專利名稱：用ⅲ類抗cea單克隆抗體和治療劑進行聯(lián)合治療的制作方法
背景技術(shù)：
A.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及治療表達癌胚抗原(“CEA“)的癌癥，特別是甲狀腺髓樣癌(MTC)、非甲狀腺髓樣癌(non-MTC)、結(jié)腸直腸癌、肝細(xì)胞癌、胃癌、肺癌、乳癌和其它表達CEA的癌癥的方法，其中所述治療是通過給予一種包含一種與至少一種其它治療劑組合的抗體的免疫試劑，所述的其它治療劑如化學(xué)治療劑、放射劑、免疫調(diào)節(jié)物、免疫偶聯(lián)物或其組合。本發(fā)明進一步涉及包含免疫試劑和至少一種以非偶聯(lián)形式存在的治療劑的藥物組合物。特別地，本發(fā)明涉及通過在給予治療劑之前、同時或之后給予III類抗癌胚抗原(抗“CEA”)單克隆抗體(“MAb”)，特別是具有結(jié)合親和性特性和相應(yīng)的鼠III類抗-CEA MAb的特異性的MAb，更加特別地是具有多種人抗體的抗原性和效應(yīng)物特性的人源化的、嵌合的或人的MAbs，來治療表達CEA的癌癥的方法。在治療的方法中特別有用的MAbs是人源化的MAbs，其中將抗CEA的鼠MAb的互補決定區(qū)(“CDRs”)嫁接入人抗體的構(gòu)架區(qū)。
B.背景CEA是一種通常在許多種上皮癌癥中表達的癌胚抗原，所述上皮癌癥是那些大多數(shù)出現(xiàn)在結(jié)腸還有在乳房、肺、胰、甲狀腺(髓型)和卵巢中的癌癥(Goldenberg等，J Natl.CancerInst.5711-22(1976)，Shively，等，Crit.Rev.Oncol.Hematol.2355-399(1985))。一開始CEA被認(rèn)為是結(jié)腸直腸癌的腫瘤特異性抗原(Gold等，J Exper.Med.，122467(1965))。但是，后來發(fā)現(xiàn)它存在于多種癌、良性腫瘤和病理組織中，以及正常的人結(jié)腸中(Shively等，Crit.Rev.Oncol.Hemato.，2355(1985)；von Kleist等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，692492(1972))。CEA已經(jīng)顯示通過同型和異型相互作用調(diào)節(jié)細(xì)胞-細(xì)胞吸附，這接著提示了CEA在腫瘤發(fā)生的各個方面的作用。
限于甲狀腺的甲狀腺髓樣癌(MTC)是可以通過甲狀腺全部切除和中樞淋巴節(jié)解剖而冶愈的。但是，病癥在這些病人的大約50％中復(fù)發(fā)。此外，患有不可切除的疾病或遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的病人的預(yù)后很糟，小于30％的病人存活10年(Rossi等，Amer.J Surgery，139554(1980)；Samaan等，J Clin.Endocrinol.Metab.，67801(1988)；Schroder等，Cancer，61806(1988)。這些病人剩下不多的治療機會(Principles and Practice of Oncology，DeVita，Hellman和Rosenberg(編輯)，紐約JB Lippincott Co.1333-1435(1989)；Cance等，Current Problems Surgery，221(1985))?；焹r值不大而放療僅可用于控制局部疾病(Cance等；Tubiana等，Cancer，552062(1985))。因而，需要新的治療形式以控制這種疾病。
一種對癌癥治療和診斷有用的方法包括利用靶向抗體直接向腫瘤位點遞送治療劑和診斷劑。在過去的十年中，已經(jīng)發(fā)展了許多腫瘤特異性抗體和抗體片段，以及將抗體偶聯(lián)結(jié)合到如藥物的治療劑、毒素、放射性核素、如細(xì)胞因子的免疫調(diào)節(jié)劑和其它藥劑上，并且將靶向腫瘤的偶聯(lián)物對病人給藥的方法。但是，用復(fù)合以鼠單克隆抗體(它是最常用的對于人的靶向抗體)的藥物或放射性核素治療的病人產(chǎn)生循環(huán)性的人抗小鼠抗體(HAMAs)，有些時候產(chǎn)生對偶聯(lián)物的抗體部位的一般性的立即的III型過敏性反應(yīng)。但是通過由許多不同的方法令這些鼠抗體的免疫原性更少已經(jīng)使得這些問題最小化了，所述方法包括通過化學(xué)修飾靶向抗體，如通過將聚乙二醇偶聯(lián)到靶向抗體上(聚乙二醇化)，或通過鑒定抗體中的抗原性位點并且隨后將它去除來產(chǎn)生人源化的、嵌合的或人的抗體；例如，F(xiàn)ab′、F(ab)2和其它代替完整的IgG使用的抗體片段。此外，已經(jīng)通過血漿去除將HAMA從血中除去來進行減少HAMA副作用的嘗試。還使用抑制免疫力的技術(shù)來改善外源抗體的副作用，所述外源抗體足以允許與靶向藥劑一起進行多次治療盡管有這些治療進步，依然存在提供更有效的治療表達CEA的癌癥的方法的需要。本發(fā)明提供利用抗CEA抗體，如在美國專利號5,874,540和Hansen等，Cancer，713478(1993)中所介紹的III類抗CEAMAb鼠MN-14 MAb，和也是在美國專利號5,874,540中所介紹的III類抗CEA MAb的嵌合的和人源化的MN-14，以及在Primus等的美國專利號4,818,709中所定義的NP-4，在此將所有文獻的全部內(nèi)容引入作為參考。優(yōu)選地，III類抗CEA MAb是人源化的，并且與一種治療劑，特別是一種化療劑相結(jié)合使用，以用最小的毒性產(chǎn)生對表達CEA的癌癥有效的治療。另外，這兩種組分的分別給藥提供了增強的結(jié)果以及適用于個別治療方法的多用性和靈活性。
發(fā)明概述本發(fā)明中所要保護的是治療甲狀腺髓樣癌和非甲狀腺髓樣癌的組合物和方法。
本發(fā)明的第一個實施方案是一種至少包含至少一種III類抗CEA單克隆抗體(MAb)或其片段和至少一種治療劑的組合物。優(yōu)選地，抗體片段選自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和scFv。還要優(yōu)選地，III類抗CEA MAb或其片段是嵌合的MAb，并且其中嵌合的MAb基本保留鼠III類抗CEA MAb的III類抗CEA結(jié)合特異性。仍然要優(yōu)選地，III類抗CEA MAb或其片段為完全的人MAb，并且其中所述完全的人MAb基本保留鼠III類抗CEA MAb的III類抗CEA結(jié)合特異性。
在本發(fā)明的一個實施方案中，III類抗CEA單克隆抗體或其片段優(yōu)選為MN-14抗體或其片段。更加優(yōu)選地，MN-14單克隆抗體或其片段包含鼠MN-14單克隆抗體的互補決定區(qū)(CDRs)，其中MN-14抗體的輕鏈可變區(qū)的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；并且III類抗CEA抗體的重鏈可變區(qū)的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。還要優(yōu)選地，MN-14單克隆抗體與CEA反應(yīng)并且與正常的交叉反應(yīng)抗原(NCA)和胎糞抗原(MA)不反應(yīng)。最優(yōu)選地，MN-14單克隆抗體或其片段是人源化的、嵌合的或完全的人MN-14抗體或其片段。
在一個優(yōu)選的實施方案中，人源化MN-14抗體的輕鏈和重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)(FRs)包含至少一個取代自鼠MN-14單克隆抗體的相應(yīng)FRs的氨基酸。具體地，人源化MN-14抗體或其片段優(yōu)選包含至少一個來自鼠MN-14抗體的相應(yīng)FR的氨基酸，所述氨基酸選自

圖14A-C的鼠重鏈可變區(qū)(KLHuVhAIGA)的氨基酸殘基24(A)、28(D)、30(T)、48(1)、49(G)、74(A)和94(S)。同樣地，人源化的MN-14抗體或其片段還可以包含至少一個來自所述鼠MN-14輕鏈可變區(qū)的相應(yīng)FR的氨基酸。仍然要優(yōu)選地，人源化的MN-14抗體或其片段包含如圖13A所示的輕鏈可變區(qū)，以及圖14A-C中所示標(biāo)明為KLHuVhAIGA的重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)是由來自這些抗體的兩個Vks的序列的組合組成的MN14VK和REIVK之間的中間序列。
在本發(fā)明的第一個實施方案中，治療劑選自裸抗體、細(xì)胞毒性劑、藥物、放射性核素、免疫調(diào)節(jié)劑、光敏治療劑、免疫偶聯(lián)物、激素或其組合，任選配制在一種可藥用的載體中。這里還要求治療劑不是達卡巴嗪(DTIC)。
本發(fā)明的第二個實施方案描述了一種治療髓樣以及非髓樣甲狀腺髓樣癌的方法，包括同時或按順序向受試者給予治療有效量的III類抗CEA單克隆抗體或其片段以及至少一種治療劑，并且任選配制在一種可藥用的載體中。優(yōu)選地，抗體片段選自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和scFv。還要優(yōu)選地，III類抗CEA單克隆抗體或其片段為人源化的，其中所述人源化的單克隆抗體基本保留了鼠III類抗CEA單克隆抗體的III類抗CEA結(jié)合特異性。還考慮了III類抗CEA單克隆抗體或其片段為嵌合的單克隆抗體，并且其中所述嵌合性單克隆抗體基本保留了鼠III類抗CEA單克隆抗體的III類抗CEA結(jié)合特異性。
在一個優(yōu)選的實施方案中，III類抗CEA單克隆抗體或其片段為MN-14抗體或其片段。優(yōu)選地，MN-14抗體或其片段包含鼠MN-14單克隆抗體的互補決定區(qū)(CDRs)，其中所述MN-14單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；并且III類抗CEA抗體的重鏈可變區(qū)的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。還要優(yōu)選地，MN-14單克隆抗體是人源化的、嵌合的或完全的人MN-14抗體，與CEA反應(yīng)并且與正常的交叉反應(yīng)抗原(NCA)和胎糞抗原不反應(yīng)。還要優(yōu)選地，MN-14抗體或其片段以100-600毫克/劑/注射的劑量進行給藥。最為優(yōu)選地，MN-14抗體或其片段以300-400毫克/劑/注射的劑量進行給藥。
在本發(fā)明的方法中，所述人源化MN-14抗體或其片段的輕鏈和重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)(FRs)包含至少一個取代自鼠MN-14單克隆抗體的相應(yīng)FRs的氨基酸。更加優(yōu)選地，包含至少一個來自所述鼠MN-14抗體的所述相應(yīng)FR的氨基酸的人源化MN-14抗體或其片段選自如上面所提到的圖14A-C的鼠重鏈可變區(qū)的氨基酸殘基24、28、30、48、49、74和94。還要優(yōu)選地，人源化的MN-14抗體或其片段包含至少一個來自所述鼠MN-14輕鏈可變區(qū)的相應(yīng)FR的氨基酸。最為優(yōu)選地，人源化的MN-14抗體或其片段包含如圖13A(中間序列)或圖22A(hMN-14)或圖16A所示的輕鏈可變區(qū)，以及圖14A-C中所示標(biāo)明為KLHuVhAIGA的或圖15B(hMN-14)或圖16B中所示的重鏈可變區(qū)。
本發(fā)明的方法還包括選自下組的治療劑與EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF或其它腫瘤血管發(fā)生抗原、Ga 733或其組合反應(yīng)的人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段。類似地，這些方法可以包括同時或按順序向受試者給予治療有效量的第二人源化的、嵌合的、人或鼠單克隆抗體或其片段，所述單克隆抗體或其片段選自II類或III類抗CEA單克隆抗體或其片段。優(yōu)選地，第二抗體或其片段既可以是裸的也可以是偶聯(lián)到一種治療劑上的。
在本文所述方法的一個優(yōu)選實施方案中，治療劑選自裸抗體、細(xì)胞毒性劑、藥物、放射性核素、免疫調(diào)節(jié)劑、光敏治療劑、CEA或非CEA抗體的免疫偶聯(lián)物、激素或其組合，任選配制在一種可藥用的載體中。這里還要求治療劑不是達卡巴嗪(DTIC)。
優(yōu)選地，治療劑為一種選自藥物或毒素的細(xì)胞毒性劑。例如，考慮藥物具有選自抗有絲分裂劑、烷化劑、抗代謝物、抗血管生成劑、凋亡劑、生物堿、COX-2和抗生素及其組合的藥理學(xué)特性。優(yōu)選地，藥物選自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亞硝基脲、三氮烯、葉酸類似物、蒽環(huán)霉素、紫杉烷、COX-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、抗代謝物、抗生素、酶、表鬼臼毒素、鉑配位化合物、長春花生物堿、取代脲、甲肼衍生物、腎上腺皮質(zhì)抑制劑、拮抗劑、內(nèi)皮他丁、紫杉醇、喜樹堿、阿霉素和它們的類似物，及其組合。
當(dāng)治療劑為微生物的、植物或動物的毒素時，該藥劑可以選自蓖麻毒素、相思豆毒素、α毒素、皂草毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、金葡菌腸毒素A、商陸抗病毒素、白樹毒素(gelonin)、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內(nèi)毒素。
在本發(fā)明的方法中還考慮治療劑為選自細(xì)胞因子、干細(xì)胞生長因子、淋巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、干擾素(IFN)、干細(xì)胞生長因子、紅細(xì)胞生成素、血小板生成素及其組合的免疫調(diào)節(jié)劑。優(yōu)選地，淋巴毒素為腫瘤壞死因子(TNF)，所述造血因子為白介素(IL)，所述集落刺激因子為粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)，所素干擾素為干擾素α、β或γ，所述干細(xì)胞生長因子指定為″S1因子″。還要優(yōu)選地，免疫調(diào)節(jié)劑包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、γ干擾素、TNF-α或其組合。還要優(yōu)選地，治療劑為一種為色素原或染料的光敏治療劑或者一種為達卡巴嗪的烷化劑。
還要優(yōu)選地，治療劑為具有20-10,000keV的能量的放射性核素。優(yōu)選地，該放射性核素選自125I、131I、90Y、88Y、225Ac、177Lu、188Re、186Re及其組合。
