專利名稱：提純5’－保護胸腺嘧啶核苷及其新型衍生物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提純5’-保護胸腺嘧啶核苷及其衍生物的方法。本發(fā)明也涉及一種5’-保護胸腺嘧啶核苷的溶劑包合化合物，該化合物是通過本發(fā)明的方法獲得的結(jié)晶體。
最近幾年，隨著制造基因藥物的發(fā)展，反義DNA藥物及其類似物的制造也在迅速發(fā)展。同時，對于作為原料的DNA低聚物以及用于制備該低聚物的保護脫氧核苷的需求急速增長，因此，必須使用非常高純度的中間產(chǎn)物來盡可能降低作為雜質(zhì)的副產(chǎn)品的生成是十分必要的。
根據(jù)日本專利特開平6-507883和2000-264897以及酶學(xué)刊物65期(1980)(Enzymo.，65(1980))的方法，傳統(tǒng)的5’-保護胸腺嘧啶核苷是通過柱色譜法提純的。利用這種方法，對于那些與提純物在極性和結(jié)構(gòu)方面有很大差距的雜質(zhì)相對容易被分離，但是去掉那些有類似結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)是困難的。特別是，在許多情況下，去掉特別令人頭疼的雜質(zhì)---3’-取代異構(gòu)體是困難的。此外，因為這種方法需要體積很大的提純設(shè)備，從將來大量生產(chǎn)和大量供應(yīng)的觀點來看，不得不說這種方法存在很大問題。
使用柱色譜法之外的方法去除雜質(zhì)的嘗試已經(jīng)取得了。作為利用單一溶劑提純方法的例子，日本專利特開平58-180500公開了一種利用苯來提純的方法，但是在實際使用的過程中，該方法形成一種并有雜質(zhì)的凝膠體而不是結(jié)晶體，因此，該方法是不切實際的。進而，該方法還有不利的一面，用作溶劑的苯是有毒的。日本專利特開平11-511480和PCT公開號WO200075154中公開了通過再沉淀提純的方法。再沉淀的方法是一種在粗化合物溶于一種有機溶劑之后，通過加入一種不溶溶劑或者倒入一種不溶溶劑中進行強制沉淀化合物的方法。但其結(jié)果是提純能力較低。另外，在工業(yè)中，恰當(dāng)?shù)乜刂瓶扇苋軇┖筒蝗苋軇┑谋壤彩呛芾щy的。此外，如果這些溶劑混和比例不恰當(dāng)，很容易導(dǎo)致油質(zhì)化(oilification)或產(chǎn)生一種粘稠沉淀物，以致提純失敗。實際上，根據(jù)日本專利60-152495所述方法，在一些情況下，所獲提純物類似一種粘稠糖漿狀物質(zhì)，從工業(yè)的角度來考慮，這是一個問題。雖然通過再沉淀形成無定形體的方法現(xiàn)在已經(jīng)公開了，但是通過結(jié)晶或再結(jié)晶獲得一種結(jié)晶體的方法還不為人所知。
經(jīng)過本發(fā)明人對上述目的的深入細致研究，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)使用一種羰基化合物如乙酸丁酯、4-甲基-2-戊酮，5’-保護胸腺嘧啶核苷可以作為一種含有溶劑的溶劑化配合物制得，并且可以利用結(jié)晶或再結(jié)晶的提純方法來提純，從而使本發(fā)明得以實現(xiàn)。
這樣，本發(fā)明包括以下部分(1)一種提純5’-保護胸腺嘧啶核苷的方法，其包括以下步驟獲得下式(1)表示的化合物， 其中R1表示任意的取代三苯甲基；R2表示氫或較小烷基；R3表示氫、鹵素或取代羥基，以包含一種溶劑的包合結(jié)晶體的形式，在液體介質(zhì)中包括該包合溶劑組成的；從液體介質(zhì)中收回包合結(jié)晶體。
