專利名稱：：基于硝基苯胺的烷化劑和它們作為前體藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥的制備和它們作為聯(lián)合硝基還原酶的GDEPT(基因-依賴性酶-前體藥物療法)與細(xì)胞消融療法的前體藥物、作為低氧-選擇性細(xì)胞毒素和作為抗癌劑的用途。
背景技術(shù)：
：腫瘤-選擇性前體藥物(相對(duì)無活性的化合物，它們能夠在體內(nèi)選擇性轉(zhuǎn)化為更具活性的化合物)的應(yīng)用在癌癥療法中是一種重要的概念。例如，前體藥物可以在可連接于單克隆抗體的酶的影響下轉(zhuǎn)化為抗腫瘤劑，該單克隆抗體可與腫瘤相關(guān)性抗原結(jié)合。這樣一種前體藥物與這樣一種酶/單克隆抗體綴合物的結(jié)合代表一種非常強(qiáng)大的臨床藥物。這種癌癥治療方法經(jīng)常被稱為“抗體定向酶/前體藥物療法”(ADEPT)，公開在WO88/07378中。另一種治療方法被稱為“病毒定向酶前體藥物療法”(VDEPT)，已被提出作為一種利用前體藥物治療患者腫瘤細(xì)胞的方法。用攜帶編碼能夠激活前體藥物的酶的基因的病毒載體靶定腫瘤細(xì)胞。該基因可以受到組織特異性啟動(dòng)子或增強(qiáng)子序列的轉(zhuǎn)錄性調(diào)節(jié)。病毒載體進(jìn)入腫瘤細(xì)胞并表達(dá)該酶，以便在腫瘤細(xì)胞內(nèi)將前體藥物轉(zhuǎn)化為活性藥物(Huber等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1991)88，8039)。作為替代選擇，已經(jīng)使用非病毒的基因遞送方法。這類方法包括磷酸鈣共沉淀、微量注入、脂質(zhì)體、直接DNA攝取和受體-介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)移。這些方法參見Morgan&amp;French，Annu.Rev.Biochem.，1993，62；191。術(shù)語(yǔ)“GDEPT”(基因定向酶前體藥物療法)用來包括病毒與非病毒的遞送系統(tǒng)。4-硝基芳族化合物被哺乳動(dòng)物和細(xì)菌的黃素蛋白酶所還原，實(shí)現(xiàn)了多達(dá)六個(gè)電子的逐步加成。主要酶代謝產(chǎn)物通常是4-電子屬(羥胺)。本發(fā)明涉及新的具有細(xì)胞毒活性的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥、制備這些新化合物的方法和這些化合物作為聯(lián)合硝基還原酶(特別是被大腸桿菌nfsB基因或梭狀芽孢桿菌屬的種編碼的硝基還原酶)的GDEPT與細(xì)胞消融療法的前體藥物、作為低氧-選擇性細(xì)胞毒素和作為抗癌劑的用途。二硝基苯甲酰胺氮丙啶(例如1)[Knox等人，CancerMet.Rev.，1993，12，195]和硝基-與二硝基苯甲酰胺氮芥(例如2-4)[Friedlos等人，J.Med.Chem.，1997，40，1270]都已被報(bào)道作為需氧大腸桿菌硝基還原酶(NTR)的底物，并作為聯(lián)合NTR的GDEPT的特異性前體藥物。不對(duì)稱的(氯-甲磺酸酯)氮芥也已被報(bào)道[例如Marais等人，CancerRes.1996，56，4735]，包括二硝基類似物5[Friedlos等人，J.MedChem.1997，40，1270]，它被描述為強(qiáng)度不足以進(jìn)行完整的生物學(xué)評(píng)價(jià)。因此，本發(fā)明的目的是提供一系列不對(duì)稱氮芥、制備這些不對(duì)稱氮芥的方法，它們適合用作聯(lián)合硝基還原酶的GDEPT(基因-依賴性酶-前體藥物療法)與細(xì)胞消融療法的前體藥物、用作低氧-選擇性細(xì)胞毒素和用作抗癌劑，或者至少為公眾提供有用的替代選擇。發(fā)明概述在第一方面，本發(fā)明提供由通式(I)代表的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽其中X代表基團(tuán)NO2、CN或SO2R1之一，其中R1代表可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基，其中當(dāng)R1代表叔胺時(shí)，進(jìn)一步包括該叔胺的N-氧化物衍生物；Y代表基團(tuán)OR2、NHCOR2、CONR2CO2R3、CONR2嗎啉、CONHR2、CONR2R3、CONHOR2、CONHSO2R2、SO2NH2、SO2NHR2或SO2NR2R3之一，其中每個(gè)R2和R3獨(dú)立地代表H、可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基；且A和B各自獨(dú)立地代表鹵素、OSO2R4、OSO2NH2、OSO2NHR4或OSO2NR4R5，其中每個(gè)R4和R5獨(dú)立地代表可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基，其中當(dāng)每個(gè)R4和R5獨(dú)立地代表叔胺時(shí)，進(jìn)一步包括該叔胺的N-氧化物衍生物；條件是(i)A≠B，(ii)除外。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥選自由式(IIa-IIc)之一代表的化合物及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽，其中X、Y、A和B如上關(guān)于式(I)化合物所定義；條件是(i)A≠B，(iii)作為式(IIa)化合物的除外。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥選自由式(IIIa-IIIc)之一代表的化合物及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽，其中X、Y如上關(guān)于式(I)化合物所定義。在本發(fā)明的第二方面，提供了制備由通式(I)代表的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽的方法其中X代表基團(tuán)NO2、CN或SO2R1之一，其中R1代表可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基，其中當(dāng)R1代表叔胺時(shí)，進(jìn)一步包括該叔胺的N-氧化物衍生物；Y代表基團(tuán)OR2、NHCOR2、CONR2CO2R3、CONR2嗎啉、CONHR2、CONR2R3、CONHOR2、CONHSO2R2、SO2NH2、SO2NHR2或SO2NR2R3之一，其中每個(gè)R2和R3獨(dú)立地代表H、可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基；且A和B各自獨(dú)立地代表鹵素、OSO2R4、OSO2NH2、OSO2NHR4或OSO2NR4R5，其中每個(gè)R4和R5獨(dú)立地代表可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基，其中當(dāng)每個(gè)R4和R5獨(dú)立地代表叔胺時(shí)，進(jìn)一步包括該叔胺的N-氧化物衍生物；條件是(i)A≠B，該方法包括以下步驟(i)使下式化合物與一定量堿金屬鹵化物在極性溶劑中反應(yīng)，得到不對(duì)稱的鹵代-甲磺酸酯化合物。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，涉及制備由通式(IIa-IIc)之一代表的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽的方法，其中X、Y、A和B如上關(guān)于式(I)化合物所定義；條件是(i)A≠B，該方法包括以下步驟(i)使下式化合物與一定量堿金屬鹵化物或甲磺酰鹵在極性溶劑中反應(yīng)，得到不對(duì)稱的鹵代-甲磺酸酯化合物。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，涉及制備由通式(IIIa-IIIc)之一代表的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽的方法，其中X、Y如上關(guān)于式(I)化合物所定義；該方法包括以下步驟(ii)使下式化合物與一定量LiBr在極性溶劑中反應(yīng)，得到式(IIIa-IIIc)之一的溴代-甲磺酸酯。在如上所定義的方法中，優(yōu)選的是所述極性溶劑選自乙腈、二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、三乙胺、丙酮及其混合物。在如上所定義的方法中，優(yōu)選的是所述堿金屬鹵化物選自下列一種或多種LiCl、LiBr、NaI和NaBr。在第三方面，提供了由任意一種如上所定義的制備方法所得到的式(I)化合物。在第四方面，本發(fā)明提供了用作適合于聯(lián)合至少一種硝基還原酶的GDEPT(基因-依賴性酶-前體藥物療法)的前體藥物、用作低氧-選擇性細(xì)胞毒素的方法，包括向?qū)ο蟮哪[瘤細(xì)胞以“治療有效量”施用如上所定義的式I化合物或如上所定義的式Ia-Ic、IIa-IIc和IIIa-IIIc化合物或其混合物的步驟。優(yōu)選地，所述硝基還原酶被大腸桿菌nfsB基因或被梭狀芽孢桿菌屬的種所編碼。在第五方面，本發(fā)明提供了用作適合于聯(lián)合至少一種硝基還原酶的GDEPT(基因-依賴性酶-前體藥物療法)的前體藥物、用作抗癌劑的方法，包括向?qū)ο蟮哪[瘤細(xì)胞以“治療有效量”施用如上所定義的式I化合物或如上所定義的式Ia-Ic、IIa-IIc和IIIa-IIIc化合物或其混合物的步驟。優(yōu)選地，所述硝基還原酶被大腸桿菌nfsB基因或被梭狀芽孢桿菌屬的種所編碼。在本發(fā)明的第六方面，提供了采用至少一種硝基還原酶的細(xì)胞消融療法，其中該方法包括施用“治療有效量”的如上所定義的式I化合物或如上所定義的式Ia-Ic、IIa-IIc和IIIa-IIIc化合物或其混合物的步驟，以消融對(duì)象組織中的腫瘤細(xì)胞，其中所述組織表達(dá)至少一種硝基還原酶。優(yōu)選地，所述硝基還原酶被大腸桿菌nfsB基因或被梭狀芽孢桿菌屬的種所編碼。優(yōu)選地，該細(xì)胞消融療法提供了基本上最小的副作用。在本發(fā)明的第七方面，提供了藥物組合物，包括治療有效量的式I化合物或式Ia-Ic、IIa-IIc和IIIa-IIIc化合物或其混合物，以及藥學(xué)上可接受的賦形劑、助劑、載體、緩沖劑或穩(wěn)定劑。藥學(xué)上可接受的賦形劑、助劑、載體、緩沖劑或穩(wěn)定劑應(yīng)當(dāng)優(yōu)選是無毒的，并且應(yīng)當(dāng)不干擾活性成分的功效。載體或其他材料的確切屬性將依賴于施用途徑，這可以是口服或者注射，例如皮膚、皮下或靜脈內(nèi)。應(yīng)該領(lǐng)會(huì)的是，這些因素容易由本領(lǐng)域技術(shù)人員來確定，無需額外的實(shí)驗(yàn)。用于口服施用的藥物組合物可以是片劑、膠囊劑、粉劑或液體形式。片劑可以包含固體載體或助劑。液體藥物組合物一般包含液體載體，例如水、石油、動(dòng)物或植物油、礦物油或合成油?？梢园ㄉ睇}水溶液、葡萄糖或其他糖溶液，或者二醇如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。膠囊劑可以包含固體載體如明膠。就靜脈內(nèi)、皮膚或皮下注射而言，活性成分將是腸胃外可接受的水溶液形式，其是無熱原的并且具有適合的pH、等滲性和穩(wěn)定性。本領(lǐng)域技術(shù)人員完全能夠制備適合的溶液，例如使用等滲的載體如氯化鈉注射液、林格氏注射液、乳酸化林格氏注射液。根據(jù)需要可以包括防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、抗氧化劑和/或其他添加劑。在本發(fā)明的第八方面，提供了有效量的如上所定義的式I化合物或如上所定義的式Ia-Ic、IIa-IIc和IIIa-IIIc化合物在藥物制備中的用途，該藥物用于在GDEPT中靶定有需要的對(duì)象的癌細(xì)胞。在本發(fā)明的第九方面，提供了有效量的如上所定義的式I化合物或如上所定義的式Ia-Ic、IIa-IIc和IIIa-IIIc化合物在藥物制備中的用途，該藥物用于在細(xì)胞消融療法中靶定有需要的對(duì)象的癌細(xì)胞。盡管本發(fā)明化合物通常將被用于靶定人類對(duì)象的腫瘤細(xì)胞或腫瘤組織，不過它們也可以用于靶定其他溫血?jiǎng)游飳?duì)象的腫瘤細(xì)胞或組織，例如其他靈長(zhǎng)類、農(nóng)用動(dòng)物(例如牛)、競(jìng)技動(dòng)物和寵物，例如馬、狗和貓。在說明書全文中使用的術(shù)語(yǔ)“治療有效量”應(yīng)被理解為足以對(duì)帶有癌細(xì)胞的對(duì)象顯示有益效果的如上所定義的式I化合物或如上所定義的式Ia-Ic、IIa-IIc和IIIa-IIIc化合物或其混合物的量。實(shí)際施用的量、速率和時(shí)間-過程將依賴于所治療疾病的屬性和嚴(yán)重性。治療處方屬于一般醫(yī)務(wù)人員和其他醫(yī)生的職責(zé)范圍。應(yīng)該理解的是，如上所定義的本發(fā)明化合物可以單獨(dú)施用或與其他治療、尤其是放射療法同時(shí)或者相繼聯(lián)合施用，這依賴于所要治療的病癥。在說明書全文中使用的其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽包括酸衍生鹽，成鹽的酸有鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、草酸、丙二酸、水楊酸、蘋果酸、富馬酸、琥珀酸、抗壞血酸、馬來酸、甲磺酸、羥乙磺酸等，和堿衍生鹽，成鹽的堿有鈉與鉀的碳酸鹽、鈉與鉀的氫氧化物、氨、三乙胺、三乙醇胺等。細(xì)胞消融療法的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。