專利名稱：作為轉(zhuǎn)化生長因子(tgf)抑制劑的三唑類衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的三唑類化合物，包括其衍生物，制備該化合物的中間體，含有它們的藥物組合物及其醫(yī)藥應(yīng)用。本發(fā)明的化合物是轉(zhuǎn)化生長因子(″TGF″)-β信號傳導(dǎo)途徑的有效抑制劑。它們有效治療TGF-β有關(guān)的疾病，包括，例如癌癥和纖維變性疾病。
TGF-β激活抗增殖和促腫瘤信號級聯(lián)。已經(jīng)識別出三種哺乳動物TGF-β同工型(TGF-βI，-βII和-βIII)。TGF-β的產(chǎn)生促進腫瘤進程而對其的阻斷增強抗腫瘤活性。TGF-β的阻斷提高抗腫瘤免疫反應(yīng)且抑制轉(zhuǎn)移。由此本領(lǐng)域中需要抑制TGF-β信號途徑的化合物。如下所述，本發(fā)明滿足了這種需求。
發(fā)明概述本發(fā)明提供含有在此說明的帶有至少一個取代或未取代2-吡啶基部分和至少一個R1部分的核心三唑環(huán)的化合物，及其所有藥物可接受鹽，前藥，互變異構(gòu)體，水合物，及溶劑化物。在本發(fā)明的化合物中，取代或未取代的2-吡啶基部分和R1部分在核心三唑環(huán)四周處于1，2-，1，3-或1，4-關(guān)系，優(yōu)選為1，2-或鄰位關(guān)系。
本發(fā)明提供式(Ia)，(Ib)或(Ic)的化合物
及其所有藥物可接受鹽，前藥，互變異構(gòu)體，水合物，和溶劑化物，其中R1，R3，R6，和s分別如下所述，條件是R1不是萘基或苯基；和條件是當(dāng)R1為與5-7員的含有至多3個N原子的芳族或非芳族環(huán)稠合的苯基時，該N不是-NH或-NC1-6烷基或者如果該N是-NH或-NC1-6烷基，則該R1必須進一步被取代；和條件是當(dāng)R1為與5-7員的含有1-3個獨立選自O(shè)和S的雜原子的芳族或非芳族環(huán)稠合的苯基時，則該R1必須進一步被取代。
在式(Ia)、(Ib)或(Ic)中，如上所述R1為飽和、不飽和或芳族的C3-C20一-、二-或多元環(huán)，其選擇性地含有至少一個選自N，O和S的雜原子，其中R1可以選擇性地選一步獨立地被至少一個獨立選自下列的基團取代羰基，鹵素，鹵代(C1-C6)烷基，全鹵代(C1-C6)烷基，全鹵代(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)鏈炔基，羥基，氧代，巰基，(C1-C6)烷硫基，(C1-C6)烷氧基，(C5-C10)芳基或(C5-C10)雜芳基，(C5-C10)芳氧基或(C5-C10)雜芳氧基，(C5-C10)芳(C1-C6)烷基或(C5-C10)雜芳(C1-C6)烷基，(C5-C10)芳(C1-C6)烷氧基或(C5-C10)雜芳(C1-C6)烷氧基，HO-(C＝O)-，酯，酰胺基，醚，氨基，氨基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基，二(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基，(C5-C10)雜環(huán)基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基-和二(C1-C6)烷基氨基，氰基，硝基，氨基甲?；?，(C1-C6)烷基羰基，(C1-C6)烷氧基羰基，(C1-C6)烷基氨基羰基，二(C1-C6)烷基氨基羰基，(C5-C10)芳基羰基，(C5-C10)芳氧基羰基，(C1-C6)烷基磺?；?，和(C5-C10)芳基磺酰基；優(yōu)選，R1可以選擇性地進一步獨立地被0-2個獨立選自但不限于下列基團取代鹵代(C1-C6)烷基，全鹵代(C1-C6)烷基，全鹵代(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，(C5-C10)芳(C1-C6)烷氧基或(C5-C10)雜芳(C1-C6)烷氧基，氨基，氨基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基，二(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基，和(C5-C10)雜環(huán)基(C1-C6)烷基；各R3獨立地選自氫，鹵素，鹵代(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)鏈炔基，全鹵代(C1-C6)烷基，苯基，(C5-C10)雜芳基，(C5-C10)雜環(huán)，(C3-C10)環(huán)烷基，羥基，(C1-C6)烷氧基，全鹵代(C1-C6)烷氧基，苯氧基，(C5-C10)雜芳基-O-，(C5-C10)雜環(huán)-O-，(C3-C10)環(huán)烷基-O-，(C1-C6)烷基-S-，(C1-C6)烷基-SO2-，(C1-C6)烷基-NH-SO2-，O2N-，NC-，氨基，Ph(CH2)1-6HN-，(C1-C6)烷基HN-，(C1-C6)烷基氨基，[(C1-C6)烷基]2-氨基，(C1-C6)烷基-SO2-NH-，氨基(C＝O)-，氨基O2S-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-NH-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-[(((C1-C6)烷基)-N]-，苯基-(C＝O)-NH-，苯基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-，苯基-(C＝O)-，(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-，HO-(C＝O)-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-，H2N(C＝O)-，(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-，[(C1-C6)烷基]2-N-(C＝O)-，苯基-NH-(C＝O)-，苯基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)-，(C5-C10)雜芳基-NH-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-NH-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-NH-(C＝O)-和(C1-C6)烷基-(C＝O)-O-；優(yōu)選，R3為氫或(C1-C6)烷基；更優(yōu)選，R3為氫或甲基；其中R3的烷基，鏈烯基，鏈炔基，苯基，雜芳基，雜環(huán)，環(huán)烷基，烷氧基，苯氧基，氨基選擇性地被至少一個獨立選自下列的取代基取代(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，鹵代(C1-C6)烷基，鹵素，H2N-，Ph(CH2)1-6HN-，和(C1-C6)烷基HN-；s為1-5的整數(shù)，優(yōu)選1-2，更優(yōu)選1；和R6選自氫，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)鏈炔基，苯基，(C5-C10)雜芳基，(C5-C10)雜環(huán)，(C3-C10)環(huán)烷基，(C1-C6)烷基-(SO2)-，苯基-(SO2)-，H2N-(SO2)-，(C1-C6)烷基-NH-(SO2)-，((C1-C6)烷基)2N-(SO2)-，苯基-NH-(SO2)-，(苯基)2N-(SO2)-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-，苯基-(C＝O)-，(