(2)一種根據(jù)上述部分(1)提純5’-保護胸腺嘧啶核苷的方法，其中，所述包合的溶劑是一種羰基化合物，如(2)式表示的。 其中R4表示較小烷基；R5表示較小的烷基或較小的烷氧基；(3)一種根據(jù)上述部分(2)的提純方法，其中，所述羰基化合物是乙酸丁脂或4-甲基-2-戊酮；(4)一種根據(jù)上述(1)到(3)任意部分的提純方法，其中，粗制備物包括(1)式的化合物和下面(3)式的化合物 其中R6表示氫或任意取代三苯甲基，R1、R2和R3和與上述表示相同；所述粗制備物溶于液體介質(zhì)中，經(jīng)過從液體介質(zhì)中回收(1)式化合物形成的包合結(jié)晶體，(3)式的化合物留在了液體介質(zhì)中。
(5)一種根據(jù)上述(1)到(4)任意部分的提純方法，其中，(1)式的化合物為如下(4)式所表示的化合物
(6)一種根據(jù)上述(1)到(5)任意部分的提純方法，其中，(1)式化合物的含有包合溶劑的包合結(jié)晶體從由包合溶劑組成的液體介質(zhì)中再結(jié)晶。
(7)一種根據(jù)上述(1)到(6)任意部分的提純方法，其中，液體介質(zhì)是由單一包合溶劑組成。
(8)一種由(5)式表示的包合化合物 其中m和n分別代表任意的整數(shù)，R1、R2、R3、R4和R5與上述表示相同；(9)一種由(6)式表示的包合化合物 其中R7表示正丁氧基或異丁基；m和n與上述表示相同。
(1)式中R1是取代的或未被取代的三苯甲基，一個三苯甲基在它的三個苯環(huán)的至少一個苯環(huán)上可以有一個或幾個取代基，在該苯環(huán)上取代可以在2-，3-或4-的位置上或者在其中兩個或更多位置上。當(dāng)一個苯環(huán)有二個或更多的取代基，多數(shù)取代基可以是相同的或者由至少兩種不同類型組成。當(dāng)兩個或更多的苯環(huán)被取代時，這些取代的苯環(huán)可以是相同的或者由至少兩種不同類型組成，其中包括一種情況，兩個或三個取代環(huán)具有相同的取代基或不同的取代基。
三苯甲基團在苯基上的取代基的例子包括烷基如甲基、乙基和異丙基；烷氧基如甲氧基、乙氧基、正丙氧基和異丙氧基；硝基；取代的或未取代的氨基如氨基、甲氨基、乙氨基、正丙氨基、異丙氨基、二甲氨基和二乙氨基；鹵素如氟、氯、溴或碘；?；缂柞；?、乙?；?、丙?；捅郊柞；?；酰氧基如甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基和苯甲酰氧基；和酰胺如甲酰胺、乙酰胺和苯酰胺。當(dāng)存在多數(shù)取代物基時，每種取代基都可以獨立的從上述基團中選擇。在上述各種取代基中的烷基團優(yōu)選為具有1-7個碳原子的較小烷基團，更優(yōu)選為具有上述具體例子的碳原子數(shù)的烷基團。
任意的取代三苯甲基的例子包括(但并不限于此)三苯甲基、4-甲氧三苯甲基、4，4’-二甲氧三苯甲基、4，4’，4”-三甲氧三苯甲基、4-甲基三苯甲基和4，4’-二甲基三苯甲基。
在R2上的較小烷基可以直鏈或支鏈的，也可以是環(huán)形。烷基上可以有另外的取代基。較小烷基團的例子包括具有1-7個碳原子的烷基團如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、環(huán)丙基、環(huán)丙甲基和環(huán)苯基。
在R3上的鹵素為氟、氯、溴或碘。在R3上的取代羥基表示由一種一般是對于羥基的保護基團的取代基取代的羥基，這種取代基如羧酸鹽、磺酸鹽、醚、氨基甲酸乙酯和甲硅烷基。對于羥基的保護基團的例子包括未取代或取代的烷基如甲基、乙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、苯甲基、2-甲氧苯甲基、3-甲氧苯甲基、4-甲氧苯甲基、2-甲苯甲基、3-甲苯甲基、4-甲苯甲基、甲氧乙基、乙氧乙基、芐氧甲基、芐氧乙基、乙酸基甲基、乙酸基乙基、苯甲酰甲基、苯甲酰乙基、甲氧乙氧乙基、炔丙基和烯丙基；烷基如苯基、2-甲氧苯基、3-甲氧苯基、4-甲氧苯基、4-苯基苯、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基；?；缂柞；⒁阴；⒈；?、苯甲?；?、2-甲氧苯甲酰基、3-甲氧苯甲酰基、4-甲氧苯甲?；?、2-甲基苯甲酰基、3-甲基苯甲酰基、4-甲基苯甲?；?、2-硝基苯甲?；?、3-硝基苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基、4-苯基苯甲酰基、2-氯苯甲?；?、3-氯苯甲酰基、4-氯苯甲?；?；氨基甲酸乙酯如甲酰胺羰基、二甲基甲酰胺基、甲基甲酰胺基、乙基甲酰胺基、二乙基甲酰胺基和苯基甲酰胺基；磺酸鹽如甲磺酰、乙磺酰、苯磺酰、2-甲基苯磺酰、3-甲基苯磺酰、4-甲基苯磺酰、三氟甲磺酰、三氯甲磺酰；甲硅烷基如三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基。
