專(zhuān)利名稱(chēng)：一種生產(chǎn)云芝糖肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)云芝糖肽(PSK)的方法。
背景技術(shù)：
云芝(Coriolus versicolor(L.Fr)Quel)屬非招菌目(Aphyllophorales)多孔菌科(POlyporaceae)，生長(zhǎng)在山區(qū)闊葉樹(shù)倒腐木或枯枝上，復(fù)瓦狀群生。分布于我國(guó)大部分地區(qū)。云芝糖肽(POlysocohartibe-piptide)是一種結(jié)合蛋白質(zhì)的多糖體，主要成分是含蛋白質(zhì)的葡聚糖，多糖含量25-60％，蛋白質(zhì)含量13-20％，多糖由β-(1.3)或β-(1，3)(1，6)葡聚糖組成。云芝糖肽是一種免疫增強(qiáng)劑，具有抗癌消炎、保肝解毒、提高機(jī)體免疫力等功能。服用云芝糖肽后，白細(xì)胞迅速恢復(fù)正常，T淋巴細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞活性提高。同時(shí)，血清中C補(bǔ)體和免疫球蛋白Ig有所增加。有報(bào)道云芝糖肽可預(yù)防和治療肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、子宮癌和白血病。
目前，在日本有用發(fā)酵云芝菌絲體，用堿法從菌絲體中提取云芝糖肽的專(zhuān)利(Ssaburo Ueno，Ichigayadai et al.專(zhuān)利號(hào)Jul.7.1976[JP]Japan 80664)，中國(guó)上海師大的楊慶堯用發(fā)酵云芝菌絲體，水提醇沉法從菌絲體中提取云芝糖肽(專(zhuān)利號(hào)CN 89105471.5)。用堿法從菌絲體中提取云芝糖肽不但需要投資較大的設(shè)備，而且發(fā)酵菌絲本身生產(chǎn)成本也較高，過(guò)量的NaOH還要用HCl中和，不僅提高成本，也污染環(huán)境。
我國(guó)野生云芝資源豐富，且野生云芝富含多種礦物質(zhì)，其中的銅離子還能增強(qiáng)抗癌功能，因此，如果利用野生云芝生產(chǎn)云芝糖肽，不但可充分利用我國(guó)的野生資源，增加林業(yè)工人的收入，也可提高現(xiàn)有云芝糖肽的療效。
發(fā)明創(chuàng)造內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種簡(jiǎn)便、低成本的生產(chǎn)云芝糖肽的方法。
本發(fā)明所提供的生產(chǎn)云芝糖肽的方法，基本上包括以下步驟(1)粉碎野生云芝子實(shí)體，加5-15倍體積的水后，再用氨水、調(diào)節(jié)pH至10-14；(2)加熱保持微沸1-3小時(shí)，然后經(jīng)100目-140目濾網(wǎng)過(guò)濾，收集濾液即提取液；(3)將步驟(2)中得到的殘?jiān)僦貜?fù)步驟(1)和(2)一次或兩次；
(4)合并步驟(2)和(3)中的提取液，得到云芝糖肽粗提物；(5)精制粗提物，得到云芝糖肽產(chǎn)品。
所述步驟(1)中優(yōu)選的是加10倍體積的水，再用氨水調(diào)節(jié)pH至12。
所述加熱為蒸汽加熱或直接加熱，優(yōu)選為蒸汽加熱。
所述步驟(2)中的溶液微沸2小時(shí)后經(jīng)120目過(guò)濾。
所述步驟(4)中的提取液經(jīng)濃縮、干燥、粉碎得到粗提物。
所述精制粗提物的步驟為粗提物加20-40倍水溶解，再通過(guò)樹(shù)脂脫去重金屬，得到的溶液經(jīng)濃縮，干燥，粉碎即得到產(chǎn)品。所述樹(shù)脂優(yōu)選的是陽(yáng)離子樹(shù)脂。
所述濃縮為減壓濃縮或煮沸濃縮，優(yōu)選的為減壓濃縮。
所述干燥為在80-100℃下烘干或自然干燥。
本發(fā)明所采用的原料是野生云芝，有效地利用了我國(guó)的野生資源，與通過(guò)發(fā)酵云芝菌絲體，用堿法從菌絲體中提取云芝糖肽相比，省去了龐大復(fù)雜的發(fā)酵設(shè)備，發(fā)酵車(chē)間和發(fā)酵工藝。本發(fā)明采用pH法提取云芝糖肽，省去了HCl中和的步驟，降低了生產(chǎn)成本，也不會(huì)產(chǎn)生環(huán)境污染問(wèn)題。根據(jù)原料的實(shí)際特點(diǎn)，本發(fā)明巧妙地除去了提取物中過(guò)高的重金屬，所生產(chǎn)的云芝糖肽，多糖蛋白有效成分含量高，活性不易被破壞，抗癌效果顯著。
