專利名稱：用作腺苷受體配體的三唑并喹啉衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通式(I)的腺苷A3受體的配體，那些之中優(yōu)選拮抗劑，以及它們的鹽、溶劑化物和異構(gòu)體，含有它們的藥物組合物，通式(I)化合物以及它們的鹽、溶劑化物和異構(gòu)體的用途，通式(I)化合物以及它們的鹽、溶劑化物和異構(gòu)體的制備，還涉及新的通式(II)的中間體及其制備。
腺苷是眾所周知的一些內(nèi)源性分子(ATP、NAD+、核酸)的成分。此外，它還在很多生理過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。腺苷對心臟功能的作用早已于1929年發(fā)現(xiàn)。(Drury和Szentgyrgyi，J Physiol 68213，1929)。對腺苷介導(dǎo)的生理功能數(shù)增加的證實和新的腺苷受體亞型的發(fā)現(xiàn)為特定配體的治療性應(yīng)用提供了可能性(Poulse，S.A.和Quinn，R.J.Bioorganic and Medicinal Chemistry 6619，1998)。
迄今為止，腺苷受體分為3個主要的種類A1、A2和A3。A1亞型通過與Gi膜蛋白偶聯(lián)部分負(fù)責(zé)抑制腺苷酸環(huán)化酶，部分影響其它第二信使系統(tǒng)。A2受體亞型可再分為兩個亞型-A2a和A2b-，該受體可刺激腺苷酸環(huán)化酶的活性。近來，已經(jīng)從大鼠睪丸cDNA庫中鑒定了腺苷A3受體的序列。隨后，證實了它與新的、功能性腺苷受體相對應(yīng)。A3受體的激活還與若干第二信使系統(tǒng)有關(guān)例如抑制腺苷酸環(huán)化酶，并刺激磷脂酶C和D。
腺苷受體可在很多器官中找到，并調(diào)節(jié)它們的功能。A1和A2a受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)中起著重要的作用。在CNS中，腺苷可抑制突觸遞質(zhì)的釋放，其作用是由A1受體介導(dǎo)的。在心臟中，A1受體還可介導(dǎo)腺苷的減弱肌收縮力效應(yīng)、變時效應(yīng)和變傳導(dǎo)效應(yīng)。腺苷A2a受體以相對較高的含量位于紋狀體中，在調(diào)節(jié)突觸傳導(dǎo)方面，顯示與多巴胺受體的功能性相互作用。內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞上的A2a腺苷受體負(fù)責(zé)腺苷誘導(dǎo)的血管舒張。
以mRNA鑒定為基礎(chǔ)，A2b腺苷受體廣泛分布于不同的組織中。它們幾乎已經(jīng)在所有細(xì)胞類型中被鑒定，但它在腸和膀胱中的表達(dá)水平最高。這種亞型還很可能在血管緊張的調(diào)節(jié)方面具有重要的調(diào)節(jié)功能，并在肥大細(xì)胞的功能方面起作用。
與在蛋白水平檢測組織分布的A1和A2a受體相反，A2b和A3受體存在的檢測是以它們的mRNA水平為基礎(chǔ)的。與其它亞型相比，A3腺苷受體的表達(dá)水平較低，而且是高度物種依賴性的。A3腺苷受體主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、睪丸、免疫系統(tǒng)中表達(dá)，而且似乎涉及從肥大細(xì)胞釋放的介質(zhì)在即發(fā)型超敏反應(yīng)中的調(diào)節(jié)。
迄今為止在文獻(xiàn)中公開的A3拮抗劑為類黃酮、1，4-二氫吡啶衍生物、三唑并喹唑啉、噻唑并萘啶和噻唑并嘧啶。本發(fā)明涉及一種新的有效的A3拮抗劑類型，它具有三唑并喹啉結(jié)構(gòu)。
就治療用途而言，它基本確保該分子不結(jié)合，或僅僅在非常高的濃度下結(jié)合腺苷受體的A1、A2a和A2b亞型。我們的發(fā)明涉及通式(I)的化合物和它們的鹽、溶劑化物和異構(gòu)體，它對腺苷受體的A3亞型具有較高選擇性。
我們的目的首先是制備具有三唑并喹啉結(jié)構(gòu)的A3配體，且那些之內(nèi)優(yōu)選拮抗劑，它具有較強的拮抗作用，并對A3受體顯示較高的選擇性，即它們以明顯低于抑制A1、A2a和A2b受體的濃度抑制A3受體。另一目的是了解穩(wěn)定性、生物可利用率、治療指數(shù)和毒性數(shù)據(jù)，從而將所述新化合物開發(fā)成藥物，且由于它們良好的腸吸收，該化合物可用于口服。
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了通式(I)的化合物和它們的鹽、溶劑化物、及其旋光異構(gòu)體和鹽、溶劑化物滿足上述標(biāo)準(zhǔn)—其中R1代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R2代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R3代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或苯基、噻吩基、或呋喃基，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或鹵素原子取代，