在R3上取代的羥基的例子包括甲氧基、乙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、芐氧基、2-甲氧苯氧基、3-甲氧苯氧基、4-甲氧苯氧基、2-甲基苯氧基、3-甲基苯氧基、4-甲基苯氧基、甲氧乙氧基、乙氧乙氧基、芐氧甲氧基、芐氧乙氧基、乙酸甲氧基、乙酸乙氧基、苯甲酸甲氧基、苯甲酸乙氧基、甲氧乙氧基、炔丙氧基、烯丙氧基、苯氧基、2-甲氧苯氧基、3-甲氧苯氧基、4-甲氧苯氧基、4-苯基苯氧基、2-吡啶氧基、3-吡啶氧基、4-吡啶氧基、甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、苯甲酰氧基、2-甲氧苯甲酰氧基、3-甲氧苯甲酰氧基、4-甲氧苯甲酰氧基、2-甲基苯甲酰氧基、3-甲基苯甲酰氧基、4-甲基苯甲酰氧基、2-硝基苯甲酰氧基、3-硝基苯甲酰氧基、4-硝基苯甲酰氧基、4-苯基苯甲酰氧基、2-氯苯甲酰氧基、3-氯苯甲酰氧基、4-氯苯甲酰氧基、甲酰胺氧基、二甲基甲酰胺氧基、甲基甲酰胺氧基、乙基甲酰胺氧基、二乙基甲酰胺氧基、苯基甲酰胺氧基、甲磺酰氧基(methanesulfonyloxy)、乙磺酰氧基、苯磺酰氧基、2-甲基苯磺酰氧基、3-甲基苯磺酰氧基、4-甲基苯磺酰氧基、三氟甲酰胺氧基、三氯甲酰胺氧基、三甲基甲硅烷氧基、三乙基甲硅烷氧基、叔丁基二甲基甲硅烷氧基、叔丁基二苯基甲硅烷氧基。
在對于羥基的保護基的上述不同取代基中的烷基團優(yōu)選為具有1-7個碳原子的較小烷基團，更優(yōu)選為具有上述具體例子中的碳原子數(shù)目的較小烷基團。
(2)式中R4和R5上的較小烷基團的例子所括具有1-7個碳原子的烷基團如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、戊基、正己基、環(huán)戊基、環(huán)己基和正庚基。R5上的較小烷氧基團的例子所括具有1-6個碳原子的烷氧基團如甲氧基、乙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基和戊氧基。
在本發(fā)明中用于制備包合結(jié)晶體的包合溶劑優(yōu)選為具有(2)式表示的羰基團的羰基化合物。這種溶劑的例子包括丙酮、2-丁酮、3-戊酮、2，4-二甲基-3-戊酮、4-甲基-2-戊酮、3-甲基-2-丁酮、甲基乙酸酯、乙基乙酸酯、正丙基乙酸酯、異丙基乙酸酯、正丁基乙酸酯、叔丁基乙酸酯、異丁基乙酸酯、戊基乙酸酯、正戊基乙酸酯、正己基乙酸酯、環(huán)己基乙酸酯、正丙基丙酸酯、異丙基丙酸酯。這些羰基化合物通常在溶劑中單獨使用，但也可以將兩種或多種羰基化合物按一定比例混和使用?？蛇x擇的，多數(shù)羰基化合物可以預(yù)先混和來制備要使用的混合溶劑。
形成包合結(jié)晶體的液體介質(zhì)可以是單一的包合溶劑或者包合溶劑和在形成包合結(jié)晶體中不含有的一種溶劑按一定比例混和的混合體。例如，單一羰基化合物溶劑或一種由兩種或多種羰基化合物組成的溶劑混合物可以和其它溶劑按一定比例混和。所述其它溶劑可以是任何一種可以混和的溶劑，例如，醇類如甲醇、乙醇和異丙醇；酮類如丙酮、甲基乙基酮和甲基異丁基酮；腈類如乙腈和丙腈；醚類如二乙基醚、二異丙基醚、二氧雜環(huán)己烷、四氫呋喃(THF)；芳香烴類如苯、甲苯、異丙基苯、二甲苯、1，3，5-三甲基苯、二異丙基苯、三異丙基苯；脂肪烴類如戊烷、己烷、環(huán)己烷和石油醚；鹵代烴如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷和氯丁烷；吡啶類如吡啶、二甲基吡啶、喹啉；叔胺如三乙胺、三丁胺；和極性溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)，二甲基咪唑啉酮(DMI)、二甲基亞砜(DMSO)?；旌衔镏衅渌軇┱剪驶衔锟傊亓康陌俜直葍?yōu)選為100％，較優(yōu)選為20％，更優(yōu)選為10％。
