專利名稱：柚皮苷的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從含柚皮苷的各種藥材中提取柚皮苷單體的方法。
背景技術(shù)：
柚皮苷是一種黃酮類化合物，廣泛存在于各種中藥材中，例如枳殼，枳實(shí)，柑橘，檸檬，葡萄柚，橘紅，橙等。柚皮苷是多種藥材的主要有效成份之一。已經(jīng)有研究證明，柚皮苷具有抗菌消炎，止咳化痰，降低血漿膽固醇濃度，改善血管循環(huán)等作用。已被用于作苦味劑、發(fā)汗劑、還有降膽固醇等方面。
柚皮苷的獲得途徑，除了Rosenmund(Rosenmund，Ber.，61，2608(1958))和Zemlen，Bognar(Ber.，75，648(1942))描述的方法以及其它化學(xué)方法進(jìn)行合成得到外，還可通過從藥材中提取獲得。很多藥材例如柚，枳實(shí)等，其藥材中柚皮苷含量均很高。枳實(shí)藥材中的柚皮苷含量就有10％左右。但由于藥材中含有各種黃酮類，多糖類，鞣質(zhì)，生物堿類，蒽醌類等物質(zhì)，而且黃酮類物質(zhì)中也含有多種結(jié)構(gòu)相近的物質(zhì)。要得到柚皮苷單體，需要把柚皮苷與其它各種物質(zhì)分離開來。以往的研究，未能提供一種獲得柚皮苷單體的可行的提取方法。從藥材中提取柚皮苷單體的方法，尚沒有報道。
柚皮苷的結(jié)構(gòu)式

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從中藥材中提取柚皮苷單體的方法。
本發(fā)明的柚皮苷提取方法的步驟包括①將含柚皮苷的藥材粉碎，經(jīng)過水提取，濾過，合并濾液；②濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進(jìn)行柱分離，有機(jī)溶劑洗脫；③洗脫液揮干溶劑，得柚皮苷粗品；再經(jīng)多次重結(jié)晶，得柚皮苷單體(純品)。
上述本發(fā)明方法所說的含柚皮苷的藥材可以是枳殼、枳實(shí)、柑橘、檸檬、葡萄柚、橘紅、橙等各種含柚皮苷的中藥材。
本發(fā)明方法中的水提取可以采用在室溫～100℃條件下或/和超聲波條件下進(jìn)行；提取次數(shù)一般為一至三次，次數(shù)增加不限。水的用量為水至少能沒過藥材，水用量過多不限。提取時間一般為0.1-24小時，時間延長不限。加溫或/和超聲波條件下提取可縮短提取時間。
本發(fā)明方法中的浸膏醇沉所用的乙醇可以是無水乙醇或者各種濃度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液體的乙醇最終濃度可以是5％至95％的各種濃度。
本發(fā)明方法中的柱分離，采用的柱填料可以為硅膠，氧化鋁，聚酰胺，大孔樹脂，葡聚糖凝膠等各種填料。
本發(fā)明方法中的有機(jī)溶劑洗脫，有機(jī)溶劑可以采用乙醇，甲醇，氯仿，乙酸乙酯，石油醚等各種常用有機(jī)溶劑。有機(jī)溶劑的濃度可以采用各種濃度，包括濃度為100％的有機(jī)溶劑。
本發(fā)明方法中的重結(jié)晶，溶劑可以采用水或者有機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑可以采用乙醇，甲醇，氯仿，乙酸乙酯，石油醚等各種常用有機(jī)溶劑。重結(jié)晶的次數(shù)可以為一次至十次，次數(shù)增加不限。
采用本發(fā)明的柚皮苷提取方法，從不同的含柚皮苷藥材中提取柚皮苷(純品)，提取得率均在85％以上，提取得率高。
采用本發(fā)明方法所得到的柚皮苷單體(純品)，經(jīng)過《中華人們共和國藥典》2000版一部高效液相色譜法測定，以中國藥品生物制品檢定所提供的柚皮苷對照品進(jìn)行外標(biāo)法定量，得提取所得柚皮苷樣品中柚皮苷單體的含量。結(jié)果表明，樣品中柚皮苷單體的含量高于95％。表明本發(fā)明工藝可行。
