專利名稱：抗病毒劑西多福韋新衍生物及中間體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗病毒藥物領(lǐng)域，更具體涉及西多福韋新衍生物及中間體。
背景技術(shù)：
病毒是能感染所有生物細(xì)胞的微小有機(jī)體，它可利用宿主細(xì)胞的代謝系統(tǒng)進(jìn)行寄生和增殖，在動(dòng)物或人體內(nèi)產(chǎn)生細(xì)胞毒性或引起各種疾病。病毒性疾病是目前傳播最廣、發(fā)病率最高的感染性疾病，據(jù)西方國家不完全統(tǒng)計(jì)，病毒性疾病在整個(gè)疾病的發(fā)病率中已達(dá)60％以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了細(xì)菌感染的16％，而且在這些病毒性疾病中，有的一旦被感染后病毒就能在體內(nèi)存在數(shù)年或終身存在，有的則有誘發(fā)癌變的可能性。因此研究開發(fā)新型的抗病毒藥物是許多藥物工作者致力的目標(biāo)。
巨細(xì)胞病毒(Cytomegalovirus，CMV)屬于皰疹病毒的一種，是嚴(yán)重危害人體健康的病原體，所有年齡段的人群都可能感染CMV，而對先天性感染的新生兒、免疫缺損的患者(如AIDS病人)、接受器官移植和接受治療的癌癥患者等免疫受到抑制的病人，CMV感染均可能致命。感染CMV后，一般呈無癥狀隱性感染，一旦免疫功能缺損時(shí)將導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，其臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、昏睡、白細(xì)胞減少、血小板減少、肝炎、肺炎、腦炎、胃炎及其它全身感染癥狀；巨細(xì)胞病毒病可影響40％AIDS病人，特別是那些CD4+細(xì)胞數(shù)目低于50/μl的患者會(huì)表現(xiàn)出嚴(yán)重癥狀，如脈絡(luò)視網(wǎng)膜炎、食管炎及神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。尸檢及臨床研究表明視網(wǎng)膜炎為AIDS病人CMV感染最常見的表現(xiàn)，可占CMV病的75％-80％。神經(jīng)系統(tǒng)癥狀不普遍，但5％-10％AIDS病人可發(fā)生胃腸CMV疾病。
由于病毒的復(fù)制必須依賴宿主的細(xì)胞和酶系統(tǒng)，而能抑制病毒復(fù)制的藥物，也可能同時(shí)干擾正常細(xì)胞的代謝。因此，要求抗病毒藥物必須有高度的選擇性，既能阻斷病毒的復(fù)制，而又不損傷未感染的細(xì)胞。病毒復(fù)制增殖周期，可分為四個(gè)階段，即吸附、入侵、核酸復(fù)制和蛋白質(zhì)的合成。不同類型的抗病毒藥物可作用于不同階段而發(fā)揮作用。
1)吸附階段在此過程中病毒吸附于細(xì)胞上，然后入侵，如果阻止吸附，利用抗體與病毒抗原結(jié)合，則可達(dá)到預(yù)防病毒感染的目的。如用丙種球蛋白預(yù)防麻疹和甲型病毒性肝炎，用乙型肝炎高效免疫球蛋白預(yù)防乙肝。
2)入侵階段在此階段如能有效地阻止病毒進(jìn)入細(xì)胞，就能成功地預(yù)防和治療病毒感染。如用金剛烷胺等使改變細(xì)胞膜電荷，阻止入侵細(xì)胞。
3)核酸復(fù)制階段病毒侵入細(xì)胞后，脫殼，復(fù)制核酸，如果用核苷類藥物如碘苷、三氮唑核苷、阿糖腺苷、無環(huán)鳥苷等，在體內(nèi)磷酸化成單磷酸、二磷酸及三磷酸衍生物，可抑制合成核酸所需要的多種酶，阻斷病毒RNA或DNA的復(fù)制，從而達(dá)到治療病毒病的目的。
4)病毒蛋白質(zhì)合成病毒通過誘導(dǎo)細(xì)胞去拷貝病毒的遺傳物質(zhì)和制造蛋白質(zhì)來進(jìn)行復(fù)制。利福霉素、酞丁安等可通過抑制蛋白聚合酶來抑制病毒蛋白質(zhì)合成。
一個(gè)理想的抗病毒藥物應(yīng)能有效地干擾(或阻止)病毒的復(fù)制，而又不影響正常細(xì)胞代謝。目前臨床上應(yīng)用的抗病毒藥物按化學(xué)結(jié)構(gòu)主要可分為核苷類、三環(huán)胺類、焦磷酸類、多肽類等，其中，核苷類抗病毒藥物的種類最多，約占65％，應(yīng)用最為廣泛，為一類重要的抗病毒藥物。核苷類藥物主要作用于病毒核酸復(fù)制階段。
西多福韋(Cidofovir，HPMPC)是開環(huán)核苷酸類似物，由美國Gilead公司開發(fā)，注射用西多福韋于1996年5月經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)上市，法國和加拿大也相繼批準(zhǔn)使用，商品名為Vistide，只供靜脈輸注，適用于治療AIDS患者的CMV視網(wǎng)膜炎，劑量為375mg/瓶西多福韋。其軟膏可用于治療HIV的生殖器疣和HSV-2的生殖器皰疹，尚在臨床試驗(yàn)研究中。西多福韋能抑制病毒DNA聚合酶，對人CMV有很強(qiáng)的抑制作用，對其它皰疹病毒如單純皰疹I(lǐng)、II型病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、皰疹6型病毒及腺病毒、人乳頭瘤狀病毒也有很強(qiáng)的活性。此藥不僅具有半衰期長的優(yōu)點(diǎn)，而且無需第一步的一磷酸化，臨床證明更昔洛韋耐藥株仍對西多福韋敏感。
