專利名稱：從柚中提取柚皮苷的方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種從柚Citus grandis(L)Osbeck(如沙田柚等)中提取柚皮苷單體的方法。
背景技術(shù)：
柚皮苷是一種黃酮類化合物，廣泛存在于各種中藥材中，例如枳殼，枳實，柑橘，檸檬，葡萄柚，橘紅，橙等。在柚Citus grandis(L)Osbeck中也含有柚皮苷，且含量較高。柚Citus grandis(L)Osbeck有多個變種，其中包括文旦柚Citus grandis(L)Osbeck var.wentanyu Hort.、沙田柚Citus grandis(L)Osbeckv var.shatianyu Hort.、坪山柚Citus grandis(L)Osbeck var.Hort.、四季拋Citus grandis(L)Osbeckvar.szechipow Hort.、大紅拋Citus grandis(L)Osbeck var.tahungpow.。柚皮苷是多種藥材的主要有效成份之一。已經(jīng)有研究證明，柚皮苷具有抗菌消炎，止咳化痰，降低血漿膽固醇濃度，改善血管循環(huán)等作用。已被用于作苦味劑、發(fā)汗劑、還有降膽固醇等方面。
柚皮苷的獲得途徑，除了Rosenmund(Rosenmund，Ber.，61，2608(1958))和Zemlen，Bognar(Ber.，75，648(1942))描述的方法以及其它化學方法進行合成得到外，還可通過從藥材中提取獲得。很多藥材例如柚，枳實等，其藥材中柚皮苷含量均很高。梅州沙田柚鮮果中的柚皮苷含量就有2％左右。但由于藥材中含有各種黃酮類，多糖類，鞣質(zhì)，生物堿類，蒽醌類等物質(zhì)，而且黃酮類物質(zhì)中也含有多種結(jié)構(gòu)相近的物質(zhì)。要得到柚皮苷單體，需要把柚皮苷與其它各種物質(zhì)分離開來。以往的研究，未能提供一種獲得柚皮苷單體的可行的提取方法。從藥材(特別是柚)中提取柚皮苷單體的方法，尚沒有報道。
柚皮苷的結(jié)構(gòu)式

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從柚Citus grandis(L)Osbeck中提取柚皮苷單體的方法。
本發(fā)明的柚皮苷提取方法的步驟包括①將柚切片或粉碎，經(jīng)過水提取，濾過，合并濾液；②濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進行柱分離，有機溶劑洗脫；③洗脫液揮干溶劑，得柚皮苷粗品再經(jīng)多次重結(jié)晶，得柚皮苷單體(純品)。
上述本發(fā)明方法所說的柚可以是沙田柚或其同科屬種水果的幼果或成熟果實的果皮或全果；可以是新鮮的或者是干的藥材；例如沙田柚Citus grandis(L)Osbeckvvar.shatianyu Hort.、文旦柚Citus grandis(L)Osbeck var.wentanyu Hort.、坪山柚Citus grandis(L)Osbeck var.Hort.、四季拋Citus grandis(L)Osbeckvar.szechipow Hort.或大紅拋Citus grandis(L)Osbeck var.tahungpow.等各種柚的各個變種。
本發(fā)明方法中的水提取可以采用在室溫～100℃條件下或/和超聲波條件下進行；提取次數(shù)一般為一至三次，次數(shù)增加不限。水的用量為水至少能沒過藥材，水用量過多不限。提取時間一般為0.1-24小時，時間延長不限。加溫或/和超聲波條件下提取可縮短提取時間。
本發(fā)明方法中的浸膏醇沉所用的乙醇可以是無水乙醇或者各種濃度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液體的乙醇最終濃度可以是5％至959％的各種濃度。
本發(fā)明方法中的柱分離，采用的柱填料可以為硅膠，聚酰胺，大孔樹脂，葡聚糖凝膠等各種填料。
本發(fā)明方法中的有機溶劑洗脫，有機溶劑可以采用乙醇，甲醇，乙酸乙酯等各種常用有機溶劑。有機溶劑的濃度可以采用各種濃度，包括濃度為100％的有機溶劑。
本發(fā)明方法中的重結(jié)晶，溶劑可以采用水或者有機溶劑，有機溶劑可以采用乙醇，甲醇，乙酸乙酯等各種常用有機溶劑。重結(jié)晶的次數(shù)可以為一次至十次，次數(shù)增加不限。
采用本發(fā)明的方法，從柚Citus grandis(L)Osbeck及其變種沙田柚等中提取柚皮苷(純品)，提取得率均在85％以上，提取得率高。
采用本發(fā)明方法所得到的柚皮苷單體(純品)，經(jīng)過《中華人們共和國藥典》2000版一部高效液相色譜法測定，以中國藥品生物制品檢定所提供的柚皮苷對照品進行外標法定量，得提取所得柚皮苷樣品中柚皮苷單體的含量。結(jié)果表明，樣品中柚皮苷單體的含量高于95％。表明本發(fā)明工藝可行。
本發(fā)明的柚皮苷提取方法，具有提取工藝簡單，提取率高，提取得到的柚皮苷單體純度高等特點。
具體實施發(fā)式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明。
各實施例所涉及到的固體混合物中之固體，液體中之液體，以及液體中之固體的百分比分別是以wt/wt，vol/vol，wt/vol計算，除非另有說明。
實施例1沙田柚的幼果切成飲片，加100℃水沒過藥材，水提取三次，每次一小時，濾過；濾液濃縮成浸膏，過大孔樹脂柱，用水洗脫后，再用70％乙醇洗脫；收集乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，得沉淀，沉淀用水重結(jié)晶三次，噴霧干燥，得柚皮苷單體。得率為88.6％。
