專利名稱：對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法涉及的是關(guān)于對(duì)存在于水或含水醇中的白首烏的皂甙類進(jìn)行提取、精制、生產(chǎn)的方法。
有報(bào)告稱白首烏具有各種優(yōu)異的藥理活性，例如抗衰老作用(郭啟錚等《中國醫(yī)藥學(xué)報(bào)》1987年2月，32期)、免疫調(diào)節(jié)作用(顧立剛《中藥近報(bào)》1986年11月，50期)、促進(jìn)毛發(fā)生長作用(吳秉芹等《中國醫(yī)藥學(xué)報(bào)》1987年2月，29期)等都曾報(bào)道過。作為白首烏中含有的有效成分之一的皂甙類，在《中藥志》(第二冊(cè)，人民衛(wèi)生出版社，33 1頁，1979年)中已有記載。這些皂甙類是具有類似的化學(xué)結(jié)構(gòu)的多種化合物的混合物。其中的七種已探明其化學(xué)結(jié)構(gòu)(J.Chen，Z.Zhang and J.Zhou，Acta Bot.Yunnanica 1990年12月，197期)。它們是C21類固醇葡萄糖甙(C21類固醇糖甙，孕烷葡萄糖甙)，命名為Wilfoside C3N、C1N、C1G、K1N、Cynauricuricuoside A、B、C。眾所周知，在朝鮮半島當(dāng)強(qiáng)壯藥使用的CynanchunWilfordi Hemsly中也含有Wilfoside(H.Mitsuhashi and K.Hayashi，Shoyakugakuzasshi，1985年1月，39期)。大家知道，這些皂甙類是具有優(yōu)異的抗腫瘤活性作用的非常重要的化合物(趙謹(jǐn)?shù)取吨袊t(yī)藥學(xué)報(bào)》1988年3月，29期)。而且近年曾有過報(bào)道蘿摩科的其它類植物中也有優(yōu)異的藥理活性作用的多種孕烷葡萄糖甙，例如海南牛奶類中具有抗肥胖作用的新的孕烷葡萄糖甙(B.Ma et al.，J.Nat.Prod.，1997年60期，134-138頁)、Leptadenia hastate Decne中具有抗腫瘤活性作用的孕烷莆萄糖甙(R.Aquino et al；J.Nat.Pord，1996年，59期，555-564頁)等。這些都在暗示白首烏中所含有的皂甙類的重要性正日益凸現(xiàn)。
白首烏作為食品用的產(chǎn)品形態(tài)，現(xiàn)在市場上銷售的是其根基部分原封不動(dòng)切成片狀的和對(duì)其根莖部加工、精制而成的(粉末、精制粉末、速熔品等)。也就是說，基本只有兩種產(chǎn)品。還有將它的水提取物加以混合成的洗發(fā)液，市場上也有銷售。在白首烏數(shù)百年的歷史中，只有如此少量的產(chǎn)品被開發(fā)出來，令人驚訝！發(fā)揮白首烏的特點(diǎn)開發(fā)出各種產(chǎn)品是今后的發(fā)展要求。白首烏具有抗衰老作用、調(diào)節(jié)免疫力作用、促進(jìn)毛發(fā)生長作用等優(yōu)異的藥理作用，因此作為保健食品與已有的制品相比，服用量很少，即可顯現(xiàn)其優(yōu)異的強(qiáng)藥理作用，是非常重要的，是今后所追求的方向。另外，作為醫(yī)藥品的用途也是非常重要的，再有作為化妝品少量的添加即可發(fā)揮其優(yōu)良作用，這也是今后追求的方向。要生產(chǎn)出用少量就能展示其非常優(yōu)異藥理作用的保健食品、醫(yī)藥品、化妝品必須研制出在工業(yè)上可以使用的提取方法來提取白首烏中含有的皂甙類但以往一直沒有成功。因此，工業(yè)上可以使用的簡便、廉價(jià)、省力、高效而無環(huán)境污染的皂甙類提取方法是今后所要求的。
白首烏作為食品的現(xiàn)在的制成品形態(tài)有二種，一種是將其根莖部原封不動(dòng)切成片狀的首烏片，另一種是對(duì)其根莖部加工精制而成的首烏粉。首烏粉現(xiàn)在的制造方法是將未加工的根莖部加入大量冷水混合粉碎，去掉纖維，再經(jīng)離心分離后使水和固體部分分開，將固體部分收集起來進(jìn)行干燥。這種方法與利用其根莖部制造淀粉的一般制造方法相同，基本方法是用冷水沖洗，將冷水中末溶解部分制成產(chǎn)品。這是利用白首烏的根莖部含有大量淀粉物質(zhì)的特征，進(jìn)行開發(fā)制造的方法。因此，這樣制造出來的產(chǎn)品主要成分是淀粉。此制造方法的一個(gè)大問題點(diǎn)是在離心分離過程中，廢棄掉水的部分，即由于將含水部分廢棄掉，白首烏溶于水的成分和不溶解于水或溶解度很小的，比重比水輕的成分等，通過離心分離之后，在水中含有的成分就被排泄掉。這不僅限于離心分離法，用水沖洗制造時(shí)也是常見的問題。白首烏中含有的有效成分大部分可溶于水，隨著水的廢棄而被廢棄掉了。與本發(fā)明有關(guān)聯(lián)的重要的有效成分皂甙類，對(duì)水的溶解性雖然不大，但是作為葡萄糖甙具有界面活性劑的性質(zhì)，所以與水有混合性，由于水部分被廢棄，因而皂甙類大部分被廢棄掉。