西多福韋可看作單磷酸更昔洛韋的類似物。核苷類藥物在體內(nèi)被病毒細(xì)胞激酶先被單磷酸化再被三磷酸化而發(fā)揮作用，因此，從理論上看體外磷酸化修飾核苷應(yīng)有抗病毒活性，且毒副作用不會(huì)加大。有文獻(xiàn)報(bào)道單磷酸Ara、單磷酸ACV抗HSV作用分別強(qiáng)于Ara、ACV，且水溶性增大。體外磷酸化ACV繞過體內(nèi)病毒TK磷酸化過程，故單磷酸ACV作用強(qiáng)于ACV。但是因?yàn)榱姿狨ゲ糠值母邩O性同細(xì)胞膜的親脂性是難以相容的，磷酸化無環(huán)鳥苷幾乎無抗病毒活性。其原因可能是由于所有上述化合物對于病毒細(xì)胞系僅僅產(chǎn)生(如果有的話)有限的細(xì)胞活性，估計(jì)它們透過細(xì)胞膜的能力差，還不足以引起生物效應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
藥物的作用強(qiáng)弱既取決于藥物分子的藥效學(xué)性質(zhì)，也與其藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)有關(guān)。不少藥物雖可能有較強(qiáng)的藥效，但因諸如胃腸道吸收、組織、器官的特異性分布等藥代動(dòng)力學(xué)的缺陷，限制了藥效的發(fā)揮。為了改善這些缺陷，前藥設(shè)計(jì)是較為常用的一種方法。Harper于1959年提出前藥原理，其原理是指把有活性或活性較高的藥物(原藥或稱母體藥物)轉(zhuǎn)變成非活性或活性較低的化合物，這些化合物在體內(nèi)經(jīng)酶或化學(xué)作用，釋放出原藥而發(fā)揮藥理作用。這種非活性或活性較低的化合物就是前藥，其本身雖無活性或活性較低，但有比原藥較好的物理學(xué)、化學(xué)或藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。
本發(fā)明的的目的，是通過結(jié)構(gòu)改造賦予藥物以有益的性質(zhì)，主要包括1)改變體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，調(diào)整藥物在體內(nèi)的吸收和分布，即生物利用度；2)改善藥物的穩(wěn)定性和溶解性；3)減低毒性和不良反應(yīng)；4)提高向特定部位的轉(zhuǎn)運(yùn)和分布；
5)延長作用時(shí)間等。
綜合分析這些核苷類前藥設(shè)計(jì)，均是對核苷類化合物糖基部分的修飾，主要有以下幾種類型1、糖基末端羥基與氨基酸的碳端成酯鍵，而提高其口服利用度；2、糖基末端羥基與末端的磷酸側(cè)鏈成內(nèi)環(huán)，以降低其毒副作用；3、糖基末端的磷酸與氯代特戊酸甲酯反應(yīng)成酯，以改善其脂水分配系統(tǒng)，提高藥物抗病毒活性。
發(fā)明人采用先分別合成糖基部分中間體及堿基部分中間體，再將二者縮合成關(guān)鍵中間體，由關(guān)鍵中間體經(jīng)進(jìn)一步衍化而得目標(biāo)化合物糖基部分中間體(R)-2，3-縮異丙叉甘油醇甲烷磺酰酯(5)的合成以D-甘露醇(1)為原料，在丙酮中用ZnCl2為催化劑反應(yīng)得化合物(2)，(2)在高碘酸鈉作用下氧化斷裂得醛(3)，它在硼氫化鉀作用下氫化得醇(4)，醇與甲烷磺酰氯作用得中間體(5)。
堿基部分中間體苯甲酰胞嘧啶(6)的合成以吡啶為溶劑，將胞嘧啶與苯甲酰氯在室溫下反應(yīng)45分鐘后，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值使苯甲酰胞嘧啶析出，攪拌2h結(jié)晶完全，減壓過濾，冰醋酸重結(jié)晶，收率90％。

關(guān)鍵中間體(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11)的合成以苯甲酰胞嘧啶(6)及(R)-2，3-縮異丙叉甘油醇甲烷磺酸酯(5)為原料在碳酸鉀的作用下反應(yīng)得(7)，化合物(7)在濃鹽酸作用下開環(huán)得化合物(8)，再與三苯氯甲烷作用將伯醇羥基保護(hù)，所得化合物(9)在氫化鈉的作用下與對甲苯磺酰氧甲基磷酸二乙酯反應(yīng)得(10)，(10)用氨水解脫去苯甲酰保護(hù)基得關(guān)鍵中間體(11)。
目標(biāo)化合物的合成目標(biāo)化合物以關(guān)鍵中間體(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11)為原料，在縮合劑的作用下與Boc-氨基酸(12A-12E)縮合得化合物(13A-13E)，再脫除Boc保護(hù)基、三苯甲基保護(hù)基并水解磷酸酯得目標(biāo)物(I-1-I-5)。
式中R為-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H5、-CH3、-H、-CH(CH3)2。
具體實(shí)施例方式
下面通過下述實(shí)施例更加詳細(xì)地說明本發(fā)明，但是，下述實(shí)施例并不可理解為是對本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1 中間體(R)-2，3-縮異丙叉甘油醇甲烷磺酰酯(5)的制備1、制備1，2-5，6-雙(二氧異丙叉)甘露醇(2)40g(0.293mol)氯化鋅、250mL丙酮加入37.5g(0.206mol)甘露醇(1)，室溫?cái)嚢?0-24h，將45g(0.325mol)碳酸鉀溶于45mL熱水中，滴加入反應(yīng)瓶中，攪拌15-20分鐘，過濾，50ml×3水洗滌，濾液加入約15mL濃氨水，濃縮得白色固體，加入少量水，用二氯甲烷萃取3次，無水硫酸鈉干燥，直接用于下一步反應(yīng)。如蒸干二氯甲烷層可得51.75g白色膏狀固體，收率97-98％(文獻(xiàn)收率87％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.68(dd，H-1，H-6)，3.27(m，4H，H-2，H-3，H-4，H-5)2、制備(S)-2，3-縮異丙叉甘油醛(3)51.75g(0.197mol)1，2-5，6-雙(二氧異丙叉)甘露醇(2)的二氯甲烷液加入50g(0.233mol)研細(xì)的高碘酸鈉，室溫?cái)嚢瑁渭?mL飽和碳酸氫鈉液，攪拌反應(yīng)24h。過濾，室溫濃縮，得50.11g淡黃色油狀固體。收率92％(文獻(xiàn)收率為91％)。