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-O-(C＝O)-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-O-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-O-(C＝O)-，H2N-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-NH-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-NH-(C＝O)-，((C1-C6)烷基)2N-(C＝O)-，(苯基)2N-(C＝O)-，苯基-[((C1-C6)烷基-N)-(C＝O)，(C5-C10)雜芳基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)，(C5-C10)雜環(huán)-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)，和(C3-C10)環(huán)烷基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)；優(yōu)選，R6是氫，(C1-C6)烷基，或(C3-C10)環(huán)烷基；其中R6的烷基，鏈烯基，鏈炔基，苯基，芐基，雜芳基，雜環(huán)，環(huán)烷基，烷氧基，苯氧基，氨基選擇性地被至少一個獨立選自下列的基團取代鹵素，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)鏈炔基，全鹵代(C1-C6)烷基，(C3-C10)環(huán)烷基，苯基，芐基，(C5-C10)雜環(huán)，(C5-C10)雜芳基，(C1-C6)烷基-SO2-，甲?；?，NC-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-，苯基-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-(C＝O)-，(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-，HO-(C-O)-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-O-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-O-(C＝O)-，(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-NH-(C＝O)-，苯基-NH-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-NH-(C＝O)-，(C5-C10)雜芳基-NH-(C＝O)-，((C1-C6)烷基)2-N-(C＝O)-，苯基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)-，羥基，(C1-C6)烷氧基，全鹵代(C1-C6)烷氧基，(C3-C10)環(huán)烷基-O-，苯氧基，(C5-C10)雜環(huán)-O-，(C5-C10)雜芳基-O-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-O-，(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-O-，苯基-(C＝O)-O-，(C5-C10)雜環(huán)-(C＝O)-O-，(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-O-，O2N-，氨基，(C1-C6)烷基氨基，((C1-C6)烷基)2-氨基，甲酰氨基，(C1-C6)烷基-(C＝O)-NH-，(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-NH-，苯基-(C＝O)-NH-，(C5-C10)雜環(huán)-(C＝O)-NH-，(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-NH-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-，苯基-(C＝O)-[(C1-C6)烷基-N]-，(C1-C6)烷基-SO2NH-，(C3-C10)環(huán)烷基-SO2NH-，苯基-SO2NH-，(C5-C10)雜環(huán)-SO2NH-和(C5-C10)雜芳基-SO2NH-；優(yōu)選，R6被0-2個獨立選自(C1-C6)烷基和(C3-C10)環(huán)烷基的基團取代；其中R6取代基的苯基或雜芳基選擇性地進一步被至少一個獨立選自鹵素，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，全氟代(C1-C6)烷基和全氟代(C1-C6)烷氧基的基團取代。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)、(Ib)和(Ic)中的R1為
或 其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)、(Ib)和(Ic)中的R1為 或 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)、(Ib)和(Ic)中的R1為 或 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)、(Ib)和(Ic)中的R1為 或 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)、(Ib)和(Ic)中的R1為 或 其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)、(Ib)和(Ic)中的R1為
或 其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)、(Ib)和(Ic)中的R1為 或 其中R2a定義如上。
上述各個R1可以選擇性地進一步被至少一個上述R2a基團取代。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為
其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 其中R2a定義如上。
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為
在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，上述式(Ia)的R1為 其中R2a定義如上且其中附加條件不適用。
在本發(fā)明中，上述式(Ia)、(Ib)和(Ic)中的R1選自
和 并且其中附加條件不適用。
在本發(fā)明中，上述式(Ia)、(Ib)和(Ic)中的R1選自 和 并且其中附加條件不適用。
在本發(fā)明中，上述式(Ia)、(Ib)和(Ic)中的R1選自 和 其中R2a定義如上并且其中附加條件不適用。
本發(fā)明還提供一種含有至少一種本發(fā)明的化合物和藥物可接受載體的藥物組合物。
本發(fā)明進一步提供一種制備本發(fā)明的化合物的方法。
本發(fā)明進一步提供一種預(yù)防或治療動物或人體中TGF-相關(guān)疾病的方法，包括向患有TGF-相關(guān)疾病的動物或人體給藥治療有效量的至少一種本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明進一步提供本發(fā)明的化合物在制備用于預(yù)防或治療動物或人體中TGF-相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
