專利名稱：具有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制作用的新型肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型肽和含有該肽的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑。所述血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑可以用作食用產(chǎn)品、飼料和藥物。
背景技術(shù)：
血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)是作用于血管緊張素I的一種酶，血管緊張素I是通過利用血管緊張肽原酶消化血管緊張素原生成的，并通過釋放其C-末端的兩個氨基酸將其轉(zhuǎn)化為血管緊張素II。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的作用不僅能產(chǎn)生具有強(qiáng)增血壓作用的血管緊張素II，還能使具有降血壓效果的緩激肽失活。由于這些作用，一直將血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑用作高血壓的治療劑，例如甲巰丙脯酸(Sankyo Co.，Ltd.生產(chǎn))和Renivase(Banyu Pharmaceutical Co.，Ltd.生產(chǎn))是已知的商購藥物。此外，還已知血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑具有使心肌肥大逆轉(zhuǎn)的作用。
另一方面，具有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制作用的肽存在于自然產(chǎn)物或動物蛋白如酪蛋白和明膠、植物蛋白如來自小麥、稻米和玉米的那些和魚蛋白如來自沙丁魚的那些的酶降解產(chǎn)物中。例如，已知存在于自然產(chǎn)物中的肽包括壬肽抗壓素(九肽，SQ20881)和屬于鏈霉菌屬的放線菌的代謝產(chǎn)物IS83(JP58-177920A)。此外，已知的酶降解產(chǎn)物包括通過利用胰蛋白酶分解酪蛋白獲得的肽(JP58-109425A、JP59-44323A、JP59-44324A、JP61-36226A和JP61-36227A)，通過利用嗜熱菌蛋白酶水解酪蛋白獲得的肽(JP6-277090A、JP6-277091A、JP6-279491A、JP7-101982A和JP7-101985A)，通過利用乳酸菌或蛋白酶和肽酶的組合水解酪蛋白等獲得的肽(JP6-197786A、JP6-40944A和JP2001-136995A，以下分別稱作“參考文獻(xiàn)1-3”)。參考文獻(xiàn)1-3的肽用作具有降血壓作用的特定健康用途食品。
在上述肽中，JP7-101982A(以下稱作“參考文獻(xiàn)4”)描述的肽表現(xiàn)出最高的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制活性并具有相當(dāng)簡單的三肽結(jié)構(gòu)。

發(fā)明內(nèi)容
如上所述，本領(lǐng)域內(nèi)已知多種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽。然而，在食品中那些肽對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制活性功能仍嫌不足。因此，需要得到一種從天然產(chǎn)物而來、對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶有更高抑制活性并具有簡單結(jié)構(gòu)的肽，以及將該肽應(yīng)用于食物產(chǎn)品、藥物等當(dāng)中。
為解決上述問題本發(fā)明人進(jìn)行了深入研究，結(jié)果，他們發(fā)現(xiàn)利用特異性酶水解酪蛋白，在水解產(chǎn)物中形成了對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶具有高抑制活性的新型肽，所述肽具有Met-Lys-Pro表征的序列，由此完成了本發(fā)明。
這就是說，本發(fā)明涉及由Met-Lys-Pro組成的肽(以下也稱作“本發(fā)明的肽”)。
進(jìn)而，本發(fā)明提供了包含由Met-Lys-Pro組成的肽作為有效成分的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑。
進(jìn)而，本發(fā)明提供了包含由Met-Lys-Pro組成的肽作為有效成分的降壓劑。
以下詳細(xì)描述本發(fā)明。
