專利名稱：化學(xué)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新化學(xué)方法，更具體地講，涉及一種用于生產(chǎn)式I的5-苯基戊酰-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰-(S)-丙氨酰-{(S)-2-[(R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酰}-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(SEQ ID NO1)的鹽的新化學(xué)方法。
式I在公布號(hào)為WO 97/31023的國(guó)際專利申請(qǐng)中公開(kāi)了式I化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，所述鹽具有藥理學(xué)有用的特性，可用于治療自身免疫病或醫(yī)學(xué)病癥，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其它MHC II類依賴性T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病。WO 97/31023公開(kāi)了其使用固相合成的制備方法，也就是說(shuō)使用聚合支持體建立所述分子，隨后從所述支持體上切下所述分子。然而，當(dāng)需要大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)，固相合成法的應(yīng)用并不方便且困難。因此需要尋找一種避免固相合成并且允許方便且經(jīng)濟(jì)地生產(chǎn)純形式所述鹽的替代方法。對(duì)于大規(guī)模生產(chǎn)而言，也特別需要尋找涉及具有允許容易地以純形式且高收率地分離的物理特性的原材料和中間體的方法。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一種方法，該方法不涉及固相合成，并且對(duì)于生產(chǎn)式I化合物的鹽而言特別有利。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)式I化合物的鹽的方法，所述方法包括將式II化合物或其鹽脫保護(hù) 式II其中每個(gè)Pg獨(dú)立地為精氨酸保護(hù)基；且R1為氫或乙酰胺部分氨基的保護(hù)基。
人們會(huì)認(rèn)識(shí)到，采用該方法獲得的鹽不是藥學(xué)上可接受的鹽，然而可用來(lái)通過(guò)進(jìn)行隨后的鹽交換程序轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽。這類鹽交換程序是本領(lǐng)域眾所周知的。合適的鹽交換法包括例如離子交換技術(shù)，任選地后接所得產(chǎn)物的純化(例如通過(guò)反相液相色譜或反滲透)。所述方法最好這樣進(jìn)行，使得直接獲得所需的藥學(xué)上可接受的鹽，而無(wú)需隨后的鹽交換程序。
Pg可以是本領(lǐng)域已知的可用于保護(hù)精氨酰殘基中胍基的任何保護(hù)基。當(dāng)R1為乙酰胺部分氨基的保護(hù)基時(shí)，它可以是本領(lǐng)域已知可用來(lái)保護(hù)這種基團(tuán)的任何保護(hù)基。保護(hù)基Pg和R1以及其脫除條件的合適實(shí)例公開(kāi)于例如J Jones，The Chemical Synthesis of Peptides，Clarendon Press，Oxford，1994；T Greeve，P Wuts，Protective Groups inOrganic Synthesis，J Wylcy & Sons，3rdEdition，1999；以及Bodanszky和Bodanszky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer，2ndEdition，1994，所述文獻(xiàn)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。人們會(huì)認(rèn)識(shí)到，兩個(gè)精氨酰殘基上的保護(hù)基Pg可以相同或不同，雖然它們最好相同。Pg的一個(gè)特別優(yōu)選的例子(value)是硝基。當(dāng)R1為保護(hù)基時(shí)，它的一個(gè)具體例子為例如芐基。最好是Pg為硝基，而R1為氫。使用其中Pg為硝基而R1為氫的式II化合物的一個(gè)具體優(yōu)點(diǎn)是，雖然該化合物是無(wú)定形的，但例如通過(guò)將丙酮水溶液加入到所述化合物的DMF溶液中，可以通過(guò)再沉淀而獲得高純度的所述化合物。使用這種具體式II化合物的另一優(yōu)點(diǎn)是，使用本身能夠高收率地以純形式分離的中間體，可以獲得所述式II化合物。
當(dāng)Pg基團(tuán)為硝基而R1為氫時(shí)，保護(hù)精氨酰殘基的硝基最好通過(guò)化學(xué)還原而脫除，例如采用催化氫化、催化轉(zhuǎn)移氫化或溶解金屬還原例如鋅/乙酸或錫/乙酸。特別優(yōu)選催化氫化。催化氫化的合適催化劑包括例如披鈀碳、氧化鉑、鈀黑和鈀鹽例如乙酸鈀(II)。催化氫化可方便地在溶劑或溶劑混合物存在下進(jìn)行。溶劑或溶劑混合物的選擇可以取決于是否需要式I化合物的特定鹽。合適的溶劑包括例如乙酸水溶液、三氟乙酸水溶液、甲酸水溶液或無(wú)機(jī)酸水溶液，特別是乙酸水溶液。乙酸水溶液(乙酸與水的比率最好是25∶1至3∶1v/v，更優(yōu)選為20∶1至3∶1v/v，或者乙酸與水的比率是1∶3至3∶1v/v，例如1∶2v/v)的應(yīng)用尤其有用，因?yàn)橹苯由墒絀化合物的二乙酸鹽，這是特別優(yōu)選的鹽。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述溶劑包含乙酸水溶液和一種比乙酸更強(qiáng)的第二種酸。所述第二種酸的pKa低于乙酸的pKa。合適的第二種酸包括無(wú)機(jī)酸或更優(yōu)選有機(jī)酸，例如氟化乙酸，例如二氟乙酸或三氟乙酸。最好是所述乙酸相對(duì)于所述第二種酸過(guò)量存在(例如乙酸與第二種酸的比率為2∶1至40∶1v/v，更優(yōu)選為5∶1至30∶1v/v)。在該實(shí)施方案中，第二種酸最好相對(duì)于式II化合物等摩爾存在，或更優(yōu)選以摩爾過(guò)量存在，例如第二種酸相對(duì)于式II化合物為1∶10摩爾當(dāng)量，更優(yōu)選為2∶8摩爾當(dāng)量。一種特別有用的溶劑包括例如含有每當(dāng)量式II化合物5當(dāng)量的三氟乙酸的乙酸水溶液。用于催化氫化的一種特別優(yōu)選的催化劑包括3-20％披鈀碳，例如5-10％披鈀碳或披鈀沸石或硅石。所述催化劑的用量最好使得有0.3-1.2％w/w鈀/式II化合物或其鹽。所述氫化最好在0-100巴表壓的氫氣壓下、最好是0-10巴表壓，尤其是1-5巴表壓下進(jìn)行。催化氫化可方便地在例如10-70℃、最好是20-50℃范圍的溫度下進(jìn)行。
藥學(xué)上可接受的鹽包括例如與形成酸的生理上可接受的陰離子的鹽，例如與無(wú)機(jī)酸形成的鹽，所述無(wú)機(jī)酸例如鹵化氫(例如氯化氫和溴化氫)、磺酸和膦酸；以及與有機(jī)酸形成的鹽，有機(jī)酸例如乙酸、草酸、酒石酸、對(duì)甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸等。
在第二個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)式II化合物或其鹽的方法，所述方法包括將式III的羧酸或其鹽 式III其中Pg如上所限定(最好是硝基)，與式IV的胺偶聯(lián) 式IV其中Pg和R1如上所限定(最好Pg為硝基，而R1為氫)。
所述偶聯(lián)反應(yīng)采用本領(lǐng)域已知用于將酸與胺偶聯(lián)生成酰胺的任何標(biāo)準(zhǔn)方法來(lái)進(jìn)行。這類方法例如描述于Bodansky和Bodansky(出處參見(jiàn)上文)，該文獻(xiàn)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。具體地說(shuō)，例如所述偶聯(lián)適合于在有機(jī)溶劑例如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)或四氫呋喃(THF)中，在偶聯(lián)劑存在下進(jìn)行。通常的偶聯(lián)劑包括例如1-羥基苯并三唑(HOBt)存在下的二環(huán)己基碳二亞胺(DCCI)、二異丙基碳二亞胺(DIC)或1-(3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亞胺(EDCI)、或叔胺堿例如N-甲基嗎啉(NMM)或二異丙基乙胺(DIPEA)存在下的四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓。最好使用NMM存在下的EDCI和HOBt。當(dāng)用EDCI作為偶聯(lián)劑時(shí)，它最好是鹽酸加成鹽的形式。當(dāng)在HOBt存在下進(jìn)行偶聯(lián)時(shí)，最好使用其一水合物形式的HOBt。
通常，偶聯(lián)最初在低溫下進(jìn)行，例如在-5℃至+5℃的范圍的溫度下進(jìn)行，可以讓反應(yīng)混合物達(dá)到環(huán)境溫度。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，偶聯(lián)在DMF或NMP中、在低于0℃的溫度例如在0℃至-5℃范圍的溫度下進(jìn)行。尤其優(yōu)選偶聯(lián)在DMF中、在0℃至-5℃范圍的溫度下進(jìn)行。本發(fā)明的再一實(shí)施方案是一種生產(chǎn)式I化合物的鹽的方法，所述方法包括將如上限定的式III的羧酸或其鹽與如上限定的式IV的胺偶聯(lián)，生成式II化合物或其鹽，然后將式II化合物或其鹽脫保護(hù)，其中Pg是精氨酸保護(hù)基，而R1為氫或乙酰胺部分氨基的保護(hù)基(例如芐基)，生成式I化合物的鹽。在該方法中，最好是Pg為硝基，而R1為氫。
