專利名稱：吡啶－2－基－氨烷基羰基甘氨酰基－β－丙氨酸及其衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及通式I的化合物及其良好耐受的鹽和溶劑化物， 其中R1為H，A，Ar，Hal，-OH，-O-A，-CF3或-OCF3；R2和R7為H或A；R3為 R4和R6在各種情況中，彼此獨立地為H，A，Hal，-OH，-O-A，-CF3，-OCF3，-CN，-NH2，-A-NH2；R5在各種情況中，彼此獨立地為H，A，Hal，-OH，-O-A，-CF3，-OCF3，-CN，-NO2；A為C1-C6烷基；Ar是由芳基形成的取代基，其可選擇性地被R5取代一次，兩次或三次，并具有1-3個可選擇性地與其它環(huán)狀結構稠合形成稠環(huán)系的環(huán)狀結構；Het是由具有1-3個環(huán)狀結構的雜環(huán)形成的取代基，各環(huán)狀結構可以是飽和的，不飽和的或芳香的并可選擇性地與其它環(huán)狀結構稠合形成稠環(huán)系，且所述雜環(huán)的環(huán)狀結構中總共具有1-4個N，O和/或S原子并可選擇性地被R6取代；Hal為F，Cl，Br或I；n為2，3，4，5或6。
WO97/26250和WO97/24124涉及相關物質種類的化合物。
WO97/26250涉及下列通式化合物及其作為整聯(lián)蛋白抑制劑的用途， 其中X，Y，m，n，R3，R4，R5和R6具有WO97/26250中給出的含義。X是5-元至6-元單環(huán)的芳環(huán)，其具有0-4個氮，氧或硫原子，并可選擇性地被R1或R2取代，或X是9-元至10-元多環(huán)系，其中至少一個環(huán)是芳香的，且其具有0-4個氮，氧或硫原子并被選擇性地取代。n和m是0-6的自然數。
WO97/24124公開了下列通式的玻連蛋白受體拮抗劑， 其中的取代基具有WO97/24124中給出的含義。
本發(fā)明是以發(fā)現(xiàn)有價值的新化合物，特別是用于生產藥物的那些化合物為目的的。
人們已經發(fā)現(xiàn)，由于通式I的化合物及其鹽可被良好耐受，它們具有非常有價值的藥理學性能。首先，它們可起整聯(lián)蛋白抑制劑的作用，因此它們可抑制ανβ3或ανβ5整聯(lián)蛋白的受體與配體的相互作用，如玻連蛋白與ανβ3整聯(lián)蛋白受體的結合。整聯(lián)蛋白是膜結合的異源二聚糖蛋白，它由一個α-亞單位和一個較小的β-亞單位組成。結合配體的相對親和性和特異性是通過不同α-和β-亞單位的結合確定的。就整聯(lián)蛋白ανβ1，ανβ3，ανβ5，αIIbβ3和ανβ6及ανβ8來說，特別是就ανβ3，ανβ5和ανβ6來說，本發(fā)明的化合物可顯示出特別高的活性程度。特別是，人們已經發(fā)現(xiàn)了有效的ανβ3整聯(lián)蛋白選擇性抑制劑。ανβ3整聯(lián)蛋白可在許多細胞，例如內皮細胞，血管如主動脈的平滑肌細胞，破壞骨基質的細胞(破骨細胞)和腫瘤細胞上表達。
本發(fā)明化合物的效果可使用J.W.Smith等在J.Biol.Chem.1990，265，12267-12271中描述的方法加以證實。
在Science 1994，264，569-571中，P.C.Brooks，R.A.Clark和D.A.Cheresh描述了血管生成的起源依賴于血管整聯(lián)蛋白與細胞外基質蛋白間的相互作用。
在Cell 1994，79，1157-1164中，P.C.Brooks，A.M.Montgomery，M.Rosenfeld，R.A.Reisfeld，T.Hu，G.Klier和D.A.Cheresh描述了使用環(huán)肽抑制該相互作用，由此引發(fā)生血管細胞的編程性細胞死亡(細胞程序死亡)的可能性。該文章描述了，例如，ανβ3的拮抗劑或抗ανβ3的抗體，其通過引發(fā)編程性細胞死亡而使腫瘤縮小。
關于本發(fā)明化合物可防止活細胞與相應基質蛋白的粘附，從而防止腫瘤細胞與基質蛋白粘附的實驗證據可在細胞粘附試驗中提供，所述試驗與F.Mitjans等在J.Cell Science 1995，108，2825-2838中描述的方法類似。
通式I的化合物能夠抑制金屬蛋白酶與整聯(lián)蛋白的結合，從而防止細胞利用蛋白酶的酶活性。P.C.Brooks等在Cell 1996，85，683-693描述了環(huán)-RGD肽抑制MMP-2(基質金屬蛋白酶2)與玻連蛋白受體ανβ3結合的能力。
可阻斷整聯(lián)蛋白受體與配體，如血纖蛋白原與血纖蛋白原受體(糖蛋白IIb/IIIa)結合的通式I化合物可作為拮抗劑防止腫瘤細胞通過轉移而擴散，因此其可在外科手術除去腫瘤的操作過程中，被用作具有抗轉移作用的物質。這是通過下列理由加以證實的由于腫瘤細胞與血小板相互作用形成微團聚體(微血栓)，腫瘤細胞從局部腫瘤擴散到血管系統(tǒng)中。腫瘤細胞被微團聚體提供的保護遮擋，因此不被免疫系統(tǒng)的細胞識別。所述微團聚體能夠沉降在血管壁上，由此進一步促進腫瘤細胞侵入到組織中。由于微血栓的形成是由配體與相應整聯(lián)蛋白受體，如ανβ3或αIIbβ3在活化血小板上的結合介導的，因此相應的拮抗劑可被看作是轉移的有效抑制劑。
化合物對ανβ5整聯(lián)蛋白受體的作用，及其所以被用作抑制劑的原因可以用J.W.Smith等，在J.Biol.Chem.1990，265，12267-12271中描述的方法加以證實。
