù)14天靜脈給藥。第14天放血處死，摘出心臟和腎臟，測定其重量。結(jié)果作為每100g體重的臟器重量列于表1中。如表1所示，給予p1c的SHR的心臟和腎臟的重量比給予生理鹽水的對照組輕，表明p1c抑制心臟肥大和腎臟肥大。
表1

(試驗例8)對于試驗例7中進行了試驗的大鼠，摘出肺動脈、腸系膜上動脈、大腿動脈，測定其重量。將各動脈的重量分別換算為單位面積的重量，再將該換算值換算為各大鼠的單位體重的值進行比較，結(jié)果如表2所示。如表2所示，給予p1c的SHR的各動脈的重量比對照組顯著輕，判斷出p1c抑制動脈肥厚即血管改型。
表2

(實施例3)利用按照特開平10-279600號公報和美國專利第5945512號的記載制備的能夠特異地識別人腎素原以及人腎素原pf肽活化人腎素原的抗體，構(gòu)筑篩選系統(tǒng)。用構(gòu)筑的篩選系統(tǒng)對候補化合物進行試驗，確認對于抗pf肽抗體引起的人腎素原活化的作用。按照該方法，能夠得到可以抑制抗人pf肽抗體引起的人腎素原活化的物質(zhì)。而且，以選自人腎素原原片斷區(qū)域的肽、已知的降壓劑等為基礎(chǔ)收集信息，并通過使用動物模型的試驗等，能夠由得到的物質(zhì)選擇具有降壓效果、臟器肥大抑制效果、動脈肥厚抑制效果的物質(zhì)。
工業(yè)實用性按照本發(fā)明，提供能夠控制腎素原活化的物質(zhì)的篩選方法，該方法以腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的腎素原活化的調(diào)節(jié)能力作為指標(biāo)進行，并提供腎素原活化控制物質(zhì)，該物質(zhì)具有控制基于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的腎素原活化的功能。而且，通過使用上述腎素原活化控制物質(zhì)，能夠提供具有新型機理的降壓劑、臟器肥大抑制劑、動脈肥厚抑制劑。這些藥物通過單獨使用或者與現(xiàn)有的藥物聯(lián)用，可以有效用于高血壓、心衰、腎衰以及伴有動脈硬化即血管改型的疾病等的治療。
序列表<110>石田雄一<120>抗高血壓劑<130>GP00-1030<150>JP P2000-108670<151>2000-04-10<160>26<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>43<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>1Leu Pro Thr Asp Thr Thr Thr Phe Lys Arg Ile Phe Leu Lys Arg Met1 5 10 15Pro Ser Ile Arg Glu Ser Leu Lys Glu Arg Gly Val Asp Met Ala Arg20 25 30Leu Gly Pro Glu Trp Ser Gln Pro Met Lys Arg35 40<210>2<211>19<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>2Leu Pro Thr Asp Thr Thr Thr Phe Lys Arg Ile Phe Leu Lys Arg Met1 5 1015Pro Ser Ile<210>3<211>15<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>3Thr Thr Thr Phe Lys Arg Ile Phe Leu Lys Arg Met Pro Ser Ile1 51015<210>4<211>15<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>4Gly Val Asp Met Ala Arg Leu Gly Pro Glu Trp Ser Gln Pro Met1 510 15<210>5<211>43<212>PRT<213>褐鼠<400>5Leu Pro Thr Asp Thr Ala Ser Phe Gly Arg Ile Leu Leu Lys Lys Met1 51015Pro Ser Val Arg Glu Ile Leu Glu Glu Arg Gly Val Asp Met Thr Arg2025 30Ile Ser Ala Glu Trp Gly Glu Phe Ile Lys Lys3540<210>6<211>19<212>PRT<213>褐鼠<400>6Leu Pro Thr Asp Thr Ala Ser Phe Gly Arg Ile Leu Leu Lys Lys Met1 51015Pro Ser Val<210>7<211>15<212>PRT<213>褐鼠<400>7Thr Ala Ser Phe Gly Arg Ile Leu Leu Lys Lys Met Pro Ser Val1 510 15<210>8<211>15<212>PRT<213>褐鼠<400>8Gly Val Asp Met Thr Arg Ile Ser Ala Glu Trp Gly Glu Phe Ile1 51015<210>9<211>11<212>PRT<213>褐鼠<400>9Leu Pro Thr Asp Thr Ala Ser Phe Gly Arg Ile1 510<210>10<211>4<212>PRT<213>褐鼠<400>10Leu Pro Thr Asp1<210>11<211>7<212>PRT<213>褐鼠<400>11Leu Pro Thr Asp Thr Ala Ser1 5<210>12<211>7<212>PRT<213>褐鼠<400>12Thr