式IV化合物最好從其保護(hù)形式例如通過(guò)用式V化合物產(chǎn)生 式V其中Pg如上所限定(最好是硝基)，R1如上所限定(最好是氫)，且Pg1為氨基保護(hù)基。重要的是，Pg1的選擇使得當(dāng)R1不是氫時(shí)，Pg1可以在Pg和R1存在下被選擇性地脫除。當(dāng)Pg為硝基，而R1為氫或芐基時(shí)，保護(hù)基Pg1最好是可以在酸性條件下容易被脫除的基團(tuán)，例如叔丁酯基(Boc)。該保護(hù)基然后可以用例如氯化氫氣體或芳基磺酸脫除。合適的芳基磺酸包括例如甲苯磺酸，或更優(yōu)選苯磺酸。當(dāng)Pg1為Boc時(shí)，尤其優(yōu)選用苯磺酸脫除Pg1。Pg1的脫除最好在惰性溶劑中進(jìn)行。合適的惰性溶劑包括例如二氯甲烷、四氫呋喃或乙酸乙酯。如果需要，在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之前，所述溶劑可以更換為另一種溶劑，例如DMF或NMP，而無(wú)需進(jìn)一步純化所生成的式IV化合物。當(dāng)R1不是氫時(shí)，允許在Pg和R1存在下選擇性地脫除Pg1的Pg、R1和Pg1的其它合適例子是本領(lǐng)域眾所周知的。
因此，本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面包括一種生產(chǎn)式I化合物的鹽的方法，所述方法包括下述步驟(1)從其中Pg和R1如上所限定(最好是Pg為硝基，而R1最好為氫或芐基，尤其是氫)的式V化合物(Pg1最好為Boc)中選擇性地脫除氨基保護(hù)基Pg1，以生成如上限定的式IV的氨基化合物；(2)將式IV的氨基化合物與如上限定的式III的羧酸或其鹽偶聯(lián)，生成如上限定的式II化合物或其鹽；和(3)將其中Pg為精氨酸保護(hù)基且R1為氫或乙酰胺部分氨基的保護(hù)基(例如芐基)的式II化合物或其鹽脫保護(hù)，生成式I化合物的鹽。在該方法中，最好是Pg為硝基，而R1為氫。
最好是，如上限定的式III化合物或其鹽最好通過(guò)式VI的酯的水解來(lái)制備 式VI其中R為烷基，例如(1-6C)烷基或芳烷基(例如苯基(1-6C)烷基例如芐基)，而Pg如上所限定(最好是硝基)。通常，水解在含水堿條件下進(jìn)行，例如使用堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉或氫氧化鋰)的水溶液和合適的有機(jī)溶劑(例如乙腈)進(jìn)行。水解可方便地在環(huán)境溫度下進(jìn)行。隨后例如用鹽酸將反應(yīng)混合物酸化，得到游離酸。尤其有利的是使用其中R為甲基且Pg為硝基的式VI化合物，因?yàn)橐呀?jīng)發(fā)現(xiàn)該化合物可以以晶體形式獲得。這一發(fā)現(xiàn)特別有利，因?yàn)樗蟠笥兄讷@得純的均一形式的式I化合物的鹽。式VI化合物可以通過(guò)提供獲得式VI化合物的超飽和溶液來(lái)結(jié)晶。采用已知技術(shù)，例如通過(guò)將所述化合物在合適溶劑中的溶液冷卻，從所述化合物的溶液中蒸發(fā)溶劑，或通過(guò)將反溶劑(anti-solvent)加至式VI化合物的溶液中，其中所述反溶劑是所述式IV化合物于其中不溶或微溶的溶劑，可以實(shí)現(xiàn)形成過(guò)飽和溶液。用于式VI化合物結(jié)晶的合適溶劑包括乙腈、丁腈、異丁醇或乙酸乙酯。其中Pg為硝基且R為甲基的式VI化合物最好從乙腈中結(jié)晶。
因此，本發(fā)明的另一優(yōu)選方面包括一種在以上步驟(1)、(2)和(3)中限定的方法，其中步驟(2)中所用的式III化合物通過(guò)其中R如上所限定(最好是甲基)且Pg如上所限定(最好是硝基)的式VI化合物的水解而獲得。
式V化合物通過(guò)將其中Pg和R1如上所限定(最好Pg為硝基，且R1為氫)的式VII化合物 式VII與式VIII的羧酸或其鹽偶聯(lián)而獲得 式VIII其中Pg1為氨基保護(hù)基，最好是Boc。
用于進(jìn)行該偶聯(lián)反應(yīng)的條件與以上對(duì)于將式III化合物和式IV化合物偶聯(lián)所述的條件類似。乙腈和DMF的混合物是供該偶聯(lián)反應(yīng)用的優(yōu)選溶劑混合物。在該偶聯(lián)反應(yīng)期間的溫度最好為0℃或更低，更優(yōu)選為0℃至-10℃，尤其是0℃至-5℃。
或者，式V化合物可以通過(guò)將式XI化合物 式XI其中Pg和Pg1如上所限定(最好Pg為硝基，且Pg1為Boc)，與式XII化合物偶聯(lián)而獲得 式XII其中R1為氫或保護(hù)基，例如芐基。
因此，本發(fā)明的再一方面包括一種在以上步驟(1)、(2)和(3)中限定的方法，其中在步驟(1)中所用的式V化合物通過(guò)將其中Pg和R1如上所限定(最好是Pg為硝基，且R1為氫)的式VII化合物與其中Pg1為能夠在Pg和R1存在下被選擇性地脫除的氨基保護(hù)基(最好為Boc)的式VIII的羧酸或其鹽偶聯(lián)而獲得。
本發(fā)明的再一方面包括一種在以上步驟(1)、(2)和(3)中限定的方法，其中在步驟(1)中所用的式V化合物通過(guò)將其中R1如上所限定(最好是氫或芐基)的式XII化合物與其中Pg和Pg1如上所限定(最好Pg為硝基，且Pg1為Boc)的式XI的化合物偶聯(lián)而獲得。
最好通過(guò)從式IX化合物選擇性地脫除氨基保護(hù)基Pg2而獲得式VII化合物， 式IX其中Pg和R1如上所限定(最好是Pg為硝基，且R1為氫或芐基，最好為氫)，而Pg2為當(dāng)R1不是氫時(shí)可以在Pg和R1存在下被選擇性地脫除的氨基保護(hù)基。Pg2最好是以上在Pg1方面提及的優(yōu)選氨基保護(hù)基之一，更優(yōu)選Pg2為Boc，Boc可以在上述的溫和酸性條件下被脫除。當(dāng)Pg2為Boc時(shí)，最好用甲苯磺酸、或更優(yōu)選用苯磺酸將其脫除。
其中Pg1為Boc的式VIII化合物可以按下文的實(shí)施例中所述方法獲得，而其它式VIII化合物可以采用類似的方法來(lái)制備。用于制備式VIII化合物的一種合適方法包括例如水解式VIIIa的酯 式VIIIa其中Pg1如上所限定(最好是Boc)，且R為烷基例如(1-6C)烷基、或芳烷基(例如苯基(1-6C)烷基，例如芐基)(1-6C)烷基。R最好是(1-6C)烷基，更優(yōu)選為(1-4C)烷基，尤其是甲基。
水解通?？梢圆捎门c上述關(guān)于式VI化合物水解所述的相似條件來(lái)進(jìn)行。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，式VIIIa化合物的水解在使用氫氧化鋰作為堿的含水堿性條件下進(jìn)行。所述水解最好在0-10℃、更優(yōu)選0-5℃范圍的溫度下進(jìn)行。
式VIIIa化合物可以用已知方法例如WO 97/31023的實(shí)施例1中所述的方法、或采用WO 99/55669中所述的方法制備。或者，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，可以采用與上述方法類似的方法，但使用替代的甲基化劑例如硫酸二甲酯，可以制備式VIIIa化合物。
式XI化合物可以例如通過(guò)水解式XIII的相應(yīng)酯來(lái)獲得 式XIII其中Pg和Pg1如上所限定，且R為烷基(例如(1-6C)烷基，或優(yōu)選(1-4C)烷基)或芳烷基(例如苯基(1-6C)烷基，例如芐基)。所述水解通常采用與上述關(guān)于式VI化合物水解所述的類似條件進(jìn)行。
在上述用于生產(chǎn)式I化合物的方法中使用式IX或XI化合物和式VI化合物的一個(gè)具體優(yōu)點(diǎn)是，這些化合物可以從同一式X原材料獲得 式X其中Pg、Pg2和R如上所限定。其優(yōu)點(diǎn)是減少制備式(I)化合物所需的方法的步驟數(shù)。
在式X中，最好是Pg是硝基，Pg2為Boc，且R為甲基，因?yàn)橐呀?jīng)意外地發(fā)現(xiàn)，這種化合物為晶狀，因此可以以純形式制備。可以用與以上關(guān)于式VI化合物結(jié)晶所述方法的類似方法，使這種化合物從合適的溶劑中結(jié)晶出來(lái)。用于使該化合物結(jié)晶的合適溶劑包括例如乙腈。
可以由式X化合物通過(guò)脫除Pg2并且與5-苯基戊酸偶聯(lián)，獲得式VI化合物。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述偶聯(lián)在甲醇存在下進(jìn)行，更優(yōu)選在甲醇和DCM的混合物中進(jìn)行。最好如上所述，分離晶形的式VI化合物。
可以從式X化合物，通過(guò)水解所述酯官能團(tuán)而形成一個(gè)羧酸基團(tuán)，并將如此形成的化合物與式XII化合物偶聯(lián)，獲得式IX化合物。水解反應(yīng)和偶聯(lián)反應(yīng)可以用與上述方法類似的方法進(jìn)行。一種用于水解反應(yīng)和偶聯(lián)反應(yīng)的優(yōu)選溶劑是THF。
通過(guò)脫除Pg2、與式VIII化合物偶聯(lián)并水解所述酯官能團(tuán)以生成羧酸，可以從式X化合物獲得式XI化合物。通?？梢杂门c上述用于式VI化合物水解的所述方法的相似條件進(jìn)行所述水解。
4-氨基苯乙酰胺(式XII，R1為H)可以例如按下文實(shí)施例中所述方法獲得。用于制備4-氨基苯乙酰胺的一種優(yōu)選方法包括下述步驟(i)在硫酸存在下用合適的醇將4-氨基苯乙酸酯化，得到4-氨基苯乙酸酯硫酸氫鹽；且(ii)使步驟(i)中的產(chǎn)物與氨反應(yīng)。
步驟(i)中所用的醇最好是(1-4C)鏈烷醇，例如乙醇，或更優(yōu)選為甲醇。
步驟(i)的合適反應(yīng)溫度低于30℃，更優(yōu)選低于25℃。該方法的步驟(ii)優(yōu)選在水性介質(zhì)、更優(yōu)選在含溶解的氯化鈉的水中進(jìn)行。最好將氨水加入到步驟(i)產(chǎn)物的水溶液中。最好在該方法的步驟(ii)之前分離出晶形的步驟(i)產(chǎn)物?？梢宰尣襟E(i)產(chǎn)物從合適溶劑中，例如從甲基·叔丁基醚中結(jié)晶。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，這種優(yōu)選方法提供高收率純形式的4-氨基苯乙酰胺。這種優(yōu)選方法是本發(fā)明的另一個(gè)方面。
