專利名稱：喹唑啉酮衍生物及其作為cb激動(dòng)劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的喹唑啉酮衍生物，其制備方法，其作為藥物的應(yīng)用，以及含有它們的藥物組合物。
更具體來(lái)說(shuō)，在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了游離堿或酸加成鹽形式的式I化合物 其中R1、R2、R3、R4和R5獨(dú)立地為氫；鹵素；C1-C4烷基；C2-C4鏈烯基；C3-C7環(huán)烷基；C3-C7環(huán)烷基C1-C4烷基；C1-C4烷氧基C1-C4烷基；C1-C4烷基羧基；羥基C1-C4烷氧基C1-C4烷基；羥基；羥基C1-C4烷基；苯基C1-C4烷基，該基團(tuán)可任選被羥基、C1-C4烷氧基、羧基、C1-C4烷氧基羰基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基羰基、氰基取代；-SO2R10；氰基；-SO2N(R10)R11；-S-R10或-SOR10；或者，R1和R2或者R2和R3與它們所連接的碳原子一起代表具有5-10個(gè)環(huán)原子的芳族或脂族碳環(huán)基團(tuán)，或具有5-10個(gè)環(huán)原子，并且有1、2或3個(gè)環(huán)原子是選自氮、氧和硫的雜原子的芳族或脂族雜環(huán)基；R6是-CH2-O-C(O)-N(R12)R13、-CH2-X-C(O)-R14、C1-C4烷基或羥基C1-C4烷基；R7、R8和R9獨(dú)立地為C1-C4烷基；R10和R11獨(dú)立地為氫、C1-C4烷基；C2-C4鏈烯基；C3-C7環(huán)烷基；C3-C7環(huán)烷基C1-C4烷基；C1-C4烷氧基C1-C4烷基；C1-C4烷基羧基；羥基C1-C4烷氧基C1-C4烷基；羥基；羥基C1-C4烷基；苯基C1-C4烷基，該基團(tuán)可任選被羥基、C1-C4烷氧基、羧基、C1-C4烷氧基羰基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基羰基、氰基取代；或者R10與R11一起形成具有5-10個(gè)環(huán)原子，并且有1、2或3個(gè)環(huán)原子是選自氮、氧和硫的雜原子的脂族雜環(huán)基；R12和R13獨(dú)立地為氫、C1-C4烷基、C2-C4鏈烯基、C3-C7環(huán)烷基、C3-C7環(huán)烷基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基C1-C4烷基、羥基C1-C4烷氧基C1-C4烷基、羥基C1-C4烷基、二羥基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基羰基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基羰基、氰基、-SO2R10、-SO2N(R10)R11、-S-R10、-SOR10、-C1-C4-亞烷基-SO2R10、-C1-C4-亞烷基-SOR10、-C1-C4-亞烷基-NH-SO2R10、-C1-C4-亞烷基-CON(R10)R11、-CON(R10)R11、-C1-C4-亞烷基-C(O)OR10、氟烷基，或者R12與R13一起形成具有5-10個(gè)環(huán)原子的取代或未取代的脂族雜環(huán)基；R14是NH、C1-C4烷基-NH-、C2-C4鏈烯基-NH-、C3-C7環(huán)烷基-NH-、C3-C7環(huán)烷基C1-C4烷基-NH-、C1-C4烷氧基C1-C4烷基-NH-、羥基C1-C4烷氧基C1-C4烷基-NH-、羥基C1-C4烷基-NH-、二羥基C1-C4烷基-NH-、C1-C4烷氧基羰基C1-C4烷基-NH-、C1-C4烷氧基羰基-NH-、-NH-C1-C4-亞烷基-CN、-NH-SO2R10、-NH-SO2N(R10)R11、-NH-C1-C4-亞烷基-S-R10、-NH-SOR10、-NH-C1-C4-亞烷基-SO2R10、-NH-C1-C4-亞烷基-SOR10、-NH-C1-C4-亞烷基-NH-SO2R10、-NH-C1-C4-亞烷基-CON(R10)R11、-NH-CON(R10)R11、-NH-C1-C4-亞烷基-C(O)OR10、-NH-氟烷基或具有5-10個(gè)環(huán)原子的取代或未取代的脂族雜環(huán)基；X是O或CH2；條件是當(dāng)R1是鹵素、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基或氫，且R2、R3、R4是氫、甲基或甲氧基，且R5是氫或甲基時(shí)，R12既不是氫、C2-C4烷基、C2-C4鏈烯基、羥基C1-C4烷基、-C1-C4-亞烷基-SO2R10，也不是-C1-C4-亞烷基-SOR10。
本發(fā)明化合物以游離或鹽例如酸加成鹽形式存在。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括游離以及酸加成鹽例如三氟乙酸鹽或鹽酸鹽形式的式I化合物。對(duì)于依據(jù)本發(fā)明的藥用，合適的可藥用酸加成鹽特別包括鹽酸鹽。
在式I中，下列基團(tuán)是獨(dú)立地、共同地或以任何組合或亞組合形式優(yōu)選的(a)R1是氫、氯、甲基、甲氧基、-CH2C(O)OCH3、-CH2CH2C(O)OCH3、-C(O)N(CH3)2、-C(O)OCH3、氰基、-SO2-1-吡咯烷基、-SO2CH3、-SO2NHCH3、-SO2N(CH3)2、-SO2N(CH3)CH2COOH、-S-CH3、-SOCH3，或者R1與R2一起形成-NH-CH2-CH2-CH2-或-CH＝CH-CH＝CH-環(huán)。R1更優(yōu)選為-SO2NHCH3；(b)R2是氫、氯、甲基、三氟甲基，或者與R1一起形成-NH-CH2-CH2-CH2-、-CH＝CH-CH＝CH-環(huán)，或者與R3一起形成-CH＝CH-CH＝CH-環(huán)。R2更優(yōu)選為氫；(c)R3是氫、氟、甲基，或者與R2一起形成-CH＝CH-CH＝CH-環(huán)。R3更優(yōu)選為氫和氯；(d)R4是氫、氯，更優(yōu)選為氫；(e)R5是氫、氯，更優(yōu)選為氫；(f)R6是甲基、羥基甲基、-CH2-O-C(O)-N(R12)R13和-CH2-X-C(O)-R14；(g)R7和R8是甲基；(h)R9是乙基或丙基，更優(yōu)選為乙基；(i)R10是1-吡咯烷基、-CH2COOH、甲基、氫，更優(yōu)選為甲基；(k)R11是甲基、氫，更優(yōu)選為氫；(l)R12是甲基、乙基、丙基、2-羥基乙基、3-羥基丙基、2，3-二羥基丙基、1-(羥基甲基)-2-羥基乙基、氰基、-CH2CH2-SO2CH3、-CH2CH2-S-CH3、-CH2CH2-NH-SO2CH3、-CH2C(O)OCH3、-CH2CONH2、2，2，2-三氟-乙基，或者與R13一起形成-CH2-CH2-CHOH-CH2-CH2-環(huán)。R12更優(yōu)選為乙基和2-羥基乙基；(m)R13是氫或者與R12一起形成-CH2-CH2-CHOH-CH2-CH2-環(huán)；(n)R14是-NH-CH3、-NH-CH2CH3、-NH-CH2CH2CH3、2-羥基乙基-NH-、3-羥基丙基-NH-、2，3-二羥基丙基-NH-、1-(羥基甲基)-2-羥基乙基-NH-、-NH-CH2CN、-NH-CH2CH2-SO2CH3、-NH-CH2CH2-S-CH3、-NH-CH2CH2-NH-SO2CH3、-NH-CH2C(O)OCH3、-NH-CH2CONH2、2，2，2-NH-三氟-乙基、 和 更優(yōu)選為 和2-羥基乙基-NH-；(o)X是O。
本發(fā)明還提供了制備式I化合物或其酸加成鹽的方法，包括以下步驟(i)為了制備其中R6是-CH2-O-C(O)-N(R12)R13，且R13是氫的式I化合物，將式II化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9如上所定義；與式III化合物反應(yīng) 其中R12如上所定義；或(ii)作為可替代(i)的步驟，為了制備其中R6是-CH2-O-C(O)-N(R12)R13，且R13是氫的式I化合物，將式IV化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9如上所定義；與式V化合物反應(yīng)H2N-R12(V)其中R12如上所定義；或(iii)為了制備其中R6＝-CH2-X-C(O)-R14，且X＝CH2的式I化合物，將式VI化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9如上所定義；與式VII化合物反應(yīng)H-R14(VII)其中R14如上所定義；或(iv)為了制備其中R6＝-CH2-X-C(O)-R14，且X＝O的式I化合物，將式VIII化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9如上所定義；與式VII化合物反應(yīng)；或(v)為了制備其中R6是C1-C4烷基或羥基C1-C4烷基的式I化合物，將式IX化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R7和R8如上所定義，且R6是C1-C4烷基或羥基C1-C4烷基；與式X化合物反應(yīng)Y-R9(X)其中R9如上所定義，且Y是離去基團(tuán)，例如鹵素如Br；收集所獲得的游離堿或酸加成鹽形式的式I化合物。
方法(i)可依據(jù)常規(guī)操作來(lái)進(jìn)行，例如按照實(shí)施例1中描述的操作來(lái)進(jìn)行。當(dāng)具體的異氰酸酯可商購(gòu)獲得或易于制得時(shí)，方法(i)是優(yōu)選的。方法(ii)、(iii)、(iv)和(v)可依據(jù)常規(guī)操作來(lái)進(jìn)行，例如按照相關(guān)實(shí)施例中描述的操作來(lái)進(jìn)行。
反應(yīng)混合物的后處理以及由此獲得的化合物的純化可依據(jù)已知操作來(lái)進(jìn)行。
酸加成鹽可依據(jù)已知方法由相應(yīng)的游離堿制得，反之亦然。
式II、III和V的原料化合物是已知的，或者可按照與已知方法類似的方法制得，例如按照實(shí)施例1中描述的方法制得。式IV化合物可通過(guò)將式II化合物與例如氯甲酸苯酯反應(yīng)來(lái)制得。
式VI、VII、VIII、IX和X的原料化合物是已知的，或者可按照與已知方法類似的方法制得，例如按照相關(guān)實(shí)施例中描述的方法制得。
當(dāng)在體外和動(dòng)物中測(cè)試時(shí)，在下文中稱為本發(fā)明活性劑的本發(fā)明化合物及其可藥用酸加成鹽表現(xiàn)出有價(jià)值的藥理性質(zhì)，因此可用作藥物。
特別是，本發(fā)明活性劑表現(xiàn)出大麻素(CB)受體結(jié)合活性。本發(fā)明活性劑尤其對(duì)人CB1和CB2受體有活性。本發(fā)明活性劑與大麻素受體的相互作用可通過(guò)以下事實(shí)得到證實(shí)它們能夠從例如在HEK293或CHOK1膜中表達(dá)的人大麻素受體中置換例如[3H]CP55940，例如這可依據(jù)下列試驗(yàn)方法來(lái)證實(shí)。
試驗(yàn)ICB1受體結(jié)合試驗(yàn)試驗(yàn)混合物包含75μL膜懸浮液[從用得自Receptor Biology，Beltsville，MD.的人CB1受體轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞中獲得的膜；133μg/mL在試驗(yàn)緩沖液(50mM Tris-HCl，2.5mM EDTA，5mM MgCl25mg/mL BSA，pH7.4)中的懸浮液，約10μg/孔]、25μL WGA-YS玻珠[包被著麥胚凝集素的Yttrium硅酸鹽玻珠，Amersham(40mg/mL，1mg/孔)]、50μL在4％DMSO中的受試化合物和50μL放射性配體{[3H]CP55940(180Ci/mmol)，New EnglandNuclear；在試驗(yàn)緩沖液中的終濃度為0.125nM}。將所有組分混和，在室溫?fù)u動(dòng)2小時(shí)，然后在Topcount上計(jì)數(shù)。在10μM(R)-(+)-[2，3-二氫-5-甲基-3-[(4-嗎啉基)甲基]吡咯并[1，2，3-de]-1，4-苯并噁嗪-6-基](1-萘基)甲酮(WIN55，212-2，Tocris)存在下測(cè)定非飽和結(jié)合。