附圖簡述圖1.在單獨以hMN-14、單獨以DTIC或以hMN-14和DTIC聯(lián)合治療之后比較腫瘤大小的圖表。圖1A顯示以25和100μg/劑單獨或與250μg hMN-14抗體一起給藥的DTIC。圖1B顯示以50和75μg/劑單獨或與100μg hMN-14抗體一起給藥的DTIC。
圖2.以131I和90Y-MN-14進行放射免疫治療(RAIT)之后比較腫瘤大小的圖表。
圖3.比較幾種化療藥物在患有TT的小鼠中對腫瘤大小治療效果的圖表。
圖4.比較RAIT和90Y標(biāo)記的抗CEA單克隆抗體MN-14的聯(lián)合治療與在RAIT之后24小時開始的4種藥物的組合對于腫瘤大小的治療效果的圖表。
圖5.比較RAIT加上DTIC和RAIT加上阿霉素和DTIC在患有TT小鼠中的效果的圖表。
圖6.比較在患有TT的異種移植小鼠中裸hMN-14治療方案的效果的圖表。動物被給予TT細(xì)胞的皮下注射，并且被留下不進行治療(A)或在第1天(B)或更遲的第11天(C)給予靜脈內(nèi)注射0.5mg hMN-14。
圖7.比較人源化的或鼠MN-14抗體在治療甲狀腺髓樣癌中的效果。給予動物皮下注射TT細(xì)胞，并且留下不進行治療或在之后的第1天給予靜脈內(nèi)注射MAb(0.5mg)。
圖8.比較不同的hMN-14劑量在治療甲狀腺髓樣癌中的效果。在皮下注射TT細(xì)胞之后的第1天，給予靜脈內(nèi)注射逐漸增多的hMN-14劑量。
圖9.在患有TT的裸鼠中比較不同治療時間的效果的圖表。
圖10.比較用hMN-14加上DTIC、單獨的DTIC、單獨的hMN-14治療患有TT的裸鼠和未治療小鼠的圖表。
圖11.圖11A和11B顯示鼠MN-14的可變區(qū)重鏈(VH)的共有DNA序列以及由該DNA序列編碼的氨基酸序列。CDRs被括于框中。
圖12.圖12A和12B顯示鼠MN-14的可變區(qū)輕鏈(VK)的共有DNA序列以及由該DNA序列編碼的氨基酸序列。CDRs被括于框中。
圖13.圖13A和13B顯示鼠MN-14的可變區(qū)與人可變區(qū)NEWM VH和REI VK(圖13A)以及人KOL VH區(qū)(圖13B)的比對。CDRs括入框中，摻入人源化VH的鼠VH FRs以它們根據(jù)Kabat等，SEQUENCES OFPROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST，U.S.Government PrintingOffice，Washington，D.C.，1987的計數(shù)系統(tǒng)的位置進行標(biāo)記。包括于KLHuVH中的CDRs之外的鼠殘基用一個實心圓指示。
圖14.圖14A-14C顯示在鼠和人源化MN-14 VH f構(gòu)架殘基(FR)之間的氨基酸序列的比較。只顯示不同于小鼠的人FR殘基。NEWM和KOL的CDRs也沒有顯示。在各個FRs中的氨基酸取代的區(qū)域以粗體進行突出，取代位置根據(jù)Kabat等的編號系統(tǒng)進行指示。將3個CDR括入框中。
圖15.圖15A和圖15B顯示人REI和KOL抗體的Vk和VH區(qū)的人、鼠和人源化序列分別與鼠和人源化MN-14的比較。將圖15A中REIVk的人序列與鼠和人源化MN-14 Vk序列比較。實心圓指示由人REI Vk序列保留的序列。將CDRs括入框中。將圖15B中KOL VH的人序列與鼠和人源化MN-14 VH序列比較。實心圓指示由人REI Vk序列保留的序列。將CDRs括入框中。
圖16.圖16A和16B顯示hMN-14的Vk、可變輕鏈和VH、可變重鏈序列，所述hMN-14是一種人源化的III類抗CEA抗體。CDR區(qū)以粗體和下劃線顯示。氨基酸殘基和核苷酸按順序編號。輕鏈可變區(qū)顯示于圖16A中，而重鏈可變區(qū)顯示于圖16B中。
優(yōu)選實施方案的詳細(xì)描述1.概述本發(fā)明提供治療的方法，其中在治療期中按順序地或同時地給予裸的III類抗CEA抗體或其片段以及至少一種治療劑。該方法對于治療甲狀腺髓樣癌特別有用，但是對于治療非甲狀腺髓樣癌、結(jié)腸直腸癌、肝細(xì)胞癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、頭和頸癌、膀胱癌、子宮癌和卵巢癌以及甚至不高水平表達CEA的癌癥也令人驚奇地有用。例如，考慮在以至少100ng/克組織的水平表達CEA的癌癥中進行治療。本方法進一步提供包含III類抗CEA抗體或抗體片段的組合物，其中抗體和治療劑彼此沒有偶聯(lián)或連接。如本文所用的，短語“III類抗CEA”抗體或抗體片段意為結(jié)合CEA抗原(或CD66e)的抗體或片段并且與正常的交叉反應(yīng)抗原(NCA)、胎糞抗原(MA)、粒細(xì)胞和CD66a-d不反應(yīng)(見，Primus等，美國專利號4,818,709，引入作為參考)。裸III類抗CEA抗體或其片段可以是人源化的、嵌合的、人或鼠抗體。在一個優(yōu)選的實施方案中，裸III類抗CEA抗體或其片段為人源化的MN-14抗體或其片段。
令人驚奇的是，本文所述的組合物和方法還對于治療非甲狀腺髓樣癌，包括結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、乳癌、肺癌、肝細(xì)胞癌、膀胱癌、頭和頸癌以及卵巢癌有用。由于這類形式的癌癥比甲狀腺髓樣癌表達較少的CEA，所以出人意料的是裸III類抗CEA抗體與治療劑的組合會對治療非甲狀腺髓樣癌有用。
裸III類抗CEA抗體殺死腫瘤細(xì)胞的機制并不是確定地已知的并且可能包括幾種機制。假設(shè)單獨的裸抗體或與治療劑組合可以通過阻斷其各自的抗原的生物學(xué)活性或通過刺激天然免疫功能，如抗體依賴性的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)或補體介導(dǎo)的溶胞作用來影響腫瘤的生長。此外，單獨的裸抗體或與治療劑結(jié)合可以通過抑制細(xì)胞生長和細(xì)胞周期進程、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制血管發(fā)生、抑制轉(zhuǎn)移活性和/或影響腫瘤細(xì)胞粘附來治療和控制癌癥。事實上，本發(fā)明的抗CEA抗體或其片段可以在治療轉(zhuǎn)移灶中比治療原發(fā)癌癥更為有效，因為轉(zhuǎn)移灶可能對于腫瘤細(xì)胞粘附的拮抗劑更為敏感。本治療方法提供了一種治療計劃，它可以通過允許對抗體和一種或多種不同治療劑進行滴定提供有效治療方案來進行優(yōu)化以提供對個體病人最大的抗腫瘤活性。
在本發(fā)明的一個方面中，裸的III類抗CEA抗體或其片段和治療劑可以補充至少一種額外的治療劑，如裸的或偶聯(lián)的人源化的、鼠的、嵌合的或人的抗體、融合蛋白或其片段。例如，另一種非阻斷性的并且不結(jié)合粒細(xì)胞或CD66a-d的III類CEA抗體或抗體片段；非阻斷性的并且不結(jié)合粒細(xì)胞或CD66a-d的II類抗CEA抗體或抗體片段；或針對與不同癌癥相關(guān)的表位或抗原的抗體，可以被用作治療劑來與優(yōu)選的人源化MN-14抗體一起進行聯(lián)合治療。如下面更加詳細(xì)介紹的，這種額外的抗體、融合蛋白或其片段可以結(jié)合CEA或另一種與癌癥或腫瘤相關(guān)的抗原。
2.定義在接下來的介紹中，使用了許多術(shù)語并且提供下列定義以幫助理解本發(fā)明。
如本文所述的，抗體是指一種全長的(即，天然存在的或由正常的免疫球蛋白基因片段重組過程所形成的)免疫球蛋白分子(例如，一種IgG抗體)或免疫球蛋白分子的一種免疫活性(即，特異性結(jié)合)部分，比如一種抗體片段。
“抗體片段”是抗體的一部分，如F(ab’)2、F(ab)2、Fab’、Fv、scFv(單鏈Fv)等。不考慮結(jié)構(gòu)，抗體片段與被完整抗體識別的相同抗原結(jié)合。
術(shù)語“抗體片段”還包括任何一種合成的或遺傳工程改造過的蛋白，它通過與特異性抗原結(jié)合形成復(fù)合物而像抗體一樣發(fā)揮作用。例如，抗體片段包括由可變區(qū)組成的分離片段，如由重鏈和輕鏈可變區(qū)組成的“Fv”片段、其中輕鏈和重鏈可變區(qū)通過肽鍵進行連接的重組的單鏈多肽分子(“sFv蛋白”)，和由模擬高變區(qū)的氨基酸殘基組成的最小識別單位。Fv片段可以以不同方式進行構(gòu)建以產(chǎn)生多價體的和/或多特異性結(jié)合的形式。對于前者多價體來說，它們與針對CEA表位與一個以上的結(jié)合位點反應(yīng)，而對于多特異性形式來說，結(jié)合一個以上的表位(既可以是CEA的表位，也可以是針對CEA的和一種不同抗原的)。
如本文所用的，術(shù)語抗體組分包括完整抗體、融合蛋白及其片段。
裸抗體通常是一種不與治療劑偶聯(lián)的完整抗體。之所以如此是因為抗體分子的Fc部分提供效應(yīng)物或免疫功能，如補體固定和ADCC(抗體依賴的細(xì)胞毒性)，它使可以導(dǎo)致細(xì)胞裂解的機制得以實施。然而，F(xiàn)v部分可能不是抗體的治療功能所必需的，但是其它機制，如凋亡、抗血管發(fā)生、抗轉(zhuǎn)移活性、抗粘附活性如對異型或同型粘附的抑制，和對信號傳遞途徑的干擾可以得以發(fā)揮作用并且干擾疾病的進程。裸抗體包括多克隆和單克隆抗體及其片段，包括鼠抗體以及某些重組抗體，如嵌合的、人源化的或人抗體及其片段。如在本發(fā)明中所定義的，“裸的”是與“未偶聯(lián)的”同義的，并且意為不與它一起給藥的治療劑相連接或偶聯(lián)。
嵌合抗體是一種重組的蛋白，它含有抗體重鏈和輕鏈的可變區(qū)，包括來源于一個物種，優(yōu)選為嚙齒動物的抗體的互補決定區(qū)(CDRs)和可變結(jié)構(gòu)域，而抗體分子的恒定區(qū)則來源于人抗體的那些。對于獸醫(yī)應(yīng)用，嵌合抗體的恒定區(qū)可以來源于其它物種，如貓或狗。
人源化抗體是一種重組蛋白，其中來源于一個物種的抗體，例如嚙齒類的抗體的CDRs，被從嚙齒類抗體的重鏈和輕鏈中轉(zhuǎn)移到人重鏈和輕鏈可變區(qū)中?？贵w分子的恒定區(qū)來源于人抗體的那些。
人抗體是一種由轉(zhuǎn)基因小鼠所獲得的抗體，它已經(jīng)進行“工程化”以產(chǎn)生反應(yīng)于抗原性侵襲的特異性人抗體。在本技術(shù)中，將人重鏈和輕鏈基因座元件導(dǎo)入源自胚胎干細(xì)胞系的小鼠品系中，所述胚胎干細(xì)胞系包含靶向的內(nèi)源重鏈和輕鏈位點的破壞。轉(zhuǎn)基因小鼠可以合成對人抗原特異的人抗體，并且該小鼠可以用于生產(chǎn)分泌人抗體的雜交瘤。Green等，Nature Genet.713(1994)，Lonberg等，Nature368856(1994)，和Taylor等，Int.Immun.6579(1994)介紹了從轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得人抗體的方法。通過基因或染色體轉(zhuǎn)染方法以及噬菌體展示技術(shù)還可以構(gòu)建完全的人抗體，所有這些技術(shù)都是本領(lǐng)域已知的。見例如，McCafferty等，Nature 348552-553(1990)關(guān)于從來自未免疫供體的免疫球蛋白可變區(qū)的基因所有組成成分體外生產(chǎn)人抗體或其片段的描述。在本技術(shù)中，將抗體可變區(qū)基因框內(nèi)克隆入絲狀噬菌體的大的或小的外殼蛋白基因，并且在噬菌體顆粒表面上展示為功能性抗體片段。由于絲狀噬菌體顆粒包含噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，基于該抗體功能特性的篩選還導(dǎo)致對編碼表現(xiàn)那些特性的抗體基因的篩選。以此方式，噬菌體模擬B細(xì)胞的一些特性。噬菌體展示能夠以許多形式進行，關(guān)于它們的綜述，見例如Johnson和Chiswell，Current Opinion in Structural Biology 35564-571(1993)。
人抗體還可以通過體外激活的B細(xì)胞生產(chǎn)。見美國專利號5,567,610和5,229,275，將它們的全部內(nèi)容引入作為參考。
治療劑是一種單獨地、與抗體組分即抗體或抗體片段，或其亞片段一起同時或按順序給藥的分子或原子，在疾病的治療中有用。治療劑的例子包括抗體、抗體片段、免疫偶聯(lián)物、藥物、細(xì)胞毒性劑、毒素、核酸酶、激素、免疫調(diào)節(jié)劑、螯合劑、硼化合物、光敏劑或染料、放射性同位素或放射性核素、免疫偶聯(lián)物或其組合。
免疫偶聯(lián)物是一種與治療劑偶聯(lián)的抗體組分。合適的治療劑如上所述。
如本文所用的，術(shù)語抗體融合蛋白是一種重組生產(chǎn)的抗原結(jié)合分子，其中兩個或更多的相同或不同的天然抗體、單鏈抗體或具有相同或不同特異性的抗體片段部分相連。III類抗CEA融合蛋白包含至少一個CEA結(jié)合位點。優(yōu)選地，III類抗CEA融合蛋白是MN-14融合蛋白。
融合蛋白的價態(tài)表明融合蛋白的結(jié)合臂或位點具有抗原或表位；即單價、二價、三價或多價的?？贵w融合蛋白的多價性意指可以利用在與抗原結(jié)合中的多重相互作用，因而增強與抗原或不同抗原結(jié)合的親和力。特異性表明抗體融合蛋白能夠結(jié)合多少種不同類型的抗原或表位；即，單特異性的、雙特異性的、三特異性的、多特異性的。利用這些定義，天然抗體，例如IgG是二價的，因為它具有兩個結(jié)合臂，但是為單特異性的，因為它結(jié)合一種類型的抗原或表位。一種單特異性的多價的融合蛋白具有一個以上的對于相同抗原或表位的結(jié)合位點。例如，單特異性的雙抗體是具有與相同抗原反應(yīng)的兩個結(jié)合位點的融合蛋白。融合蛋白可以包含不同抗體組分或相同抗體組分的多個拷貝的多價或多特異性組合。融合蛋白還可以包含治療劑。
免疫調(diào)節(jié)劑是在本發(fā)明中所定義的當(dāng)呈現(xiàn)、改變、抑制或刺激身體免疫系統(tǒng)時的治療劑。一般地，在本發(fā)明中有用的免疫調(diào)節(jié)劑刺激免疫細(xì)胞增殖或在免疫反應(yīng)級聯(lián)中被激活，如巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞和/或T細(xì)胞。如本文所述的免疫調(diào)節(jié)劑的一個例子是一種細(xì)胞因子，它是一種細(xì)胞群落(例如，激發(fā)的T淋巴細(xì)胞)在接觸特異性抗原之后釋放的大約5-20kDa的可溶性小蛋白質(zhì)，它作為細(xì)胞之間的胞間介質(zhì)發(fā)揮作用。如熟練的技術(shù)人員會理解的，細(xì)胞因子的例子包括淋巴因子、單核因子、白介素和幾種相關(guān)的信號傳遞分子，如腫瘤壞死因子(TNF)和干擾素。趨化因子是細(xì)胞因子的一個亞類。某些白介素和干擾素是刺激T細(xì)胞或其它免疫細(xì)胞增殖的細(xì)胞因子的例子。