因此，現(xiàn)在的制造方法對(duì)水的使用量、使用方法等想了許多辦法，設(shè)法制造盡可能使其含有大量的多種有效成分的產(chǎn)品。但是減少水的使用量等控制其有效成分流出的方法，卻使最終的產(chǎn)品質(zhì)量降低，也成為一個(gè)很大的問題。解決這些問題的有效方法之一就是在大量廢棄的水中簡單的通過工業(yè)規(guī)模來提取其中含有的皂甙類，如果提取可行的話，這些皂甙類的再利用也是可行的，例如和現(xiàn)在市場上的產(chǎn)品混合后，生產(chǎn)比以往產(chǎn)品效果更好的新產(chǎn)品或者生產(chǎn)新的保健食品還有醫(yī)藥品、化妝品等方面用途，可以從白首烏中提取的產(chǎn)品形態(tài)將會(huì)極其廣泛。因此，迫切需要一種簡便、廉價(jià)、高效且實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的能夠從水部分提取皂甙類的提取方法。
因提取對(duì)象是固體狀態(tài)或液體狀態(tài)(例如，水或含水醇的浸析液等)而異，固體狀態(tài)時(shí)，包括制作醫(yī)藥品、化妝品等，一般情況下使用各種溶媒，例如氯仿、乙醇、甲醇、水及它們的混合溶媒等將皂甙類溶解后進(jìn)行提取。在食品制造中，從安全性觀點(diǎn)出發(fā)最好使用乙醇、水以及它們的混合溶液。將這些提取物中的溶媒除去，剩下的提取物可以作為產(chǎn)品。一般來說，這些提取物因?yàn)楹卸喾N大量的異物，所以一般要進(jìn)一步進(jìn)行各種精加工，例如深層次提取溶媒，根據(jù)不同溶媒進(jìn)行分配，利用離子交換樹脂進(jìn)行精制、活性炭處理、活性氧化鋁處理等操作。為制造能達(dá)到醫(yī)藥類純度的制品時(shí)往往還需要進(jìn)行例如硅膠、凝膠、離子交換樹脂等各種色譜法，以及進(jìn)一步純化用的高速液體色譜法，親和力色譜法等操作。提取對(duì)象是液體狀態(tài)時(shí)也有超臨界提取等特殊提取方法，但一般來說，水浸析液情況下皂甙類溶解，使用與水分離的有機(jī)溶液，例如用已烷、三氯甲烷、醋酸鹽、N-丁醇等提取皂甙類，除去溶媒之后，采用上述對(duì)象物，在固體狀態(tài)時(shí)的各種精制方法將其提純，達(dá)到其所需的純度。用含水醇提純時(shí)，在醇含量能夠達(dá)到與其溶媒分離程度的狀態(tài)下，同用水提取液采取相同的方法。這些制造方法，在醫(yī)藥品，化妝品的場合是可行的。但在食品的場合，用大豆制造食用油時(shí)往往使用己烷，但大多數(shù)場合下，從安全性的觀點(diǎn)來看，不希望用這些有機(jī)溶媒。另外，在醫(yī)藥品、化妝品的場合，處理大量的白首烏水浸析液時(shí)，還需要大規(guī)模的提取裝置、溶液回收裝置、使用大量的有機(jī)溶媒，制造方法非常復(fù)雜，制造成本很高。從而，在工業(yè)上迫切需要簡便、廉價(jià)省力、高效的、有利于環(huán)境保護(hù)的提取方法。
這樣制造出來的皂甙類，含有白首烏中含有的多種皂甙化合物。如前面已記述的，現(xiàn)已驗(yàn)明有7種白首烏的皂甙類化學(xué)結(jié)構(gòu)。但是，白首烏中還含有更多的皂甙類。我們認(rèn)為它們是化學(xué)結(jié)構(gòu)尚未確定的新型化合物。也就是說，本發(fā)明具有能將有用的白首烏的新型皂甙類制造出來的優(yōu)秀的特征。
對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法，其特征在于將白首烏的水或含水醇浸析液通過甲基丙烯系合成吸附劑或芳香族(苯乙烯、二乙烯基苯)系合成吸附劑吸附，再用含水40％～100％的含水醇或醇或者丙酮加以解吸洗提處理，將洗提液中的溶媒除去，便能提取白首烏中的皂甙類。
對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法可將白首烏的水或含水率低于40％的含水醇浸析液，吸附在甲基丙烯系合成吸附劑上，用含水40％～100％的醇或醇加以解吸洗提，去除溶媒，從白首烏中獲取皂甙類。
對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法可將白首烏的水或含水率低于20％的含水醇浸析液，吸附在甲基丙烯系合成吸附劑上，用含水80％～100％的醇或醇加以解吸洗提，去除溶媒，從白首烏中獲取皂甙類。
對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法可將白首烏的水或含水率低于20％的含水醇浸析液，脫鹽處理后，吸附在甲基丙烯系合成吸附劑上，用含水80％～100％的醇或醇加以解吸洗提，去除溶媒，從白首烏中獲取皂甙類。
