專利名稱：2－丙基戊酰胺和2－丙基戊烯酰胺衍生物及作抗驚厥藥用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的背景本發(fā)明涉及2-丙基戊酸(丙戊酸，以后稱為VPA)和2-丙基-2-戊烯酸的新衍生物，它們的制備和作為抗癲癇藥的應(yīng)用。
VPA及其堿金屬鹽是治療癲癇發(fā)作及驚厥的諸多藥物中的主要藥物。但是，約25％的癲癇患者對(duì)目前的治療沒(méi)有反應(yīng)。另外，VPA本身有相當(dāng)大的有害作用，包括肝毒害性和產(chǎn)生畸形。參見T.A.Baille和A.W.Rettenmeier在“Antiepileptic Drugs”(R.H.Levy，F(xiàn).E.Dreifuss，R.H.Mattson，B.S.Meldrum和J.K.Penry.編，Raven Press，New York，1989)第601-619頁(yè)。
獲得改進(jìn)的抗癲癇藥的一種方法是制備VPA及其類似物的伯酰胺衍生物。參見M.Bialer，Clin.Pharmacokinet，20114-122(1991)；M.Bialer，A.Haj-Yehia，N.Barzaghi，F(xiàn).Pisani和E.Perucca，Eur.J.Clin.Pharmacol.，289-291(1990)；A.Haj-Yehia和M.Bialer，J.Pharm.Sci.79719-724(1990)。雖然R.Roncucci等在美國(guó)專利4,639,468(1987年1月27日公布)中公開了某些甘氨酰胺衍生物，但是這些化合物一般未被允許臨床應(yīng)用。因此，工藝上仍然急需研制效力改進(jìn)、治療劑量與神經(jīng)中毒劑量之間有較大差值的抗驚厥藥。
與VPA和2-烯-VPA有關(guān)的甘氨酰胺已由Grannemax等作為VPA的次要代謝產(chǎn)物公開(Xenobiotica，14，375，1984)。但是，對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的檢查表明，這些化合物實(shí)際上是VPA和2-烯-VPA甘氨酸，不會(huì)是其中的甘氨酸氮原子與VPA或2-烯-VPA的羰基相連的甘氨酰胺共軛物。雖然，Granneman等說(shuō)明這些化合物是甘氨酸共軛物，但是他們錯(cuò)誤地將它們稱作VPA和2-烯-VPA甘氨酰胺，而不是VPA和2-烯-VPA甘氨酸；后一名稱是與Granneman等報(bào)導(dǎo)的制備方法和質(zhì)譜數(shù)據(jù)相一致的。
本發(fā)明提供了以下通式II的一種化合物 其中A是X或Y，X包括 Y包括 R1、R2、R3、R4和R5各自獨(dú)立地是氫、一個(gè)C1-C6烷基、一個(gè)芳烷基或一個(gè)芳基；n是0、1、2或3。
本發(fā)明提供了藥物組合物，該組合物中含有治療上有效數(shù)量的一種通式I或II的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明提供了治療癲癇、情感性精神病、識(shí)別障礙、神經(jīng)變性病、運(yùn)動(dòng)障礙、神經(jīng)中毒性損傷，減緩癲癇患者的驚厥發(fā)作，治療中風(fēng)或腦局部缺血的各種方法，其中包括使患者服用有效數(shù)量的通式I或II的化合物。


圖1說(shuō)明了用所示藥物治療28天的小鼠在被動(dòng)回避試驗(yàn)中的表現(xiàn)，每日的口服劑量如下化合物1，200mg/kg；VPA，500mg/kg。試驗(yàn)是在藥物治療后第10天進(jìn)行的。等待時(shí)間(秒)表示進(jìn)入暗室的響應(yīng)時(shí)間。最大等待時(shí)間為300秒。等待期長(zhǎng)說(shuō)明表現(xiàn)改善。橫線代表平均標(biāo)準(zhǔn)偏差(SEM)。
圖2說(shuō)明了用所示藥物治療28天的小鼠在主動(dòng)回避試驗(yàn)中的表現(xiàn)，每日的口服劑量如下化合物1，200mg/kg；VPA，500mg/kg。式驗(yàn)是在開始服藥后的第16-17天(期間1)和第22-23天(期間2)進(jìn)行的?；乇芊?jǐn)?shù)增加、等待時(shí)間減小和橫穿次數(shù)增加表示表現(xiàn)較好。
本發(fā)明的描敘由VPA在羧基處與氨基酰胺偶合，得到特別高活性和低毒性的化合物。本發(fā)明提供了下述的通式I的化合物 其中A是X或Y，X包括 Y包括 R1、R2、R3、R4和R5各自獨(dú)立地是氫、一個(gè)C1-C6烷基、一個(gè)芳烷基或一個(gè)芳基；和n是0、1、2或3。
在一項(xiàng)實(shí)施例中，A是Y，R4是氫。
在另一項(xiàng)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了上述的式I化合物，其中的C1-C6烷基是一個(gè)直鏈烷基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了上述的式I化合物，其中C1-C6烷基是支鏈烷基。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了上述的式I的化合物，其中的芳烷基是芐基、烷基芐基、羥基芐基、烷氧基羰基芐基、芳氧基羰基芐基、羧基芐基、硝基芐基、氰芐基或鹵芐基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式I的化合物，其中芳基是苯基、荼基、蒽基、吡啶基、引哚基、呋喃基、烷基苯基、羥苯基、烷氧基羰基苯基、芳氧基羰基苯基、硝基苯基、氰苯基、鹵苯基、巰苯基或氨基苯基。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物的實(shí)例包括N-(2-正丙基戊酰)甘氨酰胺；N-(2-正丙基戊酰)-N-甲基-甘氨酰胺；N-(2-正丙基戊酰)甘氨酸-N′-甲基酰胺；N-(2-正丙基戊酰)甘氨酸-N′-丁基酰胺；N-(2-正丙基戊酰)亮氨酰胺；N-(2-正丙基戊酰)丙氨酸-N′-芐基酰胺；N-(2-正丙基戊酰)丙氨酰胺N-(2-正丙基戊酰)-2-苯基甘氨酰胺；N-(2-正丙基戊酰)-4-氨基丁酰胺；N-(2-正丙基戊酰)-β-丙氨酰胺；N-(2-正丙基戊酰)蘇氨酰胺；
N-(2-正丙基戊酰)甘氨酸-N，N′-二甲基酰胺；和N-(2-正丙基戊酰)氨基乙腈。
另外，顯示出高活性和低毒性的通式II的新化合物與通式I化合物相似，只是在2位上有一個(gè)雙健。
因此，本發(fā)明提供了以下的通式II的化合物 其中A是X或Y，X包括 Y包括 R1、R2、R3、R4和R5各自獨(dú)立地是氫、C1-C6烷基、芳烷基或芳基；和n是0、1、2或3。
在一項(xiàng)實(shí)施方案中，A是Y，R4是氫。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了上述的式II的化合物，其中C1-C6烷基是直鏈烷基。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了上述的式II化合物，其中C1-C6烷基是支鏈的烷基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了上述的式II化合物。其中芳烷基是芐基、烷基芐基、羥基芐基、烷氧基羰基芐基、芳氧基羰基芐基、羧基芐基、硝基芐基、氰芐基或鹵芐基。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了上述的式II的化合物，其中芳基是苯基、萘基、蒽基、吡啶基、吲哚基、呋喃基、烷基苯基、羥基苯基、烷氧基羰基苯基、芳氧基羰基苯基、硝基苯基、氰苯基、鹵苯基、巰苯基或氨基苯基。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物的實(shí)例包括N-(2-正丙基戊-2-烯酰)甘氨酰胺；N-(2-正丙基戊-2-烯酰)丙氨酰胺；和N-(2-正丙基戊-2-烯酰)甘氨酸-N′-甲基酰胺。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，該組合物中含有治療上有效數(shù)量的上述任何一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及一種藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其中治療上有效的數(shù)量是從約10到約500mg。本發(fā)明包括一種上述的藥物組合物，其中的載體是固體，該組合物是片劑。本發(fā)明還包括一種上述的藥物組合物，其中的載體是凝膠，該組合物是栓劑。本發(fā)明還包括一種上述的藥物組合物，其中的載體是液體，該組合物是溶液。