此處使用“包含一種溶劑的包合結(jié)晶體”術(shù)語表示溶劑起著一種形成晶體結(jié)構(gòu)的輔助作用，以使結(jié)晶體以一定的形式形成，其中溶劑包含在晶格中，或者通過晶體和溶劑之間的弱的相互作用形成一種配合物。包合形式和晶體結(jié)構(gòu)并沒有特別的限定。
就在溶劑中(1)式的化合物量低于其保和溶解度而言，在結(jié)晶和再結(jié)晶中羰基化合物溶劑的量并沒有特別限定，但是溶劑的量是(1)式化合物總重量的5-150倍較為適宜，更佳為8-50倍。
對于結(jié)晶和再結(jié)晶的溫度并沒有特殊限定，但是最好在-10℃到溶劑或液體介質(zhì)的沸點范圍內(nèi)。一般來說，經(jīng)過一次再結(jié)晶進行提純就足夠了，但是，更高純度的提純要經(jīng)過重復(fù)再結(jié)晶來實現(xiàn)，對于再結(jié)晶的液體介質(zhì)最好是由單一包合的溶劑組成并且在結(jié)晶和再結(jié)晶中使用同一種單一溶劑為更好。
根據(jù)本發(fā)明的提純方法所獲得的包合化合物的優(yōu)選部分為上述(6)式所表示的化合物，其中，m和n表示任一整數(shù)，優(yōu)選的整數(shù)從1-5。
如上所述，本發(fā)明能夠進行有效地提純5’-保護胸腺嘧啶核苷。
在下述實施例中將對本發(fā)明詳細描述。但本發(fā)明并不意味著局限于將56g的二甲氧三苯甲基氯化物(0.165mol)加入攪拌的500ml含有40.0g的胸腺嘧啶核苷(0.165mol)的吡啶溶液中，然后將該混合物在室溫條件下攪拌3小時。將16.7g的碳酸氫鈉加入混合物中，所得的混合物在室溫下攪拌30分鐘并且在減壓環(huán)境下蒸發(fā)。將500ml的甲基異丁基酮(MIBK)加入剩余物中。將500ml的水加入攪拌混合物中并且攪拌10分鐘。然后，分離有機層并用500ml水沖洗。有機層在減壓環(huán)境下蒸發(fā)，剩余物從900ml的甲基異丁基酮中再結(jié)晶從而得到一種結(jié)晶狀產(chǎn)物，該產(chǎn)物通過過濾收集。結(jié)晶狀產(chǎn)物在50℃真空干燥達到恒重，從而得到67.3g的產(chǎn)物。NMR光譜顯示，每分子的結(jié)晶狀產(chǎn)物包含0.5分子的4-甲基-2-戊酮。DSC分析顯示在137℃有一個銳利的吸熱峰值(66.8J/G)，表明此該產(chǎn)物是結(jié)晶體。通過TG-DTA分析，經(jīng)干燥發(fā)現(xiàn)，所獲得的恒重的結(jié)晶體包含0.5分子4-甲基-2-戊酮，結(jié)晶體的重量直到溫度升高到吸熱反應(yīng)的溫度(122℃-132℃)，其重量才逐漸減小，這表明溶劑并不是粘附在結(jié)晶體上。通過帶有反相十八烷基化硅膠柱，使用乙腈和水的混和物(75/25)作為洗提液，使用一種UV探測器(254nm)的高性能色譜法(HPLC)分析，表明其純度為99.5％。最多的雜質(zhì)是3’，5’-O-雙(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷，所占HPLC峰值面積為0.3％，產(chǎn)出率為67％。
