專利名稱：具有鎮(zhèn)咳活性的植物提取物和生物堿的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有鎮(zhèn)咳活性的植物提取物、分離的生物堿和合成生物堿，其作為藥劑能有效減輕或抑制咳嗽。
咳嗽由多種刺激引起，包括生理、機械或化學(xué)刺激。例如，咳嗽可由炎癥、機械紊亂和化學(xué)及溫度變化刺激引起。還例如，炎癥刺激也可以是粘膜水腫引起。反過來，水腫可由任何病因引起，例如，細菌或病毒感染、感冒或吸煙過度。炎癥刺激也可由滲出過程的刺激引起，例如后鼻滴注和胃液回流。這種刺激可能出現(xiàn)在呼吸道內(nèi)，例如喉炎、支氣管炎、肺炎和肺膿腫。
另外，機械刺激，例如微粒物質(zhì)的吸入會導(dǎo)致咳嗽。另外引起呼吸道壓縮或在呼吸系統(tǒng)任何區(qū)域壓力增加的機械紊亂會導(dǎo)致咳嗽。這些疾患可由內(nèi)壁或外壁病因引起。例如，咳嗽的外壁病因包括由主動脈瘤、肉芽瘤、肺瘤、胸腔縱隔腫瘤等引起的外壁壓力。內(nèi)壁損害例如基因性支氣管癌、支氣管腺瘤、異物的存在或支氣管哮喘也導(dǎo)致咳嗽。呼吸膜柔韌性的降低也能導(dǎo)致慢性咳嗽，如患囊纖維化病人的情況一樣。
化學(xué)刺激，例如刺激性氣體的吸入(如香煙或化學(xué)煙霧)也能引起咳嗽。其它導(dǎo)致咳嗽的原因是化學(xué)刺激及其對呼吸系統(tǒng)自身或?qū)粑鼩怏w的平衡和吸收的反應(yīng)性影響。另外，由于與在呼吸過程中所涉及的酶類反應(yīng)，許多化學(xué)制劑誘發(fā)咳嗽。最后，溫度變化刺激，例如特別熱或特別冷的空氣的吸入也能導(dǎo)致咳嗽。
一些疾病狀態(tài)中，咳嗽可能是唯一的或主要的癥狀。例如，患支氣管哮喘的病人會持續(xù)不斷地咳嗽。此外，一些病情中，例如哮喘，咳嗽本身會進一步惡化病人的情況。哮喘是由于支氣管的痙攣收縮引起，這種病況以突發(fā)性呼吸困難和復(fù)發(fā)為特征。這種情況是由多種病因引起的。某些情況下，哮喘是過敏性反應(yīng)的結(jié)果。多種因素包括劇烈鍛煉、化學(xué)或微粒刺激，甚至心理壓力也能刺激或引起咳嗽。此外，伴隨著咳嗽的胸腔的強烈收縮使已經(jīng)受刺激的呼吸膜進一步惡化。Karlsson等人，Pulmonary Pharmacology andTherapeutics(1999)12215-238對咳嗽的生理學(xué)進行了評述。
治療咳嗽的鎮(zhèn)咳藥物已發(fā)展有很多種，例如嗎啡類化合物和作用于鴉片受體的化合物。然而，這些化合物都有不利的副作用。例如嗎啡類化合物的使用會導(dǎo)致成癮、呼吸抑制、抑制平滑肌的收縮(例如導(dǎo)致便秘)和出現(xiàn)幻覺。特別是可待因高度成癮，美沙芬能誘發(fā)幻覺、妄想或其它精神病癥狀。此外，具有強鎮(zhèn)咳活性的藥物例如可待因和美沙芬對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有不利影響。另外，作用于鴉片受體的藥物對排尿有不利影響(Leander等人。Pharmacol.Exp.Ther.，22735(1983))。Hey等人，Annual Reports in MedicinalChemistry3553-62(2000)和Bolser，Pulmonary Pharmacology9357-364(1996)對鎮(zhèn)咳藥物進行了評述。
治療咳嗽的藥物有很多種，然而，無副作用如鎮(zhèn)靜和成癮的安全和有效的鎮(zhèn)咳劑種類有限。由于治療咳嗽的藥物有嚴重不利的副作用，因此需要研發(fā)無此類副作用并能有效減輕和抑制咳嗽的鎮(zhèn)咳藥物。本發(fā)明滿足了這些及其它要求。
在另一個實施方式中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括一種具有結(jié)構(gòu)式I的化合物R1選自氫和α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基；R2選自β氫和α氫；R3選 自β氫和α氫；R4是羥基；R5選自羥甲基和羧基?；蛘?，R4和R5與它們所連接的碳一起，形成取代的γ(S)-丁內(nèi)酯基或取代的呋喃環(huán)；R6選自β氫和α氫。在另一個實施方式中，R4和R5與它們所連接的碳一起，形成取代的γ(S)-丁內(nèi)酯基，R2和R6都不存在，形成一個吡咯環(huán)，條件是R1是α(S)-甲基-γ(R)-丁內(nèi)酯基，R3是α氫，和一個藥用傳遞體。
在另一個實施方式中，本發(fā)明提供了減輕患者咳嗽的一種方法，該方法包括服用有效量的具有結(jié)構(gòu)式I的化合物 其中，R1選自氫和α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基；R2選自β氫和α氫；R3選自β氫和α氫；R4是羥基；R5選自羥甲基和羧基。在一個可選擇的實施方式中，R4和R5與它們所連接的碳一起，形成取代的γ(S)-丁內(nèi)酯基或取代的呋喃環(huán)；R6選自β氫和α氫。在另一個實施方式中，R4和R5與它們所連接的碳一起，形成取代的γ(S)-丁內(nèi)酯基，R2和R6都不存在，形成一個吡咯環(huán)，條件是R1是α(S)-甲基-γ(R)-丁內(nèi)酯基，R3是α氫，從而減輕了患者的咳嗽。
在另一個實施方式中，本發(fā)明提供了一種具有鎮(zhèn)咳活性的百部科植物提取物，這種百部科植物提取物抑制了患者的咳嗽。在某一方面，屬于百部科的屬選自Stemona，Croomia或Stichoneuron。Stemona或Croomia屬的種類優(yōu)選選自S.collinsae，S.japonica，S.mairei，S.parviflora，S.sessilifolia，S.tuberosa，C.japonica和C.heterosepala，其中C.代表Croomia。在一個優(yōu)選實施方式中，Stemona種類是Stemona tuberosa。這種植物提取物可以是水提物或總生物堿提取物。
在其它實施方式中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包括一種具有鎮(zhèn)咳活性的百部科植物提取物，其中的百部科植物提取物抑制患者的咳嗽。