1HNMR(CDCl3)δ 4.20-4.05(m，1H，CH)，3.88-3.76(m，1H，CH2O)，3.73-3.53(m，1H，CH2O)，1.50-1.33(m，6H，2CH3)3、制備(S)-2，3-縮異丙叉甘油醇(4)50.11(0.385mol)(S)-2，3-縮異丙叉甘油醛(3)溶于200mL甲醇中，加入25g(0.462mol)硼氫化鉀，室溫?cái)嚢柽^夜，反應(yīng)24h，濃縮蒸干，加入5mL氨水，30ml水，加入二氯甲烷攪拌，分出二氯甲烷，水層用二氯甲烷50mL×3洗滌，合并二氯甲烷，無水硫酸鈉干燥，濃縮蒸干，得45.79g淡黃色油狀物，收率90％(文獻(xiàn)收率91％)。
1H NMR(CDCl3)δ4.20-4.05(m，1H，CH)，4.02-3.97(t，J＝5Hz，2H CH2OH)，3.88-3.76(m，1H，1fromCH2O)，3.73-3.53(m，1H，1from CH2O)，1.50-1.34(m，6H，2CH3)4、制備(R)-2，3-縮異丙叉甘油醇甲烷磺酰酯(5)19g(0.142mol)(S)-2，3-縮異丙叉甘油醇(4)溶于100mL二氯甲烷中，冰鹽浴冷卻，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下滴加30mL三乙胺，再滴入16.454g(o.142mol)甲烷磺酰氯溶于30mL二氯甲烷的溶液，冰鹽浴冷卻下攪拌1.5h后，去冰鹽浴，室溫?cái)嚢?h，加入40mL水，分出二氯甲烷，水層用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷，分別用水、飽和碳酸氫鈉液、飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得28.76g淡黃色油狀物，收率91％(文獻(xiàn)收率為93％)。通過柱層析(展開劑為石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)可得純白色油狀物。[α]D20-4.21(C＝5.5，MeOH)[lit[α]D20-4.34(C＝5.21，MeOH)]1H NMR(CDCl3)δ4.40-3.67(m，5H，H-1’，H-2’，H-3’)，3.14(s，3H，SO2CH3)，1.50-1.23(m，6H，2CH3)實(shí)施例2 中間體苯甲酰胞嘧啶(6)的制備
3g(0.027mol)胞嘧啶加入300ml吡啶，再滴加37.5mL苯甲酰氯，室溫?cái)嚢?，約半小時(shí)滴完，滴畢，攪拌45分鐘，滴加入2N鹽酸，室溫?cái)嚢?h，抽濾，固體用5％氫氧化鈉溶解，再滴入2N鹽酸，冰箱放置過夜，抽濾，真空干燥，得5.8g白色固體，mp＞300℃(文獻(xiàn)mp＞300℃)，收率95％(文獻(xiàn)收率為89％)。
1H NMR(d6-DMSO)δ11.17(s，1H，NH)，11.27(s，1H，NH)，8.18(d，J＝7Hz，1H，H-6)，7.96(d，J＝7Hz，2H，2×BzH)，7.85(d，J＝6Hz，1H，H-5)，7.76-7.46(m，3H，3×BzH)實(shí)施例3 中間體(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11)的制備1、(S)-N1-[2，3-O-縮異丙叉-2，3-(二羥基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(7)的制備方法1研細(xì)的苯甲酰胞嘧啶(6)6g(0.0276mol)及5.4g(0.0390mol)研細(xì)的碳酸鉀，加入無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)120mL，油浴加熱至90℃，緩慢滴加5.2g(0.0267mol)(R)-2，3-縮異丙叉甘油醇甲烷磺酰酯(5)溶于50mLDMF的溶液，約1h滴完，反應(yīng)完全，抽濾，DMF洗滌沉淀，濾液減壓濃縮，所得固體中加入300mL二氯甲烷，攪拌約2h，過濾，用二氯甲烷洗滌沉淀，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，柱層析分離得白色固體3.2g，收率33％(文獻(xiàn)收率為34％)。Mp194-196℃(文獻(xiàn)Mp195-197℃)方法26g(0.0276mol)研細(xì)的苯甲酰胞嘧啶(6)和5.4g(0.0390)碳酸鉀加入120mlDMF，滴加5.2g(0.0267mol)(R)-2，3-縮異丙叉甘油醇甲烷磺酰酯(5)的DMF液，微波反應(yīng)10分鐘，抽濾，DMF洗滌沉淀，濾液減壓濃縮，所得固體中加入300ml二氯甲烷，攪拌約2h，過濾，用二氯甲烷洗滌沉淀，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，柱層析分離得白色固體3g，收率33％。