這種療法通過硝基還原酶的特異性酶表達(dá)，能夠用于選擇性消融指定的靶細(xì)胞或組織，例如該酶被組織特異性表達(dá)，然后能夠用于將前體藥物激活為活性代謝產(chǎn)物，以消融指定的靶細(xì)胞或組織(Gusterson等人，EndocrineRelatedCancer，1997，4，67-74)。措辭“基本上最小的副作用”應(yīng)被理解為意指由于活化代謝產(chǎn)物在靶腫瘤細(xì)胞與非靶腫瘤細(xì)胞之間擴(kuò)散所導(dǎo)致的對(duì)鄰接非靶腫瘤細(xì)胞的殺滅作用最小，所述活化代謝產(chǎn)物來自如上所定義的式I化合物或如上所定義的任意一種式Ia-Ic、IIa-IIc和IIIa-IIIc化合物或其混合物的酶活化作用。本發(fā)明的其他方面將因僅供舉例的下列說明和參照所附合成流程而變得顯而易見。發(fā)明詳述式(I)化合物及其酸加成鹽和N-氧化物可以通過流程1-3所述方法加以制備，它們的實(shí)例參見實(shí)施例A-C。流程1試劑(i)Nal/DMF；(ii)LiBr/MeCN；(iii)KOH；(iv)SOCl2，然后RNH2.<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="218">aY＝(CH2)2OHbY＝(CH2)3OHcY＝CH2CH(OH)CH2OH</table></tables>流程2試劑(i)RNH2；(ii)HN(CH2CH2OH)2，然后MsCl；(iii)LiCl；(iv)LiBr.流程3.試劑(i)KOH；然后HCl(ii)SOCl2，然后NH4OH，然后HCl(iii)LiBr在流程1-3中，關(guān)鍵的反應(yīng)是二甲磺酸酯6、9、13a-13g和18a-18d與嚴(yán)格控制量的LiBr或NaI在極性溶劑如DMF或MeCN中的反應(yīng)，得到不對(duì)稱的溴代-與碘代-甲磺酸酯氮芥。該方法也能適用于已知氯代-甲磺酸酯(5)的反應(yīng)，得到不對(duì)稱的氯代/溴代氮芥IIa2。盡管這種反應(yīng)也得到不等量的相應(yīng)雙(溴代)或雙(碘代)化合物，不過它們?nèi)菀子蒙V分離，得到純的不對(duì)稱氮芥。其中X代表SO2Me、Y代表CONR2R3且A和B各自獨(dú)立地代表鹵素或OSO2R4(條件是A≠B)的式I化合物可以借助流程4(就具體實(shí)例而言)所述一般途徑從3，4-二氟芐腈制備[按照Atwell等人，Anti-CancerDrugDesign，1996，11，553-567]。其與NaSMe反應(yīng)，繼而氧化，得到SO2Me基團(tuán)，然后將腈進(jìn)一步修飾為CONR2R3官能團(tuán)。4-F基團(tuán)用二乙醇胺置換，繼之以進(jìn)一步修飾，得到所需的不對(duì)稱氮芥。流程4(i)NaSMe；(ii)NaBO3；(iii)H2SO4/AcOH；(iv)SOCl2,然后NH4OH；(v)HNO3/H2SO4；(vi)HN(CH2CH2OH)2/DMSO；(vii)MsCl；(viii)LiBr/DMF.其中X代表CN、Y代表CONR2R3且A和B各自獨(dú)立地代表鹵素或OSO2R4(條件是A≠B)的式I化合物可以借助流程5所述一般途徑(如具體實(shí)例所示)從3，4-二氟芐腈制備[按照Atwell等人，Anti-CancerDrugDesign，1996，11，553-567]。將腈轉(zhuǎn)化為甲酰胺(水解繼之以胺化)，然后用TMS-CN置換3-F，如流程4繼之以4-F基團(tuán)與二乙醇胺反應(yīng)，隨后進(jìn)一步修飾，得到所需的不對(duì)稱氮芥。流程5ii)H2SO4/AcOH；(ii)SOCl2,然后NH4OH；(iii)TMSCN；(iv)HNO3/H2SO4；(v)HN(CH2CH2OH)2/DMSO；(vi)MsCl；(vii)LiBr/DMF.其中X代表NO2、Y代表NHCOR2且A和B各自獨(dú)立地代表鹵素或OSO2R4(條件是A≠B)的式I化合物可以借助流程6所述一般途徑(如具體實(shí)例所示)從2，4-二硝基-5-氯苯甲酸制備。與DPPA進(jìn)行庫(kù)爾修斯反應(yīng)，繼之以水解和乙?；玫揭阴０?。如流程4，使5-Cl基團(tuán)與二乙醇胺反應(yīng)，隨后進(jìn)一步修飾，得到所需的不對(duì)稱氮芥。流程6ii)DPPA/t-BuOH；(ii)TFA；(iii)Ac2O/吡啶；(iv)HN(CH2CH2OH)2/DMSO；(v)MsCl；(vi)LiBr/DMF其中X代表NO2、Y代表OR2且A和B各自獨(dú)立地代表鹵素或OSO2R4(條件是A≠B)的式I化合物可以借助流程7所述一般途徑(如具體實(shí)例所示)從1，5-二氯-2，4-二硝基苯制備。更具活性的1-Cl基團(tuán)與NaOMe反應(yīng)，得到甲基醚，隨后如流程4進(jìn)一步修飾5-Cl基團(tuán)，得到所需的不對(duì)稱氮芥。流程7ii)Na/MeOH；(ii)HN(CH2CH2OH)2/DMSO；(iii)MsCl；(iv)LiBr/DMF其中X代表NO2、Y代表SO2NHR2且A和B各自獨(dú)立地代表鹵素或OSO2R4(條件是A≠B)的式I化合物可以借助8流程所述一般途徑(如具體實(shí)例所示)從5-氯-2，4-二硝基苯胺(見流程6)制備。重氮化繼之以氧化和胺化，得到磺酰胺[HerbertRB&amp;HollmanRG.Tetrahedron1965，21，663-675]，隨后如流程4進(jìn)一步修飾5-Cl基團(tuán)，得到所需的不對(duì)稱氮芥。流程8(i)重氮化，然后H2S；(ii)Oxone；(iii)SOCl2，然后NH4OH；(iv)HN(CH2CH2OH)2/二噁烷(V)MsCl；(vi)LiBr/DMF下表1列出25種通式I化合物的物理化學(xué)數(shù)據(jù)，它們是通式I的代表，并且可由本發(fā)明的方法制備。表1下列實(shí)施例A-C闡述代表性通式(I)化合物的制備。實(shí)施例A采用流程1所述方法制備式IIa類似物5-[(2-溴乙基)(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa2)將甲磺酸2-[5-(氨基羰基)(2-氯乙基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯(5)[Friedlos等人，J.Med.Chem.1997，40，1270](0.91g，2.2mmol)與LiBr(0.21g，2.4mmol)在無水MeCN(25mL)中的混合物在回流下攪拌1.5小時(shí)，然后在減壓下濃縮。殘余物經(jīng)過硅膠色譜處理，用CH2Cl2/EtOAc(3∶2)洗脫，得到被相應(yīng)的二溴氮芥污染的粗產(chǎn)物。經(jīng)過多次從EtOAc/I-Pr2O中重結(jié)晶純化，得到IIa2(595mg，68％)mp153℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.52(s，1H，H-3)，8.17&amp;7.82(2xs，2H，CONH2)，7.43(s，1H，H-6)，3.82(t，J＝5.8Hz，2H，CH2Cl)，3.77-3.63(m，6H，N(CH2-)CH2CH2Br)。C11H12BrClN4O5分析計(jì)算值C，33.4；H，3.1；N，14.2；Cl，9.6；實(shí)測(cè)值C，33，4；H，3.0；N，14.1；Cl，8.9％。甲磺酸2-[5-(氨基羰基)(2-溴乙基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯(IIa3)將甲磺酸2-(5-(氨基羰基){2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(6)[Friedlos等人，J.MedChem.，1997，40，1270](1.60g，3.4mmol)與LiBr(356mg，4.1mmol)在無水MeCN(30mL)中的混合物在回流下攪拌1小時(shí)。在減壓下濃縮混合物，殘余物經(jīng)過硅膠色譜處理。用EtOAc/CH2Cl2(11∶9)洗脫，得到二溴氮芥，進(jìn)一步用EtOAc/CH2Cl2(3∶1)洗脫，得到IIa3(0.61g，39％)mp(EtOAc/I-Pr2O)160-161℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.53(s，1H，H-3)，8.14&amp;7.83(2xs，2H，CONH2)，7.46(s，1H，H-6)，4.33(t，J＝5.1Hz，2H，CH2O)，3.74(t，J＝5.1Hz，2H，CH2CH2O)，3.70(brs，4H，CH2CH2Br)，3.14(s，3H，CH3)。C12H15BrN4O8S分析計(jì)算值C，31.7；H，3.3；N，12.3；Br，17.6；實(shí)測(cè)值C，32.0；H，3.4；N，12.2；Br，17.7％。甲磺酸2-[5-(氨基羰基)(2-碘乙基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯(IIa4)將6(1.12g，2.38mmol)與NaI(0.46g，3.07mmol)在無水MeCN(20mL)中的混合物在回流下攪拌1小時(shí)。在減壓下濃縮混合物，殘余物經(jīng)過硅膠色譜處理。用EtOAc/CH2Cl2(1∶1)洗脫，得到二碘氮芥，進(jìn)一步用EtOAc/CH2Cl2(3∶1)洗脫，得到IIa4(0.49g，41％)mp(Me2CO/EtOAc/I-Pr2O)160℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.52(s，1H，H-3)，8.14&amp;7.83(2xs，2H，NH2)，7.44(s，1H，H-6)，4.33(t，J＝5.1Hz，2H，CH2O)，3.73(t，J＝5.1Hz，2H，CH2CH2O)，3.65(t，J＝6.9Hz，2H，CH2CH2I)，3.40(t，J＝6.9Hz，2H，CH2I)，3.13(s，3H，CH3)。C12H15IN4O8S分析計(jì)算值C，28.7；H，3.0；N，11.2；I，25.3；實(shí)測(cè)值C，29.4；H，3.0；N，11.0；I，25.0％。甲磺酸2-((2-溴乙基)5-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(IIa5)將攪拌著的5-[雙(2-羥基乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酸甲酯[Palmer等人，J.Med.Chem1994，37，2175](5.50g，16.7mmol)與Et3N(5.82mL，41.8mmol)的無水CH2Cl2(50mL)溶液在0℃下用MsCl(3.14mL，40.0mmol)逐滴處理。30分鐘后，加入10％KHCO3水溶液(100mL)，將混合物在0℃下攪拌另外30分鐘，然后用石油醚(500mL)稀釋。收集所沉淀的產(chǎn)物，用水和iPr2O洗滌，得到5-(雙{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}氨基)-2，4-二硝基苯甲酸甲酯(7)(7.44g，92％)mp(CH2Cl2/石油醚)157-158℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.62(s，1H，H-3)，7.77(s，1H，H-6)，4.35(t，J＝5.1Hz，4H，2xCH2O)，3.88(s，3H，CO2CH3)，3.73(t，J＝5.1Hz，4H，N(CH2)CH2)，3.13(s，6H，2xSO2CH3)。C14H19N2O12S2分析計(jì)算值C，34.6；H，3.9；N，8.7；S，13.2；實(shí)測(cè)值C，34.8；H，3.7；N，8.9；S，13.1％。將7(3.0g，6.18mmol)用3NKOH(40mL)在二噁烷(200mL)中在室溫下水解15分鐘，繼之以用1NHCl酸化，用EtOAc萃取，得到定量收率的5-(雙{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}氨基)-2，4-二硝基苯甲酸(8)，mp200-210℃，無需進(jìn)一步純化即可用于下一步；1HNMR[(CD3)2SO]δ14.1(vbrs，1H，CO2H)，8.57(s，1H，H-3)，7.69(s，1H，H-6)，4.34(t，J＝5.1Hz，4H，2xCH2O)，3.72(t，J＝5.1Hz，4H，2xCH2CH2O)，3.13(s，6H，2xCH3)。將含有DMF(2滴)的8(3.20g，6.79mmol)的SOCl2(60mL)懸液在回流下加熱1小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)溶劑，繼之以與苯共沸，得到粗的酰氯，將其溶于干燥Me2CO(80mL)，在0℃下用2-氨基乙醇(1.24g，20.3mmol)處理。在0℃下攪拌5分鐘后，將混合物用0.2NHCl酸化至pH2-3，濃縮至一半體積，然后加入固體NaBr。將混合物用EtOAc萃取(2x)，合并萃取液，用飽和NaBr溶液洗滌，干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)。殘余物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc/MeOH(15∶1)洗脫，得到甲磺酸2-(5-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}{2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(9a)(2.87g，82％)，為膠狀物，直接使用。將9a(1.80g，3.50mmol)與LiBr(0.43g，4.95mmol)在DMF(5mL)中的混合物在60℃下攪拌2小時(shí)。然后將反應(yīng)物倒入飽和NaBr溶液中，用EtOAc萃取(2x)。合并萃取液，用飽和NaBr溶液洗滌，干燥(Na2SO4)，在減壓下濃縮。