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5-或6-元雜芳環(huán)、或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環(huán)，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或鹵素原子取代；R4和R5彼此獨立地代表氫原子，或共同形成1，3-丁二烯基，任選用亞甲二氧基或一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基或鹵素原子取代；R6代表氫原子或氰基，氨羰基、C1-4烷氧羰基、或羧基；R7代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或C1-4亞烷基，任選被苯基取代，或代表苯基、芐基、噻吩基或呋喃基，任選被亞甲二氧基、或一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基、三氟甲基、氰基或鹵素原子取代，氨基，一或二烷氨基，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5或6元雜芳環(huán)，或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環(huán)，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或鹵素原子取代；X代表-CH2-、-NH-、-NR12-、或硫原子或氧原子或磺基或亞硫?；渲蠷12代表直鏈或支鏈C1-4烷基或C3-6環(huán)烷基；n代表0、1或2。
上面所列取代基的詳細(xì)含義如下直鏈或支鏈C1-4烷基是指甲基-、乙基-、丙基-、異丙基-、丁基-、異丁基-、仲丁基-、叔丁基-，優(yōu)選乙基-或甲基。
直鏈或支鏈C1-4烷氧基是指甲氧基-、乙氧基-、丙氧基-、異丙氧基-、丁氧基-、異丁氧基-、仲丁氧基-、叔丁氧基-，優(yōu)選乙氧基-或甲氧基。
含有1個或2個或3個氮原子的雜芳環(huán)是指吡咯、咪唑、吡唑、1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、吡啶、嘧啶、噠嗪、吡嗪和1，3，4-三嗪環(huán)。該環(huán)可任選被C1-4烷基取代。
含有1個氮原子和1個氧原子或硫原子的雜芳環(huán)是指噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑環(huán)。該環(huán)可任選被C1-4烷基取代。
通式(I)化合物的鹽是指用無機和有機酸和堿得到的鹽。優(yōu)選的鹽是用藥學(xué)上可接受的酸，如鹽酸、硫酸、乙磺酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、蘋果酸、檸檬酸得到的那些。
溶劑化物是指用各種溶劑，如用水或乙醇得到的溶劑化物。
通式(I)的化合物表現(xiàn)出立體異構(gòu)和旋光異構(gòu)現(xiàn)象，因此本發(fā)明還涉及立體異構(gòu)體的混合物、涉及外消旋或旋光立體異構(gòu)體，并涉及它們的鹽和溶劑化物。
通式(I)化合物的優(yōu)選組是由通式(Ia)的化合物和它們的鹽、溶劑化物、及其旋光異構(gòu)體和鹽、溶劑化物形成的，其中R1代表氫原子、或甲基；R2代表氫原子、或甲基；R3代表苯基、噻吩基或呋喃基；R8、R9、R10和R11彼此獨立地代表氫原子、直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基或鹵素原子，或R8和R11代表氫原子且R9和R10共同形成亞甲二氧基；R6代表氫原子、或氰基；R7代表4-甲氧苯基、3-甲基苯基、3-甲氧苯基、3-噻吩基、3-吡啶基、3-羥苯基或3-呋喃基；X代表-NH-或氧原子；且n代表1。
特別優(yōu)選的是符合上述條件的下列化合物和它們的鹽、溶劑化物、及其旋光異構(gòu)體和鹽、溶劑化物2-(4-甲氧苯基)-9-芐氨基-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉，2-(2-呋喃基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉，2-(3，4-亞甲二氧基苯基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉，2-(3-吡啶基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉，2-(3-羥苯基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉。
另一方面，本發(fā)明還涉及含有作為活性成分的通式(I)化合物或它們的異構(gòu)體、鹽和溶劑化物的藥物組合物，優(yōu)選口服的組合物，但可吸入的、腸胃外及透皮制劑也是本發(fā)明的主題。上述藥物組合物可以是固體或液體，如片劑、顆粒劑、膠囊劑、貼劑、溶液、混懸液或乳狀液。固體組合物，片劑和膠囊劑是首先優(yōu)選的藥物形式。
上述藥物組合物是利用標(biāo)準(zhǔn)方法通過使用常規(guī)的藥物賦形劑制備的。
通式(I)的化合物可用于治療A3受體在其發(fā)展中起作用的病變。