單克隆抗體，包括嵌合的、人源化的和人抗體的制備單克隆抗體(MAbs)是特定抗原的抗體的同類群體并且該抗體僅包含一種類型的抗原結(jié)合位點并且只結(jié)合抗原決定簇上的一個表位。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法可以獲得特定抗原的嚙齒類單克隆抗體。見，例如，Kohler和Milstein，Nature256495(1975)，和Coligan等(編輯)，CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY，VOL.1，2.5.1-2.6.7頁(John Wiley和Sons 1991)[下文中″Coligan″]。簡言之，單克隆抗體可以通過用含有抗原的組合物注射小鼠、通過移除血清樣品來檢驗抗體產(chǎn)品的存在、移除脾以獲得B淋巴細(xì)胞、將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞相融合來產(chǎn)生雜交瘤、克隆該雜交瘤、選擇產(chǎn)生針對該抗原的抗體的陽性克隆、培養(yǎng)產(chǎn)生針對該抗原的抗體的克隆以及從雜交瘤培養(yǎng)物中分離抗體而獲得。
通過許多充分建立的技術(shù)可以從雜交瘤培養(yǎng)物中分離和純化MAbs。這種分離技術(shù)包括使用蛋白-A瓊脂糖凝膠的親和層析法、大小排阻層析法和離子交換層析法。參見，例如，Coligan于2.7.1-2.7.12頁和2.9.1-2.9.3頁。還參見Baines等，“免疫球蛋白G(IgG)的純化”，分子生物學(xué)的方法，第10卷，79-104頁(The Humana Press，Inc.1992)。
通過公知的抗體生產(chǎn)方法來生產(chǎn)針對肽骨架的抗體。例如，注射完全弗氏佐劑中的免疫原，如(肽)n-KLH，其中KLH是匙孔血藍蛋白，n＝1-30，隨后向免疫感受態(tài)動物中注射兩次相同的懸浮于不完全弗氏佐劑中的免疫原。最后給予動物靜脈內(nèi)注射強化抗原，接著在三天后收集脾細(xì)胞。隨后將收集的脾細(xì)胞與Sp2/0-Ag14骨髓瘤細(xì)胞相融合并且利用直接結(jié)合ELISA對得到的克隆的培養(yǎng)物上清液的抗肽反應(yīng)性進行分析。利用起始免疫原的肽片段可以分析產(chǎn)生抗體的良好特異性。利用自動肽合成儀可以輕易地制備這些片段。對于抗體生產(chǎn)來說，分離酶缺陷的雜交瘤以能夠篩選融合的細(xì)胞系。這種技術(shù)還能夠用于針對一種或多種包含聯(lián)結(jié)子的螯合物，例如In(III)-DTPA螯合物來培育抗體。針對In(III)-DTPA的單克隆小鼠抗體是已知的(授予Barbet的美國專利號5,256,395)。
生產(chǎn)抗體的另一種方法是通過在轉(zhuǎn)基因家畜的乳中進行生產(chǎn)。見，例如，Colman，A.，Biochem.Soc.Symp.，63141-147，1998；美國專利5,827,690，在此將二者的全部內(nèi)容引入作為參考。制備兩種分別含有編碼成對的免疫球蛋白重鏈和輕鏈的DNA片段的構(gòu)建體。將DNA片段克隆入含有一個啟動子序列的表達載體中，所述啟動子序列優(yōu)選在哺乳動物上皮細(xì)胞中進行表達。例子包括但不限于來自兔、牛和羊酪蛋白基因、牛α-乳球蛋白基因、羊β-乳球蛋白基因和小鼠乳清酸蛋白基因的啟動子。優(yōu)選地，插入的片段在來自哺乳動物特異性基因的同源基因組序列3’端的側(cè)翼。這提供了多聚腺苷酸化位點和轉(zhuǎn)錄穩(wěn)定序列。將表達盒共注入受精的哺乳動物卵的前核中，隨后將該卵移植入受體雌體的子宮中并且讓其孕育。出生后，通過Southern分析就兩種轉(zhuǎn)基因的存在對后代進行篩選?？贵w要存在，重鏈和輕鏈基因都必須同時在相同的細(xì)胞中表達。利用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)免疫學(xué)方法就抗體或抗體片段的存在和功能性對轉(zhuǎn)基因雌性動物的乳汁進行分析?？梢岳帽绢I(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法從乳汁中純化抗體。
在開始培育針對免疫原的抗體之后，可以將單克隆抗體的可變基因從雜交瘤細(xì)胞中進行克隆、測序并且隨后通過重組技術(shù)進行制備。例如，出版物Orlandi等，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 863833(1989)介紹了克隆鼠免疫球蛋白可變區(qū)的一般方法，將該文獻的全部內(nèi)容引入作為參考。鼠抗體和抗體片段的人源化和嵌合化是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。嵌合抗體是一種重組蛋白，它包含包括CDRs的可變區(qū)，所述CDRs源自動物的一個物種，如一種嚙齒類抗體，而抗體分子的其它部分，即恒定區(qū)則源自人抗體。源自人源化和嵌合的單克隆抗體的抗體組分的使用減少了與鼠恒定區(qū)免疫原性相關(guān)聯(lián)的潛在的問題。構(gòu)建嵌合抗體的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。作為一個例子，Leung等，Hybridoma 13469(1994)，描述了他們是如何通過將編碼LL2單克隆抗體的Vk和VH結(jié)構(gòu)域的DNA序列分別與人k和IgG1恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域組合來生產(chǎn)LL2嵌合體的，所述LL2單克隆抗體是一種抗CD22抗體。
還可以通過用一個或多個不同的人FR替換嵌合的MAb的可變區(qū)中的鼠FR的序列來將嵌合的單克隆抗體(MAb)人源化。具體地，通過將小鼠互補決定區(qū)由小鼠免疫球蛋白的重鏈和輕鏈可變區(qū)轉(zhuǎn)移到人可變區(qū)中，并且隨后取代鼠對應(yīng)部分的構(gòu)架區(qū)中的人殘基來生產(chǎn)人源化的單克隆抗體。由于簡單地將小鼠CDRs轉(zhuǎn)移到人FRs中經(jīng)常導(dǎo)致抗體親和性的減弱甚至是喪失，因此可能需要額外的修飾以便恢復(fù)鼠抗體的原始親和性。這可以通過將FR區(qū)中的一個或多個人殘基用它們的鼠的對應(yīng)物進行替換來實現(xiàn)，以便獲得一種對其表位具有良好的結(jié)合親和性的抗體。見，例如，Tempest等，Biotechnology 9266(1991)和Verhoeyen等，Science 2391534(1988)。
在一個優(yōu)選的實施方案中，在人源化的抗CEA抗體或其片段中的一些人殘基被它們的鼠對應(yīng)物所替換。此外，已知嵌合的抗CEA與其鼠的對應(yīng)物顯示相似的結(jié)合親和性，在人源化抗CEA MAb的起始形式中的缺陷性設(shè)計，如果有的話，可以通過將嵌合的抗CEA的輕鏈和重鏈與人源化形式的那些相混合和匹配而進行鑒定。優(yōu)選地，人源化的抗CEA抗體為人源化的MN-14抗體，它的制備和序列在U.S.5,874,540中進行了介紹，將它的全部內(nèi)容引入作為參考。盡管兩種人抗體REI和NEWM是用于制備人源化的和嵌合的MN-14優(yōu)選的抗體，還可以將來自2種或多種不同人抗體的構(gòu)架序列的組合用作VH和VK。Jones等，Nature321522(1986)，Riechmann等，Nature 332323(1988)，Verhoeyen等，Science2391534(1988)，Carter等，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 894285(1992)，Sandhu，Crit.Rev.Biotech.12437(1992)，和Singer等，J Immun.1502844(1993)介紹了人源化MAbs的生產(chǎn)，特此將每一篇文獻都引入作為參考。另外，針對一個具體表位的人源化的、嵌合的和人MAbs的親和性可以通過CDRs的誘變得以提高，從而較低劑量的抗體與較高劑量的突變前較低親和力的MAb一樣有效。參見例如，WO0029584A1。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體為人III類抗CEA單克隆抗體?？梢詮霓D(zhuǎn)基因非人動物中獲得抗CEA MAb或另一種人抗體。見，例如，Mendez等，Nature Genetics，15146-156(1997)和美國專利號5,633,425，將它們的全部內(nèi)容引入作為參考。例如，可以從具有人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因小鼠中回收人抗體。優(yōu)選地，抗CEA抗體為MN-14抗體。通過滅活內(nèi)源免疫球蛋白基因和導(dǎo)入人免疫球蛋白基因座來對小鼠體液免疫系統(tǒng)進行人源化。人免疫球蛋白基因座非常復(fù)雜并且包含大量的不連續(xù)片段，它總共占了人基因組的大約0.2％。為了確保轉(zhuǎn)基因小鼠能夠產(chǎn)生足夠的抗體組成成分，人重鏈和輕鏈基因座的大片段必須被導(dǎo)入小鼠基因組中。這通過一個逐步的過程得以實現(xiàn)，開始是形成在種系構(gòu)型中含有人重鏈或輕鏈免疫球蛋白基因座的酵母人工染色體(YACs)。由于每個插入片段的大小為大約1Mb，所以YAC構(gòu)建需要免疫球蛋白基因座重疊片段的同源重組。通過融合含有YAC的酵母球芽和小鼠胚胎干細(xì)胞將兩種YAC分別導(dǎo)入融合小鼠，所述兩種YAC中的一種含有重鏈基因座，另一種含有輕鏈基因座。隨后將胚胎干細(xì)胞的克隆微注射入小鼠胚泡中。對得到的嵌合雄性就其通過它們的胚系轉(zhuǎn)運YAC的能力進行篩選，并且與鼠抗體生產(chǎn)缺陷的小鼠一雜交。雜交兩種轉(zhuǎn)基因品系，一種含有人重鏈基因座而另一種含有人輕鏈基因座，產(chǎn)生了反應(yīng)于免疫而生產(chǎn)人抗體的后代。
還可以通過微細(xì)胞介導(dǎo)的染色體轉(zhuǎn)移(MMTC)來將未重排過的人免疫球蛋白基因?qū)胄∈笈咛ジ杉?xì)胞中。見，例如，Tomizuka等，Nature Genetics，16133(1997)。在該方法中含有人染色體的微細(xì)胞與小鼠胚胎干細(xì)胞相融合。轉(zhuǎn)移的染色體被穩(wěn)定地保持，并且成年嵌合體顯示合適的組織特異性表達。
作為一種選擇，本發(fā)明的抗體或抗體片段可以源于分離自免疫球蛋白組合文庫的人抗體片段。見，例如，Barbas等，METHODSACompanion to Methods in Enzymology 2119(1991)，和Winter等，Ann.Rev.Immunol.12433(1994)，將它們引入作為參考。利用噬菌體展示通過工程化并且在大腸桿菌(E.Coli)中表達抗體片段可以克服與由B細(xì)胞無限增殖化產(chǎn)生單克隆抗體相關(guān)聯(lián)的許多困難。為了確保高親和性單克隆抗體的回收，免疫球蛋白組合文庫必須包含大的全部組成成分。一種典型的策略利用由免疫過的小鼠的淋巴細(xì)胞或脾細(xì)胞獲得的mRNA利用反轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA。通過PCR分別擴增重鏈和輕鏈基因并且連接入噬菌體克隆載體。產(chǎn)生兩種不同的文庫，一種含有重鏈基因，一和含有輕鏈基因。從每種文庫中分離噬菌體DNA，將重鏈和輕鏈序列連接在一起并且進行包裝以形成組合文庫。每個噬菌體都包含重鏈和輕鏈cDNAs的隨機配對，并且在大腸桿菌的感染之后指導(dǎo)感染細(xì)胞中抗體鏈的表達。為了鑒定識別目標(biāo)抗原的抗體，將噬菌體文庫涂平板，將存在于噬斑中的抗體分子轉(zhuǎn)移至濾器。將濾器與放射性標(biāo)記的抗原一起溫育并且隨后進行洗滌以除去多余的未結(jié)合的配體。在放射自顯影照片上的放射性斑點鑒定了含有結(jié)合該抗原的抗體的斑?？梢岳?，從STRATAGENE Cloning Systems(LaJolla，CA)中獲得對于生產(chǎn)人免疫球蛋白噬菌體文庫有用的克隆和表達載體。
在一個實施方案中，如在Hansen等，美國專利號5,874,540；Hansen等，Cancer，713478(1993)；Primus等，美國專利號4,818,709，和Shively等，美國專利號5,081,235中所介紹的來生產(chǎn)本發(fā)明的抗體，將這些文獻的全部內(nèi)容引入作為參考。
抗體片段的生產(chǎn)本發(fā)明考慮III類抗CEA抗體，優(yōu)選MN-14抗體的片段的應(yīng)用。本發(fā)明的III類抗CEA抗體或其片段并不結(jié)合粒細(xì)胞或66a-d。識別特異性表位的抗體片段可以通過已知的技術(shù)進行生產(chǎn)。例如，可以通過抗體的蛋白水解或通過編碼該片段的DNA在大腸桿菌中的表達來制備抗體片段?？贵w片段是一種抗體的抗原結(jié)合部分，如F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv、scFv等，可以通過傳統(tǒng)方法對完整抗體進行胃蛋白酶和木瓜蛋白酶消化而獲得。
例如，可以通過用胃蛋白酶進行酶切以提供稱作F(ab′)2的100Kd的片段來產(chǎn)生抗體片段。該片段可以利用一種硫醇還原劑，以及任選地一種巰基的封閉基團進一步切割，以產(chǎn)生50Kd的Fab′單價片段。或者，利用木瓜蛋白酶的酶切直接產(chǎn)生兩個單價Fab片段和一個Fc片段。Goldenberg，美國專利號4,036,945和4,331,647以及包含其中的參考文獻對這些方法進行了介紹，這里將這些專利的全部內(nèi)容引入作為參考。還見Nisonoff等，ArchBiochem.Biophys.89230(1960)；Porter，Biochem.J 73119(1959)，Edelman等，inMETHODS IN ENZYMOLOGY VOL.1，422頁(學(xué)術(shù)出版社1967)，和Coligan于2.8.1-2.8.10和2.10.-2.10.4頁。
還可以使用其它切割抗體的方法，如重鏈的分離以形成單價輕-重鏈片段，進一步切割片段，或可以使用其它酶學(xué)的、化學(xué)的或遺傳學(xué)的技術(shù)，只要片段能結(jié)合被完整抗體所識別的抗原。
例如，F(xiàn)v片段包含VH和VL鏈的締合體。如在Inbar等，Proc.Nat′l.Acad.Sci.U.S.A.692659(1972)中所述，這種締合可以是非共價的?；蛘?，可變鏈可以通過分子間二硫鍵連接或通過化學(xué)物質(zhì)如戊二醛進行交聯(lián)。見，例如，Sandhu，Crit.Rev.Biotech.12437(1992)。
