專利名稱：一種具有補鐵抗菌作用的卵清轉鐵蛋白的提取方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種卵清轉鐵蛋白的提取方法。
背景技術：
轉鐵蛋白是一簇具有多種生物活性的β-球蛋白，主要包含三種典型蛋白鳥類卵清及血清中的卵清轉鐵蛋白(又稱鐵傳遞蛋白)，哺乳動物乳清中的乳鐵蛋白和脊椎動物血清中的血清轉鐵蛋白。此簇蛋白的氨基酸序列、活性中心的三級結構及功能都很相似，都具有很好的增強機體免疫力的生理功能，能促進嬰幼兒對鐵及營養(yǎng)物質的吸收，有效防止貧血，抑制腸道致病菌和病毒體內自由基的生成，緩解類風濕關節(jié)炎和抗衰老。近年來，國外已開發(fā)此簇蛋白中的乳鐵蛋白，作為重要的食品功能因子廣泛應用于保健食品當中。
牛乳中乳鐵蛋白的含量甚微，且我國又缺乏乳清資源，目前的技術要實現(xiàn)轉鐵蛋白的工業(yè)化生產難度非常大，提取成本昂貴。鳥類卵清中的卵清轉鐵蛋白含量遠高于牛乳清的乳鐵蛋白，國外有人采用親和超濾的方法分離雞蛋清轉鐵蛋白，但超濾法常因濃度極化和膜污染而限制其實際應用。中國的禽蛋生產規(guī)模、和產量均居世界第一位，利用新技術從我國豐富的禽蛋清資源中提取卵清轉鐵蛋白，前景非常廣闊。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的卵清轉鐵蛋白的提取方法。
本發(fā)明提供的一種具有補鐵抗菌作用的卵清轉鐵蛋白的提取方法，該方法包括以下步驟(1)以禽蛋清為原料，加入硫酸銨使飽和度達40～50％，調pH值3.0～6.0，0～10℃靜置，離心或過濾去除以白蛋白為主的雜蛋白沉淀，上清液再加入硫酸銨，使飽和度達到60～80％，調pH值6.0～8.0，0～10℃靜置，收集蛋白沉淀；(2)將步驟(1)所得的蛋白沉淀加水溶解，經層析分離進一步去除雜蛋白，得到蛋白洗脫液；(3)將步驟(2)所得的蛋白洗脫液以陰陽離子交換樹脂進行脫鹽，濃縮、冷凍干燥得到卵清轉鐵蛋白。
本發(fā)明提取方法中，步驟(1)選用的禽蛋清是雞蛋清、鴨蛋清、鵝蛋清或鵪鶉蛋清；步驟(2)分離雜蛋白所用的層析載體為DEAE-纖維素或離子交換樹脂；步驟(3)中脫鹽所用的陽離子交換樹脂為724或732陽離子交換樹脂，陰離子交換樹脂為701陰離子交換樹脂。
本發(fā)明具有工藝簡單、產品提取率高的特點，具有良好的應用前景。
具體實施例方式
本發(fā)明卵清轉鐵蛋白的提取方法，包括以下步驟(1)取鮮雞蛋清500克，以500毫升水稀釋，用濾布過濾除去其中的不溶物；(2)加少量三氯化鐵溶液，使蛋清液中所含的卵清轉鐵蛋白被三價鐵離子飽和；(3)加無水硫酸銨，使溶液的硫酸銨飽和度為40％，調整溶液pH值為4.2，4℃靜置12小時，2000轉離心得到上清液1000毫升，上清液中繼續(xù)加入無水硫酸銨使飽和度達70％，以氨水調pH為6.0，4℃靜置12小時，2000轉離心后收集沉淀；(4)用500毫升水溶解沉淀，所得溶液對水透析除鹽，再對pH7.0、0.02mol/LTris-HCl溶液透析；(5)透析后溶液過DEAE-纖維素柱層析，以0.05mol/L NaCl洗脫，收集洗脫液，得卵清轉鐵蛋白溶液，所得卵清轉鐵蛋白液先過724陽離子交換樹脂，再過701陰離子交換樹脂，除去鹽離子，除鹽后的蛋白液經冷凍干燥，得到卵清轉鐵蛋白產品3克，產品經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定，分子量為76KD，純度高于80％。
權利要求
1.一種具有補鐵抗菌作用的卵清轉鐵蛋白的提取方法，包括以下步驟(1)以禽蛋清為原料，加入硫酸銨使飽和度達40～50％，調pH值3.0～6.0，0～10℃靜置，離心或過濾去除以白蛋白為主的雜蛋白沉淀，上清液再加入硫酸銨，使飽和度達到60～80％，調pH值6.0～8.0，0～10℃靜置，收集蛋白沉淀；(2)將步驟(1)所得的蛋白沉淀加水溶解，經層析分離進一步去除雜蛋白，得到蛋白洗脫液；(3)將步驟(2)所得的蛋白洗脫液以陰陽離子交換樹脂進行脫鹽，濃縮、冷凍干燥得到卵清轉鐵蛋白。
2.根據(jù)權利要求1所述的卵清轉鐵蛋白的提取方法，其特征在于步驟(1)中所用的禽蛋清是雞蛋清、鴨蛋清、鵝蛋清或鵪鶉蛋清。
3.根據(jù)權利要求1所述的卵清轉鐵蛋白的提取方法，其特征在于步驟(2)分離雜蛋白所用的層析載體為DEAE-纖維素或離子交換樹脂。
4.根據(jù)權利要求1所述的卵清轉鐵蛋白的提取方法，其特征在于步驟(3)中脫鹽所用的陽離子交換樹脂為724或732陽離子交換樹脂，陰離子交換樹脂為701陰離子交換樹脂。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有補鐵抗菌作用的卵清轉鐵蛋白的提取方法，包括以下步驟(1)以禽蛋清為原料，加入硫酸銨使飽和度達40～50％，調pH值3.0～6.0，0～10℃靜置，離心或過濾去除以白蛋白為主的雜蛋白沉淀，上清液再加入硫酸銨，使飽和度達到60～80％，調pH值6.0～8.0，0～10℃靜置，收集蛋白沉淀；(2)將步驟(1)所得的蛋白沉淀加水溶解，經層析分離進一步去除雜蛋白，得到蛋白洗脫液；(3)將步驟(2)所得的蛋白洗脫液以陰陽離子交換樹脂進行脫鹽，濃縮、冷凍干燥得到卵清轉鐵蛋白。本發(fā)明具有工藝簡單、產品提取率高的特點，具有良好的應用前景。
文檔編號C07K14/435GK1546524SQ200310112528
公開日2004年11月17日 申請日期2003年12月11日 優(yōu)先權日2003年12月11日
發(fā)明者王慶華, 呂振岳, 王三永, 鐘細娥 申請人:廣東省食品工業(yè)研究所