本發(fā)明的化合物對A3受體具有選擇活性，可用于治療和/或預(yù)防性治療心臟、腎、呼吸系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的官能障礙。它們可抑制腺苷對生長癌細(xì)胞的保護作用、防止肥大細(xì)胞脫粒、抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生、降低眼內(nèi)壓、抑制TNFα釋放、抑制嗜酸細(xì)胞、中性白細(xì)胞和其它免疫細(xì)胞遷移、抑制支氣管收縮和血漿外滲。
以這些作用為基礎(chǔ)，本發(fā)明的腺苷A3受體拮抗劑可治療性用作抗炎、止喘、抗局部缺血、抗抑郁、抗心律失常、腎臟保護、抗腫瘤、抗帕金森氏病和提高認(rèn)知的藥物。它們還可用于治療或預(yù)防心肌再灌注損傷、慢性梗阻性肺病(COPD)和成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)包括慢性支氣管炎、肺氣腫或呼吸困難、變態(tài)反應(yīng)(例如，鼻炎、毒葉藤誘導(dǎo)的反應(yīng)、蕁麻疹、硬皮病、關(guān)節(jié)炎)、其它自身免疫疾病、炎性腸疾病、阿狄森氏病、克羅恩氏病、牛皮癬、風(fēng)濕病、高血壓、神經(jīng)官能癥、青光眼和糖尿病(K.N.Klotz，Naunyn-Schmiedberg′s Arch.Pharmacol.362382，2000；P.G.Baraldi és P.A.Borea，TiPS 21456，2000)。
本發(fā)明的化合物優(yōu)選用于治療疾病，如哮喘、COPD和ARDS、青光眼、腫瘤、變應(yīng)性和炎性疾病、局部缺血、低氧癥、心律失常和腎病。
另一方面，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物在治療上述病變中的用途。根據(jù)疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及患者的性別、體重等，建議每日劑量為0.1-1000mg活性成分。
本發(fā)明的其它主題是通式(I)的化合物和通式(II)、(III)和(IV)的中間體的制備。
本發(fā)明制備過程中所用的通式(II)的中間體是新的。通式(II)、(III)和(IV)的取代基具有上面所限定的含義。
在本發(fā)明的方法中，使通式(II)的1，2-二氨基-azinium鹽與通式(VII)的化合物反應(yīng)，其中R7如上面所定義，且Y代表氫原子、鹵素原子或C1-4烷氧基，優(yōu)選與適宜的?；u或酯反應(yīng)(D.W.Robertson，J.Med.Chem.，28，717，(1985))，因此獲得通式(I)的化合物，如果需要，還可轉(zhuǎn)化成它的鹽、溶劑化物，或從其鹽、溶劑化物中釋放出來，并分離成它的立體異構(gòu)或旋光異構(gòu)體。
閉環(huán)可在二甲基甲酰胺中，在有三乙胺或作為相似類型閉環(huán)催化劑已知的其它化合物存在的條件下進行。
閉環(huán)可在較寬的溫度范圍，優(yōu)選20℃-150℃間進行。
利用已知方法可將通式(I)化合物的取代基相互轉(zhuǎn)換。
通式(II)的化合物—其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、X和n的含義是如上面所定義的—可通過若干已知方法獲得，這些方法的其中1個在流程1中表示，即利用有機化學(xué)已知的N-胺化方法對通式(III)的化合物進行N-胺化(E.E.Glover，R.T.Rowbotton，J.Chem.Soc.Perkin.Trans I.，376(1976)，G.Timári，Gy.Hajós，S.Bátori és A.Messmer，Chem.Ber.，125，929(1992))。就N-胺化劑而言，優(yōu)選使用O-甲苯磺?；?羥基胺，但也可使用已知進行N-胺化的其它試劑。
通式(III)的化合物—其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、X和n的含義是如上面所定義的—可通過本來已知的方法從通式(IV)的化合物制備(Nan Zhang，Bioorg.和Med.Chem.Lett.，10，2825(2000))。
通式(IV)的化合物—其中R4、R5、R6如上面所定義的—可通過本來已知的方法從通式(V)的化合物制備(D.L.Leysen，J.HeterocyclicChem.，24，1611，(1987))。
通式(V)的化合物—其中R4、R5、R6如上面所定義的—可通過本來已知的方法制備(Pfizer(Inc)USP 4,175,193)。
本發(fā)明通式(I)、(II)、(III)和(IV)的化合物，它們的制備和生物活性在下列實施例中給出，這些實施例不是對要求保護范圍的限制。


圖1表示式(I)的化合物，圖2表示式(Ia)的化合物，圖3表示式(II)的化合物，圖4表示式(III)的化合物，圖5表示式(IV)的化合物，圖6表示式(V)的化合物，圖7表示式(VI)的化合物，圖8表示式(VII)的化合物。
實施例實施例12-(4-甲氧苯基)-9-芐氨基-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉在通式(I)中，R1和R2代表氫原子，R3代表苯基，R4和R5共同形成1，3-丁二烯基，R6代表氰基，R7代表4-甲氧苯基，X的含義是-NH，n是1。