對(duì)于該CB1受體結(jié)合試驗(yàn)，本發(fā)明活性劑的Ki值為1nM-100μM，優(yōu)選為4nM-1μM。使用對(duì)數(shù)擬合在ORIGIN中計(jì)算IC50值。使用Cheng-Prussoff方程(Ki＝IC50/(1+([L]/Kd))由IC50值計(jì)算Ki值，其中[L]是配體濃度。
試驗(yàn)IICB2受體結(jié)合試驗(yàn)試驗(yàn)混合物包含75μL膜懸浮液[從用得自Receptor Biology，Beltsville，MD.的人CB2受體轉(zhuǎn)染的CHOK1細(xì)胞中獲得的膜；133μg/mL在試驗(yàn)緩沖液(50mM Tris-HCl，2.5mM EDTA，5mM MgCl25mg/mL BSA，pH7.4)中的懸浮液，約10μg/孔]、25μL WGA-YS玻珠[包被著麥胚凝集素的Yttrium硅酸鹽玻珠，Amersham(40mg/mL，1mg/孔)]、50μL在4％DMSO中的受試化合物和50μL放射性配體{[3H]CP55940(180Ci/mmol)，New EnglandNuclear；在試驗(yàn)緩沖液中的終濃度為0.125nM}。將所有組分混和，在室溫?fù)u動(dòng)2小時(shí)，然后在Topcount上計(jì)數(shù)。在10μM(R)-(+)-[2，3-二氫-5-甲基-3-[(4-嗎啉基)甲基]吡咯并[1，2，3-de]-1，4-苯并噁嗪-6-基](1-萘基)甲酮(WIN55，212-2，Tocris)存在下測(cè)定非飽和結(jié)合。
對(duì)于該CB2受體結(jié)合測(cè)定，本發(fā)明活性劑的Ki值為1nM-100μM，優(yōu)選為4nM-1μM。使用對(duì)數(shù)擬合在ORIGIN中計(jì)算IC50值。使用Cheng-Prussoff方程(Ki＝IC50/(1+([L]/Kd))由IC50值計(jì)算Ki值，其中[L]是配體濃度。
本發(fā)明活性劑可用于治療或預(yù)防大麻素受體激活在其中起作用或涉及大麻素受體激活的病癥，例如慢性疼痛，尤其是炎性疼痛，例如慢性炎性疼痛，炎性疾病，例如炎性氣道疾病如慢性阻塞性肺病(COPD)，或哮喘，鼻炎，炎性腸病，膀胱炎例如間質(zhì)性膀胱炎，胰腺炎，眼色素層炎，炎性皮膚病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
可依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法，例如在以下試驗(yàn)中描述的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法來(lái)證實(shí)具體作為鎮(zhèn)痛劑的活性。
試驗(yàn)III神經(jīng)病性疼痛模型在如Seltzer等人(1990)所描述的，通過(guò)將坐骨神經(jīng)部分結(jié)扎而誘導(dǎo)的神經(jīng)病性疼痛模型中測(cè)定痛覺(jué)過(guò)敏。簡(jiǎn)言之，將Wistar大鼠(120-140g)麻醉，用小切口將左側(cè)坐骨神經(jīng)暴露，用7.0絲縫線將1/3-1/2的神經(jīng)厚度緊緊結(jié)扎。用一根肌肉縫線和皮膚夾子將傷口閉合，撒上金霉素抗生素粉。讓動(dòng)物恢復(fù)，在手術(shù)后12-15天使用。
使用截止點(diǎn)為250g的痛覺(jué)缺失測(cè)定儀(Ugo-Basile，Milan)，通過(guò)測(cè)定對(duì)于施加在爪子背面上不斷增加的壓力刺激的爪子縮回閾值來(lái)評(píng)價(jià)機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏。在施用藥物或載體之前(給藥前)，然后在施用藥物或載體之后最長(zhǎng)達(dá)6小時(shí)，在同側(cè)(結(jié)扎的)和對(duì)側(cè)(未結(jié)扎的)爪子上測(cè)定縮回閾值。數(shù)據(jù)以縮回閾值(g)和根據(jù)以下公式計(jì)算的痛覺(jué)過(guò)敏逆轉(zhuǎn)百分比來(lái)表示 效力以D50值表示，即產(chǎn)生50％痛覺(jué)過(guò)敏逆轉(zhuǎn)所需的化合物劑量。
本發(fā)明活性劑的D50值為0.1mg/kg-100mg/kg。
可依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法，例如在以下試驗(yàn)中描述的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法來(lái)證實(shí)具體作為CB1激動(dòng)劑的活性。
試驗(yàn)IVCB1功能測(cè)定使用G-蛋白激活來(lái)作為用于測(cè)定G-蛋白偶聯(lián)受體的受體-配體結(jié)合的功能指標(biāo)。G-蛋白激活的基本機(jī)理是結(jié)合的鳥苷5’-二磷酸(GDP)與鳥苷5’-三磷酸(GTP)的交換。使用GTP的放射性、不可水解的形式例如鳥苷5’-O-(3-[35S]硫代磷酸([35S]GTPγS)，通過(guò)測(cè)定作為對(duì)受體激活的反應(yīng)的膜結(jié)合放射性的積聚量來(lái)評(píng)價(jià)G-蛋白激活。
測(cè)定緩沖液包含25mM HEPES(2.98g/0.5L)、10mM無(wú)水MgCl2(476mg/0.5L)、100mM NaCl(2.92g/0.5L)和0.1％牛血清白蛋白(0.5g/0.5L)。對(duì)于一個(gè)96-孔板實(shí)驗(yàn)，所有下列試劑都是在測(cè)定緩沖液中配制的10×GDP(鈉鹽；Sigma，商品目錄號(hào)G-7127；0.004g/10mL＝10mM，進(jìn)行1∶20稀釋以達(dá)到500μM)；10×GTPγS(四鋰鹽；Sigma，商品目錄號(hào)G-8634；1mM貯備液，進(jìn)行1∶10稀釋以達(dá)到100μM)；10×[35S]-GTPγS(NEN LifeScience，商品目錄號(hào)NEG030H，250μCi/20μL；10μM貯備液，進(jìn)行1∶20,000稀釋以達(dá)到0.5nM)；hCB1受體膜(HEK293細(xì)胞；Receptor Biology Inc，商品目錄號(hào)RBhCB1 382200)，10μg/孔(9.23mg/mL貯備液，受體濃度(Bmax)1.21pmol/mg蛋白)＝103μL補(bǔ)充大麻素的膜，在9497μL緩沖液中(將裝有膜的小瓶融化，迅速用測(cè)定緩沖液稀釋并在冰上保持)；5×WGA PVT閃爍親近測(cè)定(SPA)玻珠(Amersham International，商品目錄號(hào)RPNQ001；20mg/mL)和10×受試化合物/DMSO對(duì)照。
將下列試劑吸移到Packard PicoPlate-96孔板內(nèi)(體積/孔)以達(dá)到總共250μL的測(cè)定體積25μL 10×(500μM)GDP或緩沖液(用于總結(jié)合)；25μL 10×受試化合物/DMSO對(duì)照；25μL 10×GTPγS(用于非特異性結(jié)合)或緩沖液；25μL 10×[35S]-GTPγS；100μL人大麻素受體(10μg/孔)；50μL(20mg/mL)WGA PVT SPA玻珠(1mg/孔)。用topseal A蓋片將該96孔板密封，渦旋2分鐘。將該96孔板在室溫培養(yǎng)60分鐘，以800g離心(Beckman6JB)5分鐘，并在Topcount計(jì)數(shù)3分鐘。
使用10μM GTPγS測(cè)定非特異性結(jié)合，將所有值減去該非特異性結(jié)合值。在不存在激動(dòng)劑以及存在GDP的情況下測(cè)定基礎(chǔ)結(jié)合。激動(dòng)劑的刺激作用定義為相對(duì)于基礎(chǔ)水平的增加百分比，即{[cpm(激動(dòng)劑)-cpm(無(wú)激動(dòng)劑)]/cpm(無(wú)激動(dòng)劑)}×100數(shù)據(jù)是1-6次以一式三份方式進(jìn)行的試驗(yàn)的平均值±S.E.M。使用Origin第5版，(邏輯運(yùn)算；Microcal Software Inc.MA，USA)進(jìn)行濃度-反應(yīng)數(shù)據(jù)的非線性回歸分析，以計(jì)算最大作用百分比(Emax，％)和EC50(nM)值。Emax是，與在相同平板上的WIN55，212-2的活性相比，受試化合物的最大活性。
本發(fā)明活性劑的EC50值為1nM-50μM，優(yōu)選為2nM-3μM。本發(fā)明活性劑的Emax值為52％-180％，優(yōu)選為80％-180％。
因此，本發(fā)明活性劑可特別用作大麻素受體激動(dòng)劑，例如用于治療各種起源或病因的疼痛，和用作抗炎劑和/或抗水腫劑以治療炎性反應(yīng)、疾病或病癥，以及用于治療過(guò)敏反應(yīng)。由于它們的鎮(zhèn)痛/抗炎性質(zhì)，本發(fā)明活性劑可用于治療痛覺(jué)過(guò)敏，和尤其用于治療嚴(yán)重慢性疼痛。它們可例如用于治療創(chuàng)傷后發(fā)生的，例如與燒傷、扭傷、骨折等有關(guān)的疼痛、炎癥和/或水腫，在手術(shù)后發(fā)生的疼痛、炎癥和/或水腫，例如用作手術(shù)后鎮(zhèn)痛劑，以及用于治療不同起源的炎性疼痛，例如用于治療骨和關(guān)節(jié)疼痛(骨關(guān)節(jié)炎)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性疾病、腱鞘炎、痛風(fēng)、癌癥疼痛、肌筋膜疼痛(肌肉損傷、纖維肌痛)、下背部疼痛，慢性神經(jīng)病性疼痛例如糖尿病性神經(jīng)病，幻肢疼痛和手術(shù)期間疼痛(普通外科手術(shù)、婦科手術(shù))。它們還適于作為鎮(zhèn)痛劑用于治療與例如心絞痛、月經(jīng)或癌癥有關(guān)的疼痛。它們還可作為抗炎劑/抗水腫劑來(lái)用于治療例如炎性皮膚病癥例如牛皮癬和濕疹。
本發(fā)明活性劑還可用于治療慢性精神病，例如抑郁癥，抑郁癥和雙相性精神障礙例如躁狂-抑郁精神病，極端精神病狀態(tài)例如躁狂，精神分裂癥和其中希望行為穩(wěn)定的過(guò)度情緒波動(dòng)。此外，本發(fā)明化合物還可用于治療ADHD(注意力缺乏多動(dòng)癥)和其它注意力障礙，例如孤獨(dú)癥、焦慮癥、泛化焦慮癥和廣場(chǎng)恐怖癥，以及特征是回避社交的行為狀態(tài)例如消極癥狀，和用于治療和預(yù)防神經(jīng)變性疾病例如阿爾茨海默氏病、帕金森病。
本發(fā)明活性劑還可用作平滑肌松弛劑，以治療例如胃腸道或子宮痙攣，例如用于治療局限性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎或胰腺炎，和用于治療例如多發(fā)性硬化中的肌肉痙攣狀態(tài)和震顫。
此外，本發(fā)明活性劑還可用于治療選自青光眼、正常眼壓青光眼和視網(wǎng)膜與視神經(jīng)的神經(jīng)變性病癥的眼睛病癥，尤其是在呈現(xiàn)出青光眼危險(xiǎn)因素，例如但不限于高眼內(nèi)壓，有家族性青光眼病史，在對(duì)側(cè)眼睛中患有青光眼和具有高度近視的患者中治療上述疾病。