對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法可將白首烏的水或含水率低于20％的含水醇浸析液，吸附在芳香族(苯乙烯、二乙烯基苯)系合成吸附劑上，用丙酮對(duì)其解吸洗提，去除溶媒，從白首烏中獲取皂甙類。
所述白首烏的水是指制作白首烏的精制粉末時(shí)產(chǎn)生大量含有白首烏的皂甙類水浸析液，或者將新鮮的白首烏放在水中懸濁、攪拌、充分浸泡后進(jìn)行離心分離產(chǎn)生的含有首烏的皂甙類離心分離液。
所述含水醇的浸析液是指采用含水醇對(duì)新鮮的白首烏或干燥的白首烏片、粉末進(jìn)行浸析處理，提取出含有白首烏的皂甙類含水醇浸析液。
上述含水醇或醇包括甲醇、乙醇、丙醇。
食品、醫(yī)療、觸媒、水處理等化學(xué)領(lǐng)域中使用的具有代表性的樹脂是離子交換樹脂。離子交換樹脂中，有強(qiáng)酸性、弱酸性、強(qiáng)堿性、弱堿性、螯合物樹脂等。這些離子交換樹脂的代表性高分子載體為苯乙烯和二乙烯基苯的共重合體，根據(jù)交聯(lián)度的不同有種類非常多的離子交換樹脂，在工業(yè)上廣泛地使用。而且根據(jù)特殊的聚合法，也有的把高分子載體做成多孔性。本發(fā)明中，離子交換樹脂也可作為輔助性使用，但是有關(guān)發(fā)明的關(guān)鍵性樹脂并不是離子交換樹脂。
本發(fā)明所使用的合成吸附劑根據(jù)不同的高分子載體的化學(xué)結(jié)構(gòu)，分為甲基丙烯系及芳香族(苯乙烯·二乙烯基苯)系兩種。這些合成吸附劑的基本結(jié)構(gòu)是具有不溶性三維交聯(lián)結(jié)構(gòu)的高分子化合物，一般來講，具有多孔性。雖然不具有離子交換基，但具有很大的表面面積，具有主要通過范德瓦耳斯力吸附各種有機(jī)化合物的性質(zhì)。其芳香族系吸附劑通常為X＝H，但為了增強(qiáng)疏水性，也有加入Br等成為芳香族系化合物的。甲基丙烯系合成吸附劑，不含芳香族系化合物，與芳香族系合成吸附劑相比，其高分子載體的極性很高，其性質(zhì)適合吸附相對(duì)極性較高的有機(jī)化合物。其結(jié)構(gòu)式為其代表性甲基丙烯系合成吸附劑甲醛系樹脂HP2MG的化學(xué)結(jié)構(gòu)。丙烯系合成吸附劑是甲基丙烯系的近緣化合物，有時(shí)也被稱之為甲基丙烯系合成吸附劑。芳香族系合成吸附劑根據(jù)芳香環(huán)的置換基的有無，為增大表面積進(jìn)行的特殊處理，細(xì)孔分布，粒子直徑的不同等。甲基丙烯系合成吸附劑。根據(jù)細(xì)孔分布，交聯(lián)度的不同等，市場上有許多種類的合成吸附劑在銷售，廣泛地被工業(yè)上所使用，這些商品根據(jù)不同制造廠家而不盡相同，有各種各樣商品名稱。現(xiàn)例示幾個(gè)商品名供參考。日本三菱化學(xué)株式會(huì)社生產(chǎn)的合成吸附劑，作為甲基丙烯系商品，有甲醛系樹脂HP10、HP2MG；作為芳香族系商品，有甲醛系樹脂HP10、HP20、HP21、HP30、HP40、HP50、作為芳香族系加入疏水基的商品，有氨基粒皂SP205、SP206、SP207作為芳香族來經(jīng)過高表面積處理的商品，有氨基粒皂SP800、SP825、SP850、SP875，作為粒子直徑較小的精密分離用產(chǎn)品，有甲醛系樹脂HP20SS氨基粒皂SP20SS等產(chǎn)品，中國杭州爭光樹脂有限公司生產(chǎn)的SD300、SD301、SD302等為芳香族系合成吸附劑。上海亞東核級(jí)樹脂有限公司生產(chǎn)的HZ802、HZ803等為芳香族系合成吸附劑。
利用這些合成吸附劑提取、精制、制造白首烏中皂甙類時(shí)，含水醇的醇濃度和白首烏的皂甙類的吸附及解吸的關(guān)系非常重要。吸附及解吸受到多種因素的影響。例如合成吸附劑的種類不同制造公司的產(chǎn)品的差異、每一制造批次的品質(zhì)差異、溫度、使用溶媒量、吸附方法、吸附時(shí)間、解吸方法、解析時(shí)間、共存的離子的種類、以及濃度等。本發(fā)明者們銳意探討的結(jié)果，已經(jīng)明確在水中，白首烏的皂甙類可被甲基丙烯系及芳香族系合成吸附劑所吸附。
此外，在[傳統(tǒng)的技術(shù)及發(fā)明打算解決的課題]一項(xiàng)中已作了闡述，但制作白首烏的精制粉末的場合，根據(jù)現(xiàn)在的制造方法，白首烏的皂甙在大量的水中含有狀態(tài)下被廢棄。從這種大量的水浸析液中提取皂甙類是本發(fā)明的主要成果之一。因此，水浸析液的吸附是十分重要的，這種場合，白首烏的皂甙類被合成吸附劑所吸附。但有時(shí)從新鮮的白首烏或干燥的白首烏片、粉末中提取皂甙類。在這種場合下，因?yàn)樵磉邦悓?duì)水的溶解度低，為了提高溶解度使用含水醇等進(jìn)行提取，可以降低溶媒量，提高了提取效率。要進(jìn)一步搞清楚用高濃度含水醇進(jìn)行吸附和解吸的條件，就意味著要搞清用水或者低醇濃度來吸附皂甙類的提取條件，這對(duì)于在白首烏中抽取、精制、制造皂甙類是非常重要的。當(dāng)然如我們從文獻(xiàn)中獲知的那樣，用氯仿和甲醇的混合溶媒來進(jìn)行提取是一般的方法。但這些溶媒在食品方面使用并非是理想的。在醫(yī)藥、化妝品方面，也往往出現(xiàn)殘存溶媒的問題，為了完全除去殘留溶媒，而且為了不產(chǎn)生公害(環(huán)境污染)，需要一些設(shè)備，需要各種類型的大規(guī)模裝置從而造成工業(yè)上的不利因素。因而用含水醇，特別是含水乙醇進(jìn)行提取，從環(huán)境的觀點(diǎn)出發(fā)最為有利，加之從安全性、經(jīng)濟(jì)性等方面考慮，在工業(yè)化方面是理想的。