a.)2-氨基-3-氰基-4-氯喹啉攪拌下，110℃加熱10g 2-氨基-3-氰基-4-羥喹啉和15ml磷酰氯的混合物。將反應(yīng)混合物冷卻，傾注在100ml冰水上，并用60ml 10％氫氧化鈉溶液中和。濾出所得黃色沉淀物，用50ml水洗滌。干燥后，獲得7.5g標(biāo)題化合物，mp.210℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)7.21ppm，(s，2H，NH2)，7.35-7.40ppm，(dd，1H，6-H)，7.53-7.57ppm，(d，1H，5-H)，7.70-7.75ppm，(dd，1H，7-H)，7.93-7.98ppm，(d，1H，8-H)b.)2-氨基-3-氰基-4-芐氨基喹啉攪拌下，130℃加熱5g 2-氨基-3-氰基-4-氯喹啉和11ml芐胺的混合物。將反應(yīng)混合物傾注在50ml水上，濾出所得沉淀物，用50ml水洗滌。將淺黃色沉淀物自二甲基甲酰胺中重結(jié)晶出來，獲得5.2g的標(biāo)題化合物。Mp.206℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)5.02-5.03ppm(d，2H，N-CH2)，6.22ppm(s，2H，NH2)，7.14-7.16ppm(dd，1H，6-H)，7.24-7.26ppm(dd，1H，5-H)，7.30ppm(s，5H，Ph)，7.50-7.52ppm(dd，1H，7-H)，8.16-8.19ppm(d，1H，8-H)，8.30-8.33ppm(t，1H，NH)c.)1，2-二氨基-3-氰基-4-芐氨基-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽20℃下，在15分鐘內(nèi)，向2.0g 2-氨基-3-氰基-4-芐氨基喹啉溶于30ml二甲基甲酰胺的溶液滴加1.78g O-甲苯磺?；?羥胺溶于20ml二氯甲烷的溶液。攪拌反應(yīng)混合物5小時，然后濾出沉淀物。將所得白色晶體物質(zhì)自乙腈中重結(jié)晶出來，得到3.1g標(biāo)題化合物，mp.207℃。
d.)2-(4-甲氧苯基)-9-芐氨基-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉向2.0g 1，2-二氨基-3-氰基-4-芐氨基-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽和15ml吡啶的混合物中加入2g aniseacid-氯化物。100℃下攪拌反應(yīng)混合物8小時。將混合物傾注在50ml水上，濾出沉淀的晶體，并自乙腈重結(jié)晶，得到1.1g標(biāo)題化合物，Mp.237℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)8.78ppm(t，1H)，8.58(d，1H)，8.38(d，1H)，8.10(d，2H)，7.98(t，1H)，7.39(m，5H)，7.07(d，2H)，5.14(d，2H)，3.82(s，3H)實施例22-(2-呋喃基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉在通式(I)中，R1和R2是氫原子，R3是2-呋喃基，R4和R5共同形成1，3-丁二烯基，R6代表氰基，R7代表2-呋喃基，X是-NH-，n是1。
a.)2-氨基-3-氰基-4-(2-呋喃基甲氨基)-喹啉130℃攪拌下，加熱5g 2-氨基-3-氰基-4-氯喹啉和1ml呋喃基甲胺(糠胺)。將反應(yīng)混合物傾注在50ml水上，濾出所得沉淀物，用50m水洗滌。將淺黃色沉淀物自20ml乙醇中重結(jié)晶出來，獲得4.8g標(biāo)題化合物，Mp.208℃。
b.)1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-呋喃基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽20℃下，在15分鐘內(nèi)，向2.0g 2-氨基-3-氰基-4-(2-呋喃基甲氨基)-喹啉溶于30ml二甲基甲酰胺的溶液中滴加1.78g O-甲苯磺酰基-羥胺溶于20ml二氯甲烷的溶液。攪拌反應(yīng)混合物5小時，濾出沉淀的白色晶體物質(zhì)，并自乙腈重結(jié)晶，得到2.1g標(biāo)題化合物，mp.211℃。
c.)2-(2-呋喃基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉向2.0g 1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-呋喃基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽和15ml吡啶的混合物中加入2g呋喃-2-羧酸氯化物。100℃下攪拌反應(yīng)混合物8小時。將混合物傾注在50ml水上，濾出沉淀的晶體，并自乙腈重結(jié)晶，得到1.1g標(biāo)題化合物，Mp.203℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)8.74ppm(t，1H)，8.52(d，1H)，8.32(d，1H)，7.90(m，3H)，7.63(m，2H)，7.14(m，1H)，6.68(m，1H)，6.44(m，2H)，5.11(d，2H)實施例32-(3，4-亞甲二氧基苯基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉在通式(I)中，R1和R2是氫原子，R3是呋喃基，R4和R5共同形成1，3-丁二烯基，R6代表氰基，R7代表3，4-亞甲二氧基苯基，X是-NH-，n是1。