通式I的化合物可被用作人和獸藥中的藥物活性化合物，特別可用于預防和/或治療循環(huán)疾病，血栓形成，心肌梗塞形成，動脈硬化，中風，心絞痛，腫瘤疾病，如腫瘤的發(fā)展或轉移，骨質溶解疾病，如骨質疏松癥，病理性血管生成疾病，如炎癥，眼科疾病，糖尿病性視網膜病，黃斑變性，近視，眼組織胞漿菌病，類風濕性關節(jié)炎，骨關節(jié)炎，發(fā)紅性(rubeotic)青光眼，潰瘍性結膜炎，克羅恩氏病，動脈粥樣硬化，牛皮癬，血管成形術后的再狹窄，多發(fā)性硬化，病毒感染，細菌感染和真菌感染，且其與急性腎衰竭和傷口愈合有關，可用于促進愈合過程。
ανβ6是一種相對較稀有的整聯(lián)蛋白(Busk等，1992J.Biol.Chem.267(9)，5790)，其形成量的增加與上皮組織的修復過程有關，且它優(yōu)選結合天然基質分子纖連蛋白和腱生蛋白(Wang等，1996，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol 15(5)，664)。目前還不能準確知道ανβ6的生理和病理功能然而，人們猜測此整聯(lián)蛋白在涉及上皮細胞的生理過程和疾病(例如，炎癥，傷口愈合及腫瘤)中起著重要的作用。因此，ανβ6在傷口中的角質形成細胞上表達(Haapasalmi等，1996，J.Invest.Dermatol.106(1)，42)，由此假設它可作為所述整聯(lián)蛋白的激動劑或拮抗劑除影響傷口愈合過程和炎癥之外還能影響其它皮膚病理事件，如牛皮癬。此外，ανβ6在呼吸道上皮中發(fā)揮重要的作用(Weinacker等，1995，Am.J.Respir.CellMol.Biol.12(5)，547)，這意味著應該能使用此整聯(lián)蛋白相應的激動劑/拮抗劑而成功治療呼吸道疾病如支氣管炎，哮喘，肺纖維組織形成及呼吸道腫瘤。最后，已知ανβ6還可在腸上皮中發(fā)揮重要的作用，這意味著相應的整聯(lián)蛋白激動劑/拮抗劑應該可用于治療炎癥，腫瘤和胃/腸道的傷口。
化合物對ανβ6整聯(lián)蛋白受體的作用，及其所以被用作抑制劑的原因是利用J.W.Smith等在J.Biol.Chem.1990，265，12267-12271中描述的方法加以證實的。
在使用生物材料，植入物，導管或心臟起博器的手術中，通式I的化合物可被用作具有抗菌作用的物質。
在本文中，它們的作用是抗菌?？咕钚缘墓πЭ墒褂肞.Valentin-Weigund等在Infection and Immunity，1988，2851-2855中描述的方法加以證實。
藥物活性化合物攝取到生物體中的測量值是它的生物可利用率。
如果藥物活性化合物是以注射溶液的形式靜脈內給予到生物體中的，那么其不變形式的絕對生物可利用率，即，到達全身血液，即到達大循環(huán)的藥物比例為100％。
當口服給予治療活性的化合物時，通常活性化合物是作為固體存在于制劑中的，并因此首先將它溶解，以便能穿過進入屏障，例如胃腸道，口腔粘膜，鼻隔膜或皮膚，特別是角質層，或能被身體吸收。藥動學數據，即生物可利用率可按照與J.Shaffer等在J.Pharm.Sciences，1999，88，313-318中描述的類似方法獲得。通式I的化合物至少具有一個手性中心，因此能夠以幾個立體異構的形式存在。所有這些形式(例如D和L形式)及其混合物(例如，DL形式)均包括在通式中。
本發(fā)明的化合物還包括被認為是前體藥物衍生物的那些。這些的例子是已經用烷基或酰基，糖或寡肽改性過的通式I化合物，且其在生物體中迅速裂解，形成本發(fā)明的活性化合物。如果忽略通常為最低限度的藥動學差異，那么前體藥物衍生物的效果與它們的活性分解產物相等，正是由于這個原因，而尋求這些化合物的保護。
此外，游離氨基或游離羥基，其是通式I化合物的取代基，可具有適宜的保護基團。
通式I化合物的溶劑化物是指將惰性溶劑分子加入到通式I的化合物中，這種加入是由于化合物與溶劑分子的相互吸引而形成的。溶劑化物的例子是一水合物，二水合物或與醇，例如與甲醇或乙醇的加合化合物。
上述定義的引申，取代基R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，A，Ar，Het，Hal和n的含義及優(yōu)選含義在下面詳細解釋。
R1優(yōu)選為H，A，Hal或-OH，特別是甲基。R1優(yōu)選在吡啶氮的對位。
R2和R7優(yōu)選為氫。
R3優(yōu)選為苯基，其在對位被Het取代，并可在另一個位置被R4選擇性地取代 優(yōu)選 R4優(yōu)選為H，A或Hal，特別是氫。
R5優(yōu)選為甲基，乙基，-OCH3，-CF3，OH，氟，氯或溴。
A為直鏈或支鏈且具有1-6，優(yōu)選1，2，3，4，5或6個碳原子的取代基。A優(yōu)選甲基，和，另外還有，乙基，正-丙基，異丙基，正-丁基，仲-丁基或叔-丁基，和，另外還有，戊基，1-，2-或3-甲基丁基，1，1-，1，2-或2，2-二甲基丙基，1-乙基丙基，己基，1-，2-，3-或4-甲基戊基，1，1-，1，2-，1，3-，2，2-，2，3-或3，3-二甲基丁基，1-或2-乙基丁基，1-乙基-1-甲基丙基，1-乙基-2-甲基丙基，或1，1，2-或1，2，2-三甲基丙基。