使用甲基丙烯系合成吸附劑的場合，用含水40％醇，雖然吸附不徹底但有相當(dāng)數(shù)量的皂甙類被吸附，所以，寧可吸附得不徹底，但排除了雜質(zhì)，提高了純度，將主要視線著眼于這一點(diǎn)時(shí)，形成了我們所推薦的吸附條件。這種條件下，被吸附的皂甙類，在40～100％更高的醇濃度的含水醇或醇中，從合成吸附劑進(jìn)行解吸，將這些洗提液收集起來，將溶媒除去，即可制造出白首烏的皂甙類。這里表達(dá)為用100％的醇進(jìn)行洗提是為了敘述方便起見。換句話說，這種場合下使用的醇是無水醇，但實(shí)際上，在吸附皂甙類的合成吸附劑中，或多或少會(huì)含有水份，所以并非文字中所描述的100％。本說明書中的100％甲醇、丙醇等的表達(dá)也是同樣的。
在使用芳香族(苯乙烯·二乙烯基苯)系合成吸附劑的場合，白首烏的皂甙類比用甲基丙烯系合成吸附劑更強(qiáng)的吸附力吸附在合成吸附劑上。在洗提時(shí)，需要濃度更高的醇，即讓含水率低于20％的含水醇的浸析液，吸附在芳香族系合成吸附劑上，要用含水80～100％醇或者醇對(duì)其進(jìn)行洗提，將這些洗提液收集起來，除去溶媒之后，即可制造出白首烏的皂甙類。使用這些高濃度含水醇可以使白首烏中的皂甙類在提取時(shí)使用的溶媒量大量的減少，也是工業(yè)上的一大長處所在。
本發(fā)明者們研討的結(jié)果，在用芳香族系合成吸附劑時(shí)，已判明白首烏的皂甙類的吸附受到了共存的離子的影響。即為了使白首烏的皂甙類吸附在合成吸附劑上更加徹底，也就是為了在工業(yè)上更加有效的提取，在除去共存的離子的狀態(tài)下，使其吸附在合成吸附劑上更為有利。脫鹽時(shí)可以采用離子交換樹脂處理。電透析等工業(yè)上常用的方法。
本發(fā)明者們研究的結(jié)果，在利用芳香族系合成吸附劑的場合，已判明用含水醇或醇，解吸白首烏的皂甙類的會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的尾部延長作用。即從合成吸附劑中解吸出來會(huì)慢慢地延長時(shí)間，這種情況將使皂甙類的回收率減低，使用的溶媒量增加(其結(jié)果必然要使用更大規(guī)模的各種裝置)，使合成吸附劑的壽命縮短等，派生出許多不利于工業(yè)化生產(chǎn)的問題。為解決這些問題，丙酮的效果是明顯的，即通過使用丙酮使其能夠迅速從合成吸附劑中解吸，從而解決了工業(yè)上的一個(gè)問題點(diǎn)。此時(shí)使用的丙酮，在沒有障礙的范圍內(nèi)，當(dāng)然容許含有水、乙醇等。
甲基丙烯系合成吸附劑和芳香族系合成吸附劑，對(duì)白首烏的皂甙類進(jìn)行吸附、解吸的作用，以及對(duì)白首烏的皂甙類以外的化合物進(jìn)行吸附及解吸的作用，兩者之間有著很大的差異。因而將二者的合成吸附劑進(jìn)行組合使用，便可以對(duì)更高純度的皂甙類進(jìn)行提取、精制、制造，這一點(diǎn)是顯而易見的。
如上面所述，使用甲基丙稀系合成吸附劑或芳香族類合成吸附劑，從白首烏的水或含水醇的浸析液中提取、精制、制造白首烏的皂甙類，這是以前完全未報(bào)導(dǎo)過的新型制造法。
以下的實(shí)施例記述皂甙類所采用的定量法。
1.樣品根據(jù)文獻(xiàn)(J.Chen，Z.Zhang and J.Zhou，Acta Bot，Yunnanica 12，197，1990)中的方法，從新鮮的白首烏中單獨(dú)分離出Wilfoside C1N，C3N，C1G，K1N。以下的實(shí)例中，主要將Wilfoside C1N當(dāng)作標(biāo)品用。
2.定量法使用高效液體色譜法(HPLC，high performance liquid chromatography；Waters公司，2487型)進(jìn)行定量。吸附塔為Nova-Pack C18(3.9×150mm)色層分析溶媒為82.5％甲醇(甲醇∶水＝82.5∶17.5)，流速為1mL/min，測量用UV，免檢物注入量為5mL，進(jìn)行了分析。用Wilfoside C1N、K1N標(biāo)品，制作了標(biāo)品濃度和面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線。兩種皂甙的標(biāo)準(zhǔn)曲線沒有太大差異。因此白首烏雖含有多種皂甙，但假定這些標(biāo)準(zhǔn)曲線相同，計(jì)算出皂甙類的總含量。每個(gè)實(shí)施例都進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)曲線的修改。
