專利名稱：蝎毒多肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制藥方法，尤其是蝎毒多肽的制備方法。
背景技術(shù)：
在傳統(tǒng)的中醫(yī)藥學(xué)中，全蝎有悠久的藥用歷史，近年來(lái)有關(guān)蝎毒的研究與應(yīng)用愈來(lái)愈受到人們的重視。研究認(rèn)為蝎毒素是全蝎藥理作用的主要成份，有較強(qiáng)的中樞鎮(zhèn)痛作用。目前有的已用于疾病的治療。中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?3109133、97120965和98101335公開的專利申請(qǐng)文件中，公開了蝎毒注射液，及其制取方法，有的采用多卡因藥物聯(lián)合配用蝎毒注射液有的采用不破壞蛋白質(zhì)晶體蝎毒配制注射液，其不足之處在于其蝎毒注射液中蝎毒原料均以蝎毒蛋白質(zhì)混合物存在，其質(zhì)量不夠穩(wěn)定，直接影響了使用效果；由于配制制劑的原料沒有具體定性、定量指標(biāo)，難于滿足國(guó)家對(duì)藥品原料質(zhì)量的要求。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)當(dāng)前蝎毒藥品中存在的不足，本發(fā)明的目的在于公開一種制備蝎毒多肽的方法，用該方法可以獲取較高純度的蝎毒多肽，以蝎毒多肽為主要原料可制取蝎毒多肽凍干粉制劑等。它是一種純度較高、活性較強(qiáng)、質(zhì)量可控、性能穩(wěn)定，療效確切的藥物。
本發(fā)明的制備方法步驟如下①裝柱用CM-Sephadex G-50層析填料裝柱；②平衡及洗脫用緩沖液平衡，再用緩沖液洗脫；③加樣將市售蝎毒樣品用緩沖液稀釋后上樣；④梯度洗脫用緩沖液和氯化鈉溶液進(jìn)行梯度洗脫；⑤洗脫液的收集與檢測(cè)；⑥合并收集液根據(jù)檢測(cè)結(jié)果合并收集液；⑦濃縮與脫鹽；⑧低溫保存；⑨全檢；⑩產(chǎn)品包裝，圖1為其生產(chǎn)工藝流程圖。
以上制備方法要求在無(wú)菌、恒溫(10℃)冷柜中進(jìn)行。
采用本方法制備的產(chǎn)品是一種無(wú)色至微黃色液體，其收率為20％-30％，其相對(duì)分子質(zhì)量在1000-10000個(gè)單位的蝎毒多肽，其純度高于90％。本制備方法工藝簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化生產(chǎn)，并能實(shí)現(xiàn)微機(jī)工作站控制質(zhì)量。


圖1為其生產(chǎn)工藝流程圖。
圖2為蝎毒多肽高壓液相色譜圖。
圖3為不同分子量蛋白質(zhì)和多肽的高壓液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
下面對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述取CM-Sephadex G-50層析柱，其柱長(zhǎng)為26×30cm。用10倍于柱體積的緩沖液沖洗平衡層析柱，待平衡好柱后上樣。將1g蝎毒樣品(淡黃色粉末)溶于10ml磷酸鹽緩沖溶液中，待柱床上的緩沖液基本吸附后，用滴管沿柱壁輕輕注入樣品(上樣)，用緩沖液稀釋余下的樣品，每次1-2ml，分兩次加入即可。然后將緩沖液旋轉(zhuǎn)式加入一段液柱，上蓋、收集，流速為5ml/1200秒。將100ml左右的緩沖液用完后，改為梯度洗脫。梯度洗脫20管前為平衡液洗脫；21管后加NaCL進(jìn)行梯度洗脫，攪拌瓶為400ml磷酸鹽緩沖溶液(10mM的磷酸鹽緩沖液，PH＝6.4)，儲(chǔ)存瓶為1MNaCL的磷酸鹽緩沖液400ml:3、直至收集150管為止。檢測(cè)以后，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果合并；合并65-82管，83-103管，在無(wú)菌、低溫下超濾，待紫外檢測(cè)確定濃度后，置密閉瓶中在-20℃以下低溫保存。
成品蝎毒多肽的質(zhì)量控制方法采用高效液相色譜法，具體條件為色譜柱日本東洋曹達(dá)公司TSK-125。
流動(dòng)相PH＝7.0的K2HPO4t和KH2PO4緩沖液加50ml異丙醇到1000ml。
流速1ml/min。
柱壓3Mpa柱測(cè)uv-280nm。
柱測(cè)結(jié)果樣品色譜圖見附圖2。
不同分子量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)圖譜見附圖3。
柱測(cè)結(jié)果表明本方法提取得到的蝎毒分子量在1000-10000之間。
權(quán)利要求
1.一種蝎毒多肽的制備方法，其特征在于它包括如下步驟①裝柱用CM-Sephadex G-50層析填料裝柱；②平衡及洗脫用緩沖液平衡，再用緩沖液洗脫；③加樣將市售蝎毒樣品用緩沖液稀釋后上樣；④梯度洗脫用緩沖液和氯化鈉溶液進(jìn)行梯度洗脫；⑤洗脫液的收集與檢測(cè)；⑥合并收集液根據(jù)檢測(cè)結(jié)果合并收集液；⑦濃縮與脫鹽；⑧低溫保存于密閉瓶中在-20℃以下低溫保存；⑨全檢；⑩產(chǎn)品包裝。
2.按照權(quán)利要求1所述蝎毒多肽的制備方法，其特征在于所述制備方法要求在無(wú)菌、恒溫(10℃)的冷柜中進(jìn)行。
全文摘要
一種蝎毒多肽的制備方法，涉及一種生物制藥方法，尤其是蝎毒多肽的制備方法，主要為生產(chǎn)蝎毒多肽提供一種新的方法，其制備方法包括裝柱、平衡及洗脫、加樣、梯度洗脫及全檢和產(chǎn)品包裝等步驟，由此種制備方法生產(chǎn)出來(lái)的蝎毒多肽為一種無(wú)色至微黃色液體，可用于生產(chǎn)蝎毒多肽凍干粉制劑，廣泛用于醫(yī)療行業(yè)。
文檔編號(hào)C07K1/00GK1417230SQ0214475
公開日2003年5月14日 申請(qǐng)日期2002年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月11日
發(fā)明者孟祥軍, 趙恩成, 張瑞德, 李娜然, 孟憲舒, 高文博, 顧孝先, 郝丕業(yè), 呂潔 申請(qǐng)人:趙恩成, 康力