可在下列動(dòng)物模型中測(cè)定對(duì)于所述眼睛病癥的效力(關(guān)于這些模型的綜合討論參見(jiàn)Goldblum和Mittag，Vision Research 42(2002)471-478)(1)通過(guò)以下方法增加眼內(nèi)壓而誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性青光眼-給下述動(dòng)物的小梁網(wǎng)施以激光光致凝固操作大鼠(Ueda等人，Japan.J.Ophthalmol.1998；42337-344)、兔子和猴子(March等人，Lasers Surg.Med.1984；4329-335，Pederson和Gaasterland，Arch.Ophthalmol.1984；1021689-1692)-燒灼兩條或三條大鼠鞏膜上/邊緣靜脈(如Shareef等人，Exp.EyeRes.1995；61379-382，Mittag等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.2000；413451-3459中所述)-將高滲鹽水注射到大鼠的邊緣水狀液收集靜脈內(nèi)(如Morrison等人，Exp.Eye Res.1997；6485-96中所述)-給兔子眼內(nèi)注射α-胰凝乳蛋白酶(如Fernandez-Durango等人，Exp.Eye Res.1991；53591-596中所述)-給大鼠眼內(nèi)注射S-抗原(Mermoud等人，Graefes Arch.Clin.Exp.Ophthalmol.1994；232553-560)(2)通過(guò)以下方法損傷視神經(jīng)(ON)而誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性青光眼-壓碎小鼠的ON(Levkovitch-Verbin等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.2000；414169-4174)和大鼠的ON(Yoles和Schwartz，Exp.Neurol.1998；1531-7)-將大鼠的ON橫切(如Martin等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.2002；432236-2243，Solomon等人J.Neurosci.Methods 1996；7021-25中所述)-將眼睛血管結(jié)扎(如Lafuente等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.2001；422074-2084中所述)或者給前房插套管(Buchi等人，Ophthalmologica 1991；203138-147)而在大鼠中引起實(shí)驗(yàn)性短暫(急性)視網(wǎng)膜局部缺血-在下述動(dòng)物的眼內(nèi)注射內(nèi)皮肽-1大鼠(Stokely等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.2002；433223-3230)或兔子(Takei等人，Graefes Arch.Clin.Exp.Ophthalmol 1993；231476-481)(3)在大鼠中通過(guò)興奮毒性誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性青光眼(眼內(nèi)注射興奮性氨基酸或其類似物，如Vorwerk等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.1996；371618-1624中所述)(4)在小鼠中自發(fā)形成繼發(fā)形式(色素分散)的青光眼(DBA/2J、DBA/2Nnia和AKXD28/Ty小鼠，如Anderson等人，BMC Genetics 2001；2:1，Chang等人，Nature Genetics 1999；21405-409，John等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.1998；39951-962，Sheldon等人，Lab.Animal Sci.1995；15508-518中)所述。
在本申請(qǐng)中，術(shù)語(yǔ)“治療”既指預(yù)防性或防止性治療，也指治療性或疾病緩減性治療，包括治療具有患病危險(xiǎn)或被懷疑患病的患者，以及治療生病的或已經(jīng)被診斷出正患有疾病或病癥的患者。
對(duì)于上述適應(yīng)癥，本發(fā)明活性劑的適當(dāng)劑量當(dāng)然根據(jù)例如治療的個(gè)體、給藥方式、所治療病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及所用具體本發(fā)明活性劑的相對(duì)效力而變。例如，所需的活性劑的量可這樣確定采用體外和體內(nèi)技術(shù)，測(cè)定療效可接受水平的具體活性劑在血漿中的濃度所保持的時(shí)間。一般情況下，在動(dòng)物中，采用約0.01-約20.0mg/kg的口服日劑量可獲得滿意結(jié)果。在人中，推薦的日劑量為約0.7-約1400mg/天口服，例如約50-200mg，適宜地每天給藥一次或每天分最高達(dá)4次給藥，或者以緩釋形式給藥。相應(yīng)地，口服劑型適當(dāng)?shù)匕c合適的可藥用稀釋劑或載體混和的約0.2-約700mg本發(fā)明活性劑。
本發(fā)明活性劑還可以例如以霜?jiǎng)?、凝膠劑等形式局部給藥，以例如治療如上文所述的皮膚病癥，或者以例如干粉的形式吸入給藥，以例如治療哮喘。
包含本發(fā)明活性劑的組合物的實(shí)例包括例如濃度為0.1-1％，例如0.5％的式I化合物鹽酸鹽的固體分散劑、含有例如助溶劑的水溶液、微乳劑和懸浮液?？捎煤线m的緩沖劑將組合物緩沖至例如3.5-9.5的pH，例如pH4.5。
本發(fā)明活性劑還可用作研究用化學(xué)藥品。
本發(fā)明活性劑可單獨(dú)或者與能有效治療以下疾病和病癥的其它藥物活性劑聯(lián)合體內(nèi)給藥CB1或CB2受體激活在其中起作用或涉及CB1或CB2受體激活的疾病和病癥，所述其它藥物活性劑包括環(huán)加氧酶-2(COX-2)抑制劑，例如特異性COX-2抑制劑(例如塞來(lái)考昔和羅非考昔)和非甾類抗炎藥物(NSAID)(例如乙酰水楊酸、丙酸衍生物)，香草生物堿(vanilloid)受體激動(dòng)劑、三環(huán)類抗抑郁劑(例如Anafranil、Asendin、Aventyl、Elavil、Endep、Norfranil、Norpramin、Pamelor、Sinequan、Surmontil、Tipramine、Tofranil、Vivactil、Tofranil-PM)、抗驚厥藥物(例如加巴噴丁)和GABAB激動(dòng)劑(例如L-巴氯芬)。
本發(fā)明用于單獨(dú)施用聯(lián)合用藥物成分的藥物組合物，以及用于在固定組合中給藥的藥物組合物，即包含至少兩種聯(lián)合用藥物成分的單一蓋侖藥物組合物可依據(jù)已知的方法制得，并因此適于對(duì)哺乳動(dòng)物，包括人胃腸給藥，例如口服給藥或直腸給藥，和胃腸外給藥，并且其中包含單獨(dú)或者與一種或多種可藥用載體，尤其是適于胃腸或胃腸外施用的可藥用載體混和的治療有效量的至少一種具有藥理活性的聯(lián)合用藥物成分。
本發(fā)明新的藥物組合物含有例如約0.1％-約99.9％，優(yōu)選約20％-約60％的活性組分。用于經(jīng)由胃腸或胃腸外給藥來(lái)進(jìn)行聯(lián)合治療的藥物制劑是例如在單位劑型如糖衣片劑、片劑、膠囊劑或栓劑以及安瓿中的藥物制劑。除非另有說(shuō)明，否則這些制劑是通過(guò)已知的方法制得的，例如是通過(guò)常規(guī)混和、制粒、包糖衣、溶解或冷凍干燥方法制得的。應(yīng)當(dāng)理解，包含在單個(gè)劑量的每個(gè)劑型中的聯(lián)合用藥物成分的單位含量自身無(wú)需構(gòu)成有效量，因?yàn)樗璧挠行Я靠赏ㄟ^(guò)施用多個(gè)劑量單位來(lái)達(dá)到。
特別是，治療有效量的每一聯(lián)合用藥物成分可同時(shí)或依次并以任何順序給藥，并且這些成分可單獨(dú)給藥或者作為固定組合來(lái)給藥。例如，本發(fā)明延遲增殖性疾病進(jìn)展或治療增殖性疾病的方法可包括(i)施用游離或可藥用鹽形式的聯(lián)合用藥物成分(a)，和(ii)施用游離或可藥用鹽形式的聯(lián)合用藥物成分(b)，二者以聯(lián)合治療有效量，優(yōu)選協(xié)同有效量，例如與本文所述量一致的日劑量同時(shí)施用或者以任何順序依次施用。在治療期間，單個(gè)聯(lián)合用藥物成分可以在不同時(shí)間單獨(dú)給藥，或者以分開(kāi)或單一組合形式同時(shí)給藥。此外，術(shù)語(yǔ)給藥或施用還包括使用可在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成聯(lián)合用藥物成分自身形式的聯(lián)合用藥物成分的前藥。因此應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括所有這樣的同時(shí)或依次進(jìn)行治療的方案，并且對(duì)術(shù)語(yǔ)“給藥或施用”也作相應(yīng)理解。
所用每一聯(lián)合用藥物成分的有效劑量可根據(jù)所用的具體化合物或藥物組合物、給藥方式、所治療的病癥、所治療病癥的嚴(yán)重程度而變。因此，根據(jù)多種因素，包括給藥途徑和患者的腎和肝臟功能來(lái)選擇用藥方案。本領(lǐng)域主治醫(yī)師、臨床醫(yī)師或獸醫(yī)很容易確定和開(kāi)處方使用防止、抵抗或抑制病癥進(jìn)展所需的單一活性組分的有效量。達(dá)到在能夠產(chǎn)生效力同時(shí)沒(méi)有毒性的范圍內(nèi)的活性組分濃度的最佳精確性需要根據(jù)活性組分到達(dá)靶位點(diǎn)的動(dòng)力學(xué)而作出的方案。一般情況下，在動(dòng)物中，采用約0.01-約20.0mg/kg口服的日劑量可獲得滿意結(jié)果。在人中，推薦的日劑量為約0.7-約1400mg/天口服，例如約50-200mg，適宜地每天給藥一次或每天分最高達(dá)4次給藥，或者以緩釋形式給藥。相應(yīng)地，口服劑型適當(dāng)?shù)匕s0.2-約700mg。
依據(jù)上述內(nèi)容，本發(fā)明還提供了(1)用作大麻素受體激動(dòng)劑，例如用于上述任何具體適應(yīng)癥的本發(fā)明活性劑；(2)包含本發(fā)明活性劑作為活性組分與可藥用稀釋劑或載體的藥物組合物。這樣的組合物可通過(guò)常規(guī)方法制備。
(2’)用于治療或預(yù)防大麻素受體激活在其中起作用或涉及大麻素受體激活的疾病或病癥的包含本發(fā)明活性劑與載體的藥物組合物。
(3)在有此需要的個(gè)體中治療上述任何具體適應(yīng)癥的方法，包括施用有效量的本發(fā)明活性劑；(3’)治療或預(yù)防大麻素受體激活在其中起作用或涉及大麻素受體激活的疾病或病癥的方法，包括給有此需要的哺乳動(dòng)物施用治療有效量的本發(fā)明活性劑。
(4)本發(fā)明活性劑在制備用于治療或預(yù)防大麻素受體激活在其中起作用或涉及大麻素受體激活的疾病或病癥的藥物中的應(yīng)用。
(5)如上所定義的方法，其中包括聯(lián)合施用，例如同時(shí)或按順序施用治療有效量的本發(fā)明活性劑與第二種藥物，所述第二種藥物能用于治療例如上述任何具體適應(yīng)癥。
(6)包含治療有效量的本發(fā)明活性劑與第二種藥物的聯(lián)合用藥物組合，其中所述第二種藥物能用于治療例如上述任何具體適應(yīng)癥。