殘余物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc洗脫，得到5-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺(10a)(0.78g，46％)mp(MeOH/EtOAc/石油醚)151-152℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.73(t，J＝5.7Hz，1H，CONH)，8.53(s，1H，H-3)，7.43(s，1H，H-6)，4.76(t，J＝5.6Hz，1H，OH)，3.77-3.64(m，8H，N(CH2CH2Br)2)，3.53(q，J＝6.0Hz，2H，CH2OH)，3.31(q，部分模糊，J＝6.1Hz，2H，CONHCH2)。C13H16Br2N4O6分析計(jì)算值C，32.3；H，3.3；11.6；33.0；實(shí)測(cè)值C，32.6；H，3.3；N，11.6；Br，33.3％。進(jìn)一步用EtOAc/MeOH(9∶1)洗脫，得到IIa5(0.73g，42％)mp(EtOAc)102-104℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.70(t，J＝5.7Hz，1H，CONH)，8.54(s，1H，H-3)，7.46(s，1H，H-6)，4.76(J＝5.5Hz，1H，OH)，4.34(t，J＝5.1Hz，2H，CH2OSO2)，3.74(t，J＝5.1Hz，2H，CH2CH2OSO2)，3.70(brs，4H，CH2CH2Br)，3.53(q，J＝6.0Hz，2H，CH2OH)，3.31(q，部分模糊，J＝6.1Hz，2H，CONHCH2)，3.14(s，3H，CH3)。C14H19BrN4O9S分析計(jì)算值C，34.3；H，3.9；N，11.0；Br，15.9；實(shí)測(cè)值C，33.8；H，3.8；H，11.2；Br，16.0％。甲磺酸2-((2-溴乙基)5-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(IIa6)將5-(雙{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}氨基)-2，4-二硝基苯甲酸(8)在回流下于過量SOCl2(60mL)和催化量DMF中加熱1小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)，繼之以在苯中共沸，得到粗的酰氯。將其溶于干燥Me2CO，在0℃下用3-氨基-1-丙醇處理5分鐘。將混合物用0.2NHCl酸化至pH2-3，濃縮至一半體積，然后加入固體NaBr，繼之以用EtOAc萃取(2x)。蒸發(fā)，殘余物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc/MeOH(9∶1)洗脫，得到甲磺酸2-(5-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(9b)(68％)，為黃色膠狀物；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.54(t，J＝5.7Hz，1H)，8.53(s，1h)，7.45(s，1H)，4.43(t，J＝5.1Hz，1H)，4.33(t，J＝5.2Hz，4H)，3.69(t，J＝5.2Hz，4H)，3.57(q，J＝5.9Hz，2H)，3.26(D2O置換后，t，J＝7.0Hz，1H)，3.12(s，6H)，1,66(五重峰，J＝6.7Hz，2H)。C16H25N4O12S的HRMS(FAB)計(jì)算值(MH+)m/z529.0910；實(shí)測(cè)值529.0904。將9b的DMF溶液用LiBr(1.4當(dāng)量)處理，如上操作，產(chǎn)物經(jīng)過硅膠色譜處理。用EtOAc洗脫，得到少量二溴氮芥10b，用EtOAc/MeOH(19∶1)洗脫，得到IIa6(31％)，為黃色膠狀物1HNMR[(CD3)2SO]δ8.60(t，J＝5.6Hz，1H)，8.54(s，1H)，7.44(s，1H)，4.45(t，J＝5.2Hz，1H)，4.33(t，J＝5.1Hz，2H)，3.74(t，J＝5.2Hz，2H)，3.72-3.66(m，4H)，3.49(q，J＝5.9Hz，2H)，3.27(D2O置換后，t，J＝7.0Hz，2H)，3.14(s，3H)，1.68(五重峰，J＝6.7Hz，2H)。C15H2279BrN4O9S的HRMS(FAB)計(jì)算值(MH+)m/z515.0270；實(shí)測(cè)值515.0283。甲磺酸2-((2-溴乙基)-5-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(IIa7)將如上由酸8(2.9g，6.15mmol)的反應(yīng)所得的粗酰氯溶于Me2CO(100mL)，在冰浴中冷卻，用過量3-氨基-1，2-丙二醇處理。攪拌10分鐘后，將反應(yīng)混合物用1NHCl酸化至pH2-3，蒸發(fā)大部分溶劑，使殘余物在水與EtOAc之間分配。水層用EtOAc反萃取，合并有機(jī)相，干燥，蒸發(fā)。將殘余物直接吸附到硅膠上進(jìn)行色譜處理，用EtOAc/MeOH(從50∶1至10∶1)洗脫，得到甲磺酸2-(5-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(9c)(2.92g，87％)，為黃色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.66(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.54(s，1H，H-3)，7.48(s，1H，H-6)，4.81(d，J＝5.0Hz，1H，CHOH)，4.59(t，J＝5.1Hz，1H，CH2OH)，4.35(m，4H，2xCH2OMs)，3.66(m，4H)，3.62(m，1H)，3.46-3.36(m，4H)，3.13(s，6H)；13CNMRδ164.48，147.09，138.26，137.27，136.60，124.17，121.72，70.02，66.69，63.68，50.21，42.68，36.55。C16H25N4O13S2的HRMSm/z(M+1)+要求值545.08596；實(shí)測(cè)值545.0856。將9c(1.28g，2.53mmol)溶于EtOAc(100mL)，在60℃下用LiBr(347mg，4.0mmol)處理2小時(shí)。在減壓下除去揮發(fā)物，將殘余物直接吸附到硅膠上進(jìn)行色譜處理。用EtOAc/MeOH(從1∶0至10∶2)洗脫，得到5-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2，3-二羥基丙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺(10c)(0.4g，31％)，為泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.71(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.53(s，1H，H-3)，7.43(s，1H，H-6)，4.86(d，J＝5.0Hz，1H，CHOH)，4.59(t，J＝5.8Hz，1H，CH2OH)，3.70-3.10(m，13H)；13CNMRδ164.61，146.65，137.99，137.35，136.52，124.25，121.20，70.05，63.73，52.44，42.76，30.33。C14H1979Br2N4O7的HRMSm/z(M+1)+要求值512.9621；實(shí)測(cè)值512.9596。進(jìn)一步洗脫得到IIa7(0.62g，46％)mp(EtOAc)117-118℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.68(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.53(s，1H，H-3)，7.46(s，1H，H-6)，4.82(d，J＝5.0Hz，1H，CHOH)，4.56(t，J＝5.1，1H，CH2OH)，4.32(m，2H，CH2OMs)，3.75-3.60(m，7H)，3.46-3.36(m，4H)，3.13(s，3H)；13CNMRδ164.48，146.84，138.05，137.29，136.52，124.18，121.40，70.01，66.74，63.68，52.89，49.56，42.69，36.55，30.20。C15H21BrN4O10S分析計(jì)算值C，34.1；H，4.0；N，10.6；Br，15.0；實(shí)測(cè)值C，34.0；H，4.0；N，10.5；Br，15.2％。進(jìn)一步洗脫得到原料(9c)(0.27g，20％)。實(shí)施例B采用流程2所述方法制備式IIb類似物甲磺酸2-[2-(氨基羰基)(2-氯乙基)-4，6-二硝基苯胺基]乙酯(IIb1)將2-[雙(2-羥基乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰胺[Friedlos等人，J.Med.Chem，1997，40，1270](2.5g，8mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液在冰浴中冷卻，一次性加入Et3N(8mL)和MsCl(4mL)。攪拌10分鐘后，加入飽和NaHCO3(100mL)，另外30分鐘后，將水相用CH2Cl2(2×70mL)萃取，合并有機(jī)相，干燥，在減壓下濃縮，殘余物經(jīng)過硅膠柱色譜純化。用EtOAc/石油醚(1∶1至1∶0)洗脫，得到IIb1(0.6g，18％)mp(EtOAc/石油醚)155-157℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-5)，8.34(d，J＝2.7Hz，1H，H-3)，8.19(s，1H，CONH)，7.99(s，1H，CONH)，4.29(m，2H，CH2OMs)，3.73(m，2H，CH2Cl)，3.48(m，4H，2xCH2N)，3.15(s，3H，OSO2CH3)；13CNMRδ167.11，145.98，146.34，140.84，136.05，127.26，122.22，67.49，54.35，51.34，41.36，36.46。C12H15ClN4O8S分析計(jì)算值C，35.1；H，3.7；N，13.7；Cl，8.5；實(shí)測(cè)值C，35.7；H，3.9；N，13.6；Cl，8.7％。進(jìn)一步洗脫得到甲磺酸2-(2-(氨基羰基){2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯(13a)(3.0g，80％)mp(EtOAc)149-150℃；1HNMR[(CDA3)2SO]δ8.73(d，J＝2.8Hz，1H，H-5)，8.35(d，J＝2.9Hz，1H，H-3)，8.19(s，1H，CONH)，8.00(s，1H，CONH)，4.31(m，4H，2xCH2OMs)，3.49(m，4H，2xCH2-N)，3.14(s，6H，2xOSO2CH3)。C13H18N4O11S2分析計(jì)算值C，33.2；H，3.9；N，11.9；實(shí)測(cè)值C，33.7；H，4.0；N，11.8％。甲磺酸2-[2-(氨基羰基)(2-溴乙基)-4，6-二硝基苯胺基]乙酯(IIb2)將二甲磺酸酯13a(1.62g，3.5mmol)的溫?zé)酔tOAc(100mL)溶液用LiBr(400mg，4.7mmol)一次性處理，將混合物加熱至60℃達(dá)2小時(shí)。在減壓下除去揮發(fā)物，將殘余物直接吸附到硅膠上進(jìn)行色譜處理。用EtOAc/石油醚(1∶1至1∶0)洗脫，得到二溴化物(0.31g，20％)，為黃色固體(文獻(xiàn)記載為泡沫)[Friedlos等人，J.Med.Chem.1997，1270]。進(jìn)一步洗脫得到IIb2(0.85g，53％)mp(EtOAc/石油醚)153-154℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H，H-5)，8.33(d，J＝2.8Hz，1H，H-3)，8.19(s，1H，CONH)，7.99(s，1H，CONH)，4.29(m，2H，CH2OMs)，3.60(m，2H，CH2Br)，3.49(m，4H，2xCH2-N)，3.14(s，3H，OSO2CH3)；13CNMRδ167.11，145.75，146.37，140.92，136.12，127.24，122.20，67.53，54.41，51.16，36.46，29.73。C12H15BrN4O8S分析計(jì)算值C，31.7；H，3.3；N，12.3；Br，17.4；實(shí)測(cè)值C，31.4；H，3.4；N，12.3；Br，17.8％。甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯(IIb3)將5mL水中的2-氨基乙醇(2.9g，47mmol)一次性加入到粗2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯(從2-氯-3，5-二硝基苯甲酸11(5.0g，18.3mmol)與SOCl2制備)的Me2CO(50mL)溶液中，同時(shí)在冰浴中冷卻。將混合物攪拌30分鐘，然后用1NHCl酸化至pH4-5，在減壓下濃縮，以除去Me2CO。加入EtOAc(100mL)，2小時(shí)后收集白色固體，用EtOAc洗滌，風(fēng)干，得到2-氯-3，5-二硝基-N-(2-羥基乙基)苯甲酰胺(12b)(3.0g，36％)mp(EtOAc)159-160℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.99(d，J＝2.6Hz，1H，H-5)，8.86(m，1H，CONH)，8.56(d，J＝2.6Hz，1H，H-3)，4.83(m，1H，-OH)，3.54(m，4H)，無需進(jìn)一步純化即可用于下一步。