本發(fā)明的肽具有表征為Met-Lys-Pro的序列。此外，本發(fā)明的肽可以是該肽的鹽。在本發(fā)明中，Met表示L-蛋氨酸殘基，Lys表示L-賴氨酸殘基，Pro表示L-脯氨酸殘基。
本發(fā)明的肽可以通過利用適當(dāng)?shù)乃饷杆獾鞍踪|(zhì)如酪蛋白來制備。
以下，將例示利用水解酶水解蛋白質(zhì)的方法。
利用酶來水解蛋白質(zhì)，盡管處理方式因蛋白質(zhì)的性質(zhì)不同而變化，但總是將原料蛋白質(zhì)分散于冷水或熱水中，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)可溶時溶解于其中。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶解性差時，將其與熱水混合并在強(qiáng)力攪拌下使之勻化。
對蛋白質(zhì)沒有特定限制，只要其含有Met-Lys-Pro表征的序列并且在利用適當(dāng)?shù)乃饷赶瘯r能生成本發(fā)明的肽即可。因此，可以采用任何源自動物或細(xì)菌的蛋白質(zhì)。特別地，優(yōu)選蛋白質(zhì)是可以大量獲得的酪蛋白。
為防止由于細(xì)菌污染造成的變質(zhì)，需要將含有蛋白質(zhì)的溶液在70-90℃滅菌約15秒-10分鐘。
隨后，優(yōu)選通過向溶液中加入堿性試劑或酸性試劑將含蛋白質(zhì)的溶液的pH值調(diào)節(jié)至對所用水解酶最佳的pH或其近似pH。本發(fā)明的方法中所用的堿性或酸性試劑可以是食物產(chǎn)品或藥物中可接受的任何堿性或酸性試劑。堿性試劑的具體實(shí)例包括氫氧化鈉、氫氧化鉀和碳酸鉀，酸性試劑的實(shí)例包括鹽酸、檸檬酸、磷酸和乙酸。
接下來，向蛋白質(zhì)溶液中加入預(yù)定量的水解酶，在約10-85℃的溫度下進(jìn)行反應(yīng)0.1-48小時。
水解酶優(yōu)選為內(nèi)肽酶，但并非特別限于此，只要該水解酶能夠水解蛋白質(zhì)生成本發(fā)明的肽即可。所述內(nèi)肽酶包括源自芽孢桿菌的蛋白酶和源自動物胰臟的蛋白酶。那些酶可以商購獲得。優(yōu)選的源自芽孢桿菌的蛋白酶例如為Biopuraze sp-20(Nagase BiochemicalIndustry Inc.制造)和Protease N(Amano Enzyme Inc.制造)，優(yōu)選的源自動物胰臟的蛋白酶可例如為PTN6.0S(Novozymes Japan Ltd.制造)。源自芽孢桿菌的蛋白酶需要以100-5000活性單位/1克蛋白質(zhì)的比率加入。另一方面，源自動物胰臟的蛋白酶需要以3000-8000活性單位/1克蛋白質(zhì)的比率加入。
本發(fā)明中所用的水解酶可以是一種水解酶或者兩或多種水解酶的組合。當(dāng)使用兩或多種水解酶時，可以同時或獨(dú)立地進(jìn)行它們的酶反應(yīng)。在本發(fā)明中，特別優(yōu)選采用Biopuraze sp-20、Protease N和PTN6.0S的混合物。
加入酶的溶液的溫度根據(jù)酶的種類而保持在適當(dāng)?shù)臏囟?，例?0-60℃，優(yōu)選45-55℃以引起蛋白質(zhì)的水解。關(guān)于水解的反應(yīng)時間，在監(jiān)控反應(yīng)的分解率的情況下，將反應(yīng)持續(xù)至達(dá)到優(yōu)選的分解率。為獲得本發(fā)明的肽，需要分解率為20-30％。
就計(jì)算蛋白質(zhì)分解率的方法而言，用凱氏法測定樣品的總含氮量(The Japanese Society for Food Science and Technology，Ed.，“Food Analysis Method”，第102頁，KORIN PublishingCo.，Ltd.，1984)，并用甲醛滴定法測定樣品的甲醛氮含量(Manda等，Ed.，“Laboratory Manuals of Food Engineering”，第一卷，第547頁，Yokendo Co.，Ltd.，1970)，接下來利用那些測量值采用下面的方程計(jì)算分解率。
分解率(％)＝(甲醛氮含量/總含氮量)×100通過例如使水解溶液中的酶失活來終止酶反應(yīng)?？梢酝ㄟ^采用通用方法的熱失活來進(jìn)行?？紤]到所用酶的熱穩(wěn)定性，可以就熱失活作用的加熱溫度和保持時間來適當(dāng)?shù)卮_定充分失活的條件。例如，可以在80-130℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行30分-2秒的保持時間。