a.)2-(3，4-亞甲二氧基苯基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉向2.0g 1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-呋喃基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽和15ml吡啶的混合物中加入2g 3，4-亞甲二氧基-苯甲酸氯化物。100℃下攪拌反應(yīng)混合物8小時。將混合物傾注在50ml水上，濾出沉淀的晶體，并自乙腈重結(jié)晶，獲得1.4g標(biāo)題化合物，Mp.185℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)8.55ppm(m，1H)，8.51(d，1H)，8.31(d，1H)，7.93(t，1H)，7.57-7.70(m，3H)，7.05(d，1H)，6.44(m，2H)，6.11(s，2H)，5.08(d，2H)實施例42-(3-吡啶基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉在通式(I)中，R1和R2是氫原子，R3是2-噻吩基，R4和R5共同形成1，3-丁二烯基，R6代表氰基，R7代表3-吡啶基，X是-NH-，n是1。
a)2-氨基-3-氰基-4-(2-噻吩基甲氨基)喹啉130℃攪拌下，加熱5g 2-氨基-3-氰基-4-氯喹啉和11ml噻吩基甲胺。將反應(yīng)混合物傾注在50ml水上，濾出所得沉淀物，用50ml水洗滌。將淺黃色沉淀物自25ml乙醇中重結(jié)晶出來，獲得5.2g標(biāo)題化合物，Mp.208℃。
b.)1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-噻吩基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽20℃下，在15分鐘內(nèi)，向2.0g 2-氨基-3-氰基-4-(2-噻吩基甲氨基)-喹啉溶于30ml二甲基甲酰胺的溶液中滴加1.78g O-甲苯磺?；?羥胺溶于20ml二氯甲烷的溶液。攪拌反應(yīng)混合物5小時，濾出沉淀的白色晶體物質(zhì)，并自乙腈重結(jié)晶，得到2.1g標(biāo)題化合物，mp.198℃。
c.)2-(3-吡啶基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉向2.0g 1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-噻吩基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽和20ml二甲基甲酰胺的混合物中加入4ml三乙胺和4g吡啶-3-carboxaldehyde。100℃下攪拌反應(yīng)混合物8小時。將混合物傾注在50ml水上，濾出沉淀的晶體，并自乙腈重結(jié)晶，獲得0.8g標(biāo)題化合物，Mp.249℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)9.25ppm(s，1H)，8.71(m，2H)，8.35(m，3H)，7.86(m，1H)，7.51(m，3H)，7.17(m，1H)，6.98(m，1H)，5.25(d，2H)實施例52-(3-羥苯基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉在通式(I)中，R1和R2是氫原子，R3是2-噻吩基，R4和R5共同形成1，3-丁二烯基，R6代表氰基，R7代表3-羥苯基，X是-NH-，n是1。
a.)2-(3-羥苯基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉向2.0g 1，2-二氨基-3-氰基-4-(2-噻吩基甲氨基)-喹啉鎓-甲苯磺酸鹽和20ml二甲基甲酰胺的混合物中加入4ml三乙胺和4g 3-羥基-苯甲醛。100℃下攪拌反應(yīng)混合物8小時。將混合物傾注在50ml水上，濾出沉淀的晶體，并自乙腈重結(jié)晶，獲得0.9g標(biāo)題化合物，Mp.248℃。
NMR，δH(400MHz，DMSO-d6)9.66ppm(s，1H)，8.81(m，1H)，8.52(m，1H)，8.35(m，1H)，7.96(m，1H)，7.62(m，3H)，7.44(m，1H)，7.32(m，1H)，7.18(m，1H)，7.01(m，1H)，6.88(m，1H)，5.29(d，2H)利用實施例1中描述的方法制備的通式(I)其它化合物的結(jié)構(gòu)和物理性質(zhì)在表I中給出。
表I.