在另一實施方式中，本發(fā)明提供了一種減輕患者咳嗽的方法，包括服用具有鎮(zhèn)咳活性的有效量的百部科植物提取物，其中的百部科植物提取物抑制患者的咳嗽。
在又一實施方式中，本發(fā)明提供了一種從百部科植物中提取具有鎮(zhèn)咳活性的總生物堿的方法，該方法包括(a)將百部科植物樣本與醇接觸形成提取液；(b)將提取液中的醇蒸發(fā)形成漿狀物；(c)調(diào)節(jié)漿狀物成酸性pH值以形成一個上清液部分；(d)調(diào)節(jié)上清液部分成pH堿性，然后用有機溶劑提取以形成有機溶液；和(e)蒸發(fā)有機溶劑至干燥狀態(tài)以形成具有鎮(zhèn)咳活性的總生物堿提取物。
在又一實施方式中，本發(fā)明進一步提供了從上述的總生物堿提取物中制備具有鎮(zhèn)咳活性的四種百部生物堿的方法，該方法進一步包括分離、提純和結(jié)晶總生物堿提取物，形成四種具有鎮(zhèn)咳活性的百部生物堿。可采用柱層析工藝來分離這四種百部生物堿。
在又一實施方式中，本發(fā)明提供了一種從百部科植物中制備具有鎮(zhèn)咳活性的水提物的方法，該方法包括(a)將百部科植物樣本與水溶劑接觸形成提取液；(b)蒸發(fā)提取液至干燥狀態(tài)以形成具有鎮(zhèn)咳活性的水提物。
結(jié)合下面詳細的描述和附圖，這些和其它的實施方式將會更加明了。
圖2表示從Stemona tuberosa中得到的水提取物的鎮(zhèn)咳效果。圖2A表示陣發(fā)性咳嗽次數(shù)的對照百分比；圖2B表示提取物與對照之間的咳嗽潛伏期比率。括號內(nèi)的數(shù)字是受測試動物的數(shù)量。與空白對照相比*P＜0.05。
圖3表示從Stemona tuberosa中得到的總生物堿提取物的鎮(zhèn)咳效果。圖3A表示陣發(fā)性咳嗽次數(shù)的對照百分比；圖3B表示提取物與對照之間的咳嗽潛伏期比率。括號內(nèi)的數(shù)字是受測試動物的數(shù)量。與空白對照相比**P＜0.01。
圖4表示neotuberostemonine(化合物A)的鎮(zhèn)咳效果。圖4A表示陣發(fā)性咳嗽次數(shù)的對照百分比；圖4B表示化合物A與對照之間的咳嗽潛伏期比率。括號內(nèi)的數(shù)字是受測試動物的數(shù)量。與空白對照相比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
圖5表示化合物A，B，C和D在動物體內(nèi)的鎮(zhèn)咳效果。圖5A表示化合物A，B，C和D的腹腔(133μmol/kg)給藥效果；圖5B表示化合物A和E的口服(400μmol/kg)給藥鎮(zhèn)咳效果。括號內(nèi)的數(shù)字是受測試動物的數(shù)量。與相應(yīng)的空白對照相比*P＜0.05，***P＜0.001。腹腔給藥時，生理鹽水用作化合物C和A的賦形劑，含％5吐溫80的生理鹽水用作化合物B和D的賦形劑；口服給藥時，含％5吐溫80的生理鹽水用作化合物E和A的賦形劑時。
圖6表示化合物D，F(xiàn)，G和H腹腔(133μmol/kg)給藥的鎮(zhèn)咳效果。括號內(nèi)的數(shù)字是受測試動物的數(shù)量。與相應(yīng)的空白對照相比*P＜0.05。含％5吐溫80的生理鹽水用作化合物F，D和G的賦形劑，生理鹽水用作化合物H的賦形劑。
圖7表示鈉洛酮對neotuberostemonine(化合物A，100mg/kg)和可待因(30mg/kg)產(chǎn)生的鎮(zhèn)咳活性的影響。括號內(nèi)的數(shù)字是受測試動物的數(shù)量。與空白對照相比**P＜0.01，***P＜0.001；與可待因治療的組相比，##P＜0.01。
圖8表示化合物A的分子結(jié)構(gòu)。
圖9表示化合物B的分子結(jié)構(gòu)。


圖10表示化合物C的分子結(jié)構(gòu)。
圖11表示化合物D的分子結(jié)構(gòu)。
圖12表示化合物E的分子結(jié)構(gòu)。
圖13表示化合物F的分子結(jié)構(gòu)。
表1所示為化合物A，B，C，D，E，F(xiàn)，G和H的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
表2所示為化合物A，B，C，D，E和F的結(jié)晶學(xué)數(shù)據(jù)和參數(shù)。
表3所示為五種天然百部生物堿的結(jié)構(gòu)-鎮(zhèn)咳活性關(guān)系。數(shù)據(jù)以平均值±SEM來表示。與空白對照相比*P＜0.05，***P＜0.001。
表4所示為三種合成百部生物堿和化合物D的結(jié)構(gòu)-鎮(zhèn)咳活性關(guān)系。數(shù)據(jù)以平均值±SEM來表示。與空白對照相比*P＜0.05，***P＜0.001。
表5所示為不同的拮抗劑對化合物A產(chǎn)生的鎮(zhèn)咳活性的影響結(jié)果。數(shù)據(jù)以平均值±SEM來表示。
表6所示為化合物A的放射性同位素示蹤受體結(jié)合試驗結(jié)果?！乐篙p微但不明顯的對受體結(jié)合的抑制。
A.化合物本發(fā)明提供鎮(zhèn)咳化合物，例如有助于減輕或抑制咳嗽的百部生物堿。本領(lǐng)域科技人員不難理解，本發(fā)明的擁有不對稱碳原子(手性中心)或雙鍵的某些化合物；消旋物、非對映體、對映體、幾何異構(gòu)體和單體異構(gòu)體都在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
一方面，鎮(zhèn)咳化合物具有結(jié)構(gòu)式I 其中R1，R2，R3，R4，R5和R6如前所定義。圖1A表示四種分離的新百部生物堿化合物B，C，D和E的化學(xué)結(jié)構(gòu)式；圖1B表示三種合成的新的與百部相關(guān)的生物堿化合物F，G和H的化學(xué)結(jié)構(gòu)式；圖1C表示分離的已知生物堿neotuberostemonine(化合物A)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。在最優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的生物堿由化合物A，B，C，D，E，F(xiàn)，G和H的化學(xué)結(jié)構(gòu)式來表示，如表I所示。