優(yōu)選地，F(xiàn)v片段包含通過肽鍵連接的VH和VL鏈。通過構(gòu)建一種含有通過寡核苷酸連接的編碼VH和VL區(qū)的DNA序列的結(jié)構(gòu)基因來制備這些單鏈抗原結(jié)合蛋白質(zhì)(sFv)。將該結(jié)構(gòu)基因插入一種表達載體中，隨后將所述的表達載體導(dǎo)入一種宿主細(xì)胞，如大腸桿菌中。重組的宿主細(xì)胞合成一種單鏈多肽，在兩個V區(qū)之間有一個連接肽。Whitlow等，MethodsA Companion to Methods in Enzymology，297(1991)介紹了生產(chǎn)sFvs的方法。還見Bird等，Science 242423(1988)，Ladner等，美國專利號4,946,778；Pack等，Bio Technology 111271(1993)和Sandhu，同上。
抗體片段的另一種形式是編碼單個互補決定區(qū)(CDR)的肽。CDR是抗體可變區(qū)的一段，它在結(jié)構(gòu)上與抗體結(jié)合的表位相互補并且比可變區(qū)的其余部分更加易變。因此，CDR一些時候稱為高變區(qū)。一個可變區(qū)包含三個CDRs。CDR肽可以通過構(gòu)建編碼目標(biāo)抗體的CDR的基因而獲得。這種基因例如是通過利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)以合成來自抗體生產(chǎn)細(xì)胞的RNA的可變區(qū)而進行制備的。參見例如，Larrick等，MethodsA Companion to Methods in Enzymology 2106(1991)；Courtenay-Luck，″Genetic Manipulation of MonoclonalAntibodies，″in MONOCLONAL ANTIBODIESPRODUCTION，ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION，Ritter等(編輯)，166-179頁(劍橋大學(xué)出版社1995)；和Ward等，″GeneticManipulation and Expression of Antibodies，″in MONOCLONALANTIBODI ESPRINCIPLES AND APPLICATIONS，Birch等(編輯)，137-185頁(Wiley-Liss，Inc.1995)。
還可以使用其它切割抗體的方法，如分離重鏈以形成單價輕-重鏈片段，進一步切割片段，或其它酶學(xué)的、化學(xué)的或遺傳學(xué)的技術(shù)，只要片段能結(jié)合被完整抗體所識別的抗原。
治療用的人源化、嵌合的和人抗CEA抗體本發(fā)明中所介紹的是利用鼠、嵌合的、人源化的和人III類抗CEA抗體或其片段進行治療的組合物和方法。優(yōu)選地，III類抗CEA抗體或其片段為MN-14抗體或其片段。本發(fā)明的抗體可以用于治療甲狀腺髓樣癌(MTC)，以及非MTC的表達CEA的癌癥。例示性的非MTC的表達CEA的癌癥包括結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、肝細(xì)胞癌、胃癌、肺癌、頭頸癌、膀胱癌、子宮癌、乳癌和卵巢癌。
組合物本文考慮的是含有至少一種III類抗CEA單克隆抗體(MAb)或其片段以及至少一種治療劑的組合物，所述抗體和治療劑彼此不相偶聯(lián)，并且因而作為每種組分的非偶聯(lián)形式存在于組合物中。在包含一種以上的抗體或其片段，如第二種III類抗CEA抗體的組合物中，該第二種抗體為非阻斷性的(即，不會阻斷第一種III類抗CEA抗體或抗體片段的結(jié)合)。
在一個實施方案中，III類抗CEA單克隆抗體或其片段是人源化的、嵌合的或完全的人的，其中人源化的、嵌合的，或完全的人MAb基本上保持鼠III類抗CEA MAb的III類抗CEA結(jié)合特異性。
在一個優(yōu)選的實施方案中，III類抗CEA單克隆抗體或其片段是MN-14抗體或其片段。優(yōu)選地，MN-14單克隆抗體或其片段包含鼠MN-14單克隆抗體的互補決定區(qū)(CDRs)，其中所述MN-14單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；并且所述III類抗CEA抗體的重鏈可變區(qū)的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。還要優(yōu)選地，MN-14單克隆抗體與CEA反應(yīng)并且與正常的交叉反應(yīng)抗原(NCA)和胎糞抗原(MA)不反應(yīng)。但是，針對這些交叉反應(yīng)性決定簇的抗體可以用于和CEA特異性抗體一起進行的聯(lián)合治療，如與MN-14單克隆抗體組合。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，MN-14單克隆抗體或其片段是人源化的或完全的人MN-14抗體或其片段。人源化MN-14抗體或其片段的輕鏈和重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)(FRs)優(yōu)選包含至少一個取代自鼠MN-14單克隆抗體的相應(yīng)FRs的氨基酸。還要優(yōu)選地，人源化MN-14抗體或其片段包含鼠MN-14抗體的相應(yīng)FR的氨基酸，選自如上面所提到的圖14A-C或圖15B或圖16B的鼠重鏈可變區(qū)(KLHuVhAIGA)的氨基酸殘基24、28、30、48、49、74和94。優(yōu)選的人源化重鏈可變區(qū)的氨基酸序列還在Hansen等，美國專利號5,874,540中給出，將其全部內(nèi)容引入作為參考。還要優(yōu)選地，人源化重鏈可變區(qū)包含圖14A-C中所示的氨基酸序列，表示為KLHuVhAIG和KLHuVhAIGAY。在另一個實施方案中，人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自鼠MN-14輕鏈可變區(qū)的相應(yīng)FR的氨基酸。最為優(yōu)選地，人源化的MN-14抗體或其片段包含圖13A或圖15A或圖16A的輕鏈可變區(qū)。本發(fā)明的另一個實施方案是一種包含嵌合MN-14單克隆抗體或其片段以及至少一種治療劑的組合物，所述抗體和治療劑彼此不相偶聯(lián)，并且因而作為每種組分的非偶聯(lián)形式存在于組合物中。優(yōu)選地，嵌合MN-14抗體或其片段包含圖13A或圖15A或圖16A中所示的鼠MN-14輕鏈可變區(qū)的CDRs以及如圖14A-C或圖15B或圖16B中所示的鼠MN-14重鏈可變區(qū)的CDRs。
本文還介紹了一種包含裸的鼠、人源化、嵌合或人的III類抗CEA抗體或其片段和一種治療劑，以及第二種裸的或偶聯(lián)的III類抗CEA抗體或其抗體片段的組合物，所述第二種抗體或其抗體片段是非阻斷性的，即，不會阻斷第一種III類抗CEA抗體或其片段的結(jié)合，并且在一種可藥用的載體中配制。換句話說，III類抗CEA抗體或其片段對于彼此都是非阻斷性的，因而允許抗體或其片段結(jié)合CEA(66e)。此外，本發(fā)明的III類CEA抗體或其抗體片段，以及用于聯(lián)合治療中的那些，并不結(jié)合粒細(xì)胞或CD66a-d。與本發(fā)明的抗體片段的裸III類抗CEA抗體一起作為裸抗體或作為免疫偶聯(lián)物的組分適于聯(lián)合治療的其它III類抗體包括在Kuroki等，JP R Cancer Res.，78(4)386(1987)和Hammarstrom(Cancer Res.52(8)2329(1992))中所述的非阻斷性抗體或其片段，它也不結(jié)合粒細(xì)胞或CD66a-d。
此外，其它的抗CEA抗體，如II類抗體，可以以裸的或偶聯(lián)的形式用于與本發(fā)明的III類抗CEA抗體組合。這種可以用作聯(lián)合治療的II類抗體或抗體片段是非阻斷性的并且不結(jié)合粒細(xì)胞或CD66a-d。例如，一種或多種嵌合的或人源化的II類抗CEA抗體或其片段，如MN-6或NP-3，可以與本發(fā)明的一種III類抗CEA抗體或其片段組合。這兩種抗體不與CD66a-d或粒細(xì)胞反應(yīng)(Hansen等，Cancer 1993 Jun1；71(11)3478-85)。許多出版物公開了識別CEA和CEA基因家族不同成員的MAbs，如Thompson等，J Clin.Lab.Anal.5344(1991)；Kuroki等，J BioL Chem.26611810(1991)；Nagel等，Eur.JBiochem.21427(1993)；Skubitz等，J Immunol.1555382(1995)；Skubitz等，J.Leukoc.Biol.60106(1996)；和Chen等，Proc.Natl.Acad.Sci.9314851(1996)。
而且，第二抗體或抗體片段是未偶聯(lián)(裸的)的或與至少一種治療劑(免疫偶聯(lián)物)偶聯(lián)的?？梢酝ㄟ^間接地將一種治療劑偶聯(lián)至一種抗體組分而制備免疫偶聯(lián)物。在Shih等，Int.R Cancer，41832(1988)；Shih等，Int.J Cancer，461101(1990)；和Shih等，美國專利號5,057,313中介紹了一般的技術(shù)。一般的方法涉及將一種具有氧化的糖部分的抗體組分與一種載體聚合物反應(yīng)，所述載體聚合物具有至少一種游離的胺功能并且加載了多種藥物、毒素、螯合劑、硼附加物或其它治療劑。這種反應(yīng)導(dǎo)致起始的Schiff堿(亞胺)鍵，它可以通過還原成仲胺進行穩(wěn)定化以形成最終的偶聯(lián)物。優(yōu)選地，用于治療的組合物中的抗CEA抗體或其片段為MN-14抗體或其片段。更加優(yōu)選地，MN-14抗體或其片段是人源化的。
本發(fā)明還考慮一種含有裸的人源化的、嵌合的、鼠的或人的III類抗CEA抗體或其片段和一種治療劑，以及一種例如偶聯(lián)的或非偶聯(lián)的抗體或其片段的第二治療劑，所述抗體不是II類或III類抗CEA抗體。在一個實施方案中，第二治療劑(或第二種抗體或其片段)是非偶聯(lián)的(裸的)或偶聯(lián)到至少一種治療劑上。適于聯(lián)合治療的非II類或III類抗CEA抗體及其片段包括，但不限于，癌相關(guān)抗體及其片段。癌相關(guān)抗體和抗體片段的例子結(jié)合EGP-1、BGP-2(如17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF或其它腫瘤血管發(fā)生抗原、Ga 733或其組合。如上面所討論的，不結(jié)合CD66a-d或粒細(xì)胞的非阻斷性的II類和III類抗CEA MAbs也可以與III類CEA抗體組合使用。適于聯(lián)合治療的其它抗體和抗體片段也包括靶向癌基因標(biāo)記或產(chǎn)物的那些，或針對腫瘤脈管系統(tǒng)標(biāo)記，如血管發(fā)生因子、胎盤生長因子(P1GF)的抗體，和針對某些免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的抗體，如針對CD40的抗體。
方法本發(fā)明中還介紹了治療甲狀腺髓樣癌和非甲狀腺髓樣癌的方法。非甲狀腺髓樣癌包括結(jié)腸直腸癌和任何其它表達CEA的腫瘤，如胰腺癌、乳癌、肝細(xì)胞癌、卵巢癌，某些類型的表達可變數(shù)量的CEA的肺癌、頭頸癌、子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌和肝癌。在這些類型的癌癥中CEA的水平比存在于甲狀腺髓樣癌中的要低得多，但是必要的是CEA的水平足夠高從而III類抗CEA療法提供有效的治療。正常的結(jié)腸粘膜層具有大約500ng/克但是以100ng/克組織的水平表達CEA的癌適于用本發(fā)明所述的方法進行治療。
例如，此處考慮一種治療甲狀腺髓樣癌或非甲狀腺髓樣癌的方法，包括向受試者同時或按順序地給予治療有效量的III類抗CEA單克隆抗體或其片段和至少一種治療劑，并且任選在一種可藥用的載體中進行配制。優(yōu)選地，III類抗CEA單克隆抗體或其片段是嵌合的、鼠的、人源化的或人的，其中嵌合的、人源化的、鼠的或人的III類抗CEA MAb基本上保留了鼠MAb的III類抗CEA抗體的結(jié)合特異性。更加優(yōu)選地，III類抗CEA抗體是人源化的，最優(yōu)選地，是如本文和美國專利5,874,540中所述的人源化的MN-14單克隆抗體。治療劑優(yōu)選是一種細(xì)胞毒性劑，更加優(yōu)選是一種烷化劑，最優(yōu)選是達卡巴嗪(DTIC)。其它類別的抗腫瘤的細(xì)胞抑制劑和細(xì)胞毒性劑，如CPT-11也可以用于與這些抗體組合，特別是在結(jié)腸直腸癌的治療中。但是在另一個實施方案中，治療劑也可以不是DTIC。
本文還考慮一種治療甲狀腺髓樣癌或非甲狀腺髓樣癌的方法，包括向受試者同時或按順序給予治療有效量的第一種III類抗CEA單克隆抗體或其片段和至少一種治療劑，以及裸的或偶聯(lián)的第二種人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段，并且任選在一種可藥用的載體中進行配制。優(yōu)選地，第一種III類抗CEA MAb是人源化的MN-14抗體或其片段。在一個實施方案中，第二種抗體或其片段(即第二治療劑)是癌相關(guān)的抗體或其片段，選自與TAG-72、EGFR、HER2/neu、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、BGP-1、EGP-2、AFP、Tn或另一種如上所述的這類與腫瘤相關(guān)的抗原反應(yīng)的單克隆抗體或其片段。在另一個實施方案中，第二種抗體或其片段可以是一種不同的IIII類抗CEA抗體或其片段，它是非阻斷性的并且不結(jié)合粒細(xì)胞或CD66a-d。
在另一個實施方案中，第二種抗CEA抗體是一種II類抗體或其片段，如在Hammarstrom和Kuroki中所述的那些，條件是它們不與粒細(xì)胞或CD66a-d結(jié)合?？贵w及其片段可以同時或按順序地給藥或與治療劑一起給藥。在一個實施方案中，第二種抗體或其片段可以是裸的也可以是偶聯(lián)到一種治療劑上的。
因此，本發(fā)明考慮按順序地或同時地與一種或多種治療劑一起給予鼠的、人源化的、嵌合的和人的抗CEA抗體及其片段，或作為多模式療法進行給藥。本發(fā)明的多模式療法包括使用一種III類抗CEA抗體或其片段和一種治療劑的免疫治療，補充以一種非偶聯(lián)的或偶聯(lián)的抗體、非偶聯(lián)的或偶聯(lián)的融合蛋白或其片段的給藥。例如，一種非偶聯(lián)的人源化的、嵌合的、鼠的或人的MN-14MAb或其片段可以與另一種裸的人源化的、鼠的、嵌合的或人的III類抗CEA抗體(如一種針對CEA上不同表位的并且也不結(jié)合粒細(xì)胞或CD66a-d的抗體)組合，或與一種人源化的、嵌合的、鼠的或人的III類抗CEA抗體的免疫偶聯(lián)物組合，所述免疫偶聯(lián)物偶聯(lián)到一種放射性同位素、化療劑、細(xì)胞因子、酶、酶抑制劑、激素或激素拮抗劑、金屬、毒素或其組合。裸的III類抗CEA抗體或其片段也可以與一種偶聯(lián)的或非偶聯(lián)的鼠融合蛋白、人源化的、嵌合的或人的III類抗CEA抗體組合。但是，用于聯(lián)合治療的III類抗CEA抗體彼此是非阻斷性的并且不能結(jié)合粒細(xì)胞或CD66a-d。優(yōu)選地，將裸的III類抗CEA抗體與第二種裸的或偶聯(lián)的抗體、融合蛋白或其片段按順序地或同時進行給藥。還要優(yōu)選地，用于聯(lián)合治療的抗體或抗體片段之一是一種裸的人源化的MN-14抗體或其片段。此外，作為裸的或偶聯(lián)的抗體、融合蛋白或其片段使用的第二抗體可以是一種人的、人源化的、嵌合的或鼠的II類CEA抗體或其片段，它是非阻斷性的并且不能結(jié)合粒細(xì)胞或CD66a-d。