本發(fā)明的柚皮苷提取方法，具有提取工藝簡單，提取率高，提取得到的柚皮苷單體純度高等特點(diǎn)。
具體實(shí)施發(fā)式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。
各實(shí)施例所涉及到的固體混合物中之固體，液體中之液體，以及液體中之固體的百分比分別是以wt/wt，vol/vol，wt/vol計算，除非另有說明。
實(shí)施例1枳殼藥材切成飲片，加100℃水沒過藥材，水提取三次，每次一小時，濾過；濾液濃縮成浸膏，過大孔樹脂柱，用水洗脫后，再用70％乙醇洗脫；收集乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，得沉淀，沉淀用水重結(jié)晶三次，噴霧干燥，得柚皮苷單體。得率為90.7％。
實(shí)施例2柑橘藥材粉碎，不過篩，加100℃水沒過藥材，提取三次，每次1小時，濾過，合并濾液；濾液濃縮，加入無水乙醇至乙醇濃度為30％，放置過夜，濾過，上清液回收乙醇。浸膏過硅膠柱，先用水洗脫，再用80％乙醇洗脫；收集乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，得沉淀，沉淀干燥，用無水乙醇重結(jié)晶五次后，得柚皮苷單體。得率為87.4％。
實(shí)施例3橘紅藥材切成飲片，經(jīng)70℃水浸提兩次，每次3小時，濾過，合并濾液；濾液濃縮成浸膏，浸膏加入95％乙醇至乙醇濃度為60％，靜置過夜，產(chǎn)生沉淀，濾過，去沉淀，濾液回收乙醇，所得液體過氧化鋁柱，先用水洗脫，再用95％乙醇洗脫；收集乙醇洗脫液，回收濃縮，得沉淀，沉淀用乙酸乙酯重結(jié)晶四次，得柚皮苷單體。得率為89.7％。
實(shí)施例4檸檬藥材不粉碎，經(jīng)超聲波用水提取4次，每次1小時，濾過，合并濾液；濃縮，得浸膏，浸膏直接過聚酰胺柱，用水洗脫后，再用95％乙醇洗脫；收集乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，得沉淀，濾過，沉淀用乙酸乙酯重結(jié)晶二次，用水溶解，直接噴霧干燥成粉末，得柚皮苷單體。得率為85.3％。
實(shí)施例5枳實(shí)藥材粉碎，過20目篩，室溫下水提取三次，每次兩天，濾過，合并濾液；濾液加入95％乙醇至乙醇濃度為50％，靜置，液體產(chǎn)生沉淀，得水層和沉淀，去沉淀，得水層，水層回收乙醇，得沉淀，沉淀過葡聚糖凝膠柱，先用水洗脫，再用40％乙醇洗脫；收集乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，得沉淀，沉淀用乙酸乙酯重結(jié)晶六次，得柚皮苷單體。得率為92.1％。
實(shí)施例6葡萄柚藥材切成飲片，加100℃水沒過藥材，提取二次，每次2小時，濾過，合并濾液；濾液濃縮，得浸膏，浸膏過大孔樹脂柱，先用水洗脫，再用60％乙醇洗脫；收集乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，所得液體放置過夜，濾過，得沉淀，沉淀用水重結(jié)晶三次，得柚皮苷單體。得率為87.6％。
實(shí)施例7柚皮苷單體純度測定實(shí)驗(yàn)取上述提取方法制備得到的柚皮苷單體適量，甲醇溶解定容于容量瓶中，再用微孔濾膜(0.45um)過濾后，注入高效液相色譜儀中，以中國藥品生物制品檢定所提供的柚皮苷對照品進(jìn)行外標(biāo)法定量，得提取所得柚皮苷樣品中柚皮苷單體的含量。結(jié)果見表1。
色譜條件Agilent1100高效液相色譜儀(自動進(jìn)樣器，真空脫氣機(jī)，四元泵，柱溫箱，二極管陣列檢測器)；色譜柱MARKER ODS柱(5um，4.0×250mm)；流動相乙腈-0.05M KH2PO4緩沖液(20∶80)；檢測波長283nm；柱溫30℃；流速1ml/min；進(jìn)樣量5μl。