1H NMR(d6-DMSO)δ7.98-7.95(d，J＝6Hz，1H，H-6)，7.83-7.76(d，J＝14Hz，1H，H-5)，7.67-7.26(m，5H，5×BzH)，4.51-4.45(m，1H，H-2’)，4.21-4.08(m，2H，H-1’andH-3’)，3.88-3.84(dd，J＝7，14Hz，1H，H-1’)，3.82-3.00(m，1H，H-3’)，1.43(m，3H，CH3)，1.34(m，3H，CH3)2、(S)-N1-[(2，3-二羥基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(8)的制備3g(9.11mmol)(S)-N1-[2，3-O-縮異丙叉-2，3-(二羥基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(7)加入20ml甲醇，滴加3mL濃鹽酸，攪拌2h，冰箱放置過夜，過濾，濾渣用冷甲醇洗，得白色固體，真空干燥，得2.57g白色固體，收率為92％。Mp190-192℃(文獻(xiàn)Mp193-195℃)1H NMR(d6-DMSO)δ11.17(s，1H，NH)，11.27(s，1H，NH)，8.18(d，J＝7Hz，1H，H-6)，7.96(d，J＝7Hz，2H，2×BzH)，7.85(d，J＝6Hz，1H，H-5)，7.46-7.76(m，3H，3×BzH)，4.67-4.58(m，1H，H-2’)，4.20-4.08(m，2H，H-1’and H-3’)，3.91-3.84(dd，J＝7，14Hz，1H，H-1’)，3.29-3.27(dd，J＝6，9Hz，1H，H-3’)3、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-羥基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(9)的制備1g(3.4mmol)(S)-N1-[(2，3-二羥基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(8)、1.059g(3.8mmol)三苯基氯甲烷、21mg(0.16mmol)DMAP加入30mL吡啶，回流反應(yīng)5h，減壓蒸除吡啶，加入40mL碳酸氫鈉飽合液，二氯甲烷萃取，二氯甲烷層分別用飽和碳酸氫鈉液，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，得粘稠淡黃色油狀物，加入石油醚，攪拌3h，過濾，得2g類白色固體。收率為84％(文獻(xiàn)收率為82％)。Mp123-126℃(文獻(xiàn)Mp122-123℃)1H NMR(d6-DMSO)δ 11.17(s，1H，NH)，11.27(s，1H，NH)，8.18(d，J＝7Hz，1H，H-6)，7.96(d，J＝7Hz，2H，2×BzH)，7.85(d，J＝6Hz，1H，H-5)，7.46-7.76(m，19H，3×BzH，15×TrH)，4.67-4.58(m，1H，H-2’)，4.38-4.08(m，2H，H-1’andH-3’)，3.91-3.84(dd，J＝7，14Hz，1H，H-1’)，3.70-3.63(dd，J＝6，9Hz，1H，H-3’)4、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(10)的制備
1.13g(2.01mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-羥基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(9)加入30mLDMF和15mL石油醚，冰鹽浴冷卻，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入18mg(0.75mmol)氫化鈉，保溫反應(yīng)2h，再加入0.95g(2.9mmol)二乙基[(對甲苯磺酸)甲基]磷酸酯(14)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2天，加入水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得1.63g黃色油狀物，直接用于下一步反應(yīng)。
1H NMR(d6-DMSO)δ7.80-7.75(d，J＝4Hz，1H，H-6)，7.37-7.31(d，J＝2Hz，1H，H-5)，7.30-7.20(m，20H，5×BzH，15×TrH)，4.20-4.05(m，5H，H-1’，H-2’，H-3’)，2.93-2.88(d，J-10，2H，OCH2P)，2.44(s，4H，4×CH2)，1.37-1.24(m，6H，2×CH3)5、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11)的制備1.63g(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(10)加入100mL甲醇，通入氨氣至飽和，室溫?cái)嚢?h，減壓蒸干，得1.38g黃色油狀物，直接用于下一步反應(yīng)。