表1化合物A，B，C，D，E，F(xiàn)，G和H的化學(xué)結(jié)構(gòu)式 本發(fā)明的化合物包括天然產(chǎn)物和合成的類似物。在某一優(yōu)選方面，本發(fā)明的天然產(chǎn)物具有如下結(jié)構(gòu)式
其中，R1選自氫和α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基；R2選自β氫和α氫；R3選自β氫和α氫。在一個優(yōu)選方面，R1是α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基；R2是α氫；R3是α氫，在此也就是指化合物B。在另外一個優(yōu)選方面，R1是α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基；R2是α氫；R3是β氫，在此也就是指化合物C。在又一優(yōu)選方面，R1是氫；R2是β氫；R3是β氫，在此也就是指化合物D。在又一優(yōu)選方面，通式I的化合物具有結(jié)構(gòu)式Ib，在此也就是指化合物E?；衔顴具有結(jié)構(gòu)式 除天然產(chǎn)物外，本發(fā)明還包括合成的類似物。在某些優(yōu)選方面，本發(fā)明的天然產(chǎn)物能衍生出具有結(jié)構(gòu)式Ic的化合物 其中，R4是羥基；R5選自羥甲基和羧基?；蚩蛇x擇地，R4和R5與它們所連接的碳一起，形成取代的呋喃環(huán)。在一個優(yōu)選方面，R4是羥基；R5是羥甲基，在此也就是指化合物F。在另一個優(yōu)選方面，R4是羥基；R5是羧基，在此也就是指化合物G。在又一優(yōu)選方面，R4和R5與它們所連接的碳一起，形成取代的呋喃環(huán)，在此也就是指化合物H，它具有如下結(jié)構(gòu)式 制備方法如上所述，本發(fā)明的化合物包括天然產(chǎn)物和合成的類似物。天然產(chǎn)物如具有結(jié)構(gòu)式Ia和Ib的化合物能從百部科植物提取物如S.tuberosa中獲得。這些天然產(chǎn)物能從總生物堿提取物中獲得。使用根據(jù)本發(fā)明的方法能產(chǎn)生一種總生物堿提取物。
如此，本發(fā)明提供了一種從百部科植物中制備具有鎮(zhèn)咳活性的總生物堿的方法，該方法包括(a)將百部科植物樣本與醇例如乙醇接觸形成提取液；(b)將提取液中的醇蒸發(fā)形成漿狀物；(c)調(diào)節(jié)漿狀物到一酸性pH值以形成一個上清液部分；(d)調(diào)節(jié)上清液部分到一堿性pH值，然后用有機溶劑例如乙醚提取以形成有機溶液。有機溶液此后可被蒸發(fā)至干燥狀態(tài)以形成總生物堿提取物，可進一步使用例如柱層析法進行分離來獲得感興趣的純生物堿。
在一個實施方式中，一個采用不連續(xù)梯度洗脫液系統(tǒng)的硅膠柱用來連續(xù)洗脫生產(chǎn)含本發(fā)明生物堿的組份。該組份此后可再分離和結(jié)晶來生產(chǎn)化合物B，C，D和E。
在某些方面，本發(fā)明的天然生物堿有一個稠和的內(nèi)酯環(huán)。這些內(nèi)酯環(huán)的官能團能衍生或還原來產(chǎn)生本發(fā)明的另外化合物。在一個優(yōu)選方面，化合物D能由氫化鋁鋰還原為化合物F或H。在另一方面，化合物D的內(nèi)酯環(huán)被水解來產(chǎn)生化合物G。如此，在某些方面，本發(fā)明提供制備具有通式Ic的化合物的方法。
B.植物提取物在另一實施方式中，本發(fā)明提供具有鎮(zhèn)咳活性的植物提取物。在一些優(yōu)選實施方式中，植物提取物是具有鎮(zhèn)咳活性的百部科植物提取物，其中的百部科植物提取物能抑制患者咳嗽。在某些方面，屬于百部科的屬是例如Stemona，Croomia或者Stichoneuron，優(yōu)選Stemona或Croomia。Stemona或Croomia屬的種可以是例如S.collinsae，S.japonica，S.mairei，S.parviflora，S.sessilifolia，S.tuberosa，C.japonica和C.heterosepala。(其中C.代表Croomia)。優(yōu)選的Stemona種是Stemona tuberosa。如上所述，這種植物提取物可以是0-95％有機溶劑提取物或總生物堿提取物。該植物提取物可包括天然產(chǎn)物例如具有結(jié)構(gòu)式Ia和Ib的化合物和表1中描述的化合物A以及它們的混合物。
在一個實施方式中，本發(fā)明提供從百部科植物中制備具有鎮(zhèn)咳活性的總生物堿提取物的方法，包括(a)將百部科植物樣本與醇接觸形成提取液；(b)將提取液中的醇蒸發(fā)形成漿狀物；(c)調(diào)節(jié)漿狀物到一酸性pH值以形成一個上清液部分；(d)調(diào)節(jié)上清液部分到一堿性pH值，然后用有機溶劑提取以形成有機溶液；和(e)蒸發(fā)有機溶劑至干燥狀態(tài)以形成具有鎮(zhèn)咳活性的總生物堿提取物。
在另一實施方式中，本發(fā)明提供了一種從百部科植物中制備具有鎮(zhèn)咳活性的水提物的方法，包括(a)將百部科植物樣本與水溶劑接觸形成提取液；和(b)蒸發(fā)提取液至干燥狀態(tài)以形成具有鎮(zhèn)咳活性的水提物。
C.組合物在一個實施方式中，本發(fā)明提供含本發(fā)明化合物或提取物和藥用傳遞體的藥物組合物。藥用傳遞體部分地由所服用的特殊組合物決定，也由服用組合物所用的特殊方法來決定。因此，本發(fā)明的藥物組合物有很多種合適的劑型。適合口服的劑型可包括(a)水溶液，例如有效量的溶解于稀釋劑例如水、鹽水或PEG400的生物堿；(b)每種包含預(yù)定量活性成份的膠囊、袋劑或片劑，液劑、固劑、顆粒劑或明膠；(c)在合適液體中的混懸物；和(d)合適的乳劑。
片劑形式可包括一種或多種乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、磷酸鈣、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、黃芪膠、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、二氧化硅膠、糊精、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸和其它的賦形劑、著色劑、填充劑、粘合劑、稀釋劑、緩沖劑、濕潤劑、防腐劑、香料、染劑、崩解劑和藥理上可配伍的傳遞體。錠劑形式包含的活性成份可在香料內(nèi)，通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠，如同軟錠劑包含的活性成份在無活性基內(nèi)，例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠乳劑、凝膠等除活性成份外的本領(lǐng)域已知的傳遞體。