優(yōu)選將本發(fā)明的肽從上述的水解溶液中分離出來并提純。肽的提純通常以與提純寡肽相同的技術(shù)來進(jìn)行，例如，通過適當(dāng)?shù)貙⒁韵陆M合起來各種層析法包括離子交換層析、吸收層析、反相層析、分配層析和凝膠過濾層析，溶劑沉淀，鹽析提取，以及在兩個液相之間進(jìn)行分配等。在提純本發(fā)明的肽的時候，可以根據(jù)下述的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制作用來確定含有目標(biāo)物質(zhì)的部分?？梢酝ㄟ^質(zhì)譜法來鑒別那些部分中的活性成分。
而且，也可以通過化學(xué)合成來制備本發(fā)明的肽?？梢酝ㄟ^通常用于寡肽合成的液相法或固相法來進(jìn)行本發(fā)明的肽的化學(xué)合成。根據(jù)需要，對合成的肽進(jìn)行去保護(hù)，然后除去未反應(yīng)試劑、副產(chǎn)物等?？梢圆捎每缮藤彽碾暮铣善鱽磉M(jìn)行這些肽的合成?？梢愿鶕?jù)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制作用來確認(rèn)目標(biāo)肽的生成。
本發(fā)明的肽可以用作血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的有效成分。本發(fā)明的肽對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶具有抑制作用并對緩激肽的失活具有抑制作用并顯示出降血壓作用。因此，可以將其用作源于高血壓的各種疾病的預(yù)防劑或治療劑，如腦出血、腦梗塞、心絞痛、心肌梗塞形成和腎機(jī)能不全，更具體而言，可以將其用作降血壓劑等。此外，已知血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑還對原因尚不清楚的instinct高血壓有效，這樣，還可以預(yù)期本發(fā)明的肽顯示出對instinct高血壓的治療或預(yù)防作用。此外，可以將其用作其它疾病的治療或預(yù)防藥物，如心肌肥大和絞痛疾病，對這些疾病，認(rèn)為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑是有效的。
本發(fā)明的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑可以口服給藥或者腸胃外給藥，但優(yōu)選口服給藥。腸胃外給藥包括靜脈內(nèi)注射、直腸內(nèi)給藥和吸入法?？诜o藥的藥物形式包括片劑形式、膠囊形式、錠劑形式、糖漿形式、顆粒形式、粉末形式和軟膏形式。就藥物制劑而言，除乳清蛋白水解產(chǎn)物以外，可以采用其它成分如賦形劑、pH調(diào)節(jié)劑、著色劑和藥物用香料，這些都是常用于常規(guī)藥物配方中的。而且，還可以與本領(lǐng)域已知的或?qū)戆l(fā)現(xiàn)具有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制作用的藥物一起使用。
可以將本發(fā)明的肽作為有效成分包含于食物產(chǎn)品中，并且作為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的一種實(shí)施方案，加工成具有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制作用的食物產(chǎn)品。不論形式為液體、膏體、固體和粉末等，這些食物產(chǎn)品包括除糖果，流食和飼料(包括用于寵物的那些)以外，小麥粉產(chǎn)品如面包、通心粉、細(xì)條實(shí)心面、面條，面包混和料、法式炸薯?xiàng)l混和料和面包屑；方便食品如方便面、碗面、蒸煮包裝食品、預(yù)制食品、罐裝食品、微波爐食品、速食湯或燉制品、速食日本醬湯或日本清湯、罐裝湯、凍干食品和其它方便食品；農(nóng)業(yè)加工產(chǎn)品如罐裝農(nóng)產(chǎn)品、罐裝水果、果醬或柑桔果醬、腌制食品、煮豆、農(nóng)業(yè)干食品，和谷物(谷物加工產(chǎn)品)；加工海產(chǎn)品如罐裝海產(chǎn)品、魚火腿或香腸，魚醬、海產(chǎn)品珍品和佃煮；畜牧業(yè)加工產(chǎn)品如罐裝畜牧業(yè)產(chǎn)品、醬和牲畜肉火腿或香腸；奶和奶制品如加工奶、奶飲料、酸奶、乳酸菌飲料、奶酪、冰淇淋、改制奶粉、奶油和其它奶制品；脂肪和脂肪油如黃油、人造黃油和植物油；主調(diào)味品如大豆醬、日本豆瓣醬、沙司、土豆加工調(diào)味品、烹調(diào)用甜米酒和醋；混合調(diào)味品和食物如烹調(diào)混和料、咖喱預(yù)混和料、鹵汁、色拉調(diào)料、面條湯料、香辛料和其它混合調(diào)味品；冷凍食品如材料冷凍食品、半制冷凍食品和冷凍烹調(diào)食品；糖食如糖油、糖果、口香糖、巧克力、曲奇餅、餅干、蛋糕餡餅、小吃、脆餅干、日式甜食、米餅、豆類甜品、甜食和其它糖食；帶味飲料如碳酸飲料、天然果汁、果汁飲料、含果汁的軟飲料、果肉飲料、含有漿果的果汁飲料、蔬菜飲料、豆奶，豆奶飲料、咖啡飲料、茶飲料、飲料粉、濃縮飲料、運(yùn)動飲料、營養(yǎng)飲料和酒類飲料以及其它帶味飲料；以及其它市售的食物產(chǎn)品如嬰兒食品、魚粉和帶茶paste的白米飯。
