專利名稱：一種紫杉醇的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及大規(guī)模制備紫杉醇的方法，特別提供了一種前處理除雜工藝順序?yàn)樘崛　滔噍腿　?lián)合樹(shù)脂層析的方法。
背景技術(shù)：
紫杉醇通過(guò)其穩(wěn)定微管的獨(dú)特機(jī)理發(fā)揮抗癌作用。目前，在臨床上廣泛用于卵巢癌、乳腺癌、小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌、食道癌、頭頸癌、抗化療白血病等多種癌癥的化療，具有確切的療效。正如美國(guó)NCI所預(yù)測(cè)，紫杉醇是20世紀(jì)發(fā)現(xiàn)的最重要的抗癌新藥。作為唯一促進(jìn)微管聚合的抗癌新藥，紫杉醇產(chǎn)品Taxol和Taxotere已成為主要的抗癌藥物之一。
制備紫杉醇的方法包括(1)、自紫杉或其它可再生的紫杉屬植物中提取Taxol；(2)、自其它天然紫杉烷(10-去乙?；涂ㄍII)化合物半合成Taxol或Taxotere(10-去乙?；涂ㄍII仍自紫杉屬植物中分離獲得)；(3)、從頭全合成。目前為止，僅僅提取和半合成方法實(shí)現(xiàn)了商業(yè)化，因紫杉醇結(jié)構(gòu)復(fù)雜，已報(bào)道的全合成方法路線長(zhǎng)、收率低、成本極高，無(wú)法達(dá)到商業(yè)化的要求。
制備紫杉醇的植物資源及原料來(lái)源包括(1)天然資源；(2)人工栽培；(3)植物器官、組織或細(xì)胞的培養(yǎng)；(4)微生物發(fā)酵。植物細(xì)胞培養(yǎng)和微生物發(fā)酵還處于研究階段，目前尚未實(shí)現(xiàn)規(guī)模化工業(yè)生產(chǎn)，因此，現(xiàn)有資源還無(wú)法擺脫依賴天然資源的現(xiàn)狀。全世界約有11種紅豆杉，主要分布在北半球溫帶和亞熱帶。我國(guó)有4個(gè)品系和1個(gè)變種。除漿果紅豆杉、加拿大紅豆杉和雜交品種的曼地亞紅豆杉外，其余紅豆杉生長(zhǎng)緩慢，需100多年才能成樹(shù)，并且資源極少，屬不可再生資源。紫杉醇在該屬植物的樹(shù)皮中含量為0.0001～0.069％，平均0.015％，收率0.01％。每提取生產(chǎn)1公斤紫杉醇需10噸紫杉樹(shù)皮，需砍伐3000棵成樹(shù)。目前全球每年紫杉醇需求量為400公斤左右，即便將全部的天然資源采伐，也只能滿足短期的需要。
紫杉醇資源珍貴，價(jià)格居高難下，制備的收率成為制藥紫杉醇成本的關(guān)鍵因素。在天然原料中紫杉醇的含量低、紫杉烷系列化合物共存，并含有大量的植物臘、色素和樹(shù)膠等雜質(zhì)，因而，紫杉醇的分離難度極高。目前常用的工藝過(guò)程是將液～液萃取、色譜分離和重結(jié)晶手段有機(jī)結(jié)合，并反復(fù)多次采用色譜手段。萃取和重結(jié)晶是紫杉醇收率難以提高的制約因素，色譜過(guò)程中溶劑消耗大也使其加工成本居高難下。
紫杉醇的制備過(guò)程一般為浸出(或超聲或微波提取)→己烷脫脂→二氯甲烷或氯仿萃取得粗提物→2～3次工業(yè)色譜粗分離→結(jié)晶→溴化(或氧化)→正相色譜精分離→重結(jié)晶得產(chǎn)品。在此基礎(chǔ)上發(fā)展了許多改進(jìn)工藝，包括固相萃取和專用反相柱的使用以及省去溴化過(guò)程等。生產(chǎn)紫杉醇的一個(gè)最關(guān)鍵技術(shù)是工業(yè)色譜技術(shù)。工業(yè)色譜(industrial preparativechromatography or process chromatography，IPC or PC)是以公斤為計(jì)量單位的規(guī)模制備技術(shù)，它是現(xiàn)有大規(guī)模制備技術(shù)中，人類掌握的分離能力最高的規(guī)模制備技術(shù)。工業(yè)色譜的巨大潛力在于對(duì)目標(biāo)成分與相鄰成分間的分離能力。但是其致命的缺陷是被分離體系中，無(wú)需色譜就能分離的雜質(zhì)亦會(huì)競(jìng)爭(zhēng)吸附位點(diǎn)、增加傳質(zhì)阻力，大幅度降低色譜分離能力甚至導(dǎo)致不可分離。因此，在進(jìn)行色譜分離前，使用用萃取、沉淀和結(jié)晶等傳統(tǒng)技術(shù)最大限度地除去雜質(zhì)，是成功地進(jìn)行色譜制備分離的基礎(chǔ)。