NMRδ(CDCl3)8.7(s，1H)，7.6(s，1H)，7.2-7.4(m，9H)，6.8(m，4H)，6.4(t，1H)，4.6(m，1H)，4.1(m，1H)，3.8(s，6H)，3.4(m，2H)，2.3-2.5(m，3H包括MIBK中的CH2)，2.1(m，1.5H包括MIBK中的COCH3)，1.7(m，0.5H包括MIBK中的CH)，1.5(s，3H)，0.9(d，3H包括MIBK中的CH3×2)(MIBK4-甲基-2-戊酮的簡寫)；IRcm-1(KBr)3136，1698，1608，1509，1259，1177，1098，1033，830。
將56g的二甲氧三苯甲基氯化物(0.165mol)加入攪拌的500ml含有40.0g的胸腺嘧啶核苷(0.165mol)的吡啶溶液中，然后將該混合物在室溫條件下攪拌3小時。將16.7g的碳酸氫鈉加入混合物中，所得的混合物在室溫下攪拌30分鐘并且在減壓環(huán)境下蒸發(fā)。將500ml的正丁基乙酸酯加入剩余物中。將500ml的水加入攪拌混合物中并且攪拌10分鐘。然后，分離有機層并用500ml水沖洗。有機層在減壓條件下蒸發(fā)。剩余物從900ml的正丁基乙酸酯中再結(jié)晶從而得到一種結(jié)晶狀產(chǎn)物，該產(chǎn)物通過過濾收集。結(jié)晶狀產(chǎn)物在50℃真空干燥達到恒重，從而得到74.6g的產(chǎn)物。通過帶有反相十八烷基化硅膠柱，使用乙腈和水的混和物(75/25)作為稀釋劑，使用一種UV探測器(254nm)的高性能色譜法(HPLC)分析，表明其純度為99.6％。最多的雜質(zhì)是3’，5’-O-雙(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷，所占HPLC峰值面積為0.3％，產(chǎn)出率為75％。
NMRδ(CDCl3)0.9(t，1.5H包括正丁基乙酸酯中的CH3)，1.4(m，1H包括正丁基乙酸酯中的CH2)，1.5(s，3H)，1.6(m，1H包括正丁基乙酸酯中的CH2)，2.0(s，1.5H包括正丁基乙酸酯中的CH3)，2.3(m，1H)，2.4(m，1H)，2.6(m，1H包括正丁基乙酸酯中的OCH2)，3.3(dd，1H)，3.4(dd，1H)，3.8(s，6H)，4.1(m，1H)，4.6(m，1H)，6.4(m，1H)，6.8(m，4H)，7.3(m，7H)，7.4(m，2H)，7.6(s，1H)，8.9(s，1H).參考例13’，5’-O-雙(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷的制備。
在實施例1中通過再結(jié)晶獲得的濾液濃縮，濃縮物通過柱色譜法(乙基乙酸酯/己烷)提純。提純的部分被濃縮得到一粉未，將該粉未分散到二異丙基醇中，由此形成的沉淀通過過濾和干燥回收，因此，獲得一種白色粉未狀標定化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.1(1H，s)，7.5-7.2(18H，m)，6.8(8H，m)，6.4(1H，m)，4.4(1H，m)，4.1(0.33H，m)，3.8(1H，m)，3.8(12H，s)，3.2(1H，m)，2.9(1H，m)，1.9(2H，m)，1.4(3H，m)，1.2(2H，d，J＝6Hz)。參考例25’-O-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)胸腺嘧啶核苷的制備。
將胸腺嘧啶核苷(15.0g)溶于200ml的DMF中。將8.16g的咪唑加到所得溶液中，然后加入10.8g的叔-丁基二甲基甲硅烷氯化物。進一步加入100mlDMF并且在室溫下攪拌溶液。兩小時后，用乙基乙酸酯進行萃取并且將有機層用飽和氯化鈉水溶液沖洗，并且用無水硫酸鎂干燥。萃取物濃縮之后，目標化合物通過柱色譜法(甲醇/氯仿)制得了包括目標化合物的分級溶液并將其濃縮從而得到了11.3g的標定化合物(產(chǎn)出率51％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.2(1H，br)，7.5(1H，s)，6.4(1H，dd，J＝5.6，8.4Hz)，4.5(1H，m)，4.1(1H，m)，3.9(1H，dd，J＝2.8，11.2Hz)，3.8(1H，dd，J＝2.4，11.2Hz)，2.9(1H，m)，2.4(1H，m)，2.1(1H，m)，1.9(3H，m)，0.9(9H，s)，0.1(6H，s)。參考例3