對(duì)兩種性別，大、小鼠進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，結(jié)果是LD50為10g/kgbw，根據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明的云芝糖肽屬實(shí)際無(wú)毒。三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)，結(jié)果為陰性。30天喂養(yǎng)試驗(yàn)，根據(jù)生長(zhǎng)發(fā)育、血液學(xué)和血液生化學(xué)、臟器稱(chēng)量及病理組織學(xué)檢查結(jié)果綜合判斷，本發(fā)明的云芝糖肽未對(duì)大鼠引起有害效應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的云芝糖肽具有顯著的免疫調(diào)節(jié)及抑制腫瘤的作用。通過(guò)對(duì)NIH種小鼠經(jīng)口給云芝糖肽，連續(xù)28天，結(jié)果表明1)可明顯提高綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力，具有增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能作用。2)可使受試動(dòng)物血清溶血素抗體滴度反應(yīng)增高，具有增強(qiáng)體液免疫功能作用。3)可使受試動(dòng)物碳廓清吞噬指數(shù)增加，具有增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能作用。4)可使受試動(dòng)物的脾臟重量增加。動(dòng)物試驗(yàn)表明。云芝糖肽對(duì)兩株移植性腫瘤(S-180、H-22)在小鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)與對(duì)照組比較有明顯的抑制作用，抑瘤率大于30％，同時(shí)對(duì)正常小鼠的免疫功能未表現(xiàn)抑制作用。


圖1為生產(chǎn)云芝糖肽的工藝流程圖具體實(shí)施方式
實(shí)施例1、生產(chǎn)云芝糖肽云芝糖肽的生產(chǎn)工藝流程如圖1所示，具體步驟如下1.粗品提取將180公斤云芝子實(shí)體粉碎后放入2000升的提取罐中，加水1800升，再加氨水調(diào)節(jié)pH至12，用蒸汽加熱至沸騰，減少給汽量，保持微沸2小時(shí)。提取液經(jīng)120目尼龍濾網(wǎng)過(guò)濾并放入儲(chǔ)液罐。殘?jiān)粼谔崛」拗?，并再加水?800升，再調(diào)pH，沸騰后仍保持微沸2小時(shí)。用同法收集第2次提取液，兩次提取液合并后壓入三效罐進(jìn)行濃縮，濃縮至波美比重1.2時(shí)，將濃縮液分別加入不銹鋼盤(pán)中，進(jìn)入100度烘箱，烘至濃縮液表面結(jié)硬皮后，將裝有濃縮液的不銹鋼盤(pán)轉(zhuǎn)入80度的真空干燥箱繼續(xù)烘干。最后得到干燥塊狀物13公斤。
2.精制取干燥塊狀提取物30公斤，經(jīng)120目粉碎后，加水600升并攪拌30分鐘，靜置2小時(shí)后經(jīng)300目尼龍濾網(wǎng)過(guò)濾后收集濾液。沉淀再加水450升，攪拌30分鐘，靜置2小時(shí)，300目過(guò)濾后與前次濾液混合，經(jīng)市售的107號(hào)陽(yáng)離子樹(shù)脂處理30分鐘，此濾液再經(jīng)陽(yáng)離子樹(shù)脂處理30分鐘，濾液經(jīng)三效濃縮至波美比重1.2后，80度的真空干燥箱進(jìn)行干燥。粉碎后得到精品即云芝糖肽產(chǎn)品13公斤。
得到的產(chǎn)品各項(xiàng)指標(biāo)為顏色褐色；形狀粉狀；水份7％；灰分8％；多糖含量30％；蛋白質(zhì)含量18％；銅離子含量10ppm；鉛離子含量1ppm。
實(shí)施例2、生產(chǎn)云芝糖肽生產(chǎn)云芝糖肽的具體步驟如下1.粗品提取將180公斤云芝子實(shí)體粉碎后放入2000升的提取罐中，加水1080升，氨水調(diào)節(jié)pH至14，用直接加熱至沸騰，保持微沸1小時(shí)。提取液經(jīng)100目尼龍濾網(wǎng)過(guò)濾并放入儲(chǔ)液罐。殘?jiān)粼谔崛」拗?，并再加水?080升，沸騰后仍保持微沸1小時(shí)。用同法收集第2次提取液，兩次提取液合并后煮沸濃縮至波美比重1.2時(shí)，將濃縮液分別加入不銹鋼盤(pán)中，進(jìn)入100度烘箱，烘至濃縮液表面結(jié)硬皮后，80℃干燥。最后得到干燥塊狀物13公斤。