依據(jù)本發(fā)明使用的優(yōu)選的式I化合物是實(shí)施例2的化合物。該化合物是有效的CB激動(dòng)劑(在試驗(yàn)IV的CB1功能測(cè)定中的EC50＝0.132±0.019μM；Emax＝117±5％)，特別是體外CB1激動(dòng)劑(在試驗(yàn)I的CB1受體結(jié)合試驗(yàn)中的Ki＝0.034±0.003μM)和體外CB2激動(dòng)劑(在試驗(yàn)II的CB2受體結(jié)合試驗(yàn)中的Ki＝0.011±0.0035μM)。在試驗(yàn)III的神經(jīng)病性疼痛模型中，實(shí)施例2的化合物的D50值為0.5mg/kg口服。
在實(shí)施例中使用的縮寫AcOH＝乙酸；HCl＝鹽酸；KOH＝氫氧化鉀；MeCN＝乙腈；MgSO4＝硫酸鎂；Na2SO4＝硫酸鈉；NaHCO3＝碳酸氫鈉；TFA＝三氟乙酸；THF＝四氫呋喃下列實(shí)施例舉例說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例1制備2-乙基氨基甲酰氧基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯a)制備3，5-二甲基-苯-1，2，4-三甲酸4-乙酯1，2-二甲酯將異脫水乙酸乙酯(300g，1.53mol)和丁炔二酸二甲酯(434.6g，3.06mol)的黃色粘稠反應(yīng)混合物在氬氣氛下于約190℃加熱1小時(shí)。劇烈釋放CO2，形成了黑色反應(yīng)混合物。讓該反應(yīng)混合物在氬氣氛下冷卻至室溫，并在該條件下保持過(guò)夜。將該混合物溶解在乙酸乙酯/己烷(約700mL，1∶2)中，通過(guò)經(jīng)由硅膠(5kg)過(guò)濾來(lái)純化，用己烷/乙酸乙酯(3∶1)洗脫，獲得了本標(biāo)題化合物，為黃色油狀物(427g，94.9％)。
b)制備3，5-二甲基-苯-1，2，4-三甲酸4-乙酯2-甲酯將3，5-二甲基-苯-1，2，4-三甲酸4-乙酯1，2-二甲酯(421g，1.43mol)在甲醇(10.2L)中的攪拌著的淺黃色溶液于室溫用5M KOH溶液(5.74L)處理，形成了淺棕色溶液。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘，TLC(乙酸乙酯∶AcOH，20∶1)表明反應(yīng)在約15分鐘后完全。將該黃棕色反應(yīng)混合物用冰(3kg)處理，用叔丁基甲基醚(2×15L)萃取。再用鹽水(5L)萃取有機(jī)相。向水相中加入濃鹽酸(2.5L)直至達(dá)到pH1，將溫度保持在30℃以下，按照需要加入冰。用乙酸乙酯(2×3L)萃取酸性水相，用鹽水(2L)回洗有機(jī)相。將合并的有機(jī)相用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，獲得了本標(biāo)題化合物，為白色固體結(jié)晶(377g，94％)。
c)制備4-叔丁氧基羰基氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯3-甲酯將3，5-二甲基-苯-1，2，4-三甲酸4-乙酯2-甲酯(374g，1.33mol)、二苯基磷酰疊氮(734g，576mL，2.66mol)和三乙胺(270g，371.4mL，2.66mol)在叔丁醇(4.2L)中的攪拌著的黃色溶液加熱回流1.5小時(shí)。劇烈釋放N2，形成了澄清的棕色溶液。將該反應(yīng)混合物冷卻至約50℃，真空蒸發(fā)至干，獲得了深棕色油狀物(1.4kg)。將該油狀物再溶解在二氯甲烷(3L)中，依次用飽和NaHCO3溶液(2×2L)和鹽水(2L)洗滌。將合并的水層用二氯甲烷(1L)回洗。將合并的有機(jī)層用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，獲得了深棕色油狀物(1.14kg)。將粗產(chǎn)物溶解在己烷/乙酸乙酯(1L，1∶1)中，通過(guò)經(jīng)由硅膠(6kg)過(guò)濾來(lái)純化，用己烷/乙酸乙酯(8∶1)洗脫，獲得了本標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色蠟狀固體(441.5g，94.2％)。
d)制備4-氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯3-甲酯將4-叔丁氧基羰基氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯3-甲酯(435g，1.24mol)在二氯甲烷(825mL)中的攪拌著的黃色澄清溶液于室溫和氮?dú)夥障掠肨FA(825mL)處理，觀察到CO2釋放。在室溫?cái)嚢杓s1.5小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)至干。將殘余物再溶解在乙酸乙酯(2L)中，依次用水(2L)、50％NaHCO3溶液(2L)、飽和NaHCO3溶液(2L)和鹽水(2L)洗滌。將合并的水相用乙酸乙酯(1L)回洗。將合并的有機(jī)層用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑。將所得濃厚的漿液用己烷(2L)洗滌，在攪拌下冷卻至0℃，并劇烈攪拌1小時(shí)。將該懸浮液過(guò)濾，用冷的己烷充分洗滌，在40℃干燥直至恒重，獲得了本標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體結(jié)晶(231.5g，74.4％)。
e)制備4-氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯將4-氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯3-甲酯(225g，0.89mol)在甲醇(5.9L)中的攪拌著的白色懸浮液于室溫和氮?dú)夥障掠?M KOH溶液(3.58L)處理。將該反應(yīng)混合物加熱至約80℃，最后形成了澄清的無(wú)色溶液。加熱1小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物冷卻至約40℃。減壓除去甲醇，用叔丁基甲基醚(2×3L)萃取剩余的水相。用水(0.5L)反萃取有機(jī)相。向合并的水相中加入濃鹽酸(2.5L)直至達(dá)到pH1，將溫度保持在30℃以下，按照需要加入冰。用乙酸乙酯(2×3L)萃取酸性水相，用鹽水(2L)回洗有機(jī)相。將合并的有機(jī)相用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾并將溶劑濃縮至體積為約1L。將該黃色乙酸乙酯溶液用己烷(2L)稀釋，在0℃貯存1小時(shí)。將所得白色懸浮液過(guò)濾，用己烷/乙酸乙酯(8∶2)充分洗滌，在40℃干燥至恒重，獲得了本標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體結(jié)晶(194g，84.9％)。從母液中又另外收集了17.8g(7.8％)。
f)制備4-(芐氧基乙?；?氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯在冰浴溫度下，向4-氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯(25g，0.1054mol)在無(wú)水二氯甲烷(250mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中一次性加入二異丙基乙胺(18mL，0.421mol)，然后滴加芐氧基乙酰氯(Aldrich，18mL，0.1159mol)。讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭⒈３诌^(guò)夜。TLC/LCMS分析表明反應(yīng)已完全。將該反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，將殘余物在乙酸乙酯與2M HCl之間分配。分離出有機(jī)相，用無(wú)水Na2SO4干燥，并蒸發(fā)，獲得了黃色固體。從環(huán)己烷/乙酸乙酯中重結(jié)晶，獲得了本標(biāo)題化合物，為黃色固體結(jié)晶(38.5g，0.100mol，95％)。
g)制備N-甲基-2-硝基-苯磺酰胺經(jīng)由加液漏斗向2-硝基苯磺酰氯(18.24g，0.082mol)在甲醇(35mL)內(nèi)的攪拌著的懸浮液中滴加甲胺(2.0M在THF中的溶液，90mL，0.18mol)。讓該反應(yīng)混合物達(dá)到室溫，然后放置過(guò)夜。TLC(洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯1/1)表明仍然剩余一些原料。再加入甲胺(2.0M在THF中的溶液，30mL)，將該混合物攪拌1小時(shí)。TLC表明反應(yīng)已完全。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，將殘余物在水與乙酸乙酯之間分配。分離出有機(jī)相，用乙酸乙酯萃取水相。將合并的有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，然后用無(wú)水MgSO4干燥。真空蒸發(fā)，獲得了本標(biāo)題化合物，為淺黃色結(jié)晶(16.91g，0.078mol，95％)。
h)制備2-氨基-N-甲基-苯磺酰胺將N-甲基-2-硝基-苯磺酰胺(17g，0.078mol)在無(wú)水THF(200mL)中的溶液于室真空下脫氣。加入以活性炭為載體的鈀(10％Pd，3.7g)，用氫氣(氣囊)吹掃該攪拌著的懸浮液。將該懸浮液在氫氣下攪拌過(guò)夜。TLC分析表明反應(yīng)已完全。然后將該反應(yīng)混合物經(jīng)由硅藻土過(guò)濾。將所消耗的催化劑依次用乙酸乙酯和甲醇洗滌。真空蒸發(fā)，獲得了本標(biāo)題化合物，為粘稠的淺棕色油狀物(14.6g，100％)。
i)制備2-芐氧基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯在三頸圓底燒瓶?jī)?nèi)，經(jīng)由加液漏斗向4-(芐氧基乙?；?氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯(27g，0.07mol)、2-氨基-N-甲基-苯磺酰胺(13g，0.07mol)和無(wú)水甲苯(500mL)的機(jī)械攪拌著的懸浮液中加入三氯化磷(51mL，0.56mol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?分鐘，然后加熱至回流。45分鐘后，LCMS分析表明反應(yīng)已完全。將該懸浮液冷卻至室溫，將溶液相從固體材料中傾析出來(lái)。對(duì)溶液和固體材料獨(dú)立地進(jìn)行后處理。在劇烈攪拌下將該甲苯溶液在乙酸乙酯與飽和NaHCO3水溶液之間分配，獲得了澄清的兩相溶液。分離出有機(jī)相和水相，用乙酸乙酯萃取水相(×2)。將有機(jī)相合并，用無(wú)水Na2SO4干燥，并真空蒸發(fā)，獲得了橙色油狀物。按照類似方法，將固體材料與乙酸乙酯和飽和NaHCO3水溶液劇烈攪拌，獲得了澄清的兩相溶液。分離出有機(jī)相和水相，用乙酸乙酯萃取水相(×2)。將有機(jī)相合并，用無(wú)水Na2SO4干燥，并真空蒸發(fā)，獲得了橙色油狀物。用乙醚研制該橙色油狀物，獲得了黃色固體，通過(guò)過(guò)濾將其取出，用乙醚洗滌并晾干，獲得了本標(biāo)題化合物(20g，0.037mol，53％)。