在一個優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的組合物用來治療咳嗽。在一個優(yōu)選實施方式中本發(fā)明提供長效的鎮(zhèn)咳組合物。上述組合物的用量隨多種因素變化，例如特殊物質(zhì)的藥效特性及其給藥方式和路線；年齡、健康狀況、個體重量；癥狀的性質(zhì)和程度、并行治療的種類、治療頻率和預(yù)期效果。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含合適的藥用傳遞體或稀釋劑。合適的藥用傳遞體和制備藥劑形式的方法記載在本領(lǐng)域的一個標準參考書《Remington’sPharmaceutical Science》，Mack出版公司。合適的藥用稀釋劑、賦形劑或傳遞體根據(jù)給藥形式如口服片劑、膠囊、糖漿等來選擇，與傳統(tǒng)藥理實踐一致。該組合物優(yōu)選口服，更優(yōu)選膠囊或漿狀物形式，例如止咳糖漿。
對于液體形式的口服給藥，口服活性物質(zhì)可與任何口服無毒的藥用無活性傳遞體例如乙醇、甘油、水等混合。如果希望或需要，合適的粘合劑、潤滑劑、崩解劑和著色劑也可摻進藥劑中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖例如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味劑、天然或合成膠例如阿拉伯膠、黃芪膠或藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙烯乙二醇、蠟等。合適的潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、醋酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括淀粉、甲基纖維素、瓊脂、皂土、黃原膠等。止咳劑一般包括(除活性成份外)山梨醇、蔗糖、檸檬酸、香料和水。
對于片劑或膠囊形式的口服給藥，活性物質(zhì)可與口服無毒的藥用無活性傳遞體例如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、磷酸二鈣、硫酸鈣、甘露醇、山梨醇等混合。明膠膠囊可包含活性物質(zhì)和粉末狀傳遞體，例如乳糖、淀粉、纖維素衍生體、硬脂酸鎂、硬脂酸等。類似的傳遞體和稀釋劑也可用來制備壓縮的片劑。片劑和膠囊也能制作成持續(xù)釋放產(chǎn)品，在一段時間內(nèi)使活性成份連續(xù)釋放。壓縮片劑可用糖衣或薄膜覆蓋以遮住難受的味道并使其與空氣隔離來得到保護，或用腸衣在胃腸道中選擇分解?？诜簞┛砂珓┖拖懔蟻碓黾踊颊呓邮?。
水、合適的油、鹽水、葡萄糖水及相關(guān)的糖溶液和乙二醇例如丙烯乙二醇或聚乙烯乙二醇可用作腸道外溶液的傳遞體。這種溶液優(yōu)選包含活性成份的水溶性鹽、合適的穩(wěn)定劑，如果需要，還可包含緩沖物質(zhì)。合適的穩(wěn)定劑包括抗氧化劑例如硫酸氫鈉、亞硫酸鈉或抗壞血酸，單獨或混合的檸檬酸及其鹽和EDTA鈉。腸道外溶液也可包含防腐劑，例如殺藻胺、對羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯和氯丁醇。
本發(fā)明的化合物也可以脂質(zhì)體輸送體系形式給藥，例如小的單層泡囊、大的單層泡囊和多層泡囊。脂質(zhì)體可由多種磷脂形成，例如膽固醇、十八胺或磷脂酰膽堿。本發(fā)明的化合物也可配合可溶性聚合物，這些是可命中目標的藥物傳遞體。這些聚合物例如包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羥基乙基天冬酰苯丙胺苯酚或由軟酯酰殘基取代的聚乙烯氧-聚賴氨酸。該物質(zhì)也可配合用作控制藥物釋放的生物可降解聚合物。合適的聚合物包括聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醇、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯、和交聯(lián)或兩親嵌段水凝膠共聚物。
在一個組合物中可使用多種本發(fā)明的化合物。這些化合物可同時、單獨或順次給藥。
D.使用方法本發(fā)明提供一種抑制哺乳動物咳嗽的方法，包括有效量的由化合物A，B，C，D，E，F(xiàn)，G，H的化學(xué)結(jié)構(gòu)式表示的一種生物堿或其組合物的給藥步驟。另一方面，本發(fā)明提供減輕患者咳嗽的一種方法，包括服用有效量的具有鎮(zhèn)咳活性的百部科植物提取物，其中的百部科植物提取物抑制患者咳嗽。
隨著時間的過去，本發(fā)明上下文中的對患者的給藥量應(yīng)該足夠能在患者獲得有益的治療反應(yīng)。給藥量由患者的狀況決定。給藥量也由伴隨對特殊患者給藥所產(chǎn)生的任何副作用的存在、性質(zhì)和程度來決定。在決定獲得鎮(zhèn)咳效果的生物堿給藥的有效量時，標準的定量服法可如本領(lǐng)域已知的Karlsson etal.，Pulmonary Pharmacology和Therapiutics(1999)12215-238。
另一方面，本發(fā)明的特征在于一種減輕動物咳嗽的分離的生物堿的制備方法，包括(a)提供一個植物樣本；(b)將植物樣本與醇接觸以使可溶性植物化學(xué)組合物從植物樣本提取到醇中形成提取液；(c)將提取液中的醇蒸發(fā)形成漿狀物；(d)調(diào)節(jié)漿狀物到一酸性pH值，分離出漿狀物中的特殊物質(zhì)形成上清液部分；(e)調(diào)節(jié)上清液部分到一堿性pH值，用至少一種溶劑提取可溶性植物化學(xué)組合物形成有機溶液；(f)蒸發(fā)有機溶液至干燥狀態(tài)形成總生物堿提取物；(h)純化、分離和結(jié)晶總生物堿提取物形成分離的生物堿；和(i)將分離的生物堿給藥于陣發(fā)性咳嗽的動物，從而減輕或抑制陣發(fā)性咳嗽。