定義本文中所用的冠詞″一個″或″一種″是指所述客體的單數(shù)和復(fù)數(shù)兩種形式。
本文中所用的術(shù)語″烷基，″以及其他所述基團(例如，烷氧基)的烷基部分是指直鏈或支鏈飽和烴(例如，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基)。
本文中所用的術(shù)語″環(huán)烷基″是指單或雙環(huán)碳環(huán)(例如，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基，環(huán)辛基，環(huán)壬基，環(huán)戊烯基，環(huán)己烯基，二環(huán)[2.2.1]庚烷基，二環(huán)[3.2.1]辛烷基和二環(huán)[5.2.0]壬烷基)。
本文中所用的術(shù)語″鹵素″或″鹵代″是指包括氟、氯、溴或碘或者氟化物、氯化物、溴化物或碘化物。
本文中所用的術(shù)語″鹵素取代的烷基″或″鹵代烷基″是指定義如上的被一個或多個上述鹵素取代的烷基，包括，但不限于，氯代甲基，二氯甲基，氟代甲基，二氟甲基，三氟甲基，和2，2，2-三氯乙基。
本文中所用的術(shù)語″全鹵代烷基″是指定義如上的烷基，其中烷基的各個氫被上述″鹵素″或″鹵代″取代。
本文中所用的術(shù)語″鏈烯基″是指直鏈或支鏈含有至少兩個碳原子和至少一個雙鍵的烴鏈基團。實例包括，但不限于，乙烯基，1-丙烯基，2-丙烯基(烯丙基)，異丙烯基，2-甲基-1-丙烯基，1-丁烯基，和2-丁烯基。
本文中所用的術(shù)語″鏈炔基″是指具有至少一個叁鍵的直鏈或支鏈烴鏈基團，包括，但不限于，乙炔基，丙炔基，和丁炔基。
本文中所用的術(shù)語″羰基″是指＞C＝O部分。烷氧基羰基氨基(即烷氧基(C＝O)-NH-)是指烷基氨基甲酸酯基團。羰基在此也等同定義為(C＝O)。
本文中所用的術(shù)語″苯基-[(烷基)-N]-(C＝O)-″是指下式的N，N′-二取代的酰胺基團
本文中所用的術(shù)語″芳基″是指芳族基團，例如苯基，萘基，四氫萘基，和二氫化茚基。
本文中所用的術(shù)語″雜芳基″是指含有至少一個選自O(shè)、S和N的雜原子的芳族基團。例如，雜芳基包括，但不限于，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，噻酚基，呋喃基，咪唑基，吡咯基，噁唑基(例如，1，3-噁唑基，1，2-噁唑基)，噻唑基(例如，1，2-噻唑基，1，3-噻唑基)，吡唑基，四唑基，三唑基(例如，1，2，3-三唑基，1，2，4-三唑基)，噁二唑基(例如，1，2，3-噁二唑基)，噻二唑基(例如，1，3，4-噻二唑基)，喹啉基，異喹啉基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，和吲哚基。
本文中所用的術(shù)語″雜環(huán)″是指含有至少一個選自N、O和S的雜原子的飽和或不飽和C3-C20單-，二-或多元環(huán)基團。雜環(huán)基團的實例包括，但不限于，氮雜環(huán)丁烷基，四氫呋喃基，咪唑烷基，吡咯烷基，哌啶基，哌嗪基，噁唑烷基，噻唑烷基，吡唑烷基，硫代嗎啉基，四氫噻嗪基，四氫-噻二嗪基，嗎啉基，氧雜環(huán)丁烷基，四氫二嗪基，噁嗪基，oxcithiazinyl，吲哚基，異吲哚基，quincuclidinyl，色滿基，異色滿基，苯并cazinyl等。單環(huán)飽和或不飽和環(huán)系的實例為四氫呋喃-2-基，四氫呋喃-3-基，咪唑烷-1-基，咪唑烷-2-基，咪唑烷-4-基，吡咯烷-1-基，吡咯烷-2-基，吡咯烷-3-基，哌啶-1-基，哌啶-2-基，哌啶-3-基，哌嗪-1-基，哌嗪-2-基，哌嗪-3-基，1，3-噁唑烷-3-基，異噻唑烷，1，3-噻唑烷-3-基，1，2-吡唑烷-2-基，1，3-吡唑烷-1-基，硫代嗎啉-基，1，2-四氫噻嗪-2-基，1，3-四氫噻嗪-3-基，四氫噻二嗪-基，嗎啉-基，1，2-四氫二嗪-2-基，1，3-四氫二嗪-1-基，1，4-噁嗪-2-基，和1，2，5-噁噻嗪-4-基。
本文中所用的術(shù)語″藥物可接受酸加成鹽″是指無毒酸加成鹽，即衍生自藥學(xué)可接受陰離子的鹽，例如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硝酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，磷酸鹽，酸式磷酸鹽，乙酸鹽，乳酸鹽，檸檬酸鹽，酒石酸鹽，酒石酸氫鹽，琥珀酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，葡萄糖酸鹽，糖質(zhì)酸鹽，苯甲酸鹽，甲磺酸鹽，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽和撲酸鹽[即1，1′-亞甲基-二-(2-羥基-3-萘甲酸鹽)]。
本文中所用的術(shù)語″藥物可接受堿加成鹽″是指無毒堿加成鹽，即衍生自藥物可接受陽離子的鹽，例如堿金屬陽離子(例如鉀和鈉)和堿土金屬陽離子(例如，鈣和鎂)，銨或水溶性胺加成鹽，例如N-甲基葡糖胺-(葡甲胺)，和低級烷醇銨和其他藥物可接受有機胺的堿鹽。
本文中所用的術(shù)語″適當(dāng)?shù)娜〈?、″取代基″或″取代的″是指化學(xué)上和藥學(xué)上可接受的官能團，即，對本發(fā)明化合物的抑制和/或治療活性沒有不利影響的部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以按慣例選擇適當(dāng)?shù)娜〈?。適當(dāng)取代基的實例包括，但不限于，羰基，鹵素，鹵代烷基，全氟烷基，全氟烷氧基，烷基，鏈烯基，鏈炔基，羥基，氧代，巰基，烷硫基，烷氧基，芳基或雜芳基，芳氧基或雜芳氧基，芳烷基或雜芳烷基，芳烷氧基或雜芳烷氧基，HO-(C＝O)-，酯，酰胺基，醚，氨基，烷基-和二烷基氨基，氰基，硝基，氨基甲?；?，烷基羰基，烷氧基羰基，烷基氨基羰基，二烷基氨基羰基，芳基羰基，芳氧基羰基，烷基磺?；蓟酋；取１绢I(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解，許多取代基可以被另外的取代基取代。
本文中所用的術(shù)語″TGF-相關(guān)疾病″是指由TGF-β的生成介導(dǎo)的疾病。
本文中所用的術(shù)語″Ph″是指苯基。
本文中所用的術(shù)語″選擇性地含有至少一個雜原子的飽和、不飽和或芳族C3-C20一-、二-或多元環(huán)″是指，但不限于，
和
其中R2a獨立地選自(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)鏈炔基，(C3-C10)環(huán)烷基，(C5-C10)芳基，(C1-C6)烷基芳基，氨基，羰基，羧基，(C2-C6)酸，(C1-C6)酯，(C5-C10)雜芳基，(C5-C10)雜環(huán)基，(C1-C6)烷氧基，硝基，鹵素，羥基，(C1-C6)烷氧基(C1-C6)酯，和那些公開在美國專利申請10/094,717，10/094,760，和10/115,952中的基團，其分別在此全文引入作為參考；和其中R2a的烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，氨基，酸，酯，雜芳基，雜環(huán)基，和烷氧基選擇性地被至少一個獨立選自下列的基團取代鹵素，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)鏈炔基，全鹵代(C1-C6)烷基，苯基，(C3-C10)環(huán)烷基，(C5-C10)雜芳基，(C5-C10)雜環(huán)，甲?；?