實(shí)施例1將去皮后的新鮮白首烏(25g)放在水中(250mL)中懸濁、攪拌、充分浸泡后，進(jìn)行離心分離(3000rpm)。將離心分離的上清液(230mL)分為6、50、85、85mL四份。6mL原樣濃縮干燥用2mL的乙醇，對(duì)可溶部進(jìn)行分析。50mL濃縮干燥后測定其重量時(shí)，為310mg。85mL原封不動(dòng)地通過甲醛系樹脂HP2MG(甲基丙烯系合成吸附劑、三菱化學(xué)株式會(huì)社制、10mL)的吸附塔進(jìn)行沖洗，變成120mL，再將其中的6mL進(jìn)行濃縮干燥，使用2mL的乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析。然后用30mL乙醇洗提2次。分別原封不動(dòng)地進(jìn)行HPLC分析。另外的85mL原封不動(dòng)地通過甲醛系樹脂HP2MG(10mL)吸附塔進(jìn)行充分沖洗。將通過液和水洗液合并，濃縮干燥后用干燥機(jī)進(jìn)行通宵干燥。其重量為490mg，然后用0.1m Nacl，30mL進(jìn)行試洗提。然后充分水洗，繼續(xù)用乙醇(30mL)進(jìn)行洗提，對(duì)乙醇洗提劃分進(jìn)行HPLC分析，推算出0.1m，Nacl的洗提率。實(shí)施例1的結(jié)果如下。皂甙類，以Wilfoside C1N為基準(zhǔn)根據(jù)HPLC分析的結(jié)果進(jìn)行了計(jì)算。
白首烏的水浸析物大約37mg(吸附到甲醛系樹脂HP2MG(10mL)上。
計(jì)算出白首烏的皂甙類吸附在HP2MG上的吸附率。其結(jié)果為85mL中含有Wilfoside C1N為2.1mg幾乎100％被吸附。第一次乙醇洗提量為2.0mg。洗提率約為100％，第二次乙醇洗提率約為3％。
用0.1M，Nacl時(shí)幾乎未洗提出。
甲醛系樹脂HP2MG吸附的物質(zhì)中，Wilfoside C1N的含量為5.7％左右。甲醛系樹脂HP2MG吸附的物質(zhì)中，總皂甙量推算為樹脂吸附物約15.9％。
以Wilfoside C1N為基準(zhǔn)推算了用甲醛系樹脂HP2MG處理后，皂甙類的濃縮倍率，皂甙類以外物質(zhì)的去除率。從新鮮白首烏干物重量濃縮了約250倍，從新鮮白首烏水樣提取物濃縮了約14倍。新鮮白首烏水樣提取物的皂甙類以外的物質(zhì)約93％被去除掉。
實(shí)施例2將去皮后的新鮮白首烏(15g)放在水(150mL)中懸濁、攪拌、充分浸泡后，進(jìn)行離心分離(3000rpm)，將離心分離的上清液(134mL)分成6mL、128mL兩份。6mL原樣濃縮干燥，用2mL的乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析。128mL原樣通過甲醛系樹脂HP2MG(10mL)吸附塔充分水洗后，使用含水50％、70％、90％乙醇以及100％乙醇(各30mL)進(jìn)行洗提，而且分別進(jìn)行HPLC分析。實(shí)施例2的結(jié)果如以下所記。皂甙類的洗提率以Wilfoside C1N為基準(zhǔn)，根據(jù)HPLC分析結(jié)果計(jì)算，用含水50％乙醇的洗提率為37％，用含水70％乙醇洗提率為46％，用含水90％乙醇洗提率為15％，用100％乙醇洗提率為4％，合計(jì)為102％。
實(shí)施例3與實(shí)施例2一樣使用含水50％、70％、90％的乙醇及100％乙醇進(jìn)行了洗提，其結(jié)果，含水乙醇同乙醇時(shí)沒有多大差別。同樣可以采用甲醇、丙醇進(jìn)行洗提，將洗提液濃縮、干燥、脫除溶媒，即可以從白首烏中獲取皂甙類。
實(shí)施例4將去皮新鮮白首烏(10g)放在水(100mL)中懸濁、攪拌、充分浸泡后，進(jìn)行離心分離(3000rpm)。將離心分離的上清液(88mL)通過強(qiáng)堿性離子交換樹脂(三菱化學(xué)株式會(huì)社制甲醛系樹脂SA-11A、OH-型10mL)吸附塔用20mL的水沖洗，將通過液和水洗液合并，再通過強(qiáng)酸性離子交換樹脂(三菱化學(xué)株式會(huì)社制甲醛系樹脂SK＝104H-型10mL)吸附塔，用20mL的水沖洗。再將通過溢和水洗液合并，通過HP20(芳香族系合成吸附劑、三菱株式會(huì)社、20mL)吸附塔進(jìn)行水洗。將通過液和水洗液(200mL)合并，取其中6mL濃縮干燥后，用2mL的乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行了HPLC分析。再將50％的乙醇(60mL)通過甲醛系樹脂HP20吸附塔原樣進(jìn)行HPLC分析。接下來用乙醇(60mL)進(jìn)行洗提，原樣進(jìn)行HPLC分析。接下來用丙酮(40mL)洗提，除去溶媒后，用2mL的乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析。實(shí)施例4的HPLC分析結(jié)果可總結(jié)為甲醛樹脂HP20吸附塔的通過液及水洗液中，沒有檢測出皂甙類，皂甙類幾乎全部被HP20所吸附。