在本文所述的方法中，受試者至少接受一種裸的III類抗CEA抗體或其片段，它是在一種治療劑之前、之后或與之一起給藥。優(yōu)選地，治療劑為用于標(biāo)準(zhǔn)的癌癥化療中的藥物，如卵巢癌中的紫杉烷或鉑藥物、結(jié)腸直腸癌中的奧沙利鉑藥物，用在胰腺癌和其它癌癥中的吉西他濱，或用在乳癌中的紫杉烷衍生物。COX-2抑制劑仍然代表另一類藥劑，它在癌癥化療中與典型的細(xì)胞毒性劑相組合而顯示活性，并且可以在本發(fā)明中以同樣的方式使用，但是組合以除了單獨的CEA抗體之外的藥劑以及組合以其它的癌癥相關(guān)的抗體。任選地，這些藥物可以與放射性標(biāo)記的抗體聯(lián)合使用，所述放射性標(biāo)記的抗體既有CEA抗體偶聯(lián)物也有與上述種類的其它相關(guān)抗體偶聯(lián)的放射性偶聯(lián)物。還優(yōu)選地，III類抗CEA抗體或其片段是MN-14抗體或其片段。還要優(yōu)選地，MN-14抗體或其片段是人源化的。
在一個優(yōu)選的實施方案中，裸的III類抗CEA抗體或其片段與達卡巴嗪(DTIC)、阿霉素、環(huán)磷酰胺或長春新堿，或這些的任意組合按順序地(之前或之后)或同時地進行給藥。例如，DTIC和環(huán)磷酰胺可以與裸的III類抗CEA抗體或其片段按順序地或同時地進行給藥。優(yōu)選地，抗CEA抗體或其片段是人源化的MN-14抗體或其片段。類似地，5-氟尿嘧啶組合以單獨的或組合以依立替康(CPT-11)的亞葉酸，是用于治療結(jié)腸直腸癌的一種療法。其它合適的聯(lián)合化療療法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的，如單獨用奧沙利鉑，或組合以這些其它的藥物。因此，根據(jù)所用的療法，與任何這些化療劑和裸III類抗CEA抗體或其片段的聯(lián)合療法都能夠用于治療MTC或非MTC。在甲狀腺髓樣癌中，仍然可以優(yōu)選其它化療劑，如一種烷化劑(例如，DTIC)，以及吉西他濱和其它更加新近類別的細(xì)胞毒性劑?；熕幬锖吐鉏II類抗CEA抗體或其片段可以以任何順序或一起給藥。換句話說，抗體和治療劑可以同時或按順序地進行給藥。在一個優(yōu)選的多模式療法中，在給予一種根據(jù)本發(fā)明的偶聯(lián)的或非偶聯(lián)的抗CEA抗體、融合蛋白或其片段之前、之后或同時給予化療藥物和裸III類抗CEA抗體或其片段。優(yōu)選地，III類抗CEA抗體或其片段為人源化MN-14抗體或其片段。
一種優(yōu)選的多模式療法的治療方案是給予hMN-14和DTIC 3天，僅在第7、14、21天給予hMN-14，并且隨后每21天給藥一次，持續(xù)12個月的治療期。hMN-14的劑量是0.5-15mg/kg體重/每次輸注，更加優(yōu)選2-8，并且依然更加優(yōu)選3-5mg/kg體重/每次輸注，而DTIC的劑量如目前臨床應(yīng)用的優(yōu)選劑量，但是也可以給予應(yīng)用的最大優(yōu)選劑量的2/3或更少，由此降低與藥物相關(guān)的副作用?？梢越o予重復(fù)的藥物循環(huán)，如每3-6個月，伴隨著持續(xù)的裸抗體治療，或伴隨著放射標(biāo)記的抗體、藥物偶聯(lián)的抗體，以及包括某些細(xì)胞因子如G-CSF和/或GM-CSF的不同方案，調(diào)整每種劑量從而使對于病人的毒性不被治療組合所增強。細(xì)胞因子生長因子，如G-CSF的應(yīng)用，可以使要給予甚至更高劑量的骨髓抑制劑，如放射性標(biāo)記的抗體或細(xì)胞毒性藥物成為可能，并且這些方案和劑量將根據(jù)病人的疾病狀態(tài)和以往的治療而對病人個別地進行調(diào)整，所有的疾病狀態(tài)和以往的治療都影響骨髓狀態(tài)和對于其它細(xì)胞毒性治療的耐受性。在一個優(yōu)選的實施方案中，以100-600毫克蛋白質(zhì)/劑/注射的劑量給予MN-14抗體或其片段。仍要優(yōu)選地，以300毫克蛋白質(zhì)/劑/注射的劑量給予MN-14抗體或其片段，優(yōu)選重復(fù)的劑量。
治療劑這里所列舉的治療劑是在與如本文所述的裸抗體分開給藥也有用的那些藥劑。合適的治療劑可以選自細(xì)胞毒性劑、放射性核素、免疫調(diào)節(jié)劑、光敏治療劑(如色素原或染料)、免疫偶聯(lián)物、另一種裸抗體、激素，或其組合。治療劑包括，例如化療藥物如長春花生物堿和其它生物堿、蒽環(huán)霉素、表鬼臼毒素、紫杉烷、抗代謝藥、烷化劑、抗生素、COX-2抑制劑、抗有絲分裂劑、抗血管生成劑和凋亡劑，特別是阿霉素、氨甲蝶呤、紫杉醇、CPT-11、喜樹堿，和來自這些和其它類別的抗癌劑的其它藥劑等。其它對于制備免疫偶聯(lián)物和抗體融合蛋白有用的癌癥化療藥物包括氮芥、烷基磺酸酯、亞硝基脲、三氮烯、葉酸類似物、COX-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、鉑配位化合物、激素、毒素(例如，核糖核酸酶、假單胞菌外毒素)等。根據(jù)要治療的惡性腫瘤的不同，優(yōu)選的治療劑包括DTIC、CPT-11、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、奧沙利鉑、阿霉素、環(huán)磷酰胺和長春新堿，或其組合。更優(yōu)選地，阿霉素、DTIC、環(huán)磷酰胺和長春新堿在本發(fā)明的組合物和方法中單獨或組合使用。因此，此處描述的組合物和方法可以包括一種以上的治療劑。合適的化療劑在REMINGTON′S PHARMACEUTICALSCIENCES，19th Ed.(Mack Publishing Co.1995)，和在GOODMAN ANDGILMAN′S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS，第七版.(MacMillan Publishing Co.1985)，以及這些出版物的修訂版本中進行了介紹。其它合適的化療劑，如實驗性的藥物，是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。
毒素，如假單胞菌外毒素，也可以與一種裸III類抗CEA抗體或其片段一起給藥。優(yōu)選地，III類抗CEA抗體或其片段是人源化的MN-14或其片段。其它在裸的III類抗CEA抗體或其片段給藥之前、之后或同時地非偶聯(lián)給藥的合適微生物、植物或動物毒素包括蓖麻毒素、相思豆毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、金葡菌腸毒素A、商陸抗病毒素、白樹毒素、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內(nèi)毒素。見，例如，Pastan等，Cell 47641(1986)，和Goldenberg，CA-ACancer Journalfor Clinicians 4443(1994)。其它的適用于本發(fā)明的毒素是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的并且在美國專利號6,077,499中公開，將它的全部內(nèi)容引入作為參考。這些可以源自，例如動物、植物和微生物來源，或化學(xué)地或重組地工程化設(shè)計的。該毒素可以是一種植物的、微生物的或動物的毒素，或其合成變體。
免疫調(diào)節(jié)劑，如細(xì)胞因子也可以與本發(fā)明的嵌合的、人源化的或人的III類抗CEA抗體或其片段非偶聯(lián)地進行給藥。如本文所用的，術(shù)語“免疫調(diào)節(jié)物”包括細(xì)胞因子、干細(xì)胞生長因子、淋巴毒素如腫瘤壞死因子(TNF)、造血因子如白介素(例如，白介素1(IL-1)、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12和IL-18)、集落刺激因子(例如，粒細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞-集落刺激因子(GM-CSF))、干擾素(例如，干擾素α、β或γ)、被指定為″S1因子″的干細(xì)胞生長因子、紅細(xì)胞生成素和血小板生成素。合適的免疫調(diào)節(jié)劑部分的例子包括IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、γ干擾素、TNF-α等。所以，受試者可以接受一種裸的III類抗CEA抗體或其片段以及一種分開給藥的細(xì)胞因子，所述細(xì)胞因子可以在裸的III類抗CEA抗體或其片段的給藥之前、同時或之后進行給藥。由于一些抗原也可以是免疫調(diào)節(jié)劑，例如，CD40抗原，也可以與一種裸III類抗CEA抗體或其片段聯(lián)合給藥，在裸抗體或抗體組合的給藥之前、同時或之后進行給藥。此外，適于治療患病組織的放射性核素包括，但不限于，32P、33P、47Sc、59Fe、64Cu、67Cu、75Se、77As、89Sr、90Y、99Mo、105Rh、109Pd、111Ag、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、161Tb、166Ho、169Er、177Lu、186Re、188Rc、189Re、194Ir、198Au、199Au、211Pb、212Pb，和213Bi、58Co、67Ga、80mBr、99mTc、103mRh、109Pt、111In、119Sb、161Ho、189mOs、192Ir、152Dy、211At、212Bi、223Ra、219Rn、215Po、211Bi、225Ac、221Fr、217At、213Bi、88Y和255Fm。優(yōu)選的放射性核素為125I、131I、90Y、177Lu和225Ac。還優(yōu)選地，放射性核素的能量為20-10,000keV。
可藥用的載體要遞送給受試者的裸的鼠、人源化、嵌合和人的III類抗CEA MAbs可以包含一種或多種可藥用的載體、一種或多種其它的成分，或這些的某種組合。
本發(fā)明的非偶聯(lián)的III類抗CEA抗體及其片段可以根據(jù)已知的制備藥用組合物的方法進行配制。優(yōu)選地，III類抗CEA抗體或其片段為MN-14抗體或其片段。滅菌的磷酸緩沖液鹽水是可藥用載體的一個例子。其它可接受的載體是本領(lǐng)域公知的。見，例如，Ansel等，PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS，第5版(Lea & Febiger 1990)，和Gennaro(編輯)，REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES，第18版(Mack Publishing Company1990)，及其修訂版。
可以將本發(fā)明的非偶聯(lián)的III類抗CEA抗體及其片段配制以進行靜脈內(nèi)給藥，所述靜脈內(nèi)給藥通過例如彈丸注射或持續(xù)輸注的方式進行。優(yōu)選地，III類抗CEA抗體或其片段為MN-14抗體或其片段。注射用的劑型可以以單位劑型存在，例如，與添加的防腐劑一起共存于安瓿瓶中或共存于多劑容器中。組合物可以采用在油狀或水性載體中的懸浮液、溶液或乳劑的形式，并且可以包含成型劑如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘撸谑褂们盎钚猿煞挚梢允欠勰┬问揭詷?gòu)成一種合適的載體，如滅菌的無熱原水。
可以利用其它的藥學(xué)方法控制藥劑和裸抗體或其片段作用的持續(xù)時間。控制釋放的制劑可以通過使用聚合物來復(fù)合或吸附裸抗體來制備。例如，生物相容性的聚合物包括聚(乙烯-共-醋酸乙烯酯)的基質(zhì)和硬脂酸二聚體和癸二酸的聚酐共聚物的基質(zhì)。Sherwood等，BiolTechnology 101446(1992)。從這種基質(zhì)中釋放抗體或其片段的速率依賴于免疫偶聯(lián)物或抗體的分子量、基質(zhì)內(nèi)抗體的量和分散顆粒的大小。Saltzman等，Biophys.R 55163(1989)；Sherwood等，見前。其它固體配藥形式在Ansel等，PHARMACEUTICAL DOSAGEFORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS，第5版(Lea & Febiger 1990)，和Gennaro(編輯)，REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES，第18版(Mack Publishing Company 1990)，及其修訂版中進行了介紹。
非偶聯(lián)的III類抗CEA抗體或其片段也可以以皮下方式或甚至通過其它腸胃外途徑對哺乳動物給藥。而且，給藥可以是通過連續(xù)輸注或通過單次或多次的彈丸注射。通常，給予人類裸抗體或其片段的劑量將根據(jù)病人的年齡、體重、身高、性別、一般醫(yī)學(xué)狀況和以往病史而變化。一般地，給接受者單次靜脈輸注大約0.5mg/kg-20mg/kg的裸抗體或其片段的劑量是合乎需要的，盡管根據(jù)情況要求可以給予更低或更高的劑量。這種劑量可以如需要進行重復(fù)，例如每月1次持續(xù)4-10個月，優(yōu)選每兩周一次持續(xù)16周，并且更加優(yōu)選每周一次持續(xù)8周。還可以以更少的頻率給藥，如每兩周一次持續(xù)幾個月或者以更大的頻率和/或持續(xù)更長時間地給藥。可以通過各種腸胃外途徑給藥，適當(dāng)調(diào)整劑量和方案。
為了治療的目的，向哺乳動物給予治療有效量的III類抗CEA抗體或其片段以與未處理的對照實驗相比減小腫瘤的大小。優(yōu)選地，III類抗CEA抗體或其片段是人源化的MN-14抗體或其片段。適于本發(fā)明的受試者通常是人，盡管還考慮非人的哺乳動物或動物受試者。如果給藥的量是生理上有意義的，則認(rèn)為給予的抗體制劑是“治療有效量”。如果一種藥劑的存在導(dǎo)致受體哺乳動物生理上可檢測的變化，那么這種藥劑是生理上有意義的。特定地，如果本發(fā)明的抗體制劑的存在引起抗腫瘤反應(yīng)，則它是生理上有意義的。生理上有意義的效應(yīng)還可以是受體哺乳動物中體液和/或細(xì)胞免疫的誘發(fā)。
