專利名稱：用可再生資源提取藥用紫杉醇及其衍生物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用可再生資源提取藥用紫杉醇及其衍生物的方法，屬醫(yī)藥化工領(lǐng)域。
目前的藥用紫杉醇主要從紫杉樹的樹皮中提取，紫杉醇含量約0.02-0.06％，由于紫杉樹生長(zhǎng)緩慢，一顆百年紫杉樹的樹皮只有2.5kg左右，因此不僅原料來(lái)源困難，而且破壞生態(tài)環(huán)境，破壞珍貴植物，采用紫杉樹的樹葉為原料，不會(huì)影響樹木生長(zhǎng)，但紫杉醇含量太低，一般僅為0.003-0.008％且伴生雜質(zhì)多，提取難度大，近年來(lái)人工種植短期生長(zhǎng)的紅豆杉植物為紫杉醇生產(chǎn)提供了豐富的原料。
現(xiàn)有生產(chǎn)紫杉醇的方法，多數(shù)是根據(jù)O.C.H.Huang等在1986年發(fā)表的方法衍生而耒，其步驟是用甲醇浸提粉碎的短葉紅豆衫樹皮，濃縮提取物用二氯甲烷萃取濃縮物，用水洗將二氯甲相后真空除二氯甲烷得到二氯甲烷浸膏，再將浸膏溶解再進(jìn)行多次硅膠柱層析制得紫杉醇濃縮物再經(jīng)氧化、層析、重結(jié)晶得到紫杉醇產(chǎn)品，CN1182424A文獻(xiàn)中仍然用紅豆杉樹皮為原料按上述方法生產(chǎn)紫杉醇濃縮物經(jīng)溴加成和硅膠層析分離，重結(jié)晶得紫杉醇，C1240789A文獻(xiàn)中揭示用市售10-51％紫杉醇為原料，經(jīng)臭氧氧化，硅回層析分離，重結(jié)晶得到紫杉醇，但尚未揭示如何制得10-51％紫杉醇，而且氧化三尖杉寧堿己遭分解不能回收，ZL96102442.9專利文獻(xiàn)中揭示了一種用多孔高分子填料作固定相的液相色譜法從紫杉植物體浸膏中制備紫杉醇的方法，該法回收率高、生產(chǎn)成本低、溶劑損耗少，但是存在許多與紫杉醇共詵脫的雜質(zhì)，造成純化困難，流程復(fù)雜；ZL01110208.X專利文獻(xiàn)中也揭示了一種聯(lián)合制備紫杉醇、三尖杉寧堿和10一脫乙酰巴卡亭III的方法，為了回收10一脫乙酰巴卡亭III等副產(chǎn)品，需用乙酸乙酯多次萃取，不僅溶劑消耗大，而且不能完全回收副產(chǎn)品。
近年來(lái)研究與紫杉醇伴生的衍生物如10一脫乙酰巴卡亭III、巴卡亭III、、三尖寧堿和紫杉醇苷作為半合成紫杉烷類藥物的原料也日愈受到重視，實(shí)用價(jià)值很高，因此在生產(chǎn)紫杉醇時(shí)必須回收其衍生物。
本發(fā)明的目的是通過(guò)下列技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的用可再生資源提取藥用紫杉醇及其衍生物的方法，其特征在于它按下述步驟進(jìn)行(a)它是以紫杉樹的枝葉或人工種植紅豆杉植物的枝葉為原料，經(jīng)自然干燥后粉碎至10目以下，加入原料重量的2-10倍體積的甲醇或乙醇，在常溫條件下進(jìn)行2-3次的攪拌浸出或滲濾浸出，每次時(shí)間為24小時(shí)，合并浸出液過(guò)濾，再將浸出液濃縮至原體積的1/10-1/20，得到含有紫杉醇和紫杉醇衍生物的甲醇或乙醇濃縮物；(b)再將濃縮物加入2-10倍體積的由二氯甲烷或三氯甲烷或二氯乙烷和水組成的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，兩者體積比為1∶1～2，靜止分層，萃余水相為含有10一脫乙酰巴卡亭III和紫杉醇苷，有機(jī)相減壓真空濃縮至干，按常規(guī)方法用丙酮溶解后加入硅藻土并真空除溶劑，得到負(fù)載濃縮物硅藻土；(c)再將負(fù)載濃縮物硅藻土置于硅膠色譜柱柱頭進(jìn)行正相色譜分離，洗脫液為己烷與乙酸乙酯或己烷與丙酮或二氯甲烷與乙酸乙酯的混合液，兩者體積比為9∶1至6∶4，并按常規(guī)方法進(jìn)行梯度洗脫，首先流出柱子的洗脫液為油狀物尾棄，依次流出的洗脫液為含有紫杉醇、三尖杉寧堿、巴卡亭III、10一脫乙酰巴卡亭III和紫杉醇苷，收集目標(biāo)物的餾分；(d)將(c)項(xiàng)的鎦分分別真空濃縮至干，用