，NC-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-，苯基-(C＝O)-，HO-(C＝O)-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-，(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-，((C1-C6)烷基)2-N-(C＝O)-，苯基-NH-(C＝O)-，苯基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)-，O2N-，氨基，(C1-C6)烷基氨基，((C1-C6)烷基)2-氨基，(C1-C6)烷基-(C＝O)-NH-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-，苯基-(C＝O)-NH-，苯基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-，H2N-(C＝O)-NH-，(C1-C6)烷基-HN-(C＝O)-NH-，((C1-C6)烷基)2N-(C＝O)-NH-，(C1-C6)烷基-HN-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-，((C1-C6)烷基)2N-(C＝O)-[(C1-C6)烷基-N]-，苯基-HN-(C＝O)-NH-，(苯基)2N-(C＝O)-NH-，苯基-HN-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-，(苯基-)2N-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-NH-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-，苯基-O-(C＝O)-NH-，苯基-O-(C＝O)-[(烷基)-N]-，(C1-C6)烷基-SO2NH-，苯基-SO2NH-，(C1-C6)烷基-SO2-，苯基-SO2-，羥基，(C1-C6)烷氧基，全鹵代(C1-C6)烷氧基，苯氧基，(C1-C6)烷基-(C＝O)-O-，(C1-C6)酯-(C1-C6)烷基-O-，苯基-(C＝O)-O-，H2N-(C＝O)-O-，(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-O-，((C1-C6)烷基)2N-(C＝O)-O-，苯基-NH-(C＝O)-O-，和(苯基)2N-(C＝O)-O-。
發(fā)明詳述下列反應(yīng)圖解舉例說明本發(fā)明化合物的制備。本發(fā)明的化合物可以通過類似于美國專利申請10/094,717，10/094,760和10/115,952和WO 02/40476所述的方法制備。除非另外說明，反應(yīng)圖解和下列討論中的)，R3，R6，R2a和s定義如上。
圖解1 圖解1涉及式Ia，Ib和Ic的化合物的制備。參見圖解I，式III的化合物是由式II的化合物通過將該化合物與催化劑如PdCl2(PPh)2在添加劑如CuI和乙炔基-三甲基-甲硅烷的存在下在約0℃-約80℃，優(yōu)選約室溫下，于極性溶劑如四氫呋喃中混合來制備。式V的化合物是由化合物III通過用堿例如碳酸鉀在極性溶劑例如甲醇中處理得到。隨后與催化劑(例如鈀tetrakis)、添加劑(例如CuI)和式IV的化合物在極性溶劑例如四氫呋喃和附加極性溶劑如四甲基乙二胺中、于約20℃-約100℃，優(yōu)選約55℃的溫度下混合。式VI的化合物是由化合物V通過用三甲基甲硅基疊氮化物在約20℃-約160℃、優(yōu)選約130℃的溫度下、于極性溶劑如二甲基甲酰胺中處理來制成。式Ia，Ib和Ic的化合物是由式VI的化合物通過用堿例如碳酸鉀和烷基鹵化物R6X在極性溶劑如乙腈中處理來制備。
制備方法A 制備方法A涉及式VIII的化合物的制備，該式化合物是制備在圖解1中的式(Ia)，(Ib)和(Ic)的化合物的中間體。參見制備方法A，式VIII的化合物(等同于圖解1的式II的化合物)按照文獻(xiàn)所述方法制備(Moran，D.B.；Morton，G.O.；Albright，J.D.，J.Heterocycl.Chem.，Vol.23，pp.1071-1077(1986))或由其中L’是氯、溴或碘的式VII的化合物通過與肼反應(yīng)來制備。式VIII的化合物是由式VII的化合物與環(huán)化試劑例如酰氯、酸酐、原乙酸三烷基酯或原甲酸三烷基酯制備。式VI的化合物可商購。
本發(fā)明化合物的所有藥物可接受鹽，前藥，互變異構(gòu)體，水合物和溶劑化物也屬于本發(fā)明。
本發(fā)明的呈堿性的化合物能夠與不同的無機和有機酸形成多種不同的鹽。盡管這些鹽必須在給藥給動物和人體時是藥物可接受的，但實踐中常常希望首先從反應(yīng)混合物分離出呈藥學(xué)不可接受鹽的本發(fā)明化合物，并且隨后通過用堿性試劑處理使后者簡單轉(zhuǎn)化回到游離堿化合物，再將游離堿轉(zhuǎn)化為藥物上可接受的酸加成鹽。本發(fā)明的堿性化合物的酸加成鹽很容易通過用基本等量的選定無機或有機酸在含水溶劑介質(zhì)或適當(dāng)有機溶劑例如甲醇或乙醇中處理該堿性化合物來制備。小心蒸發(fā)溶劑之后，得到所需固體鹽。
可用于制備本發(fā)明堿性化合物的藥物可接受酸加成鹽的酸是那些生成無毒酸加成鹽、即含有藥物可接受陰離子的鹽的酸，例如，氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸鹽或硫酸氫鹽，磷酸鹽或酸式磷酸鹽，乙酸鹽，乳酸鹽，檸檬酸鹽，酒石酸鹽或酒石酸氫鹽，琥珀酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，葡萄糖酸鹽，糖質(zhì)酸鹽，苯甲酸鹽，甲磺酸鹽和撲酸[即1，1′-亞甲基-二-(2-羥基-3-萘甲酸)]鹽。
本發(fā)明的呈酸性的化合物，例如含有COOH或四唑部分的化合物，能夠與不同的藥物可接受陽離子形成堿鹽。盡管這些鹽必須在給藥于動物和人體時是藥物可接受的，但實踐中常常適宜首先從反應(yīng)混合物中分離出呈藥學(xué)不可接受鹽的本發(fā)明化合物，并且隨后通過用酸性試劑處理使后者簡單轉(zhuǎn)化回到游離酸化合物，此后將該游離酸轉(zhuǎn)化為藥物可接受堿加成鹽。此類藥物可接受堿加成鹽的實例包括堿金屬或堿土金屬鹽，特別是鈉和鉀鹽。這些鹽可以通過常規(guī)技術(shù)制備?？梢杂米髦苽浔景l(fā)明的藥物可接受堿加成鹽的試劑的化學(xué)堿是那些與本發(fā)明所述的酸性化合物形成無毒堿鹽的堿。這些無毒堿鹽包括衍生自藥物可接受陽離子例如鈉、鉀、鈣和鎂等的鹽。這些鹽可以通過用含所需藥物可接受陽離子的水溶液處理相應(yīng)酸性化合物，并且隨后蒸發(fā)所得溶液至干燥來制備，優(yōu)選在減壓下進行。另外，還可以通過混合該酸性化合物的烷醇溶液和所需金屬醇鹽，隨后采取與上述相同的方式蒸發(fā)所得溶液至干燥來制備。在上述兩種情況中，優(yōu)選使用化學(xué)計量量的試劑，從而使反應(yīng)完全且產(chǎn)物收率最高。
同位素標(biāo)記的化合物也屬于本發(fā)明。本文中，″同位素標(biāo)記的化合物″是指本發(fā)明的化合物，包括其上述藥物可接受鹽、前藥，其中一個或多個原子被原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同于天然原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子替代。可以摻雜在本發(fā)明化合物中的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如2H，3H，13C，14C，15N，18O，17O，31P，32p，35S，18F和36Cl。