在本發(fā)明的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑中，本發(fā)明的肽的含量優(yōu)選至少為0.001％重量，相對于該血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的最終組成計(jì)。
本發(fā)明的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的劑量因年齡、癥狀等變化。通常，以0.001-3000毫克/天的劑量服用該抑制劑，優(yōu)選0.01-30毫克/天，而且，可以每天服用一次或者二或三次。


圖1示范了本發(fā)明的肽的MS/MS分析結(jié)果。
具體實(shí)施例方式
接下來，利用實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。
實(shí)施例1通過酪蛋白的酶降解制備肽<1>酪蛋白的酶降解向100克商購的酪蛋白(New Zealand Dairy Board制造)中加入900克水并使酪蛋白在其中良好地分散。然后，加入氫氧化鈉將得到的溶液的pH調(diào)至7.0使酪蛋白完全溶解，由此，制備了濃度為約10％的酪蛋白水溶液。將所述酪蛋白水溶液在85℃熱滅菌10分鐘，然后將溫度調(diào)至50℃，接下來加入氫氧化鈉將pH調(diào)至9.5。之后向溶液中加入100,800活性單位(1,200活性單位/1克蛋白質(zhì))的Biopurazesp-20(Nagase Biochemical Industry Inc.制造)、168,000活性單位(2,000活性單位/1克蛋白質(zhì))的Protease N(Amano Enzyme Inc.制造)和588,000活性單位(7,000活性單位/1克蛋白質(zhì))的PTN6.0S(Novozymes Japan Ltd.制造)以開始水解反應(yīng)。當(dāng)酪蛋白的分解率達(dá)到24.1％時，在80℃加熱6分鐘使酶失活以終止該酶反應(yīng)，接下來冷卻至10℃。用分級分子量為3,000的超濾膜(Asahi KaseiCorporation制造)超過濾該水解溶液，然后將其濃縮并接下來進(jìn)行冷凍干燥，獲得85克凍干產(chǎn)物。
(2)通過HPLC分離肽通過反相HPLC分離酪蛋白水解產(chǎn)物。HPLC的條件描述在下面所述的HPLC條件1中。
柱CAPCELL PAK C18(UG120，5μm)20mmI.D.×250mm(Shiseido Co.，Ltd.)檢測UV 215nm流速16ml/min洗脫液A含有0.05％TFA的1％乙腈水溶液洗脫液B含有0.05％TFA的25％乙腈水溶液在從100％洗脫液A到100％洗脫液B的線性梯度條件下40分鐘后，水解產(chǎn)物得到了分離。對于每個洗脫級分，用后面描述的方法測定其血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制能力。結(jié)果是在保留時間為22分鐘時，具有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制能力的肽被洗脫出來。為了提純肽，將其用HPLC進(jìn)一步提純。其條件示于下面的HPLC條件2中。
柱CAPCELL PAK C18(UG300，5μm)2.0mmI.D.×250mm(Shiseido Co.，Ltd.)檢測UV 215nm流速0.2ml/min洗脫液A含有0.05％TFA的1％乙腈水溶液洗脫液B含有0.05％TFA的10％乙腈水溶液在從100％洗脫液A至100％洗脫液B的線性梯度條件下15分鐘后，在保留時間為13分鐘的峰處觀測到強(qiáng)的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制能力。在該峰處血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶抑制能力使IC50[抑制50％的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性所需要的濃度(μg/ml)]＝0.18μg/ml。