其中R1為保護(hù)基例如芐基的式XII化合物，可以例如通過(guò)從式XIIa化合物中脫除氨基保護(hù)基Z來(lái)獲得，其中Z是如上文對(duì)于Pg1所限定的氨基保護(hù)基(例如Boc) 式XIIa
其中R1如上文所限定?？梢圆捎靡陨蠈?duì)于Pg1的脫除所述的類似條件，脫除保護(hù)基Z。
式XIIa化合物可以例如通過(guò)將式XIIb化合物與其中R1如上限定的式R1NH2化合物偶聯(lián)來(lái)制備 式XIIb其中Z如上所限定。
例如，當(dāng)式XII化合物中的R1為芐基時(shí)，該化合物可以通過(guò)將4-(丁氧羰基氨基)苯乙酸與芐胺偶聯(lián)、然后在酸性條件下脫除Boc基團(tuán)來(lái)制備。在這些情況下，可以使用與以上關(guān)于式III和IV化合物偶聯(lián)所述的類似偶聯(lián)條件。用于該偶聯(lián)反應(yīng)的合適溶劑包括例如四氫呋喃。
式X化合物可以通過(guò)從式XIV化合物選擇性脫除Pg3并且與Pg2保護(hù)的(S)-丙氨酸偶聯(lián)而獲得 式XIV其中Pg3為可以在Pg存在下被選擇性脫除的合適的氨基保護(hù)基；且R、Pg和Pg2如上所限定。用Pg3表示的合適基團(tuán)如上文關(guān)于Pg2的限定，最好是Boc。在式XIV中，最好Pg為硝基，且Pg3為Boc。正如人們會(huì)理解的，在Pg2保護(hù)的(S)-丙氨酸中，Pg2是(S)-丙氨酸中氨基的保護(hù)基。最好是Pg2和Pg3相同，更優(yōu)選Pg2和Pg3都是Boc。R優(yōu)選為(1-4C)烷基，更優(yōu)選為甲基。
用于脫除Pg3的條件與上述關(guān)于從式V化合物中脫除Pg1所述的條件類似。在從式XIV化合物中脫除Pg3后，用于與Pg2保護(hù)的(S)-丙氨酸偶聯(lián)的條件與以上關(guān)于式III和IV化合物偶聯(lián)所述的條件類似。當(dāng)Pg3為Boc時(shí)，最好用芳基磺酸、更優(yōu)選用甲苯磺酸或尤其是苯磺酸將其脫除。
最好如上所述，分離出晶形的式X化合物。
式XIV化合物可以通過(guò)將式XV化合物或其鹽與式XVI化合物或其鹽偶聯(lián)來(lái)獲得 式XV 式XVI其中Pg、Pg3和R如上所限定(最好Pg為硝基，Pg3為Boc，且R為甲基)。用于式XV化合物和XVI化合物偶聯(lián)的合適條件與上述式III化合物和式IV化合物偶聯(lián)所用的條件類似。
式XV化合物最好是叔丁酯基-(S)-精氨酰(NO2)-OH。式XVI化合物最好是丙氨酸(1-6C)烷基酯鹽酸鹽，更優(yōu)選為丙氨酸甲酯鹽酸鹽。
我們已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)Pg為硝基，Pg3為Boc，且R為甲基時(shí)，式XIV化合物為晶狀。這種化合物可以通過(guò)從合適的溶劑例如乙酸(1-6C)烷基酯如乙酸丙酯或乙酸正丁酯中結(jié)晶，而以晶形分離出。
最好是，式XIV化合物在與Pg2保護(hù)的(S)-丙氨酸偶聯(lián)形成式X化合物之前，以晶形分離出來(lái)，因?yàn)檫@將不希望有的雜質(zhì)的形成降至最低。然而，如有必要，可以將式XV化合物和XVI化合物的偶聯(lián)、然后與Pg2保護(hù)的(S)-丙氨酸偶聯(lián)疊縮在一起。
式II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI XII和XIII的某些中間體是新型的，是本發(fā)明的其它獨(dú)立方面。本發(fā)明的另外的獨(dú)立方面是本文所述用于制備所述新型中間體的方法。
現(xiàn)在將通過(guò)以下非限制性實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，在所述實(shí)施例中，除非另有說(shuō)明(i)通過(guò)在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行濃縮和蒸發(fā)；(ii)在室溫下、即在18-26℃的范圍內(nèi)進(jìn)行操作；(iii)當(dāng)給出收率時(shí)，所述收率僅用于幫助讀者，不一定是通過(guò)努力地進(jìn)行方法開(kāi)發(fā)可獲得的最大收率；(iv)1H NMR譜用四甲基硅烷(TMS)作內(nèi)標(biāo)來(lái)測(cè)定，采用下述主峰命名的常規(guī)縮寫(xiě)、以相對(duì)于TMS的百萬(wàn)分之幾計(jì)的化學(xué)位移(δ值)來(lái)表示s，單峰；d，雙峰；m，多重峰；t，三重峰；br，寬峰。
實(shí)施例1(從式II化合物(Pg＝硝基；R1＝H)制備式I化合物(SEQ ID NO1)的三氟乙酸鹽)將5-苯基戊酰-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-{(S)-2-[(R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酰}-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式II；Pg＝硝基)(SEQ ID NO2)(0.75g)和5％披鈀碳(0.083g 60％水潤(rùn)濕糊料，6∶4干固體∶水)加入到玻璃壓力容器中的乙酸(6ml)、水(2ml)和三氟乙酸(0.24ml)混合物中，混合物用氬氣在4巴壓力下吹掃3次。將混合物加熱至50℃，然后用氫氣在4巴下吹掃。將混合物于50℃、5.5巴壓力下攪拌3.25小時(shí)。然后用氬氣在4巴壓力下吹掃所述壓力容器3次。將反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土水潤(rùn)濕墊熱過(guò)濾。容器和濾餅用水(2×4ml)洗滌。合并的濾液通過(guò)蒸發(fā)濃縮，得到無(wú)色油狀物。將油狀物溶于甲醇(25ml)中，通過(guò)蒸發(fā)濃縮混合物。重復(fù)該步驟數(shù)次，得到無(wú)色油狀物(0.92g)。將油狀物溶于熱甲醇(5ml)中，加入乙酸乙酯(20ml)以沉淀白色固體。通過(guò)真空過(guò)濾收集固體，并用乙酸乙酯(5ml)洗滌，得到作為二三氟乙酸鹽的式I的5-苯基戊酰-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰-(S)-丙氨酰-{(S)-2-[(R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酰}-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(SEQ IDNO1)(0.78g)；1H NMR(d6-DMSO)1.20(m，6H)，1,25(d，3H)，1.28(d，3H)，1.32(d，3H)，1.51(m，10H)，1.70(m，3H)，2.14(m，2H)，2.29(m，1H)，2.57(t，2H)，3.09(m，4H)，3.36(m，4H)，4.26(m，5H)，4.38(m，2H)，4.60(dd，1H)，7.13-7.30(m，7H)，7.50(d，2H)。通過(guò)使式I化合物的二三氟乙酸鹽溶液在乙酸銨存在下通過(guò)離子交換柱，將所述式I化合物的二三氟乙酸鹽轉(zhuǎn)化為二乙酸鹽。然后，可以用反相液相色譜純化所得產(chǎn)物。
實(shí)施例2(從式III化合物(Pg＝硝基)和式IV化合物(Pg＝硝基；；R1＝H)制備式II化合物(Pg＝硝基；R1＝H)(SEQ ID NO2))將{(S)-2-[(R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酰}-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式IV；Pg＝硝基)(5.8g)在于21℃攪拌下溶于DMF(25ml)中。將溶液冷卻至-3℃至-4℃，緩慢加入N-甲基嗎啉(1.5ml)，并將混合物的溫度維持在-1℃和-4℃之間。沉淀出白色固體。當(dāng)加入完成時(shí)，攪拌混合物，并將其溫?zé)嶂?1℃，得到澄清的溶液。加入5-苯基戊酰-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸(式III；Pg＝硝基)(3.27g)和1-羥基苯并三唑一水合物(0.63g)，將混合物于21℃攪拌直至獲得澄清的溶液。然后將溶液冷卻至-4℃，一次性加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1.48g)。將反應(yīng)混合物于-4℃攪拌4.75小時(shí)。停止冷卻，在7分鐘內(nèi)滴加水(48ml)。在10分鐘內(nèi)滴加丙酮(48ml)和水(48ml)的混合物，將反應(yīng)混合物于21℃至25℃攪拌16小時(shí)。通過(guò)真空過(guò)濾收集沉淀的固體，用水(90ml)洗滌，然后用丙酮(2×90ml)洗滌，得到5-苯基戊酰-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-{(S)-2-[(R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酰}-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式II；Pg＝硝基)(SEQ ID NO2)(6.0g)；1H NMR(d6-DMSO)1.18(d，3H)，1.20(d，3H)，1.23(d，3H)，1.27(d，3H)，1.31(d，3H)，1.52(m，10H)，1.70(m，3H)，2.13(t，3H)，2.29(m，1H)，2.56(t，3H)，3.15(m，4H)，3.33(m，4H)，4.27(m，5H)，4.38(m，2H)，4.60(dd，1H)，7.13-7.29(m，7H)，7.51(d，2H)。