盡管前面提到的是特別優(yōu)選的實施方案，可以理解，本發(fā)明并不受到如此限定。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，可以對公開的實施方案進行適當(dāng)?shù)母倪M，這種改進也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，本發(fā)明的范圍是通過權(quán)利要求限定的。在此引入所有引用的公開的文章、專利和專利申請的全文作為參考。
實施例1材料和方法單克隆抗體和細(xì)胞系從美國典型培養(yǎng)物保藏中心購買了一種人甲狀腺髓樣細(xì)胞系TT。該細(xì)胞單層生長于DMEM(Life Technologies，Gaithersburg，MD)中，所述DMEM添加了10％的胎牛血清、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100pg/ml)和L-谷氨酰胺(2mM)。在以胰蛋白酶、0.2％ EDTA分離后對細(xì)胞進行常規(guī)傳代。
MN-14是一種III類抗CEA MAb，與CEA反應(yīng)并且與正常的交叉反應(yīng)抗原NCA和胎糞抗原不反應(yīng)(Hansen等，Cancer，713478(1993))。這里用作陰性對照的MN-14和LL2，即抗CD22 MAb的人源化形式的構(gòu)建和特征描述之前曾進行過介紹。(Sharkey等，CancerRes.，555935s(1995)；Leung等，Mol.Immunol.，321416(1995))。P3x63Ag8(MOPC-21)是從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(Rockville，MD)獲得的一種不相關(guān)的小鼠骨髓瘤IgG1。通過蛋白A層析法純化抗體。
體內(nèi)研究通過皮下注射2×108個洗滌的TT細(xì)胞在雌性nu/nu小鼠(TaconicFarms，Germantown，NY)中增殖腫瘤，所述腫瘤已在組織培養(yǎng)中進行過增殖。將抗體經(jīng)由側(cè)尾靜脈靜脈注射進患腫瘤的動物內(nèi)。注射的抗體量和給藥時間的細(xì)節(jié)在每個研究的結(jié)果部分指出。結(jié)果作為個別動物的腫瘤體積以及平均值±SE給出。通過每周利用測徑器測量腫瘤的長度、寬度和深度來監(jiān)測腫瘤大小。將腫瘤體積計算為三種測量值的乘積。利用Student′s T檢驗進行統(tǒng)計學(xué)比較以比較腫瘤的體積和生長曲線下的面積。
實施例2.在注射TT(人甲狀腺髓樣)腫瘤細(xì)胞后2天遞送裸hMN-14和DTIC的聯(lián)合治療在前面的研究中，在腫瘤移植2天之后，利用100μg和25μg劑量的DTIC(第2、3和4天)和在第2天以及之后每周給予的250μg劑量的hMN-14，與TT聯(lián)合給予裸hMN-14和達卡巴嗪。100μg的DTIC劑量聯(lián)合以hMN-14比兩種單獨的治療都更加有效(圖1A)。但是，100μgDTIC的劑量產(chǎn)生太強的反應(yīng)，而25μg的劑量則無效。令人驚奇的是，單獨的MN-14和單獨的DTIC的效果并不是加和性的。換句話說，給定單獨用250μg hMN-14和單獨用100μgDTIC治療的結(jié)果，并不會預(yù)測250μg hMN-14和100μgDTIC的組合會具有這樣一種顯著的效果。見圖1A。
在本研究中，如以往研究中的一樣，治療開始于TT細(xì)胞注射2天之后。在第2，3，4，5，7，8，9，10，11，15和22天以100μg/劑給藥hMN-14，隨后每7天給藥一次直到動物死亡、腫瘤達到2.0cm3或研究由于人道原因而終止。DTIC的劑量為50和75μg/每劑，它介于以往的研究中給予的劑量之間。在60只裸鼠中皮下注射TT細(xì)胞。注射日為星期一，第0天。參見圖1B。
結(jié)果顯示腫瘤生長的顯著延遲是由單獨的MAb治療或單獨的化療引起的(圖1B)。75μg劑量的DTIC結(jié)合以這種hMN-14抗體的方案比兩種單獨的治療都顯著地更為有效(p＜0.02)。出乎意料的是，組合的DTIC和MAb治療不是加和性的。在第7周，與在只有75μg DTIC組中的1/10只小鼠和在未處理的和MAb組中的0/10只小鼠相比，在75μg DTI C和MAb組中的8/10只小鼠沒有明顯的腫瘤。
在第7周平均腫瘤體積為0.018±0.039cm3(75μg DTIC加MN-14)、0.284±0.197cm3(僅有75μg DTIC)、0.899±0.545cm3(僅有hMN-14)和1.578±0.959cm3(未處理的)。裸的抗CEA抗體和DTIC的聯(lián)合治療增強了單獨用抗體或化療的抗腫瘤效果，而無增長的毒性。組合型治療的優(yōu)勢是令人吃驚的。
給藥方案概述(1)在第2天到11天，除了星期六，以100μg/劑/小鼠每天給予hMN-14?？贵w治療與DTIC治療在同一天開始。在第2、3和4天以50和70μg/劑給予DTIC，所述劑量相應(yīng)于5％和7.5％的MTD。只給一個療程的DTIC。
組6組小鼠，每組包含10只小鼠。
組1未處理。
組2.在第2、3和4天以50μg/劑給予DTIC(星期三、星期四和星期五)。
組3.在第2、3和4天以75μg/劑給予DTIC。
組4.在第2、3和4天以50μg/劑給予DTIC，加上第2、3、4、5、7、8、9、10、11、15和22天的hMN-14(100μg/劑)，隨后每7天給藥一次直到動物死亡，腫瘤達到2.0cm3的體積，或研究終止。
組5.在第2、3和4天以25μg/劑給予DTIC，加上第2、3、4、5、7、8、9、10、11、15和22天的hMN-14(100μg/劑)，隨后每7天給藥一次直到動物死亡，腫瘤達到2.0cm3的體積，或研究終止。
組6.在第2、3、4、5、7、8、9、10、11、15和22天給予hMN-14(確定100μg/劑)，隨后每7天給藥一次直到動物死亡，腫瘤達到2.0cm3的體積，或研究終止。
監(jiān)測動物的存活。每周測量腫瘤和體重。
方法在第二天，將2,200mg/管形瓶的DTIC用19.7ml滅菌水進行重構(gòu)用于注射。得到的溶液包含10mg/ml的達卡巴嗪，pH范圍為3.0-4.0。根據(jù)需要利用該溶液進行下面所述的稀釋并且將剩余物以1ml的小份進行冷凍作隨后的使用。
組2和4制備5ml 0.5mg/ml的溶液。靜脈注射100μl的0.5mg/ml/小鼠溶液。
組3和5制備5ml 0.75mg/ml的溶液。靜脈注射100μl的0.75mg/ml/小鼠溶液。
估計hMN-14的量。將100μl的1mg/ml hMN-14腹膜內(nèi)注射于組4、5和6中的小鼠中。
實施例3.在人MTC異種移植模型中的放射性免疫療法研究申請人開發(fā)了一種利用生產(chǎn)CEA和降鈣素的命名為TT的人MTC細(xì)胞系的人MTC異體移植物，使用放射性標(biāo)記的抗CEA MAbs進行MTC的實驗放射性免疫療法的模型([Stein，1999 &num；82]，見附錄)。通過皮下接種2×108個細(xì)胞在裸鼠中建立MTC腫瘤并且讓它在注射MAbs之前生長2-5周。隨后以MN-14進行生物分布和RAIT研究，其為流式細(xì)胞計數(shù)法顯示與TT細(xì)胞反應(yīng)。在這些研究中都利用Ag8和Mu-9作為陰性對照MAbs。利用約0.08g的較小腫瘤的初步研究顯示注射131I-MN-14之后7天，與只有12.6％ID/g的共注射125I-Ag8對照相比，注射劑量/克腫瘤的百分比(％ID/g)是68.9％。使用更大的腫瘤(在裸鼠中生長五個星期；平均腫瘤重量＝0.404g)，在注射125I-MN-14之后7天觀察到的腫瘤的ID/g％是12.4％。但是，共注射的88Y-MN-14的ID/g％是50.5％，或比125I-MN-14高4.1倍。用88Y-MN-14的腫瘤與血液、肺、肝、脾和腎的比率也比用125I-MN-14的更高，而用這兩種藥劑的腫瘤與骨的比率相等。當(dāng)利用125I-MN-14和88Y-MN-14生物分布數(shù)據(jù)來分別預(yù)測用131I-MN-14和90Y-MN-14的腫瘤放射劑量時，在90Y-MN-14的MTD上遞送的放射吸收劑量(150μCi)比在131I-MN-14的MTD上遞送的放射吸收劑量(275μCi)高1.75倍(4900cGy對2800cGy)。
在該模型中的治療研究確定90Y-MN-14是比131I-MN-14更好的治療劑。在5周大的腫瘤中，與用131I-MN-14僅有腫瘤生長延遲相比在90Y-MN-14的MTD上見到了5周的腫瘤生長完全抑制(圖2)。而且，當(dāng)治療較小的2周大的腫瘤時，在90Y-MN-14的MTD上見到了平均60％的腫瘤體積減小，伴隨著一些完全的腫瘤消退。與在未治療動物或那些以對照MAbs治療的MTD中的相對快速的腫瘤生長相比，這些抗腫瘤效應(yīng)是非常顯著的。因而，我們的臨床前研究顯示這種動物模式是非常適于以抗CEA MAbs進行的實驗性RAIT的。
與131I相比90Y較長的路徑長度和較高能量，加上90Y被靶細(xì)胞保持較長時間的事實導(dǎo)致了遞送給腫瘤提高的放射劑量并且因而導(dǎo)致了在等毒性下更加有效的療效。如果我們的用殘余131I(refs)的結(jié)果可以推廣到MTC中的MN-14，那么我們可以預(yù)期殘余131I在這里研究的大小的腫瘤中與90Y至少同樣有效，并且很可能在處置微轉(zhuǎn)移疾病中或作為手術(shù)后的輔助治療具有優(yōu)勢。
實施例4化療對四種藥物，阿霉素、DTIC(達卡巴嗪)、環(huán)磷酰胺和長春新堿，單獨地或組合地評估它們在裸鼠中TT MTC異種移植物生長的效應(yīng)。基于每種藥物在臨床上以mg/m2為基礎(chǔ)對人給藥的劑量來選擇劑量。監(jiān)測動物的存活，每周測量腫瘤的體積和體重。圖3顯示本研究中動物的腫瘤生長曲線。通過個別地給藥，阿霉素、DTIC和環(huán)磷酰胺產(chǎn)生了顯著的生長抑制，但長春新堿沒有產(chǎn)生顯著的生長抑制，盡管由DTIC引起的生長延遲比其它藥物的顯著更長。對于每組加倍的大致平均時間為未處理的，1周；阿霉素，2.5周；DTIC，7.5周；環(huán)磷酰胺，3周；和長春新堿，1.5周。阿霉素和DTIC的組合與單獨的兩種藥物相比提高了效力，將加倍的平均時間增至10周。但是，與單獨的DTIC相比，阿霉素和DTIC組合的提高的效力沒有達到95％的置信水平。AUC比較的P值如下阿霉素+DTIC對阿霉素，P＜0.01，而阿霉素+DTIC對DTIC，P＜0.1。4種藥物的療法將加倍的平均時間延長至12周；對于阿霉素和DTIC二者的比較P＜0.01。
個別藥物對未處理組的存活數(shù)據(jù)的對數(shù)秩分析僅對DTIC和環(huán)磷酰胺顯示了顯著的差異。分別與DTIC和環(huán)磷酰胺治療組的11周和8周相比，未處理對照組的平均存活時間為4周，并且藥物組合大于12周。如通過體重?fù)p失所測量的毒性對于所有研究組都在可接受的范圍之內(nèi)。在以所有4種藥物處理的小鼠中的治療1周之后，觀察最大重量損失，體重?fù)p失在3-12％范圍之間。
實施例5.聯(lián)合放射免疫治療和化療進行MTC的治療RAIT加4種藥物組合通過將在未處理小鼠中的TT生長與上述使用4種藥物(阿霉素、DTIC、環(huán)磷酰胺和長春新堿)方案治療的小鼠相比較，來評估把用90Y抗CEA MAb MN-14進行的RAIT和4種藥物組合組合起來的效果，RAIT的100％最大耐受劑量(MTD)(105μCi)、RAIT的50％ MTD，以及RAIT的50％ MTD組合以4種藥物處理的那些。圖4顯示在給予各種治療方案的小鼠中TT腫瘤的生長曲線。與未治療的動物相比，所有四個治療組都在效力上產(chǎn)生了顯著的提高。鑒于未治療動物中大致的平均加倍時間為1.5周，以4種藥物進行的化療將平均加倍時間延長至10周而單獨的RAIT分別于50％和100％MTD時得出了4周和8周的加倍時間。如所預(yù)期的，100％RAIT組和4種藥物治療方案組二者都比50％RAIT組顯著地更好。最重要的是，與兩種療法相比，將50％RAIT和4種藥物方案組合起來改善了結(jié)果，進一步將平均加倍時間延長至12.5周。對于聯(lián)合治療與4種藥物方案的比較來說，P＜0.02，對于與100％RAIT的比較來說，P＜0.01。
治療后1周的平均重量損失(nadir)對于100％ RAIT和4種藥物方案來說是9％，但是對于組合的50％ RAIT加上4種藥物方案來說是15％。此外，在組合療法組，一只動物死于治療3周之后而第二只動物有大于20％的重量損失。因而，該治療超出了最大耐受劑量。
RAIT加2種藥物方案的化療還在這種MTC異種移植物模型中，評估把用90Y抗CEA MAb MN-14進行的RAIT和2種藥物組合結(jié)合起來的效果，所述2種藥物組合由阿霉素和DTIC組成。各組的大致加倍時間為未處理的，1.5周；阿霉素加DTIC，8周；RAIT的MTD，10周；結(jié)合以25-75％的2種藥物方案的RAIT的MTD，大于12周。因而，單獨的RAIT比2種藥物方案更加有效，并且最為顯著地，將RAIT和2種藥物方案組合起來與任一種單獨的療法相比產(chǎn)生了改善的結(jié)果。對于結(jié)合治療與2種藥物方案的比較來說，P＜0.005，對于與單獨的RAIT的比較來說，P＜0.02。
對于各組來說治療后(nadir)1-2周的平均重量損失為2-8％，除了100％RAIT加75％的2種藥物化療組在第2周時觀察到13％的重量損失以外。此外，在該聯(lián)合治療組，兩只動物死于治療后3-4周并且一只經(jīng)歷了大于20％的重量損失。因而，向100％RAIT的治療中加入75％劑量水平的阿霉素和DTIC超出了MTD，而該2種藥物組合的50％與100％RAIT組合則可以被耐受。
RAIT加阿霉素由于以往的出版物已經(jīng)報道過在該模型中RAIT與阿霉素的組合(Stein等，Clin CancerRes.，53199s(1999)；Behr等，CancerRes.575309(1997))，可以對RAIT加阿霉素方案作直接的比較。還對RAIT加4種藥物方案作直接的比較。與未處理的動物相比，所有的治療都產(chǎn)生了顯著的效力。RAIT加阿霉素的平均加倍時間為12周。在本研究中，將RAIT的全MTD與50％的阿霉素和DTIC或4種藥物方案組合起來將平均加倍時間延長至15周，在這兩組之間沒有統(tǒng)計學(xué)上的顯著性差異。在這些研究中觀察了客觀反應(yīng)的基本數(shù)目。在以RAIT加阿霉素治療后有3只動物完全反應(yīng)，2只動物部分反應(yīng)，并且在全部10只小鼠中，5只動物病情穩(wěn)定至少4周。RAIT加2種藥物方案將客觀反應(yīng)增至12只動物的10只有完全反應(yīng)和2只有部分反應(yīng)，而RAIT加4種藥物治療方案導(dǎo)致9只小鼠的7只小鼠完全反應(yīng)和2只部分反應(yīng)。