k)制備2-羥基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺酰基-苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯將2-芐氧基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯(15g，0.028mol)在無(wú)水THF(270mL)中的溶液于室真空下脫氣。加入以活性炭為載體的鈀(Acros，10％Pd，930mg)，用氫氣(氣囊)吹掃該懸浮液。將該懸浮液在氫氣下攪拌過(guò)夜。TLC和LCMS分析表明仍然剩余原料。將該反應(yīng)混合物經(jīng)由硅藻土過(guò)濾，依次用甲醇、DCM和甲醇洗滌催化劑。將濾液蒸發(fā)，獲得了霜狀固體。用乙醚研制，獲得了白色固體，通過(guò)過(guò)濾將其取出，在高度真空下干燥，獲得了本標(biāo)題化合物(5.42g，0.012mol，43％)。將含有未反應(yīng)的原料的乙醚濾液真空蒸發(fā)，對(duì)殘余物進(jìn)行第二次氫氣循環(huán)(Pd-C，920mg)在氫氣下攪拌過(guò)夜后，TLC/LCMS表明已不存在原料。按照上述方法對(duì)該反應(yīng)混合物進(jìn)行后處理，獲得了本標(biāo)題化合物，為白色固體(4.75g，0.01mol，38％)。總收率10.17g，0.022mol，82％。
l)制備2-乙基氨基甲酰氧基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯向2-羥基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯(1.2g，2.70mmol)在無(wú)水THF(2mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中一次性加入異氰酸乙酯(3mL)。將所得懸浮液在氬氣氛下攪拌。10分鐘后，獲得了澄清溶液。45分鐘后，TLC/LCMS分析表明轉(zhuǎn)化完全。通過(guò)加入過(guò)量甲醇來(lái)中止該反應(yīng)，然后真空蒸發(fā)至干。通過(guò)快速硅膠柱色譜純化(用乙酸乙酯，30％-35％-65％，在乙醚中的混合物進(jìn)行梯度洗脫)，獲得了本標(biāo)題化合物，為無(wú)色玻璃狀物(1.36g，2.63mmol，98％)。Mp 102-115℃；1HNMR(400MHz，CDCl3)1.12(3H，t，J＝7Hz)，1.41(3H，t，J＝8Hz)，2.43(3H，s)，2.66(3H，d，J＝5Hz)，2.73(3H，s)，3.16(2H，m)，4.44(2H，q，J＝7Hz)，4.61(1H，d，J＝14Hz)，4.73(1H，d，J＝14Hz)，4.90(1H，bm)重疊4.94(1H，bm)，7.47(2H，m)，7.70(1H，dt，J＝1，8Hz)，7.78(1H，dt，J＝2，8Hz)，8.10(1H，d，J＝8Hz)；1HNMR(400MHz，CD3OD)1.11(3H，t，J＝7Hz)，1.42(3H，t，J＝7Hz)，2.44(3H，s)，2.55(3H，s)，2.71(3H，s)，3.09(2H，q，J＝7Hz)，4.46(2H，q，J＝7Hz)，4.58(1H，d，J＝14Hz)，4.78(1H，d，J＝14Hz)，7.48(1H，s)，7.60(1H，dd，J＝1，8Hz)，7.81(2H，m)，8.12(1H，dd，J＝1，8Hz)；MS m/z(ES+)517.1(M+1，100％)；HPLC保留時(shí)間＝5.185分鐘，＞96％，柱Phenomex-Kingsorb C18，3cm×4.6mM ID，溶劑系統(tǒng)MeCN/H2O(0.1％TFA)，10-90％梯度的MeCN，10分鐘；檢測(cè)254nm。
m)制備2-乙基氨基甲酰氧基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯鹽酸鹽在劇烈攪拌下用10分鐘將2-乙基氨基甲酰氧基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯(504mg，0.976mmol)溶解在無(wú)水乙醇(20mL)中。經(jīng)由吸移管向該無(wú)色澄清溶液中緩慢地加入濃鹽酸(70滴)。5分鐘后，形成了濃厚的白色沉淀。再攪拌10分鐘后，將該懸浮液真空蒸發(fā)，將殘余物在高度真空下干燥過(guò)夜，獲得了鹽酸鹽，為無(wú)色細(xì)針狀物(521mg，0.942mmol，97％)。Mp 126-130℃；1HNMR(400MHz，CD3OD)1.12(3H，t，J＝8Hz)，1.43(3H，t，J＝7Hz)，2.48(3H，s)，2.56(3H，s)，2.73(3H，s)，3.13(2H，m)，4.48(2H，q，J＝7Hz)，4.77(1H，d，J＝15Hz)，4.90(1H，d，J＝15Hz)，7.59(1H，s)，7.68(1H，dd，J＝1，8Hz)，7.88(2H，m)，8.15(1H，dd，J＝2，8Hz)；MSm/z(ES+)517.1(M+1，100％)。
其中R6b是H，R7和R8是甲基，且R9是乙基的下列式I化合物可通過(guò)實(shí)施例1的方法，但是使用合適的原料制得(Ex＝實(shí)施例；具有下列HPLC保留時(shí)間數(shù)據(jù)[分鐘]和離子質(zhì)量)
*柱Phenomex-Kingsorb C18，3cm×4.6mM ID，溶劑系統(tǒng)MeCN/H2O(0.1％TFA)，10-90％梯度的MeCN，10分鐘；檢測(cè)254nm。
實(shí)施例2制備2-(2-羥基-乙基氨基甲酰氧基甲基)-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯在氮?dú)夥障?，?-羥基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯(800mg，1.79mmol)在無(wú)水吡啶(20mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中一次性加入氯甲酸苯酯(0.566mL，4.5mmol)。形成了凝膠狀白色沉淀。將該攪拌著的溶液加熱至80℃。45分鐘后，TLC/LCMS分析表明反應(yīng)已完全。讓該反應(yīng)冷卻，并真空蒸發(fā)至干。將殘余物在乙酸乙酯與2M HCl之間分配。分離出有機(jī)相，用無(wú)水Na2SO4干燥，并蒸發(fā)，獲得了灰白色泡沫狀物，將其在高度真空下干燥。將該泡沫狀物溶解在無(wú)水THF(10mL)中，加入乙醇胺(2mL，33mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫于氮?dú)夥障聰嚢柽^(guò)夜。TLC/LCMS分析表明反應(yīng)已完全。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)至干，將殘余物在氯甲烷與2M HCl之間分配。分離出有機(jī)相，用無(wú)水Na2SO4干燥，并真空蒸發(fā)，獲得了橙色油狀物。通過(guò)快速硅膠柱色譜純化(用乙酸乙酯，50％-70％-90％在環(huán)己烷中的混合物進(jìn)行梯度洗脫)，在高度真空下干燥后，獲得了本標(biāo)題化合物，為無(wú)色結(jié)晶(872mg，1.64mmol，91％)。Mp 122-125℃；1HNMR(400MHz，CDCl3)1.41(3H，t，J＝7Hz)，2.30(1H，bm)，2.43(3H，s)，2.67(3H，d，J＝5Hz)，2.74(3H，s)，3.27(2H，m)，3.66(2H，bm)，4.45(2H，q，J＝7Hz)，4.73(2H，m)，4.97(1H，bm)，5.31(1H，bm)，7.45(1H，d，J＝8Hz)，7.49(1H，s)，7.71(1H，t，J＝8Hz)，7.79(1H，m)，8.10(1H，d，J＝8Hz)；MS m/z(ES+)533.2(M+1，100％)；HPLC保留時(shí)間＝4.313分鐘，＞99％，柱Phenomex-Kingsorb C18，3cm×4.6mM ID，溶劑系統(tǒng)MeCN/H2O(0.1％TFA)，10-90％梯度的MeCN，10分鐘；檢測(cè)254nm。
其中R6是-CH2-O-C(O)-NH-R12，R7和R8是甲基，且R9是乙基的下列式I化合物可通過(guò)實(shí)施例2的方法，但是使用合適的原料制得(Ex＝實(shí)施例；具有下列HPLC保留時(shí)間數(shù)據(jù)[分鐘]和離子質(zhì)量)

其中R6是-CH2-O-C(O)-N(R12)R13，R7和R8是甲基，且R9是乙基的下列式I化合物可通過(guò)實(shí)施例2的方法，但是使用合適的原料制得(Ex＝實(shí)施例；具有下列HPLC保留時(shí)間數(shù)據(jù)[分鐘]和離子質(zhì)量)
柱Phenomex-Kingsorb C18，3cm×4.6mM ID，溶劑系統(tǒng)MeCN/H2O(0.1％TFA)，10-90％梯度的MeCN，10分鐘；檢測(cè)254nm。
實(shí)施例77制備3-(2-氯苯基)-2-(2-乙基氨基甲?；一?-5，7-二甲基-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸乙酯a)4-(3-乙氧基羰基丙?；被?-2，6-二甲基間苯二甲酸1-乙酯在0℃，將4-氨基-2，6-二甲基間苯二甲酸1-乙酯(0.3g，1.26mmol)和三乙胺(0.355mL，2.55mmol)在二氯甲烷(15mL)中的攪拌著的溶液用乙基琥珀酰氯(0.199mL，1.39mmol)處理，讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭⒈３诌^(guò)夜。將該反應(yīng)混合物用1M鹽酸洗滌，用鹽水回洗，用無(wú)水MgSO4干燥。減壓除去溶劑，獲得了本標(biāo)題化合物，其不用進(jìn)一步純化直接使用。
b)3-(2-氯苯基)-2-(2-乙氧基羰基乙基)-5，7-二甲基-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸乙酯將4-(3-乙氧基羰基丙?；被?-2，6-二甲基間苯二甲酸1-乙酯(0.327g，0.89mmol)、2-氯苯胺(0.28mL，2.66mmol)和三氯化磷(0.74g，5.4mmol)在甲苯(6mL)中的攪拌著的混合物于130℃加熱3小時(shí)。冷卻至室溫后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉溶液中，用氯仿萃取。合并氯仿萃取液，用鹽水洗滌，用無(wú)水MgSO4干燥。減壓除去溶劑，通過(guò)快速硅膠色譜純化殘余物(初始洗脫劑19∶1環(huán)己烷∶乙酸乙酯；最終洗脫劑7∶3環(huán)己烷∶乙酸乙酯)，獲得了本標(biāo)題化合物。
b)2-(2-羧基乙基)-3-(2-氯苯基)-5，7-二甲基-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸乙酯將3-(2-氯苯基)-2-(2-乙氧基羰基乙基)-5，7-二甲基-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸乙酯(0.1g，0.22mmol)在無(wú)水乙醇(6mL)中的溶液用氫氧化鈉溶液(12滴)處理，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?天。減壓除去溶劑，將殘余物溶解在水中，用乙酸乙酯洗滌。用濃鹽酸將水層酸化至pH2，用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相合并，用無(wú)水MgSO4干燥，減壓除去溶劑，獲得了本標(biāo)題化合物，其不用進(jìn)一步純化直接使用。