本發(fā)明提供了一種治療癲癇患者的方法，包括使患者服用對(duì)治療該患者的癲癇有效的一定數(shù)量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了一種治療情感性精神病患者的方法，包括使患者服用對(duì)治療該患者的情感性精神病有效的一定數(shù)量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了一種治療識(shí)別障礙患者的方法，包括使患者服用對(duì)治療該患者的識(shí)別障礙有效的一定數(shù)量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了一種治療神經(jīng)變性病患者的方法，包括使患者服用對(duì)治療該患者的神經(jīng)變性病有效的一定數(shù)量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了一種治療運(yùn)動(dòng)障礙患者的方法，包括使患者服用對(duì)治療該患者的運(yùn)動(dòng)障礙有效的一定數(shù)量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了一種治療神經(jīng)中毒性損傷患者的方法，包括使患者服用對(duì)治療該患者的神經(jīng)中毒性損傷有效的一定數(shù)量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了一種減緩癲癇患者驚厥發(fā)作的方法，包括使患者服用對(duì)減緩該患者驚厥發(fā)作有效的一定數(shù)量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了一種治療中風(fēng)患者的方法，包括使患者服用對(duì)治療該患者的中風(fēng)有效的一定數(shù)量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了一種治療腦局部缺血患者的方法，包括使患者服用對(duì)治療該患者腦局部缺血有效的一定數(shù)量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了一種治療頭部損傷患者的方法，包括使患者服用對(duì)治療該患者頭部損傷有效的一定數(shù)量的本發(fā)明化合物。
通式I和II化合物是常規(guī)型式人類癲癇癥的有效的抗驚厥藥。幾種這類化合物具有令人驚奇的比米拉醋胺、VPA、VPA酰胺類似物或N-丙戊酰甘氨酸更好的治療效果。另外，它們還可用于治療其它的中樞神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能障礙。
出乎意料的是，本發(fā)明的化合物在MES(最大電休克)、電激發(fā)模式和scMet(皮下戊四氮)試驗(yàn)中極其有效。本申請(qǐng)?zhí)岢鲆蟮乃巹┑陌霐?shù)有效劑量(EDso)大大低于造成神經(jīng)損傷所需的劑量。因此，動(dòng)物模型試驗(yàn)的結(jié)果顯示出本發(fā)明化合物與其它抗癲癇藥劑不同，表明這里公開的某些化合物除了其它形式的癲癇以外，在防治全身性和局部性癲癇發(fā)作方面也有效，包括失神性癲癇發(fā)作。
本發(fā)明的某些化合物有手性中心。本發(fā)明的另一實(shí)施方案是這些化合物可以基本上由純的右旋或左旋對(duì)映體或外消旋混合物構(gòu)成。應(yīng)當(dāng)清楚，通式II的化合物可以是E-(反式)或Z-(順式)幾何構(gòu)型，或是它們的混合物。
通式I的化合物是2-丙基戊酸的二酰胺，可以通過(guò)常規(guī)的酰胺化過(guò)程制備，例如，將上述酸的活化形式與通式III的氨基酰胺反應(yīng)，通式III中的R1、R2、R3可以相同或不同，它們可以是氫、(C1-C6)烷基、芳烷基或芳基，n為0到3；或者與通式IV的氨基酸衍生物反應(yīng)，其中R1和n與式III的相同，和R4是氫或C1-C3烷基。所形成的2-丙基戊酰氨基酸衍生物V與通式VII的胺反應(yīng)(V中R4是一個(gè)低級(jí)烷基時(shí))，或是先被活化，然后使活化形式的酸VI與VII反應(yīng)(V中的R4是氫時(shí))。 R4＝H或C1-C3烷基X＝鹵素或活化的酯，例如N-羥丁二酰亞胺例如，化合物I和V可以在一個(gè)兩相體系中制備，該兩相體系由一個(gè)氨基酰胺III或氨基酸酯IV的堿性水溶液和2-丙基戊酰氯在惰性的水不溶性有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷或甲苯)中的溶液構(gòu)成，反應(yīng)在0至50℃，優(yōu)選在0-10℃下進(jìn)行1到24小時(shí)，最好是1到5小時(shí)。
用作此用途的堿性物質(zhì)可以是堿(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀或碳酸鉀)或是脂族或芳族叔胺，優(yōu)選三乙胺，其數(shù)量必須足以中和反應(yīng)期間形成的氫鹵酸。
化合物I和V也可以通過(guò)VPA的活化酯與氨基酰胺III或氨基酸酯IV反應(yīng)來(lái)制備。例如，VPA與一種活化劑(例如N-羥基丁二酰亞胺、五氟苯酚、五氯苯酚或1-羥基苯并三唑)在脫水劑(例如二烷基碳化二亞胺，如二環(huán)己基碳化二亞胺、二異丙基碳化二亞胺或N-(二甲氨基丙基-N′-乙基碳化二亞胺)存在下于0-50℃(優(yōu)選0-25℃)在惰性溶劑(如四氫呋喃、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷、二氯甲烷或N，N-二甲基甲酰胺)中反應(yīng)。所形成的活化的酯可以分離和純化，或是就地直接使用。將活化的酯，不管是純化過(guò)或直接使用，在導(dǎo)致上面詳述的縮合反應(yīng)的相同條件下進(jìn)行反應(yīng)。
化合物V與胺R2R3NH的反應(yīng)可以在許許多多種有機(jī)溶劑中進(jìn)行，包括在飽和烴或芳族烴(例如己烷、苯或石油醚)或是鹵化溶劑(例如氯仿或二氯甲烷)等質(zhì)子惰性溶劑中，或是在質(zhì)子性或醇類溶劑中(例如甲醇或乙醇)或水中。最好是用甲醇作為溶劑。反應(yīng)在從室溫到回流的溫度下均可有效地進(jìn)行，但最好是在50-70℃。
化合物III可以以游離堿或其加成鹽的形式使用，加成鹽可以通過(guò)用無(wú)機(jī)酸(例如四氟硼酸、鹽酸、磷酸或硫酸)或有機(jī)酸(例如對(duì)甲苯磺酸、乙酸或苯甲酸)處理游離堿來(lái)形成。化合物III可以是純的對(duì)映體(D或L構(gòu)型)形式，也可以是外消旋的混合物。
通式III和IV的氨基酸酰胺和氨基酸酯是市場(chǎng)上可買到的，或者可以如以下實(shí)施例中所詳述的，由合適的前體制得。
通式II的化合物是2-丙基戊烯酸的二酰胺，可以與通式I的化合物相似地由2-丙基戊烯酸制備。