Wani(J.Am.Chem.Soc.，1971932325-2327)和Miller(J.Org.Chem.，1981；461469)等報(bào)道將醇提物溶于最少量的醇、丙酮或乙晴水溶液，用己烷、石油醚或輕汽油等非極性溶劑萃取脫酯后，用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取水相中紫杉醇，極性雜質(zhì)則殘留于水相中被除去。
美國(guó)專利USP56544448公開(kāi)了用最少量的醇、丙酮或乙晴等極性溶劑溶解醇提物，通過(guò)上述溶液中添加己烷、石油醚或輕汽油等非極性溶劑將紫杉醇沉淀析出，非極性雜質(zhì)則殘留于母液中被除去的操作過(guò)程。
中國(guó)專利CN1342155A和美國(guó)專利USP5279949、5475120、5670673以及USP6136989公開(kāi)了用最少量的醇、丙酮或乙晴等極性溶劑溶解醇提物，通過(guò)在上述溶液中添加水使紫杉醇沉淀析出，極性雜質(zhì)則殘留于母液中被除去的工藝過(guò)程。
中國(guó)專利CN1356992A(USP6452024)公開(kāi)了用最少量的醇、丙酮或乙晴等極性溶劑溶解醇提物，首先向溶液中添加堿性水溶液(乙酸鈉、乙酸鉀或三(羥甲基)氨基甲烷)或酸性水溶液(鹽酸、乙酸或檸檬酸)，將紫杉醇沉淀析出，酸性或堿性雜質(zhì)則殘留于母液中與紫杉醇分離。
中國(guó)專利CN1377882A和美國(guó)專利USP6469186公開(kāi)了用堿金屬碳酸鹽、堿金屬碳酸氫鹽、三乙胺或Tris等堿性水液洗滌上述二氯甲烷相(或乙酸乙酯相)，以進(jìn)一步除去色素等雜質(zhì)。
Nair(USP5279949)、Hong(WO96/34973)和Kasitu(USP6469186)等報(bào)道了活性碳脫色的使用方法。
Senilh(J.Nat.Prod.，1984，47131-137)、Rao(USP5380916、5475120、5670673)、Nair(USP5478736)Liu(USP6229027)和Kasitu(USP6469186)等報(bào)道了快速色譜(Flash Chromatography)除去雜質(zhì)的方法。
上述除雜法中，萃取法和沉淀法除去雜質(zhì)的能力均不徹底，需反復(fù)多次操作，常伴隨相當(dāng)量的紫杉醇的損失；堿洗滌法操作繁瑣，溶劑損耗大，同時(shí)，紫杉醇在堿性條件下不穩(wěn)定，易因水解造成紫杉醇的損失；活性碳脫色和快速色譜除雜法，因?qū)ψ仙即季哂胁豢赡嫖降奶攸c(diǎn)，也會(huì)造成一定量的紫杉醇的損失。
張志強(qiáng)(高等化學(xué)工程學(xué)報(bào)，1999，13(2)161-164)和元進(jìn)英(離子交換與吸附，1994，10(6)543-545)等報(bào)道的離子交換樹(shù)脂的脫色作用尚不具備使用水平，所使用溶劑體系統(tǒng)不適合規(guī)模生產(chǎn)。而Liu(USP5969165、6229027)、Li(CN96102442.9)、朱法科(CN1442413A)和劉開(kāi)祿(CN1377882A)公開(kāi)的多孔有機(jī)高分子聚合物的反相色譜法，其目的在于取代常規(guī)正相色譜，進(jìn)行紫杉醇的分離。
因而，紫杉醇的生產(chǎn)的迫切需要一個(gè)除雜徹底、紫杉醇收率高，并且操作簡(jiǎn)便、消耗低前處理除雜方法。
發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容為了提高紫杉醇的回收率，并充分發(fā)揮續(xù)后色譜的分離能力，本發(fā)明的目的在于提供一種低成本、簡(jiǎn)單、方便、大批量地制備紫杉醇的前處理除雜方法。