A特別優(yōu)選甲基，乙基，異丙基，正-丙基，正-丁基或叔-丁基。
Ar是由芳基形成的取代基，其可選擇性地被R5取代一次，兩次或三次，并具有1-3個可選擇性地與其它環(huán)狀結構稠合形成稠環(huán)系的環(huán)狀結構。芳基中的環(huán)狀結構數與理論上必須進行開環(huán)以便將芳基轉化成無環(huán)化合物的開環(huán)數相等。Ar優(yōu)選僅具有一個環(huán)狀結構。
Ar優(yōu)選為被R5選擇性地取代一次，兩次或三次的苯基，萘基，蒽基，聯(lián)苯基，特別是被選擇性地取代一次，兩次或三次的苯基或萘基。因此Ar優(yōu)選為苯基，鄰-，間-或對-甲基苯基，鄰-，間-或對-乙基苯基，鄰-，間-或對-丙基苯基，鄰-，間-或對-異丙基苯基，鄰-，間-或對-叔-丁基苯基，鄰-，間-或對-羥基苯基，鄰-，間-或對-甲氧基苯基，鄰-，間-或對-乙氧基苯基，鄰-，間-或對-三氟甲基苯基，鄰-，間-或對-氟苯基，鄰-，間-或對-氯苯基或鄰-，間-或對-溴苯基，還優(yōu)選2，3-，2，4-，2，5-，2，6-，3，4-或3，5-二甲基苯基，2，3-，2，4-，2，5-，2，6-，3，4-或3，5-二羥基苯基，2，3-，2，4-，2，5-，2，6-，3，4-或3，5-二氟苯基，2，3-，2，4-，2，5-，2，6-，3，4-或3，5-二氯苯基，2，3-，2，4-，2，5-，2，6-，3，4-或3，5-二溴苯基，2，3-，2，4-，2，5-，2，6-，3，4-或3，5-二甲氧基苯基或3-氯-4-氟苯基，4-氟-2-羥基苯基，萘-1-基，萘-2-基或2-，3-，4-，5-，6-，7-或8-甲基萘-1-基，2-，3-，4-，5-，6-，7-或8-乙基萘-1-基，2-，3-，4-，5-，6-，7-或8-氯萘-1-基，2-，3-，4-，5-，6-，7-或8-氟萘-1-基，2-，3-，4-，5-，6-，7-或8-溴萘-1-基，2-，3-，4-，5-，6-，7-或8-羥基萘-1-基，1-，3-，4-，5-，6-，7-或8-甲基萘-2-基，1-，3-，4-，5-，6-，7-或8-乙基萘-2-基，1-，3-，4-，5-，6-，7-或8-氯萘-2-基，1-，3-，4-，5-，6-，7-或8-氟萘-2-基，1-，3-，4-，5-，6-，7-或8-溴萘-2-基，1-，3-，4-，5-，6-，7-或8-羥基萘-2-基。Ar特別優(yōu)選苯基，鄰-，間-或對-氟苯基，間-或對-氯苯基，對-甲基苯基，對-三氟甲基苯基，3-氯-4-氟苯基，4-氯-2-羥基苯基，萘-1-基或萘-2-基。
Het是由選擇性地取代的，具有1-3個環(huán)狀結構的雜環(huán)形成的取代基；優(yōu)選具有一個環(huán)狀結構的雜環(huán)。雜環(huán)中的環(huán)狀結構數與理論上必須進行開環(huán)以便將雜環(huán)轉化成無環(huán)化合物的開環(huán)數相等。在化學可能的范圍內，該環(huán)狀結構彼此獨立地可以是飽和的，不飽和的或芳香的。環(huán)狀結構可選擇性地與其它環(huán)狀結構稠合形成稠環(huán)系。非芳香的飽和或不飽和環(huán)狀結構可像稠環(huán)系那樣相互連接，即彼此共用化學鍵，例如與甾族化合物或與苯并二氫吡喃。所述雜環(huán)共含有1-4個氮，氧和/或硫原子，其可替換環(huán)狀結構中的碳原子。優(yōu)選這些N，O和/或S原子不相鄰。該雜環(huán)可選擇性地被R6取代。Het優(yōu)選吡啶基，喹啉基，噻吩基，苯并[b]噻吩基，吲哚基，特別是吡啶-3-基或吡啶-4-基，喹啉-8-基，苯硫-3-基，苯并[b]苯硫-6-基或吲哚-7-基。
Hal是F，Cl，溴或碘，特別是F，Cl或溴。
N是2，3，4，5或6，特別優(yōu)選3，4或5，然而特別是3。
其中R7不是氫的通式I化合物及其溶劑化物被認為是前體藥物，即，它們在體外實驗中是非活性的，這是因為它們掩蔽了生物活性的羧基。然而，前體藥物可在肌體中代謝轉化成生物活性的形式。與R7＝H的通式I化合物相對應的相應游離酸及其鹽和溶劑化物在體外是活性的。
因此，本發(fā)明特別涉及通式I的那些化合物，其中所述基團至少有一個具有上述優(yōu)選含義之一。
本發(fā)明還涉及一種制備通式I化合物及其鹽和溶劑化物的方法，該方法包括(a)通式II的化合物 其中R1和n具有上述含義，與通式III的化合物反應 其中R2，R3和R7具有上述含義，且R7≠H的基團可被選擇性地轉化成R7＝H的基團，或包括(b)通式IV的化合物 其中R1，R2和n具有上述含義，與通式V的化合物反應 其中R3和R7具有上述含義，且R7≠H的基團可被選擇性地轉化成R7＝H的基團，或(c)通式I化合物的一個或多個基團R1，R2，R3，R4，R5，R6和/或R7可通過i)使羥基烷基化和/或ii)水解酯基形成羧基和/或iii)使羧基酯化和/或iv)使氨基烷基化和/或v)使氨基酰化和/或vi)用酸或堿處理而使通式I的堿性或酸性化合物轉化成其鹽或溶劑化物，而被轉化成一個或多個基團R1，R2，R3，R4，R5，R6和/或R7。
通式I化合物及用于制備它們的起始化合物是按照本身已知且在文獻中描述過的方法制備的(例如，在標準著作中，如Houben-Weyl，Methoden der organischen Chemie[有機化學方法]，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart)，特別是在適于所述反應的已知反應條件下制備。就此而論，也可使用本身已知，但未在此處詳述的不同方法。