用Applied Biosytems Ltd.的蛋白質(zhì)序列儀(473A型)鑒定上述活性峰值處的化合物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該化合物具有新型的Met-Lys-Pro結(jié)構(gòu)。而且，采用Thermoquest Co.，Ltd.的質(zhì)譜儀LCQ鑒定分子量(M)為374.2，通過MS/MS分析法檢測到m/z＝260,215和129等的子離子，m/z＝375.2(MH+)的母離子，如圖1所示。
結(jié)果，闡明具有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制能力的肽的結(jié)構(gòu)為H-Met-Lys-Pro-OH。在凍干產(chǎn)物(85克)中含有42.5mg三肽Met-Lys-Pro。
實(shí)施例2肽的化學(xué)合成通過固相合成方法，采用肽合成器(Model 433A，AppliedBiosystems Ltd.)并采用Fmoc-L-Met(Applied Biosystems Ltd.)、Fmoc-Lys(Boc)(Applied Biosystems Ltd.)和Fmoc-Pro-TrtA-PEGResin(Watanabe Kagaku Kogyo K.K.)作為原料，合成了三肽Met-Lys-Pro。按照Applied Biosystems Ltd.的手冊進(jìn)行操作，接下來進(jìn)行去保護(hù)。在上述的HPLC條件1下提純肽。采用該材料測量血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制能力，結(jié)果獲得了與實(shí)施例1中從酪蛋白降解產(chǎn)物提取得到的幾乎相同的值(IC50＝0.19μg/ml)。
通過質(zhì)譜法測定得到的三肽的分子量(M)為374.2。通過MS/MS分析獲得幾乎與圖1相同的光譜，母離子為mz＝375.2(MH+)。
實(shí)施例3肽的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制作用按照Cushman等人的方法[Biochemical Pharmacology，第20卷，第1637-1648頁(1971)]實(shí)施血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制作用的測量。
采用實(shí)施例1和實(shí)施例2中獲得的肽(Met-Lys-Pro)、描述于參考文獻(xiàn)1-3中的肽(Val-Pro-Pro、Ile-Pro-Pro)和描述于參考文獻(xiàn)4中的肽(Leu-Leu-Trp)作為樣品。那些肽中的每一個都是按與實(shí)施例2相同的方式化學(xué)合成的。
將樣品溶解于0.1M的硼酸鹽緩沖液(含有0.3M NaCl，pH8.3)中，然后將其中的0.08ml加入試管中。之后，加入用0.1M硼酸鹽緩沖液(含有0.3M NaCl，pH8.3)調(diào)節(jié)至5mM的0.2ml酶底物(馬尿酰-組氨酰-亮氨酸，Sigma Co.，Ltd制造)，然后在37℃培育3分鐘。然后，加入通過加入蒸餾水調(diào)至0.1U/ml的0.02ml兔肺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Sigma Co.，Ltd.制造)，然后在37℃反應(yīng)30分鐘。
接下來，加入0.25ml 1N的鹽酸來終止反應(yīng)。然后，加入1.7ml的乙酸乙酯并強(qiáng)力攪拌混合物20秒，在3000rpm實(shí)施離心操作10分鐘，接下來收集1.4ml乙酸乙酯層。通過加熱得到的乙酸乙酯層除去溶劑后，加入1.0ml蒸餾水并測量提取的馬尿酸的吸收(228nm的吸光度)并定義為酶活性。
由下面的方程計(jì)算出抑制活性，然后定義IC50[抑制50％的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性所需的濃度(μg/ml或μM)]。結(jié)果示于表1中。
抑制率＝(A-B)/(A-C)×100％A不含樣品(肽)情況下的酶活性(228nm吸光度)。
B加入樣品時的酶活性(228nm吸光度)。
C不加入酶和樣品時的酶活性(228nm吸光度)。
表1

實(shí)施例4肽對動物的降血壓作用<1>試驗(yàn)方法將12只10周齡的雄性SHR/Hos大鼠(從Japan SLC，Inc.購得)預(yù)先喂養(yǎng)一周，然后采用小動物用無損傷性自動血壓計(jì)(MK-2000，Muromachi Kikai Co.，Ltd.制造)測量大鼠的血壓。
根據(jù)收縮血壓將大鼠分成各自包括6只動物的兩組，這樣在服藥前每組的平均收縮血壓應(yīng)為幾乎相同的值。之后，使大鼠禁食約16小時。對于測試組，將實(shí)施例1中部分<1>獲得的酪蛋白酶降解產(chǎn)物溶于注射用水中，然后以10ml/kg體重的比率經(jīng)口給藥(酪蛋白酶降解產(chǎn)物為100mg/kg體重，本發(fā)明的肽(Met-Lys-Pro)為0.05mg/kg體重)。服藥后2小時測量大鼠的血壓。對于對照組，將相同體積的注射用水代替含酪蛋白酶降解產(chǎn)物的水溶液經(jīng)口給藥。服藥后2小時測量大鼠的血壓。