式IV化合物的制備將{(S)-2-[(R)-3-(N-[叔丁酯基]氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酰}-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式V，Pg＝硝基；Pg1＝Boc)(5.0g)于22℃至24℃、氯化氫在乙酸乙酯(90ml)中的飽和溶液中攪拌3小時(shí)。然后將氬氣通過(guò)反應(yīng)混合物中達(dá)30分鐘。然后真空濃縮反應(yīng)混合物。用乙酸乙酯研磨所得的固體，并從乙酸乙酯中蒸發(fā)，經(jīng)過(guò)濾收集所述固體，得到{(S)-2-[(R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酰}-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式IV；Pg＝硝基)(5.92g)。
實(shí)施例3(從式VII化合物(Pg＝硝基；R1＝H)和式VIII化合物(Pg1＝Boc)制備式V化合物(Pg＝硝基；Pg1＝Boc；R1＝H))將(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式VII；Pg＝硝基)(44.5g)、(S)-2-[(3R)-3-(N-[叔丁酯基]氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酸(式VIII，Pg1＝Boc)(21.14g)和1-羥基苯并三唑一水合物(5.93g)加入到乙腈(863ml)和DMF(128ml)的混合物中。將攪拌的混合物冷卻至-2℃，緩慢加入N-甲基嗎啉(20.2ml)。將混合物的溫度升至大約0℃。將混合物再冷卻至-3℃，在攪拌下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(14.16g)。將混合物于-3℃至-5℃攪拌20小時(shí)，然后濃縮，得到含細(xì)微白色沉淀的油狀物。經(jīng)過(guò)濾除去固體，用乙腈洗滌所述固體。合并洗滌液和濾液，在高度真空下濃縮，得到油狀物(132g)。將異丁醇(860ml)加入到油狀物中，混合物順序用10％氯化鈉水溶液、1.0M硫酸氫鈉溶液、碳酸鈉水溶液洗滌，然后再次用10％氯化鈉溶液洗滌。重復(fù)該洗滌步驟，直至用氯化鈉溶液洗滌的最終洗滌液的pH為7。蒸餾有機(jī)相，不時(shí)地加入異丁醇，直至蒸餾頭溫度達(dá)到107℃。然后使溶液通過(guò)帶夾套濾器(夾套溫度65℃)中的硅藻土墊過(guò)濾。將經(jīng)過(guò)濾的溶液再加熱至回流，得到澄清的溶液。讓該溶液在攪拌下冷卻至66℃，此時(shí)停止攪拌，讓混合物冷卻至環(huán)境溫度。通過(guò)過(guò)濾收集沉淀的固體，用異丁醇洗滌并且在真空爐中于45℃干燥至恒重。如此獲得-{(S)-2-[(R)-3-[N-叔丁酯基]氨基-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酰}-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式V，Pg＝硝基；Pg1＝Boc)(48.5g)；1H NMR(d6-DMSO)1.23(d，3H)，1.27(d，3H)，1.32(d，3H)，1.39(s，9H)，1.53(m，3H)，1.73(m，2H)，2.23(m，1H)，3.16(m，2H)，3.31(m，4H)，4.11(m，1H)，4.25(m，2H)，4.38(m，1H)，4.55(m，1H)，7.18(m，2H)，7.52(m，2H)。
式VII化合物的制備將氯化氫的乙酸乙酯(335ml)溶液加入到在冰水浴中冷卻的叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式IX，Pg＝硝基；Pg2＝Boc)(43.2g)中。將混合物在冷卻下攪拌10分鐘，然后讓其升溫至環(huán)境溫度。7.5小時(shí)之后，過(guò)濾混合物，分離出的固體用乙酸乙酯(4×125ml)洗滌。然后將固體于環(huán)境溫度下真空干燥16小時(shí)，得到(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式VII；Pg＝硝基)(44.5g)，使用該化合物，而無(wú)需進(jìn)一步純化。
式VIII化合物(Pg1＝Boc)的制備將氫氧化鈉溶液(1.88M；150ml)加入到(R)-甲硫氨酸(25.0g；0.166mol)中，然后加入叔丁醇(100ml)。將混合物冷卻至0-5℃，一次性加入二碳酸二叔丁酯(41.1g)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃，并攪拌4小時(shí)。使混合物冷卻至0-5℃，加入2M檸檬酸水溶液(128ml)，同時(shí)保持溫度低于5℃。加入二氯甲烷(250ml)，于20℃攪拌混合物15分鐘。分離出上層水相，保留有機(jī)相。水相用二氯甲烷(125ml)萃取，將萃取液與保留的有機(jī)相合并。合并的有機(jī)相用水(250ml)洗滌，于常壓下蒸餾直至保留250ml的體積。將溶液(該溶液含有Boc-(R)-甲硫氨酸)冷卻至0-5℃，加入(S)-丙氨酸甲酯鹽酸鹽(25.7g)、1-羥基苯并三唑水合物(24.6g)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(35.6g)和N-甲基嗎啉(35.6g)，同時(shí)將混合物的溫度保持低于5℃。然后將混合物溫?zé)嶂?0℃，并于該溫度下攪拌5小時(shí)。將混合物冷卻至0-5℃，加入水(100ml)，同時(shí)將溫度保持低于5℃，并將混合物攪拌15分鐘。分離有機(jī)相，順序用水(150ml)、2M檸檬酸水溶液(100ml)、20％碳酸氫鈉水溶液(100ml)和鹽水(100ml)洗滌。加入二氯甲烷(450ml)至有機(jī)相中，于常壓下蒸餾所述混合物，直至收集100ml餾出液。將混合物(該混合物含有Boc-(R)-Met-(S)-Ala-OMe)冷卻至0-5℃，一次性加入四氟硼酸三甲基氧鎓(25.1g；0.166mol)，同時(shí)將溫度保持在0-5℃。讓混合物在30分鐘內(nèi)溫?zé)嶂?0℃，然后再攪拌4小時(shí)。加入粉狀碳酸鉀(325目；71.9g)，將混合物回流12小時(shí)。讓混合物冷卻至0-5℃，加入水(300ml)。將混合物于20℃攪拌15分鐘，然后通過(guò)燒結(jié)漏斗(孔隙率為3)過(guò)濾。分離出濾液的下層有機(jī)相，用水(300ml)洗滌。于常壓下蒸餾該溶液，直至收集320ml餾出液，并加入乙酸正丁酯(200ml)。將溶液于70-75℃減壓濃縮，直至留下80ml濃縮液。將濃縮液冷卻至40℃，加入異己烷(80ml)。將混合物冷卻至20℃，然后加熱至40℃，在1小時(shí)內(nèi)緩慢加入額外的異己烷(320ml)。將混合物于40℃再攪拌30分鐘，然后冷卻至0-5℃，并攪拌1小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾收集懸浮的晶狀固體，用冷異己烷(2×50ml)洗滌，在真空爐中于50℃干燥8小時(shí)，得到(S)-2-[(R)-3-(N-叔丁酯基]氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酸甲酯(36.5g)。將所述產(chǎn)物(25g)的水(195ml)溶液冷卻至0-5℃，在攪拌下在1小時(shí)內(nèi)加入氫氧化鈉的水(47％w/w；5.45ml)溶液。當(dāng)加入完成時(shí)，再將反應(yīng)混合物于0-5℃攪拌90分鐘，然后在2小時(shí)內(nèi)加入硫酸氫鉀(13.67g)的水(50ml)溶液至所述冷混合物中。再經(jīng)1小時(shí)后，過(guò)濾所述冷混合物。所收集的固體用小體積水洗滌，并且于40℃真空干燥，得到(S)-2-[(R)-3-(N-[叔丁酯基]氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酸(21.8g)。
式VIII化合物(Pg1＝Boc)的替代制備方法將6.13％w/w氫氧化鈉水溶液(184.1g)加入至(R)-甲硫氨酸(25.0g；0.166mol)中，然后加入叔丁醇(92.5ml)中。將混合物冷卻至0-5℃，在45分鐘內(nèi)分4次加入二碳酸二叔丁酯(42.2g)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃并攪拌4小時(shí)。將混合物冷卻至0-5℃，加入30％w/w檸檬酸水溶液(164g)，同時(shí)保持溫度低于5℃。加入二氯甲烷(250ml)，將混合物于20℃攪拌15分鐘。分離上層水相，保留有機(jī)相。水相用二氯甲烷(125ml)萃取，將萃取液與保留的有機(jī)相合并。合并的有機(jī)相用水(250ml)洗滌，然后用17％w/w氯化鈉水溶液(300g)洗滌。于常壓下蒸餾有機(jī)相，直至保留250ml的體積。將該溶液(該溶液含有Boc-(R)-甲硫氨酸)冷卻至-5℃至0℃，加入N-甲基-嗎啉(35.7g)，同時(shí)保持溫度為-5℃至0℃。加入(S)-丙氨酸甲酯鹽酸鹽(25.8g)，然后加入1-羥基苯并三唑水合物(24.7g)。在1小時(shí)內(nèi)分4次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(36.1g)。將混合物于-5℃至0℃攪拌5小時(shí)。加入水(100ml)，同時(shí)保持溫度低于5℃，將混合物攪拌15分鐘。分離有機(jī)相，順序用水(100ml)、30％w/w檸檬酸水溶液(132g)、9.1％w/w碳酸氫鈉水溶液(110g)和16.7％w/w氯化鈉水溶液(120g)洗滌。加入二氯甲烷(450ml)至有機(jī)相中，于常壓下蒸餾混合物，直至保留500ml的體積。將混合物(該混合物含有Boc-(R)-Met-(S)-Ala-OMe)冷卻至0-5℃，一次性加入四氟硼酸三甲基氧鎓(24.7g)，同時(shí)將溫度保持在0-5℃。讓混合物在30分鐘內(nèi)溫?zé)嶂?0℃，然后再攪拌4小時(shí)。分3次加入碳酸鉀(96g)，讓混合物總共回流20小時(shí)。加入水(400ml)，同時(shí)保持溫度＜5℃。將混合物于20℃攪拌15分鐘，通過(guò)硅藻土墊(5.0g)過(guò)濾。分離濾液的下層有機(jī)相，然后用水(300ml)洗滌。于常壓下蒸餾溶液，直至保留120ml的體積。加入乙酸正丁酯(385ml)，然后于100mbar下減壓濃縮溶液，直至保留205ml的體積。將濃縮液冷卻至60℃，加入異己烷(614ml)，同時(shí)保持溫度≥55℃。將混合物冷卻至0℃，然后攪拌1小時(shí)。經(jīng)過(guò)濾收集懸浮的晶狀固體，用冷乙酸正丁酯∶異己烷(32ml∶101ml)洗滌，然后用冷異己烷(135ml)洗滌，然后在真空爐中于50℃干燥17小時(shí)，得到(S)-2-[(R)-3-(N-[叔丁酯基]氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酸甲酯(23.7g)；1H NMR(d6-DMSO)1.30(d，3H)，1.40(s，9H)，1.80(m，1H)，2.25(m，1H)，3.20(m，1H)，3.30(t，1H)，3.65(s，3H)，4.10(m，1H)，4.65(m，1H)，7.10(d，1H)將該產(chǎn)物(70g)的水(595ml)溶液冷卻至0-5℃，在攪拌下在1小時(shí)內(nèi)加入氫氧化鋰一水合物(11.15g)的水(105ml)溶液。將反應(yīng)混合物于0-5℃再攪拌2小時(shí)，然后在2小時(shí)內(nèi)加入硫酸氫鉀(37.84g)的水(140ml)溶液至所述冷混合物中。再經(jīng)1小時(shí)后，過(guò)濾所述冷混合物。所收集的固體用小體積水洗滌，于40℃真空干燥，得到(S)-2-[(R)-3-(N-[叔丁酯基]氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酸(21.8g)；1H NMR(d6-DMSO)1.33(m，3H)，1.79(m，1H)，2.27(m，1H)，3.28(m，2H)，4.06(q，1H)，4.55(m，1H)，7.09(d，1H)。