c)3-(2-氯苯基)-2-(2-乙基氨基甲?；一?-5，7-二甲基-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸乙酯將2-(2-羧基乙基)-3-(2-氯苯基)-5，7-二甲基-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸乙酯(0.093g，0.217mmol)、乙胺鹽酸鹽(0.018g，0.221mmol)、4-(二甲基氨基)吡啶(0.027g，0.221mmol)、三乙胺(0.066g，0.65mmol)和1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.042g，0.219mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物于室溫?cái)嚢?天。減壓除去溶劑，將殘余物溶解在乙酸乙酯中。將該乙酸乙酯溶液依次用2M鹽酸、飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。用無(wú)水MgSO4干燥后，減壓除去溶劑，通過(guò)制備高效液相色譜法純化殘余物，獲得了本標(biāo)題產(chǎn)物。1HNMR(400MHz，CDCl3)1.13(3H，t，J＝7.2Hz)，1.43(3H，t，J＝7.1Hz)，2.44(3H，s)，2.54-2.62(2H，m)，2.70-2.78(2H，m)，2.78(3H，s)，3.25-3.32(2H，m)，4.45(2H，q，J＝7.3Hz)，5.98(1H，br s)，7.36(1H，s)，7.38-7.39(1H，m)，7.47-7.49(2H，m)，7.61(1H，m)。
實(shí)施例78制備2-(2-羥基-乙基氨基甲酰氧基甲基)-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；交?-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸丙酯a)2-羥基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；交?-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸將2-芐氧基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯(3g，5.6mmol)溶解在47％氫溴酸中。將該反應(yīng)混合物在80℃攪拌過(guò)夜，然后在90℃攪拌5小時(shí)，最后在95℃攪拌5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，獲得了棕色固體，將其懸浮在乙醚/二氯甲烷中，并攪拌過(guò)夜。過(guò)濾，然后依次用二氯甲烷和乙醚洗滌，真空干燥，獲得了本標(biāo)題化合物，為沙狀棕色固體。
b)2-(2-羥基-乙基氨基甲酰氧基甲基)-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺酰基苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸丙酯在室溫，向2-羥基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；交?-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸(200mg，0.479mmol)在吡啶(10mL)內(nèi)的溶液中一次性加入氯甲酸苯酯(0.361mL，2.87mmol)。形成了白色沉淀。將該反應(yīng)混合物在80℃加熱2小時(shí)，然后蒸發(fā)，在高度真空下干燥。向殘余物中加入丙醇(30mL)和二氯甲烷(1mL)，獲得了溶液，將其在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)至干，將殘余物在二氯甲烷與2.0M鹽酸之間分配。將有機(jī)相干燥(Na2SO4)，并真空蒸發(fā)，獲得了黃色油狀物。將該油狀物溶解在THF(5mL)中，加入乙醇胺(1mL)，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)至干，將殘余物在二氯甲烷與2.0M鹽酸之間分配。將有機(jī)相干燥(Na2SO4)，并真空蒸發(fā)，獲得了黃色油狀物。采用自動(dòng)梯度洗脫(10-100％乙酸乙酯在己烷中的混合物)快速色譜法進(jìn)行純化，獲得了本標(biāo)題化合物，為淺黃色泡沫狀物。1HNMR(400MHz，CDCl3)1.02(3H，t，J＝7Hz)，1.80(2H，m)，2.43(3H，s)，2.66(3H，d，J＝5Hz)，2.74(3H，s)，3.26(2H，br m)，3.66(2H，br m)，4.44(2H，t，J＝7Hz)，4.72(2H，m)，5.03(1H，br m)，5.43(1H，br m)，7 46(2H，m)，7.71(1H，t，J＝8Hz)，7 79(1H，t，J＝8Hz)，8.09(1H，d，J＝8Hz)。
其中R2、R3、R4和R5是H，R6是-CH2-O-C(O)-R14，且R7和R8是甲基的下列式I化合物可通過(guò)實(shí)施例78的方法，但是使用合適的原料制得(Ex＝實(shí)施例；具有下列HPLC保留時(shí)間數(shù)據(jù)[分鐘]和離子質(zhì)量)

HPLC條件Phenomenex Luna反相C18 3微米30×4.9mm；梯度洗脫10％MeCN在水中的混合物(+0.08％甲酸)至100％MeCN，10分鐘(流速＝3.0mL/分鐘；檢測(cè)＝254nM)。
實(shí)施例1022-羥基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸丁酯a)制備3，5-二甲基-苯-1，2，4-三甲酸4-乙酯1，2-二甲酯將異脫水乙酸乙酯(300g，1.53mol)和丁炔二酸二甲酯(434.6g，3.06mol)的黃色粘稠反應(yīng)混合物在氬氣氛下于約190℃加熱1小時(shí)。劇烈釋放CO2，形成了黑色反應(yīng)混合物。讓該反應(yīng)混合物在氬氣氛下冷卻至室溫，并在該條件下保持過(guò)夜。將該混合物溶解在乙酸乙酯/己烷(約700mL，1∶2)中，通過(guò)經(jīng)由硅膠(5kg)過(guò)濾來(lái)純化，用己烷/乙酸乙酯(3∶1)洗脫，獲得了本標(biāo)題化合物，為黃色油狀物。
b)制備3，5-二甲基-苯-1，2，4-三甲酸4-乙酯2-甲酯將3，5-二甲基-苯-1，2，4-三甲酸4-乙酯1，2-二甲酯(421g，1.43mol)在甲醇(10.2L)中的攪拌著的淺黃色溶液于室溫用5M KOH溶液(5.74L)處理，形成了淺棕色溶液。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘，TLC(乙酸乙酯∶AcOH，20∶1)表明反應(yīng)在約15分鐘后完全。將該黃棕色反應(yīng)混合物用冰(3kg)處理，用叔丁基甲基醚(2×15L)萃取。再用鹽水(5L)萃取有機(jī)相。向水相中加入濃鹽酸(2.5L)直至達(dá)到pH1，將溫度保持在30℃以下，按照需要加入冰。用乙酸乙酯(2×3L)萃取酸性水相，用鹽水(2L)回洗有機(jī)相。將合并的有機(jī)相用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，獲得了本標(biāo)題化合物，為白色固體結(jié)晶。
c)制備4-叔丁氧基羰基氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯3-甲酯將3，5-二甲基-苯-1，2，4-三甲酸4-乙酯2-甲酯(374g，1.33mol)、二苯基磷酰疊氮(734g，576mL，2.66mol)和三乙胺(270g，371.4mL，2.66mol)在叔丁醇(4.2L)中的攪拌著的黃色溶液加熱回流1.5小時(shí)。劇烈釋放N2，形成了澄清的棕色溶液。將該反應(yīng)混合物冷卻至約50℃，真空蒸發(fā)至干，獲得了深棕色油狀物(1.4kg)。將該油狀物再溶解在二氯甲烷(3L)中，依次用飽和NaHCO3溶液(2×2L)和鹽水(2L)洗滌。將合并的水層用二氯甲烷(1L)回洗。將合并的有機(jī)層用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，獲得了深棕色油狀物(1.14kg)。將粗產(chǎn)物溶解在己烷/乙酸乙酯(1L，1∶1)中，通過(guò)經(jīng)由硅膠(6kg)過(guò)濾來(lái)純化，用己烷/乙酸乙酯(8∶1)洗脫，獲得了本標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色蠟狀固體。
d)制備4-氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯3-甲酯將4-叔丁氧基羰基氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯3-甲酯(435g，1.24mol)在二氯甲烷(825mL)中的攪拌著的黃色澄清溶液于室溫和氮?dú)夥障掠肨FA(825mL)處理，觀察到CO2釋放。在室溫?cái)嚢杓s1.5小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)至干。將殘余物再溶解在乙酸乙酯(2L)中，依次用水(2L)、50％NaHCO3溶液(2L)、飽和NaHCO3溶液(2L)和鹽水(2L)洗滌。將合并的水相用乙酸乙酯(1L)回洗。將合并的有機(jī)層用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑。將所得濃厚的漿液用己烷(2L)洗滌，在攪拌下冷卻至0℃，并劇烈攪拌1小時(shí)。將該懸浮液過(guò)濾，用冷的己烷充分洗滌，在40℃干燥直至恒重，獲得了本標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體結(jié)晶。
e)制備4-氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯將4-氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯3-甲酯(225g，0.89mol)在甲醇(5.9L)中的攪拌著的白色懸浮液于室溫和氮?dú)夥障掠?M KOH溶液(3.58L)處理。將該反應(yīng)混合物加熱至約80℃，最后形成了澄清的無(wú)色溶液。加熱1小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物冷卻至約40℃。減壓除去甲醇，用叔丁基甲基醚(2×3L)萃取剩余的水相。用水(0.5L)反萃取有機(jī)相。向合并的水相中加入濃鹽酸(2.5L)直至達(dá)到pH1，將溫度保持在30℃以下，按照需要加入冰。用乙酸乙酯(2×3L)萃取酸性水相，用鹽水(2L)回洗有機(jī)相。將合并的有機(jī)相用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾并將溶劑濃縮至體積為約1L。將該黃色乙酸乙酯溶液用己烷(2L)稀釋，在0℃貯存1小時(shí)。將所得白色懸浮液過(guò)濾，用己烷/乙酸乙酯(8∶2)充分洗滌，在40℃干燥至恒重，獲得了本標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體結(jié)晶。從母液中又另外收集了一定量產(chǎn)物。
f)制備4-(芐氧基乙酰基)氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯在冰浴溫度下，向4-氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯(25g，0.1054mol)在無(wú)水二氯甲烷(250mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中一次性加入二異丙基乙胺(18mL，0.421mol)，然后滴加芐氧基乙酰氯(Aldrich，18mL，0.1159mol)。讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭⒈３诌^(guò)夜。TLC/LCMS分析表明反應(yīng)已完全。將該反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，將殘余物在乙酸乙酯與2M HCl之間分配。分離出有機(jī)相，用無(wú)水Na2SO4干燥，并蒸發(fā)，獲得了黃色固體。從環(huán)己烷/乙酸乙酯中重結(jié)晶，獲得了本標(biāo)題化合物，為黃色固體結(jié)晶。