50％的乙醇洗提液中，沒有檢測出皂甙類，沒有被洗提出。
乙醇的洗提液中，若以Wilfoside C1N為基準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算，約有50％的皂甙類被洗提回收。
用丙酮可以使皂甙類全部回收。
實(shí)施例5將去皮的新鮮白首烏(30g)放在水(300mL)中懸濁、攪拌、充分浸泡后，進(jìn)行離心分離(3000rpm)。在離心分離的上清液中加入少量水后達(dá)到300mL。各取100mL，分別通過甲醛系樹脂HP20(4mL)氨基粒皂SP825芳香族系合成吸附劑(三菱化學(xué)株式會(huì)社制4mL)、甲醛系樹脂HP2MG(4mL)。將各自的通過液(約100mL)中取6mL經(jīng)濃縮干燥后，用2mL乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析。然后，在各自的吸附塔用乙醇50mL進(jìn)行洗提，原封不動(dòng)進(jìn)行HPLC分析。實(shí)施例5的結(jié)果如下皂甙類以WilfosideC1N為基準(zhǔn)根據(jù)HPLC分析的結(jié)果計(jì)算如下白首烏的皂甙類在各種樹脂上的吸附率分別為甲醛系樹脂HP2MG(約93％)，甲醛系樹脂HP20(約75％)，氨基粒皂SP825(約60％)，吸附能力的順序分別為甲醛系樹脂HP2MG)甲醛系樹脂HP20)，氨基粒皂SP825。
乙醇的洗提圖形顯示甲醛系樹脂HP2MG是幾乎沒有尾部延長，而甲醛系樹脂HP20(約75％)、氨基粒皂SP825發(fā)現(xiàn)有很大程度的尾部延長。
實(shí)施例6將去皮的新鮮白首烏(22g)放在水(220mL)中懸濁、攪拌、充分浸泡后，進(jìn)行離心分離(3000rpm)。將離心分離的上清液(205mL)分成25、90、90mL三份。25mL原樣濃縮干燥成6mL后用2mL乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析。90mL原樣通過甲醛系樹脂HP20(芳香族系合成吸附劑、三菱化學(xué)株式會(huì)社制、10L)吸附塔水洗后變成150mL，將其中的10mL濃縮干燥，用2mL的乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析。另外的90mL通過強(qiáng)堿性離子交換樹脂(三菱化學(xué)株式會(huì)社制、甲醛系樹脂SA-11A、OH-型，10mL)吸附塔用90mL的水沖洗。將通過液和水洗液合并，通過強(qiáng)酸性離子交換樹脂(三菱化學(xué)株式會(huì)社制甲醛系樹脂SK-104、H+型、10mL)，吸附塔并用水沖洗。將通過液和水洗液合并變成200mL，將其中13mL濃縮干燥，用2mL的乙醇，對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析，洗提操作如下用離子交換樹脂處理的場合，用1M Nacl(30mL)進(jìn)行洗提，并充分用水沖洗(全部液量，200mL)接著，用乙醇(30mL)進(jìn)行洗提。對(duì)乙醇洗提劃分進(jìn)行HPLC分析，推算出1M Nacl的洗提率。未進(jìn)行離子交換樹脂處理的場合，用乙醇(30mL)洗提2次，進(jìn)行HPLC分析。實(shí)施例6的結(jié)果如下。皂甙類以Wilfoside C1N為基準(zhǔn)根據(jù)HPLC分析的結(jié)果計(jì)算如下離子交換樹脂未處理的場合甲醇系樹脂HP20的吸附率為81.2％，第一次乙醇洗提率為75.3％，第二次乙醇洗提率為4.2％，合計(jì)為79.5％。
離子交換樹脂處理的場合甲醛系樹脂HP20的吸附率幾乎為100％，1M，Nacl洗提率約為32％(推算)，乙醇的洗提率為48％。
實(shí)施例7將去皮后新鮮的白首烏(40g)放在水(400mL)中懸濁、攪拌、充分浸泡后，進(jìn)行離心分離(3000rpm)。將離心分離的上清液(350mL)分成6mL，86mL×4份，6mL原樣濃縮干燥，用2mL乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析，86mL×4分別通過甲醛系樹脂HP2MG(10mL)吸附塔充分進(jìn)行水洗后，也用含水20％、30％、40％、50％的乙醇各30mL進(jìn)行洗提，而后分別濃縮干燥，用2mL的乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行HPLG分析。實(shí)施例7的結(jié)果如下，皂甙類以Wilfoside C1N為基準(zhǔn)根據(jù)HPLC分析結(jié)果進(jìn)行了計(jì)算。含水20％乙醇時(shí)，幾乎沒有被洗提出；含水30％乙醇時(shí)有百分之幾洗提出；含水40％乙醇時(shí)約提洗出18％；含水50％乙醇時(shí)約洗提出40％。