如果需要，也可就地形成起始化合物，這樣就不用將它們從反應混合物中分離出來，而是立即經過進一步的反應，從而形成通式I的化合物。
一些相同或不同的被護氨基和/或羥基也可存在于起始化合物的分子中。如果存在的保護基彼此不相同，那么在大多數情況下，它們可被選擇性地除去(就這一問題參看T.W.Greene，P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Chemistry，2nded.，Wiley，New York1991或P.J.Kocienski，Protecting Groups，1sted.，Georg ThiemeVerlag，Stuttgart-New York，1994，H.Kunz，H.Waldmann inComprehensive Organic Synthesis，Vol.6(ed.，B.M.Trost，I.Fleming，E.Winterfeldt)，Pergamon，Oxford，1991，pp.631-701)。
術語“氨基保護基”為人們所熟知，它是指適于保護(封閉)化學反應中氨基的基團。特別是，未取代或取代的?；蓟纪檠跫谆蚍纪榛沁@種性質的典型基團。因為氨基保護基在預期的反應(或反應順序)之后即被除去，因此它們的性質和大小不很重要；然而，具有1-20個，特別是1-8個C原子的那些是優(yōu)選的。就本方法而論，術語“酰基”可以最廣義的形式來解釋。它包括來源于脂肪族，芳脂肪族，脂環(huán)族，芳香或雜環(huán)羧酸或磺酸的?；貏e是烷氧羰基，烯氧羰基，芳氧羰基和，特別是，芳烷氧羰基。這種酰基的例子是烷酰基，如乙酰基，丙?；蚨□；?；芳烷?；?，如苯乙?；?；芳?；?，如苯甲酰基或甲苯甲?；环佳跬轷；?，如苯氧乙酰基；烷氧羰基，如甲氧羰基，乙氧羰基，2，2，2-三氯乙氧羰基，BOC或2-碘乙氧羰基；烯氧羰基，如烯丙氧羰基(Aloc)，芳烷氧羰基，如CBZ(與Z同義)，4-甲氧芐氧羰基(MOZ)，4-硝基-芐氧羰基或9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；2-(苯基磺酰基)乙氧羰基；三甲基甲硅烷基乙氧羰基(Teoc)或芳磺?；?，如4-甲氧-2，3，6-三甲基苯基磺酰基(Mtr)。優(yōu)選的氨基保護基是BOC，F(xiàn)moc和Aloc，此外還有CBZ，芐基和乙?；?br> 術語“羥基保護基”同樣為人們所熟知，它是指適于保護化學反應中羥基的基團。上述未取代或取代的芳基，芳烷基，芳?；蝓；沁@種基團的典型基團，還有烷基，芳基或芳烷基甲硅烷基，或O，O-或O，S-縮醛。羥基保護基的性質和大小不很重要，這是因為它們在預期的化學反應或反應順序后即被再一次除去；具有1-20個，特別是1-10個C原子的基團是優(yōu)選的。羥基保護基的一些例子是芳烷基，如芐基，4-甲氧芐基或2，4-二甲氧芐基，芳?；?，如苯甲酰基或對-硝基苯甲?；?，?；?，如乙?；蛐挛祯；?，對-甲苯磺?；?，烷基，如甲基或叔-丁基及烯丙基，烷基甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)，三異丙基甲硅烷基(TIPS)，叔-丁基二甲基甲硅烷基(TBS)或三乙基甲硅烷基，三甲基甲硅烷基乙基，芳烷基甲硅烷基，如叔-丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)，環(huán)狀縮醛，如異亞丙基縮醛，亞環(huán)戊基縮醛，亞環(huán)己基縮醛，亞芐基縮醛，對-甲氧亞芐基縮醛或鄰，對-二甲氧亞芐基縮醛，無環(huán)縮醛，如四氫吡喃基(Thp)，甲氧甲基(MOM)，甲氧乙氧甲基(MEM)，芐氧甲基(BOM)或甲基硫甲基(MTM)。特別優(yōu)選的羥基保護基是芐基，乙?；?，叔-丁基或TBS。
對各種情況中所用的保護基而言，文獻公開了如何將通式I的化合物從它們的官能衍生物中釋放出來(例如，T.W.Greene，P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Chemistry，2nded.，Wiley，New York1991或P.J.Kocienski，Protecting Groups，1sted.，Georg ThiemeVerlag，Stuttgart-New York，1994)。就這一問題，還可使用本身已知，但未在此處詳述的不同方法。
例如，優(yōu)選在15-30℃時，使用約3-5N HCl在二噁烷中，或使用TFA在二氯甲烷中除去BOC和O-叔-丁基，而在15-30℃時，使用二甲胺，二乙胺或哌啶的約5-50％溶液在DMF中除去Fmoc基團。Aloc基團是20-30℃時，在溫和條件下，使用貴金屬催化，在氯仿中裂解的。優(yōu)選的催化劑是四(三苯基膦)鈀(O)。
通常，通式II-V的起始化合物是已知的。然而如果它們是新的，可使用本身已知的方法制備它們。
通式II的化合物是在有堿存在的情況下，偶合相應的2-氨基吡啶衍生物與相應的正-溴羧酸酯(Br-[CH2]n-COOSG1，其中SG1是前述的羥基保護基)，并隨后在標準條件下除去保護基而得到的。