通過同位素標(biāo)記本發(fā)明的化合物，該化合物可以用于藥物和/或底物組織的分布測定中。氚(3H)和碳-14(14C)標(biāo)記的化合物由于其易于制備和檢測而特別優(yōu)選。此外，被更重的同位素取代，例如氘(2H)代，可以提供某些治療優(yōu)點，這得自于其較高的代謝穩(wěn)定性，例如延長體內(nèi)半壽期或減少所需劑量，因此這在某些情形中是優(yōu)選的。本發(fā)明的同位素標(biāo)記化合物，包括其藥物可接受鹽、前藥，可以通過本領(lǐng)域的已知方法制備。
本發(fā)明的化合物的立體異構(gòu)體(例如順式和反式異構(gòu)體)和所有光學(xué)異構(gòu)體(例如R和S對映異構(gòu)體)以及此類異構(gòu)體的外消旋體、非立體異構(gòu)體和其他混合物也考慮在本發(fā)明中。
本發(fā)明的化合物，鹽，前藥，水合物，和溶劑化物可以存在數(shù)種互變異構(gòu)形式，包括烯醇和亞胺形式，酮和烯胺形式以及幾何異構(gòu)體及其混合物。所有此類互變異構(gòu)形式均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。互變異構(gòu)體是以互變異構(gòu)體的混合物存在于溶液中。在固體中，通常一種互變異構(gòu)體占優(yōu)勢。雖然可能描述了一種互變異構(gòu)體，但本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的全部互變異構(gòu)體。
本發(fā)明還包括本發(fā)明的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體。阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體是指可以分離為旋轉(zhuǎn)受限制異構(gòu)體的本發(fā)明化合物。
如上所述，本發(fā)明的化合物可以用于預(yù)防或治療動物或人體中TGF-相關(guān)疾病狀態(tài)的藥物的制備中。
本發(fā)明的化合物是轉(zhuǎn)化生長因子(″TGF″)-β信號途徑的有效抑制劑并由此可應(yīng)用到治療中。所以，本發(fā)明提供一種預(yù)防或治療動物或人體中TGF-相關(guān)疾病的方法，該方法包括給藥治療有效量的至少一種本發(fā)明化合物于患有TGF-相關(guān)疾病的動物或人體的步驟。
本文中，術(shù)語″治療有效量″是指抑制TGF-β信號途徑所需的本發(fā)明化合物的量。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，不同患者的″治療有效量″有差異且應(yīng)在個案中根據(jù)基本情況進行判斷?？紤]的因素包括，但不限于，被治療的患者，體重，健康，給藥的化合物等。
許多疾病可以通過抑制TGF-β信號途徑來治療。此類疾病包括，但不限于，所有類型的癌癥(例如乳腺，肺，結(jié)腸，前列腺，卵巢，胰腺，黑素瘤，所有血液惡性腫瘤)以及所有類型的纖維變性疾病(例如，腎小球性腎炎，糖尿病性腎病，肝臟纖維變性，肺纖維變性，動脈增生和再狹窄，硬皮病，和皮膚瘢痕)。
本發(fā)明還提供含有至少一種本發(fā)明化合物和至少一種藥物可接受載體的藥物組合物。藥物可接受載體可以是任何本領(lǐng)域已知的載體，包括例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，(A.R.Gennaro edit.1985)中所述的那些。本發(fā)明的藥物組合物可以通過本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法制備，例如，混合至少一種本發(fā)明的化合物和藥物可接受載體。
本發(fā)明的藥物組合物可以用于預(yù)防或治療動物或人體中上述TGF-相關(guān)疾病。所以，本發(fā)明的化合物可以配制為口服、經(jīng)口含、鼻內(nèi)、非腸道(例如，靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)，局部或直腸給藥或適合吸入或吹入給藥的形式的藥物組合物。
對于口服給藥，所述的藥物組合物可以為例如片劑或膠囊的形式，其采用常規(guī)方式利用藥物可接受賦形劑制成，例如粘合劑(例如，預(yù)膠凝玉米淀粉，聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；填充劑(例如，乳糖，微晶纖維素或磷酸鈣)；潤滑劑(例如，硬脂酸鎂，滑石粉或二氧化硅)；崩解劑(例如，土豆淀粉或羥乙酸淀粉鈉)；或濕潤劑(例如，十二烷基硫酸鈉)。片劑可以通過本領(lǐng)域已知方法包衣?？诜o藥的液體制劑可以為例如溶液、糖漿或混懸液的形式，或者它們可以以用水和其他適當(dāng)載體在使用之前配制的干燥產(chǎn)物存在。
適當(dāng)?shù)囊后w制劑可以通過常規(guī)方法用藥物可接受添加劑來制備，例如助懸劑(例如，山梨醇漿，甲基纖維素或氫化可食用脂肪)；乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠)；非水載體(例如，杏仁油，油性酯或乙醇)；和防腐劑(例如，羥基苯甲酸甲酯或丙酯類或山梨酸)。
對于經(jīng)口含給藥，所述的化合物可以采取通過常規(guī)方式制備的片劑或錠劑的形式。
本發(fā)明的化合物還可以按照本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法配制為緩釋給藥劑型，例如此類制劑的實例參見美國專利3,538,214，4,060,598，4,173,626，3,119,742，和3,492,397，其全文在此引入作為參考。
本發(fā)明的化合物可以配制用于通過注射的非腸道給藥，包括利用常規(guī)插導(dǎo)管技術(shù)或輸注。注射用制劑可以以單位劑型存在于例如安瓿或者多劑量容器內(nèi)，同時加入防腐劑。該組合物可以是存在于油性或含水載體中的例如混懸液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制試劑，例如助懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘?，活性成分可以是粉末形式，適于在使用之前用適當(dāng)載體，例如，滅菌的無熱原水重新配制。
本發(fā)明的化合物還可以配制為直腸組合物，例如栓劑或保留灌腸劑，例如，含有常規(guī)栓劑基質(zhì)，如可可脂或其他甘油酯。
對于鼻內(nèi)給藥或吸入給藥，本發(fā)明的化合物一般可以溶液或混懸液的形式從患者按壓或泵壓的泵噴霧容器中給藥，或者以氣霧劑噴霧形式自加壓容器或霧化器給藥，同時使用適當(dāng)?shù)膾伾鋭?，例如，二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷，二氧化碳和其他適當(dāng)氣體。在加壓氣霧劑的情況中，劑量單位可以通過釋放計量量的閥門來測定。加壓容器或霧化器可以含有本發(fā)明化合物的溶液或混懸液。吸入器或吹入器中使用的膠囊和藥筒(由例如明膠制成)可以配制含有本發(fā)明化合物和適當(dāng)粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉的粉末混合物。
本發(fā)明對一般成年人體的口服、非腸道或經(jīng)口含給藥用于治療TGF-相關(guān)疾病的推薦劑量為每單位劑量約0.1mg-約2000mg，優(yōu)選約0.1mg-約200mg的活性成分，該劑量可以每天給藥例如1-4次。
在一般成年人的上述疾病的治療中，氣霧劑優(yōu)選制成使各計量劑量或″噴″的氣霧劑含有約20μg-約10,000μg，優(yōu)選約20μg-約1000μg的本發(fā)明化合物。氣霧劑的總?cè)談┝吭诩s100μg-約100mg的范圍內(nèi)，優(yōu)選約100μg-約10mg。每天可以給藥數(shù)次，例如2，3，4或8次，每次給藥例如1，2或3個劑量。