RAIT加DTIC由于DTIC是在單獨給藥時最有效的化療劑，所以通過與RAIT加阿霉素和DTIC的效力來評估RAIT加DTIC的效力。將阿霉素從治療方案中刪去對于臨床應(yīng)用來說將是重要的，以便避免該藥的額外毒性，特別是已知的心臟毒性。如圖5中所示的，兩個接受化療聯(lián)合RAIT的研究組，阿霉素和DTIC或只有DTIC，彼此大致上等同，二者都比單獨形式的治療更有效。AUC比較的P值如下RAIT+DTIC對DTIC，P＜0.01，RAIT+DTIC對RAIT，P＜0.05。分別與單獨的DTIC和RAIT 7.5周和9周相比，RAIT加DTIC以及RAIT加阿霉素和DTIC組的平均加倍時間分別為15.5周和14周。因而，RAIT加DTIC的聯(lián)合形式的治療將平均加倍時間在DTIC化療之上延長了100％。通過AUC或時序分析在RAIT加DTIC以及RAIT加阿霉素和DTIC組之間沒有觀察到顯著的差異。
實施例6用裸的抗CEA單獨進行的研究用裸hMN-14進行的治療為了研究未標(biāo)記的hMN-14對于在裸鼠中TT腫瘤生長的影響，在腫瘤細(xì)胞注射之后的一天或十一天，通過靜脈內(nèi)給藥單次注射hMN-14。圖6顯示與未處理的對照相比，用0.5mg hMN-14/小鼠處理的動物的腫瘤生長曲線。未處理組包含16只動物；兩個處理組每組包含10只動物。在未處理組和腫瘤注射后1天的處理組之間觀察到顯著的生長延遲。從第32天到93天觀察到平均腫瘤大小的顯著性差異(p＜0.05)。與未處理動物相比，在MN-14處理組中于第32天和60天之間有腫瘤大小的64-70％的抑制。在第11天組和未處理組的平均腫瘤大小之間沒有顯著的差異。通過在生長曲線下的t檢驗分析還見到腫瘤生長的顯著延遲。對于與腫瘤注射后1天處理的組相比較的未處理組來說，P＜0.05，但是對于腫瘤注射后11天處理的組來說并非如此。
治療的特異性圖7總結(jié)了對于抗腫瘤反應(yīng)的特異性研究的結(jié)果。將裸鼠中未標(biāo)記的hMN-14對于TT腫瘤生長的效果與陰性對照人源化MAb、hLL2(抗CD22)和鼠MN-14的效果相比較。在TT細(xì)胞之后的一天給藥(靜脈內(nèi)地)MAbs(0.5mg/小鼠)，隨后給予三次每周一次的0.5mg/小鼠的劑量。研究15只動物的組。在第一個研究中觀察到的緣于以0.5mghMN-14治療的生長抑制在本研究中得到確認(rèn)。從第23天開始，觀察到在hMN-14和未處理組之間平均腫瘤大小的顯著性差異(p＜0.05)。在第37天用hMN-14處理的組中的平均腫瘤體積是未處理的對照動物的42.7％。以鼠MN-14進行的處理產(chǎn)生與hMN-14相似的結(jié)果。以hLL2進行的處理沒有放慢腫瘤生長；相反在生長速率上有小的(不顯著的)增長。例如，與未處理的40％和hLL2處理組的29％相比，在第37天87％的用hMN-14處理的腫瘤小于0.5cm3。對在生長曲線以下面積的T檢驗分析顯示在未處理組和用hMN-14或鼠MN-14處理組之間的顯著性差異(p＜0.05)，但是與hLL2處理的組卻沒有顯著性差異。此外，hMN-14組顯著不同于hLL2組，但是與鼠MN-14處理的動物卻沒有顯著的不同。
劑量的效果為了研究未標(biāo)記的hMN-14的劑量對于裸鼠中TT腫瘤生長的影響，對逐漸增加的hMN-14劑量進行了評估。在TT細(xì)胞1天后給予多個抗體劑量，隨后每周一次直到研究終止。在六只小鼠的組中每周的劑量在0.125mg到2.0mg hMN-14/小鼠的范圍內(nèi)。在未處理組和所有處理組之間觀察到平均腫瘤大小和生長曲線以下面積的顯著性差異(圖8)。例如，在第21天和第49天之間兩個最低hMN-14處理組中的平均腫瘤體積是未處理動物中腫瘤大小的27-40％。用較低劑量0.125mg和0.25mg進行的處理似乎比用較高劑量進行的處理更有效，但差異沒有達到統(tǒng)計學(xué)上的顯著性。
時間測定通過變化MAb的給藥日期來評估介于TT注射和hMN-14的起始劑量之間的時間對于裸鼠中TT腫瘤生長的影響。在TT細(xì)胞之后1、3或7天給藥hMN-14(0.25mg)，隨后每周一次直到研究結(jié)束。研究7-8只動物的組。結(jié)果總結(jié)于圖9中。在未處理組和所有三個處理組之間觀察到平均腫瘤大小的顯著性差異(p＜0.05)。但是，在未處理的小鼠和第7天處理組之間平均腫瘤大小的差異僅僅在一個時間點，第28天是顯著的。第1天處理的小鼠在第21-77天產(chǎn)生顯著的差異，而第3天處理的小鼠在第21-70天產(chǎn)生顯著的差異。對生長曲線下的面積的T檢驗分析顯示，對于在TT細(xì)胞給藥之后1天或3天用hMN-14處理的組顯示與未處理組相比的顯著的生長抑制。該分析對于在未處理組和在第7天處理的組之間的差異沒有達到95％的置信限(在第五周p＝0.057)。
實施例7組合的裸的抗CEA加DTIC對MTC的治療為了研究裸hMN-14是否能夠增強DTIC的效力，給予長有TT細(xì)胞的裸小鼠以DTIC(75μg/劑)，聯(lián)合以一段未標(biāo)記的MAb的療程。在皮下注射TT細(xì)胞后2天開始，連續(xù)3天以75μg/劑給藥DTIC作為一個療程。hMN-14 MAb治療與第一劑DTIC開始于同一天，在首先的兩周以100μg/劑/天持續(xù)5天，隨后每周兩次。這些MAb療法或單獨的化療引起腫瘤生長的顯著延遲(圖10)。75μg劑量的DTIC組合以本方案的hMN-14比兩種單獨的治療顯著地更加有效(P＜0.02)。7周后，與在僅有75μgDTIC組中的1/10只和在未處理組和只有MAb組中的0/10只相比，在75μgDTIC+MAb組中的8/10只小鼠沒有可觸及的腫瘤。第7周時的平均腫瘤體積為0.018+0.039cm3(75μgDTIC+hMN-14)、0.284+0.197cm3(75μg DTIC)、0.899+0.545cm3(hMN-14)和1.578+0.959cm3(未處理的)。
抗CEA MAb MN-14已顯示了出乎意料的在MTC中的抗腫瘤效力，而不必偶聯(lián)到一種細(xì)胞毒性劑上。在3周開始并且至少持續(xù)2個月，在hMN-14處理的和未處理的組之間觀察到平均腫瘤大小的差異。用同種型匹配的陰性對照MAbs進行的處理并不減慢腫瘤的生長。這是用“裸”抗CEA MAb抑制腫瘤的第一個證據(jù)。但是，裸的抗CEA MAb與DTIC的聯(lián)合治療增強了單獨的抗體或化療的抗腫瘤效果。聯(lián)合形式治療的優(yōu)勢支持將CEA-MAb療法并入化療方案中以進行MTC控制。MN-14的腫瘤細(xì)胞殺傷機理是未知的，可能涉及一些機理。此處提出的研究將提供理解這些觀察結(jié)果的基礎(chǔ)以及支持臨床試驗的基礎(chǔ)。
盡管前面提到的是特別優(yōu)選的實施方案，可以理解，本發(fā)明并不受到如此限定。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，可以對公開的實施方案進行適當(dāng)?shù)母倪M，這種改進也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，本發(fā)明的范圍是通過權(quán)利要求限定的。
在此引入所有引用的公開的文章、專利和專利申請的全文作為參考。
權(quán)利要求
1.一種包含至少一種III類抗CEA單克隆抗體(MAb)或其片段和至少一種治療劑的組合物。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的III類抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述的人源化的MAb基本上保留了鼠III類抗CEAMAb的III類抗CEA結(jié)合特異性。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的III類抗CEA MAb或其片段是一種嵌合的MAb，其中所述嵌合的MAb基本上保留了鼠III類抗CEAMAb的III類抗CEA結(jié)合特異性。
4.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的III類抗CEA MAb或其片段是完全的人MAb，其中所述完全的人MAb基本上保留了鼠III類抗CEAMAb的III類抗CEA結(jié)合特異性。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的III類抗CEA單克隆抗體或其片段是MN-14抗體或其片段。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述的MN-14單克隆抗體或其片段包含鼠MN-14單克隆抗體的互補決定區(qū)(CDRs)，其中所述MN-14抗體的輕鏈可變區(qū)的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；并且所述的III類抗CEA抗體的重鏈可變區(qū)的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。
7.權(quán)利要求5的組合物，其中所述的MN-14單克隆抗體與CEA反應(yīng)，但不與正常的交叉反應(yīng)性抗原(NCA)和胎糞抗原(MA)反應(yīng)。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述的MN-14單克隆抗體或其片段是人源化的MN-14抗體或其片段。
9.權(quán)利要求7的組合物，其中所述的MN-14單克隆抗體或其片段是嵌合的MN-14抗體或其片段。
10.權(quán)利要求7的組合物，其中所述的MN-14單克隆抗體或其片段是完全的人MN-14抗體或其片段。
11.權(quán)利要求8的組合物，其中所述的人源化MN-14抗體或其片段的輕鏈和重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)(FRs)包含至少一個取代自鼠MN-14單克隆抗體的相應(yīng)FRs的氨基酸。
12.權(quán)利要求11的組合物，其中所述的人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自所述鼠MN-14抗體的所述相應(yīng)FR的氨基酸，所述氨基酸選自圖14A-C或圖15B(hMN-14)或圖16B的鼠重鏈可變區(qū)(KLHuVhAIGA)的氨基酸殘基24、28、30、48、49、74和94。
13.權(quán)利要求11的組合物，其中所述的人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自所述鼠MN-14輕鏈可變區(qū)的所述相應(yīng)FR的氨基酸。
14.權(quán)利要求8的組合物，其中所述的人源化MN-14抗體或其片段包含如圖13A或圖15A或圖16A中所示的輕鏈可變區(qū)，以及圖14A-C中所示標(biāo)明為KLHuVhAIGA的或圖15B(hMN-14)或圖16B中所示的重鏈可變區(qū)。
15.權(quán)利要求9的組合物，其中所述的嵌合的MN-14抗體或其片段包含如圖13A中所示標(biāo)明為鼠MN-14Vκ的輕鏈可變區(qū)和圖14A-C中標(biāo)明為鼠MN-14VH的重鏈可變區(qū)。
16.權(quán)利要求1-15的任意一項的組合物，其中所述片段選自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和scFv。
17.權(quán)利要求1-15的任意一項的組合物，其中所述的治療劑選自裸抗體、細(xì)胞毒性劑、藥物、放射性核素、免疫調(diào)節(jié)劑、光敏治療劑、免疫偶聯(lián)物、激素或其組合，任選配制于一種可藥用的載體中。
18.權(quán)利要求17的組合物，其中所述的其組合包含長春新堿、阿霉素、DTIC和環(huán)磷酰胺。
19.權(quán)利要求17的組合物，其中所述的治療劑是裸抗體或免疫偶聯(lián)物。
20.權(quán)利要求19的組合物，其中所述的裸抗體或所述的免疫偶聯(lián)物的抗體部分包含一種人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段，所述的單克隆抗體或其片段選自與EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF或其它腫瘤血管發(fā)生抗原、Ga733或其組合反應(yīng)的單克隆抗體或其片段。
21.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的片段選自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和scFv。
22.權(quán)利要求1-15的任意一項的組合物，其中所述的治療劑不是DTIC。
23.一種治療非甲狀腺髓樣癌的方法，包括同時或按順序地給予受試者治療有效量的III類抗CEA抗體或其片段和至少一種治療劑，它們?nèi)芜x配制于一種可藥用的載體中。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述的III類抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述人源化的MAb基本上保留了鼠III類抗CEA MAb的III類抗CEA結(jié)合特異性。
25.權(quán)利要求23的方法，其中所述的III類抗CEA MAb或其片段是嵌合的MAb，其中所述嵌合的MAb基本上保留了鼠III類抗CEA MAb的III類抗CEA結(jié)合特異性。
26.權(quán)利要求23的方法，其中所述的III類抗CEA單克隆抗體或其片段是MN-14抗體或其片段。
27.權(quán)利要求23的方法，其中所述的MN-14單克隆抗體或其片段包含鼠MN-14單克隆抗體的互補決定區(qū)(CDRs)，其中所述MN-14抗體的輕鏈可變區(qū)的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；所述III類抗CEA抗體的重鏈可變區(qū)的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述的MN-14單克隆抗體與CEA反應(yīng)，但不與正常的交叉反應(yīng)性抗原(NCA)和胎糞抗原(MA)反應(yīng)。
29.權(quán)利要求28的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是人源化的MN-14抗體或其片段。
30.權(quán)利要求28的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是嵌合的MN-14抗體或其片段。
31.權(quán)利要求28的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是完全的人MN-14抗體或其片段。
32.權(quán)利要求29的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段的輕鏈和重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)(FRs)包含至少一個取代自鼠MN-14單克隆抗體的相應(yīng)FRs的氨基酸。