5’-O-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)-3’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷的制備。
將5’-O-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)胸腺嘧啶核苷(11.3g)溶于100ml的無水吡啶中。將4，4’-二甲氧三苯甲基氯化物(11.4g)加到所得溶液中，進一步加入140ml的無水吡啶，在60℃下攪拌。完全反應(yīng)后，用碳酸氫鈉將混和物中和并將吡啶蒸餾出去。用乙基乙酸酯進行萃取并且將萃取物用飽和氯化鈉水溶液沖洗，并且用無水硫酸鎂干燥。萃取物濃縮并用柱色譜法(乙基乙酸酯/己烷)提純，得到了14.9g的標定化合物(產(chǎn)出率71％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.2(1H，s)，7.8(1H，s)，7.5-7.3(9H，m)，6.8(4H，m)，6.4(1H，dd，J＝5.6，5.6Hz)，4.3(1H，m)，4.1(1H，m)，4.0(1H，m)，3.8(6H，s)，3.7(1H，dd，J＝1.6，11.2Hz)，3.3(1H，dd，J＝8.8，11.2Hz)，2.0(1.5H，m)，1.9(3H，s)，1.7-1.5(2H，m)，1.3(1.5H，m)，0.8(9H，s)，0.1(3H，s)，0.04(3H，s)。參考例43’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷的制備。
將5’-O-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)-3’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷(14.9g)溶于200ml的干燥THF中。將叔丁銨氟化物的THF溶液(25ml)加到所得溶液中，進一步加入100ml的干燥THF，在室溫下攪拌溶液。8小時后，用乙基乙酸酯濃縮并萃取，萃取物用飽和氯化鈉水溶液沖洗，并且用無水硫酸鎂干燥。然后萃取物通過柱色譜法(乙基乙酸酯/己烷)濃縮和提純。提純物分散到氯仿中，并在溶液中倒入己烷。沉淀物經(jīng)過濾回收和干燥，從而獲得了12.2g白色粉未狀標定化合物。(產(chǎn)出率98％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.7(1H，s)，7.7(1H，s)，7.5-7.2(9H，m)，6.8(4H，m)，6.1(1H，dd，J＝5.6，8.8Hz)，4.0(1H，m)，3.8(6H，s)，3.7(1H，m)，3.3(1H，m)，2.3(1H，m)，1.9(1H，m)，1.87(3H，s)，1.7(1H，m)。對比例1對于去除雜質(zhì)如3’-取代異構(gòu)體〔3’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷〕或3’，5’-多取代物〔3’，5’-O-雙(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷〕的能力，現(xiàn)對下述兩種提純方法做比較，一種是使用4-甲基-2-戊酮(MIBK)的再結(jié)晶方法，另一種是使用可溶性溶劑二氯甲烷和不可溶溶劑己烷進行再沉淀方法。另外，比較兩種方法中產(chǎn)物〔5’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷〕的回收并且將所獲得的結(jié)晶體進行熱分析(TG-DTA吸熱峰值，DSC吸熱峰值和吸熱能量)。
表1