如圖2所示，具有鎮(zhèn)咳活性的水提物以3g/kg的高用量顯著抑制檸檬酸導(dǎo)致的咳嗽在50％左右，增加用量時咳嗽潛伏期延長。圖2A-B表示從Stemona tuberosa中提取的有鎮(zhèn)咳效果的水提物。圖2A表示陣發(fā)性咳嗽次數(shù)的對照百分比，圖2B表示在提取物和對照之間的咳嗽潛伏期比率。
當給藥量為150mg/kg時，總生物堿提取物顯著減少了咳嗽次數(shù)(參見圖3)。結(jié)果表明從Stemona tuberosa中提取的總生物堿提取物對咳嗽有效。此外，結(jié)果還表明由總生物堿提取物產(chǎn)生的鎮(zhèn)咳活性非常強，從而證明，存在于百部科植物中的百部生物堿為鎮(zhèn)咳活性物質(zhì)。
在另一實施方式中，提供了一種篩選抑制咳嗽的方法。例如，用0.5M的檸檬酸刺激一只豚鼠。第一次刺激后產(chǎn)生超過10次陣發(fā)性咳嗽的豚鼠被挑選為對檸檬酸誘導(dǎo)敏感，并被用于進一步的鎮(zhèn)咳測試。動物第一次刺激時的咳嗽次數(shù)和咳嗽潛伏期被記作基礎(chǔ)對照。經(jīng)過48小時的恢復(fù)后，挑選敏感豚鼠并隨機分成不同的組，然后預(yù)先腹腔或口服給藥。對于腹腔給藥，可以是水提物(0.3-3g/kg)、總生物堿提取物(25-150mg/kg)、分離的生物堿例如化合物A(10，30，50和100mg/kg)、或化合物B，C，D，F(xiàn)，G，H(133μmol/kg)，或是認為有鎮(zhèn)咳活性的提取物，預(yù)先30分鐘給藥。對于口服給藥，可以是化合物A或E(400μmol/kg)，或是認為有鎮(zhèn)咳活性的提取物，預(yù)先60分鐘給藥。然后第二次檸檬酸刺激，與基礎(chǔ)對照相比，鎮(zhèn)咳活性體現(xiàn)在每一個受測試動物的咳嗽次數(shù)的減少和咳嗽潛伏期的延長。
每種測試的生物堿鎮(zhèn)咳活性強度采用GraphPad PRISM軟件(Windows95和NT的3.00版本，GraphPad Software Inc.，San Diego，CA，USA)進行了統(tǒng)計比較。盡可能進行參數(shù)檢驗，因為初步研究表明，陣發(fā)性咳嗽次數(shù)和潛伏期的數(shù)據(jù)屬于正態(tài)分布。為進行兩個不同治療組的藥效比較，采用成對或不成對的T檢驗，挑選數(shù)據(jù)匹配或不匹配的組。為進行不同組間的比較，采用方差分析(ANOVA)進行Bonfferoni檢驗。比較不同組的結(jié)果所得小于0.05的概率(P)值被認為在統(tǒng)計上顯著不同?；谶@些檢驗的統(tǒng)計結(jié)果，確定了所有測試的生物堿活性強度，判定了結(jié)構(gòu)與活性間的關(guān)系。
II.實施例原材料1.使用儀器熔點由Fisher Scientific儀器測量。樣品在MeOH溶液中的旋光度用Perkin-Elmer 341旋光計測定。EI-MS采用直接進樣由Finnegan MAT GCQ質(zhì)譜儀測定，而ESI-MS用Finnegan MAT TSQ 7000儀器測定。1H和13C NMR核磁共振(CDCl3)由500MHz或300MHz Bruker核磁共振儀測定?；瘜W(xué)位移δ(ppm)以TMS為內(nèi)標，耦合常數(shù)(J)以Hz給出。化合物B，C和D的X-光衍射數(shù)據(jù)用Bruker SMART CCDX-光衍射儀測定分析，化合物A，E和F的X-光衍射用Bruker P4衍射計儀測定。Merck硅膠板(60F254)用作薄層層析(TLC)，斑點用Dragendorff試劑噴霧顯色，柱層析用Merck硅膠(70-230目)。
2.植物材料上述實驗中所用的Stemona tuberosa干根莖從香港的一家中藥店購買，經(jīng)鑒定是Stemona tuberosa。這種植物材料的證據(jù)樣本(#992300)保藏在香港中文大學(xué)中醫(yī)中藥研究所中藥博物館。
3.動物本發(fā)明使用雄性成年Dunkin-Hartley豚鼠(體重300-500g)，由香港中文大學(xué)實驗動物中心提供。豚鼠置于實驗室內(nèi)(溫度21±1℃；濕度60％)，自然晝/夜循環(huán)，給以標準的食物和水。
五種百部生物堿(化合物A-E)的分離實施例2的總生物堿提取物(24g)于乙醚中進行回流溶解，室溫下放置過夜，得到淡黃色沉淀物，即粗制的化合物A(3.4g)。粗制的化合物A進一步用乙醇結(jié)晶，得到純的生物堿(化合物A，2.5g)。合并母液并蒸干，形成生物堿混合物。生物堿混合物經(jīng)硅膠柱層析分離，分別用CHCl3∶MeOH∶NH4OH(98∶2∶0.05)，(96∶4∶0.05)和(92∶8∶0.05)不連續(xù)梯度洗脫。洗脫液用薄層層析(TLC)跟蹤檢測并合并為4個部分1-4。CHCl3∶MeOH∶NH4OH(98∶2∶0.05)洗脫的部分1(0.9g)進一步經(jīng)硅膠柱層析純化，以己烷-乙酸乙酯(70∶30)為洗脫液，得到化合物E(Eipbisdehydrotuberostemonine J，380mg)。CHCl3∶MeOH∶NH4OH(98∶2∶0.05)洗脫的部分2(0.8g)進一步經(jīng)硅膠柱層析純化，以己烷-乙酸乙酯(60∶40)為洗脫液，得到化合物B(Tuberostemonine J，245mg)。CHCl3∶MeOH∶NH4OH(96∶4∶0.05)洗脫的部分3(2.3g)進一步經(jīng)硅膠柱層析純化，以己烷-乙酸乙酯(50∶50)為洗脫液，分別得到化合物C(Tuberostemonine H，470mg)和化合物A(98mg)。CHCl3∶MeOH∶NH4OH(92∶8∶0.05)洗脫的部分4(3.1g)進一步經(jīng)硅膠柱層析純化，以己烷-乙酸乙酯(35∶65)為洗脫液，得到化合物D(Neostenine，600mg)。
每種化合物的特性如下。