Ala Ser Phe Gly Arg Ile1 5<210>13<211>8<212>PRT<213>褐鼠<400>13Leu Leu Lys Lys Met Pro Ser Val1 5<210>14<211>5<212>PRT<213>褐鼠<400>14Ile Leu Leu Lys Lys1 5<210>15<211>11<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>15Leu Pro Thr Asp Thr Thr Thr Phe Lys Arg Ile1 510<210>16<211>7<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>16Thr Thr Thr Phe Lys Arg Ile1 5<210>17<211>4<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>17Leu Pro Thr Asp1<210>18<211>7<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>18Leu Pro Thr Asp Thr Thr Thr1 5<210>19<211>8<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>19Phe Leu Lys Arg Met Pro Ser Ile1 5<210>20<211>5<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>20Ile Phe Leu Lys Arg1 5<210>21<211>15<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>21Leu Pro Thr Asp Thr Thr Thr Phe Lys Arg Ile Phe Leu Lys Arg1 51015<210>22<211>13<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>22Ser Ile Arg Glu Ser Leu Lys Glu Arg Gly Val Asp Met1 510<210>23<211>12<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>23Met Ala Arg Leu Gly Pro Glu Trp Ser Gln Pro Met1 510<210>24<211>15<212>PRT<213>褐鼠<400>24Leu Pro Thr Asp Thr Ala Ser Phe Gly Arg Ile Leu Leu Lys Lys1 51015<210>25<211>13<212>PRT<213>褐鼠<400>25Ser Val Arg Glu Ile Leu Glu Glu Arg Gly Val Asp Met1 510<210>26<211>12<212>PRT<213>褐鼠<400>26Met Thr Arg Ile Ser Ala Glu Trp Gly Glu Phe Ile1 510
權(quán)利要求
1.能夠控制腎素原活化的物質(zhì)的篩選方法，以由于該腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的調(diào)節(jié)能力作為指標(biāo)進行。
2.能夠控制腎素原活化的物質(zhì)的篩選方法，以對腎素原的原片斷區(qū)域的抗體引起的腎素原活化的調(diào)節(jié)能力作為指標(biāo)進行。
3.如權(quán)利要求1或2所述的篩選方法，作為篩選對象的物質(zhì)是以腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列中至少3個氨基酸序列的信息為基礎(chǔ)設(shè)計的物質(zhì)。
4.如權(quán)利要求1或2所述的篩選方法，作為篩選對象的物質(zhì)是以腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列的N末端起第1至第19的氨基酸序列或第27至第41的氨基酸序列中至少3個氨基酸序列的信息為基礎(chǔ)設(shè)計的物質(zhì)。
5.如權(quán)利要求1或2所述的篩選方法，作為篩選對象的物質(zhì)是以腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列的N末端起第5至第19的氨基酸序列中至少3個氨基酸序列的信息為基礎(chǔ)設(shè)計的物質(zhì)。
6.如權(quán)利要求3至5中任意一項所述的篩選方法，作為篩選對象的物質(zhì)是肽。
7.如權(quán)利要求3至5中任意一項所述的篩選方法，作為篩選對象的物質(zhì)是低分子化合物。
8.如權(quán)利要求1至7中任意一項所述的篩選方法，腎素原是人腎素原。
9.如權(quán)利要求1至7中任意一項所述的篩選方法，腎素原是大鼠腎素原。
10.腎素原活化控制物質(zhì)，具有控制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能。
11.按照權(quán)利要求1至9中任意一項所述的方法篩選的腎素原活化控制物質(zhì)，具有控制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能。
12.腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能。