丙基戊烯酸[2-丙基戊-(E)-2-烯酸]可以根據(jù)工藝中已知的步驟制備。參見G.Taillandier等，Arch.Pharm.(Weinheim)，310，394(1977)；C.V.Vorhees等，Teratology，43，583(1991)；R.C.Neuman，Jr.和G.D.Holmes，J.Amer.Chem.Soc.，93，4242(1971)。
在實(shí)施本發(fā)明時(shí)，摻入到藥物組合物中的本發(fā)明化合物的數(shù)量可以在很大范圍內(nèi)變化。在決定準(zhǔn)確的數(shù)量時(shí)需要考慮的因素是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。這些因素的實(shí)例包括但不限于所治療的對(duì)象，具體的藥用載體，服藥途徑和服用組合物的頻率。。一種用于治療上述病癥的單位劑量形式的藥物組合物含有10到500mg活性組分。
在一項(xiàng)優(yōu)選的實(shí)施方案中，以含有本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物的形式服用該化合物。這里使用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體“，包括任何標(biāo)準(zhǔn)的藥物上可接受的載體，例如磷酸鹽緩沖的鹽水溶液、水、乳狀液(如油/水乳狀液或甘油三酯乳狀液)、各類潤(rùn)濕劑、片劑、包衣片劑和膠囊劑?？捎糜陟o脈內(nèi)和腹膜內(nèi)用藥的一種甘油三酯乳狀液的實(shí)例是商品名稱Intralipid的甘油三酯乳狀液。
通常，這些載體包括賦形劑，例如淀粉、牛奶、糖、某些類型的粘土、明膠、Stensic acid滑石、植物油或脂、樹膠、甘醇或其它的已知賦形劑。這些載體也可以包括香味劑、著色劑或其它組分。
在實(shí)施本發(fā)明時(shí)，藥物組合物的服用可以用任何熟知的方法進(jìn)行，包括但不限于口服、靜脈用藥、腹膜內(nèi)用藥、肌內(nèi)、皮下或局部用藥。局部用藥可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員通常已知的方法進(jìn)行，包括但不限于將藥物組合物摻入乳油、膏劑或經(jīng)皮用藥的貼劑中。
列出以下的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)以有助于了解本發(fā)明，它們的用意不是、也不應(yīng)理解成是對(duì)下面的權(quán)利要求中陳述的本發(fā)明的任何形式的限制。
實(shí)施例1N-(2-正丙基戊酰)甘氨酰胺(化合物1)將2-丙基戊酰氯(108克，0.66摩爾)在CH2Cl2(500ml)中的溶液逐滴加到甘氨酰胺·Hcl(72g，0.65摩爾)和(C2H5)3N(138g，1.37摩爾)在水(200ml)中的冰冷溶液中。停止冷卻，在室溫下攪拌此兩相混合物3小時(shí)，冷卻到5-8℃，用1N Hcl酸化到pH2。過(guò)濾收集固體，在300ml水中漿化，過(guò)濾，干燥，自乙酸乙酯中結(jié)晶，得到75克(0.375摩爾，50％)標(biāo)題化合物，為白色晶狀固體，熔點(diǎn)127℃。分析計(jì)算值 C10H20N2O2C，59.97；H，10.06 N，13.99；實(shí)測(cè)值C，60.09；H，10.25；N，14.00.1H NMRδ(CDCl3)6.72(br s，1H，CONH2)，6.65(br t，1H，CONH)，5.75(br s，1H，CONH2)，3.98(d，2H，gly CαH2)，2.18(m，1H，Pr2CH)，1.57，1.40(m，4H，CH3CH2CH2)，1.29(m，4H，CH3CH2CH2)，0.89(t，6H，CH3)ppm.MS201(MH+，100)，184(MH+-NH3，24).IR3240，3312，3181，2953，2932，2872，1676，1630，1549，1431，1325，1271，1221cm-1實(shí)施例2N-(2-正丙基戊酰)亮氨酰胺此標(biāo)題化合物是根據(jù)實(shí)施例1中所述的步驟由2-丙基戊酰氯(2.0g，12.3毫摩爾)和DL-亮氨酰胺鹽酸鹽(2.0g，12.05毫摩爾)制備的。得到2.36克(9.2毫摩爾，76％)白色晶狀固體，熔點(diǎn)151-152℃。分析計(jì)算值 for C14H28N2O2C，65.58；H，11.01；N，10.93；實(shí)測(cè)值C，65.28；H，10.89；N，10.86.1H NMRδ(DMSO)7.85(br d，1H，CONH)，7.20(br s，1H，CONH2)，6.89(br s，1H，CONH2)，4.27(m，1H，leu CαH)，2.25(m，1H，Pr2CH)，1.60，1.42，1.20(m，11H，CH3CH2CH2，Me2CHCH2)，0.88(d，3H，leu Me)，0.83(d，3H，leu Me)，0.83(br t，6H，Me)ppm.MS257(MH+，100)，240(MH+-NH3，32).IR3410，3300，2955，2925，1720，1655，1645，1540，1260cm-1.
實(shí)施例3N-(2-正丙基戊酰)-2-苯基甘氨酰胺。
將2-丙基戊酰氯(1.95g，12毫摩爾)在1，2-二甲氧基乙烷(DME，30ml)中的溶液加到苯基甘氨酰胺(1.80g，12毫摩爾，由DL-苯基甘氨腈制備，德國(guó)專利2637204)和(C2H5)3N(2.4g，24毫摩爾)在DME(35ml)中的冰冷的懸浮液里。在氮?dú)夥蘸褪覝叵聦⒎磻?yīng)混合物攪拌24小時(shí)，過(guò)濾收集所形成的產(chǎn)物，用冷己烷(50ml)洗，溶入乙酸乙酯/水(200ml∶175ml)中。分離出有機(jī)層，依次用飽和的NaHCO3、0.1N Hcl和飽和的NaCl洗，干燥，蒸發(fā)至干。該粗產(chǎn)物從乙酸乙酯中結(jié)晶，得到2.50g(9.06毫摩爾，75％)標(biāo)題化合物，為白色晶狀固體，熔點(diǎn)190-191℃。分calc.C16H24N2O2C，69.53；H，8.75；N，10.14；實(shí)測(cè)值C，68.26；H，8.57；N，9.96.1H NMRδ(DMSO)8.36(br d，1H，CONH)，7.65(br s，1H，CONH)，7.46-7.22(m，5H，Ph)，7.10(br s，1H，CONH2)，5.46(d，1H，Ph-CH)，2.44(m，1H，Pr2CH)，1.40，1.22，1.10(m，8H，CH3CH2CH2)，0.85(t，3H，Me)，0.78(t，3H，Me)ppm.MS277(MH+，56)，201(100).IR3400，3300，2950，2910，1735，1685，1560，1400cm-1.
實(shí)施例4N-(2-正丙基戊酰)丙氨酸甲酯將DL-丙氨酸甲酯鹽酸鹽(13.7g，98毫摩爾)和(C2H5)3N(20.2g，200毫摩爾)在水(50ml)中的溶液逐滴加到2-丙基戊酰氯(15.0g，92毫摩爾)在CH2Cl2(150ml)中的冰冷溶液中。加完后將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。分出兩層，將水層用CH2Cl2萃取。合并的有機(jī)相依次用水、飽和NaHCO3、0.1N Hcl和飽和NaCl洗，干燥并蒸發(fā)至干。殘余物用60ml己烷處理，過(guò)濾收集所得的固體，用己烷洗，干燥，得到14.2g(62毫摩爾，63％)標(biāo)題化合物，為白色固體，熔點(diǎn)72-73℃。1H NMRδ(CDCl3)6.02(br d，1H，NH)，4.63(五重峰，1H，ala CαH)，3.75(s，3H，OMe)，2.08(m，1H，Pr2CH)，1.6，1.4，1.32(m，8H，CH3CH2CH2)，1.40(d，3H，ala Me)，0.89(t，6H，Me)ppm.MS230(MH+，100)，127(7)，104(16).IR3300，2925，1740，1630，1540cm-1.