利用實施例1中描述的方法制備的通式(III)中間體的結(jié)構(gòu)和物理性質(zhì)在表(II)中給出。
表II

利用實施例1中描述的方法制備的通式(IV)中間體的結(jié)構(gòu)和物理性質(zhì)在表(III)中給出。
表III
實施例74下列組成的片劑是通過制藥工業(yè)所用的已知方法制備的。
活性成分25mg乳糖50mg微晶纖維素21mg聚乙烯吡咯烷酮3mg硬脂酸鎂1mg生物學(xué)方法人腺苷A3受體的結(jié)合制備膜混懸液通過用冰冷的PBS洗滌3次而收集表達(dá)hA3受體的CHO細(xì)胞，1000xg離心10分鐘，在緩沖液(50mM Tris、10mM MgCl2、1mM EDTA，pH8.0)中勻化15秒，43,000xg離心10分鐘(Sigma 3K30)，將膜制品懸浮于上述緩沖液中，-80℃貯存等分試樣。
結(jié)合方案在有0.5nM[125I]AB-MECA(對-氨基-苯甲基-甲基酰氨基-腺苷)(100.000cpm)和100μM R-PIA(N6-[L-2-苯基異丙基]腺苷)存在的條件下，室溫下在培養(yǎng)緩沖液(50mM Tris、10mM MgCl2、1mM EDTA、3U/mL腺苷脫氨酶，pH8.0)中培養(yǎng)CHO-hA3膜制品(2μg蛋白內(nèi)容物)1小時，從而測定非-特異性結(jié)合或供試化合物，總體積50μL。在WhatmanGF/B玻璃纖維濾膜(在0.5％聚氮丙啶中預(yù)浸泡3小時)上過濾，在96-孔Brandel細(xì)胞收集器上用1mL冰冷的50mM Tris、10mM MgCl2、1mMEDTA(pH 8.0)洗滌4次?；钚詸z測在γ-計數(shù)器中(1470 Wizard，Wallac)。抑制[％]＝100-((有供試化合物存在下的活性-非特異性活性)/(總活性-非特異性活性))*100人腺苷A1受體的結(jié)合制備膜混懸液通過用冰冷的PBS洗滌3次而收集表達(dá)hA1受體的CHO細(xì)胞，1000xg離心10分鐘，在緩沖液(50mM Tris，pH7.4)中勻化15秒，43,000xg離心10分鐘(Sigma 3K30)，將膜制品懸浮于上述緩沖液中，-80℃貯存等分試樣。
結(jié)合方案室溫下，在培養(yǎng)緩沖液(50mM Tris、3U/mL腺苷脫氨酶，pH7.4)、10nM[3H]CCPA(2-氯-N6-環(huán)戊基-腺苷)(80.000dpm)和10μMR-PIA(N6-[L-2-苯基異丙基]腺苷)中，培養(yǎng)CHO-hA1膜制品(50μg蛋白內(nèi)容物)3小時，從而測定非-特異性結(jié)合或供試化合物，總體積100μL。在Whatman GF/B玻璃纖維濾膜(在0.5％聚氮丙啶中預(yù)浸泡3小時)上過濾，在96-孔Brandel細(xì)胞收集器上用1mL冰冷的50mM Tris(pH7.4)洗滌4次?；钚詸z測在β-計數(shù)器(1450 Microbeta，Wallac)中、有HiSafe-3 coctail存在的條件下、在96孔平板中。抑制[％]＝100-((有供試化合物存在下的活性-非特異性活性)/(總活性-非特異性活性))*100人腺苷A2a受體的結(jié)合結(jié)合方案室溫下，培養(yǎng)7μg膜(轉(zhuǎn)染到HEK-293細(xì)胞中的人A2a腺苷受體，來源Receptor Biology，Inc.)、緩沖液(50mM Tris-HCl，10mMMgCl2，1mM EDTA，2U/mL腺苷脫氨酶，pH7.4)、20nM[3H]CGS-21680(2-[對(2-羰乙基)苯基乙氨基]-5’-N-乙酰氨基-腺苷)(200.000dpm)和50μM NECA(5’-N-乙酰氨基-腺苷)中90分鐘，從而測定非-特異性結(jié)合或供試化合物，總體積100μl。在Whatman GF/B玻璃纖維濾膜(在0.5％聚氮丙啶中預(yù)浸泡)上過濾，在96-孔Brandel細(xì)胞收集器上用1mL冰冷的50mM Tris、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.9％NaCl，pH7.4)洗滌4次?；钚詸z測在β-計數(shù)器(1450 Microbeta，Wallac)中、有HiSafe-3coctail存在的條件下、在96孔平板中。抑制[％]＝100-((有供試化合物存在下的活性-非特異性活性)/(總活性-非特異性活性))*100人腺苷A2b受體的結(jié)合結(jié)合方案室溫下，培養(yǎng)20.8μg膜(轉(zhuǎn)染到HEK-293細(xì)胞中的人A2b腺苷受體，來源Receptor Biology，Inc.)、緩沖液(50mM Tris-HCl、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.1mM芐脒、2U/mL腺苷脫氨酶，pH6.5)、32.4nM[3H]DPCPX(8-環(huán)戊基-1，3-二丙基黃嘌呤)(800.000dpm)和100μM NECA(5’-N-乙酰氨基-腺苷)中30分鐘，從而測定非-特異性結(jié)合或供試化合物，總體積100μl。在Whatman GF/C玻璃纖維濾膜(在0.5％聚氮丙啶中預(yù)浸泡)上過濾，在96-孔Brandel細(xì)胞收集器上用1mL冰冷的50mM Tris-HCl(pH6.5)洗滌4次。活性檢測在β-計數(shù)器(1450Microbeta，Wallac)中、有HiSafe-3 coctail存在的條件下、在96孔平板中。抑制[％]＝100-((有供試化合物存在下的活性-非特異性活性)/(總活性-非特異性活性))*100結(jié)果在我們的實驗條件和1μM濃度下，如果化合物能夠以高于80％的活性抑制放射性配體在人腺苷A3受體上的結(jié)合，則我們認(rèn)為該化合物是生物活性的化合物。
CHO-hA3膜制品上[125I]AB-MECA的解離常數(shù)(Kd)是在Scatchard分析的幫助下，利用同位素飽和研究測定的(G.Scatchard，Ann.N.Y.Acad.Sci.51660，1949)。通過使用Cheng-Prusoff方程可將IC50值轉(zhuǎn)化成親和性常數(shù)(Ki)(Y.J.Cheng和W.H.Prusoff，Biochem.Pharmacol.223099，1973)。