本發(fā)明提供了一種紫杉醇的制備方法，過(guò)程為
——提取，以紅豆杉為原料獲得含有紫杉醇的提取物；——除雜，除去提取物中的大量雜質(zhì)；——色譜分離，其特征在于所述的除雜過(guò)程為——固相萃取，固相萃取除去脂溶性雜質(zhì)，同時(shí)將紫杉烷化合物分離為紫杉醇/三尖杉寧堿、10-去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III和7-木糖紫杉醇三組；——樹(shù)脂聯(lián)用層析，吸附樹(shù)脂除去極性雜質(zhì)，離子交換樹(shù)脂除去色素等負(fù)電荷雜質(zhì)和/或正電荷雜質(zhì)，同時(shí)，將目標(biāo)紫杉烷分為紫杉醇/三尖杉寧堿、10-去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III和7-木糖-紫杉醇三個(gè)部分。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法中，樹(shù)脂聯(lián)用是指大孔吸附樹(shù)脂與陰離子交換樹(shù)脂和/和陽(yáng)離子交換樹(shù)脂聯(lián)用。三種樹(shù)脂獨(dú)立裝柱，串聯(lián)使用，串聯(lián)順序?yàn)榇罂孜綐?shù)脂→陰離子交換樹(shù)脂→陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、大孔吸附樹(shù)脂→陽(yáng)離子交換樹(shù)脂→陰離子交換樹(shù)脂或大孔吸附樹(shù)脂→陰離子交換樹(shù)脂。若將離子交換樹(shù)脂置于吸附樹(shù)脂之前，兩者之間需增加一步濃縮工序，帶來(lái)諸多不利。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法中，大孔吸附樹(shù)脂指以苯乙烯-二乙烯苯共聚物(styrene-divinylbenzene copolymers)或聚甲基丙烯酸酯(polymethacrylate)等有機(jī)聚合物為材料的吸附樹(shù)脂。如南開(kāi)大學(xué)化工廠生產(chǎn)的D3520、D4006、D4020、H103、H107和X-5，以及美國(guó)Amberlite XAD系列中非極性吸附樹(shù)脂。吸附樹(shù)脂用量為紅豆杉樹(shù)皮、枝葉重的0.5～0.8倍(w/w)，醇提浸膏重的1～1.5倍(w/w)。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法中，陰離子交換樹(shù)脂為堿性苯乙烯系列陰離子交換樹(shù)脂。如南開(kāi)大學(xué)化工廠生產(chǎn)的201、D201、D201GF、D290、D296、D280、D284、D261、D262、D301、D370和D372，美國(guó)Amberlite IRA系列和Dowex，日本Diaion SA，俄國(guó)AB-17，以及法國(guó)Duolite等。陰離子交換樹(shù)脂用量為紅豆杉樹(shù)皮、枝葉重的0.3～0.5倍(w/w)，醇提浸膏重的0.5～1倍(w/w)。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法中，陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為強(qiáng)酸性苯乙烯系列陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。如南開(kāi)大學(xué)化工廠生產(chǎn)的001、002、003、004、D072、D061、D001-CC、D001-SS和NKC-9，美國(guó)Amberlite IR、Amberlite ER、Amberlyste和Dowex 50，日本Diaion，以及俄KY等。用量為紅豆杉樹(shù)皮、枝葉重的0.3～0.5倍(w/w)，醇提浸膏重的0.5～1倍(w/w)。