化合物A(Neotuberostemonine)無色針狀晶體，結(jié)晶于己烷/乙酸乙酯。mp159.5-161℃；[α]D20＝+83°(c，0.1；MeOH)；IRνmaxKBr＝cm-11762，1456，1167，1015；ESI-MSm/z(％強度)376[M+H]+(63)；EI-MSm/z(％強度)375[M]+(5)，276[M-C5H7O2]+(100)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.96(3H，t，J＝7.3Hz，H-17)，1.20(3H，d，J＝7.1Hz，H-15)，1.22(3H，d，J＝7.0Hz，H-22)，1.3-2.0(14H，H-1，2H-2，2H-6，2H-7，2H-8，H-9，H-10，2H-16，H-19)，2.05(1H，ddd，J＝15.0，3.3，6.6Hz，H-12)，2.34(1H，ddd，J＝5.4，13.3，15.2Hz，H-19)，2.58(1H，ddq，J＝5.3，7.0，12.1Hz，H-20)，2.84(1H，dq，J＝6.6，6.9Hz，H-13)，2.92和3.03(各1H，m，2H-5)，3.16(1H，dd，J＝3.8，3.9Hz，H-9a)，3.29(1H，dd，J＝7.7，14.0Hz，H-3)，4.36(1H，ddd，J＝5.4，7.7，11.2Hz，H-18)，4.49(1H，dd，J＝3.3，3.0Hz，H-11)。X-光衍射數(shù)據(jù)匯總于表2和圖8。
化合物B(Tuberostemonine J)無色棱晶(prism)，結(jié)晶于己烷/乙酸乙酯。mp180-182℃；[α]D20＝+36.4°(c，0.1；MeOH)；EI-MSm/z(％強度)375[M]+(1.5)，276[M-C5H7O2]+(100)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.01(3H，t，J＝7.5Hz，H-17)，1.18(3H，d，J＝7.5Hz，H-15)，1.22(3H，d，J＝7.5Hz，H-22)，1.40-2.10(15H，H-1，2H-2，2H-6，2H-7，2H-8，H-9，H-10，H-12，2H-16，H-19)，2.25(1H，m，H-19)，2.50(1H，m，H-20)，2.74(1H，m，H-13)，2.74和2.98(各1H，m，2H-5)，3.02(2H，m，H-3和H-9a)，4.19(1H，br，H-11)，4.37(1H，m，H-18)；13CNMR(125MHz，CDCl3)δ11.60(C-17)，12.90(C-15)，14.80(C-22)，25.45(C-16)，29.45(C-7)，30.62(C-6)，32.40(C-2)，33.27(C-8)，34.30(C-19)，34.52(C-9)，34.77(C-10)，38.38(C-12)，41.11(C-20)，45.05(C-13)，45.80(C-1)，50.09(C-5)，64.59(C-3)，66.28(C-9a)，80.18(C-11)，81.28(C-18)，179.18(C-14)，179.26(C-21).X-光衍射數(shù)據(jù)匯總于表2和圖9。
化合物C(Tuberostemonine H)無色針狀晶體，結(jié)晶于己烷/乙酸乙酯。mp183-185℃；[α]D20＝+77.6°(c，0.1；MeOH)；IR νmaxKBrcm-11769，1454，1174，1016；EI-MSm/z(％強度)375[M]+(0.9)，276[M-C5H7O2]+(100)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ1.00(3H，t，J＝7.2Hz，H-17)，1.18(3H，d，J＝7.2Hz，H-15)，1.22(3H，d，J＝7.2Hz，H-22)，1.3-2.0(15H，H-1，2H-2，2H-6，2H-7，2H-8，H-9，H-10，H-12，2H-16，H-19)，2.35(1H，m，H-19)，2.45(1H，m，H-20)，2.61(1H，m，H-13)，2.78和2.84(各1H，m，2H-5)，3.01(1H，m，H-9a)，3.20(1H，m，H-3)，4.37(1H，ddd，J＝4.6，5.9，10.5Hz，H-18)，4.57(1H，d，J＝3.6Hz，H-11)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ11.61(C-15)，11.88(C-17)，15.05(C-22)，21.17(C-16)，24.10(C-7)，27.10(C-8)，27.34(C-6)，31.15(C-2)，33.42(C-19)，35.31(C-10)，41.10(C-9)，41.90(C-20)，44.14(C-12)，44.84(C-1)，47.22(C-13)，54.70(C-5)，67.46(C-9a)，77.97(C-3)，79.24(C-18)，80.67(C-11)，179.10(C-21)，179.45(C-14)。X-光衍射數(shù)據(jù)匯總于表2和圖10。
化合物D(Neostenine)無色棱晶(prism)，結(jié)晶于己烷/乙酸乙酯。mp90-92℃；[α]D20＝+73.6°(c，0.1；MeOH)；EI-MSm/z(％強度)277[M]+(74)，276[M-H]+(100)，233(32)，204(76)，191(67)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ0.97(3H，t，J＝7.5Hz，H-17)，1.20(3H，d，J＝7.2Hz，H-15)，1.3-2.0(14H，H-1，2H-2，2H-6，2H-7，2H-8，H-9，H-10，H-12，和2H-16)，2.27(1H，m，H-13)，2.45(2H，m，H-3)，2.81和2.89(各1H，m，2H-5)，3.22(1H，m，H-9a)，4.50(1H，br，H-11)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ10.67(q，C-17)，11.84(q，C-15)，21.63(t，C-16)，21.70(t，C-7)，28.67(t，C-8)，28.86(t，C-6)，30.65(t，C-2)，34.79(t，C-9)，37.81(d，C-10)，37.97(d，C-12)，43.04(d，C-13)，43.38(d，C-1)，56.28(t，C-5)，56.44(t，C-3)，71.52(d，C-9a)，79.87(d，C-11)，180.24(s，C-14)。X-光衍射數(shù)據(jù)匯總于表2和圖11。