實(shí)施例8將去皮后新鮮白首烏(50g)放在水(500mL)中懸濁、攪拌、充分浸泡后，進(jìn)行離心分離(3000rpm)，將離心分離的上清液(430Ml)通過強(qiáng)堿性離子交換樹脂(三菱化學(xué)株式會(huì)社甲醛系樹脂SA-11A、OH-型、50mL)吸附塔用100mL的水沖洗。將通過液和水洗液合并，通過強(qiáng)酸性離子交換樹脂(三菱化學(xué)株式會(huì)社甲醛系樹脂SK-104、H+型、50mL)吸附塔用100mL的水沖洗，將通過液和水洗液合并，加水至700mL，分成6mL、約139mL×4份。6mL原樣濃縮干燥后用2mL的乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析；約139mL×4，分別通過甲醛系樹脂HP20(10mL)吸附塔，充分經(jīng)過水洗后，用含水50％、70％、80％、90％乙醇以及100％乙醇各30mL進(jìn)行洗提，分別進(jìn)行濃縮干燥，用2mL乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析。實(shí)施例8的結(jié)果如以下，皂甙類以Wilfoside C1N為基準(zhǔn)根據(jù)HPLC分析的結(jié)果進(jìn)行了計(jì)算。含水50％、70％乙醇時(shí)幾乎未發(fā)現(xiàn)洗提出。含水80％乙醇時(shí)發(fā)現(xiàn)約33％被洗提出，含水90％乙醇時(shí)約洗提出75％，含水100％乙醇時(shí)約洗提出90％。
實(shí)施例9與實(shí)施例8相同，用含水70％、90％乙醇及100％乙醇進(jìn)行洗提，其結(jié)果，含水乙醇及乙醇時(shí)的洗提率沒有多大差別。
實(shí)施例10將去皮后新鮮白首烏(10g)放在含水70％乙醇(100mL)中進(jìn)行懸濁、攪拌充分浸泡后，進(jìn)行離心分離(3000rpm)。將離心分離后的上清液(90mL)通過強(qiáng)堿性離子交換樹脂(三菱化學(xué)株式會(huì)社Diaion SA-11A、OH-型，10mL)吸附塔，用20mL水沖洗，將通過液和水洗液合并，通過強(qiáng)酸性離子交換樹脂(三菱化學(xué)株式會(huì)社Diaion SK-104、H+型、10mL)吸附塔用20mL水沖洗，將通過液和水洗液合并，加水至200mL，分成6mL和140mL兩分，6mL原樣濃縮干燥用2mL乙醇，對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析。約140mL通過甲醛系樹脂HP20(10mL)吸附塔，充分水洗，用30mL乙醇洗提，分別濃縮干固用2mL的乙醇進(jìn)行洗提，對(duì)可溶部進(jìn)行HPLC分析，皂甙類以Wilfoside C1N為基準(zhǔn)根據(jù)HPLC分析的結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，約有78％的皂甙被提取出來。
實(shí)施例11將去皮后新鮮白首烏(100g)放在水(1000mL)中進(jìn)行懸濁、攪拌和充分浸泡后，進(jìn)行離心分離(3000rpm)，將離心分離后的上清液(900mL)分成6mL和894mL兩份。6mL原樣濃縮干燥后用2mL乙醇對(duì)可溶部進(jìn)行了HPLC分析；894mL通過甲醛系樹脂HP2MG(甲基丙烯系合成吸附劑、三菱化學(xué)株式會(huì)社制、30mL)吸附塔充分經(jīng)過水洗后，再用含水20％乙醇充分沖洗。接著，用含水90％乙醇進(jìn)行洗提，將洗提液濃縮，便產(chǎn)生不溶物質(zhì)。將此不溶物用大量水邊沖洗邊過濾，加以收集，水沖洗后，用干燥機(jī)進(jìn)行通宵干燥后，得到237.6mg，對(duì)本品進(jìn)行了HPLC分析。皂甙類以Wilfoside C1N為基準(zhǔn)根據(jù)HPLC分析的結(jié)果進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果，本品的皂甙類含量為85.3％。
實(shí)施例12將制作白首烏的精制粉末時(shí)產(chǎn)生的大量含有白首烏的皂甙類水浸析液(白首烏的水)通過裝有甲基丙烯系合成吸附劑或芳香族(苯乙烯、二乙烯基苯)系合成吸附劑吸附塔吸附，再用含水40％～100％的含水醇或者丙酮加以解吸沖洗吸附塔，將洗提液經(jīng)濃縮干燥除去溶媒，即可從白首烏的水中提取皂甙類。