1H NMR(d6-DMSO)δ11.17(s，1H，NH)，7.99-7.77(d，J＝4Hz，1H，H-6)，7.76-7.75(d，J＝2Hz，1H，H-5)，7.37-7.20(m，15H，15×TrH)，4.20-4.05(m，5H，H-1’，H-2’，H-3’)，2.93-2.88(d，J-10，2H，OCH2P)，2.44(s，4H，4×CH2)，1.37-1.24(m，6H，CH3)實(shí)施例4 羰基二咪唑CDI(15)的制備12g(0.176mol)咪唑溶于60mL二氯甲烷，滴別5g(0.0168mol)三光氣溶于25mL二氯甲烷的溶液，冰鹽浴冷卻下攪拌1h，室溫?cái)嚢?h，過濾，用二氯甲烷洗濾餅，二氯甲烷層減壓濃縮至20mL，加入100mL石油醚，冰箱放置放置過夜，有大量白色固體生成，過濾，得8.05g白色固體。Mp113-116℃(文獻(xiàn)116-200℃)，收率80％(文獻(xiàn)收率為82％)。
實(shí)施例5 西多福韋—亮氨酸(I-1)的制備1、BoC-亮氨酸(12A)的制備2g(0.0152mol)亮氨酸溶于10.1mL水中，加入728mg(0.0182mol)氫氧化鈉的25％溶液，滴加3.32g(0.0152mol)叔丁氧甲酸酐的20.2mL四氫呋喃液，加熱至41℃，保溫反應(yīng)8h，濃縮蒸干，加入3.51g(0.0183mol)檸檬酸和少量水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層分別用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得3.24g白色固體，收率92％，Mp82-83℃(文獻(xiàn)82-85℃)。
2、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-亮氨酸胞嘧啶(13A)的制備2g(8.65mmol)Boc-亮氨酸(12A)及506mg(8.65mmol)羰基二咪唑加入50mLDMF，冰鹽冷卻下攪拌2h，加入1.504g(2.37mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11)，加熱至80℃，反應(yīng)24h，加入水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層分別用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得2.28g淡黃色液狀物。所得粗品直接用于下一步反應(yīng)。
1H NMR(CDCl3)δ7.81-7.76(d，J＝4，1H，H-6)，7.63-7.50(m，15H，3×BzH)，7.33-7.32(d，J＝8，1H，H-5)，5.29(d，J＝8，1H，H-1’)，4.88-4.67(t，J＝6.14，1H，H-2’)，4.62-4.58(d，J＝4，16，2H，H-3’)，3.37-3.06(m，4H，H-3”，H-4”，H-5”)，3.06(s，2H，CH2P)，2.93(m，4H，2×CH2)，1.07-0.83(m，16H，CH3)3、西多福韋-亮氨酸(I-1)的制備2g(2.48mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-亮氨酸胞嘧啶(13A)加入50mL乙腈，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入5.21g(31.38mmol)碘化鉀，加熱至60℃，滴加4mL(31.38mmol)三甲基氯硅烷的乙腈液，保溫反應(yīng)2天，減壓濃縮，加入50mL水，室溫?cái)嚢?h，用二氯甲烷洗水層至淡黃色，水液減壓濃縮，得0.70g淡黃色固體。兩步總收率為72％。[α]D20-102.3(H2O)
1H NMR(d6-DMSO)δ7.34-7.12(d，J＝8Hz，1H，H-6)，7.31-7.28(d，J＝6Hz，1H，NH)，6.98(s，2H，NH2)，5.64-5.53(m，1H，H-5)，4.29-3.60(m，7H，H-1’，H-2’，H-3’，OCH2P)，2.51-2.50(d，J＝2Hz，1H，H-3”)，2.33-2.30(dd，J＝2Hz，2Hz，2H，H-4”)，2.29(s，1H，H-5”)，1.31-1.28(d，J＝6Hz，3H，3×CH3)，1.23-1.13(d，J＝10Hz，3H，3×CH3)MS(m/e)393(M++1)IR(Vmaxcm-1，KBr)3342，1655，1432實(shí)施例6 西多福韋-異亮氨酸(I-2)的制備1、BoC-異亮氨酸(12B)的制備2g(0.0152mol)異亮氨酸溶于10.1mL水中，加入728mg(0.0182mol)氫氧化鈉的25％溶液，滴加3.32g(0.0152mol)叔丁氧甲酸酐的20.2mL四氫呋喃液，加熱至41℃，保溫反應(yīng)8h，濃縮蒸干，加入3.51g(0.0183mol)檸檬酸和少量水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層分別用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得2.95g白色固體。收率為83％，Mp56-58℃(文獻(xiàn)58-20℃)。
2、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-異亮氨酸胞嘧啶(13B)2g(8.65mmol)Boc-異亮氨酸(12B)及506mg(8.65mmol)羰基二咪唑加入50mLDMF，冰鹽冷卻下攪拌2h，加入1.405g(2.37mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11)，加熱至80℃，反應(yīng)24h，加水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層分別用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得2.43g淡黃色液狀物。產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。