通式(I)、(I1)、(III)和(IV)的若干化合物顯示出顯著的生物作用。權(quán)利要求2中限定的通式(IA)化合物作為權(quán)利要求1中限定的通式(I)副組，發(fā)揮了最重要的活性。除9種化合物外，它們的Ki值均不高于20nM。實施例給出的化合物是特別優(yōu)選的。它們在人腺苷A3受體結(jié)合研究中的Ki值為3.5-0.78nM。最優(yōu)選化合物的Ki值為0.82和0.78nM。
這些化合物具有適當(dāng)?shù)纳锘盍Γθ讼佘誂1、A2a和A2b受體亞型具有至少1,000倍的選擇性。
此外，在靜脈內(nèi)和口服給藥時，它們作用的持續(xù)時間足夠長，它們的ED50值較低，它們的毒理學(xué)和副作用分布十分有利。
上述數(shù)據(jù)說明通式(I)的化合物可用于治療用途。
權(quán)利要求
1.通式(I)的化合物和它們的鹽、溶劑化物，及其旋光異構(gòu)體和鹽、溶劑化物-其中R1代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R2代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R3代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或苯基、噻吩基、或呋喃基，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或鹵素原子取代，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5-或6-元雜芳環(huán)、或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環(huán)，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或鹵素原子取代；R4和R5彼此獨立地代表氫原子，或共同形成1，3-丁二烯基，任選用亞甲二氧基或一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基或鹵素原子取代；R6代表氫原子或氰基，氨羰基、C1-4烷氧羰基、或羧基；R7代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或C1-4亞烷基，任選被苯基取代，或代表苯基、芐基、噻吩基或呋喃基，任選被亞甲二氧基、或一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基、三氟甲基、氰基或鹵素原子取代，氨基，一或二烷氨基，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5或6元雜芳環(huán)，或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環(huán)，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或鹵素原子取代；X代表-CH2-、-NH-、-NR12-、或硫原子或氧原子或磺基或亞硫?；?其中R12代表直鏈或支鏈C1-4烷基或C3-6環(huán)烷基；n代表0、1或2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通式(Ia)化合物和它們的鹽、溶劑化物，及其旋光異構(gòu)體和鹽、溶劑化物-其中R1代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R2代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基；R3代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或苯基、噻吩基、或呋喃基，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或鹵素原子取代，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5-或6-元雜芳環(huán)，或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環(huán)，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或鹵素原子取代；R8、R9、R10和R11彼此獨立地代表氫原子、直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基或鹵素原子；或R8和R11代表氫原子且R9和R10共同形成亞甲二氧基；R6代表氫原子或氰基、氨羰基、C1-4烷氧羰基、或羧基；R7代表氫原子或直鏈或支鏈C1-4烷基，或C1-4亞烷基，任選被苯基取代，或代表苯基、芐基、噻吩基或呋喃基，任選被亞甲二氧基、或一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基、三氟甲基、氰基或鹵素原子取代，氨基，一或二烷氨基，或代表含有1個、2個或3個氮原子的5或6元雜芳環(huán)，或含有1個氮原子和1個氧原子或1個氮原子和1個硫原子的5元雜芳環(huán)，任選被一個或多個直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、或鹵素原子取代；X代表-CH2-、-NH-、-NR12-、或硫原子或氧原子或磺基或亞硫?；?其中R12代表直鏈或支鏈C1-4烷基或C3-6環(huán)烷基；n代表0、1或2。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的通式(IA)化合物和它們的鹽、溶劑化物，及其旋光異構(gòu)體和鹽、溶劑化物-其中R1代表氫原子、或甲基；R2代表氫原子、或甲基；R3代表苯基或噻吩基或呋喃基；R8、R9、R10和R11彼此獨立地代表氫原子、直鏈或支鏈C1-4烷基、直鏈或支鏈C1-4烷氧基、羥基或鹵素原子，或R8和R11代表氫原子且R9和R10共同形成亞甲二氧基；R6代表氫原子、或氰基；R7代表4-甲氧苯基、3-甲基苯基、3-甲氧苯基、3-噻吩基、3-吡啶基、3-羥苯基或3-呋喃基；X代表-NH-或氧原子；且n代表1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的如下化合物和它們的鹽、溶劑化物，及其旋光異構(gòu)體和鹽、溶劑化物2-(4-甲氧苯基)-9-芐氨基-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉，2-(2-呋喃基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉，2-(3，4-亞甲二氧基苯基)-9-(2-呋喃基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉，2-(3-吡啶基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉，2-(3-羥苯基)-9-(2-噻吩基甲氨基)-10-氰基-s-三唑并[1，5-a]喹啉。