實施例2沙田柚的柚皮粉碎，不過篩，加100℃水沒過樣品，提取三次，每次1小時，濾過，合并濾液；濾液濃縮，加入無水乙醇至乙醇濃度為50％，放置過夜，濾過，上清液回收乙醇。浸膏過聚酰胺柱，先用水洗脫，再用30％乙醇洗脫；收集乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，得沉淀，沉淀干燥，用無水乙醇重結(jié)晶五次后，得柚皮苷單體。得率為86.3％。
實施例3沙田柚的幼果切成飲片，經(jīng)70℃水浸提兩次，每次3小時，濾過，合并濾液；濾液濃縮成浸膏，浸膏加入95％乙醇至乙醇濃度為60％，靜置過夜，產(chǎn)生沉淀，濾過，去沉淀，濾液回收乙醇，所得液體過氧化鋁柱，先用水洗脫，再用95％乙醇洗脫；收集乙醇洗脫液，回收濃縮，得沉淀，沉淀用甲醇重結(jié)晶四次，得柚皮苷單體。得率為85.8％。
實施例4經(jīng)炮制后的沙田柚切成飲片，加100℃水沒過藥材，提取二次，每次2小時，濾過，合并濾液；濾液濃縮，得浸膏，浸膏過聚酰胺柱，先用水洗脫，再用60％乙醇洗脫；收集乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，所得液體放置過夜，濾過，得沉淀，沉淀用水重結(jié)晶四次，得柚皮苷單體。得率為89.4％。
實施例5柚皮苷單體純度測定實驗取上述提取方法制備得到的柚皮苷單體適量，甲醇溶解定容于容量瓶中，再用微孔濾膜(0.45um)過濾后，注入高效液相色譜儀中，以中國藥品生物制品檢定所提供的柚皮苷對照品進行外標法定量，得提取所得柚皮苷樣品中柚皮苷單體的含量。結(jié)果見表1。
色譜條件Agilentl100高效液相色譜儀(自動進樣器，真空脫氣機，四元泵，柱溫箱，二極管陣列檢測器)；色譜柱MARKER ODS柱(5um，4.0×250mm)；流動相甲醇-水-冰乙酸(35∶61∶4)；檢測波長283nm；柱溫30℃；流速1ml/min；進樣量5μl。
表1樣品含量測定試驗結(jié)果樣品濃度 進樣量測得柚皮苷 柚皮苷含量樣品號峰面積(mg/ml)(μl)濃度(mg/ml) (％)柚皮苷0.1004 5815.75 0.1004 100對照品樣品1 0.1004 5798.85 0.0983 98.0樣品2 0.1192 5963.64 0.1186 99.5從表1結(jié)果看出，提取所得樣品中柚皮苷單體的含量均高于98％。說明本發(fā)明的提取方法所得到的柚皮苷樣品純度高。
綜上所述，說明本發(fā)明的柚皮苷提取方法，能有效地從柚中提取得到柚皮苷單體，所得柚皮苷樣品純度高，含量均高于95％以上。工藝簡單可行。
權(quán)利要求
1.一種從柚中提取柚皮苷的方法，依次包括以下步驟①將柚切片或粉碎，經(jīng)過水提取，濾過，合并濾液；②濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進行柱分離，有機溶劑洗脫；③洗脫液揮干溶劑，得柚皮苷粗品；再經(jīng)多次重結(jié)晶，得柚皮苷單體。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說的水提取是在室溫至100℃條件下或/和超聲波條件下進行；提取次數(shù)為一至三次。
3.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所說水提取的提取時間為0.1-24小時。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說的浸膏醇沉所用的乙醇是無水乙醇或者各種濃度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液體的乙醇最終濃度為5％至95％。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說的柱分離采用的柱填料為硅膠，聚酰胺，大孔樹脂或葡聚糖凝膠填料。
6.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說的有機溶劑洗脫所用的有機溶劑為包括濃度為100％6的各種濃度的乙醇或甲醇，乙酸乙酯。
7.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說的重結(jié)晶所用的溶劑為水或常用有機溶劑，常用有機溶劑為乙醇，甲醇，乙酸乙酯；重結(jié)晶的次數(shù)為一次至十次。
8.按照權(quán)利要求1至7之一所述的方法，其特征是所述的柚為沙田柚或其同科屬種水果的幼果或成熟果實的果皮或全果。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從柚(如沙田柚等)中提取柚皮苷單體的方法。該方法是將柚切片或粉碎，經(jīng)過一至多次水提取，濾過，合并濾液；濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進行柱分離，有機溶劑洗脫；洗脫液揮干溶劑，得粗品；再經(jīng)多次重結(jié)晶，得柚皮苷晶體。采用本發(fā)明方法，從沙田柚中提取柚皮苷，提取得率均在85％以上，所得柚皮苷樣品中柚皮苷單體的含量達到98％以上。因此，本發(fā)明方法具有提取工藝簡單，提取率高，提取得到的柚皮苷單體純度高等特點。
文檔編號C07H17/00GK1528773SQ0314699
公開日2004年9月15日 申請日期2003年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月29日
發(fā)明者蘇薇薇, 方鐵錚, 吳忠, 宋曉虹, 王永剛, 彭維, 古淑儀 申請人:中山大學