實(shí)施例5N-(2-正丙基戊酰)甘氨酸甲酯此標(biāo)題化合物根據(jù)實(shí)施例4中所述的步驟由2-丙基戊酰氯(19.34g，119毫摩爾)和甘氨酸甲酯鹽酸鹽(15.0g，119毫摩爾)制備。得到22g(102毫摩爾，86％)灰白色固體，熔點(diǎn)68℃。1H NMRδ(CDCl3)5.97(br t，1H，NH)，4.06(d，2H，glyCH2)，3.76(s，3H，OMe)，2.14(m，1H，Pr2CH)，1.60，1.45-1.25(m，8H，CH3CH2CH2)，0.90(t，6H，Me)ppm.MS216(MH+，100)，127(13).IR3300，2945，2920，1765，1650，1550，1220cm-1.
實(shí)施例6N-(2-正丙基戊酰)丙氨酰胺向N-(2-丙基戊酰)丙氨酸甲酯(6.87g，30毫摩爾)在甲醇(20ml)中的溶液逐滴加入氨水(25％，50ml)，將該反應(yīng)混合物在回流下攪拌4小時(shí)。濾出冷卻時(shí)沉淀的固體，用冷己烷洗，干燥，從乙酸乙酯中結(jié)晶，得到1.90g(8.92毫摩爾，30％)標(biāo)題化合物，為白色晶狀固體，熔點(diǎn)165-166℃。分析計(jì)算值 C11H22N2O2C，61.64；H，10.35；N，13.08；實(shí)測(cè)值C，61.35；H，10.26；N，13.32.1H NMRδ(DMSO)7.84(brd，1H，CONH)，7.21(br s，1H，CONH2)，6.92(br s，1H，CONH2)，4.25(quintet，1H，alaCαH)，2.24(m，1H，Pr2-CH)，1.42，1.20(m，8H，CH3CH2CH2)，1.17(d，3H，ala Me)，0.833(t，3H，Me)，0.827(t，3H，Me)ppm.MS214(M+，1)，170(M+-CONH2，100).IR3390，3295，1675，1620cm-1.
實(shí)施例7N-(2-正丙基戊酰)丙氨酸-N′-芐基酰胺此標(biāo)題化合物根據(jù)實(shí)施例6中所述的步驟由N-(2-丙基戊酰)丙氨酸甲酯(3.67g，16毫摩爾)制備，但是使用芐胺(過(guò)量1.5摩爾)的甲醇溶液，而且該反應(yīng)混合物回流攪拌24小時(shí)。得到1.4g(4.6毫摩爾，29％)標(biāo)題化合物，為白色固體，熔點(diǎn)139℃。分析計(jì)算值C18H28N2O2C，71.01；H，9.27；N，9.21；實(shí)測(cè)值C，70.88；H，9.15；N，9.24.1H NMRδ(DMSO)7.25(m，6H，PhCH2NH)，6.40(br d，1H，CONH)，4.61(quintet，1H，ala CαH)，4.39(m，2H，Ph-CH2)，2.06(m，1H，Pr2CH)1.50，1.25(m，8H，CH3CH2CH2)，1.34(d，3H，ala Me)，0.87(t，3H，Me)，0.82(t，3H，Me)ppm.MS304(M+，34)，198(M+-PhCH2NH，11)，171(44).IR3280，2945，2925，1640，1550，1445cm-1.
實(shí)施例8N-(2-丙基戊酰)甘氨酸-N′-甲基酰胺此標(biāo)題化合物根據(jù)實(shí)施例7中所述的步驟由N-(2-丙基戊酰)甘氨酸甲酯(5.0g，23.2毫摩爾)和35％的甲胺水溶液(56.4毫摩爾)制備。得到2.86g(13.4毫摩爾，58％)白色結(jié)晶狀固體，熔點(diǎn)146℃。分析計(jì)算值 for C11H22N2O2C，61.65；H，10.35；N，13.07；實(shí)測(cè)值C，61.36；H，10.14；N，12.78.1H NMR δ(DMSO)7.99(br t，1H，CONHCH2)，7.69(m，1H，CONHCH3)，3.62(d，2H，gly CH2)，2.58(d，3H，NHMe)，2.22(m，1H，Pr2CH)，1.45，1.22(m，8H，CH3CH2CH2)，0.83(t，6H，Me)ppm.MS215(MH+，100)，197(MH+-H2O，23)，184(MH+-MeNH2，65)，127(8).IR3300，2960，2920，2870，1660，1630，1555，1440，1420cm-1實(shí)施例9N-(2-正丙基戊酰)甘氨酸-N′-丁基酰胺此標(biāo)題化合物根據(jù)實(shí)施例7中所述的步驟由N-(2-正丙基戊酰)甘氨酸甲酯(5.0g，23.0毫摩爾)和丁胺制備(4.1g，55.0毫摩爾)制備。得到2.2g(8.5毫摩爾，37％)，熔點(diǎn)101℃。分析計(jì)算值 C14H22N2O2C，65.58；H，11.01；N，10.93；實(shí)測(cè)值C，65.87；H，11.23；N，11.38.1H NMRδ(DMSO)7.99(br t，1H，NH)，7.65(br t，1H，NH)，3.63(d，2H，gly CH2)，3.05(m，2H，CH3CH2CH2CH2NH)，2.22(m，1H，Pr2CH)，1.50-1.16(m，12H，CH3CH2CH2，CH3CH2CH2CH2NH)，0.85(t，3H，CH3CH2CH2NH)，0.83(t，3H，CH3CH2CH2)ppm.MS257(MH+，100)，184(MH+-C4H9NH2，19).IR3300，2940，1660，1635，1555，1470，1435，1300cm-1.
實(shí)施例10N-(2-正丙基戊酰)甘氨酸-N′-甲基酰胺此標(biāo)題化合物根據(jù)實(shí)施例1中所述的步驟由2-丙基戊酰氯(404mg，2.5毫摩爾)和2-氨基-N-甲基乙酰胺(220mg，2.5毫摩爾，由甘氨酸甲酯鹽酸鹽和甲胺制備)制得。得到318mg(1.49毫摩爾，59％)白色晶狀固體，與實(shí)施例8中所述的產(chǎn)物相同。
實(shí)施例11N-(2-正丙基戊酰)-4-氨基丁酰胺在1小時(shí)內(nèi)向N-(2-丙基戊酰)-4-氨基丁酰氯(由N-(2-丙基戊酰)-4-氨基丁酸和SOCl2制備，(5.9g，24.0毫摩爾)在二噁烷(25ml)中的冰冷的溶液里逐滴加入34ml NH4OH。然后在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物20小時(shí)，減壓蒸發(fā)至干。將該殘余物溶于水(20毫升)和乙酸乙酯(30ml)的混合物中，激烈攪拌此混合物5分鐘。分離出有機(jī)相，減壓蒸發(fā)至干，殘余物從乙酸乙酯中結(jié)晶，得到1.4g(6.1毫摩爾，26％)晶狀固體，熔點(diǎn)138℃。分析計(jì)算值 C12H24N2O2C，63.13；H，10.60；N，12.27；實(shí)測(cè)值C，63.12；H，10.69；N，12.54.1H NMR δ(DMSO)7.81(br t，1H，NH)，7.26(br s，1H，(CH2)3CONH2)，6.73(br s，1H，(CH2)3CONH2)，3.02(m，2H，CH2CH2CH2CONH2)，2.11(m，1H，Pr2CH)，2.03(t，2H，CH2CONH2)，1.58(m，2H，CH2CH2CONH2)，1.42(m，2H，CH2CHCO)，1.19(m，6H，CH2CH2CHCO)，0.84(t，6H，Me)ppm.MS229(MH+，100)，127(17).IR3405，3300，3190，2960，2935，2880，1660，1655，1635，1550，1445cm-1.