<2>測試結(jié)果結(jié)果示于表2中。從表2明顯看出，在測試組中觀測到了血壓下降。另一方面，在對照組中未觀測到這一結(jié)果。因此，發(fā)現(xiàn)含有本發(fā)明的肽(Met-Lys-Pro)的酪蛋白酶降解產(chǎn)物對動物具有降血壓作用。
表2

實(shí)施例5肽對人的降血壓作用<1>測試方法九名被實(shí)驗(yàn)者為30歲至低于58歲的男性志愿者，在開始攝取前的3周的篩選試驗(yàn)(通過醫(yī)生醫(yī)學(xué)檢查)時患有收縮血壓為140-165mmHg的輕度高血壓，而且他們沒有接受任何降壓劑的治療。
將被實(shí)驗(yàn)者分為5名被實(shí)驗(yàn)者的測試樣品攝取組和4名被實(shí)驗(yàn)者的對照組，這樣在篩選試驗(yàn)時測量的血壓值、吸煙習(xí)慣和年齡在組間應(yīng)是均等的。
作為測試樣品，每日攝取一次3克的實(shí)施例1中部分<1>獲得的酪蛋白酶降解產(chǎn)物(含有1.5mg本發(fā)明的肽(Met-Lys-Pro))，作為對照，每天攝取一次3克糊精。在幾乎相同的時間進(jìn)行血壓的測量(0-第三周)。
得到的數(shù)值(收縮血壓)示于表3和表4中。
采用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS(SPSS Inc.制造)以5％的顯著性水平，通過單向變差分析法(參見，例如Kiyoshi Ichihara，“Statistics forBioscience”，F(xiàn)ifth Issue，Nankodo Co.，Ltd.，November 20，1991，第150-151頁)就其顯著性差異對得到的數(shù)值(收縮血壓)進(jìn)行分析。當(dāng)數(shù)值中存在顯著性差異時，通過Dunnett多重比較法(參見，例如Kei Takeuchi及其他13人編，“Statistics Dictionary”，ToyoKeizai Inc.，December 4，1989，第399頁)比較平均值。
表3測試樣品攝取組的結(jié)果(收縮血壓單位mmHg)No. 服藥前 第一周 第二周 第三周(0周)1162 150 1491452163 160 1521603157 153 1361424145 137 1471375145 133 139127表4對照組結(jié)果(收縮血壓單位mmHg)No. 服藥前 第一周 第二周 第三周(0周)1150 145 1391442153 145 1361563149 137 1341354146 143 148137<2>測試結(jié)果作為統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS的分析結(jié)果，發(fā)現(xiàn)對照組在與服藥前(0周)相比時，服藥后第一、第二和第三周全無顯著性差異，而在測試樣品攝取組，獲得的結(jié)果是在服藥后第二和第三周存在顯著性差異。因此，證實(shí)含有本發(fā)明的肽(Met-Lys-Pro)的酪蛋白酶降解產(chǎn)物對人具有降血壓作用。
工業(yè)實(shí)用性根據(jù)本發(fā)明，提供了一種可用作血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的新型肽。本發(fā)明的肽源自天然產(chǎn)物并顯示出低毒性和高安全性。因此，本發(fā)明的肽也可以作為活性成分包含在食品中，而且，作為降壓劑的實(shí)施方案，加工成具有降血壓作用的食物產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.由Met-Lys-Pro組成的肽。
2.包含由Met-Lys-Pro組成的肽作為有效成分的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑。
3.包含由Met-Lys-Pro組成的肽作為有效成分的降壓劑。
全文摘要
將通過化學(xué)合成或酪蛋白水解獲得的肽Met－Lys－Pro用作血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑或降壓藥物的活性成分。
文檔編號C07K5/083GK1612892SQ0282702
公開日2005年5月4日 申請日期2002年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月21日
發(fā)明者田村吉隆, 宮川博, 山田明男, 齋藤仁志, 川口靖, 越智浩, 井出朋子, 井上惠梨 申請人:森永乳業(yè)株式會社