表1樣品含量測定試驗(yàn)結(jié)果樣品濃度 進(jìn)樣量 測得柚皮苷柚皮苷含量樣品號峰面積(mg/ml)(μl) 濃度(mg/ml) (％)柚皮苷0.400 5 2743.358890.400 100對照品樣品10.396 5 2626.766140.383 96.7樣品20.424 5 2853.093250.416 98.2樣品30.385 5 2571.898960.375 97.4樣品40.417 5 2798.226070.408 97.9從表1結(jié)果看出，提取所得樣品中柚皮苷單體的含量均高于95％。說明本發(fā)明的提取方法所得到的柚皮苷樣品純度高。
綜上所述，說明本發(fā)明的柚皮苷提取方法，能有效地從含柚皮苷藥材中提取得到柚皮苷單體，所得柚皮苷樣品純度高，含量均高于95％以上。工藝簡單可行。
權(quán)利要求
1.一種柚皮苷的提取方法，依次包括以下步驟①將含柚皮苷的藥材粉碎，經(jīng)過水提取，濾過，合并濾液；②濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進(jìn)行柱分離，有機(jī)溶劑洗脫；③洗脫液揮干溶劑，得柚皮苷粗品；再經(jīng)多次重結(jié)晶，得柚皮苷單體。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說的水提取是在室溫至100℃條件下或/和超聲波條件下進(jìn)行；提取次數(shù)為一至三次。
3.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所說水提取的提取時間為0.1-24小時。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說的浸膏醇沉所用的乙醇是無水乙醇或者各種濃度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液體的乙醇最終濃度為5％至95％的各種濃度。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說的柱分離采用的柱填料為硅膠，氧化鋁，聚酰胺，大孔樹脂或葡聚糖凝膠填料。
6.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說的有機(jī)溶劑洗脫所用的有機(jī)溶劑為包括濃度為100％的各種濃度的乙醇或甲醇，或者氯仿、乙酸乙酯或石油醚。
7.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說的重結(jié)晶所用的溶劑為水或常用有機(jī)溶劑，常用有機(jī)溶劑為乙醇，甲醇，氯仿，乙酸乙酯或石油醚；重結(jié)晶的次數(shù)為一次至十次。
8.按照權(quán)利要求1至7之一所述的方法，其特征是所用的含柚皮苷的藥材為枳殼、枳實(shí)、柑橘、檸檬、葡萄柚、橘紅、橙的中藥材。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從含柚皮苷的各種藥材中提取柚皮苷單體的方法。該方法是將藥材粉碎，經(jīng)過一至多次水提取，濾過，合并濾液；濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進(jìn)行柱分離，有機(jī)溶劑洗脫；洗脫液揮干溶劑，得粗品；再經(jīng)多次重結(jié)晶，得柚皮苷晶體。采用本發(fā)明方法，從不同的含柚皮苷藥材中提取柚皮苷，提取得率均在85％以上，所得柚皮苷樣品中柚皮苷單體的含量達(dá)到95％以上。因此，本發(fā)明方法具有提取工藝簡單，提取率高，提取得到的柚皮苷單體純度高等特點(diǎn)。
文檔編號C07H17/07GK1431216SQ0311360
公開日2003年7月23日 申請日期2003年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月21日
發(fā)明者蘇薇薇, 王永剛, 方鐵錚, 彭維, 吳忠 申請人:中山大學(xué)