實(shí)施例12N-[2-正丙基戊-(E)-2-烯酰]甘氨酰胺將甘氨酰胺鹽酸鹽(6.63g，60毫摩爾)在水(18ml)和(C2H5)3N(12.7g，126毫摩爾)中的冷溶液在攪拌下慢慢加到2-丙基戊-(E)-2-烯酰氯在甲苯(40ml)中的冰冷溶液里。加完后將兩相的反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。按照實(shí)施例1中的步驟進(jìn)行后處理和結(jié)晶，得到6.92克(34.8毫摩爾，58％)標(biāo)題化合物，為白色晶狀固體，熔點(diǎn)112℃。分析計(jì)算值 C10H18N2O2C，60.58；H，9.13；N，14.13；實(shí)測(cè)值C，60.53；H，8.86；N，14.04.1H NMRδ(CDCl3)6.97(br s，1H，CONH2)，6.91(br t，1H，NH)，6.29(t，1H，vinyl)，6.05(br s，1H，CONH2)，2.28(m，2H，CH3CH2CH＝)，2.17(m，2H，CH3CH2CH2)，1.42(m，2H，CH3CH2CH2)，1.05(t，3H，Me)，0.93(t，3H，Me)ppm.MS199(MH+，83)，182(MH+-NH3，79)，125(100).IR3341，3179，2955，2872，1680，1601，1535，1433，1319cm-1實(shí)施例13N-[2-正丙基戊-(E)-2-烯酰]丙氨酸甲酯此標(biāo)題化合物根據(jù)實(shí)施例4中所述的步驟由2-丙基戊-(E)-2-烯酰氯(10.95g，68.1毫摩爾)和丙氨酸甲酯鹽酸鹽(10.14g，72.6毫摩爾)制備。粗產(chǎn)物自己烷中結(jié)晶，得到13.25g(58.4毫摩爾，86％)白色晶狀固體，熔點(diǎn)25℃。1H NMRδ(CDCl3)6.30(br d，1H，NH)，6.23(t，1H，vinyl)4.65(m，1H，ala CH)，3.76(s，3H，OMe)，2.29(m，2H，CH3CH2CH3)，2.17(m，2H)，1.43(d，3H，ala CH3)，1.43(m，2H，CH3CH2CH2)，1.04(t，3H，Me)，0.92(t，3H，Me)ppm.MS228(MH+，100)，196(NH++-NH3，100)，168(30)，125(76).
實(shí)施例14N-[2-正丙基戊-(E)-2-烯酰]甘氨酸-N′-甲基酰胺此標(biāo)題化合物是根據(jù)實(shí)施例7中所述的步驟，由按照實(shí)施例5中所述自2-丙基戊-2-烯酰氯和甘氨酸甲酯鹽酸鹽制得的N-[2-正丙基戊-(E)-2-烯酰]甘氨酸甲酯(13.5，63.9毫摩爾)和35％的甲胺水溶液(15ml，169.2毫摩爾)制得。此酰胺產(chǎn)物用柱狀色譜純化，自乙酸乙酯中結(jié)晶，得到7.8g(36.8毫摩爾，58％)白色晶狀固體，熔點(diǎn)68-69℃。分析計(jì)算值 C11H2ON2O2C，62.23；H，9.50；N，13.20；實(shí)測(cè)值C，62.42；H，9.50；N，13.05.1H NMRδ(DMSO)7.94(br t，1H，NH)7.67(m，1H，NHCH3)，6.23(t，1H，vinyl)，3.65(d，2H，gly)，2.58(d，3H，NHCH3)，2.21(m，2H，CH3CH2CH＝)，2.13(m，2H，CH3CH2CH2)，1.32(m，2H，CH3CH2CH2)，0.99(t，3H，Me)，0.85(t，3H，Me)ppm.MS213(MH+，73)，195(37)，182(MN+-CH+3NH2，100)，125(74).IR3300，2955，2925，1660，1620，1560，1540，1460cm-1.
實(shí)施例15N-[2-正丙基戊-(E)-2-烯酰]丙氨酰胺。
此標(biāo)題化合物按照與實(shí)施例6中所述的方式由N-[2-正丙基戊-(E)-2-烯酰]丙氨酸甲酯(9.08g，40毫摩爾)和氨水(67ml)制備，得到5.0g(59％)白色晶狀固體，熔點(diǎn)141-142℃。分析計(jì)算值 C11H20N2O2C，62.23；H，9.50；N，13.20；實(shí)測(cè)值C，62.48；H，9.25；N，13.18.1H NMRδ(DMSO)7.63(d，1H，NH)7.25(br s，1H，CONH2)，6.96(br s，1H，CONH2)，6.18(t，1H，vinyl)4.25(m，1H，ala CH)，2.21(m，2H，CH3CH2CH2)，1.31(m，2H，CH3CH2CH＝)，2.11(m，2H，CH3CH2CH2)，1.31(m，2H，CH3CH2CH2)，1.23(d，3H，ala CH3)，0.99(s，3H，Me)，0.84(s，3H，Me)ppm.MS213(MH+，74)，196(MH+-NH3，100)，125(76).IR3725，3180，2950，1700，1650，1605，1530，cm-1實(shí)施例16N-(2-正丙基戊酰)-β-丙氨酰胺將由2-丙基戊酰氨和β-丙氨酸乙酯鹽酸鹽根據(jù)實(shí)施例4中所述制得的N-(2-正丙基戊酰)-β-丙氨酸乙酯(4.45g，18.29毫摩爾)干燥的甲酰胺(2.74g，61.27毫摩爾)和無(wú)水四氫呋喃(9.2ml)的混合物加熱到100℃，在20分鐘內(nèi)逐滴加入新制備的甲醇鈉(12.7毫摩爾)的甲醇(2.93ml)溶液。將此混合物在100℃下加熱4小時(shí)，加入100ml異丙醇。將該懸浮液加熱回流，過(guò)濾，濾液蒸發(fā)至干。將殘余物在水和乙酸乙酯中回流溶解。分離兩層，用乙酸乙酯(4×100ml)萃取水層。合并的有機(jī)層用水洗，干燥，蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物(2.5g)自乙酸乙酯中結(jié)晶，得2.20g(10.28毫摩爾，56％)白色固體，熔點(diǎn)167-168℃。分析計(jì)算值 C11H22N2O2C，61.64；H，10.35；N，13.08.實(shí)測(cè)值C，61.41；H，10.16；N，12.91.1H NMRδ(DMSO)7.82(br t，1H，CONH)，7.29(br s，1H，CONH2)，6.79(br s，1H，CONH2)，3.20(q，2H，β-ala)，2.21(t，2H，α-ala)，2.12(m，1H，(Pr)2CH)，1.41，1.18(m，8H，CH3CH2CH2)，0.83(t，6H，Me)ppm.MS215(MH+，100)，197(MH+-NH3，69)，172(13)，127(3).IR3389，3303，3202，2957，2928，1653，1634，1551，1456，1439cm-1.