1H NMR(CDCl3)δ7.81-7.76(d，J＝4，1H，H-6)，7.63-7.55(m，15H，3×BzH)，7.37-7.32(d，J＝8，1H，H-5)，5.29(d，J＝8Hz，1H，H-1’)，4.88-4.67(t，J＝6，14Hz，1H，H-2’)，4.62-4.58(d，J＝4，16Hz，2H，H-3’)，3.25-3.06(m，4H，H-3”，H-4”，H-5”)，2.95(s，2H，CH2P)，2.83-2.56(m，4H，2×CH2)，1.15-0.93(m，16H，CH3)
3、西多福韋-異亮氨酸(I-2)的制備2g(2.48mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-異亮氨酸胞嘧啶(13B)加入50mL乙腈，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入5.21g(31.38mmol)碘化鉀，加熱至60℃，滴加4mL(31.38mmol)三甲基氯硅烷的乙腈液，反應(yīng)保溫反應(yīng)2天，減壓濃縮，加入50mL水，室溫?cái)嚢?h，用二氯甲烷洗水層至淡黃色，水液減壓濃縮，得0.62g淡黃色固體。兩步總收率為67％.[α]D20-121.3(H2O)1H NMR(d6-DMSO)δ11.93(s，1H，NH)，7.60(s，1H，H-6)，7.07(s，1H，H-5)，6.80(s，1H，NH)，4.27-3.25(m，7H，H-1’，H-2’，H-3’，O CH2P)，3.14-3.10(d，1H，J＝8Hz，H-3”)，2.90-2.68(m，3H，H-4”，H-5”)，1.31-1.27(d，J＝10Hz，3H，CH3)，1.15-0.99(dd，J＝4Hz，6Hz，3H，CH3)MS(m/e)392(M+)，323，167IR(Vmaxcm-1，KBr)3440，1644，1462，1161實(shí)施例7 西多福韋—丙氨酸(I-3)的制備1、BoC-丙氨酸(12C)的制備2g(0.0224mol)丙氨酸溶于15mL水中，加入1.076g(0.0269mol)氫氧化鈉的25％溶液，滴加4.9g(0.0225mol)叔丁氧甲酸酐的30mL四氫呋喃液，加熱至41℃，保溫反應(yīng)8h，濃縮蒸干，加入5.176g(0.0269mol)檸檬酸和少量水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層分別用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得3.905g白色固體，收率92％，Mp79-81℃(文獻(xiàn)80-82℃)2、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-丙氨酸胞嘧啶(13C)2g(10.5mmol)Boc-丙氨酸(12C)及1.419g(10.5mmol)羰基二咪唑加入50mLDMF，冰鹽冷卻下攪拌2h，加入4.30g(3.20mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11)，加熱至80℃，反應(yīng)24h，加入水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層分別用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得2.48g淡黃色液狀物。粗品直接用于下一步反應(yīng)。
1H NMR(CDCl3)δ7.77-7.75(d，J＝4，1H，H-6)，7.68-7.57(m，15H，3×BzH)，7.35-7.31(d，J＝8，1H，H-5)，4.96-4.02(m，5H，H-1’，H-2’，H-3’)，3.45(s，2H，CH2P)，2.93-2.76(m，4H，CH2)，2.85(m，1H，CH)，1.34(m，9H，CH3)3、西多福韋-丙氨酸(I-3)的制備2g(2.61mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-丙氨酸胞嘧啶(13C)加入34mL乙腈，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入4.81g(28.9mmol)碘化鉀，加熱至60℃，滴加4mL(28.9mmol)三甲基氯硅烷的乙腈液，反應(yīng)保溫反應(yīng)2天，減壓濃縮，加入50mL水，室溫?cái)嚢?h，用二氯甲烷洗水層至淡黃色，水液減壓濃縮，得0.283g淡黃色固體。兩步總收率為78％。