(S)-2-[(R)-3-(N-[叔丁酯基]氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酸甲酯(式VIIIa化合物(Pg1＝Boc，R＝甲基)的替代制備方法)步驟1.1 D-甲硫氨酸的Boc保護(hù)向D-甲硫氨酸(25.00g，0.168mmol)中加入6.13％w/w氫氧化鈉溶液(176ml，7.0相對(duì)體積)。將叔丁醇(85.0ml)加入到冷卻至4℃的該反應(yīng)混合物中。在45分鐘內(nèi)，以4個(gè)等份加入Boc酸酐(42.18g，183mmol，1.12mol eq)，同時(shí)保持批料溫度低于4℃。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度(22℃)，并攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物冷卻至3℃，加入30％w/w檸檬酸水溶液(49.05g檸檬酸，1.52mol eq，溶于115ml水中)，同時(shí)保持溫度低于5℃。加入額外的檸檬酸(15.00g，71.4mmol)，以將pH降低至低于pH3。加入二氯甲烷(250ml)，將批料溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度(22℃)。攪拌15分鐘之后，讓批料沉降15分鐘。分離并保留下層有機(jī)層。水層用二氯甲烷(125ml)萃取。將其于20℃保持15分鐘，讓其沉降15分鐘。分離下層有機(jī)層，將其與原始有機(jī)層合并。加入水(250ml)至合并的有機(jī)相中。將混合物于20℃攪拌15分鐘，讓其沉降15分鐘。分離下層有機(jī)相，加入鹽水(50g氯化鈉，2倍相對(duì)重量，溶于250ml水中，250g，10.0倍相對(duì)體積)。將批料于20℃攪拌15分鐘，讓其沉降15分鐘。分離下層有機(jī)層，然后用62℃的浴通過(guò)常壓蒸餾從440ml濃縮至250ml。加入額外的二氯甲烷(400ml)，通過(guò)常壓蒸餾將有機(jī)相濃縮至140ml。含濕量為0.06％w/w。
步驟1.2Boc-D-甲硫氨酸和丙氨酸甲酯的偶聯(lián)將得自步驟1.1的反應(yīng)混合物冷卻至4℃，在30分鐘內(nèi)均勻加入4-甲基嗎啉(38.8ml，349mmol，2.10mol eq)，將溫度保持＜5℃。加入丙氨酸甲酯鹽酸鹽(25.80g，183mmol，1.10mol eq)，然后加入HOBt.H2O(24.71g，161mmol，0.96mol eq)。在1小時(shí)內(nèi)分4個(gè)等份加入EDCI.HCl(36.07g，188mmol，1.12mol eq)，同時(shí)保持溫度＜5℃。于＜5℃下攪拌反應(yīng)混合物大約5小時(shí)，讓其緩慢溫?zé)嶂?0℃過(guò)夜。冷卻至4℃后，加入水(100ml)。于＜10℃下攪拌混合物15分鐘，讓其沉降15分鐘。分離下層有機(jī)層，加入水(100ml)，同時(shí)保持溫度于＜10℃。將混合物攪拌15分鐘，讓其沉降15分鐘。分離下層有機(jī)層，加入30％w/w檸檬酸水溶液(38.50g檸檬酸，1.20mol eq，溶于93ml水中)，同時(shí)保持溫度于＜10℃。將反應(yīng)混合物攪拌15分鐘，讓其沉降15分鐘。分離下層有機(jī)層，加入9.10％w/w碳酸氫鈉水溶液(10.0g碳酸氫鈉，0.71mol eq，用100ml水制備)，同時(shí)保持溫度于＜10℃。將反應(yīng)混合物于＜10℃下攪拌15分鐘，然后讓其沉降15分鐘。分離下層有機(jī)層，并加入16.7％w/w鹽水(20.00g氯化鈉溶于100ml水中)。于＜10℃攪拌反應(yīng)混合物15分鐘，讓其沉降15分鐘。分離下層有機(jī)層，加入二氯甲烷(450ml)，通過(guò)常壓蒸餾將其濃縮至430ml。水含量為0.05％w/w。
步驟1.3Boc-D-Met-Ala-OMe的S-甲基化向得自步驟1.2的反應(yīng)溶液中加入二氯甲烷(70ml)，使用該溶液的一半繼續(xù)進(jìn)行反應(yīng)。燒瓶用氬氣吹掃，加入硫酸二甲酯(7.9ml，82.5mmols，1.20mol eq，基于二肽)。將反應(yīng)混合物加熱至回流(42℃)并攪拌27小時(shí)。
步驟1.4環(huán)化將含有得自步驟1.3的反應(yīng)混合物的反應(yīng)燒瓶連接于反置(reversed)迪安-斯達(dá)克裝置和bleach阱。加入碳酸鉀(19.02g，138mmol，2.0mol eq)，得到漿液。將反應(yīng)混合物加熱至回流(42℃)，在4.25小時(shí)和20小時(shí)后加入額外的碳酸鉀(9.51g，69mmol，1.0mol eq)。將反應(yīng)混合物冷卻至3℃，加入水(200ml)，同時(shí)保持溫度低于5℃。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃，攪拌15分鐘，并讓其沉降15分鐘。分離下層有機(jī)層，加入水(150ml，3.3相對(duì)體積)。于20℃攪拌15分鐘并讓其沉降15分鐘后，分離并保留下層有機(jī)層。
步驟1.5結(jié)晶和分離加入乙酸正丁酯(176ml)至得自步驟1.4的有機(jī)溶液中，通過(guò)高真空蒸餾(浴溫75℃，壓力＜100mbar)將有機(jī)相濃縮至90ml。加入異己烷(282ml)，同時(shí)保持溫度≥45℃。形成一些白色固體，當(dāng)將反應(yīng)混合物加熱至回流(62℃)，這些固體實(shí)際上全都溶解。將批料在20分鐘內(nèi)冷卻至50℃并于50℃保持30分鐘，得到晶形的標(biāo)題產(chǎn)物的懸浮液。將批料在30分鐘內(nèi)冷卻至4℃，將漿液過(guò)濾，并讓其潮解(deliquor)。產(chǎn)物濾餅用預(yù)冷的(4℃)乙酸正丁酯和異己烷(19ml∶51ml)溶液置換洗滌，然后用異己烷(68ml)洗滌。產(chǎn)物在真空爐中于50℃干燥，得到(S)-2-[(R)-[N-叔丁酯基]氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酸甲酯(于100％強(qiáng)度下的產(chǎn)量＝16.01g(67％))。
產(chǎn)物通過(guò)HPLC和1H-NMR分析。
實(shí)施例4(從式X化合物(Pg＝硝基；Pg2＝Boc；R＝甲基)制備式IX化合物(Pg＝硝基；Pg2＝Boc))將叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(式X，Pg＝硝基，Pg2＝Boc，R＝甲基)(64.9g)和乙腈(380ml)的混合物冷卻至16℃，在2分鐘內(nèi)加入1.0N氫氧化鈉溶液(146.5ml)。將混合物于9-12℃保持90分鐘，然后溫?zé)嶂?8℃，并加入1.0M硫酸氫鈉溶液(195ml)。加入固體氯化鈉(64.9g)，分離有機(jī)層，水相用乙腈洗滌。合并有機(jī)相，加入DMF(40ml)，將混合物冷卻至0-5℃。加入4-氨基苯乙酰胺(19.95g)和1-羥基苯并三唑一水合物(12.83g)，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(28.0g)。在冷卻下攪拌混合物16小時(shí)，然后讓其溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度。將反應(yīng)混合物濃縮，得到油狀物。加入異丁醇(420ml)，并過(guò)濾溶液。加入10％檸檬酸水溶液(195ml)至濾液中，然后加入固體氯化鈉(50g)。分離有機(jī)相，用飽和氯化鈉溶液洗滌，然后蒸餾直至收集105ml餾出液。讓混合物冷卻至環(huán)境溫度，通過(guò)過(guò)濾收集固體，然后于45℃真空干燥，得到叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氫基苯乙酰胺(式IX，Pg2＝Boc)(65.35g)；1H NMR(d6-DMSO)1.23(d，3H)，1.38(d，3H)，1.45(s，9H)，1.59(m，3H)，1.77(m，1H)，3.22(m，2H)，3.37(s，2H)，4.03(m，1H)，4.36(m，1H)，4.46(m，1H)，7.24(m，2H)，7.58(m，2H)。
4-氨基苯乙酰胺的制備(i)在攪拌下，在15分鐘內(nèi)分批加入4-氨基苯乙酸(22.0g)至冷的2.0-2.5M無(wú)水氯化氫的甲醇(132ml)溶液中，同時(shí)保持混合物的溫度于0-10℃。然后將混合物回流1小時(shí)，通過(guò)常壓蒸餾濃縮，收集72.6ml餾出液。然后將混合物冷卻至50℃，加入甲基·叔丁基醚(176ml)，同時(shí)保持溫度高于35℃。然后將混合物逐漸冷卻至2.5℃，保持該溫度達(dá)1小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾分離出所產(chǎn)生的晶狀產(chǎn)物，用甲基·叔丁基醚(2×20ml)洗滌并于50℃真空干燥，得到4-氨基苯乙酸甲酯鹽酸鹽(28g)；1H NMR(d6-DMSO)3.60(3H)，3.70(2H)，7.36(4H)。