丙酮或甲醇或乙醇/水溶液溶解注入裝有高分子填料固定相的色譜柱進(jìn)行反相色譜分離，用丙酮或甲醇或乙醇/水溶液進(jìn)行梯度洗脫，其兩者體積比為3∶7至8∶2，依次流出并收集紫杉醇苷、10一脫乙酰巴卡亭III、巴卡亭III、三尖杉寧堿和紫杉醇洗脫液，分別收集目標(biāo)物的鎦分；(e)將含有紫杉醇餾分真空濃縮、結(jié)晶，經(jīng)過(guò)濾、干燥，得到純度為85-90％紫杉粗醇產(chǎn)品，將此產(chǎn)品溶于丙酮或甲醇或乙醇/水溶液中注入填充有高分子填料固定相的色譜柱內(nèi)進(jìn)行反相色譜離，用丙酮或甲醇或乙醇/水溶液進(jìn)行梯度洗脫，其兩者體積比為3∶7至6∶4，收集紫杉醇冼脫液，餾分真空濃縮，結(jié)晶得到紫杉醇產(chǎn)品，再重結(jié)晶、真空干燥得到純度大于99％紫杉醇產(chǎn)品；(f))將三尖杉寧堿的餾分真空濃縮，結(jié)晶、過(guò)濾、干燥，得到純度為90-94％三尖杉寧堿產(chǎn)品，將此產(chǎn)品溶于丙酮或甲醇或乙醇/水溶液中注入填充有高分子填料固定相的色譜柱內(nèi)進(jìn)行反相色譜分離，得到三尖杉寧堿和紫杉醇，用甲醇或乙醇/水溶液進(jìn)行梯度洗脫，其兩者體積比為3∶7至6∶4，分別收集三尖杉寧堿和紫杉醇冼脫液，將三尖杉寧堿真空濃縮、結(jié)晶，得到三尖杉寧堿產(chǎn)品在甲醇/水中重結(jié)晶真空干燥，得到純度為99％三尖杉寧堿產(chǎn)品，同時(shí)回收紫杉醇產(chǎn)品；(g)將(d)項(xiàng)得到的含有10一脫乙?？ㄍII、巴卡亭III和紫杉醇昔鎦分真空濃縮與(a)項(xiàng)的萃取水相一起注入填充有高分子填料固定相的色譜柱內(nèi)進(jìn)行反相色譜分離，丙酮或甲醇或乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，其兩者體積比為2∶8至5∶5，分別收集目標(biāo)物餾分，將10一脫乙酰巴卡亭III、巴卡亭III和紫杉醇苷餾分分別收集，再真空濃縮至干，得到10一脫乙酰巴卡亭III、巴卡亭III和紫杉醇苷粗產(chǎn)品，經(jīng)重結(jié)晶得到純度95％產(chǎn)品。
所述的高分子填料固定相為多孔型苯乙烯二乙烯基苯共聚物或多孔型交聯(lián)聚丙烯酸酯共聚物或多孔型交聯(lián)甲基丙烯酸酯共聚物或多孔型交聯(lián)聚丙烯腈共聚物，其粒徑為30-200微米，比表面積50-900m2/g，孔度30-70％。
由于采取上述技術(shù)方案使本發(fā)明技術(shù)與已有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)及效果(a)該方法提取的產(chǎn)品成本低，收率高，產(chǎn)品純度高，適合于加工低含量紫杉醇原料；(b)采用的原料可避免天然資源破壞，而且原料資源豐富；(c)副產(chǎn)品回收率高、溶劑消耗??；(d)采用硅膠固定相正相色譜法可有效地除去粗提物中干攏反相色譜純化紫杉醇的共洗脫雜質(zhì)；(e)采用高分子填料為固定相反相色譜回收和純化萃余水相和色譜分離得到水溶性紫杉醇衍生物的回收率和純度高。
權(quán)利要求
1.用可再生資源提取藥用紫杉醇及其衍生物的方法，其特征在于它按下述步驟進(jìn)行(a)它是以紫杉樹的枝葉或人工種植紅豆杉植物的枝葉為原料，經(jīng)自然干燥后粉碎至10目以下，加入原料重量的2-10倍體積的甲醇或乙醇，在常溫條件下進(jìn)行2-3次的攪拌浸出或滲濾浸出，每次時(shí)間24小時(shí)，合并浸出液過(guò)濾，再將浸出液濃縮至原體積的1/10-1/20，得到含有紫杉醇和紫杉醇衍生物的甲醇或乙醇濃縮物；(b)再將濃縮物加入2-10倍體積的由二氯甲烷或三氯甲烷或二氯乙烷和水組成的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，兩者體積比為1∶1～2，靜止分層，萃余水相為含有10一脫乙酰巴卡亭III和紫杉醇苷，有機(jī)相減壓真空濃縮至干，按常規(guī)方法用丙酮溶解后加入硅藻土并真空除溶劑，得到負(fù)載濃縮物硅藻土；(c)再將負