(1)對比例1的HPLC條件(多取代形成物量的分析)柱Develosil TMS-UG-5，150mm×Φ4.6流動速率1.0mL/min柱溫度40℃探測波長254nm流動相梯度條件(見表2)表2
100mL的100mM三乙胺乙酸(PH7)/880mL的水/20mL的乙腈。[液體B]100mL的100mM三乙胺乙酸(PH7)/900mL的乙腈。
(2)對比例1的HPLC條件(3’-異構(gòu)體量的分析)柱Develosil TMS-UG-5，150mm×Φ4.6流動相乙腈-水(55∶45)流動速率1.0mL/min柱溫度40℃探測波長254nm(3)熱分析條件(TG-DTA)裝置SHIMADZU TG/DTA320(SII)溫度上升速率10℃/min氣體測溫法氮氣條件，200ml/min(4)示差掃描量熱法條件裝置DSC-7(Perkin Elmer)溫度上升速率10℃/min根據(jù)本發(fā)明，一種批量生產(chǎn)的方法能夠比傳統(tǒng)方法更有效地生產(chǎn)高純度的5’-保護胸腺嘧啶核苷。
權(quán)利要求
1.一種提純5’-保護胸腺嘧啶核苷的方法，其包括以下步驟獲得下式(1)表示的化合物， 其中R1表示任意的取代三苯甲基；R2表示氫或較小烷基；R3表示氫、鹵素或取代羥基，以包含一種溶劑的包合結(jié)晶體的形式，在液體介質(zhì)中包括該包合溶劑組成的；從液體介質(zhì)中收回包合結(jié)晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提純5’-保護胸腺嘧啶核苷的方法，其中，用于包合的溶劑是一種由(2)式表示的羰基化合物。 其中R4表示較小烷基；R5表示較小的烷基或較小的烷氧基；
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提純5’-保護胸腺嘧啶核苷的方法，其中羰基化合物為乙酸丁脂或4-甲基-2-戊酮。
4.根據(jù)權(quán)利要求1到3所述的任意一種提純方法，其中粗制備物包括(1)式的化合物和下面(3)式的化合物 其中R6表示氫或任意取代三苯甲基，R1、R2和R3和與上述表示相同；所述粗制備物溶于液體介質(zhì)中，經(jīng)過從液體介質(zhì)中回收(1)式化合物形成的包合結(jié)晶體，(3)式的化合物留在了液體介質(zhì)中。
5.一種根據(jù)權(quán)利要求1到4所述的任意一種提純方法，其中，(1)式的化合物是下面(4)式所表示的化合物
6.根據(jù)權(quán)利要求1到5所述的任意一種提純方法，其中，(1)式化合物的含有包合溶劑的包合結(jié)晶體從由包合溶劑組成的液體介質(zhì)中再結(jié)晶。
7.根據(jù)權(quán)利要求1到6所述的任意一種提純方法，其中，液體介質(zhì)是由單一包合溶劑組成。
8.一種由(5)式表示的包合化合物 其中m和n分別代表任意的整數(shù)，R1、R2、R3、R4和R5與上述表示相同；
9.一種由(6)式表示的包合化合物 其中R7表示正丁氧基或異丁基；m和n與上述表示相同。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種有效的提純5’－保護胸腺嘧啶核苷的方法,利用現(xiàn)有技術(shù)這種物質(zhì)的高效生產(chǎn)是困難的。為了獲得高純度的5’－保護胸腺嘧啶核苷,通過獲得一種包括含有羰基的溶劑的結(jié)晶體,雜質(zhì)可以被分離出去。本發(fā)明能夠很容易實現(xiàn)大量提純高純度的5’－保護胸腺嘧啶核苷,而利用現(xiàn)有技術(shù)不能形成工業(yè)規(guī)模。
文檔編號C07H19/06GK1385437SQ0211971
公開日2002年12月18日 申請日期2002年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月15日
發(fā)明者小松弘典, 河野敏之, 土屋克敏, 谷川廣晴, 石橋大樹 申請人:三井化學(xué)株式會社