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法中，上柱樣品為經(jīng)固相固相萃取后的粉末樣品。洗脫液為有機(jī)溶劑水溶液，濃度范圍為20～100％(V/V)。有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、乙腈之一種或其混合物，以丙酮為佳。洗脫方式可以是梯度洗脫，也可以是等度分段洗脫。等度分段洗脫時(shí)，以10％的濃度差為一段，每段洗脫體積為2～3個(gè)柱體積。洗脫液流速為1～2個(gè)柱體積/小時(shí)。如采用40％的丙酮溶液3個(gè)柱體積→50％的丙酮溶液3個(gè)柱體積→60％的丙酮溶液3個(gè)柱體積→90％的丙酮溶液3個(gè)柱體積進(jìn)行等度分段洗脫。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法中，固相萃取中固體樣品的制備過(guò)程為紅豆杉醇提液濃縮至原體積的1/5～1/3后，與適量硅藻土[紅豆杉樹(shù)皮、枝葉重的0.5～0.8倍(w/w)]混勻，或紅豆杉醇提浸膏溶于最少量溶劑(甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷或氯仿)后與硅藻土[浸膏2～4倍(w/w)]混勻，經(jīng)減壓干燥制成粉末。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法中，固相萃取的洗脫液為不同極性的有機(jī)溶劑。不同極性的有機(jī)溶劑通過(guò)非極性溶劑(己烷、石油醚、輕汽油、氯仿、乙酸乙酯或其混合液等)與適量的極性溶劑(如氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇或其混合液等)混合配制。極性溶劑用量為混合溶劑的溶劑量的0％～100％。洗脫液用量為7～18個(gè)柱床積。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法中，固相萃取的方式可以是柱層析洗脫，也可以是固液萃取。柱層析洗脫可以是梯度洗脫，也可以是等度分段洗脫。柱層析洗脫具有設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、溶劑用量少和洗脫徹底的優(yōu)勢(shì)。如采用己烷/乙酸乙酯(70/30)3個(gè)柱體積→己烷/乙酸乙酯(65/35)3個(gè)柱體積→己烷/乙酸乙酯(60/40)3個(gè)柱體積→乙酸乙酯(70/30)3個(gè)柱體積→己烷/甲醇(96/4)3個(gè)柱體積→丙酮3個(gè)柱體積進(jìn)行等度分段洗脫。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法中，樹(shù)脂聯(lián)用層析在有效除去雜質(zhì)的同時(shí)，將目標(biāo)紫杉烷分為紫杉醇/三尖杉寧堿、10-去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III和7-木糖-紫杉醇A/B/C三個(gè)部分，簡(jiǎn)化了其純化工藝并降低了其續(xù)后的分離費(fèi)用。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法中，吸附樹(shù)脂的作用是取代傳統(tǒng)的二氯甲烷萃取法除去極性雜質(zhì)，其除雜能力、溶劑消耗和紫杉醇損失均優(yōu)于二氯甲烷萃取法；離子交換樹(shù)脂的作用是取代酸堿沉淀法或堿液洗滌法除去色素等負(fù)電荷雜質(zhì)和正電荷雜質(zhì)，其除雜能力、溶劑消耗和紫杉醇損失均優(yōu)于酸堿沉淀法或堿液洗滌法；固相萃取的主要作用在于傳統(tǒng)的己烷萃取法除去脂溶性雜質(zhì)，保護(hù)樹(shù)脂不受污染、延長(zhǎng)樹(shù)脂受命。固相萃取同時(shí)還具有吸附相色譜的作用，將紫杉烷化合物分離為紫杉醇/三尖杉寧堿、10-去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III和7-木糖紫杉醇三組，減輕了后續(xù)色譜的負(fù)荷。固相萃取的除雜能力、溶劑消耗和紫杉醇損失同樣優(yōu)于己烷萃取。
