專利名稱：附子及烏頭屬植物中脂類生物總堿的分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于將從附子及烏頭屬植物中脂類生物總堿的分離方法。
背景技術(shù)：
附子及烏頭屬植物是傳統(tǒng)中醫(yī)臨床用藥的常用中藥材。具有強(qiáng)心、利尿、鎮(zhèn)痛、麻醉、消炎、提高免疫力等作用。附子及烏頭屬植物中主要含有三類生物堿單酯型生物堿，雙酯型生物堿和脂類生物堿?，F(xiàn)代藥理研究證明，雙酯型生物堿為附子及烏頭屬中的劇毒成分，其有效量與其中毒量非常接近，沒(méi)有應(yīng)用價(jià)值；單酯型生物堿毒性教小，但其生物活性也較差，也沒(méi)有利用價(jià)值；脂類生物堿具有鎮(zhèn)痛、消炎等顯著的生物活性，與雙酯型生物堿比較，其毒性較小，是一種具有廣泛藥理活性的藥物，具有重要的研究?jī)r(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。
由于脂類生物堿之間結(jié)構(gòu)極其相似，其物理和化學(xué)性質(zhì)也接近，所以對(duì)它們的分離是極為困難的。國(guó)外曾經(jīng)對(duì)附子的甲醇提取物直接柱層析，按生物堿的骨架結(jié)構(gòu)分離了脂類生物堿(Katagawa，Chem.Pharm.Bull.30(2)758-761(1982))，但是附子甲醇提取物成分復(fù)雜，分離比較困難，產(chǎn)率較低。Yili Bai改用雙酯型生物堿和長(zhǎng)鏈脂肪酸加吡啶合成了單一的脂類生物堿(Yili Bai，Journal ofNatural Products，57(7)963-970(1994))，但是單一的雙酯型生物堿原料的獲取本身比較困難，并且雙酯型生物堿在加熱的過(guò)程中易于分解，產(chǎn)率較低，很難進(jìn)行大量制備。目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)對(duì)脂類生物堿分離的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是將分離得到的脂類生物總堿，按其生物堿骨架結(jié)構(gòu)的不同加以分離。
脂類生物堿的結(jié)構(gòu)相似，其差別在于脂肪酸長(zhǎng)鏈的差別和生物堿骨架的差別，脂肪酸長(zhǎng)鏈的差別十分微小，目前的技術(shù)尚無(wú)成功分離差別如此小的化合物的先例，所以只能根據(jù)其生物堿骨架的差別進(jìn)行分離。脂類生物堿由于含有長(zhǎng)脂肪酸酯鏈，所以其堿性小、極性也小，適合使用硅膠柱分離，二氯甲烷-乙醚-乙醇以不同配比梯度進(jìn)行柱層析，按照極性由小到大的順序即把不同生物堿骨架結(jié)構(gòu)的脂類生物堿分離。
本發(fā)明將從附子、川烏、草烏、雪上一支蒿分離出來(lái)的脂類生物總堿用硅膠柱，二氯甲烷-乙醚-乙醇分別以5-6∶3-4∶0-2比例梯度柱層析，用電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)檢測(cè)，得到三組脂類生物堿1)苯甲酰中烏頭原堿長(zhǎng)鏈脂肪酸酯(Lipomesaconitine)2)苯甲酰烏頭原堿長(zhǎng)鏈脂肪酸酯(Lipoaconitine)3)苯甲酰次烏頭原堿長(zhǎng)鏈脂肪酸酯(Lipohypaconitine)本發(fā)明首次將從附子及烏頭屬植物中提取出了的脂類生物總堿進(jìn)行分離，上述三組脂類生物堿的分離效率分別在35％，13％，3％以上。