(fù)載濃縮物硅藻土置于硅膠色譜柱柱頭進(jìn)行正相色譜分離，洗脫液為己烷與乙酸乙酯或己烷與丙酮或二氯甲烷與乙酸乙酯的混合液，兩者體積比為9∶1至6∶4，并按常規(guī)方法進(jìn)行梯度洗脫，首先流出柱子的洗脫液為油狀物尾棄，依次流出的洗脫液為含有紫杉醇、三尖杉寧堿、巴卡亭III、10一脫乙酰巴卡亭III和紫杉醇苷，收集目標(biāo)物的餾分；(d)將(c)項(xiàng)的鎦分分別真空濃縮至干，用丙酮或甲醇或乙醇/水溶液溶解注入裝有高分子填料固定相的色譜柱進(jìn)行反相色譜分離，用丙酮或甲醇或乙醇/水溶液進(jìn)行梯度洗脫，其兩者體積比為3∶7至8∶2，依次流出并收集紫杉醇苷、10一脫乙酰巴卡亭III、巴卡亭III、三尖杉寧堿和紫杉醇洗脫液，分別收集目標(biāo)物的鎦分；(e)將含有紫杉醇餾分真空濃縮、結(jié)晶，經(jīng)過(guò)濾、干燥，得到純度為85-90％紫杉醇粗產(chǎn)品，將此產(chǎn)品溶于丙酮或甲醇或乙醇/水溶液中注入填充有高分子填料固定相的色譜柱內(nèi)進(jìn)行反相色譜離，用丙酮或甲醇或乙醇/水溶液進(jìn)行梯度洗脫，其兩者體積比為3∶7至6∶4，收集紫杉醇冼脫液，餾分真空濃縮，結(jié)晶得到紫杉醇產(chǎn)品，再重結(jié)晶、真空干燥得到純度大于99％紫杉醇產(chǎn)品。(f))將三尖杉寧堿的餾分真空濃縮，結(jié)晶、過(guò)濾、干燥，得到純度為90-94％三尖杉寧堿產(chǎn)品，將此產(chǎn)品溶于丙酮或甲醇或乙醇/水溶液中注入填充有高分子填料固定相的色譜柱內(nèi)進(jìn)行反相色譜分離，得到三尖杉寧堿和紫杉醇，用甲醇或乙醇/水溶液進(jìn)行梯度洗脫，其兩者體積比為3∶7至6∶4，分別收集三尖杉寧堿和紫杉醇冼脫液，將三尖杉寧堿鎦分真空濃縮、結(jié)晶，得到三尖杉寧堿產(chǎn)品在甲醇/水中重結(jié)晶真空干燥，得到純度為99％三尖杉寧堿產(chǎn)品，同時(shí)回收紫杉醇產(chǎn)品；(g)將(d)項(xiàng)得到的含有10一脫乙?？ㄍII、巴卡亭III和紫杉醇苷鎦分真空濃縮與(a)項(xiàng)的萃取水相一起注入填充有高分子填料固定相的色譜柱內(nèi)進(jìn)行反相色譜分離，用丙酮或甲醇或乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，其兩者體積比為2∶8至5∶5，分別收集目標(biāo)物餾分，將10一脫乙酰巴卡亭III、巴卡亭III和紫杉醇苷餾分分別收集，再真空濃縮至干，得到10一脫乙酰巴卡亭III、巴卡亭III和紫杉醇苷粗產(chǎn)品，經(jīng)重結(jié)晶得到純度95％產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的高分子填料固定相為多孔型苯乙烯二乙烯基苯共聚物或多孔型交聯(lián)聚丙烯酸酯共聚物或多孔型交聯(lián)甲基丙烯酸酯共聚物或多孔型交聯(lián)聚丙烯腈共聚物，其粒徑為30-200微米，比表面積50-900m2/g，孔度30-70％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用可再生資源提取藥用紫杉醇及其衍生物的方法，其特征在于它是以紫杉樹的枝葉或人工種植紅豆杉植物的枝葉為原料，經(jīng)干燥、粉碎、浸出、濃縮浸出液負(fù)載在硅藻土后進(jìn)行正相色譜分離，再在高分子填料柱中進(jìn)行反相色譜分離，再將粗產(chǎn)品分別經(jīng)重結(jié)晶和反相色譜分離得到藥用產(chǎn)品，該方法具有產(chǎn)品純度高、回收率高、方法可靠的優(yōu)點(diǎn)及效果。
文檔編號(hào)C07D305/00GK1442413SQ03121928
公開日2003年9月17日 申請(qǐng)日期2003年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月18日
發(fā)明者朱法科, 劉開錄, 方成開, 郭占偉, 張東輝, 屈輔, 謝滿佳, 余華, 孫燕鉻, 祖靜 申請(qǐng)人:北京怡禾生物工程有限公司