(ii)在攪拌下，在15分鐘內(nèi)分批加入4-氨基苯乙酸甲酯鹽酸鹽(28g)至冷氨水(濃度0.91g/ml；84ml)，同時(shí)保持混合物的溫度于15-25℃。然后于環(huán)境溫度下攪拌混合物16小時(shí)。將混合物冷卻至0-5℃，于該溫度保持1小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾分離出所產(chǎn)生的晶狀產(chǎn)物，順序用水和乙腈洗滌，然后于50℃真空干燥，得到4-氨基苯乙酰胺(16.7g)；1H NMR(d6-DMSO)3.16(2H)，4.85(2H)，6.49(2H)，6.90(2H)。
實(shí)施例5(從式VI化合物(Pg＝硝基；R＝甲基)制備式III化合物(Pg＝硝基))在攪拌下，在10分鐘內(nèi)加入1.0M氫氧化鈉溶液(180ml)至5-苯基戊酰-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(式VI，Pg＝硝基；R＝甲基)(17.75g)的乙腈(180ml)溶液中。攪拌混合物達(dá)3小時(shí)，將其冷卻至0-5℃，緩慢加入濃鹽酸(3.5ml)，以將混合物的pH調(diào)至2-3。讓混合物的溫度達(dá)到環(huán)境溫度，然后加熱至溫和回流，然后讓其冷卻至50℃。分離有機(jī)相，通過(guò)蒸餾除去揮發(fā)性物質(zhì)，不時(shí)地加入乙腈，直至蒸餾頭溫度為81℃。讓反應(yīng)混合物在攪拌下在2小時(shí)內(nèi)冷卻至環(huán)境溫度。將混合物冷卻至10℃，通過(guò)過(guò)濾收集沉淀的固體，用乙腈(2×15ml)洗滌，并于45℃真空干燥。將所述固體(21.8g)、水(100ml)和乙腈(100ml)的混合物加熱至回流，然后讓其緩慢冷卻。將混合物冷卻至14℃，通過(guò)過(guò)濾收集所沉淀的固體，用乙腈(2×15ml)洗滌，然后干燥，得到5-苯基戊酰-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸(17.3g)；1H NMR(d6-DMSO)1.18(d，3H)，1.27(d，3H)，1.52(m，7H)，1.70(m，1H)，2.13(t，2H)，2.55(t，2H)，3.13(m，2H)，4.18(m，1H)，4.26(m，2H)，7.17(m，3H)，7.27(m，2H)。
實(shí)施例6(從式X化合物(Pg＝硝基；Pg2＝Boc；R＝甲基)制備式VI化合物(Pg＝硝基；R＝甲基))將叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(式X，Pg2＝Boc；Pg＝硝基；R＝甲基)(79.6g)在二氯甲烷(668ml)中的混合物在攪拌冷卻至0-5℃，將無(wú)水氯化氫通過(guò)該混合物中達(dá)90分鐘。然后讓混合物溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度。然后混合物用氬氣吹掃90分鐘。將混合物冷卻至0-5℃，在攪拌下順序加入N-甲基嗎啉(101.4ml)、5-苯戊酸(27.4g)和1-羥基苯并三唑一水合物(27.2g)。
然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(32.4g)，將混合物的溫度保持在0-5℃達(dá)15分鐘，然后讓其升至環(huán)境溫度。將混合物攪拌16小時(shí)，加入異丁醇(417ml)，混合物用1.0M硫酸氫鈉溶液(3×230ml)、碳酸鈉溶液(2×210ml)和飽和氯化鈉溶液(4×200ml)洗滌。濃縮有機(jī)相，加入乙酸乙酯(550ml)，再次濃縮混合物。加入額外的乙酸乙酯(550ml)，將混合物溫?zé)幔缓笞屍淅鋮s，此時(shí)結(jié)晶出固體。讓混合物在冰水浴中冷卻，通過(guò)過(guò)濾分離出晶狀固體，用乙酸乙酯(2×100ml)洗滌，并于50℃真空干燥，得到5-苯基戊酰-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(式VI，R＝甲基)(75.5g)；1H NMR(d6-DMSO)1.18(d，3H)，1.28(d，3H)，1.52(m，7H)，1.69(m，1H)，2.13(t，2H)，2.55(t，2H)，3.16(m，2H)，3.62(s，3H)，4.26(m，3H)，7.17(m，3H)，7.27(m，2H)。
叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(式X(Pg2＝Boc；R＝甲基))的制備在攪拌下加入N-甲基嗎啉(34.09g)至叔丁酯基-(S)-精氨酰(NO2)-OH(61.98g)、丙氨酸甲酯鹽酸鹽(20.93g)和1-羥基苯并三唑水合物(10.13g)在二氯甲烷(750ml)中的混合物中。將混合物冷卻至0-5℃，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(36.0g)。于0-5℃攪拌混合物達(dá)3小時(shí)，然后于22℃攪拌30分鐘。然后將混合物冷卻至0-5℃，將無(wú)水氯化氫通入該混合物中，同時(shí)保持溫度低于15℃。50分鐘后，將混合物溫?zé)嶂?2℃，并用氮?dú)獯祾?。將混合物冷卻至0-5℃，然后在攪拌下在10分鐘內(nèi)加入N-甲基嗎啉(92.9g)，同時(shí)保持反應(yīng)混合物的溫度低于20℃。將反應(yīng)混合物冷卻至10℃，加入叔丁酯基(S)-丙氨酸(28.35g)，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(28.8g)。攪拌混合物15小時(shí)，然后過(guò)濾，用二氯甲烷(50ml)洗滌濾餅。濾液用1M硫酸氫鈉(3×150ml)洗滌，然后用碳酸鈉溶液洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥，并蒸發(fā)濃縮，得到淺黃色固體。通過(guò)加熱至回流，將該固體溶于乙腈(169ml)中，讓溶液冷卻。結(jié)晶出的產(chǎn)物通過(guò)過(guò)濾收集，用冷乙腈(2×55ml)洗滌，得到叔丁酯基--(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(59.3g)；1H NMR(d6-DMSO)1.17(d，3H)，1.29(d，3H)，1.37(s，9H)，1.52(m，3H)，1.68(m，1H)，3.17(m，2H)，3.62(s，3H)，3.97(m，1H)，4.28(m，2H)。
實(shí)施例7(從式XIII化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基；R＝甲基)通過(guò)式XI化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基)制備式V化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基；R1＝芐基))(1)一次性加入1M氫氧化鈉溶液(20ml)至式XIII化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基；R＝甲基)(1.0g)在乙腈(15ml)中的漿液中，攪拌混合物16小時(shí)。一次性加入固體氯化鈉(0.5g)，通過(guò)滴加1M鹽酸(2.4ml)將混合物酸化至pH2。加入乙腈(5ml)，并分離有機(jī)相。水相用乙腈(2×10ml)萃取，合并有機(jī)相，得到式XI化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基)的溶液。一次性加入羥基苯并三唑一水合物(0.236g)，并將混合物冷卻至0-5℃。
(2)一次性加入4M氯化氫的二噁烷(7ml)溶液至N-芐基-4-(叔丁酯基氨基)苯乙酰胺(0.56g)中，攪拌混合物2小時(shí)。濃縮混合物，并將殘余物保持在真空下達(dá)2小時(shí)。加入乙腈(2ml)至殘余物中，將漿液冷卻至0-5℃。在1分鐘內(nèi)滴加N-甲基嗎啉(0.8ml)，并攪拌混合物5分鐘。
(3)加入得自步驟(1)的冷混合物至步驟(2)的混合物中，加入水(0.5ml)，得到完全的溶液。一次性加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.465g)，于0-5℃攪拌所得的混合物2小時(shí)，然于育環(huán)境溫度攪拌16小時(shí)。加入碳酸鉀溶液(10％w/w；20ml)，分離有機(jī)相。水相用乙腈(2×10ml)萃取，合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液(20ml)洗滌，然后濃縮，得到淺黃色泡沫狀物，所述泡沫狀物靜置時(shí)固化。如此獲得了式V化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基；R1＝芐基)(1.07g)。
式XIII化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基；R＝甲基)的制備采用與實(shí)施例6中所述方法類似的方法，但用式VIII化合物(Pg1＝Boc)取代5-苯戊酸，從式X化合物獲得式XIII化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基；R＝甲基)。用無(wú)水氯化氫的二氯甲烷溶液將式X化合物(Pg2＝Boc；Pg＝硝基；R＝甲基)(10.81g)脫保護(hù)?；旌衔镉玫?dú)獯祾?6小時(shí)，所得的固體在乙腈(300ml)中制成漿液。將混合物冷卻至0-5℃，在1分鐘內(nèi)滴加N-甲基嗎啉(8ml)，繼續(xù)攪拌30分鐘。加入1-羥基苯并三唑一水合物(2.84g)和式VIII化合物(Pg1＝Boc)(6.89g)，攪拌混合物5分鐘。加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(4.43g)，于0-5℃攪拌所得的混合物2小時(shí)，然后于環(huán)境溫度攪拌12小時(shí)。加入碳酸鉀水溶液(10％w/v；300ml)，攪拌混合物10分鐘。水層用乙腈(2×10ml)萃取，合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液(100ml)洗滌，然后濃縮至約50ml。加入乙腈(100ml)，將混合物加熱至回流，然后冷卻至環(huán)境溫度。減壓過(guò)濾混合物，濾餅用乙腈(2×30ml)洗滌。固體于40℃真空下干燥，得到式XIII化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基；R＝甲基)(10.6g)。