通式IV的化合物是在標準條件下，通過通式II化合物與甘氨酸衍生物H2N-CH2-COOSG2的肽-類似物的偶合得到的，其中SG2是前述的羥基保護基。
通式V的化合物(β-氨基酸)可按照與Skinner等，在J.Org.Chem.1960，25，1756中描述的類似方法制備。使相應的醛R3-CHO與丙二酸和醋酸銨在適宜溶劑中反應，溶劑優(yōu)選為醇，如特別優(yōu)選乙醇，產生通式V的β-氨基酸，其中R7是H。在標準條件下，酯化通式V的游離酸，可產生通式V的化合物，其中R7是A。
為了制備通式III的化合物，將酸功能受到保護的通式V的β-氨基酸(或者利用適宜的保護基保護該化合物或R7為A)與甘氨酸衍生物SG3-NH-CH2-COOH偶合。甘氨酸衍生物SG3-NH-CH2-COOH的取代基SG3是一種氨基保護基，如前所述，其隨后被除去。在Houben-Weyl，1.c.，第15/II冊，1974，1-806頁中描述了肽合成的常規(guī)方法。
通式I的化合物可通過使通式II的化合物與通式III的化合物反應，隨后除去保護基或使表示A的基團R7轉化成基團R7＝H而得到。
通式I的化合物同樣可通過使通式IV的化合物與通式V的化合物反應，隨后除去保護基或使表示A的基團R7轉化成基團R7＝H而得到。
所述偶合反應優(yōu)選在有脫水劑，例如碳二亞胺，如二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)或二異丙基碳二亞胺(DIC)，或者，例如，丙烷膦酸酐(參見Angew.Chem.1980，92，129)，二苯基磷?；B氮化物或2-乙氧基-N-乙氧羰基-1，2-二氫喹啉存在的情況下，在惰性溶劑，例如鹵代烴，如二氯甲烷，醚，如四氫呋喃或二噁烷，酰胺，如DMF或二甲基乙酰胺，腈，如乙腈中，在二甲基亞砜中或在有這些溶劑存在的情況下，在大約-10-40℃，優(yōu)選0-30℃的溫度范圍內完成。根據所用條件的不同，反應時間在幾分鐘到幾天之間。
已經證實偶合試劑TBTU(O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基尿鎓四氟硼酸鹽)或O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基尿鎓六氟磷酸鹽的加入非常有利，這是因為在有這些化合物其中一種存在的情況下，僅有較小程度的外消旋作用發(fā)生，且沒有細胞毒性的副產物形成。
代替通式II和/或IV的化合物，還可使用通式II和/或IV化合物的衍生物，優(yōu)選預活化的羧酸，或羰基鹵化物，對稱或混合的酸酐或活性酯。文獻描述了用于在典型?；磻谢罨然幕鶊F(例如，在標準著作中，如Houben-Weyl，Methoden der organischen Chemie[有機化學方法]，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart)?；罨タ珊芊奖愕鼐偷匦纬桑缤ㄟ^加入HOBt(1-羥苯并三唑)或N-羥基琥珀酰亞胺形成。
通常，所述反應在惰性溶劑中進行；當使用羰基鹵化物時，它在有酸-結合劑，優(yōu)選有機堿，如三乙胺，二甲基苯胺，吡啶或喹啉存在的情況下進行。
堿金屬或堿土金屬的氫氧化物，碳酸鹽或碳酸氫鹽的加入，或其它弱酸與堿金屬或堿土金屬，優(yōu)選鉀，鈉，鈣或銫的鹽的加入也是有利的。
用酸可將通式I的堿轉化成相關的酸加成鹽，例如在惰性溶劑如乙醇中，使等量的堿和酸反應，然后蒸發(fā)濃縮。能夠產生生理無害鹽的酸特別適于此反應。因此可使用無機酸，例如硫酸，亞硫酸，連二硫酸，硝酸，氫鹵酸，如鹽酸，氫溴酸，磷酸，如正磷酸，或氨基磺酸，也可使用有機酸，特別是脂肪酸，脂環(huán)酸，芳脂肪酸，芳香或雜環(huán)的一元或多元羧酸，磺酸或硫酸，例如甲酸，乙酸，丙酸，己酸，辛酸，癸酸，十六酸，十八酸，新戊酸，二乙基乙酸，丙二酸，丁二酸，庚二酸，反丁烯二酸，順丁烯二酸，乳酸，酒石酸，蘋果酸，檸檬酸，葡萄糖酸，抗壞血酸，煙酸，異煙酸，甲磺酸或乙磺酸，苯磺酸，三甲氧基苯甲酸，金剛烷羧酸，對-甲苯磺酸，乙醇酸，撲酸，氯苯氧基乙酸，天門冬氨酸，谷氨酸，脯氨酸，乙醛酸，軟脂酸，對氯-苯氧基異丁酸，環(huán)己烷羧酸，葡萄糖1-磷酸鹽，萘一磺酸，萘二磺酸或月桂基硫酸。還可使用生理無害酸的鹽，如苦味酸鹽分離和/或純化通式I的化合物。另一方面，可用堿(例如，鈉或鉀的氫氧化物或碳酸鹽)將通式I的化合物轉化成相應的金屬鹽，特別是堿金屬鹽或堿土金屬鹽，或轉化成相應的銨鹽。
本發(fā)明還涉及作為藥物活性化合物的通式I化合物，及其生理上無害的鹽或溶劑化物。
本發(fā)明還涉及作為整聯(lián)蛋白抑制劑的通式I化合物，及其生理上無害的鹽或溶劑化物。
本發(fā)明還涉及用于控制疾病的通式I化合物，及其生理上無害的鹽或溶劑化物。
此外，本發(fā)明還涉及藥物制劑，其至少含有一種通式I的化合物，和/或其生理上無害的鹽或溶劑化物，其是通過非化學途徑制備的。在這一點上，通式I的化合物可與至少一種固體，液體和/或半流體的賦形劑或輔劑和，適宜的，與一種或多種另外的活性化合物一起形成適宜的給藥形式。