33.權(quán)利要求32的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自所述鼠MN-14抗體的所述相應(yīng)FR的氨基酸，所述氨基酸選自圖14A-C標(biāo)明為KLHuVhAIGA或圖15B(hMN-14)或圖16B的鼠重鏈可變區(qū)的氨基酸殘基24、28、30、48、49、74和94。
34.權(quán)利要求32的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自所述鼠MN-14輕鏈可變區(qū)的所述相應(yīng)FR的氨基酸。
35.權(quán)利要求32的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含如圖13A或15A(hMN-14)或16A中所示的輕鏈可變區(qū)，以及圖14A-C中所示標(biāo)明為KLHuVhAIGA的或圖15B(hMN-14)或圖16B中所示的重鏈可變區(qū)。
36.權(quán)利要求23-35的任意一項的方法，其中所述的片段選自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和sFv。
37.權(quán)利要求23-35的任意一項的方法，其中所述的治療劑選自人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段，所述的單克隆抗體或其片段選自II類抗CEA單克隆抗體、III類抗CEA單克隆抗體及其片段，并且以治療有效量同時地或按順序地進行給藥。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述抗體或其片段是裸的或偶聯(lián)到另一種治療劑上的抗體。
39.權(quán)利要求23-35的任意一項的方法，其中所述的治療劑選自裸抗體、細(xì)胞毒性劑、藥物、放射性核素、免疫調(diào)節(jié)劑、光敏治療劑、CEA或非CEA抗體的免疫偶聯(lián)物、激素或其組合，任選配制于一種可藥用的載體中。
40.權(quán)利要求39的方法，其中所述的治療劑選自與EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF或其它腫瘤血管發(fā)生抗原、Ga733及其組合反應(yīng)的人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段，并且以治療有效量同時地或按順序地對所述的受試者進行給藥。
41.權(quán)利要求40的方法，其中所述的抗體或其片段是裸的或被偶聯(lián)到另一種治療劑上。
42.權(quán)利要求23-35的任意一項的方法，其中所述的治療劑不是DTIC。
43.權(quán)利要求39的方法，其中所述的細(xì)胞毒性劑是一種藥物或毒素。
44.權(quán)利要求43的方法，其中所述的藥物具有選自抗有絲分裂劑、烷化劑、抗代謝物、抗血管生成劑、凋亡劑、生物堿、COX-2和抗生素及其組合的藥理學(xué)特性。
45.權(quán)利要求43的方法，其中所述的藥物選自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亞硝基脲、三氮烯、葉酸類似物、蒽環(huán)霉素、紫杉烷、COX-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、抗代謝物、抗生素、酶、表鬼臼毒素、鉑配位化合物、長春花生物堿、取代的脲、甲肼衍生物、腎上腺皮質(zhì)抑制劑、拮抗劑、內(nèi)皮他丁、紫杉醇、喜樹堿、阿霉素和它們的類似物及其組合。
46.權(quán)利要求43的方法，其中所述毒素為微生物的、植物的或動物的毒素，選自蓖麻毒素、相思豆毒素、α毒素、皂草毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、葡萄球菌腸毒素A、商陸抗病毒素、白樹毒素、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內(nèi)毒素。
47.權(quán)利要求39的方法，其中所述的免疫調(diào)節(jié)劑選自細(xì)胞因子、干細(xì)胞生長因子、淋巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、干擾素(IFN)、干細(xì)胞生長因子、紅細(xì)胞生成素、血小板生成素及其組合。
48.權(quán)利要求47的方法，其中所述的淋巴毒素是腫瘤壞死因子(TNF)，所述的造血因子為白介素(IL)，所述的集落刺激因子為粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)或粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)，所述的干擾素是干擾素α、β或γ，所述的干細(xì)胞生長因子被指定為″S1因子″。
49.權(quán)利要求47的方法，其中所述的免疫調(diào)節(jié)劑包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、γ干擾素、TNF-α或其組合。
50.權(quán)利要求39的方法，其中所述的放射性核素的能量為20-10,000keV。
51.權(quán)利要求50的方法，其中所述的放射性核素選自125I、131I、90Y、88Y、225Ac、177Lu、188Re、186Re及其組合。
52.權(quán)利要求39的方法，其中所述的光敏治療劑為一種色素原或染料。
53.權(quán)利要求44的方法，其中所述烷化劑為達卡巴嗪。
54.權(quán)利要求53的方法，其中以100-600毫克蛋白質(zhì)/劑/注射的劑量給予所述MN-14抗體或其片段。
55.權(quán)利要求54的方法，其中以300毫克蛋白質(zhì)/劑/注射的劑量給予所述MN-14抗體或其片段。
56.一種治療甲狀腺髓樣癌的方法，包括同時或按順序地給予受試者治療有效量的III類抗CEA抗體或其片段和至少一種治療劑，它們?nèi)芜x配制于一種可藥用的載體中。
57.權(quán)利要求56的方法，其中所述的III類抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述人源化的MAb基本上保留了鼠III類抗CEA MAb的III類抗CEA結(jié)合特異性。
58.權(quán)利要求56的方法，其中所述的III類抗CEA MAb或其片段是嵌合的MAb，其中所述嵌合的MAb基本上保留了鼠III類抗CEA MAb的III類抗CEA結(jié)合特異性。
59.權(quán)利要求56的方法，其中所述的III類抗CEA單克隆抗體或其片段是MN-14抗體或其片段。
60.權(quán)利要求59的方法，其中所述的MN-14單克隆抗體或其片段包含鼠MN-14單克隆抗體的互補決定區(qū)(CDRs)，其中所述MN-14抗體的輕鏈可變區(qū)的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；所述III類抗CEA抗體的重鏈可變區(qū)的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。
61.權(quán)利要求60的方法，其中所述的MN-14單克隆抗體與CEA反應(yīng)，但不與正常的交叉反應(yīng)性抗原(NCA)和胎糞抗原(MA)反應(yīng)。
62.權(quán)利要求61的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是人源化的MN-14抗體或其片段。
63.權(quán)利要求61的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是嵌合的MN-14抗體或其片段。
64.權(quán)利要求61的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是完全的人MN-14抗體或其片段。
65.權(quán)利要求62的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段的輕鏈和重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)(FRs)包含至少一個取代自鼠MN-14單克隆抗體的相應(yīng)FRs的氨基酸。
66.權(quán)利要求65的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自所述鼠MN-14抗體的所述相應(yīng)FR的氨基酸，所述氨基酸選自圖14A-C或15B(MN-14)的鼠重鏈可變區(qū)的氨基酸殘基24、28、30、48、49、74和94。
67.權(quán)利要求65的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自所述鼠MN-14輕鏈可變區(qū)的所述相應(yīng)FR的氨基酸。
68.權(quán)利要求65的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含如圖13A或15A(hMN-14)或16A中所示的輕鏈可變區(qū)，以及圖14A-C或15B(hMN-14)或16B中所示的重鏈可變區(qū)。
69.權(quán)利要求56-68的任意一項的方法，其中所述的片段選自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和sFv。
70.權(quán)利要求56-68的任意一項的方法，其中所述的治療劑選自人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段，所述的單克隆抗體或其片段選自II類抗CEA單克隆抗體、III類抗CEA單克隆抗體及其片段，并且以治療有效量同時地或按順序地進行給藥。
71.權(quán)利要求70的方法，其中所述抗體或其片段是裸的或偶聯(lián)到另一種治療劑上的抗體。
72.權(quán)利要求56-68的任意一項的方法，其中所述的治療劑選自裸抗體、細(xì)胞毒性劑、藥物、放射性核素、免疫調(diào)節(jié)劑、光敏治療劑、CEA或非CEA抗體的免疫偶聯(lián)物、激素或其組合，任選配制于一種可藥用的載體中。
73.權(quán)利要求72的方法，其中所述的治療劑選自與EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF或其它腫瘤血管發(fā)生抗原、Ga733及其組合反應(yīng)的人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段，并且以治療有效量同時地或按順序地對所述的受試者進行給藥。
74.權(quán)利要求73的方法，其中所述的抗體或其片段是裸的或被偶聯(lián)到另一種治療劑上。
75.權(quán)利要求56-68的任意一項的方法，其中所述的治療劑不是DTIC。
76.權(quán)利要求72的方法，其中所述的細(xì)胞毒性劑是一種藥物或毒素。
77.權(quán)利要求72的方法，其中所述的藥物具有選自抗有絲分裂劑、烷化劑、抗代謝物、抗血管生成劑、凋亡劑、生物堿、COX-2和抗生素及其組合的藥理學(xué)特性。
78.權(quán)利要求76的方法，其中所述的藥物選自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亞硝基脲、三氮烯、葉酸類似物、蒽環(huán)霉素、紫杉烷、COX-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、抗代謝物、抗生素、酶、表鬼臼毒素、鉑配位化合物、長春花生物堿、取代的脲、甲肼衍生物、腎上腺皮質(zhì)抑制劑、拮抗劑、內(nèi)皮他丁、紫杉醇、喜樹堿、阿霉素和它們的類似物及其組合。
79.權(quán)利要求76的方法，其中所述毒素為微生物的、植物的或動物的毒素，選自蓖麻毒素、相思豆毒素、α毒素、皂草毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、葡萄球菌腸毒素A、商陸抗病毒素、白樹毒素、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內(nèi)毒素。
80.權(quán)利要求72的方法，其中所述的免疫調(diào)節(jié)劑選自細(xì)胞因子、干細(xì)胞生長因子、淋巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、干擾素(IFN)、干細(xì)胞生長因子、紅細(xì)胞生成素、血小板生成素及其組合。
81.權(quán)利要求80的方法，其中所述的淋巴毒素是腫瘤壞死因子(TNF)，所述的造血因子為白介素(IL)，所述的集落刺激因子為粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)或粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)，所述的干擾素是干擾素α、β或γ，所述的干細(xì)胞生長因子被指定為″S1因子″。
82.權(quán)利要求72的方法，其中所述的免疫調(diào)節(jié)劑包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、γ干擾素、TNF-α或其組合。
83.權(quán)利要求72的方法，其中所述的放射性核素的能量為20-10,000keV。
84.權(quán)利要求83的方法，其中所述的放射性核素選自125I、131I、90Y、88Y、225Ac、177Lu、188Re、186Re及其組合。
85.權(quán)利要求72的方法，其中所述的光敏治療劑為一種色素原或染料。
86.權(quán)利要求77的方法，其中所述烷化劑為達卡巴嗪。
87.權(quán)利要求86的方法，其中以100-600毫克蛋白質(zhì)/劑/注射的劑量給予所述MN-14抗體或其片段。
88.權(quán)利要求87的方法，其中以300毫克蛋白質(zhì)/劑/注射的劑量給予所述MN-14抗體或其片段。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種包含裸的人源化的、嵌合的和人的III類抗CEA單克隆抗體以及一種治療劑的組合物，它用于治療表達CEA的癌癥和其它疾病，以及提供了利用該組合物進行治療的方法。
文檔編號C07K16/30GK1708317SQ02830006
公開日2005年12月14日 申請日期2002年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月8日
發(fā)明者D·M·高登伯, H·J·漢森 申請人:免疫醫(yī)療公司