在一般成年人體的上述疾病的治療中，氣霧聯(lián)合制劑優(yōu)選制成使各計量劑量或″噴″的氣霧劑含有約0.01mg-約1000mg，優(yōu)選約0.01mg-約100mg的本發(fā)明化合物，更優(yōu)選約1mg-約10mg的所述化合物。每天可以給藥數(shù)次，例如2，3，4或8次，每次給藥例如1，2或3個劑量。
在一般成年人體的上述疾病的治療中，氣霧制劑優(yōu)選制成使各計量劑量或″噴″的氣霧劑含有約0.01mg-約20,000mg，優(yōu)選約0.01mg-約2000mg的本發(fā)明化合物，更優(yōu)選約1mg-約200mg的所述化合物。每天可以給藥數(shù)次，例如2，3，4或8次，每次給藥例如1，2或3個劑量。
對于局部給藥，本發(fā)明的化合物可以配制為軟膏或霜劑。
本發(fā)明還包括含有本發(fā)明化合物的前藥的藥物組合物，和包括給藥至少一種本發(fā)明化合物的前藥的治療或預(yù)防方法。本文中，術(shù)語″前藥″是指在生物體中需要自發(fā)或在酶作用下生物轉(zhuǎn)化釋放出活性藥物的母體藥物分子的藥學(xué)無活性衍生物。前藥是具有在代謝條件下可裂解的基團的本發(fā)明化合物的變體或衍生物。當(dāng)在生理條件下經(jīng)過溶劑分解或者經(jīng)過酶促降解時，前藥變成具有體內(nèi)藥學(xué)活性的本發(fā)明化合物。本發(fā)明的前藥化合物可以是單一的，雙倍的，三倍的等，這取決于在生物體內(nèi)釋放活性藥物所需的生物轉(zhuǎn)化步驟的數(shù)量，并且表明以前體形式存在的官能團的數(shù)目。前藥形式常常具有溶解度、組織相容性和延遲在哺乳動物生物體中釋放的優(yōu)點(參見Bundgard，Design of Prodrugs，pp.7-9，21-24，Elsevier，Amsterdam1985 and Silverman，TheOrganic Chemistry of Drug Design and Drug Action，pp.352-401，AcademicPress，San Diego，Calif，1992)。本領(lǐng)域公知的前藥包括本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員熟知的酸衍生物，例如通過母體酸與適當(dāng)醇的反應(yīng)制成的酯，或者通過母體酸化合物與胺的反應(yīng)制成的酰胺，或反應(yīng)形成酰化堿衍生物的堿性基團。此外，本發(fā)明的前藥衍生物可以兼具其他特征以便提高生物利用度。例如，本發(fā)明的具有游離氨基、酰胺基、羥基或羧基的化合物可以轉(zhuǎn)化為前藥。前藥包括其中氨基殘基或含兩個或多個(例如，2，3或4)氨基酸殘基的多肽鏈與本發(fā)明化合物的游離氨基、羥基或羧酸基團通過肽鍵共價連接而成的化合物。氨基酸殘基包括20個天然氨基酸，一般用三個字母符號表示，并且包括4-羥基脯氨酸，羥基賴氨酸，demosine，isodemosine，3-甲基組氨酸，正纈氨酸，β-丙氨酸，γ-氨基丁酸，瓜氨酸高半胱氨酸，高絲氨酸，鳥氨酸和甲硫氨酸砜。前藥也包括其中碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺和烷基酯與本發(fā)明化合物的上述取代基經(jīng)羰基碳前藥側(cè)鏈共價連接而成的化合物。
按照本發(fā)明，在TGF相關(guān)疾病的治療中所述的本發(fā)明化合物，無論單用或者作為藥物組合物的一部分，都可以與本發(fā)明的另一個或多個化合物和/或與另一種或多種治療劑聯(lián)合。適當(dāng)治療劑的實例包括，但不限于，標(biāo)準(zhǔn)非甾類抗炎劑(此后稱NSAID′s)(例如，吡羅昔康，二氯芬酸)，丙酸類(例如，萘普生，氟比洛芬，非諾洛芬，酮洛芬和布洛芬)，滅酸類(fenamates)(例如，甲滅酸，消炎痛，舒林酸，阿扎丙宗)，吡唑酮類(例如，保泰松)，水楊酸鹽類(例如，阿司匹林)，COX-2抑制劑(例如塞來昔布，valdecoxib，洛芬昔布和etoricoxib)，鎮(zhèn)痛劑和關(guān)節(jié)內(nèi)(intraarticular)治療劑(例如，皮質(zhì)類固醇類)和透明質(zhì)酸類(例如，hyalgan和synvisc)，抗癌藥(例如，尹度他汀(endostatin)和安吉他汀(angiostatin))，細(xì)胞毒素藥物(例如，ladriamycin，柔紅霉素，順鉑，依托泊甙，紫杉醇，多西紫杉)，生物堿類(例如，長春新堿)，和抗代謝藥物(例如，甲氨蝶呤)，心血管藥物(例如，鈣通道阻滯劑)，降脂藥(例如，他汀類)，貝特類，β-阻滯劑，Ace抑制劑，血管緊張素-2受體拮抗劑和血小板凝集抑制劑，CNS藥物(例如，作為抗抑郁藥物(例如舍曲林))，抗帕金森藥物(例如，芐甲炔胺，L-多巴，羅匹尼羅，帕爾米司)，MAOB抑制劑(例如，司立吉林(selegine)和拉司吉林(rasagiline))，comP抑制劑(例如托卡朋)，A-2抑制劑，多巴胺攝取抑制劑，NMDA拮抗劑，煙堿激動劑，多巴胺激動劑和神經(jīng)原氧化氮合酶的抑制劑)，抗阿爾茨海默氏病藥物(例如，杜尼匹次，他克林，COX-2抑制劑，丙戊茶堿或metryfonate)，骨質(zhì)疏松癥藥物(例如，roloxifene，著洛西芬，lasofoxifene或fosomax)，和免疫抑制劑(例如，F(xiàn)K-506和雷怕霉素)。
生物活性本發(fā)明的化合物對于上述多種TGF-相關(guān)疾病的作用可以按照一種或多種下列試驗進行測定。按照本發(fā)明，本發(fā)明的化合物具有小于約10μm的體外IC50值。例如，實施例12的化合物具有約44.5nM的TβRIIC50值。
本發(fā)明的化合物對TβRI具有不同于TβRII和TβRITI的活性(即選擇性)。選擇性是在標(biāo)準(zhǔn)試驗中測定各試驗中抑制作用的IC50值。
TGF-β型II受體(TβRII)激酶試驗方案髓磷脂堿性蛋白(MBP)通過TβRII激酶的磷酸化作用按照下列方法測定80微升在激酶反應(yīng)緩沖液(KRB)中稀釋至終濃度微3微摩爾MBP的MBP(Upstate Biotechnology#；13-104)加入到Millipore 96孔多篩-DP 0.65微米過濾平板(#MADPNOB50)的各孔內(nèi)，上述KRB含有50mM MOPS，5mMMgCl2，pH 7.2。將在KRB中稀釋的20微升的抑制劑加入到適當(dāng)孔內(nèi)得到所需終濃度(10-0.03微摩爾)。加入10微升在KRB中稀釋的ATP(Sigma#；A-5394)和33P-ATP(Perkin Elmer#NEG/602H)的混合物達(dá)到每孔0.25微摩爾ATP和0.02微居里33P-ATP的終濃度。將10微升在KRB中稀釋的GUST-TβRII融合蛋白(谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶在TβRII-氨基酸193-567的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的N末端在438位由A轉(zhuǎn)變?yōu)閂)加入到各孔內(nèi)達(dá)到終濃度位27nmolGST-TβRII?；旌掀桨迩以谑覝叵聹赜?0分鐘。反應(yīng)物溫育后，每孔內(nèi)加入100微升的冷20％三氯乙酸(Aldrich&num；25，139-9)且混合平板并在4℃下溫育60分鐘。隨后用Millipore真空歧管除去液體。平板用200微升/孔的冷10％三氯乙酸洗滌1次，此后用100微升/孔的冷10％三氯乙酸洗滌2次。使該平板在室溫下干燥過夜。取20微升的Wallac OptiPhase SuperMix閃爍混合液加入到各孔內(nèi)。密封平板且用Wallac 1450 Microbeta液體閃爍計數(shù)器計數(shù)。抑制劑的效價是通過其減小TβRII介導(dǎo)的MBP底物的磷酸化的性能來測定。