這些制劑可被用作人或獸藥中的藥物。適宜的賦形劑是有機或無機的物質，其適于腸內(例如口服)，非腸道或局部給藥，且其不與新化合物反應，如水，植物油，芐醇，烷撐二醇，聚乙二醇，三乙酸甘油酯，明膠，碳水化合物，如乳糖或淀粉，硬脂酸鎂，滑石和凡士林?？墒褂闷瑒?，丸劑，包衣片劑，膠囊劑，散劑，顆粒劑，糖漿劑，汁劑和滴劑，特別是口服使用；而栓劑可直腸使用；溶液，優(yōu)選油溶液或水溶液，和，此外還有，混懸液，乳液和植入物可非腸道使用；軟膏劑，乳膏或粉劑可局部使用。還可將所述新化合物冷凍干燥，并使用所得的冷凍干燥物，例如，用于生產注射制劑。上述制劑可被滅菌和/或含有輔劑如潤滑劑，防腐劑，穩(wěn)定劑，濕潤劑，乳化劑，改變滲透壓的鹽，緩沖物質，染料，矯味劑和/或多種附加的活性化合物，例如一種或多種維生素。
對于吸入噴霧給藥而言，可使用含有活性化合物的噴霧劑，該活性化合物溶解或混懸在推進劑氣體或推進劑氣體混合物(例如，CO2或氟氯化烴)中。在這一點上，所述活性化合物可很方便地以微粉化形式使用，且還可有一種或多種另外的生理耐受溶劑，例如，乙醇存在。可使用常規(guī)的吸入器給予吸入溶液。
通式I的化合物及其生理上無害的鹽或溶劑化物可被用作整聯(lián)蛋白抑制劑，用來控制疾病，特別是血栓形成，心肌梗塞形成，冠心病，動脈硬化，腫瘤，骨質疏松癥，炎癥和感染。
通式I的化合物和/或它們生理上無害的鹽還可用于與由血管生成維持或傳播的病變有關的疾病，特別是與腫瘤和類風濕性關節(jié)炎有關的疾病。
在這一點上，本發(fā)明的物質通常是按照與WO97/26250或WO97/24124中描述的化合物類似的方法給藥，優(yōu)選每個劑量單位約為0.05-500mg，特別是0.5-100mg。優(yōu)選每日劑量約為0.01-2mg/kg體重。然而，各病人具體的給藥劑量取決于各種因素，例如所用具體化合物的功效，年齡，體重，一般的健康狀況，性別，日常飲食，給藥的時間和途徑，排泄的速率，藥物的組合及所治療的具體疾病的嚴重程度。優(yōu)選非腸道給藥。
此外，通式I的化合物可被用作整聯(lián)蛋白的配體用于制備用于純化整聯(lián)蛋白的親和色譜柱。
在這一點上，所述配體，即，通式I的化合物經由結合功能團，例如羧基與聚合載體共價偶合。
適宜的聚合載體材料是聚合的固相，其本身在肽化學中已知，且優(yōu)選顯示親水性，例如交聯(lián)聚合糖如纖維素，瓊脂糖或交聯(lián)葡聚糖R，丙烯酰胺，基于聚乙二醇的聚合物或Tentakel聚合物R。
用于純化整聯(lián)蛋白的親和色譜材料是在通常用于縮合氨基酸且本身已知的條件下制備的。
通式I的化合物含有一個或多個手性中心，因此可以外消旋形式或旋光形式存在。使用本身已知的方法可將所得外消旋物機械或化學分離成對映異構體。優(yōu)選通過使它與旋光分離劑反應而從外消旋混合物形成非對映異構體。適宜分離劑的例子是旋光酸，如D和L形式的酒石酸，二乙酰基酒石酸，二苯甲?；剖幔嘈尤仕?，蘋果酸，乳酸或各種旋光樟腦磺酸，如β-樟腦磺酸。還可使用填充有旋光分離劑(例如，二硝基苯甲?；交拾彼?的柱子進行對映異構體的分離；適宜洗脫劑的例子是己烷/異丙醇/乙腈混合物，例如體積比為82∶15∶3。
還可通過上述方法，使用已經旋光的起始化合物得到旋光的通式I化合物。
下面通過實施例更詳細地說明本發(fā)明。
在上下文中，所有溫度均是以℃給出的。在實施例中，“常規(guī)處理”表示如果需要可加入水，且如果需要可根據終產品的組成調節(jié)pH值至2-10，用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取混合物，進行相分離，在硫酸鈉上干燥有機相并蒸發(fā)濃縮，通過硅膠色譜，制備型HPLC和/或通過結晶純化殘余物。適當的時候，冷凍干燥該純化的化合物。
RT＝下列系統(tǒng)中HPLC的保留時間(分鐘)柱Lichrosorb RP-18(5μm)250×4mm；(分析型)Lichrosorb RP-18(15μm)250×50mm；(制備型)分析型HPLC所用洗脫劑是由(A)0.1％TFA和(B)0.1％TFA在9份乙腈和1份水中組成的梯度洗脫劑。梯度是以乙腈的體積百分比給出的。該梯度洗脫是在20％B中跑5分鐘，在90％B中跑50分鐘。LichrosorbRP-18(5μm)250×4mm柱的保留時間是以分給出的。在強極性物質的情況下，使用另一個梯度洗脫在5％B中5分鐘，然后在75％B中50分鐘。此梯度洗脫的保留時間用*表示。
在225nm處進行檢測。
制備型HPLC使用Lichrosorb RP-18(15μm)250×50mm柱。分析檢測并收集各部分。然后將該物質冷凍干燥。
通過制備型HPLC純化的化合物以三氟醋酸鹽的形式被分離。
通過使用FAB(快速原子轟擊)質譜(MS)測定分子量此后其被稱為“MS-FAB(M+H)+”。
縮略語TBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基尿鎓四氟硼酸鹽)HOBt(1-羥基苯并三唑)實施例1制備4-喹啉-8-基苯甲醛將1g 8-溴喹啉，720mg 4-甲?；交鹚岷?66mg四(三苯基膦)鈀(O)溶解在甲苯中，并將碳酸鈉水溶液(1g/3ml)加入到此溶液中。使所述反應混合物沸騰回流過夜。
分離有機相，并用水洗兩次。然后用無水硫酸鈉干燥有機相，過濾，在旋轉式蒸發(fā)儀上除去溶劑。為了進行純化，在二氯甲烷/甲醇9/1中進行硅膠色譜。
用二乙醚研磨合所述產物的流分。得到450mg淡粉紅色的結晶。
氯仿/甲醇/冰醋酸85/10/5的TLCRf＝0.75。