g)制備N-甲基-2-硝基-苯磺酰胺經(jīng)由加液漏斗向2-硝基苯磺酰氯(18.24g，0.082mol)在甲醇(35mL)內(nèi)的攪拌著的懸浮液中滴加甲胺(2.0M在THF中的溶液，90mL，0.18mol)。讓該反應(yīng)混合物達(dá)到室溫，然后放置過(guò)夜。TLC(洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯1/1)表明仍然剩余一些原料。再加入甲胺(2.0M在THF中的溶液，30mL)，將該混合物攪拌1小時(shí)。TLC表明反應(yīng)已完全。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，將殘余物在水與乙酸乙酯之間分配。分離出有機(jī)相，用乙酸乙酯萃取水相。將合并的有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，然后用無(wú)水MgSO4干燥。真空蒸發(fā)，獲得了本標(biāo)題化合物，為淺黃色結(jié)晶。
h)制備2-氨基-N-甲基-苯磺酰胺將N-甲基-2-硝基-苯磺酰胺(17g，0.078mol)在無(wú)水THF(200mL)中的溶液于室真空下脫氣。加入以活性炭為載體的鈀(10％Pd，3.7g)，用氫氣(氣囊)吹掃該攪拌著的懸浮液。將該懸浮液在氫氣下攪拌過(guò)夜。TLC分析表明反應(yīng)已完全。然后將該反應(yīng)混合物經(jīng)由硅藻土過(guò)濾。將所消耗的催化劑依次用乙酸乙酯和甲醇洗滌。真空蒸發(fā)，獲得了本標(biāo)題化合物，為粘稠的淺棕色油狀物。
i)制備2-芐氧基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯在三頸圓底燒瓶?jī)?nèi)，經(jīng)由加液漏斗向4-(芐氧基乙酰基)氨基-2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯(27g，0.07mol)、2-氨基-N-甲基-苯磺酰胺(13g，0.07mol)和無(wú)水甲苯(500mL)的機(jī)械攪拌著的懸浮液中加入三氯化磷(51mL，0.56mol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?分鐘，然后加熱至回流。45分鐘后，LCMS分析表明反應(yīng)已完全。將該懸浮液冷卻至室溫，將溶液相從固體材料中傾析出來(lái)。對(duì)溶液和固體材料獨(dú)立地進(jìn)行后處理。在劇烈攪拌下將該甲苯溶液在乙酸乙酯與飽和NaHCO3水溶液之間分配，獲得了澄清的兩相溶液。分離出有機(jī)相和水相，用乙酸乙酯萃取水相(×2)。將有機(jī)相合并，用無(wú)水Na2SO4干燥，并真空蒸發(fā)，獲得了橙色油狀物。按照類似方法，將固體材料與乙酸乙酯和飽和NaHCO3水溶液劇烈攪拌，獲得了澄清的兩相溶液。分離出有機(jī)相和水相，用乙酸乙酯萃取水相(×2)。將有機(jī)相合并，用無(wú)水Na2SO4干燥，并真空蒸發(fā)，獲得了橙色油狀物。用乙醚研制該橙色油狀物，獲得了黃色固體，通過(guò)過(guò)濾將其取出，用乙醚洗滌并晾干，獲得了本標(biāo)題化合物。
k)制備2-羥基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺酰基-苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯將2-芐氧基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯(15g，0.028mol)在無(wú)水THF(270mL)中的溶液于室真空下脫氣。加入以活性炭為載體的鈀(Acros，10％Pd，930mg)，用氫氣(氣囊)吹掃該懸浮液。將該懸浮液在氫氣下攪拌過(guò)夜。TLC和LCMS分析表明仍然剩余原料。將該反應(yīng)混合物經(jīng)由硅藻土過(guò)濾，依次用甲醇、DCM和甲醇洗滌催化劑。將濾液蒸發(fā)，獲得了霜狀固體。用乙醚研制，獲得了白色固體，通過(guò)過(guò)濾將其取出，在高度真空下干燥，獲得了本標(biāo)題化合物。將含有未反應(yīng)的原料的乙醚濾液真空蒸發(fā)，對(duì)殘余物進(jìn)行第二次氫氣循環(huán)(Pd-C，920mg)在氫氣下攪拌過(guò)夜后，TLC/LCMS表明已不存在原料。按照上述方法對(duì)該反應(yīng)混合物進(jìn)行后處理，獲得了本標(biāo)題化合物，為白色固體。
l)制備2-羥基甲基-5，7-三甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸將2-羥基甲基-5，7-三甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸乙酯(1.006g，2.3mmol)溶解在48％氫溴酸中，將該溶液在120℃加熱4.5小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，將殘余物懸浮在乙酸乙酯中。將該懸浮液蒸發(fā)，獲得了本標(biāo)題化合物的粗產(chǎn)物，為淺黃色粉末，其不用進(jìn)一步純化直接使用。
m)2-羥基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸丁酯在室溫向2-羥基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；交?-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸(238mg，0.58mmol)在DMF(5mL)內(nèi)的溶液中加入碳酸銫(187mg，0.57mmol)，然后滴加1-溴丁烷(0.062mL，0.58mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。真空除去溶劑，將殘余物在水與乙酸乙酯之間分配。將水相用乙酸乙酯萃取3次，將合并的有機(jī)萃取液干燥(Na2SO4)，并真空蒸發(fā)。采用自動(dòng)梯度洗脫(0-80％乙酸乙酯在己烷中的混合物)快速色譜法進(jìn)行純化，獲得了本標(biāo)題化合物，為白色固體。1HNMR(400MHz，CDCl3)0.98(3H，t，J＝7Hz)，1.49(2H，m)，1.76(1H，m)，2.45(3H，s)，2.65(3H，d，J＝5Hz)，2.75(3H，s)，3.98(1H，t，J＝5Hz)，4.07(2H，d，J＝5Hz)，4.39(2H，m)，4.80(1H，br t，J＝5Hz)，7.36(1H，dd，J＝1.5，8Hz)，7.50(1H，s)，7.76(2H，m)，8.14(1H，dd，J＝1.5，8Hz)。
實(shí)施例1032，5，7-三甲基-3-(2-甲基氨磺?；交?-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸環(huán)丁基甲酯a)制備4-乙?；被?2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯在氬氣氛下，向4-乙?；被?2，6-二甲基-間苯二甲酸(5g，20mmol)在DCM(50mL)內(nèi)的溶液中加入DIPEA(11mL，60mmol)。將該無(wú)色溶液在冰浴上冷卻。滴加乙酸酐(2mL)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，在室溫保持過(guò)夜，將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)。向殘余物中加入乙酸乙酯和2M鹽酸。從該兩相混合物中沉淀出了白色固體。通過(guò)過(guò)濾取出該白色固體，將濾液的有機(jī)相干燥(Na2SO4)，并真空蒸發(fā)，又獲得了一部分白色固體。將合并的白色固體真空干燥，獲得了本標(biāo)題化合物。
b)制備2，5，7-三甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯將4-乙?；被?2，6-二甲基-間苯二甲酸1-乙酯(5.39g，1.95mmol)、2-氨基-N-甲基-苯磺酰胺(3.63g，1.95mmol)和三氯化磷(8.5mL，9.7mmol)在甲苯(220mL)中的多相混合物在140℃(油浴溫度)加熱3.5小時(shí)。讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并真空蒸發(fā)。加入足夠的乙酸乙酯以將殘余物溶解，將該溶液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并真空蒸發(fā)。用二氯甲烷研制該殘余物，獲得了白色固體，通過(guò)過(guò)濾將其取出。將溶液蒸發(fā)，然后用乙酸乙酯研制，獲得了第二批白色固體。重復(fù)進(jìn)行蒸發(fā)-研制操作，又獲得了兩批白色固體。將合并的白色固體用乙醚洗滌，并真空干燥，獲得了本標(biāo)題化合物。
c)制備2，5，7-三甲基-3-(2-甲基氨磺酰基苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸將2，5，7-三甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-6-甲酸乙酯(1.006g，2.3mmol)溶解在48％氫溴酸中，將該溶液在120℃加熱4.5小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，將殘余物懸浮在乙酸乙酯中。將該懸浮液蒸發(fā)，獲得了本標(biāo)題化合物的粗產(chǎn)物，為淺黃色粉末，其不用進(jìn)一步純化直接使用。
d)制備2，5，7-三甲基-3-(2-甲基氨磺酰基苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸環(huán)丁基甲酯在冰浴溫度下，向2，5，7-三甲基-3-(2-甲基氨磺酰基-苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸(196mg，0.488mmol)在DMF(4.5mL)內(nèi)的溶液中滴加六甲基乙硅氮烷化鈉(1.0M在THF中的溶液，0.488mL)。用2小時(shí)讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀缓蠹尤脘寮谆h(huán)丁烷(0.055mL，0.488mmol)。在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜后，加入碘化鉀(催化量)，將該反應(yīng)混合物在單模式微波裝置內(nèi)于90℃在密封的管中加熱1小時(shí)25分鐘。真空除去溶劑，將殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液與乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)相干燥(Na2SO4)，并真空蒸發(fā)。采用自動(dòng)梯度洗脫(10-80％乙酸乙酯在己烷中的混合物)快速色譜法進(jìn)行純化，獲得了本標(biāo)題化合物，為白色固體。1HNMR(400MHz，CDCl3)1.87(2H，m)，1.94(2H，m)，2.13(2H，m)重疊2.18(3H，s)，2.42(3H，s)，2.65(3H，d，J＝5Hz)，2.73(3H，s)重疊2.77(1H，m)，4.35(2H，d，J＝5Hz)，4.82(1H，br m)，7.35(1H，dd，J＝1，8Hz)，7.41(1H，s)，7.71(1H，m)，7.78(1H，m)，8.14(1H，dd，J＝1.5，8Hz)。