將12b(0.6g，2.14mmol)的CH2Cl2溶液在冰浴中冷卻，加入3，4-二氫-2H-吡喃(2.0mL)和對(duì)-甲苯磺酸(0.1g)。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，然后在減壓下濃縮。殘余物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc/石油醚(從1∶2至2∶1)洗脫，得到2-氯-3，5-二硝基-N-[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]苯甲酰胺(12c)(0.8g，100％)，為油狀物；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.67(d，J＝2.6Hz，1H，H-4)，8.60(d，J＝2.6Hz，1H，H-6)，7.02(m，1H，CONH)，4.54(m，1H)，4.00-3.50(m，6H)，1.84-1.75(m，6H)，無需進(jìn)一步純化即可用于下一步。如上所述使12c與二乙醇胺、繼而與MsCl/Et3N反應(yīng)，得到甲磺酸2-[{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}-4，6-二硝基-6-({[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]氨基}羰基)苯胺基]乙酯(13c)(1.28g，100％)，為黃色泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.63(d，J＝2.9Hz，1H，H-5)，8.51(d，J＝2.9Hz，1H，H-3)，4.55(m，1H)，4.39(m，4H)，4.00-3.59(m，10H)，3.15(s，3H)，3.03(s，3H)，1.64-1.39(m，6H)，無需進(jìn)一步純化即用于下一步。將13c(1.28g，2.14mmol)的THF(60mL)溶液用1NHCl(40mL)處理，將溶液在20℃下攪拌1小時(shí)，然后用水(100mL)稀釋，用飽和NaHCO3中和，用EtOAc萃取(3×80mL)。合并有機(jī)相，用鹽水洗滌，干燥，蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)過硅膠色譜純化，用EtOAc/MeOH(從1∶0至100∶2)洗脫，得到13b(0.84g，76％)，為黃色泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.78(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-5)，8.36(d，J＝2.7Hz，1H，H-3)，4.29(m，4H，2xCH2OMs)，3.56(m，2H)，3.45(m，6H)，3.14(s，6H，2xOSO2CH3)；13CNMRδ165.37，146.27，145.06，140，63，135.78，127.62，122.32，67.26，59.17，51.26，42.14，36.44。在60℃下將13c(0.49g，0.95mmol)用LiBr(0.100g，1.2mmol)于EtOAc(60mL)中處理3小時(shí)，產(chǎn)物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc/石油醚(從2∶1至1∶0)洗脫，得到二溴化物(14c)(0.24g，53％)。進(jìn)一步洗脫得到IIb3(0.20g，42％)，為黃色泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-5)，8.36(d，J＝2.7Hz，1H，H-3)，4.28(m，2H，CH2OMs)，3.58(m，4H)，3.44(m，4H)，3.14(s，3H，OSO2CH3)；13CNMRδ165.33，145.79，145.20，140，87，135.11，127.50，122.19，67.49，59.18，54.21，50.99，42.09，36.44，29.68。C14H2079BrN4O9S的HRMSm/z(M+1)+要求值499.01344；實(shí)測(cè)值499.01324。甲磺酸2-((2-碘乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯(IIb4)在60℃下，將13b(6.7g，13.0mmol)用NaI(2.9g，20mmol)于EtOAc(200mL)中處理3小時(shí)，產(chǎn)物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc/石油醚(從2∶1至1∶0)洗脫，得到2-[雙(2-碘乙基)氨基]-N-(3-羥基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(3.3g，44％)，為黃色固體mp(EtOAc/石油醚)129-131℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.72(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.70(m，1H，CONH)，8.32(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.80(m，1H)，3.55(m，2H)，3.43(m，4H)，3.31(m，6H)；13CNMRδ165.3，145.2，144.7，141.0，136.3，127.3，122.0，59.3，54.7，42.1，2.94。從后面的洗脫液得到IIb4(1.35g，19％)，為黃色泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.74(m，1H，CONH)，8.34(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.28(m，2H)，3.56(m，2H)，3.43(m，2H)，3.31(m，6H)，3.13(s，3H)；13CNMRδ165.3，145.5，145.2，140.8，136.1，127.4，122.1，67.5，59.2，55.4，50.6，42.1，36.5，2.6。C14H20IN4O9S的HRMS(FAB)計(jì)算值[M+H+]m/z546.9996；實(shí)測(cè)值546.9997。甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯(IIb5)將12d(1.22g，4.0mmol)的50mLCH2Cl2溶液在冰浴中冷卻，加入3，4-二氫-2H-吡喃(1.0mL)和對(duì)-甲苯磺酸(0.1g)。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，然后在減壓下濃縮。殘余物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc/石油醚(從1∶2至2∶1)洗脫，得到2-氯-3，5-二硝基-N-[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]苯甲酰胺(12e)(1.45g，94％)，為淡黃色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.99(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.81(m，1H，CONH)，8.51(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.57(m，1H)，3.72(m，2H)，3.46-3.25(m，4H)，1.82-1.44(m，8H)；13CNMRδ162.7，148.4，145.9，140.3，128.2，125.8，120.5，98.0，64.2，61.3，36.5，30.2，28.9，24.9，19.1。C15H1935ClIN3O7的HRMS(FAB)計(jì)算值[M+H+]m/z388.0912；實(shí)測(cè)值；388.0915。如上所述使12e(1.45g，3.75mmol)與二乙醇胺(1.67g)反應(yīng)，得到2-[雙(2-羥基乙基)氨基]-3，5-二硝基-N-[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]苯甲酰胺(1.62g，95％)，為黃色泡沫，直接使用；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.96(m，1H，CONH)，8.66(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.31(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.95(m，2H)，4.56(m，1H)，3.79-3.16(m，14H)，1.80-1.45(m，8H)；13CNMRδ166.2，148.1，143.6，139.3，133.8，128.9，123.8，98.5，64.8，61.7，58.5，54.6，37.3，30.6，29.2，25.4，19.6。C19H29N4O6的HRMS(FAB)計(jì)算值[M+H+]m/z457.1935；實(shí)測(cè)值；457.1939。如上所述使上述二醇(1.62g，3.55mm0l)與MsCl(2mL)反應(yīng)，得到甲磺酸2-[{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}-4，6-二硝基-6-({[2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]-氨基}羰基)苯胺基]乙酯(13e)(2.17g，100％)，為黃色泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.71(d，J＝2.8Hz，1H)，8.71(m，1H)，8.31(d，J＝2.8Hz，1H)，4.26(m，4H)，3.71-3.37(m，10H)，3.13(s，6H)，3.10(m，2H)，1.82-1.43(m，8H)；13CNMRδ165.1，146.3，145.4，140.9，135.9，127.4，122.2，98.0，67.2，64.3，51.4，45.7，36.5，30.2，28.7，24.9，19.1，8.5。C21H33N4O13S2的HRMS(FAB)計(jì)算值[M+H+]m/z613.1486；實(shí)測(cè)值613.1481。將13e(2.95g，3.55mmol)的THF(120mL)溶液用1NHCl(80mL)處理，將溶液在20℃下攪拌1小時(shí)，然后用水(100mL)稀釋，用飽和NaHCO3中和，用EtOAc萃取(3×80mL)。合并有機(jī)相，用鹽水洗滌，干燥，蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)過硅膠色譜純化，用EtOAc/MeOH(100∶1)洗脫，得到甲磺酸2-[{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}-4，6-二硝基-6-([{2-羥基丙基-氨基}羰基]苯胺基)乙酯(13d)(1.4g，75％)，為黃色固體mp(EtOAc/石油醚)130-133℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.72(m，1H)，8.32(d，J＝2.8Hz，1H)，4.29(m，4H)，3.47(m，8H)，3.14(s，6H)，1.71(m，2H)；13CNMRδ165.2，146.3，145.3，140.8，135.9，127.5，122.3，67.3，58.4，51.4，36.8，36.5，31.7。分析值(C16H24N4O12S2)C，H，N。在60℃下，將13d(0.25g，0.45mmol)用LiBr(53mg，0.7mmol)于EtOAc(50mL)中處理3小時(shí)，產(chǎn)物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc/石油醚(從2∶1至1∶0)洗脫，得到IIb5(0.16g，66％)，為黃色泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.73(m，1H)，8.31(d，J＝2.8Hz，1H)，4.28(m，2H)，3.65-3.44(m，10H)，3.13(s，3H)，1.70(m，2H)；13CNMRδ165.1，145.7，145.4，141.0，136.2，127.3，122.1，67.5，58.4，51.1，36.7，36.5，31.7，29.6。C15H2279BrN4O9S的HRMS(FAB)計(jì)算值[M+H+]m/z513.0291；實(shí)測(cè)值513.0281。甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯(IIb6)在室溫下，將甲磺酸2-(2-({[(2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)甲基]氨基}羰基){2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯(13g)[Palmer等人，J.Med.Chem.1997，40，1272](5.0mmol)的MeOH(200mL)溶液用對(duì)-甲苯磺酸(0.2g)處理4小時(shí)。然后蒸發(fā)大部分MeOH，將殘余物吸收于EtOAc(200mL)中，用飽和NaHCO3和鹽水洗滌，干燥，濃縮。