1H NMR(CDCl3)δ 7.81-7.76(d，J＝4Hz，1H，H-6)，7.37-7.33(d，J＝8Hz，1H，H-5)，4.20-4.06(m，5H，H-1’，2×H-2’，H-3’)，2.44(s，2H，OCH2P)，2.15(s，1H，CH)，1.42-1.26(m，3H，CH3)MS(m/e)352(M++1)，269，127IR(Vmaxcm-1，KBr)3464，1620，1462，1192實(shí)施例8 西多福韋—甘氨酸(I-4)的制備1、BoC-甘氨酸(12D)的制備2g(0.0266mol)甘氨酸溶于18mL水中，加入1.27g(0.0317mol)氫氧化鈉的25％溶液，滴加5.814g(0.0266mol)叔丁氧甲酸酐的30mL四氫呋喃液，加熱至41℃，保溫反應(yīng)8h，濃縮蒸干，加入5.8144g(0.0302mol)檸檬酸和少量水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層分別用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得4.128g白色固體，收率88.5％，mp85-86℃(文獻(xiàn)87-88℃)2、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-甘氨酸胞嘧啶(13D)2g(11.4mmol)Boc-甘氨酸(12D)及2.281g(11.4mmol)羰基二咪唑加入50mLDMF，冰鹽冷卻下攪拌2h，加入6.914g(3.81mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11)，加熱至80℃，反應(yīng)24h，加入水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層分別用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得2.77g淡黃色液狀物。粗品直接用于下一步反應(yīng)。
1H NMR(CDCl3)δ7.92(d，J＝4Hz，1H，H-6)，7.77-7.59(m，15H，3×BzH)，7.42(d，J＝8Hz，1H，H-5)，4.63-4.32(m，5H，H-1’，H-2’，H-3’)，3.52(s，2H，CH2P)，2.87-2.63(m，4H，2×CH2)，2.13(s，2H，CH2)1.07-0.83(m，6H，CH3)3、西多福韋-甘氨酸(I-4)的制備2g(2.66mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-甘氨酸胞嘧啶(13D)加入50mL乙腈，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入5.0g(34.27mmol)碘化鉀，加熱至60℃，滴加3.77ml(34.73mmol)三甲基氯硅烷的乙腈液，反應(yīng)保溫反應(yīng)2天，冷卻至室溫，減壓濃縮，加入34mL水，室溫?cái)嚢?h，用二氯甲烷洗水層至淡黃色，水液減壓濃縮，得0.67g淡黃色固體。兩步總收率為75％。
1H NMR(CDCl3)δ7.81-7.76(d，J＝4Hz，1H，H-6)，737-7.32(d，J＝8Hz，1H，H-5)，4.20-4.06(m，5H，H-1’，2×H-2’，H-3’)，2.35(s，2H，OCH2P)，2.15(s，2H，CH2)MS(m/e)339，323，208，197，181IR(Vmaxcm-1，KBr)3520，1648，1462，1161實(shí)施例9 西多福韋—纈氨酸(I-5)的制備1、BoC-纈氨酸(12E)的制備2g(0.0171mol)亮氨酸溶于11.4mL水中，加入820mg(0.0205mol)氫氧化鈉的25％溶液，滴加3.728g(0.0171mol)叔丁氧甲酸酐的22.8ml四氫呋喃液，加熱至41℃Boc-亮氨酸(15)，保溫反應(yīng)8h，濃縮蒸干，加入3.94g(0.0205mol)檸檬酸和少量水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層分別用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得3.154g白色固體，收率為84-85％，Mp77-79℃(文獻(xiàn)78-79℃)2、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-纈氨酸胞嘧啶(13E)2g(9.21mmol)Boc-纈氨酸(12E)及1.245g(9.21mmol)羰基二咪唑加入50mlDMF，冰鹽冷卻下攪拌2h，加入3.773g(3.068mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11)，加熱至80℃，反應(yīng)24h，加入水，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層分別用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得2.39g淡黃色液狀物。產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。
1H NMR(CDCl3)δ7.72-7.70(d，J＝4Hz，1H，H-6)，7.53-7.42(m，15H，3×BzH)，7.21(d，J＝8Hz，1H，H-5)，4.20-3.76(m，5H，H-1’，H-2’，H-3’)，3.27(s，2H，CH2P)，2.76-2.57(m，4H，2×CH2)，2.43-2.31(m，2H，2CH)，1.07-0.83(m，12H，4CH3)3、西多福韋-纈氨酸(I-5)的制備2g(2.55mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-纈氨酸胞嘧啶(13E)加入50mL乙腈，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入3.939g(23.72mmol)碘化鉀，加熱至60℃，滴加3mL(23.72mmol)三甲基氯硅烷的乙腈液，反應(yīng)保溫反應(yīng)2天，減壓濃縮，加入50mL水，室溫?cái)嚢?h，用二氯甲烷洗水層至淡黃色，水液減壓濃縮，得0.220g淡黃色固體。兩步總收率為78％。