ALK-5(TβRI)激酶試驗方案激酶試驗使用65nM GST-ALK5和84nM GST-Smad3在50mM HEPES，5mM MgCl2，1mMCaCl2，1mM二硫蘇糖醇和3M ATP中進行。反應(yīng)物用0.5Ci的[33P]ATP在30℃下保溫3小時。磷酸化的蛋白捕獲在P′-81紙上(Whatman，Maidstone，England)，用0.5％磷酸洗滌，并且通過液體閃爍法計數(shù)?；蛘?，Smad3或Smad1蛋白也可以覆蓋在FlashPlate SterileBasicMicroplates(PerkinElmer Life Sciences，Boston，MA)上。激酶試驗隨后在Flash平板上以相同的試驗條件采用ALK5的激酶結(jié)構(gòu)域和Smad3作為底物或采用ALK6的激酶結(jié)構(gòu)域(B′MP受體)和Smad1作為底物進行。平板用磷酸鹽緩沖液洗滌3次且通過TopCount(Packard Bio-science，Meriden，CT).(Laping，N.J.等Molecular Pharnzacology 6258-64(2002))計數(shù)。
下列實施例舉例說明本發(fā)明化合物的制備。熔點未經(jīng)校準(zhǔn)。NMR數(shù)據(jù)以百萬分之幾(ppm)(d)報告并且參照樣本溶劑的氘固定信號(氘代氯仿，除非另外說明)。質(zhì)譜數(shù)據(jù)采用Micromass ZMD APCI質(zhì)譜儀得到，該儀器帶有Gilson梯度高效液相色譜。下列溶劑和梯度用于分析。溶劑A；98％水/2％乙腈/0.01％甲酸，和溶劑B含有0.005％甲酸的乙腈。通常，梯度是在約4分鐘的時間內(nèi)由95％溶劑A開始并以100％溶劑B結(jié)束。主要洗脫組分的質(zhì)譜隨后以陽或陰離子模式得到，掃描的分子量范圍為165 AMU-1100 AMU。旋光率是在室溫下用鈉D線(589nm)測定。市售試劑無需進一步純化就可使用。THF是指四氫呋喃。DMF是指N，N-二甲基甲酰胺。色譜是指用32-63mm硅膠并在氮氣壓(快速色譜)條件下進行的柱色譜。室溫或常溫是指20-25℃。所有非水反應(yīng)是在氮氣氛下進行從而達(dá)到方便和收率最高。減壓下濃縮是指采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)理解，在某些情況中需要在制備中需要保護基。當(dāng)制得目標(biāo)分子后，通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的那些方法可以脫除保護基，例如如Greene和Wuts在″Protective Groups in Organic Synthesis″(2nidEd，John Wiley&Sons 1991)中所述的。
反相的分析高效液相色譜和質(zhì)譜檢測(LSMS)使用Polaris 2×20mm C18柱進行。梯度洗脫采用在0.01％水性甲酸中的乙腈在3.75分鐘內(nèi)自5％至100％的濃度增加。質(zhì)譜儀Micromass ZMD用于分子離子鑒定。
實施例13-異丙基-6-[5-(3-甲基-吡啶-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-[1 2.4]三唑并[4，3-a]吡啶步驟A3-異丙基-6-三甲基甲硅烷基乙炔基-[1，2，4]三唑并(4，3-a)吡啶向125mL圓底燒瓶內(nèi)加入3-異丙基-6-溴-[1，2，4]三唑并(4，3-a)吡啶(3.51g，14.6mmol，1當(dāng)量)和29mL的干燥THF。向該溶液中吹入氬氣5分鐘。加入28mg(0.15mmol)碘化銅，205mg(0.3mmol)的二(三苯基膦)氯化鈀(II)，和4.13mL(29.2mmol，d＝0.695)的三甲基甲硅烷基乙炔。最后，滴加4.1mL(29.2mmol，d＝0.722)的二異丙胺。室溫和氬氣下攪拌該反應(yīng)混合物24小時。此后經(jīng)塞力特硅藻土過濾該反應(yīng)混合物(儲存乙酸乙酯)且該硅藻土用150mL乙酸乙酯洗滌。濃縮濾液，并且殘余物懸浮在125mL的水中，此后用(3×70mL)乙酸乙酯萃取。合并有機萃取液，用硫酸鎂干燥，過濾，并且濃縮至干。產(chǎn)物此后通過快速柱色譜(Biotage flash 40M硅膠填充柱)用0-10％乙酸乙酯/氯仿溶劑階式梯度純化，得到2.5 g(66％)的褐色固體。HPLCtR＝5.73min(88％)，LC-MS＝258(M+1).
步驟B3-異丙基-6-乙炔基-[1，2，4]三唑并(4，3-a)吡啶的制備向250mL圓底燒瓶內(nèi)加入2.5g(9.71mmol)的3-異丙基-6-三甲基甲硅烷基乙炔基-[1，2，4]三唑并(4，3-a)吡啶，50mL甲醇和4.03g(29.1mmol)碳酸鉀。該混懸液在室溫下攪拌2小時。濃縮該反應(yīng)混合物，殘余物懸浮在100mL的水中，用(2×100mL)乙酸乙酯萃取。合并有機萃取液，用100mL的鹽水和水的1∶1溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，并且濃縮至干得到1.47g(82％)淺褐色固體。HPLCtR＝3.22min(93％)，LC-MS＝186(M+1)。
步驟C3-異丙基-6-(6-甲基吡啶-2-基乙炔基)-[1，2，4]三唑并(4，3-a)吡啶的制備向250mL圓底燒瓶加入1.47g(7.94mmol)的3-異丙基-6-乙炔基-[1，2，4]三唑并(4，3-a)吡啶，40ml無水THF，40mL的TMEDA，279mg(0.4mmol)的二(三苯基膦)氯化鈀(II)，151mg(0.8mmol)的碘化銅，和1.8mL(15.9mmol，d＝1.512)的2-溴-6-甲基吡啶。向該反應(yīng)混合物中吹入氬氣5分鐘。反應(yīng)混合物在60℃下攪拌5小時。冷卻該反應(yīng)混合物且濃縮至干。殘余物懸浮在乙酸乙酯和水(各80ml)的混合物中并經(jīng)填充乙酸乙酯的塞力特硅藻土過濾。該硅藻土用100mL的乙酸乙酯萃取。分離有機層后，濾液用50mL的乙酸乙酯萃取。合并全部有機層，用100mL水洗滌，此后用100mL鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾和濃縮。產(chǎn)物通過快速柱色譜(Biotage flash 40M硅膠填充柱)用0-80％乙酸乙酯/氯仿溶劑階式梯度純化，得到840mg(38％)的橙色漿狀物。HPLCtR＝4.27min(100％)，LC-MS＝277(M+1).
步驟D3-異丙基-6-[5-(6-甲基-吡啶-2-基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基-[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶向10mL燒瓶中加入100mg(0.36mmol)的3-異丙基-6-(6-甲基吡啶-2-基乙炔基)-[1，2，4]三唑并(4，3-a)吡啶，1.5mL的無水DMF和168μl(1.3mmol)的疊氮基三甲基甲硅烷。該反應(yīng)混合物加熱回流16小時。濃縮后，殘余物懸浮在30mL的水中且用(2×30mL)乙酸乙酯萃取。合并有機萃取液，用20mL的水和20mL鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾和濃縮。產(chǎn)物通過Shimodzu制備HPLC用5-60％乙腈/緩沖液梯度(緩沖液是含0.1％甲酸的水，和含有0.1％甲酸的乙腈)純化，得到45mg(39％)的淺褐色固體，HPLCtR＝3.71min(98％)，LC-MS＝320(M+1)。
實施例23-甲基-6-[5-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶本標(biāo)題化合物按照類似于實施例1所述的方法制備。HPLCtR＝3.22min，LC-MS＝292(M+1).