其中R1是SO2-NHCH3，R2、R3、R4和R5是H，且R7和R8是甲基的下列式I化合物可通過(guò)實(shí)施例102或103的方法，但是使用合適的原料制得(Ex＝實(shí)施例；具有下列HPLC保留時(shí)間數(shù)據(jù)[分鐘]和離子質(zhì)量) *HPLC條件Phenomenex Luna反相C18 3micron 30×4.9mm；梯度洗脫10％MeCN在水中的混合物(+0.08％甲酸)至100％MeCN，10分鐘(流速＝3.0mL/分鐘；檢測(cè)＝254nM)。
權(quán)利要求
1.游離堿或酸加成鹽形式的式I化合物 其中R1、R2、R3、R4和R5獨(dú)立地為氫；鹵素；C1-C4烷基；C2-C4鏈烯基；C3-C7環(huán)烷基；C3-C7環(huán)烷基C1-C4烷基；C1-C4烷氧基C1-C4烷基；C1-C4烷基羧基；羥基C1-C4烷氧基C1-C4烷基；羥基；羥基C1-C4烷基；苯基C1-C4烷基，該基團(tuán)可任選被羥基、C1-C4烷氧基、羧基、C1-C4烷氧基羰基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基羰基、氰基取代；-SO2R10；氰基；-SO2N(R10)R11；-S-R10或-SOR10；或者，R1和R2或者R2和R3與它們所連接的碳原子一起代表具有5-10個(gè)環(huán)原子的芳族或脂族碳環(huán)基團(tuán)，或具有5-10個(gè)環(huán)原子，并且有1、2或3個(gè)環(huán)原子是選自氮、氧和硫的雜原子的芳族或脂族雜環(huán)基；R6是-CH2-O-C(O)-N(R12)R13、-CH2-X-C(O)-R14、C1-C4烷基或羥基C1-C4烷基；R7、R8和R9獨(dú)立地為C1-C4烷基；R10和R11獨(dú)立地為氫、C1-C4烷基；C2-C4鏈烯基；C3-C7環(huán)烷基；C3-C7環(huán)烷基C1-C4烷基；C1-C4烷氧基C1-C4烷基；C1-C4烷基羧基；羥基C1-C4烷氧基C1-C4烷基；羥基；羥基C1-C4烷基；苯基C1-C4烷基，該基團(tuán)可任選被羥基、C1-C4烷氧基、羧基、C1-C4烷氧基羰基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基羰基、氰基取代；或者R10與R11一起形成具有5-10個(gè)環(huán)原子，并且有1、2或3個(gè)環(huán)原子是選自氮、氧和硫的雜原子的脂族雜環(huán)基；R12和R13獨(dú)立地為氫、C1-C4烷基、C2-C4鏈烯基、C3-C7環(huán)烷基、C3-C7環(huán)烷基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基C1-C4烷基、羥基C1-C4烷氧基C1-C4烷基、羥基C1-C4烷基、二羥基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基羰基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基羰基、氰基、-SO2R10、-SO2N(R10)R11、-S-R10、-SOR10、-C1-C4-亞烷基-SO2R10、-C1-C4-亞烷基-SOR10、-C1-C4-亞烷基-NH-SO2R10、-C1-C4-亞烷基-CON(R10)R11、-CON(R10)R11、-C1-C4-亞烷基-C(O)OR10、氟烷基，或者R6a與R6b一起形成具有5-10個(gè)環(huán)原子的取代或未取代的脂族雜環(huán)基；R14是NH、C1-C4烷基-NH-、C2-C4鏈烯基-NH-、C3-C7環(huán)烷基-NH-、C3-C7環(huán)烷基C1-C4烷基-NH-、C1-C4烷氧基C1-C4烷基-NH-、羥基C1-C4烷氧基C1-C4烷基-NH-、羥基C1-C4烷基-NH-、二羥基C1-C4烷基-NH-、C1-C4烷氧基羰基C1-C4烷基-NH-、C1-C4烷氧基羰基-NH-、-NH-C1-C4-亞烷基-CN、-NH-SO2R10、-NH-SO2N(R10)R11、-NH-C1-C4-亞烷基-S-R10、-NH-SOR10、-NH-C1-C4-亞烷基-SO2R10、-NH-C1-C4-亞烷基-SOR10、-NH-C1-C4-亞烷基-NH-SO2R10、-NH-C1-C4-亞烷基-CON(R10)R11、-NH-CON(R10)R11、-NH-C1-C4-亞烷基-C(O)OR10、-NH-氟烷基或具有5-10個(gè)環(huán)原子的取代或未取代的脂族雜環(huán)基；X是O或CH2；條件是當(dāng)R1是鹵素、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基或氫，且R2、R3、R4是氫、甲基或甲氧基，且R5是氫或甲基時(shí)，R12既不是氫、C2-C4烷基、C2-C4鏈烯基、羥基C1-C4烷基、-C1-C4-亞烷基-SO2R10，也不是-C1-C4-亞烷基-SOR10。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自游離堿或酸加成鹽形式的2-乙基氨基甲酰氧基甲基-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺?；?苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯和2-(2-羥基-乙基氨基甲酰氧基甲基)-5，7-二甲基-3-(2-甲基氨磺酰基-苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-甲酸乙酯。
3.制備式I化合物或其酸加成鹽的方法，包括以下步驟(i)為了制備其中R6是-CH2-O-C(O)-N(R12)R13，且R13是氫的式I化合物，將式II化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9如權(quán)利要求1所定義；與式III化合物反應(yīng) 其中R12如權(quán)利要求1所定義；或(ii)作為可替代(i)的步驟，為了制備其中R6是-CH2-O-C(O)-N(R12)R13，且R13是氫的式I化合物，將式IV化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9如權(quán)利要求1所定義；與式V化合物反應(yīng)H2N-R12(V)其中R12如權(quán)利要求1所定義；或(iii)為了制備其中R6＝-CH2-X-C(O)-R14，且X＝CH2的式I化合物，將式VI化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9如權(quán)利要求1所定義；與式VII化合物反應(yīng)H-R14(VII)其中R14如權(quán)利要求1所定義；或(iv)為了制備其中R6＝-CH2-X-C(O)-R14，且X＝O的式I化合物，將式VIII化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9如權(quán)利要求1所定義；與式VII化合物反應(yīng)H-R14(VII)其中R14如權(quán)利要求1所定義；或(v)為了制備其中R6是C1-C4烷基或羥基C1-C4烷基的式I化合物，將式IX化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7和R8如權(quán)利要求1所定義，且R6是C1-C4烷基或羥基C1-C4烷基；與式X化合物反應(yīng)Y-R9(X)其中R9如權(quán)利要求1所定義，且Y是離去基團(tuán)；并收集所獲得的游離堿或酸加成鹽形式的式I化合物。
4.用作藥物的游離堿或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利要求1的化合物。
5.用于治療或預(yù)防大麻素受體激活在其中起作用或涉及大麻素受體激活的疾病或病癥的游離堿或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利要求1的化合物。
6.藥物組合物，其中包含游離堿或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利要求1的化合物與藥物載體或稀釋劑。
7.游離堿或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利要求1的化合物作為用于治療或預(yù)防大麻素受體激活在其中起作用或涉及大麻素受體激活的疾病或病癥的藥物的應(yīng)用。
8.游離堿或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療或預(yù)防大麻素受體激活在其中起作用或涉及大麻素受體激活的疾病或病癥的藥物中的應(yīng)用。
9.游離堿或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療或預(yù)防選自下列的眼睛病癥的藥物中的應(yīng)用青光眼、正常眼壓青光眼和視網(wǎng)膜與視神經(jīng)的神經(jīng)變性病癥。
10.在需要這種治療的個(gè)體中治療或預(yù)防選自青光眼、正常眼壓青光眼和視網(wǎng)膜與視神經(jīng)的神經(jīng)變性病癥的眼睛病癥的方法，包括給所述個(gè)體施用治療有效量的游離堿或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利要求1的化合物。
11.用于同時(shí)、單獨(dú)或依次使用的聯(lián)合用藥物組合，其中包含(a)治療有效量的游離堿或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利要求1的化合物，和(b)第二種藥物，所述第二種藥物可用于例如治療和預(yù)防慢性疼痛、骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎和痛風(fēng)，并且還任選包含至少一種可藥用載體。
12.在需要這種治療的個(gè)體中治療或預(yù)防大麻素受體激活在其中起作用或涉及大麻素受體激活的疾病或病癥的方法，包括給所述個(gè)體施用治療有效量的游離堿或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利要求1的化合物。
13.治療大麻素受體激活在其中起作用或涉及大麻素受體激活的疾病或病癥的方法，包括給動(dòng)物施用聯(lián)合用藥物組合，其中所述聯(lián)合用藥物組合包含(a)治療有效量的游離堿或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利要求1的化合物，和(b)第二種藥物，所述第二種藥物可用于治療和預(yù)防慢性疼痛、骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎和痛風(fēng)。
全文摘要
新的式I的喹唑啉酮衍生物，其中R
文檔編號(hào)C07D239/91GK1628104SQ03803448
公開(kāi)日2005年6月15日 申請(qǐng)日期2003年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月6日
發(fā)明者C·T·布雷恩, E·K·齊亞杜盧艾斯, T·W·哈特 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司