實(shí)施例17N-(2-正丙基戊酰)蘇氨酰胺將2-丙基戊酰氯(3.15g，19.4毫摩爾)在無(wú)水1，2-二甲氧基乙烷(DME，48ml)中的溶液慢慢加到蘇氨酰胺鹽酸鹽(3.0g，19.4毫摩爾)和(C2H5)3N(3.88g，38.8毫摩爾)在無(wú)水DME(60ml)中的10-15℃的懸浮液中。該反應(yīng)混合物在N2和室溫下攪拌24小時(shí)，減壓除去溶劑，殘余物按照實(shí)施例16中所述進(jìn)行后處理。將產(chǎn)物自乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到1.0g(4.1毫摩爾，21％)白色固體，熔點(diǎn)172-174℃。分析計(jì)算值 C12H24N2O3C，58.99，H，9.90；N，11.47；實(shí)測(cè)值C，58.12；H，9.42；N，11.43.1H HMRδ(DMSO)7.58(d，1H，CONH)，7.05(br s，2H，CONH2)，4.84(d，1H，OH)，4.18(dd，1H，α-thr，3.99(m，1H，β-thr)，2.35(m，1H，Pr2CH)，1.44，1.22(m，8H，CH3CH2CH2)，1.02(d，3H，Me-thr)，0.85 (t，3H，Me)，834(t，3H，Me)ppm.MS245(MH+，37)，228(MH+-NH3，100).IR3405，3281，2957，2930，2854，1688，1665，1624，1549cm-1.
實(shí)施例18N-(2-正丙基戊酰)甘氨酸-N′，N′-二甲基酰胺將根據(jù)實(shí)施例4中的步驟由2-丙基戊酰氯和甘氨酸甲酯鹽酸鹽制得的N-(2-正丙基戊酰)甘氨酸甲酯(6.0g，29.9毫摩爾)溶解在15ml甲醇中，逐滴加入11ml 40％的二甲胺水溶液。將該反應(yīng)混合物回流19小時(shí)，蒸發(fā)至干。該反應(yīng)混合物用熱的乙酸乙酯處理，冷卻后過(guò)濾。濾液依次用飽和的NaHCO3和飽和NaCL溶液洗，干燥并蒸發(fā)至干。將固體殘余物自乙酸乙酯/己烷中重結(jié)晶，得到1.50g的白色固體，熔點(diǎn)78-80℃。分析計(jì)算值 C12H24N2O2C，63.12，H，10.59；N，12.27.實(shí)測(cè)值C，62.80，H，10.64；N，11.93.1HNMRδ(DMSO)7.73(br t，1H，CONH)，3.79(d，2H，gly)，2.84(s，3H，Me)，2.72(s，3H，Me)，2.16(m，1H，(Pr)2CH)，1.34(m，2H)，1.12(m，6H)，0.74(t，6H，Me)ppm.MS229(MH+，100)，184(18).IR3314，2951，2924，2872，1662，1630，1522，1466cm-1.
實(shí)施例19N-(2-丙基戊酰)甘氨酰胺的生物活性對(duì)本文提供的所有化合物進(jìn)行篩選，評(píng)價(jià)它們?cè)谥辽賰煞N型式的癲癇中防治化學(xué)和電學(xué)誘發(fā)的癲癇的能力。第一種型式是皮下戊四氮(s.c.Met)癲癇發(fā)作閾值試驗(yàn)，這是顯示藥劑對(duì)抗失神性癲癇發(fā)作能力的標(biāo)準(zhǔn)篩選方法。第二種型式是最大電休克(MES)試驗(yàn)，用來(lái)顯示抗癲癇藥物對(duì)抗全身癲癇發(fā)作的效力。在這些研究中，通過(guò)腹膜內(nèi)(i.P)對(duì)小鼠用藥和/或?qū)κ罂诜?P.O)本發(fā)明化合物來(lái)抑制或防止驚厥。
對(duì)N-(2-丙基戊酰)甘氨酰胺(以后稱為化合物1)還在另兩種型式中進(jìn)行試驗(yàn)。第三種型式是鼠的電激發(fā)，已知這顯示了抗癲痛藥防治會(huì)發(fā)展成全身性肌肉運(yùn)動(dòng)癲癇癥的綜合性局部癲癇發(fā)作的能力。在這些試驗(yàn)中用角膜電極每日兩次對(duì)鼠進(jìn)行電激發(fā)約5天，然后每日一次再進(jìn)行10天。一旦符合如R.J.Racine等在Electroenceph.Clin.Neurophysiol.，32281-294(1972)中所述的癲癇發(fā)作標(biāo)準(zhǔn)，使鼠口服試驗(yàn)物質(zhì)，對(duì)鼠電激發(fā)，觀察發(fā)生或不發(fā)生癲癇。此外，還按照皮下荷包牡丹堿(s.c.Bic)型式對(duì)式I化合物作了試驗(yàn)。所有這些試驗(yàn)的詳細(xì)步驟，請(qǐng)參看E.A.Swinyard等在“AntiepilepticDrugs”(R.H.Levy等編，Raven Press，New York，1989)一書的85-100頁(yè)及上述的Racine文章。
化合物1在所有上述試驗(yàn)中(MES，s.c.Met，s.c.Bic和電激發(fā))都對(duì)嚙齒動(dòng)物顯示出抗驚厥活性。在MES型式中ED50(鼠，口服)是73mg/kg(表1)，此值比VPA的低7倍(效力高7倍)，約為苯妥英的2倍(表1；見E.A.Swinyard等，同上)。另外，在電激發(fā)鼠型式的試驗(yàn)中，化合物1(口服)防止癲癇發(fā)作的ED50為162mg/kg(表1)。這些結(jié)果表明，化合物1具有對(duì)抗全身性癲癇發(fā)作和發(fā)展成全身性肌肉運(yùn)動(dòng)癲癇癥的綜合性局部癲癇發(fā)作的能力。
此外，在s.c.Bic型式中，化合物1在劑量約為文獻(xiàn)中VPA的ED50劑量時(shí)，完全防止了小鼠的癲癇發(fā)作。文獻(xiàn)值還表明，被認(rèn)為是局部和全身性的強(qiáng)直一陣攣型癲癇發(fā)作首選藥物的苯妥英，在這種型式中無(wú)效。參見B.J.Wilder和R.J.Rangel在“Antiepileptic Drugs”(R.H.Levy等，Raven Press，New York，1989)一書的233-239頁(yè)。
在s.c.Met型式中(小鼠，腹膜內(nèi))，化合物1的ED50是127mg/kg(表1)，而VPA的文獻(xiàn)值是146mg/kg。這些結(jié)果進(jìn)一步表明了化合物1防止失神性癲癇發(fā)作的能力。
實(shí)施例20化合物1的神經(jīng)毒性還用小鼠(腹膜內(nèi)用藥)作了旋轉(zhuǎn)棒運(yùn)動(dòng)失調(diào)試驗(yàn)以評(píng)價(jià)提出權(quán)利要求的各藥劑的神經(jīng)毒性，在某些情形還用鼠(口服)作了位置感覺(jué)試驗(yàn)和步態(tài)姿態(tài)試驗(yàn)。參見E.A.Swinyard等在“AntiepilepticDrugs”(R.H.Levy等編，Raven Press，New York，1989)一書的85-100頁(yè)。本發(fā)明化合物中沒(méi)有一個(gè)在試驗(yàn)劑量100mg/kg下對(duì)小鼠顯示出神經(jīng)毒性?；衔?在鼠中的半數(shù)神經(jīng)中毒劑量(TD50)大于1000mg/kg。作為比較，VPA的TD50是280mg/kg。對(duì)于小鼠，化合物1和VPA的TD50的差別較小，但是化合物1的TD50仍明顯較高(神經(jīng)毒性較小)(表1)。對(duì)于在MES試驗(yàn)中的鼠，化合物1的保護(hù)指數(shù)(PI.PI＝TD50/ED50)比VPA的高23倍(表1)。這些結(jié)果表明，可以采用較大的治療劑量范圍而不會(huì)造成常常觀察到的神經(jīng)學(xué)上的副作用。
化合物1對(duì)于小鼠(腹膜內(nèi)服用)的半致死量大于4000mg/kg。與之相比，在同一試驗(yàn)中VPA的LD50是658mg/kg。因此，這些結(jié)果表明化合物1的毒性比VPA小得多。
實(shí)施例21化合物1的神經(jīng)病學(xué)活性在用抗癲癇藥治療的患者中觀察到的主要的神經(jīng)學(xué)副作用是識(shí)別能力損傷。現(xiàn)有的數(shù)據(jù)還表明，在使MES試驗(yàn)中的鼠完全防止發(fā)作誘發(fā)的癲癇所需的最低劑量下，化合物1造成的識(shí)別損傷比VPA小。由采用的模型動(dòng)物得到的結(jié)果被作為人類識(shí)別能力主要組分的標(biāo)志。