本發(fā)明紫杉醇的制備方法具有如下優(yōu)點(diǎn)1、固相萃取與樹(shù)脂法聯(lián)用具有處理量大、去除雜質(zhì)徹底、回收率高、溶劑消耗低、操作簡(jiǎn)便以及所有樣品制備用載體、樹(shù)脂和色譜填料均可再生使用等優(yōu)勢(shì)，基本克服了傳統(tǒng)方法(萃取法、沉淀法、堿洗滌法、活性碳脫色和快速色譜除雜法)中紫杉醇的大量損失；2、避免了萃取法、沉淀法和堿洗滌法雜質(zhì)去除不徹底，需反復(fù)多次、操作繁瑣、溶劑損耗大等工藝弊端；3、10-去乙酰巴卡亭III和巴卡亭III的回收工藝大為簡(jiǎn)化、收率高；4、極大地提高了后續(xù)色譜分離能力、降低了其負(fù)荷和費(fèi)用。
本發(fā)明為大批量制備紫杉醇提供了一種簡(jiǎn)單方便、回收率高、成本低的方法。使用本方法制備的紫杉醇含量≥99.5％，目標(biāo)紫杉烷總收率≥80％，紫杉醇產(chǎn)率≥0.025％，總產(chǎn)率(紫杉烷+10-去乙酰巴卡亭III)≥0.035％。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1樹(shù)脂處理丙酮浸泡3天(每天換液一次)→取出樹(shù)懸浮于乙醇中、裝柱→按每小時(shí)3個(gè)柱體積的流速乙醇洗柱洗至流出液清澈→蒸餾水洗凈乙醇→浸泡于70％乙醇中→3天后用水洗凈乙醇即可使用。對(duì)于離子交換樹(shù)脂還需進(jìn)一步的處理，陰離子交換樹(shù)脂的處理程序?yàn)?個(gè)柱體積的2N鹽酸洗柱→水洗至中性→3個(gè)柱體積的2N HaOH洗柱→水洗至中性；陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的處理程序?yàn)?個(gè)柱體積2N的HaOH洗柱柱→水洗至中性→3個(gè)柱體積2N的鹽酸洗→水洗至中性。各種溶液的洗脫速度為每小時(shí)候1.5～2.5個(gè)柱體積。
實(shí)施例2樹(shù)脂再生吸附樹(shù)脂的再生3個(gè)柱體積的95％乙醇洗柱→蒸餾水洗凈乙醇。
離子交換樹(shù)脂的再生與相應(yīng)的樹(shù)脂處理相同。
本發(fā)明實(shí)施例中，各種溶液的洗脫速度為每小時(shí)候1.5～2.5個(gè)柱體積，洗脫液體積為3個(gè)柱體積。
實(shí)施例3提取、樣品制備紅豆杉樹(shù)皮(或莖葉)→干燥、粉碎過(guò)篩(40目，100公斤)→甲醇提取(室溫～60℃、500L×1、150L×3、24h×4)→≤45℃減壓濃縮至200L→加入硅藻土(30kg)混勻→≤45℃真空靶式干燥→固體粉末(51.5kg)實(shí)施例4固相萃取固體粉末(51.5kg)→上不銹鋼柱(φ500×1000)→己烷/乙酸乙酯(70/30)3個(gè)柱體積→己烷/乙酸乙酯(65/35)3個(gè)柱體積→己烷/乙酸乙酯(60/40)3個(gè)柱體積→乙酸乙酯(70/30)3個(gè)柱體積→己烷/甲醇(96/4)3個(gè)柱體積→丙酮3個(gè)柱體積(流速1.0L/min)。紫杉醇/三尖杉寧堿段→≤45℃真空分部濃縮回收溶劑→殘留物A(1.8公斤)。
實(shí)施例4樹(shù)脂聯(lián)用層析殘留物A(1.8公斤)→甲醇溶解→加入硅藻土(5kg)混勻→≤45℃真空干燥→固體粉末→上于D4020柱頭(φ300×1500)→丙酮水溶液分步洗脫(20％3個(gè)柱體積，30％、40％、50％、60％和70％各2個(gè)柱體積，90％1個(gè)柱體積，流速流速1.0L/min)→20％段洗脫液由D4020柱直接排入溶劑回收槽，其余各段直接流經(jīng)→D280柱(φ200×1500)→D4020柱(φ200×1500)→分段收集(每段5～10L)→分部合并(經(jīng)TLC和HPL檢測(cè)后按紫杉醇/三尖杉寧堿和10-去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III二個(gè)部分合并)→≤45℃真空分部濃縮回收丙酮→水相4℃過(guò)夜→過(guò)濾收集沉淀→真空干燥→沉淀A(131g，主要含紫杉醇/三尖杉寧堿)，沉淀B(152g，主要含10-去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III)。