實施例2制備β-氨基酸β-氨基酸是按照引用的參考文獻所述制備的。110mg β-氨基酸3-氨基-3-(4-喹啉-8-基苯基)丙酸是從450mg 4-喹啉-8-基苯甲醛，200mg丙二酸和300mg醋酸銨得到的。
其它β-氨基酸是按照類似的方法制備的。
對于隨后的反應而言，乙醚是通過常規(guī)方法制備的(與亞硫酰氯/乙醇沸騰)。
參考文獻
Skinner等，；J.Org.Chem.25，1756(1960)E.Profft，F(xiàn).-J.Becker；Journal für Praktische Chemie[實用化學雜志]，30，18-38(1965)實施例3合成3-{2-[4-(4-甲基吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酰氨基}-3-(4-喹啉-8-基苯基)丙酸將30mg乙基3-氨基-3-(4-喹啉-8-基苯基)丙酸鹽的鹽酸鹽溶解在5ml DMF中，并將63mg[4-(4-甲基吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酸加入到此溶液中。將其全部冷卻至大約0℃，并在此溫度加入30mgTBTU和4.3mg HOBt。用大約0.4ml N-甲基嗎啉中和該混合物。然后在室溫攪拌過夜。
除去殘余物得澄清溶液。然后將30ml乙酸乙酯加入到殘余物中，用20ml半-濃縮的碳酸氫鹽溶液萃取兩次，并用30ml飽和氯化鈉溶液洗一次。在硫酸鈉上干燥有機相，過濾并濃縮。
將所得50mg粗物質溶解在4.5ml乙醇中，加入0.5mlNaOH(2mol/l)。室溫攪拌該混合物過夜。在旋轉式蒸發(fā)儀上蒸發(fā)該溶液，并通過制備型HPLC純化殘余物。得到22mg上述物質。
FAB MS(M+H+)526；保留時間(RT)13.88分鐘實施例4下列化合物是按照與實施例1-3所述相似的方法制備的。
合成化合物d)和e)的流程圖 合成化合物f)的流程圖
實施例5測定生成的腫瘤血管可顯著顯示出ανβ3整聯(lián)蛋白，因此可使用ανβ3-特異性抑制劑追蹤到它。
使用分析方法，可鑒定從人的腫瘤中分離出來的細胞系，該細胞系可提供整聯(lián)蛋白ανβ6，但不提供整聯(lián)蛋白ανβ3，例如Detroit562，HT-29和UCLA-P3，或提供兩種整聯(lián)蛋白ανβ3和ανβ6，例如Calu-3和Capan-2。(分析方法免疫沉淀和熒光-活化細胞分類分析)。這些鑒定了的細胞系作為皮下腫瘤在免疫缺陷的嚙齒類動物，例如nu/nu小鼠中生長。
就像已經描述過的那樣，ανβ3整聯(lián)蛋白受體的抑制劑可通過血管阻斷腫瘤生長，所述血管因暴露于編程性細胞死亡信號中而長成腫瘤，并由于程序性細胞死亡(編程性細胞死亡)而死亡。(參考文獻P.C.Brooks，Eur.J.Cancer 1996，32A，2423-2426，P.C.Brooks等，Cell 1994，79，1157-1164或S.Stomblad等，J.Clin.Invest 1996，98，426-433)。
ανβ6整聯(lián)蛋白抑制劑直接損害腫瘤的發(fā)展。本發(fā)明聯(lián)合療法的協(xié)同作用是通過下列一系列實驗加以證實的，其按照與Mitjans等在J.Cell.Sci.1995，108，2825-2838中描述的試驗系統(tǒng)相類似的方法進行將ανβ6-表達腫瘤細胞皮下植入到例如nu/nu小鼠中。與Mitjans等所述的M21細胞系類似，在小鼠中觀察到了整聯(lián)蛋白抑制劑對這些腫瘤細胞生長的作用。
植入腫瘤細胞后，將這樣處理的小鼠分成每10只一組。按照本發(fā)明每天對小鼠進行治療，即腹膜內注射適宜的整聯(lián)蛋白抑制劑，并觀察到了腫瘤的生長。對照組注射無菌無熱原的鹽水。每周兩次測量腫瘤大小，并計算相應的腫瘤體積。
下列實施例涉及藥物制劑實施例A注射瓶將100g通式I的活性化合物和5g磷酸氫二鈉溶解在3升雙蒸餾水中，用2N鹽酸調節(jié)該溶液的pH值至6.5，濾過滅菌，等分到注射瓶中，并在無菌條件下冷凍干燥；然后在無菌條件下密封該瓶。各注射瓶含5mg活性化合物。
實施例B栓劑熔化由20g通式I的活性化合物，100g大豆卵磷脂和1400g椰子油組成的混合物，并將其注入到模具中并使之冷卻。各栓劑含20mg活性化合物。
實施例C溶液劑將1g通式I的活性化合物，9.38g NaH2PO4·2H2O，28.48gNa2HPO4·12H2O和0.1g苯扎氯銨溶解在940ml雙蒸餾水中。調節(jié)該溶液的pH值至6.8，補足至1升，并通過輻照滅菌。此溶液劑可以滴眼劑的形式使用。
實施例D軟膏劑將500mg通式I的活性化合物與99.5g凡士林在無菌條件下混合。
實施例E片劑按照常規(guī)方式，將1kg通式I的活性化合物，4kg乳糖，1.2kg馬鈴薯淀粉，0.2kg滑石粉和0.1kg硬脂酸鎂的混合物壓制成片劑，每片含10mg活性化合物。
實施例F包衣片劑按照與實施例E類似的方法壓制片劑，然后以常規(guī)方式，用由蔗糖，馬鈴薯淀粉，滑石粉，黃芪膠和著色劑組成的糖衣包裹這些片劑。
實施例G膠囊劑按照常規(guī)方法，將2kg通式I的活性化合物等分到硬明膠膠囊中，每個膠囊含20mg活性化合物。
實施例H安瓿劑將1kg通式I的活性化合物溶解在60升雙蒸餾水中，濾過滅菌該溶液，并將其等分到安瓿中，并在無菌條件下冷凍干燥；然后在無菌條件下密封該安瓿。各安瓿含10mg活性化合物。