5.用于制備通式(I)的化合物和它的鹽、溶劑化物，及其旋光異構(gòu)體和鹽、溶劑化物的方法-其中通式中的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、X和n具有與權(quán)利要求1相同的含義，其特征在于使通式(VII)的化合物-其中R7具有與權(quán)利要求1相同的含義-與通式(II)的1，2-二氨基-吡啶鎓鹽閉環(huán)-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7具有與權(quán)利要求1相同的含義，且如果需要，通過本來已知的方法相互轉(zhuǎn)換如此獲得的通式(I)化合物的取代基，和/或?qū)⑷绱双@得的通式(I)化合物轉(zhuǎn)換成其鹽、或溶劑化物，或?qū)⑺鼜钠潲}或溶劑化物中釋放出來和/或?qū)⑺c其旋光異構(gòu)體形式分離開或?qū)⑿庑问睫D(zhuǎn)化成外消旋形式。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于在有三乙胺存在的條件下，在二甲基甲酰胺中進行通式(VII)化合物的閉環(huán)，其中Y代表氫原子。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于在吡啶中進行通式(VII)化合物的閉環(huán)，其中Y代表鹵素原子。
8.含有作為活性成分的一種或多種通式(I)化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權(quán)利要求1相同的含義-或它們的鹽、溶劑化物、或其旋光異構(gòu)體和鹽、溶劑化物，以及一種或多種制藥工業(yè)所用賦形劑的藥物組合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，它含有作為活性成分的一種或多種通式(Ia)化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權(quán)利要求2相同的含義-或它們的鹽、溶劑化物、或其旋光異構(gòu)體和鹽、溶劑化物，以及一種或多種制藥工業(yè)所用賦形劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，它含有作為活性成分的一種或多種權(quán)利要求4的化合物。
11.通式(I)的化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權(quán)利要求1相同的含義-用于治療受體A3在其發(fā)展中起作用的疾病的用途。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的通式(I)化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權(quán)利要求1相同的含義-作為A3配體在心臟、腎、呼吸器官和中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的情況下，用于抑制腺苷對生長腫瘤細(xì)胞的保護，防止肥大細(xì)胞脫粒，抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生，降低眼內(nèi)壓，抑制TNFα釋放，抑制嗜酸性細(xì)胞、中性白細(xì)胞和其它免疫細(xì)胞遷移，抑制支氣管收縮和血漿外滲的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求11和12所述、作為活性成分的通式(I)化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權(quán)利要求1相同的含義-作為A3受體拮抗劑，在抗炎、止喘、抗局部缺血、抗抑郁、抗心律失常、腎臟保護、抗腫瘤、抗帕金森氏病和提高認(rèn)知的藥物組合物和用于治療或預(yù)防心肌再灌注損傷、慢性梗阻性肺病(COPD)和成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)包括慢性支氣管炎、肺氣腫或呼吸困難、變態(tài)反應(yīng)(例如，鼻炎、毒葉藤誘導(dǎo)的反應(yīng)、蕁麻疹、硬皮病、關(guān)節(jié)炎)、其它自身免疫疾病、炎性腸疾病、阿狄森氏病、克羅恩氏病、牛皮癬、風(fēng)濕病、高血壓、神經(jīng)官能癥、青光眼和糖尿病的組合物中的用途。
14.根據(jù)權(quán)利要求11、12和13所述、作為活性成分的通式(I)化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X和n具有與權(quán)利要求1相同的含義-作為A3受體拮抗劑用于治療疾病如哮喘、COPD和ARDS、青光眼、腫瘤、變應(yīng)性和炎性疾病、局部缺血、低氧癥、心律失常和腎病的用途。
15.通式(II)的化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、X和n具有與權(quán)利要求1相同的含義。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)的腺苷A
文檔編號C07D471/04GK1606556SQ02825646
公開日2005年4月13日 申請日期2002年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月21日
發(fā)明者P·阿蘭伊, L·巴拉茲, S·巴托里, J·本斯, K·博爾, F·哈杰都, Z·卡普, E·米庫斯, T·薩伯, L·特納吉, G·蒂馬里, K·厄班－薩伯, E·瓦爾茨 申請人:薩諾費合成實驗室