化合物E(Epibisdehydrotuberostemonine J)無色棱晶(prism)，結(jié)晶于己烷/乙酸乙酯。mp186-188℃；[α]D20＝-16.1°(c，0.1；MeOH)；IR νmaxKBr＝cm-12932，2864，1763，1454，1158，997，923；EI-MSm/z(％強度)371[M]+(68)，327(28)，298(100)，272[M-C5H7O2]+(71)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.06(3H，t，J＝7.0Hz，H-17)，1.35(3H，d，J＝7.0Hz，H-22)，1.37(3H，d，J＝7.0Hz，H-15)，1.47(1H，t，J＝11.5Hz，H-10)，1.80(2H，m，H-16)，1.95(2H，m，H-8)，2.06和1.16(各1H，m，2H-6)，2.08和1.47(各1H，m，2H-7)，2.07(1H，d，J＝11Hz，H-19)，2.7-2.9(3H，m，H-13，H-19，H-20)，3.01(1H，t，J＝7.0Hz，H-9)，3.56(1H，dd，J＝5.0，5.8Hz，H-12)，3.79(1H，dd，J＝13.3，14.0Hz，H-5)，4.24(1H，dd，J＝5.0，14.0Hz，H-5)，4.67(1H，d，J＝4.0Hz，H-11)，5.36(1H，dd，J＝5.0，11.0Hz，H-18)，5.99(1H，s，H-2)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ11.39(C-17)，11.88(C-15)，14.97(C-22)，23.25(C-16)，28.58(C-6)，28.88(C-7)，30.97(C-19)，34.87(C-10)，35.04(C-8)，36.10(C-9)，39.57(C-12)，41.80(C-13)，41.94(C-20)，44.85(C-5)，71.70(C-18)，80.89(C-11)，107.13(C-2)，108.59(C-1)，126.60(C-9a)，137.58(C-3)，178.87(C-14)，178.87(C-21).X-光衍射數(shù)據(jù)匯總于表2和圖12。
表2化合物A，B，C，D，E和F的結(jié)晶學(xué)數(shù)據(jù)和參數(shù)


實施例4化合物D的類似物的合成化合物F，G和H化合物F的合成化合物D(250mg)和氫化鋁鋰(120mg)的混合物在四氫呋喃中攪拌回流加熱3小時。冷卻后，在混合物中加入幾滴水來破壞掉多余的氫化鋁鋰。過濾混合物，濾液在40℃下減壓蒸干，得到白色殘留物。將殘留物溶解于4％的鹽酸溶液，用乙醚提取來除去非生物堿化合物。分離出水層并用25％的氨水堿化，然后用乙醚提取。水洗乙醚層并蒸發(fā)得到干粉，在己烷-乙酸乙酯中結(jié)晶得到棱晶(prism)(165mg)。所得合成化合物稱為Neostenine-diol。Neostenine-diol的特性如下。
以己烷-乙酸乙酯重結(jié)晶得棱晶(prism)；mp130-132℃；ESI-MSm/z(％強度)282[M+H]+(100).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.93(3H，t，J＝7.5Hz，H-17)，1.04(3H，d，J＝7.5Hz，H-15)，2.4-2.7(2H，m，H-3)，2.9-3.1(2H，m，H-5)，3.34(1H，m，H-9a)，3.61(2H，m，H-14)，3.90(1H，m，H-11)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ12.18(C-17)，18.90(C-15)，21.58(C-7)，22.26(C-16)，28.09(C-2)，29.59(C-8)，30.03(C-6)，35.59(C-10)，38.58(C-12)，39.45(C-9)，43.83(C-1)，44.99(C-13)，56.87(C-3)，58.91(C-5)，65.49(C-14)，71.43(C-9a)，73.04(C-11).X-光衍射數(shù)據(jù)匯總于表2和圖13。
化合物G的合成化合物D(148mg)溶解于2毫升4％的氫氧化鈉溶液中，60℃水浴攪拌加熱1.5小時?；鞈乙鹤?yōu)榍逡骸Ｓ帽鋮s溶液，攪拌下逐漸加入2％的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH到8。加入冷卻的蒸餾水到最終體積20ml，合成化合物F最終濃度26.67mM。所得溶液在0-5℃下保存。該化合物稱為Neostenine-酸。
化合物G的ESI質(zhì)譜表明僅有一個化合物，分子離子峰為296[M+H]+(100)。
化合物H的合成化合物D(500mg)和氫化鋁鋰(250mg)的混合物在四氫呋喃中回流4小時。冷卻后，在混合物中加入幾滴水來破壞掉多余的氫化鋁鋰。過濾混合物得一殘留物。將殘留物溶解于4％的鹽酸溶液，用乙醚提取來除去非生物堿化合物。分離出水層并用25％的氨水堿化，然后用乙醚提取。蒸干乙醚溶液。將殘留物與20毫升10％的硫酸溶液水浴加熱5小時，用乙醚提取酸性溶液，然后用K2CO3堿化。所得堿性溶液用乙醚提取。水洗有機層，與K2CO3一起干燥，蒸干得到一種油。進一步經(jīng)硅膠柱層析純化并用溶劑CHCl3∶EtOAc∶MeOH(7∶1∶2)洗脫得到一種稱為Neosenine-醚(245mg)的無色油。該化合物特性如下。
ESI-MSm/z(％強度)264[M+H]+(100).1H NMR(300CDCl3)δ0.93(3H，t，J＝＝7.5Hz，H-17)，0.98(3H，d，J＝7.5，H-15)，3.22(1H，m，H-9a)，3.45(1H，dd，J＝8.1，10.2Hz，H-14)，3.87(1H，dd，J＝8.1，8.1Hz，H-14)，4.1(1H，m，H-11)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ12.13(C-17)，12.97(C-15)，21.93(C-16)，22.19(C-7)，29.31(C-2)，29.49(C-8)，31.31(C-6)，35.09(C-10)，37.03(C-12)，38.69(C-9)，38.81(C-13)，42.89(C-1)，56.93(C-3)，57.13(C-5)，72.41(C-14)，72.64(C-9a)，80.06(C-11).