實(shí)施例5紫杉醇/三尖杉寧堿的純化沉淀A(113g)→溶于最少量丙酮→加入硅藻土(250g)混勻→減壓干燥→粉末樣品→上中性Al2O3柱(Al2O34.5kg，φ80×1500)→0.0％～5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫(流速50～100mL/min)→分段收集(每段1～1.5L)→分部合并(經(jīng)TLC和HPL檢測(cè)后按紫杉醇/三尖杉寧堿和10-去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III兩個(gè)部分合并)→紫杉醇/三尖杉寧堿部分→≤45℃真空分部濃縮回收丙酮→獲殘余物(35.3g，含紫杉醇75％、三尖杉寧堿14％)。
實(shí)施例6溴化及紫杉醇的分離獲殘余物(35.3g)→溶于180mL氯仿中→加入液溴0.9mL→0℃避光攪拌反應(yīng)5min→上中性SiO2柱(SiO21.6kg，φ80×800)→四氯化碳洗脫(3L)→1∶1的己烷/乙酸乙酯混合液洗脫(流速30～50mL/min)→分段收集(每段0.5～1.0L)→分部合并(經(jīng)TLC和HPL檢測(cè)后按紫杉醇和溴化三尖杉寧堿兩個(gè)部分合并)→紫杉醇部分→≤45℃真空分部濃縮回收溶劑→獲殘余物(23.75g)。
實(shí)施例7紫杉醇的結(jié)晶、干燥獲殘余物(23.75g)→40℃溶于300mL丙酮中→攪拌下滴加40℃蒸餾水至出現(xiàn)混濁→靜置至室溫→4℃結(jié)晶24小時(shí)→過(guò)濾回收結(jié)晶→真空干燥→紫杉醇產(chǎn)品(20.5g)。
權(quán)利要求
1.一種紫杉醇的制備方法，過(guò)程為——提取，以紅豆杉為原料獲得含有紫杉醇的提取物；——除雜，除去提取物中的大量雜質(zhì)；——色譜分離，其特征在于所述的除雜過(guò)程為——固相萃取，固相萃取除去脂溶性雜質(zhì)，同時(shí)將紫杉烷化合物分離為紫杉醇/三尖杉寧堿、10-去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III和7-木糖紫杉醇三組；——樹(shù)脂聯(lián)用層析，吸附樹(shù)脂除去極性雜質(zhì)，離子交換樹(shù)脂除去色素等負(fù)電荷雜質(zhì)和/或正電荷雜質(zhì)，同時(shí)，將目標(biāo)紫杉烷分為紫杉醇/三尖杉寧堿、10-去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III和7-木糖-紫杉醇三個(gè)部分。
2.按照權(quán)利要求1所述紫杉醇的制備方法，其特征在于所述的樹(shù)脂聯(lián)用是指大孔吸附樹(shù)脂與陰離子交換樹(shù)脂和/或陽(yáng)離子交換樹(shù)脂單獨(dú)裝柱，串聯(lián)使用；串聯(lián)順序?yàn)榇罂孜綐?shù)脂→陰離子交換樹(shù)脂→陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、大孔吸附樹(shù)脂→陽(yáng)離子交換樹(shù)脂→陰離子交換樹(shù)脂、大孔吸附樹(shù)脂→陰離子交換樹(shù)脂或大孔吸附樹(shù)脂→陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。