2.精制取干燥塊狀提取物30公斤，經(jīng)粉碎至120目后，加水1050升并攪拌30分鐘，靜置2小時(shí)后經(jīng)300目尼龍濾網(wǎng)過(guò)濾后收集濾液。沉淀再加水450升，攪拌30分鐘，靜置過(guò)夜，300目過(guò)濾后與前次濾液混合，經(jīng)市售的107號(hào)陽(yáng)離子樹(shù)脂處理30分鐘，濾液經(jīng)(三效)煮沸濃縮至波美比重1.2后，80℃烘箱干燥。粉碎后得到精品即云芝糖肽產(chǎn)品12.5公斤。
得到的產(chǎn)品各項(xiàng)指標(biāo)為顏色褐色；形狀粉狀；水份8-10％；多糖含量28％灰分7％蛋白質(zhì)含量14％銅離子含量15ppm；鉛離子含量2ppm。
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)云芝糖肽的方法，基本上包括以下步驟(1)粉碎野生云芝子實(shí)體，加5-15倍體積的水后，再用氨水、調(diào)節(jié)pH至10-14；(2)加熱保持微沸1-3小時(shí)，然后經(jīng)100目-140目濾網(wǎng)過(guò)濾，收集濾液即提取液；(3)將步驟(2)中得到的殘?jiān)僦貜?fù)步驟(1)和(2)一次或兩次；(4)合并步驟(2)和(3)中的提取液，得到云芝糖肽粗提物；(5)精制粗提物，得到云芝糖肽產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中加10倍體積的水，再用氨水調(diào)節(jié)pH至12。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述加熱為蒸汽加熱或直接加熱。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2述的方法，其特征在于所述加熱為蒸汽加熱。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2述的方法，其特征在于所述步驟(2)中的溶液煮沸2小時(shí)后經(jīng)120目過(guò)濾。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2述的方法，其特征在于所述步驟(4)中的提取液經(jīng)濃縮、干燥、粉碎得到粗提物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述濃縮為減壓濃縮或煮沸濃縮。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述精制粗提物的步驟為粗提物加20-40倍水溶解，再通過(guò)樹(shù)脂脫去重金屬，得到的溶液經(jīng)濃縮，干燥，粉碎即得到產(chǎn)品。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述樹(shù)脂為陽(yáng)離子樹(shù)脂；所述濃縮為減壓濃縮或煮沸濃縮。
10.根據(jù)權(quán)利要求6或7述的方法，其特征在于所述干燥為在80-100℃下烘干或自然干燥。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種生產(chǎn)云芝糖肽的方法，其目的是提供一種簡(jiǎn)便、低成本的生產(chǎn)云芝糖肽的方法。本發(fā)明所提供的方法基本上包括以下步驟(1)粉碎野生云芝子實(shí)體，加5－15倍體積的水后，再用氨水、調(diào)節(jié)pH至10－14；(2)加熱保持微沸1－3小時(shí)，然后經(jīng)100目一140目過(guò)濾，收集濾液即提取液；(3)將步驟(2)中得到的殘?jiān)僦貜?fù)步驟(1)和(2)一次或兩次；(4)合并步驟(2)和(3)中的提取液，得到云芝糖肽粗提物；(5)精制粗提物，得到云芝糖肽產(chǎn)品。本發(fā)明利用野生資源，采用pH法提取云芝糖肽，生產(chǎn)成本低，所生產(chǎn)的云芝糖肽，多糖蛋白有效成分含量高，活性不易被破壞，減少了在發(fā)酵過(guò)程的副產(chǎn)物或化學(xué)污染，且抗癌效果顯著。
文檔編號(hào)C07K14/37GK1552732SQ0313699
公開(kāi)日2004年12月8日 申請(qǐng)日期2003年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月26日
發(fā)明者杜千有, 關(guān)秀清 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院植物研究所