進(jìn)行了關(guān)于動(dòng)機(jī)、聯(lián)想以及短期和長(zhǎng)期記憶水平的試驗(yàn)研究。具體研究的是化合物1對(duì)鼠在運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)和被動(dòng)及主動(dòng)響應(yīng)試驗(yàn)中的表現(xiàn)的影響。在以下的識(shí)別研究中?；衔?和VPA的劑量是在MES試驗(yàn)中完全防止癲癇發(fā)作的最低劑量(化合物1＝200mg/kg和VPA＝500mg/kg)。
在運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)中，在開始藥物治療8-9天后記錄肌肉運(yùn)動(dòng)活性。運(yùn)動(dòng)評(píng)分是在25×26cm的籠子內(nèi)進(jìn)行，籠內(nèi)有間隔4cm的紅外光束網(wǎng)格。記錄兩類運(yùn)動(dòng)小的動(dòng)作(起源于靜態(tài)活動(dòng)，例如梳毛和抓搔)和大的運(yùn)動(dòng)(造成移動(dòng)并被記錄成同時(shí)橫跨兩個(gè)以上光束的動(dòng)作)。因?yàn)槭笫且归g活動(dòng)的動(dòng)物，所以常常在下午18:00-上午6:00之間記錄。
運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)中的結(jié)果(表2)表明，對(duì)照樣與化合物1之間的肌肉運(yùn)動(dòng)活性沒(méi)有明顯差別。
為測(cè)定被動(dòng)回避反應(yīng)，在開始藥物治療后第10、12、14、20和26天進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)裝置由一個(gè)彼此用拉門隔開的亮室和暗室構(gòu)成。在實(shí)驗(yàn)時(shí)，將鼠放在亮室內(nèi)30秒，然后打開門，鼠進(jìn)入暗室，記下等待時(shí)間。在進(jìn)入暗室的同時(shí)，將門關(guān)上，放出3秒鐘0.3mA的足部電擊。48小時(shí)后重復(fù)此試驗(yàn)并記錄等待時(shí)間，以確定對(duì)此經(jīng)驗(yàn)的記憶力，任意地指定300秒為最大等待時(shí)間。較長(zhǎng)的等待時(shí)間被看作是記憶改進(jìn)的反映。
此研究的結(jié)果表明，在試驗(yàn)的第16天，服用化合物1的一組和對(duì)照組一樣保留了所獲得的避免電擊的知識(shí)(圖1)。但是，VPA治療的鼠顯然受治療的影響，表現(xiàn)差得多。這些結(jié)果表明，化合物1沒(méi)有這種有害作用。
鼠的條件性回避響應(yīng)(主動(dòng)回避試驗(yàn))在一臺(tái)Hugo-Basi1e自動(dòng)式條件反射裝置中測(cè)定，該裝置由一個(gè)帶兩個(gè)分開的地板格線的梭箱構(gòu)成。在此裝置中，訓(xùn)練鼠從箱子的一邊跳到另一邊。訓(xùn)練的條件是10秒鐘光和電蜂音器刺激。在刺激結(jié)束時(shí)未能跳到箱子另一邊的鼠要受到20秒來(lái)自網(wǎng)格地板的電擊(50V，0.3mA)。跳到箱子另一邊的鼠不受電擊。7天后用同樣的鼠重復(fù)這一試驗(yàn)。試驗(yàn)是在開始藥物治療后的第16-17天和第22-23天進(jìn)行，每只鼠試驗(yàn)60次，每次間隔30秒。
記錄以下參數(shù)a)成功地避免了可能的電擊的次數(shù)；b)避免可能電擊的等待時(shí)間響應(yīng)(秒)；和(c)在整個(gè)試驗(yàn)中穿過(guò)箱子的總數(shù)目。在此試驗(yàn)中，回避電擊的增加、跳到籠子另一邊的等待時(shí)間減小和鼠穿過(guò)籠了另一邊的次數(shù)增多都表示表現(xiàn)較好。
用化合物1治療的鼠的表現(xiàn)比用VPA治療的顯示地好。用化合物1治療的動(dòng)物的表現(xiàn)與對(duì)照組相似，而VPA治療的鼠表現(xiàn)較差(圖2和表3)。
上述的試驗(yàn)與化合物1造成的識(shí)別力損傷比VPA小的結(jié)論是一致的。
根據(jù)化合物1與VPA相比ED50較低而TD50和LD50較高這一事實(shí)，可以認(rèn)為化合物1是通過(guò)特有的機(jī)制而不是作為VPA的前驅(qū)藥物起作用。另外，由于2-丙基戊酰甘氨酸和米拉醋胺在小鼠(腹膜內(nèi)用藥劑量高達(dá)300mg/kg)的MES和s.c.Met模式試驗(yàn)中均無(wú)活性。這些結(jié)果是相當(dāng)出乎意料的。
實(shí)施例22N-(2-正丙基戊酰)氨基乙腈將2-丙基戊酰氯(3.26g，20毫摩爾)在甲苯(20ml)中的溶液在攪拌下逐滴加到氨基乙腈鹽酸鹽(1.85g，20毫摩爾)和(C2H5)3N(4.24g，42毫摩爾)的冰冷溶液中。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后加入10ml甲苯和10ml水，兩相分離。將甲苯層在CH2Cl2(80ml)中稀釋，分離兩相。該有機(jī)層用硫酸鎂干燥，減壓蒸發(fā)至干。該殘余物加到30ml己烷中，在室溫下攪拌2小時(shí)，將所形成的懸浮液過(guò)濾，用己烷(10ml)洗。粗產(chǎn)物自6∶1的己烷∶乙酸乙酯中結(jié)晶，得到2.41g(13.22毫摩爾，66％)白色晶狀固體，熔點(diǎn)76-77℃。分析計(jì)算值 C10H15N2OC，65.90；H，9.95；N，15.37.實(shí)測(cè)值C，65.90；H，10.22；N，15.51.1H-NMRδ(CDCl3)6.40(br s，1H，NH)，4.19(d，2H，CH2)，2.19(m，1H，Pr2CH)，1.60，1.42(m，4H，CH3CH2CH2)，1.29(m，4H，CH3CH2CH2)0.90(t，6H，CH3)ppm.MS183(MH+，100)，156(MH+-HCN，19)，127(23)IR3287，2959，2930，2250，1657，1543，1466，1420，1260cm-1實(shí)施例23N-(2-正丙基戊酰)-N-甲基甘氨酸乙酯將甲基甘氨酸乙酯鹽酸鹽(3.26g，21.2毫摩爾)和(C2H5)3N(4.37g，43.3毫摩爾)在12ml水中的溶液逐滴加到2-乙基丙酰氯(3.25g，20毫摩爾)在CH2Cl2(35ml)中的冰冷溶液里。將該混合物回流攪拌3小時(shí)，然后冷至室溫。分離兩相，有機(jī)層依次用水(15ml)、飽和碳酸氫鈉(15ml)和0.1N HCl(15ml)洗。然后將殘余物用硫酸鎂干燥，減壓蒸發(fā)至干，得到淺黃色油狀的標(biāo)題產(chǎn)物(15.2毫摩爾，76％)。1H-NMRδ(CDCl3)4.18(q，2H，Et)，4.13(s，2H，CH2)，3.12(s，3H，CH3)，2.74(m，1H，Pr2CH)，1.65，1.35(m，8H，CH3CH2CH2)，1.27(t，3H，Et)，0.90(t，6H，CH3)ppm.MS244(MH+，100)，201(28)，198(25，MH+-EtOH)
實(shí)施例24N-(2-正丙基戊酰)-N-甲基甘氨酰胺將6.8ml氨水加到N-(2-正丙基戊酰)-N-甲基甘氨酸乙酯(1.0g，4.1毫摩爾)在3ml乙醇中的溶液里。將該反應(yīng)混合物回流攪拌15小時(shí)，減壓蒸干。殘余物溶在5ml乙酸乙酯中，該溶液依次用碳酸氫鈉水溶液(5ml)、0.1N HCl(2×5ml)和飽和的NaCl溶液(5ml)洗，用硫酸鎂干燥，減壓蒸干。粗產(chǎn)物用己烷處理(2×2ml)，過(guò)濾，干燥，得到120mg(14％)白色固體狀標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)138-140℃。1H-NMRδ(CDCl3)6.32(br s，1H，CONH2)，5.45(br s，1H，CONH2)，4.02(d，2H，gly CH2)，3.17(s，3H，NCH3)，2.70(m，1H，Pr2CH)，1.60，1.40(m，4H，CH3CH2CH2)，1.25(m，4H，CH3CH2CH2)，0.90(t，6H，CH3).MS215(MH+，100)，198(MH+-NH3，46)，172(5)，158(9).