N-芐基-4-(叔丁酯基氨基)苯乙酰胺的制備在2分鐘內(nèi)加入三乙胺(6.67ml)至4-(叔丁酯基氨基)苯乙酸(10.0g)和羥基苯并三唑一水合物(0.236g)的四氫呋喃(200ml)溶液中。將混合物冷卻至0-5℃，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(9.17g)。攪拌混合物3分鐘，滴加芐胺(4.56ml)至混合物中。于0-5℃攪拌所得的混合物1小時(shí)，然后于環(huán)境溫度攪拌48小時(shí)。加入碳酸鉀水溶液(10％w/v，200ml)至混合物中，然后分離的水層用THF(100ml)萃取，合并的有機(jī)萃取液用鹽水(2×100ml)洗滌，然后通過(guò)真空蒸餾濃縮，直至保留大約50ml有機(jī)萃取液。加入甲苯(200ml)，通過(guò)真空蒸餾，將所得的混合物蒸發(fā)至干，留下固體。加入甲苯(250ml)至固體中，加熱混合物至回流，然后讓其冷卻至環(huán)境溫度。將混合物在冰中冷卻，然后過(guò)濾。分離出的固體用甲苯(2×50ml)洗滌，然后于40℃真空干燥，得到N-芐基-4-(叔丁酯基氨基)苯乙酰胺(8.0g)。
實(shí)施例8從式X化合物(Pg＝硝基；Pg2＝Boc；R＝甲基)制備式IX化合物(Pg＝硝基；Pg2＝Boc)[叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式IX，Pg2＝Boc)的替代合成法]于18℃，在10分鐘內(nèi)向叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(式X Pg＝硝基；Pg2＝Boc；R＝甲基)(101g)、水(25ml)和四氫呋喃(905ml)的混合物中加入氫氧化鈉(9.57g)的水(375ml)溶液。讓混合物于環(huán)境溫度靜置18小時(shí)。加入硫酸氫鈉水合物(42g)的水(323ml)溶液。加入氯化鈉(97g)，分離有機(jī)相，將其冷卻至5℃。加入4-氨基苯乙酰胺(33.06g)、1-羥基苯并三唑一水合物(18.37g)和3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(44.6g)。于5℃攪拌混合物40分鐘，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(3.0g)，繼續(xù)于10-16℃攪拌2小時(shí)。加入氯化鈉(160g)和水(650ml)。分離有機(jī)相。加入四氫呋喃(450ml)，然后通過(guò)常壓蒸餾收集750ml餾出液。于60℃加入四氫呋喃(250ml)和丙酮(700ml)。讓混合物冷卻至環(huán)境溫度，然后加入丙酮(300ml)。通過(guò)過(guò)濾收集固體，用丙酮(3×100ml)洗滌，然后于42℃真空干燥，得到叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酰-4-氨基苯乙酰胺(式IX，Pg2＝Boc)(60.0g)；1H NMR(d6-DMSO)1.23(d，3H)，1.38(d，3H)，1.45(s，9H)，1.59(m，3H)，1.77(m，1H)，3.22(m，2H)，3.37(s，2H)，4.03(m，1H)，4.36(m，1H)，4.46(m，1H)，7.24(m，2H)，7.58(m，2H)。
4-氨基苯乙酰胺的制備如下獲得該實(shí)施例中使用的4-氨基苯乙酰胺(i)加入甲醇(200ml)至4-氨基苯乙酸(25.0g)中。加入硫酸(18.0ml)，同時(shí)保持溫度＜20℃。然后將混合物回流1小時(shí)，通過(guò)常壓蒸餾濃縮至135ml的體積。然后將混合物冷卻至50℃，加入甲基·叔丁基醚(275ml)，同時(shí)保持溫度高于45℃。然后將混合物逐漸冷卻至0-5℃，在該溫度保持1小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾分離出所得的晶狀產(chǎn)物，用冷甲醇∶甲基·叔丁基醚(20ml∶55ml)和冷甲基·叔丁基醚(75ml)洗滌，然后于45℃真空干燥，得到4-氨基苯乙酸甲酯硫酸氫鹽(40.1g)；1H NMR(d6-DMSO)3.61(s，3H)，3.71(s，2H)，7.25(m，2H)，7.35(m，2H)。
(ii)加入4-氨基苯乙酸甲酯硫酸氫鹽(20g)至20％w/w氯化鈉水溶液(37.5g)中。加入含溶解的氯化鈉(7.5g)的氨水(濃度0.88g/ml 50ml)，同時(shí)保持溫度為15-25℃。然后于22℃攪拌混合物16小時(shí)。將混合物冷卻至0-5℃，于該溫度保持1小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾分離出所得的晶狀產(chǎn)物，用水(2×20ml)洗滌，然后于45℃真空干燥，得到4-氨基苯乙酰胺(7.2g)；1H NMR(d6-DMSO)3.16(2H)，4.85(2H)，6.49(2H)，6.90(2H)。
實(shí)施例9(從式X化合物(Pg＝硝基；Pg2＝Boc；R＝甲基)制備式VI化合物(Pg＝硝基；R＝甲基))如下獲得5-苯基戊酰-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(式VI，Pg＝硝基；R＝甲基)加入叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(60.0g)至苯磺酸(33.89g)和二氯甲烷(600ml)的無(wú)水溶液中。加入甲醇(150ml)，于回流下加熱攪拌的混合物21小時(shí)。將混合物冷卻至-5℃，加入NMM(28.0ml)，然后加入5-苯戊酸(30.26g)和1-羥基苯并三唑水合物(9.89g)，同時(shí)保持溫度于-5℃。加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(33.74g)的甲醇(60ml)溶液，同時(shí)保持溫度于-5℃，然后于-5℃攪拌混合物12小時(shí)。將混合物加熱至20℃，用氯化鈉(10.3g)的水(206ml)溶液洗滌。分離的有機(jī)相用氯化鈉(10.3g)在水(206ml)和甲醇(82ml)中的溶液洗滌。將分離的有機(jī)相加熱至回流，收集350ml餾出液。加入乙腈(675ml)，將溶液加熱至回流，收集400ml餾出液，然后讓混合物冷卻，通過(guò)過(guò)濾分離出晶狀固體，用乙腈(70ml)洗滌，然后于40℃真空干燥，得到5-苯基戊酰(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(53.25g)；1H NMR(d6-DMSO)1.18(d，3H)，1.28(d，3H)，1.52(m，7H)，1.69(m，1H)，2.13(t，2H)，2.55(t，2H)，3.16(m，2H)，3.62(s，3H)，4.26(m，3H)，7.17(m，3H)，7.27(m，2H)。
叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(s)-丙氨酸甲酯(式X，Pg2＝Boc；Pg＝硝基；R＝甲基)的制備加入叔丁酯基-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(式XIV，Pg＝硝基；Pg3＝Boc；R＝甲基)(46.91g)至苯磺酸(22.15g)和二氯甲烷(750ml)的無(wú)水溶液中。將攪拌的混合物加熱至回流達(dá)6小時(shí)。將混合物冷卻至-5℃，加入NMM(19.3ml)，然后加入叔丁酯基-(S)-丙氨酸(21.95g)、1-羥基苯并三唑水合物(7.29g)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(24.54g)，同時(shí)保持溫度于-5℃。于-5℃攪拌混合物12小時(shí)，然后加熱至20℃，用氯化鈉(8.4g)的水(168ml)溶液洗滌2次。將分離的有機(jī)相加熱至回流，收集660ml餾出液。加入乙腈(540ml)，將溶液加熱至回流，收集280ml餾出液，然后讓混合物冷卻，通過(guò)過(guò)濾分離晶狀固體，用乙腈(50ml)洗滌，并于50℃真空干燥，得到叔丁酯基-(S)-丙氨酰-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(45.09g)；1H NMR(d6-DMSO)1.17(d，3H)，1.29(d，3H)，1.37(s，9H)，1.52(m，3H)，1.68(m，1H)，3.17(m，2H)，3.62(s，3H)，3.97(m，1H)，4.28(m，2H)。
叔丁酯基-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(式(XIV)，Pg2＝Boc；Pg＝硝基；R＝甲基)的制備將丙氨酸甲酯鹽酸鹽(30.61g)在二氯甲烷(950ml)中的攪拌混合物冷卻至-5℃，加入NMM(54.2ml)，同時(shí)保持溫度在-5℃。加入叔丁酯基-(S)-精氨酰(NO2)-OH(式XV，Pg＝硝基，Pg3＝Boc)(70.0g)、1-羥基苯并三唑水合物(16.78g)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(52.61g)，同時(shí)保持溫度在-5℃。于-5℃攪拌混合物12小時(shí)，然后將其加熱至20℃，加入乙酸正丁酯(12.6ml)。混合物用水(225ml)洗滌2次，將分離的有機(jī)相加熱至回流，直至收集600ml餾出液。加入乙酸正丁酯(700ml)，減壓蒸餾溶液，直至收集530ml餾出液。讓混合物冷卻至22℃，通過(guò)過(guò)濾分離晶狀固體，用乙酸正丁酯(140ml)洗滌，并于40℃真空干燥，得到叔丁酯基-(S)-精氨酰(NO2)-(S)-丙氨酸甲酯(80.1g)；1H NMR(d6-DMSO)1.29(d，3H)，1.38(s，9H)，1.52(m，3H)，1.63(m，1H)，3.15(m，2H)，3.62(s，3H)，3.96(m，1H)，4.27(m，1H)。