實施例I吸入噴霧劑將14g通式I的活性化合物溶解在10升等滲的NaCl溶液中，將所得溶液等分到具有泵結構的市售噴霧容器中。該溶液可噴到口腔或鼻子中。噴一下(大約0.1ml)相當于大約0.14mg的給藥劑量。
權利要求
1.一種通式I的化合物及其良好耐受的鹽和溶劑化物， 其中R1為H，A，Ar，Hal，-OH，-O-A，-CF3或-OCF3；R2和R7為H或A；R3為 R4，R5和R6在各種情況中，彼此獨立地為H，A，Hal，-OH，-O-A，-CF3，-OCF3，-CN，-NH2，-A-NH2；A為C1-C6烷基；Ar是由芳基形成的取代基，其可選擇性地被R5取代一次，兩次或三次，并具有1-3個可選擇性地與其它環(huán)狀結構稠合形成稠環(huán)系的環(huán)狀結構；Het是由具有1-3個環(huán)狀結構的雜環(huán)形成的取代基，各環(huán)狀結構是飽和的，不飽和的或芳香的并可選擇性地與其它環(huán)狀結構稠合形成稠環(huán)系，且所述雜環(huán)的環(huán)狀結構中總共具有1-4個N，O和/或S原子并可選擇性地被R6取代；Hal為F，Cl，Br或I；n為2，3，4，5或6。
2.根據權利要求1所述的化合物，選自a)3-{2-[4-(4-吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酰氨基}-3-(4-吡啶-4-基苯基)丙酸b)3-{2-[4-(4-甲基吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酰氨基}-3-(4-吡啶-4-基苯基)丙酸c)3-{2-[4-(吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酰氨基}-3-(4-吡啶-3-基苯基)丙酸d)3-{2-[4-(4-甲基吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酰氨基}-3-(4-喹啉-8-基苯基)丙酸e)3-{2-[4-(吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酰氨基}-3-(4-喹啉-8-基苯基)丙酸f)3-[4-(1H-吲哚-7-基)-苯基]-3-{2-[4-(吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酰氨基}丙酸g)3-{2-[4-(4-甲基吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酰氨基}-3-(4-苯硫-3-基苯基)丙酸h)3-{2-[4-(吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酰氨基}-3-(4-苯硫-3-基苯基)丙酸i)3-{2-[4-(4-甲基吡啶-2-基氨基)丁酰氨基]乙酰氨基}-3-(4-吡啶-3-基-3-(4-苯并[b！]苯硫-6-基苯基)-3-{2-[4-(吡啶-2-基氨基)-丁酰氨基]乙酰氨基}丙酸及其良好耐受的鹽和溶劑化物。
3.一種制備權利要求1或2所述的通式I化合物及其鹽和溶劑化物的方法，其中(a)通式II的化合物 其中R1和n具有權利要求1中給出的含義，與通式III的化合物反應 其中R2，R3和R7具有權利要求1中給出的含義，且R6≠H的基團可被選擇性地轉化成R6＝H的基團，適當的，或(b)通式IV的化合物 其中R1，R2和n具有權利要求1中給出的含義，與通式V的化合物反應 其中R3和R7具有權利要求1中給出的含義，且R7≠H的基團可被轉化成R7＝H的基團，適當的，或(c)在通式I的化合物中，一個或多個基團R1，R2，R3，R4，R5，R6和/或R7可通過vii)使羥基烷基化和/或viii)使酯基水解成羧基和/或ix)使羧基酯化和/或x)使氨基烷基化和/或xi)使氨基酰化和/或xii)用酸或堿處理而使通式I的堿性或酸性化合物轉化成其鹽或溶劑化物，而被轉化成一個或多個基團R1，R2，R3，R4，R5，R6和/或R7。
4.一種含有權利要求1或2所述的化合物的藥物。
5.一種藥物制劑，其含有至少一種權利要求1或2所述的化合物。
6.根據權利要求1或2所述的化合物用于生產藥物的用途。
7.根據權利要求1或2所述的化合物作為整聯(lián)蛋白抑制劑的用途。
8.根據權利要求1或2所述的化合物作為整聯(lián)蛋白ανβ1，ανβ3，ανβ5，ανβ6和αIIbβ3抑制劑的用途。
9.根據權利要求1或2所述的化合物作為整聯(lián)蛋白αν β3，ανβ5和ανβ6抑制劑的用途。
10.根據權利要求1或2所述的化合物用于治療由血管生成維持或傳播的病變的用途。
11.根據權利要求1或2所述的化合物用于生產控制血栓形成，心肌梗塞形成，冠心病，動脈硬化，炎癥，腫瘤，骨質疏松癥，感染和血管成形術后再狹窄的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中R
文檔編號C07K5/023GK1436196SQ01811104
公開日2003年8月13日 申請日期2001年6月12日 優(yōu)先權日2000年6月13日
發(fā)明者G·霍爾澤曼, S·古德曼 申請人:默克專利股份有限公司