實(shí)施例25根據(jù)實(shí)施例19和20的步驟，用小鼠(腹膜內(nèi)用藥)、鼠(口服)或二者皆用，試驗(yàn)了各化合物在最大電休克(MES)試驗(yàn)和皮下戊四氮(s.c.Met)癲癇發(fā)作閾值試驗(yàn)中的生物活性及神經(jīng)毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果列在表4。
表1本發(fā)明的及參照的抗癲癇藥劑的抗驚厥效果
化合物1的抗驚厥效果與定型的抗驚厥藥VPA及苯妥英的文獻(xiàn)值比較(采用的文獻(xiàn)值的抗驚厥活性實(shí)驗(yàn)方案與本研究相同)。用皮下注射戊四氮(s.c.Met試驗(yàn))或電激發(fā)(MES試驗(yàn))在小鼠和鼠中誘發(fā)驚厥。N.E.＝無(wú)效。
表2用化合物1長(zhǎng)期治療的鼠的活動(dòng)性分?jǐn)?shù)
藥物治療的鼠的活動(dòng)性分?jǐn)?shù)，在開始逐日口服指定藥物后的第8-9天于活動(dòng)性籠子內(nèi)測(cè)定。數(shù)字是穿過(guò)籠子的次數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)平均偏差。括號(hào)內(nèi)是每組的鼠的個(gè)數(shù)。
表3本發(fā)明化合物和參照化合物的主動(dòng)回避響應(yīng)
用化合物1和有關(guān)藥物治療的鼠在主動(dòng)回避試驗(yàn)(條件性回避響應(yīng))中的分?jǐn)?shù)。此試驗(yàn)的第一階段在開始用藥后的第16-17天進(jìn)行，第二階段在第22-23天進(jìn)行，即第一階段的7天之后，括號(hào)內(nèi)是每組內(nèi)的鼠數(shù)。
表4本發(fā)明各化合物的生物活性和神經(jīng)毒性
表4(續(xù))
數(shù)值的單位是mg/kg，化合物與它們的實(shí)施例編號(hào)相同(例如，化合物22是合成實(shí)施例22公開的N-(2-正丙基戊酰)氨基乙腈)。
權(quán)利要求
1.一種結(jié)構(gòu)如下的化合物 其中R4和R5各自獨(dú)立地是氫、C1-C6烷基、芳烷基或芳基；和n是0、1、2或3。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中C1-C6烷基是直鏈烷基。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中C1-C6烷基是支鏈烷基。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中芳烷基是芐基、烷基芐基、羥基芐基、烷氧基羰基芐基、芳氧基羰基芐基、羧基芐基、硝基芐基、氰芐基或鹵芐基。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中芳基是苯基、萘基、蒽基、吡啶基、吲哚基、呋喃基、烷基苯基、羥基苯基、烷氧基羰基苯基、芳氧基羰基苯基、硝基苯基、氰苯基、鹵苯基、巰苯基或氨基苯基。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是N-(2-正丙基戊酰)氨基乙腈。
7.一種結(jié)構(gòu)如下的化合物 R4和R5各自獨(dú)立地是氫、C1-C6烷基、芳烷基或芳基；n是0、1、2或3。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中C1-C6烷基是直鏈烷基。
9.權(quán)利要求7的化合物，其中C1-C6烷基是支鏈烷基。
10.權(quán)利要求7的化合物，其中芳烷基是芐基、烷基芐基、羥基芐基、烷氧基羰基芐基、芳氧基羰基芐基、羧基芐基、硝基芐基、氰芐基或鹵芐基。
11.權(quán)利要求7的化合物，其中芳基是苯基、萘基、蒽基、吡啶基、吲哚基、呋喃基、烷基苯基、羥基苯基、烷氧基羰基苯基、芳氧基羰基苯基、硝基苯基、氰苯基、鹵苯基、巰苯基或氨苯基。
12.一種藥物組合物，其中含有治療上有效數(shù)量的權(quán)利要求1或7的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥物上可接受的載體。
13.權(quán)利要求12的藥物組合物，其中治療上有效的數(shù)量是從約10到約500mg。
14.權(quán)利要求13的藥物組合物，其中載體是固體，該組合物是片劑。
15.權(quán)利要求13的藥物組合物，其中載體是凝膠，該組合物是栓劑。
16.權(quán)利要求13的藥物組合物，其中載體是液體，該組合物是溶液。
17.權(quán)利要求1-11之一的化合物在制備治療患者的癲癇的藥物中的用途。
18.權(quán)利要求1-11之一的化合物在制備治療患者的情感性精神病的藥物中的用途。
19.權(quán)利要求1-11之一的化合物在制備治療患者的識(shí)別障礙的藥物中的用途。
20.權(quán)利要求1-11之一的化合物在制備治療患者的神經(jīng)變性病的藥物中的用途。
21.權(quán)利要求1-11之一的化合物在制備治療患者的運(yùn)動(dòng)障礙癥的藥物中的用途。
22.權(quán)利要求1-11之一的化合物在制備治療患者的神經(jīng)中毒性損傷的藥物中的用途。
23.權(quán)利要求1-11之一的化合物在制備減緩患者驚厥發(fā)作的藥物中的用途。
24.權(quán)利要求1-11之一的化合物在制備治療患者的中風(fēng)的藥物中的用途。
25.權(quán)利要求1-11之一的化合物在制備治療患者的腦局部缺血的藥物中的用途。
26.權(quán)利要求1-11之一的化合物在制備治療患者的頭部損傷的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了結(jié)構(gòu)為式(I)的化合物，其中A是X或Y，X是(a)、Y是(b)、R
文檔編號(hào)C07C255/24GK1418869SQ02105358
公開日2003年5月21日 申請(qǐng)日期1994年7月6日 優(yōu)先權(quán)日1993年7月6日
發(fā)明者M·比亞勒, S·哈達(dá)德, J·赫齊格, J·施特林, D·倫納, M·希爾萬(wàn) 申請(qǐng)人:耶路撒冷希伯來(lái)大學(xué)伊森姆研究發(fā)展公司, 特瓦制藥工業(yè)有限公司