實(shí)施例10 從式V化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基；R1＝芐基)制備式I化合物可以采用與實(shí)施例2所述方法類似的方法，將按照實(shí)施例7制備的式V化合物(Pg1＝Boc；Pg＝硝基；R1＝芐基)轉(zhuǎn)化為式IV化合物(Pg＝硝基；R1＝芐基)，并且與式III化合物(Pg＝硝基)偶聯(lián)。然后采用與實(shí)施例1中所述方法類似的方法，通過(guò)在Pd/C催化劑存在下進(jìn)行催化氫化，可以將所得的式II化合物(Pg＝硝基；R1＝芐基)轉(zhuǎn)化為式I化合物的鹽。
序列表<110>阿斯特拉曾尼卡有限公司(AstraZeneca AB)<120>化學(xué)方法<130>MAN<140>
<141>
<160>2<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>6<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述具有經(jīng)修飾殘基的肽<220>
<221>經(jīng)修飾的殘基<222>(1)<223>5-苯戊酰-Ala<220>
<221>經(jīng)修飾的殘基<222>(4)<223>[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰]-Ala<220>
<221>經(jīng)修飾的殘基<222>(6)<223>Ala-4-氨基苯乙酰胺<400>1Xaa Arg Ala Xaa Ala Xaa1 5<210>
<211>6<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述具有經(jīng)修飾殘基的肽<220>
<221>經(jīng)修飾的殘基<222>(1)<223>5-苯戊酰-Ala<220>
<221>經(jīng)修飾的殘基<222>(2)<223>硝基-Arg<220>
<221>經(jīng)修飾的殘基<222>(4)<223>[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰]-Ala<220>
<221>經(jīng)修飾的殘基<222>(5)<223>硝基-Arg<220>
<221>經(jīng)修飾的殘基<222>(6)<223>Ala-4-氨基苯乙酰胺<400>2Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Xaa1 權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)式I化合物的鹽的方法 式I所述方法包括將式II化合物或其鹽脫保護(hù) 式II其中每個(gè)Pg獨(dú)立地為精氨酸保護(hù)基；和R1為氫或乙酰胺部分氨基的保護(hù)基。
2.一種權(quán)利要求1的方法，其中所述兩個(gè)精氨酰殘基上的保護(hù)基Pg是相同的。
3.一種權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中保護(hù)基Pg為硝基，并且R1為氫。
4.一種權(quán)利要求3的方法，其中在式II中保護(hù)精氨酰殘基的硝基通過(guò)化學(xué)還原而脫除。
5.一種權(quán)利要求4方法，其中所述化學(xué)還原為在溶劑或溶劑混合物存在下進(jìn)行的催化氫化。
6.一種權(quán)利要求5的方法，其中所述催化氫化在含有比乙酸更強(qiáng)的第二種酸的乙酸水溶液中進(jìn)行。
7.一種依照任一前述權(quán)利要求的方法，其中式II化合物或其鹽用包括下述步驟的方法生產(chǎn)將式III的羧酸或其鹽 式III與式IV的胺偶聯(lián) 式IV其中R1和每個(gè)Pg如權(quán)利要求1中所限定。
8.一種權(quán)利要求7的方法，其中所述式IV化合物通過(guò)包括下述步驟的方法制備從式V化合物脫除氨基保護(hù)基Pg1 式V其中Pg和R1如權(quán)利要求1中所限定；和Pg1為當(dāng)R1不是氫時(shí)可以在Pg和R1存在下被選擇性脫除的氨基保護(hù)基。
9.一種權(quán)利要求8的方法，其中所述式V化合物通過(guò)包括下述步驟的方法制備將其中Pg和R1如權(quán)利要求1所限定的式VII化合物 式VII與式VIII的羧酸或其鹽偶聯(lián) 式VIII其中Pg1為氨基保護(hù)基。
10.一種權(quán)利要求9的方法，其中所述式VII化合物通過(guò)包括下述步驟的方法制備從式IX化合物選擇性地脫除氨基保護(hù)基Pg2 式IX其中Pg和R1如權(quán)利要求9中所限定；和Pg2為當(dāng)R1不是氫時(shí)可以在Pg和R1存在下被選擇性脫除的氨基保護(hù)基。
11.一種權(quán)利要求10的方法，其中所述式IX化合物通過(guò)包括下述步驟的方法制備(a)水解式X化合物的酯官能團(tuán)，形成羧酸基團(tuán) 式X其中Pg和Pg2如權(quán)利要求10中所限定，且R為烷基或芳烷基；和(b)將步驟(a)的產(chǎn)物與式XII化合物偶聯(lián) 式XII其中R1為氫或乙酰胺部分氨基的保護(hù)基。
12.一種權(quán)利要求8的方法，其中所述式(V)化合物通過(guò)包括下述步驟的方法制備將式XI化合物 式XI其中Pg和Pg1如權(quán)利要求8所限定，與式XII化合物偶聯(lián) 式XII其中R1為氫或保護(hù)基。
13.一種權(quán)利要求12的方法，其中所述式XI化合物通過(guò)包括水解式XIII的酯的方法制備 式XIII其中R 為烷基或芳烷基；Pg1為當(dāng)R1不是氫時(shí)可以在Pg和R1存在下被選擇性脫除的氨基保護(hù)基；和Pg為精氨酸保護(hù)基。
14.一種權(quán)利要求13的方法，其中所述式XIII化合物通過(guò)包括下述步驟的方法從權(quán)利要求11中限定的式X化合物獲得(a)從式X化合物脫除Pg2；和(b)將步驟(a)的產(chǎn)物與權(quán)利要求9中限定的式VIII化合物偶聯(lián)。
15.一種權(quán)利要求7的方法，其中所述式III化合物或其鹽通過(guò)包括水解式VI的酯的方法制備 式VI其中R 為烷基或芳烷基；和Pg如權(quán)利要求7中所限定。
16.一種權(quán)利要求15的方法，其中式VI化合物通過(guò)包括下述步驟的方法制備(a)從權(quán)利要求11中限定的式X化合物脫除Pg2；和(b)將步驟(a)的產(chǎn)物與5-苯戊酸偶聯(lián)。
17.一種權(quán)利要求7的方法，其中所述式III化合物和式IV化合物都衍生于權(quán)利要求11中限定的式X化合物。
18.如權(quán)利要求1中限定的式II化合物。
19.如權(quán)利要求7中限定的式III化合物。
20.如權(quán)利要求7中限定的式IV化合物。
21.如權(quán)利要求8中限定的式V化合物。
22.如權(quán)利要求15中限定的式VI化合物。
23.如權(quán)利要求9中限定的式VII化合物。
24.化合物(S)-2-[(R)-3-(N-[叔丁酯基]氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基]丙酸。
25.如權(quán)利要求10中限定的式IX化合物。
26.如權(quán)利要求11中限定的式X化合物。
27.如權(quán)利要求12中限定的式XI化合物。
28.式XIIa化合物 式XIIa其中R1為乙酰胺部分氨基的保護(hù)基；和Z1為H或氨基保護(hù)基。
29.如權(quán)利要求13中限定的式XIII化合物。
30.一種制備權(quán)利要求11中限定的式X化合物的方法，所述方法包括從式XIV化合物選擇性地脫除Pg3并且與Pg2保護(hù)的(S)-丙氨酸偶聯(lián)而獲得 式XIV其中Pg3為在Pg存在下可以被選擇性地脫除的氨基保護(hù)基；Pg2為氨基保護(hù)基；Pg 為精氨酸保護(hù)基；和R為烷基或芳烷基。
31.一種權(quán)利要求30的方法，其中所述式XIV化合物通過(guò)包括將式XV化合物或其鹽與式XVI化合物或其鹽偶聯(lián)的方法制備 式XV式XVI其中Pg、Pg3和R如權(quán)利要求30中所限定。
32.一種制備權(quán)利要求9中限定的式VIII化合物的方法，所述方法包括水解式VIIIa的酯 VIIIa其中Pg1如權(quán)利要求9中所限定；且R為烷基或芳烷基。
33.一種權(quán)利要求32的方法，其中所述水解在用氫氧化鋰作為堿的含水堿性條件下進(jìn)行。
34.一種制備4-氨基苯乙酰胺的方法，所述方法包括下述步驟(i)在硫酸存在下用合適的醇酯化4-氨基苯乙酸，得到4-氨基苯乙酸酯硫酸氫鹽；和(ii)使步驟(i)的產(chǎn)物與氨反應(yīng)。
35.一種生產(chǎn)權(quán)利要求1中限定的式II化合物或其鹽的方法，所述方法包括將式III的羧酸或其鹽 式III與式IV的胺偶聯(lián) 式IV其中Pg和R1如權(quán)利要求1中所限定。
全文摘要
要求保護(hù)一種用于制備5－苯基戊酰－(S)－丙氨酰－(S)精氨酰－(S)－丙氨酰－{(S)－2－[(R)－3－氨基－2－氧代吡咯烷－1－基]丙酰}－(S)－丙氨酰－(S)－精氨酰－(S)－丙氨酰－4－氨基苯乙酰胺(SEQ ID NO1)的鹽的方法，所述方法包括將式II化合物或其鹽脫保護(hù)其中Pg和R
文檔編號(hào)C07B61/00GK1617881SQ01813098
公開(kāi)日2005年5月18日 申請(qǐng)日期2001年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月22日
發(fā)明者N·P·泰勒, K·W·勒斯利, P·J·霍甘, F·J·蒙特戈梅里, E·J·布斯, K·A·博爾德曼, C·I·普林, A·C·巴克爾, M·W·塞尼爾, C·S·哈里斯 申請(qǐng)人:阿斯特拉曾尼卡有限公司