附圖1是脂類生物總堿的電噴霧質(zhì)譜，由圖可以看出樣品中不含有單酯型和雙酯型生物堿，只含有3種類型的脂類生物堿；附圖2、3、4分別為脂類生物總堿經(jīng)過(guò)分離后得到的苯甲酰中烏頭原堿長(zhǎng)鏈脂肪酸酯(Lipomesaconitine)，苯甲酰次烏頭原堿長(zhǎng)鏈脂肪酸酯(Lipohypaconitine)以及苯甲酰烏頭原堿長(zhǎng)鏈脂肪酸酯(Lipoaconitine)的電噴霧質(zhì)譜圖，由圖可以確定脂類生物堿按照生物堿骨架不同而得到有效分離。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1將從生附子中提取出的純凈的脂類生物總堿4.34克，用硅膠柱，二氯甲烷-乙醚-乙醇分別以6∶3∶1、5∶4∶1、5∶3∶2比例梯度柱層析，用電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)檢測(cè)，得到三組脂類生物堿Lipomesaconitine 1.56克(35.9％)Ltipoaconitine 0.82克(18.9％)Lipohypaconitine 0.34克(7.8％)實(shí)施例2將從制附子中提取出的純凈的脂類生物總堿13.50克，用硅膠柱，二氯甲烷-乙醚-乙醇分別以6∶3∶1、5∶4∶1、5∶3∶2比例梯度柱層析，用電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)檢測(cè)，得到三組脂類生物堿
Lipomesaconitine 8.78克(65.0％)Lipoaconitine 2.13克(13.5％)Lipohypaconitine 1.06克(7.8％)實(shí)施例3將從川烏中提取出的純凈的脂類生物總堿6.09克，用硅膠柱，二氯甲烷-乙醚-乙醇分別以6∶4∶0、6∶3∶1、5∶4∶1、5∶3∶2的比例梯度洗脫，用電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)檢測(cè)，即得到三組脂類生物堿Lipomesaconitine 3.15克(51.7％)Lipoaconitine 0.98克(14.2％)Lipohypaconitine 0.24克(3.9％)實(shí)施例4將從草烏中提取出的純凈的脂類生物總堿9.62克，用硅膠柱，二氯甲烷(CH2Cl2)、乙醚((CH3CH2)2O)、乙醇(CH3CH2OH)分別以6∶3∶1、5∶4∶1、5∶3∶2的比例進(jìn)行柱層析，用電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)檢測(cè)，得到三組脂類生物堿Lipomesaconitine 5.03克(52.3％)Lipoaconitine 2.13克(22.1％)Lipohypaconitine 0.95克(9.9％)
實(shí)施例5將從雪上一支蒿中提取出的純凈的脂類生物總堿5.71克用硅膠柱，二氯甲烷-乙醚-乙醇分別以6∶4∶0、6∶3∶1、5∶4∶1、5∶3∶2的比例梯度柱層析，用電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)檢測(cè)，得到三組脂類生物堿Lipomesaconitine 2.46克(43.1％)Lipoaconitine 0.86克(14.9％)Lipohypaconitine 0.23克(4.0％)。
權(quán)利要求
1一種附子及烏頭屬植物中脂類生物總堿的分離方法，其特征在于，將從附子、川烏、草烏和雪上一支蒿分離出來(lái)的脂類生物總堿用硅膠柱，二氯甲烷-乙醚-乙醇分別以6∶3-4∶0-1、5-6∶3-4∶1、5∶3∶2比例梯度柱層析，用電噴霧質(zhì)譜檢測(cè)，得到三組脂類生物堿苯甲酰中烏頭原堿長(zhǎng)鏈脂肪酸酯苯甲酰烏頭原堿長(zhǎng)鏈脂肪酸酯苯甲酰次烏頭原堿長(zhǎng)鏈脂肪酸酯。
全文摘要
本發(fā)明屬于一種從附子及烏頭屬植物中分離提取的脂類生物總堿進(jìn)行分離的方法。采用不同的二氯甲烷(CH
文檔編號(hào)C07G5/00GK1569864SQ200410010819
公開(kāi)日2005年1月26日 申請(qǐng)日期2004年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月23日
發(fā)明者劉淑瑩, 許慶軒, 劉志強(qiáng), 宋鳳瑞, 王勇 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所