產(chǎn)物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc/MeOH(20∶1)洗脫，得到甲磺酸2-(2-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯(13f)(2.0g，73％)，為黃色泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝3.0Hz，1H，H-5)，8.37(d，J＝3.0Hz，1H，H-3)，4.30(m，4H，2xCH2OMs)，3.66(m，1H)，3.48-3.30(m，8H)，3.14(s，6H，2xOSO2CH3)；13CNMRδ165.42，146.24，145.09，140.60，135.77，127.67，122.26，69.77，67.29，63.87，51.29，42.98，36.44。C16H25N4O13S2的HRMSm/z(M+1)+要求值545.08596；實(shí)測(cè)值545.08680。在60℃下，將13f(1.50g，2.75mmol)用LiBr(0.21g，2.0mmol)于EtOAc(60mL)中處理3小時(shí)，繼之以硅膠色譜處理，用EtOAc/MeOH(20∶1)洗脫，得到二溴化物14f(0.5g，35％)，為黃色泡沫，然后得到IIb6(0.62g，34％)，為黃色固體；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H，H-5)，8.71(m，1H，CONH)，8.36(d，J＝2.8Hz，1H，H-3)，4.28(m，2H，CH2OMs)，3.69-3.30(m，11H)，3.14(s，3H)；13CNMRδ165.52，145.87，145.30，140.93，136.20，127.64，122.23，68.89，67.62，63.93，54.35，51.08，43.04，36.52，29.80。C15H21BrN4O10S分析計(jì)算值C，34.1；H，4.0；N，10.6；Br，15.0；實(shí)測(cè)值C，34.0；H，4.0；N，10.5；Br，15.2％。進(jìn)一步洗脫得到原料8e(0.28，19％)。甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2-({[3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}羰基)-4，6-二硝基苯胺基]乙酯(IIb7)在室溫下，使2-氯-N-[3-(4-嗎啉基)丙基]-3，5-二硝基苯甲酰胺(12h)(0.5g，1.34mmol)與二乙醇胺(0.5g)在對(duì)-二噁烷(10mL)中反應(yīng)3小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入鹽水中，用EtOAc萃取(3×70mL)，合并有機(jī)相，干燥，在減壓下濃縮，得到粗的2-[雙(2-羥基乙基)氨基]-N-[3-(4-嗎啉基)丙基]-3，5-二硝基苯甲酰胺。將其溶于CH2Cl2(100mL)，在冰浴中冷卻，用Et3N(1.5mL)、繼之以MsCl(0.7mL)一次性處理。攪拌10分鐘后，加入飽和NaHCO3(100mL)，將混合物攪拌另外30分鐘，然后將水相用CH2Cl2萃取(2×70mL)。合并有機(jī)相，干燥，在減壓下蒸發(fā)。殘余物經(jīng)過柱色譜純化，用EtOAc/MeOH(20∶1至9∶0)洗脫，得到甲磺酸2-[{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}-2-({[3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}羰基)-4，6-二硝基苯胺基]乙酯(13h)(0.75g，93％)，為泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-5)，8.20(d，J＝2.7Hz，1H，H-3)，4.28(m，4H，2xCH2OMs)，3.56(m，5H)，3.44(m，5H)，3.15(s，6H)，2.35(m，6H)，1.71(m，2H)。在60℃下，將13h(0.70g，1.17mmol)的EtOAc(100mL)溶液用LiBr(118mg，1.36mmol)處理2小時(shí)。在減壓下除去揮發(fā)物，將殘余物直接吸附到硅膠上進(jìn)行色譜處理。用EtOAc/MeOH(從20∶1至10∶1)洗脫，得到2-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-[3-(4-嗎啉基)丙基]-3，5-二硝基苯甲酰胺(14h)228mg(34％)，為黃色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(m，1H，CONH)，8.76(d，J＝2.8Hz，1H，H-5)，8.30(d，J＝2.8Hz，1H，H-3)，3.58-3.42(m，14H)，2.36(m，6H)，1.70(m，2H)；13CNMRδ165.08，145.57，145.27，141.19，136.40，127.27，122.10，66.08，59.66，55.64，53.19，37.61，25.39，13.99。C18H2579Br2N5O6的HRMSm/z(M+1)+要求值566.0250；實(shí)測(cè)值566.0241。從后面的洗脫液得到IIb7(300mg，44％)，為黃色泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(m，1H，CONH)，8.75(d，J＝2.6Hz，1H，H-4)，8.31(d，J＝2.6Hz，1H，H-6)，4.28(m，2H，CH2OMs)，3.56(m，7H)，3.44(m，5H)，3.14(s，3H)，2.35(m，6H)，1.71(m，2H)；13CNMRδ165.07，145.79，145.31，140.92，136.04，127.36，122.21，67.50，66.09，59.64，55.68，53.21，51.10，37.63，36.45，25.41，14.00。C19H2979BrN5O9S的HRMSm/z(M+1)+要求值582.08519；實(shí)測(cè)值582.08694；還得到原料13h(117mg，18％)。3-{[2-((2-氯乙基){2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}氨基)-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基}丙酸甲酯(IIb8)將丙氨酸甲酯鹽酸鹽(2.55g，18.3mmol)溶于水(12mL)，將該溶液用Me2CO(20mL)和Et2O(50mL)稀釋。然后將其倒入粗的2-氯-3，5-二硝基苯甲酰氯(從2-氯-3，5-二硝基苯甲酸11(5.0g，18.3mmol)與SOCl2制備)的Me2CO(50mL)溶液中，同時(shí)在冰浴中冷卻。將混合物攪拌30分鐘，然后倒入水中，用EtOAc萃取。將有機(jī)相用飽和NaHCO3和鹽水洗滌，干燥，濃縮，得到3-[(2-氯-3，5-二硝基苯甲?；?氨基]丙酸甲酯(12i)(4.45g，73.3％)mp(EtOAc/石油醚)128-130℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.99(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.96(m，1H，CONH)，8.51(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，3.63(s，3H，CO2CH3)，3.50(m，2H，CONHCH2)，2.64(m，2H，CH2CO2)。產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。將12i(2.5g，7.6mmol)與二乙醇胺(2.0g)在對(duì)-二噁烷(30mL)中的混合物在室溫下保持3小時(shí)，然后倒入鹽水中，用EtOAc萃取(3×70mL)。合并有機(jī)相，干燥，在減壓下蒸發(fā)。將殘余物溶于CH2Cl2(15mL)，在冰浴中冷卻，用Et3N(8mL)和MsCl(4mL)處理。攪拌10分鐘后，加入飽和NaHCO3(100mL)，再攪拌另外30分鐘后，將水相用CH2Cl2萃取(2×70mL)。合并有機(jī)相，干燥，然后在減壓下蒸發(fā)，殘余物然后經(jīng)過硅膠柱色譜純化。用EtOAc/石油醚(1∶1至1∶0)洗脫，得到IIb8(0.2g，5％)，為黃色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.88(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.31(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.29(m，2H，CH2OMs)，3.71(m，2H，CH2Cl)，3.63(s，3H，CO2CH3)，3.54-3.36(m，6H)，3.14(s，3H，OSO2CH3)，2.65(m，2H，CH2CO2)；13CNMRδ171.68，165.34，146.14，145.17，140，74，135.59，127.58，122.42，67.47，54.22，51.45，51.22，41.37，36.48，35.44，32.95。C16H2235ClN4O10S的HRMSm/z(M+1)+要求值497.0745；實(shí)測(cè)值497.0748。進(jìn)一步洗脫得到3-{[2-雙{2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鶀氨基}丙酸甲酯(13i)(2.6g，62％)，為黃色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.90(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.32(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.30(m，4H，2xCH2OMs)，3.63(s，3H，CO2CH3)，3.52(m，2H，CONHCH2)，3.44(m，4H，2xCH2N)，3.14(s，6H，2xOSO2CH3)，2.65(m，2H，CH2CO2)；13CNMRδ171.66，165.28，146.36，144.98，140，52，135.23，127.64，122.50，67.20，51.40，51.25，36.44，35.45，32.91。C17H25N4O13S2的HRMSm/z(M+1)+要求值557.0860；實(shí)測(cè)值557.0853。在IIb8的替代制備方法中，在60℃下將13i(0.417g，0.75mmol)的DMF(10mL)溶液用LiCl(0.038g，1.00mmol)處理2小時(shí)，然后冷卻，倒入稀HCl中，用EtOAc萃取(3×80mL)。將產(chǎn)物處理并經(jīng)過硅膠色譜分離，用EtOAc/石油醚(1∶1至2∶1)洗脫，得到3-({2-[雙(2-氯乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鶀氨基)丙酸甲酯(15i)(0.16g，51％)，為黃色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.85(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.29(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，3.68(m，4H，2xCH2Cl)，3.63(s，3H，CO2CH3)，3.50(m，2H，CONHCH2)，3.41(m，4H，N(CH2)2)，2.64(m，2H，CH2CO2)；13CNMRδ171.59，165.28，145.81，145.31，140，89，135.89，127.45，122.26，54.08，51.40，41.51，35.35，32.92。然后進(jìn)一步洗脫，得到IIb8(0.124g，33％)，與上面制備的樣品相同。3-{[2-((2-溴乙基){2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}氨基)-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基}丙酸甲酯(IIb9)在60℃下，將13i(2.04g，3.67mmol)用LiBr(0.318g，3.67mmol)于EtOAc(100mL)中處理3小時(shí)，繼之以硅膠色譜處理，用EtOAc/石油醚(1∶1至1∶0)洗脫，得到3-({2-[雙(2-溴乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲?；鶀氨基)丙酸甲酯(14i)(0.55g，29％)，為黃色泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.86(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.29(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，3.63(s，3H，CO2CH3)，3.60-3.43(m，10H)，2.64(m，2H，CH2CO2)；13CNMRδ171.60，165.28，145.39，145.36，141.07，136.05，127.44，122.25，53.97，51.44，35.35，32.95，29.96。C15H1979Br2N4O7的HRMSm/z(M+1)+要求值524.9621；實(shí)測(cè)值524.9616。進(jìn)一步洗脫得到IIb9(0.96g，48％)，為黃色泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.89(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.31(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.28(m，2H，CH2OMs)，3.63(s，3H，CO2CH3)，3.60-3.43(m，8H)，3.14(s，3H，OSO2CH3)，2.65(m，2H，CH2CO2)；13CNMRδ171.63，165.28，145.87，145.19，140，81，135.65，127.54，122.37，67.47，54.25，51.42，51.02，36.45，35.40，32.93，29.69。