3.按照權(quán)利要求2所述樹(shù)脂聯(lián)用制備紫杉醇的方法，其特征在于所述的大孔吸附樹(shù)脂指以苯乙烯-二乙烯苯共聚物或聚甲基丙烯酸酯有機(jī)聚合物為材料的吸附樹(shù)脂；吸附樹(shù)脂用量為紅豆杉樹(shù)皮、枝葉重的0.5～0.8倍w/w，醇提浸膏重的1～1.5倍w/w；所述的陰離子交換樹(shù)脂為堿性苯乙烯系列陰離子交換樹(shù)脂；陰離子交換樹(shù)脂用量為紅豆杉樹(shù)皮、枝葉重的0.3～0.5倍w/w，醇提浸膏重的0.5～1倍w/w；所述的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為強(qiáng)酸性苯乙烯系列陽(yáng)離子交換樹(shù)脂；陽(yáng)離子交換樹(shù)脂用量為紅豆杉樹(shù)皮、枝葉重的0.3～0.5倍w/w，醇提浸膏重的0.5～1倍w/w。
4.按照權(quán)利要求2所述紫杉醇的制備方法，其特征在于所述樹(shù)脂聯(lián)用層析過(guò)程中，洗脫液為有機(jī)溶劑水溶液，濃度范圍為20～100％V/V；有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、乙腈之一種或其混合物；洗脫方式為梯度洗脫，或者是等度分段洗脫。
5.按照權(quán)利要求4所述紫杉醇的制備方法，其特征在于所述等度分段洗脫時(shí)，以10％的濃度差為一個(gè)間隔段，每段的洗脫體積為2～3個(gè)柱體積，洗脫液流速為1～2個(gè)柱體積/小時(shí)。
6.按照權(quán)利要求1所述紫杉醇的制備方法，其特征在于所述固相萃取過(guò)程中，固體樣品的制備過(guò)程為——紅豆杉醇提液濃縮至原體積的1/5～1/3后，與紅豆杉樹(shù)皮、枝葉重0.5～0.8倍w/w的硅藻土混勻；或紅豆杉醇提浸膏溶于最少量的甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷或氯仿溶劑后與浸膏2～4倍w/w的硅藻土混勻；——經(jīng)減壓干燥制成粉末。
7.按照權(quán)利要求1所述紫杉醇的制備方法，其特征在于所述固相萃取中，洗脫液為非極性溶劑與極性溶劑的混合溶劑，極性溶劑用量占溶劑量的0％～100％；洗脫液用量為7～18個(gè)柱床積。
8.按照權(quán)利要求7所述紫杉醇的制備方法，其特征在于所述非極性溶劑選自己烷、石油醚、輕汽油、氯仿、乙酸乙酯之一種或多種，極性溶劑選自氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇之一種或多種。
9.按照權(quán)利要求1所述紫杉醇的制備方法，其特征在于所述固相萃取的方式是柱層析洗脫，或者是固液萃取。
10.按照權(quán)利要求8所述紫杉醇的制備方法，其特征在于所述柱層析洗脫是梯度洗脫，或者是等度分段洗脫。
全文摘要
一種紫杉醇的制備方法，過(guò)程為提取，除雜，色譜分離，其特征在于除雜過(guò)程為固相萃取，固相萃取除去脂溶性雜質(zhì)，同時(shí)將紫杉烷化合物分離為紫杉醇/三尖杉寧堿、10－去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III和7－木糖紫杉醇三組；樹(shù)脂聯(lián)用層析，吸附樹(shù)脂除去極性雜質(zhì)，離子交換樹(shù)脂除去色素等負(fù)電荷雜質(zhì)和/或正電荷雜質(zhì)，同時(shí)，將目標(biāo)紫杉烷分為紫杉醇/三尖杉寧堿、10－去乙酰巴卡亭III/巴卡亭III和7－木糖－紫杉醇三個(gè)部分。本發(fā)明為大批量制備紫杉醇提供了一種簡(jiǎn)單方便、回收率高、成本低的方法。使用本方法制備的紫杉醇含量≥99.5％，目標(biāo)紫杉烷總收率≥80％，紫杉醇產(chǎn)率≥0.025％，總產(chǎn)率(紫杉烷+10－去乙酰巴卡亭III)≥0.035％。
文檔編號(hào)C07D305/14GK1670018SQ20041002141
公開(kāi)日2005年9月21日 申請(qǐng)日期2004年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月18日
發(fā)明者楊凌, 何克江, 楊義 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所