專利名稱：2β－取代鬼臼衍生物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是用于制備抗腫瘤藥物的化合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
70年代發(fā)現(xiàn)的天然產(chǎn)物鬼臼毒素的半合成糖甙衍生物Etoposide(VP-16)，其已成為目前臨床上使用的最重要抗腫瘤藥物之一，但它的毒副作用，特別是對骨髓有抑制作用，使臨床應(yīng)用受到一定的限制。在上述鬼臼毒素衍生物的結(jié)構(gòu)中，2-位的a-構(gòu)型是抗腫瘤活性所必需的，但由于熱力學(xué)穩(wěn)定性使2-位的α-構(gòu)型在體內(nèi)與β-構(gòu)型的苦鬼臼毒素產(chǎn)生一個動態(tài)平衡，但苦鬼臼毒素?zé)o抗腫瘤活性，從而使鬼臼毒素的在體內(nèi)的抗腫瘤活性受到影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種破壞藥物在體內(nèi)的動態(tài)平衡的鬼臼毒素衍生物及其制備方法，其明顯提高鬼臼毒素衍生物在體內(nèi)的抗腫瘤活性。
本發(fā)明是用于制備一類抗腫瘤藥物的化合物及其制備方法，代表化合物的化學(xué)名稱為2β-溴代鬼臼毒素衍生物，結(jié)構(gòu)式如下所示 式中R1為α-羥基或β-羥基，R2為氫或甲基，X為鹵素原子或甲基。本發(fā)明的發(fā)明點(diǎn)是在2-位引入了一個基團(tuán)，從而破壞了藥物在體內(nèi)的動態(tài)平衡，明顯提高了鬼臼毒素衍生物的抗腫瘤活性。
上述結(jié)構(gòu)式的化合物，當(dāng)R1為α-羥基，R2為甲基，X為溴原子，其化學(xué)名稱為2β-溴代鬼臼毒素，熔點(diǎn)為107-110℃，IR(KBr，cm-1)3420(-OH)，1772(-內(nèi)酯C＝O)，1591，1540，1479(芳環(huán)C＝C)，1239，1129(C-O-C)，930(OCH2O)。
上述結(jié)構(gòu)式的化合物，當(dāng)R1為β-羥基，R2為氫，X為溴原子，其化學(xué)名稱為2β-溴-4β-脫氧-4’-去甲基表鬼臼毒素，熔點(diǎn)為167-168℃，IR(KBr，cm-1)3472(-OH)，1755(-內(nèi)酯C＝O)，1587，1505，1482(芳環(huán)C＝C)，1238，1126(C-O-C)，931(OCH2O)。
本發(fā)明2β-溴代鬼臼衍生物的制備通用步驟如下1)將4位含吡喃保護(hù)基(或其他保護(hù)基)的鬼臼毒素或4，4’位含吡喃保護(hù)基的表鬼臼毒素溶于四氫呋喃(THF)中，緩慢滴加到二異丙基胺基鋰溶液中，保持反應(yīng)溫度在-78℃，滴加20-40分鐘；2)接著緩慢滴加溶有Br2的THF混合液，控制反應(yīng)溫度在-78℃，滴加20-40分鐘，然后在室溫下攪拌8-12小時，整個反應(yīng)過程均在N2保護(hù)下進(jìn)行；3)反應(yīng)結(jié)束后，加有機(jī)溶劑，用飽和氯化銨洗滌，分出有機(jī)層，干燥，減壓蒸去溶劑；4)將由3)得到的化合物溶于混合液(10％HCl∶THF＝1∶9)中，回餾，冷卻，加有機(jī)溶劑，依次用飽和NaHCO3、水洗滌，分出有機(jī)層，用無水Na2SO4干燥，減壓蒸去溶劑，用硅膠柱或制備薄板層析純化產(chǎn)物，得到本發(fā)明所述的化合物。
本發(fā)明利用在2-位引入的基團(tuán)，破壞了藥物在體內(nèi)的動態(tài)平衡，在體外對人肺腺癌、人肝癌和P388小鼠白血病有很強(qiáng)的抑制細(xì)胞生長的作用，明顯提高了鬼臼毒素衍生物的抗腫瘤活性。
具體實施例方式
實施例12β-溴代鬼臼毒素的制備將含有LDA的體系降溫到-78℃，將1.0g 4位含吡喃保護(hù)基(或其他保護(hù)基如氨基)的鬼臼毒素溶于10mlTHF的混合液慢慢滴加到含有LDA的反應(yīng)體系中，滴加速度保持在反應(yīng)體系溫度在-78℃，約30分鐘。然后再慢慢滴加含有0.4mlBr2的10mlTHF混合液，控制反應(yīng)溫度在-78℃，約30分鐘。然后在室溫下攪拌12小時，整個反應(yīng)過程均在N2保護(hù)下進(jìn)行。待反應(yīng)結(jié)束后，加100mlCH2Cl2，用飽和NH4Cl洗滌，分出有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑。