C16H2279BrN4O10S的HRMSm/z(M+1)+要求值541.0240；實(shí)測(cè)值541.0228，繼而得到原料13g(0.45g，22％)。實(shí)施例C采用流程3所述方法制備式IIc類似物甲磺酸2-[3-(氨基羰基)(2-氯乙基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯(IIc1)將3-[雙(2-羥基乙基)氨基]-2，6-二硝基苯甲酸甲酯[Palmer等人，J.Med.Chem.1996，39，2518](7.24g，22mmol)的CH2Cl2(120mL)溶液在冰浴中冷卻，一次性加入Et3N(15mL)和MsCl(8mL)。攪拌10分鐘后，加入飽和NaHCO3(100mL)，另外30分鐘后，將水相用CH2Cl2萃取(2×70mL)，合并有機(jī)相，干燥，在減壓下濃縮，殘余物經(jīng)過硅膠柱色譜純化。用EtOAc/石油醚(1∶1至1∶0)洗脫，得到粗的3-(雙{2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}氨基)-2，6-二硝基苯甲酸甲酯(16)(10.67g，100％)，為黃色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.32(d，J＝9.6Hz，1H，H-5)，7.75(d，J＝9.6Hz，1H，H-4)，4.32(m，4H)，3.88(s，3H)，3.67(m，4H)，3.14(m，6H)；13CNMRδ163.02，147.59，138.40，136.46，128.33，125.83，123.96，66.73，54.00，50.24，45.58，36.58。將16(10.6g，21.9mmol)用3NKOH(40mL)于二噁烷(200mL)中在室溫下水解15分鐘，繼而用1NHCl酸化，用EtOAc萃取，得到定量收率的粗的3-(雙{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}氨基)-2，6-二硝基苯甲酸(17)mp200-210℃，HRMSC13H18N3O12S2要求值m/z472.0332；實(shí)測(cè)值472.033，無需純化即可使用。將來自17(3.2g，6.8mmol)的酰氯(SOCl2/催化量的DMF)溶于Me2CO(30mL)，在冰浴中冷卻，用濃NH4OH(10mL)處理。攪拌10分鐘后，將反應(yīng)混合物用1NHCl酸化至pH2-3，然后蒸發(fā)大部分溶劑，使殘余物在EtOAc與水之間分配。將水層用EtOAc萃取(2×80mL)，合并有機(jī)萃取液，干燥，在減壓下蒸發(fā)。將殘余物直接吸附到硅膠上進(jìn)行色譜處理。用EtOAc/石油醚(從1∶1至1∶0)洗脫，得到IIc1(0.145g，5.2％mp(EtOAc)134-136℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.25(d，J＝9.3Hz，1H，H-5)，8.23(s，1H，NH)，7.89(s，1H，NH)，7.64(d，J＝9.3Hz，1H，H-6)，4.27(m，2H，CH2OMs)，3.73(m，2H)，3.66(m，2H)，3.59(m，2H)，3.15(s，3H)；13CNMRδ163.06，146.40，140.52，137.65，129.42，127.51，122.89，66.83，52.93，50.16，41.45，36.57。C12H15ClN4O8S分析計(jì)算值C，35.1；H，3.7；N，13.6；Cl，8.6；實(shí)測(cè)值C，35.5；H，3.7；N，13.6；Cl，8.6％。將柱子用EtOAc/MeOH(50∶1)洗脫，得到甲磺酸2-(3-(氨基羰基){2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}-2，6-二硝基苯胺基)乙酯(18a)(1.1g，34％)mp(EtOAc/MeOH/石油醚)160-162℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.26(d，J＝9.3Hz，1H，H-5)，8.23(s，1H，NH)，7.89(s，1H，NH)，7.66(d，J＝9.3Hz，1H，H-6)，4.27(m，4H，2x-CH2OMs)，3.63(m，4H，2x-CH2N)，3.15(s，6H，2xCH3SO3-)；13CNMRδ163.00，146.51，140.98，137.99，129.30，127.47，123.40，66.74，50.44，36.56。C13H18N4O11S2分析計(jì)算值C，33.2；H，3.9；N，11.9；實(shí)測(cè)值C，33.5；H，3.8；N，11.9％。甲磺酸2-[3-(氨基羰基)(2-溴乙基)-2，6-二硝基苯胺基]乙酯(IIc2)將LiBr(117mg，1.34mmol)一次性加入到18a(0.474g，1.0mmol)的Me2CO/EtOAc(1∶1，100mL)溶液中，將反應(yīng)混合物加熱至60℃達(dá)2小時(shí)。在減壓下除去揮發(fā)物，將殘余物直接吸附到硅膠上進(jìn)行色譜處理。用EtOAc/石油醚(1∶1)洗脫，得到3-[雙(2-溴乙基)氨基]-2，6-二硝基苯甲酰胺(19a)(95mg，21％)，為黃色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.25(d，J＝9.5Hz，1H，H-5)，8.22(s，1H，NH)，7.88(s，1H，NH)，7.63(d，J＝9.5Hz，1H，H-4)，3.68(m，4H)，3.58(m，4H(文獻(xiàn)[Palmer等人，J.Med.Chem.，1996，39，2518-2528])。進(jìn)一步用EtOAc/石油醚(3∶1)洗脫，得到IIc2(208mg，46％)mp(EtOAc/石油醚)143-145℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.25(d，J＝9.3Hz，1H，H-5)，8.23(s，1H，NH)，7.89(s，1H，NH)，7.64(d，J＝9.3Hz，1H，H-6)，4.28(m，2H，CH2OMs)，3.67(m，4H)，3.57(m，2H)，3.16(s，3H)；13CNMRδ163.05，146.17，140.49，137.68，129.42，127.53，122.89，66.85，52.92，50.04，36.57，29.95。C12H15BrN4O8S分析計(jì)算值C，31.7；H，3.3；N，12.3；Br，17.4。實(shí)測(cè)值C，31.9；H，3.3；N，12.2；Br，17.5％。從后面的洗脫液得到原料18a(150mg)。甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-2，6-二硝基苯胺基)乙酯(IIc3)將EtOAc(50mL)中的甲磺酸3-(3-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}{3-[(甲基磺?；?氧基]丁基}-2，4-二硝基苯胺基)-1-甲基丙基酯(18b)](310mg，0.6mmol)用LiBr(78mg，0.9mmol)處理，繼之以硅膠色譜處理，用EtOAc/石油醚(從1∶1至1∶0)洗脫，得到3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羥基乙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺(19b)(70mg，25％)，為泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.80(m，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H)，4.66(m，1H)，3.70(m，4H)，3.60(m，4H)，3.45(m，2H)，3.22(m，2H)；13CNMRδ161.4，145.8，140.2，137.5，129.2，127.6，122.6，59.0，52.6，41.7，30.0。C13H1779Br2N4O6的HRMS(FAB)計(jì)算值[M+H+]m/z482.9515；實(shí)測(cè)值482.9508。進(jìn)一步用EtOAc/MeOH(50∶2)洗脫，得到IIc3(118mg，39％)mp.94-97℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.80(m，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H)，4.67(m，1H)，4.27(m，2H)，3.63(m，4H)，3.57(m，2H)，3.45(m，2H)，3.26(m，2H)，3.15(s，3H)；13CNMRδ161.4，146.2，140.5，137.7，129.2，127.5，122.9，66.8，59.0，50.0，41.7，36.6，29.9。分析(C14H19BrN4O9S)C，H，N。甲磺酸2-((2-氯乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(IIc4)如上所述，使17的酰氯與3-氨基丙醇在Me2CO中在0℃下反應(yīng)，繼而產(chǎn)物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc/石油醚(1∶1)洗脫，得到IIc4(292mg，12％)mp(EtOAc/石油醚)104-109℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.44(m，1H，CHOH)，4.26(m，2H)，3.72(m，2H)，3.65(m，2H)，3.59(m，2H)，3.43(m，2H)，3.20(m，2H)，3.15(s，3H)，1.60(m，2H)；13CNMRδ161.09，146.42，140.49，137.65，129.23，127.58，122.91，66.82，58.22，52.88，50.11，41.44，36.57，36.37，31.57。C15H21ClN4O9S分析計(jì)算值C，38.5；H，4.5；N，12.0；Cl，7.5；實(shí)測(cè)值C，38.8；H，4.8；N，11.5；Cl，7.0％。進(jìn)一步用EtOAc洗脫，得到甲磺酸2-(3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(18e)(1.1g，41％)mp(EtOAc/MeOH/石油醚)160-162℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.66(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.43(m，1H，CHOH)，4.27(m，4H，2xCH2OMs)，3.63(m，4H，2xCH2N)，3.43(m，2H)，3.20(m，2H)，3.15(s，6H，2xCH3SO3)，1.60(m，2H)；13CNMRδ161.03，146.52，140.95，138.00，129.12，127.54，123.42，66.72，58.22，50.39，36.55，36.37，31.57。C16H24N4O12S2分析計(jì)算值C，36.4；H，4.6；N，10.6；實(shí)測(cè)值C，36.6；H，4.5；N，10.6％。甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，6-二硝基苯胺基)乙酯(IIc5)如上將EtOAc(200mL)中的18c(716mg，1.36mmol)用LiBr(175mg，2.0mmol)處理，繼之以硅膠色譜處理，用EtOAc/石油醚(從1∶1至1∶0)洗脫，得到3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羥基丙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺(19c)(289mg，42％)，為泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.23(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.62(d，J＝9.4Hz，1H，H-4)，4.47(m，1H，CHOH)，3.68(m，4H)，3.57(m，4H)，3.43(m，2H)，3.20(m，2H)，1.60(m，2H)；13CNMRδ161.20，146.90，140.20，137.53，129.36，127.69，122.56，58.29，52.64，36.42，31.61，30.13。C14H1979Br2N4O6的HRMSm/z(M+1)+要求值496.9671；實(shí)測(cè)值；496.9667。進(jìn)一步用EtOAc/MeOH(50∶2)洗脫，得到IIc5(270mg，39％)mp.115-117℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.43(m，1H，CHOH)，4.27(m，2H，CH2OMs)，3.66(m，4H，2xCH2N)，3.59(m，2H)，3.44(m，2H)，3.22(m，2H)，3.15(s，3H，CH3SO3)，1.60(m，2H)；13CNMRδ161.08，146.19，140.47，137.69，129.24，127.59，122.91，66.83，58.22，52.87，50.00，36.57，36.37，31.58，29.95。C15H21BrN4O9S分析計(jì)算值C，35.2；H，4.1；N，10.9；Br，15.4；實(shí)測(cè)值C，35.4；H，3.9；N，11.0；Br，16.3％。甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(4-羥基丁基)氨基]羰基}-2，6-二硝基苯胺基)乙酯(IIc6)將EtOAc(100mL)中的甲磺酸3-(3-{[(4-羥基丁基)氨基]羰基}{3-[(甲基磺?；?氧基]丁基}-2，4-二硝基苯胺基)-1-甲基丙酯(18d)(500mg，0.92mmol)用LiBr(110mg，1.4mmol)處理，繼之以硅膠色譜處理，用EtOAc/石油醚(從1∶1至1∶0)洗脫，得到3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羥基丁基)-2，6-二硝基苯甲酰胺(19d)(100mg，21％)，為泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.73(m，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H)，4.38(m，1H)，3.69(m，4H)，3.57(m，4H)，3.40(m，2H)，3.14(m，2H)，1.47(m，4H)；13CNMRδ161.0，145.8，140.2，137.6，129.3，127.6，122.6，60.2，52.6，30.0，29.6，24.8。C15H2079Br2N4O6的HRMS(FAB)計(jì)算值[M+H+]m/z510.9828；實(shí)測(cè)值510.9819。進(jìn)一步用EtOAc/MeOH(50∶2)洗脫，得到IIc6(117mg，30％)mp.114-117℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(m，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.37(m，1H)，4.27(m，2H)，3.65(m，4H)，3.57(m，2H)，3.35(m，2H)，3.16(m，2H)，3.15(s，3H)，1.47(m，4H)；13CNMRδ160.0，146.1，140.6，137.8，129.2，127.5，122.9，66.8，60.2，52.9，50.0，36.6，29.9，29.6，24.9。分析(C16H23BrN4O9S)C，H，N。甲磺酸2-((2-氯乙基)-3-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(IIc7)如上所述在0℃下使17的酰氯(2.4g，5.1mmol)與3-氨基-1，2-丙二醇在Me2CO中反應(yīng)，繼而產(chǎn)物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc洗脫，得到IIc7(240mg，10％)mp(EtOAc)100-105℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.72(d，J＝4.9，1H，CHOH)，4.52(t，J＝5.7，1H，CH2OH)，4.27(m，2H，CH2OMs)，3.74-3.50(m，10H)，3.15(s，3H，CH3SO3)，3.04(m，1H)；13CNMRδ161.48，146.38，140.55，137.73，129.28，127.51，122.88，69.89，66.83，63.57，52.95，50.17，42.55，41.43，36.58。C15H21ClN4O10S分析計(jì)算值C，37.2；H，4.4；N，11.6；Cl，7.2；實(shí)測(cè)值C，38.0；H，4.5；N，11.1；Cl，7.2％。進(jìn)一步用EtOAc/MeOH(50∶1)洗脫，得到甲磺酸2-(3-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(18e)(480mg，51％)mp(MeOH/EtOAc)60-63℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.78(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.66(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.72(d，J＝4.9，1H，CHOH)，4.52(t，J＝5.7，1H，CH2OH)，4.27(m，4H，2xCH2OMs)，3.63(m，4H)，3.52-3.30(m，5H)，3.15(s，3H，2xCH3SO3)，3.06(m，1H)；13CNMRδ161.43，146.49，141.01，138.07，129.15，127.47，123.36，69.89，66.73，63.67，50.44，42.55，36.56。C16H24N4O13S2分析計(jì)算值C，35.3；H，4.5；N，10.3；實(shí)測(cè)值C，35.8；H，4.5；N，10.5％。甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯(IIc8)如上將EtOAc(200mL)中的18e(0.92g，1.7mmol)用LiBr(170mg，1.95mmol)處理，繼之以硅膠色譜處理，用EtOAc/MeOH(50∶1)洗脫，得到3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-(2，3-二羥基丙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺(19e)(155mg，18％)，為黃色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.76(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.23(d，J＝9.5Hz，1H，H-5)，7.63(d，J＝9.5Hz，1H，H-6)，4.72(d，J＝5.1Hz，1H，CHOH)，4.52(t，J＝5.7Hz，1H，CH2OH)，3.70-3.50(m，11H)，3.04(m，1H)。C14H1979Br2N4O7的HRMSm/z(M+1)+要求值512.9621；實(shí)測(cè)值512.9603。進(jìn)一步洗脫得到IIc8(278mg，31％)mp(EtOAc)108-110℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.72(d，J＝4.9，1H，CHOH)，4.52(t，J＝5.7，1H，CH2OH)，4.27(m，2H，CH2OMs)，3.70-3.50(m，10H)，3.15(s，3H，CH3SO3)，3.06(m，1H)；13CNMRδ161.47，146.16，140.52，137.77，129.28，127.53，122.88，69.89，66.84，63.57，52.94，50.05，42.55，36.58，29.94；C15H21BrN4O10S分析計(jì)算值C，34.1；H，4.0；N，10.6；Br，15.0；實(shí)測(cè)值C，34.3；H，4.1；N，10.4；Br，15.4％；以及原料(200mg，22％)。甲磺酸2-[(2-氯乙基)-3-({[3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}羰基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯(IIc9)如上所述，使Me2CO中的17的酰氯(1.3g)與3-(4-嗎啉基)丙胺(1.0mL)在0℃下反應(yīng)，繼而產(chǎn)物經(jīng)過硅膠色譜處理，用EtOAc/MeOH(9∶1至4∶1)洗脫，得到IIc9(0.37g，25％)mp(EtOAc/石油醚)113-116℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.79(t，J＝5.6Hz，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.28(t，J＝5.3，2H)，3.73(t，J＝6.3，2H)，3.66(t，J＝5.2，2H)，3.60(t，J＝5.9，2H)，3.56(m，4H)，3.17(m，5H)，2.34(m，6H)，1.61(m，2H)；13CNMRδ161.07，146.44，140.44，137.62，129.23，127.60，122.92，66.81，66.12，55.40，53.19，52.85，50.10，41.45，37.30，36.56，25.12。C19H2935ClN5O9S的HRMSm/z(M+1)+要求值538.13745；實(shí)測(cè)值538.13869。從后面的洗脫液得到甲磺酸2-[{2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}-3-({[3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}羰基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯(18f)(0.93g，56％)，為黃色固體，mp(EtOAc/石油醚)90-95℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.79(t，J＝5.7Hz，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.28(t，J＝5.3，4H)，3.64(t，J＝5.2，4H)，3.55(t，J＝4.6，4H)，3.15(m，8H)，2.34(m，6H)，1.61(m，2H)；13CNMRδ161.03，146.55，140.90，137.97，129.10，127.56，123.43，66.72，66.12，55.39，53.19，50.37，37.29，36.55，25.13。C20H32N5O12S2的HRMSm/z(M+1)+要求值598.14889；實(shí)測(cè)值598.14894。甲磺酸2-[(2-溴乙基)-3-({[3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}羰基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯(IIc10)將LiBr(107mg，1.3mmol)一次性加入溫?zé)岬?8f(0.53g，0.89mmol)的EtOAc(50mL)溶液中。將反應(yīng)混合物加熱至60℃達(dá)2小時(shí)，然后在減壓下除去揮發(fā)物，將殘余物直接吸附到硅膠上進(jìn)行色譜處理。用EtOAc/MeOH(10∶1至5∶1)洗脫，得到3-[雙(2-溴乙基)氨基]-N-[3-(4-嗎啉基)丙基]-2，6-二硝基苯甲酰胺(19f)(109mg，22％)，為泡沫；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(t，J＝5.6Hz，1H，CONH)，8.23(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，3.68(m，4H)，3.57(m，8H)，3.17(m，2H)，2.34(m，6H)，1.61(m，2H)。HRMSC15H1179Br2N4O5要求值m/z438.9253；實(shí)測(cè)值438.9228。從后面的洗脫液得到IIc10(293mg，57％)mp(EtOAc/石油醚)114-117℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.79(t，J＝5.6Hz，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.28(t，J＝5.2，2H)，3.66(m，J＝5.2，4H)，3.56(m，J＝4.6，6H)，3.17(m，5H)，2.34(m，6H)，1.61(m，2H)；13CNMRδ161.07，146.22，140.39，137.65，129.21，127.62，122.92，66.83，66.07，55.37，53.15，52.83，49.99，37.28，36.57，29.97，25.07。C19H2979BrN5O9S的HRMSm/z(M+1)+要求值582.08694；實(shí)測(cè)值582.08639。從后面的洗脫液得到原料18f(124mg，23％)。下表2和3給出表1所列化合物的生物學(xué)數(shù)據(jù)。表2所選擇的表1化合物實(shí)例對(duì)NTR-轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的相對(duì)細(xì)胞毒活性(18小時(shí)暴露)表2注釋a人卵巢野生型(NR-)是SKOV3，轉(zhuǎn)染型(NR+)是SC3.2。b人結(jié)腸野生型(NR-)是WIDR，轉(zhuǎn)染型(NR+)是WC14.10。c中國(guó)倉(cāng)鼠成纖維細(xì)胞野生型(NR-)是T-78-1，轉(zhuǎn)染型(NR+)是T79-A3。dIC50在評(píng)價(jià)期結(jié)束時(shí)，減少細(xì)胞數(shù)量至對(duì)照組的50％所需的藥物濃度(以微摩爾計(jì))。e比率＝IC50(NR-)/IC50(NR+)f4小時(shí)暴露表3.所選擇的表1化合物實(shí)例對(duì)有氧與缺氧腫瘤細(xì)胞的相對(duì)細(xì)胞毒活性表3注釋a人肺癌細(xì)胞系b野生型c比率＝IC50(需氧)/IC50(缺氧)d用人細(xì)胞色素P450還原酶(P450R)轉(zhuǎn)染的A549從表2和3數(shù)據(jù)清楚地看到，本發(fā)明的硝基苯胺衍生物的實(shí)例包括這樣的化合物，它們具有細(xì)胞毒性劑的活性以及在低氧下被大腸桿菌NTR和/或內(nèi)源性還原酶還原性活化的另外的能力。在前述說明中提到過具有其已知等價(jià)形式的試劑或者整數(shù)，這些等價(jià)形式引用在此，如同分別闡述一樣。