實(shí)施例13采用含水醇對(duì)新鮮的白首烏或干燥的白首烏片、粉末進(jìn)行浸析處理，提取出含有白首烏的皂甙類含水醇浸析液，將上述含有白首烏的皂甙類含水醇浸析液通過裝有甲基丙烯系合成吸附劑或芳香族(苯乙烯、二乙烯基苯)系合成吸附劑吸附塔吸附，再用含水40％～100％的含水醇或者丙酮加以解吸沖洗吸附塔，將洗提液經(jīng)濃縮干燥除去溶媒，即可從白首烏的水中提取皂甙類。
發(fā)明的效果綜上所述，根據(jù)本發(fā)明從白首烏的水或者含水醇的浸析液中提取白首烏的皂甙類可以簡便、廉價(jià)、省力、高效率，而且能對(duì)環(huán)境無污染地進(jìn)行提取和精制，能夠提供在工業(yè)上最合適的白首烏皂甙類的制造方法。
附合成吸附劑的基本結(jié)構(gòu)的化學(xué)構(gòu)造式，即合成吸附劑是具有如下所示基本結(jié)構(gòu)的有著三維交聯(lián)結(jié)構(gòu)的高分子化合物。
合成吸附劑化學(xué)結(jié)構(gòu)如下1、芳香族系合成吸附劑 2、甲基丙烯系合成吸附劑
權(quán)利要求
1.一種對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法，其特征在于將白首烏的水或含水醇浸析液通過甲基丙烯系合成吸附劑或芳香族(苯乙烯、二乙烯基苯)系合成吸附劑吸附，再用含水40％～100％的含水醇或醇或者丙酮加以解吸洗提處理，將洗提液中的溶媒除去，便能提取白首烏中的皂甙類。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法，其特征在于將白首烏的水或含水率低于40％的含水醇浸析液，吸附在甲基丙烯系合成吸附劑上，用含水40％～100％的醇或醇加以解吸洗提，去除溶媒，從白首烏中獲取皂甙類。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法，其特征在于將白首烏的水或含水率低于20％的含水醇浸析液，吸附在甲基丙烯系合成吸附劑上，用含水80％～100％的醇或醇加以解吸洗提，去除溶媒，從白首烏中獲取皂甙類。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法，其特征在于將白首烏的水或含水率低于20％的含水醇浸析液，脫鹽處理后，吸附在甲基丙烯系合成吸附劑上，用含水80％～100％的醇或醇加以解吸洗提，去除溶媒，從白首烏中獲取皂甙類。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法，其特征在于將白首烏的水或含水率低于20％的含水醇浸析液，吸附在芳香族(苯乙烯、二乙烯基苯)系合成吸附劑上，用丙酮對(duì)其解吸洗提，去除溶媒，從白首烏中獲取皂甙類。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法，其特征在于所述白首烏的水是指制作白首烏的精制粉末時(shí)產(chǎn)生大量含有白首烏的皂甙類水浸析液，或者將新鮮的白首烏放在水中懸濁、攪拌、充分浸泡后進(jìn)行離心分離產(chǎn)生的含有首烏的皂甙類離心分離液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法，其特征在于所述含水醇的浸析液是指采用含水醇對(duì)新鮮的白首烏或干燥的白首烏片、粉末進(jìn)行浸析處理，提取出含有白首烏的皂甙類含水醇浸析液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法，其特征在于含水醇或醇包括甲醇、乙醇、丙醇。
全文摘要
本發(fā)明對(duì)白首烏中含有的皂甙類進(jìn)行提取生產(chǎn)的方法涉及的是關(guān)于對(duì)存在于水或含水醇中的白首烏的皂甙類進(jìn)行提取、精制、生產(chǎn)的方法。其特征在于將白首烏的水或含水醇浸析液通過甲基丙烯系合成吸附劑或芳香族系合成吸附劑吸附，再用含水40％～100％的含水醇或醇或者丙酮加以解吸洗提處理，將洗提液中的溶媒除去，便能提取白首烏中的皂甙類。所述白首烏的水是指制作白首烏的精制粉末時(shí)產(chǎn)生大量含有白首烏的皂甙類水浸析液，或者將新鮮的白首烏放在水中懸濁、攪拌、充分浸泡后進(jìn)行離心分離產(chǎn)生的含有首烏的皂甙類離心分離液。所述含水醇的浸析液是指采用含水醇對(duì)新鮮的白首烏或干燥的白首烏片、粉末進(jìn)行浸析處理，提取出含有白首烏的皂甙類含水醇浸析液。含水醇或醇包括甲醇、乙醇、丙醇。
文檔編號(hào)C07J7/00GK1458162SQ03131868
公開日2003年11月26日 申請(qǐng)日期2003年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月12日
發(fā)明者江連洋治, 吳洪生 申請(qǐng)人:鹽城市金昉實(shí)業(yè)有限公司