當給藥量為150mg/kg時，總生物堿提取物顯著減少了咳嗽次數(shù)(參見圖3)。結(jié)果表明從Stemona tuberosa提取的總生物堿提取物對咳嗽有效。此外，結(jié)果還表明由總生物堿提取物產(chǎn)生的鎮(zhèn)咳活性非常強，因此，存在于這種提取物中的百部生物堿為鎮(zhèn)咳活性化合物。
從Stemona tuberosa中分離出的純百部生物堿，化合物A能抑制檸檬酸導(dǎo)致的咳嗽，并且其活性具量效關(guān)系，并且用50和100mg/kg(參見圖4)的劑量也顯著延長咳嗽的潛伏期。此外，采用臨床常用止咳藥可待因作為陽性對照進行對比研究。結(jié)果表明化合物A和可待因的ED50值相似。
表3五種天然百部生物堿的結(jié)構(gòu)-鎮(zhèn)咳活性關(guān)系 表4列出了三種合成百部生物堿和化合物D的結(jié)構(gòu)-鎮(zhèn)咳活性關(guān)系。表4三種合成百部生物堿和化合物D的結(jié)構(gòu)-鎮(zhèn)咳活性關(guān)系 止咳活性強度的排序是化合物A＝D＞C≈F≈H≈B。結(jié)果表明定義的三環(huán)體系(環(huán)A，B和C)(圖1)是產(chǎn)生鎮(zhèn)咳活性的主要關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，在三個環(huán)連接處的所有順式構(gòu)造是最佳結(jié)構(gòu)。此外，環(huán)A上的3位取代基和環(huán)C上的11和12位取代基也影響這些生物堿的止咳活性，當α-甲基-γ-丁內(nèi)酯基環(huán)取代在環(huán)C11和12位時，其止咳活性為所有測試的百部生物堿中最強。
表5不同拮抗劑對化合物A鎮(zhèn)咳活性的影響結(jié)果

實施例10鎮(zhèn)咳活性機制的體外受體結(jié)合試驗代表性百部生物堿化合物A被用來進行下面主要的受體結(jié)合試驗。在10微摩爾濃度的條件下通過Novascreen Biosciences Crop.(7170StandardDrive，Hanover，Maryland 21076，USA)進行雙份的標準放射性同位素示蹤配體結(jié)合試驗。監(jiān)測的受體包括所有已知的涉及產(chǎn)生鎮(zhèn)咳活性的受體，例如[3H]Deltorphin(δ1-opioid receptor)，[3H]Naltrindole(δ2-opioid receptor)，[3H]DAMGO(μ-opioid receptor)，[3H]U69593(κ1-opioid receptor)，[3H]CGP54626A(GABABreceptor)，[3H]8-OH-DPAT(5HT1Areceptor)，和[3H]Glibenclamide(Dopamine D2-receptor)。體外受體結(jié)合試驗(表6)表明化合物A與以上所有的受體均未顯示任何的親和力。因此，從活體動物和體外研究獲得的結(jié)果證實，所有四種有效的新百部生物堿和化合物A的鎮(zhèn)咳活性機理與嗎啡受體無關(guān)。
表6化合物A的放射性同位素示蹤配體結(jié)合試驗結(jié)果


在此描述的實施例和實施方式僅起說明目的，本領(lǐng)域科技人員會明白其各種改進和變化，各種改進和變化包含在本申請及所附權(quán)利要求的主旨和范圍內(nèi)。在此引述的所有出版物、專利和專利申請包含在參考文獻內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種化合物，具有結(jié)構(gòu)式 其中R1選自氫和α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基；R2選自β氫和α氫；R3選自β氫和α氫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基，R2是α氫，R3是α氫；或者R1是α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基，R2是α氫，R3是β氫；或者R1是α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基，R2是β氫，R3是β氫。
3.一種化合物，具有結(jié)構(gòu)式
4.一種化合物，具有結(jié)構(gòu)式 其中R4是羥基；和R5選自羥甲基和羧基；或者，R4和R5與它們所連接的碳一起，形成取代的呋喃環(huán)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中R4是羥基，R5是羥甲基；或者R4是羥基，R5是羧基。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中所述化合物具有結(jié)構(gòu)式
7.一種藥物組合物，所述的組合物包括從具有權(quán)利要求1所述的結(jié)構(gòu)式Ia，或具有權(quán)利要求3所述的結(jié)構(gòu)式Ib，或具有權(quán)利要求4-5任一項所述的結(jié)構(gòu)式Ic，或具有權(quán)利要求6所述的結(jié)構(gòu)式Id中選出的一種化合物或者兩種以上化合物的混合物；和藥用載體。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中所述的化合物具有結(jié)構(gòu)式 其中R1選自氫和α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基；R2選自β氫和α氫；和R3選自β氫和α氫。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的組合物，其中R1是α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基，R2是α氫，和R3是α氫；或者R1是α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基，R2是α氫，和R3是β氫；或者R1是氫，R2是β氫，和R3是β氫；或者R1是α(S)-甲基-γ(S)-丁內(nèi)酯基，R2是β氫，和R3是β氫。
10.一種具有鎮(zhèn)咳活性的百部科植物提取物，其中所述的百部科植物提取物抑制患者咳嗽。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的植物提取物，其中所述植物提取物是0-95％的有機溶劑提取物或者是總生物堿提取物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的植物提取物，其中所述植物提取物包括從權(quán)利要求8-9任一項所述的結(jié)構(gòu)式Ia和權(quán)利要求3所述的結(jié)構(gòu)式Ib中選擇的一種化合物或至少兩種以上的化合物的組合物。
13.一種藥物組合物，所述組合物包括具有鎮(zhèn)咳活性的抗百部科植物的提取物，和藥用載體。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述植物提取物是0-95％的有機溶劑提取物或者是總生物堿提取物。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述植物提取物包括從權(quán)利要求8-9任一項所述的結(jié)構(gòu)式Ia和權(quán)利要求3所述的結(jié)構(gòu)式Ib中選擇的一種化合物或至少兩種以上的化合物的混合物。
16.一種用于制備權(quán)利要求14的0-95％的有機溶劑提取物的方法，所述方法包括(a)使百部科植物提取物樣品與溶劑接觸以形成溶液；和(b)蒸發(fā)所述溶液至干燥狀態(tài)以形成具有鎮(zhèn)咳活性的0-95％的有機溶劑提取物。
17.一種用于制備權(quán)利要求14所述的總生物堿提取物的方法，所述方法包括(a)使百部科植物提取物樣品與溶劑接觸以形成溶液；(b)使所述溶液中的有機溶劑蒸發(fā)以形成漿狀物；(c)調(diào)整所述漿狀物至酸性pH值以形成上清液組分；(d)調(diào)節(jié)上清液組分到一堿性pH值，然后用有機溶劑提取以形成有機溶液；和(e)蒸發(fā)有機溶劑至干燥狀態(tài)以形成具有鎮(zhèn)咳活性的總生物堿提取物。
18.一種從權(quán)利要求17所述的總生物堿提取物中制備具有鎮(zhèn)咳活性的生物堿的方法，進一步包括對所述總生物堿提取物進行分離，提純和結(jié)晶，從而形成具有鎮(zhèn)咳活性的分離的生物堿。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述分離的生物堿是具有從權(quán)利要求1-2所述的結(jié)構(gòu)式Ia和權(quán)利要求3所述的結(jié)構(gòu)式Ib中選擇的結(jié)構(gòu)式的化合物。
全文摘要
本發(fā)明提供具有鎮(zhèn)咳活性的植物提取物、分離的生物堿、合成生物堿和混合物。在一些優(yōu)選實施方式中，植物提取物和分離的生物堿獲自一種百部科植物。在另外的優(yōu)選實施方式中，植物提取物和分離的生物堿來自一種Stemona、Croomia或Stichoneuron屬的植物。在最優(yōu)選實施方式中，植物提取物和分離的生物堿獲自Stemona tuberosa植物。本發(fā)明進一步提供分離這些植物提取物和生物堿的方法。另外，通過服用具有鎮(zhèn)咳活性的植物提取物、生物堿和組合物，本發(fā)明提供了減輕和抑制咳嗽的方法。
文檔編號C07D491/16GK1453279SQ0312247
公開日2003年11月5日 申請日期2003年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月24日
發(fā)明者林革, 鐘凱聲, 韓寶銘, 畢培曦, 董輝 申請人:香港中文大學(xué)