實施例36-[5-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-喹唑啉本標(biāo)題化合物按照類似于實施例1所述的方法制備。HPLCtR＝3.46min，LC-MS＝289(M+1)。
在此引用的所有出版物，包括但不限于專利、專利申請和雜志論文分別在此全文引入作為參考。
盡管本發(fā)明已經(jīng)參考所公開的實施方案舉例進行說明，本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易理解詳述的具體試驗僅僅舉例說明本發(fā)明。應(yīng)該理解，在不脫離本發(fā)明精神的前提下可以進行許多改進。所以，本發(fā)明只由下面的權(quán)利要求書限定。
權(quán)利要求
1.式(Ia)，(Ib)或(Ic)的化合物 及其藥物可接受鹽，前藥，互變異構(gòu)體，水合物，和溶劑化物，其中R1為飽和、不飽和或芳族的C3-C20一-、二-或多元環(huán)，其選擇性地含有至少一個選自N，O和S的雜原子，其中R1可以選擇性地進一步獨立地被至少一個獨立選自下列的基團取代羰基，鹵素，鹵代(C1-C6)烷基，全鹵代(C1-C6)烷基，全鹵代(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)鏈炔基，羥基，氧代，巰基，(C1-C6)烷硫基，(C1-C6)烷氧基，(C5-C10)芳基或(C5-C10)雜芳基，(C5-C10)芳氧基或(C5-C10)雜芳氧基，(C5-C10)芳(C1-C6)烷基或(C5-C10)雜芳(C1-C6)烷基，(C5-C10)芳(C1-C6)烷氧基或(C5-C10)雜芳(C1-C6)烷氧基，HO-(C＝O)-，酯，酰胺基，醚，氨基，氨基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基，二(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基，(C5-C10)雜環(huán)基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基-和二(C1-C6)烷基氨基，氰基，硝基，氨基甲?；?，(C1-C6)烷基羰基，(C1-C6)烷氧基羰基，(C1-C6)烷基氨基羰基，二(C1-C6)烷基氨基羰基，(C5-C10)芳基羰基，(C5-C10)芳氧基羰基，(C1-C6)烷基磺?；?C5-C10)芳基磺?；?；各R3獨立地選自氫，鹵素，鹵代(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)鏈炔基，全鹵代(C1-C6)烷基，苯基，(C5-C10)雜芳基，(C5-C10)雜環(huán)，(C3-C10)環(huán)烷基，羥基，(C1-C6)烷氧基，全鹵代(C1-C6)烷氧基，苯氧基，(C5-C10)雜芳基-O-，(C5-C10)雜環(huán)-O-，(C3-C10)環(huán)烷基-O-，(C1-C6)烷基-S-，(C1-C6)烷基-SO2-，(C1-C6)烷基-NH-SO2-，O2N-，NC-，氨基，Ph(CH2)1-6HN-，(C1-C6)烷基HN-，(C1-C6)烷基氨基，[(C1-C6)烷基]2-氨基，(C1-C6)烷基-SO2-NH-，氨基(C＝O)-，氨基O2S-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-NH-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-[(((C1-C6)烷基)-N]-，苯基-(C＝O)-NH-，苯基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-，苯基-(C＝O)-，(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-，HO-(C＝O)-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-，H2N(C＝O)-，(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-，[(C1-C6)烷基]2-N-(C＝O)-，苯基-NH-(C＝O)-，苯基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)-，(C5-C10)雜芳基-NH-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-NH-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-NH-(C＝O)-和(C1-C6)烷基-(C＝O)-O-；其中R3的烷基，鏈烯基，鏈炔基，苯基，雜芳基，雜環(huán)，環(huán)烷基，烷氧基，苯氧基，氨基選擇性地被至少一個獨立選自下列的取代基取代(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，鹵代(C1-C6)烷基，鹵素，H2N-，Ph(CH2)1-6HN-，和(C1-C6)烷基HN-；s為1-5的整數(shù)；和R6選自氫，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)鏈炔基，苯基，(C5-C10)雜芳基，(C5-C10)雜環(huán)，(C3-C10)環(huán)烷基，(C1-C6)烷基-(SO2)-，苯基-(SO2)-，H2N-(SO2)-，(C1-C6)烷基-NH-(SO2)-，((C1-C6)烷基)2N-(SO2)-，苯基-NH-(SO2)-，(苯基)2N-(SO2)-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-，苯基-(C＝O)-，(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-O-(C＝O)-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-O-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-O-(C＝O)-，H2N-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-NH-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-NH-(C＝O)-，((C1-C6)烷基)2N-(C＝O)-，(苯基)2N-(C＝O)-，苯基-[((C1-C6)烷基-N)-(C＝O)，(C5-C10)雜芳基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)，(C5-C10)雜環(huán)-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)，和(C3-C10)環(huán)烷基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)；其中R6的烷基，鏈烯基，鏈炔基，苯基，芐基，雜芳基，雜環(huán)，環(huán)烷基，烷氧基，苯氧基，氨基選擇性地被至少一個獨立選自下列的取代基取代鹵素，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)鏈炔基，全鹵代(C1-C6)烷基，(C3-C10)環(huán)烷基，苯基，芐基，(C5-C10)雜環(huán)，(C5-C10)雜芳基，(C1-C6)烷基-SO2-，甲酰基，NC-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-，苯基-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-(C＝O)-，(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-，HO-(C-O)-，(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-O-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-O-(C＝O)-，(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-，(C3-C10)環(huán)烷基-NH-(C＝O)-，苯基-NH-(C＝O)-，(C5-C10)雜環(huán)-NH-(C＝O)-，(C5-C10)雜芳基-NH-(C＝O)-，((C1-C6)烷基)2-N-(C＝O)-，苯基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)-，羥基，(C1-C6)烷氧基，全鹵代(C1-C6)烷氧基，(C3-C10)環(huán)烷基-O-，苯氧基，(C5-C10)雜環(huán)-O-，(C5-C10)雜芳基-O-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-O-，(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-O-，苯基-(C＝O)-O-，(C5-C10)雜環(huán)-(C＝O)-O-，(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-O-，O2N-，氨基，(C1-C6)烷基氨基，((C1-C6)烷基)2-氨基，甲酰氨基，(C1-C6)烷基-(C＝O)-NH-，(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-NH-，苯基-(C＝O)-NH-，(C5-C10)雜環(huán)-(C＝O)-NH-，(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-NH-，(C1-C6)烷基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-，苯基-(C＝O)-[(C1-C6)烷基-N]-，(C1-C6)烷基-SO2NH-，(C3-C10)環(huán)烷基-SO2NH-，苯基-SO2NH-，(C5-C10)雜環(huán)-SO2NH-和(C5-C10)雜芳基-SO2NH-；其中R6取代基的苯基或雜芳基選擇性地進一步被至少一個獨立選自鹵素，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，全氟代(C1-C6)烷基和全氟代(C1-C6)烷氧基的基團取代；條件是R1不是萘基或苯基；和條件是當(dāng)R1為與5-7員的含有至多3個N原子的芳族或非芳族環(huán)稠合的苯基時，該N不是-NH或-NC1-6烷基或者如果該N是-NH或-NC1-6烷基，則該R1必須進一步被取代；和條件是當(dāng)R1為與5-7員的含有1-3個獨立選自O(shè)和S的雜原子的芳族或非芳族環(huán)稠合的苯基時，則該R1必須進一步被取代。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是 ，或
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是 或
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是 或
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是 ，或
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是 ，或
7.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是 或
8.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是 或
9.權(quán)利要求1的化合物，其中s是1-2，R3為氫或(C1-C6)烷基，和R6為H，(C1-C6)烷基，和(C3-C10)環(huán)烷基。
10.一種含有權(quán)利要求1的化合物和藥物可接受載體的藥物組合物。
11.一種預(yù)防和治療動物或人中TGF相關(guān)性疾病的方法，包括向患有TGF相關(guān)性疾病的動物或人給藥治療有效量的權(quán)利要求1的化合物的步驟。
12.權(quán)利要求11的方法，其中該TGF相關(guān)性疾病選自癌癥、腎小球腎炎、糖尿病性腎病、肝臟纖維變性、肺纖維變性、內(nèi)膜增生和再狹窄，硬皮病和皮膚瘢痕。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的式(Ia－c)的衍生物，制備該衍生物的中間體，含有它們的藥物組合物及其醫(yī)藥應(yīng)用。本發(fā)明的化合物是轉(zhuǎn)化生長因子(“TGF”)－β信號途徑的有效抑制劑。它們適用于治療多種TGF相關(guān)性疾病，包括癌癥和纖維變性疾病。
文檔編號C07D471/04GK1681502SQ03822159
公開日2005年10月12日 申請日期2003年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月18日
發(fā)明者勞拉·C·布隆伯格, 邁克爾·J·芒奇霍夫 申請人:輝瑞產(chǎn)品公司