盡管已經(jīng)參照某些實(shí)施方式和實(shí)施例描述了本發(fā)明，不過應(yīng)該領(lǐng)會(huì)到的是可以對(duì)所提供的實(shí)施方式和實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步的調(diào)整和改變，而不背離本發(fā)明的范圍。權(quán)利要求1.由通式(I)代表的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽其中X代表基團(tuán)NO2、CN或SO2R1之一，其中R1代表可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基，其中當(dāng)R1代表叔胺時(shí)，進(jìn)一步包括該叔胺的N-氧化物衍生物；Y代表基團(tuán)OR2、NHCOR2、CONR2CO2R3、CONR2嗎啉、CONHR2、CONR2R3、CONHOR2、CONHSO2R2、SO2NH2、SO2NHR2或SO2NR2R3之一，其中每個(gè)R2和R3獨(dú)立地代表H、可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基；A和B各自獨(dú)立地代表鹵素、OSO2R4、OSO2NH2、OSO2NHR4或OSO2NR4R5，其中每個(gè)R4和R5獨(dú)立地代表可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基，其中當(dāng)每個(gè)R4和R5獨(dú)立地代表叔胺時(shí)，進(jìn)一步包括該叔胺的N-氧化物衍生物；；條件是(i)A≠B，且除外。2.如權(quán)利要求1所述的由式(IIa-IIc)之一代表的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽，其中X、Y、A和B如權(quán)利要求1關(guān)于式(I)化合物所定義；條件是(i)A≠B，且作為式(IIa)化合物的除外。3.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥，選自5-[(2-溴乙基)(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺，甲磺酸2-[5-(氨基羰基)(2-溴乙基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯，甲磺酸2-[5-(氨基羰基)(2-碘乙基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)5-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)5-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-5-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-[2-(氨基羰基)(2-氯乙基)-4，6-二硝基苯胺基]乙酯，甲磺酸2-[2-(氨基羰基)(2-溴乙基)-4，6-二硝基苯胺基]乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-碘乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2-({[3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}羰基)-4，6-二硝基苯胺基]乙酯，3-{[2-((2-氯乙基){2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}氨基)-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基}丙酸甲酯，3-{[2-((2-溴乙基){2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}氨基)-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基}丙酸甲酯，甲磺酸2-[3-(氨基羰基)(2-氯乙基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯，甲磺酸2-[3-(氨基羰基)(2-溴乙基)-2，6-二硝基苯胺基]乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-2，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-氯乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(4-羥基丁基)氨基]羰基}-2，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-氯乙基)-3-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-[(2-氯乙基)-3-({[3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}羰基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯，和甲磺酸2-[(2-溴乙基)-3-({[3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}羰基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯。4.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥，選自由式(IIIa-IIIc)之一代表的化合物其中X、Y如權(quán)利要求1關(guān)于式(I)化合物所定義，及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽。5.權(quán)利要求4所述的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥，選自甲磺酸2-[5-(氨基羰基)(2-溴乙基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)5-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)5-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-5-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-[2-(氨基羰基)(2-溴乙基)-4，6-二硝基苯胺基]乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羥基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2-({[3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}羰基)-4，6-二硝基苯胺基]乙酯，3-{[2-((2-溴乙基){2-[(甲基磺?；?氧基]乙基}氨基)-3，5-二硝基苯甲?；鵠氨基}丙酸甲酯，甲磺酸2-[3-(氨基羰基)(2-溴乙基)-2，6-二硝基苯胺基]乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2-羥基乙基)氨基]羰基}-2，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羥基丙基)氨基]羰基}-2，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(4-羥基丁基)氨基]羰基}-2，6-二硝基苯胺基)乙酯，甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2，3-二羥基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯胺基)乙酯，和甲磺酸2-[(2-溴乙基)-3-({[3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}羰基)-2，4-二硝基苯胺基]乙酯。6.制備由通式(I)代表的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽的方法其中X代表基團(tuán)NO2、CN或SO2R1之一，其中R1代表可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基，其中當(dāng)R1代表叔胺時(shí)，進(jìn)一步包括該叔胺的N-氧化物衍生物；Y代表基團(tuán)OR2、NHCOR2、CONR2CO2R3、CONR2嗎啉、CONHR2、CONR2R3、CONHOR2、CONHSO2R2、SO2NH2、SO2NHR2或SO2NR2R3之一，其中每個(gè)R2和R3獨(dú)立地代表H、可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基；A和B各自獨(dú)立地代表鹵素、OSO2R4、OSO2NH2、OSO2NHR4或OSO2NR4R5，其中每個(gè)R4和R5獨(dú)立地代表可選地被一個(gè)或多個(gè)羥基和/或一個(gè)或多個(gè)氨基取代的C1-6-低級(jí)烷基，其中當(dāng)每個(gè)R4和R5獨(dú)立地代表叔胺時(shí)，進(jìn)一步包括該叔胺的N-氧化物衍生物；；條件是(i)A≠B，該方法包括以下步驟使下式化合物與一定量堿金屬鹵化物在極性溶劑中反應(yīng)，得到不對(duì)稱的鹵代-甲磺酸酯化合物。7.制備如權(quán)利要求2或權(quán)利要求3所述的由通式(IIa-IIc)之一代表的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽的方法，其中X、Y、A和B如權(quán)利要求1關(guān)于式(I)化合物所定義；條件是(i)A≠B，該方法包括以下步驟使下式化合物與一定量堿金屬鹵化物或甲磺酰鹵在極性溶劑中反應(yīng)，得到不對(duì)稱的鹵代-甲磺酸酯化合物。8.制備如權(quán)利要求4或權(quán)利要求5所述的由通式(IIIa-IIIc)之一代表的基于硝基苯胺的不對(duì)稱氮芥及其藥學(xué)上可接受的衍生物和鹽的方法，其中X、Y如權(quán)利要求1關(guān)于式(I)化合物所定義；該方法包括以下步驟使下式化合物與一定量LiBr在極性溶劑中反應(yīng)，得到式(IIIa-IIIc)之一的溴代甲磺酸酯。9.如權(quán)利要求6至8任意一項(xiàng)所述的方法，其中極性溶劑選自乙腈、二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、三乙胺、丙酮及其混合物。10.如權(quán)利要求6至9任意一項(xiàng)所述的方法，其中該堿金屬鹵化物選自下列一種或多種LiCl、LiBr、NaI和NaBr。11.通過如權(quán)利要求6至10任意一項(xiàng)所述方法的任意一種得到的式(I)化合物。12.一種方法，包括向?qū)ο蟮哪[瘤細(xì)胞施用治療有效量的如權(quán)利要求1至5任意一項(xiàng)所定義的式I化合物的步驟，該式I化合物用作適合于聯(lián)合至少一種硝基還原酶的GDEPT(基因-依賴性酶-前體藥物療法)的前體藥物、用作低氧-選擇性細(xì)胞毒素。13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中硝基還原酶被大腸桿菌nfsB基因或者被梭狀芽孢桿菌屬的種所編碼。14.一種方法，包括向?qū)ο蟮陌卸[瘤細(xì)胞施用治療有效量的如權(quán)利要求1所定義的式I化合物的步驟，該式I化合物用作適合于聯(lián)合至少一種硝基還原酶的GDEPT(基因-依賴性酶-前體藥物療法)的前體藥物、用作抗癌劑。15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中硝基還原酶被大腸桿菌nfsB基因或者被梭狀芽孢桿菌屬的種所編碼。16.采用至少一種硝基還原酶的細(xì)胞消融治療方法，其中該方法包括施用“治療有效量”的如權(quán)利要求1所述的式I化合物的步驟，以消融對(duì)象組織中的腫瘤細(xì)胞，其中所述組織表達(dá)至少一種硝基還原酶。17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中硝基還原酶被大腸桿菌nfsB基因或者被梭狀芽孢桿菌屬的種所編碼。18.根據(jù)權(quán)利要求16或權(quán)利要求17的方法，其中細(xì)胞消融療法提供基本上最小的副作用。19.藥物組合物，包括治療有效量的如權(quán)利要求1所定義的式I化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑、助劑、載體、緩沖劑或穩(wěn)定劑。20.有效量的如權(quán)利要求1所定義的式I化合物在藥物制備中的用途，該藥物用于GDEPT中以靶定有需要的對(duì)象的癌細(xì)胞。21.有效量的如權(quán)利要求1所定義的式I化合物在藥物制備中的用途，該藥物用于在細(xì)胞消融療法中靶定有需要的對(duì)象的癌細(xì)胞。全文摘要提供了通式(I)的硝基苯胺類不對(duì)稱氮芥以及制備方法和它們作為聯(lián)合硝基還原酶的GDEPT(基因－依賴性酶－前體藥物療法)與細(xì)胞消融療法的前體藥物、作為低氧－選擇性細(xì)胞毒素和作為抗癌劑的用途。文檔編號(hào)C07C311/39GK1711236SQ200380102812公開日2005年12月21日申請(qǐng)日期2003年10月8日優(yōu)先權(quán)日2002年10月8日發(fā)明者W·A·丹尼,G·J·阿特韋爾,楊尚金,W·R·威爾森申請(qǐng)人:奧克蘭聯(lián)合服務(wù)有限公司