去保護(hù)基反應(yīng)將上述反應(yīng)得到的化合物于20ml混合液(10％HCl∶THF＝1∶9)中，回餾2小時，冷卻。加CH2Cl2至100ml，用飽和NaHCO3、水洗滌各一次，分出有機(jī)層，用無水Na2SO4干燥，減壓蒸去溶劑，用硅膠柱層析純化產(chǎn)物(淋洗液∶乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1∶1)，為白色固體。
m.p.107-110℃，得率32％，IR(KBr，cm-1)3420(-OH)，1772(γ-內(nèi)酯C＝O)，1591，1540，1479(芳環(huán)C＝C)，1239，1129(C-O-C)，930(OCH2O)。1HNMR(CDCl3，TMS)δ(ppm)7.11(s，1H，5-H)，6.51(s，1H，8-H)，6.37(s，2H，2’6’-H)，5.99(brs，2H，OCH2O)，4.78(d，J＝5.1Hz，1H，1-H)，4.61(d，1H，4-H)，4.12(dd，J＝7.5，9.0Hz，11-Ha)，3.81(s，3H，4’-OCH3)，3.76(s，6H，3’5’-OCH3)，3.74(s，1H，11Hb)，2.83(ddd，J＝9.6，9.0，6.8Hz，1H，3-H)，2.04(s，1H，4-OH)。MS(EI)(m/z，％)414(M+-Br，100％)，399(M+-Br-CH3，4％)，299(3.34)，229(3.47)，79(3.98)。
化合物2β-溴代鬼臼毒素進(jìn)行了抗腫瘤生物活性體外篩選試驗。用藥濃度分別為10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mol/L；對腫瘤細(xì)胞生長的抑制率的評價標(biāo)準(zhǔn)無效10-5mol/L＜85％；弱效10-5mol/L≥85％或10-6mol/L≥50％、強(qiáng)效10-6mol/L≥85％或10-7mol/L≥50％。A-549人肺腺癌和BEL-7402人肝癌使用的是磺酰羅丹明B(sulforhodamineB，SRB)蛋白染色法，作用時間為72小時；對P388小鼠白血病和HL-60人白血病使用的是四氮唑鹽(microculturetetrozolium，MTT)還原法，作用時間為48小時。
藥理試驗數(shù)據(jù)如下(表1-3)表1對腫瘤細(xì)胞BEL-7402生長的抑制率％濃度(mol/L) 10-410-510-610-710-8評價2β-溴代鬼臼毒素94.4 90.8 91.2 90.9 0強(qiáng)效表2對腫瘤細(xì)胞A-549生長的抑制率％濃度(mol/L) 10-410-510-610-710-8評價2β-溴代鬼臼毒素96.1 91.3 90 90.1 9.7 強(qiáng)效表3對腫瘤細(xì)胞P388生長的抑制率％濃度(mol/L) 10-410-510-610-710-8評價2β-溴代鬼臼毒素100 100 100 97.1 96.9 強(qiáng)效實施例22β-溴-4β-脫氧-4’-去甲基表鬼臼毒的制備將含有LDA的體系降溫到-78℃，將1.0g 4，4’位含四氫吡喃保護(hù)基的表鬼臼毒素溶于10ml THF的混合液慢慢滴加到含有LDA的反應(yīng)體系中，滴加速度保持在反應(yīng)體系溫度在-78℃，約30分鐘。然后再慢慢滴加含有0.4mlBr2的10mlTHF混合液，控制反應(yīng)溫度在-78℃，約需30分鐘。然后在室溫下攪拌10，整個反應(yīng)過程均在N2保護(hù)下進(jìn)行。待反應(yīng)結(jié)束后，加100mlCH2Cl2，用飽和NH4Cl洗滌，分出有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑。