13.腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且不具有腎素抑制活性。
14.按照權(quán)利要求1至9中任意一項所述的方法篩選的腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能。
15.按照權(quán)利要求1至9中任意一項所述的方法篩選的腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且不具有腎素抑制活性。
16.腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由具有從腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列中選擇的部分序列的肽或其等價肽構(gòu)成。
17.腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由具有從腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列中選擇的連續(xù)3個至10個的部分序列的肽構(gòu)成。
18.腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由具有從腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列中選擇的連續(xù)3個至8個的部分序列的肽構(gòu)成。
19.腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由具有從腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列中選擇的連續(xù)3個至6個的部分序列的肽構(gòu)成。
20.腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由從序列表中序列號7至14記載的肽中選擇的肽構(gòu)成。
21.腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且由從序列表中序列號3、序列號4和序列號15至20記載的肽中選擇的肽構(gòu)成。
22.腎素原活化控制物質(zhì)，是根據(jù)腎素原的原片斷區(qū)域的氨基酸序列的信息設(shè)計的低分子化合物，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能。
23.如權(quán)利要求16至22中任意一項所述的腎素原活化控制物質(zhì)，具有抑制由于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的不伴有一維結(jié)構(gòu)改變的腎素原活化的功能，且不具有腎素抑制活性。
24.如權(quán)利要求12至23中任意一項所述的腎素原活化控制物質(zhì)，抑制腎素原活化的效果是通過腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用的拮抗作用產(chǎn)生的。
25.腎素原活化控制物質(zhì)，其特征在于，基于對腎素原的原片斷區(qū)域的抗原抗體反應(yīng)除去腎素原，從而在機體內(nèi)抑制腎素原活化。
26.腎素原活化控制物質(zhì)，基于對腎素原的原片斷區(qū)域的抗原抗體反應(yīng)除去腎素原，從而能夠在機體內(nèi)抑制腎素原活化，并由對腎素原的原片斷區(qū)域的抗體構(gòu)成。
27.降壓劑，含有權(quán)利要求12至26中任意一項所述的腎素原活化控制物質(zhì)的至少1種作為有效成分。
28.如權(quán)利要求27所述的降壓劑，作為降壓效果，至少在機體內(nèi)給藥后第12小時，顯示10％程度以上的降壓率。
29.如權(quán)利要求27所述的降壓劑，僅對高血壓患者選擇性地發(fā)揮降壓效果。
30.臟器肥大抑制劑，含有權(quán)利要求12至26中任意一項所述的腎素原活化控制物質(zhì)的至少1種作為有效成分。
31.如權(quán)利要求30所述的臟器肥大抑制劑，能夠在心臟和/或腎臟中抑制臟器肥大。
32.動脈肥厚抑制劑，含有權(quán)利要求12至26中任意一項所述的腎素原活化控制物質(zhì)的至少1種作為有效成分。
33.高血壓的治療方法，使用權(quán)利要求27至29中任意一項所述的降壓劑。
34.心衰或腎衰的治療方法，使用權(quán)利要求30或31所述的臟器肥大抑制劑。
35.伴有血管肥厚的疾病的治療方法，使用權(quán)利要求32所述的動脈肥厚抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供能夠控制腎素原活化的物質(zhì)的篩選方法，該方法以腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的腎素原活化的調(diào)節(jié)能力作為指標(biāo)進行，并提供腎素原活化控制物質(zhì)，該物質(zhì)具有控制基于腎素原的原片斷區(qū)域的蛋白質(zhì)間相互作用引起的腎素原活化的功能，還提供含有該腎素原活化控制物質(zhì)作為有效成分的降壓劑、臟器肥大抑制劑、動脈肥厚抑制劑。
文檔編號C07K14/47GK1436305SQ01810974
公開日2003年8月13日 申請日期2001年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月10日
發(fā)明者石田雄一, 鈴木文昭, 村上和雄 申請人:石田雄一