1H NMR(CDCl3)δ 8.05-7.95(d，J＝10Hz，1H，H-6)，7.54(s，1H，H-5)，3.36-2.87(m，5H，H-1’，H-2’，H-3’)，1.73-1.17(m，4H，OCH2P，CH，CHNH2)，1.17-0.87(m，6H，6×CH3)實(shí)施例10 體外酶水解實(shí)驗(yàn)(肝勻漿實(shí)驗(yàn))1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶η八幍氖滓笫乔八幙稍隗w內(nèi)釋放出原藥，于是設(shè)計(jì)肝勻漿實(shí)驗(yàn)以測定前藥是否能在肝臟酶內(nèi)釋放出原藥西多福韋及其大致釋放時(shí)間。
2、實(shí)驗(yàn)材料試驗(yàn)動(dòng)物成年雄性健康小白鼠，體重約30g，由四川大學(xué)華西實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
試驗(yàn)藥品所有目標(biāo)化合物均稱取約10mg溶于蒸餾水中，即用。
儀器肝勻漿器，離心機(jī)3、實(shí)驗(yàn)方法取成年雄性小白鼠一只，稱重，取出其肝臟，稱重約1.2g，平分為兩份，一份加入西多福韋標(biāo)準(zhǔn)對照，另一部分加前藥樣品。將樣品取約10mg溶于3ml蒸餾水中，與肝臟混合勻漿，約30分鐘，加入離心管中，離心2分鐘，取上層清液，加入兩倍于其量的甲醇，有沉淀生成，離心2分鐘，取上層清液，與標(biāo)準(zhǔn)品對照點(diǎn)板，薄層展開(展開劑正丁醇∶水∶冰醋酸＝12∶10∶1)，用碘顯色。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1系列目標(biāo)化合物和西多福韋薄層展開的Rf值

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該系列5個(gè)化合物在體外酶的作用下30分種內(nèi)都可完全斷開釋放出原藥，達(dá)到本發(fā)明的目的。
實(shí)施例11 測定口服生物利用度將相當(dāng)于25亳克/公斤西多福韋和目標(biāo)化合物用管飼法喂給Long Evans老鼠。延續(xù)24小時(shí)和48小時(shí)收集超濾后劑量的尿，用反相高壓液體色層分離法分析。西多福韋和目標(biāo)化合物的口服生物利用度以尿中排出的西多福韋劑量的百分?jǐn)?shù)表示。
目標(biāo)化合物的尿回收度(劑量百分?jǐn)?shù)％)西多福韋25I-1 63I-2 50I-3 55I-4 60I-5 5權(quán)利要求
1.一種下式(I)表示的西多福韋衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式中R為-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H5、-CH3、-H、-CH(CH3)2。
2.一種制備下式(I)表示的西多福韋衍生物的方法該方法包括由下式(II) 和式(III)反應(yīng)，式中R為-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H5、-CH3、-H、-CH(CH3)2。 生成(IV)，式中R為-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H5、-CH3、-H、-CH(CH3)2。 在(CH3)3SiCl/KI存在下脫除Boc保護(hù)基、三苯甲基保護(hù)基并水解磷酸酯反應(yīng)生成式(I)， 式中R為-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H5、-CH3、-H、-CH(CH3)2。
3.一種藥物組合物，該藥物組合物包括作為活性成分的藥學(xué)有效量的由下式(I)表示的西多福韋衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，還包含藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。 式中R為-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H5、-CH3、-H、-CH(CH3)2。
4.一種如下式(IV)的中間體(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶；
5.如權(quán)利要求4所述的式(IV)的制備方法，包含如下反應(yīng)布驟
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗病毒劑西多福韋新衍生物及中間體，本發(fā)明還公開了新衍生物的制備方法，以關(guān)鍵中間體(S)－N1－[(3－三苯甲氧基－2－乙基磷酸甲氧基)甘油醇]－胞嘧啶為原料，在縮合劑的作用下與Boc－氨基酸縮合得中間化合物，再脫除Boc保護(hù)基、三苯甲基保護(hù)基并水解磷酸酯得新衍生物。
文檔編號C07F9/6512GK1690065SQ20041002234
公開日2005年11月2日 申請日期2004年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月19日
發(fā)明者楊勤, 胡鍵, 徐鳴夏 申請人:橫店集團(tuán)成都分子實(shí)驗(yàn)室有限公司