去保護(hù)基反應(yīng)將上述反應(yīng)得到的化合物于20ml混合液(10％HCl∶THF＝1∶9)中，回餾2小時，冷卻。加CH2Cl2至100ml，用飽和NaHCO3、水洗滌各一次，分出有機(jī)層，用無水Na2SO4干燥，減壓蒸去溶劑，用制備薄板進(jìn)行純化(展開劑∶乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1∶1)，為白色固體。
m.p.167-168℃，得率33％，IR(KBr，cm-1)3472(-OH)，1755(γ-內(nèi)酯C＝O)，1587，1505，1482(芳環(huán)C＝C)，1238，1126(C-O-C)，931(OCH2O)1HNMR(CDCl3，TMS)δ(ppm)7.11(s，1H，5-H)，6.51(s，1H，8-H)，6.37(s，2H，2’6’-H)，5.99(brs，2H，OCH2O)，4.78(d，J＝5.1Hz，1H，11-H，4.61(d，1H，4-H)，4.12(dd，J＝7.5，9.0Hz，11-H)，3.81(s，3H，4’-OCH3)，3.75(s，6H，3’5’-OCH3)，2.83(ddd，J＝9.6，9.0，6.8Hz，1H，3-H)，1.55(s，1H，4’-OH)MS(EI，m/z，％)，446(M+-Br，3)，428(M+-Br-H2O，15)，383(12)，299(11)，229(6)，77(16)。
權(quán)利要求
1.下述通式化合物 其中R1為α-羥基或β-羥基，R2為氫或甲基，X為鹵素原子或甲基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物中，其中R1為α-羥基，R2為甲基，X為溴原子，其化學(xué)名稱為2β-溴代鬼臼毒素，熔點(diǎn)為107-110℃，IR(KBr，cm-1)3420(-OH)，1772(-內(nèi)酯C＝O)，1591，1540，1479(芳環(huán)C＝C)，1239，1129(C-O-C)，930(OCH2O)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1為β-羥基，R2為氫，X為溴原子，其化學(xué)名稱為2β-溴-4β-脫氧-4’-去甲基表鬼臼毒素，熔點(diǎn)為167-168℃，IR(KBr，cm-1)3472(-OH)，1755(-內(nèi)酯C＝O)，1587，1505，1482(芳環(huán)C＝C)，1238，1126(C-O-C)，931(OCH2O)。
4.2β-取代鬼臼衍生物的制備方法，其特征是反應(yīng)步驟如下1)將4位含保護(hù)基的鬼臼毒素或4，4’位含保護(hù)基的表鬼臼毒素溶于四氫呋喃(THF)中，緩慢滴加到二異丙基胺基鋰溶液中，保持反應(yīng)溫度在-78℃，滴加20-40分鐘；2)接著緩慢滴加溶有Br2的四氫呋喃混合液，控制反應(yīng)溫度在-78℃，滴加20-40分鐘，然后在室溫下攪拌8-12小時，整個反應(yīng)過程均在N2保護(hù)下進(jìn)行；3)反應(yīng)結(jié)束后，加有機(jī)溶劑，用飽和氯化銨洗滌，分出有機(jī)層，干燥，減壓蒸去溶劑；4)將由3)得到的化合物溶于混合液(10％HCl∶THF＝1∶9)中，回餾，冷卻，加有機(jī)溶劑，依次用飽和NaHCO3、水洗滌，分出有機(jī)層，用無水Na2SO4干燥，減壓蒸去溶劑，用硅膠柱或制備薄板層析純化產(chǎn)物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的2β-取代鬼臼衍生物的制備方法，其特征是所述的保護(hù)基為吡喃或氨基。
全文摘要
本發(fā)明涉及的是用于制備抗腫瘤藥物的化合物及其制備方法?，F(xiàn)有鬼臼毒素衍生物的結(jié)構(gòu)中，由于熱力學(xué)穩(wěn)定性使2－位的α－構(gòu)型在體內(nèi)與β－構(gòu)型的苦鬼臼毒素產(chǎn)生一個動態(tài)平衡，從而使鬼臼毒素的在體內(nèi)的抗腫瘤活性受到影響。本發(fā)明是用于制備一類抗腫瘤藥物的化合物及其制備方法，結(jié)構(gòu)式如下所示其中R
文檔編號C07D493/04GK1566115SQ0314142
公開日2005年1月19日 申請日期2003年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月1日
發(fā)明者陳紹明 申請人:陳紹明