專(zhuān)利名稱(chēng)：石蓮花有效成分及其降糖活性的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明繼高效純天然降血糖劑(專(zhuān)利號(hào)ZL97.100285.1)、石蓮花茶及其功能(申請(qǐng)?zhí)?0132449.7)、石蓮花多糖(申請(qǐng)?zhí)?0133666.5)、全溶石蓮花及其抗應(yīng)激功能(申請(qǐng)?zhí)?003101010564)、復(fù)合石蓮花茶(申請(qǐng)?zhí)?31377688)等一系列研究之后，經(jīng)七年之久對(duì)其有效成分的分離提取、降糖活性、人群試驗(yàn)及其降糖機(jī)理四個(gè)方面進(jìn)行探討。
1、石蓮花有效成分的分離提取1.1景石酸的分離、提取(景石酸縮寫(xiě)EgA)實(shí)施例1將鮮石蓮花洗凈，40-50℃烘干后，取1Kg干石蓮花，加入5升0.1MNaOH攪拌，在70-80℃煮沸30分鐘后趁熱過(guò)濾，然后將上述操作重復(fù)兩次，將3次濾液合并后用0.1MHCL中和PH＝5~6，出現(xiàn)沉淀，過(guò)濾、烘干，景石酸產(chǎn)量為289.6g，收率28.96％。(見(jiàn)附

圖1)1.2石蓮花中生物黃酮的分離提取(石蓮花黃酮縮寫(xiě)EgF)1.2.1甲醇法實(shí)施例2取2g干石蓮花包在濾紙中，置于索氏提取器中，在底部接收瓶加入60ml甲醇(80％或100％)，水浴回流至無(wú)色為止，保留濾紙中殘?jiān)麬備用，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至干，烘干，生物黃酮含量0.1248g，收率6.24％。(見(jiàn)附圖2)1.2.2乙醇法實(shí)施例3取2g干石蓮花包在濾紙中，置于索氏提取器中，在底部接收瓶加入60ml乙醇(無(wú)水或80％)，水浴回流至無(wú)色為止，保留濾紙中殘?jiān)麭備用，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至干，烘干，生物黃酮含量0.1252g，收率6.26％。(見(jiàn)附圖3)1.3石蓮花的總皂甙分離提取(石蓮花總皂甙EgS)實(shí)施例4取1.2.1甲醇法提取的殘?jiān)麬1.5g，加入無(wú)離子水100ml回流1h后，過(guò)濾，殘?jiān)麮備用，濾液用3×30ml正丁醇萃取，將正丁醇減壓濃縮，烘干，總皂甙含量0.0852g，收率5.68％。(見(jiàn)附圖4)1.4石蓮花中多糖的分離提取(石蓮花多糖縮寫(xiě)EgPS)1.4.1乙醇沉淀法實(shí)施例5向上述1.3濾液C中加入無(wú)水乙醇，出現(xiàn)沉淀，過(guò)濾，收集沉淀，烘干，得粗EgPS0.155g，收率為10.97％。(見(jiàn)附圖5)1.4.2直接濃縮法實(shí)施例6將上述1.3中濾液C直接減壓濃縮，烘干，得粗EgPS0.161g，收率為14.1％。(見(jiàn)附圖6)1.5石蓮花與降糖相關(guān)的有效成分(見(jiàn)表1-1)表1-1 石蓮花與降糖相關(guān)的有效成分
2、石蓮花降糖活性，用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證EgA、EgF、EgS、EgPS、(EgA+EgF)、(EgS+EgPS)降糖活性2.1 EgA、EgF、EgS、EgPS、(EgA+EgF)、(EgS+EgPS)白鼠，正常SD大白鼠(采購(gòu)自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部)77只，分成7組，每組11只，隨機(jī)分成7組，實(shí)驗(yàn)組分別按4、4、4、4、2、2mg/kg，對(duì)照組灌等量的生理鹽水，每日灌胃1次，連續(xù)4周，末次給藥各2h，尾靜脈取血測(cè)血糖，血糖(FBG)無(wú)影響見(jiàn)表2-1-1
表2-1-1 石蓮花有效成分對(duì)正常大白鼠血糖無(wú)影響(X±S，n＝11)
結(jié)論石蓮花有效成分對(duì)正常大鼠血糖無(wú)影響2.2石蓮花有效成分對(duì)四氧嘧啶糖尿病(縮寫(xiě)DM)大鼠FBG、血清胰島素(縮寫(xiě)ins)顯示的活性(見(jiàn)表2-2-1)由表2-1-1可見(jiàn)，與正常對(duì)照組比較，四氧嘧啶糖尿病大鼠血糖值顯著升高，血清ins明顯下降(P＜0.01)，實(shí)驗(yàn)組分別按4、4、4、4、2、2mg/kg口服劑量對(duì)DM大鼠有非常明顯的降糖活性，并使血清胰島素(縮寫(xiě)ins)水平呈上升趨勢(shì)。
表2-2-1 石蓮花有效成分對(duì)四氧嘧啶糖尿病(縮寫(xiě)DM)大鼠FBG、血清胰島素(縮寫(xiě)ins)顯示的活性
*P＜0.05**P＜0.01與DM比較P＜0.01與正常對(duì)照組比較
2.3石蓮花有效成分對(duì)DM大鼠血脂顯示的降脂活性(見(jiàn)表2-3-1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按2.2安排，糖代謝、脂代謝均屬于內(nèi)分泌失調(diào)，而造成糖、脂代謝失調(diào)。如表2-3-1可見(jiàn)，與正常大鼠比較，DM大鼠血清甘油酸三脂(TG)、總膽固醇(Tc)、低密度脂蛋白(LDL)顯著升高(P＜0.01)，高密度脂蛋白(HDL)顯著下降(P＜0.01)，分別給石蓮花有效成分后，TG、Tc、LDL顯著降低(P＜0.01)而HDL顯著升高(P＜0.01)，證明石蓮花有效成分對(duì)DM大鼠血脂代謝具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用。
表2-3-1 石蓮花有效成分對(duì)DM大鼠血脂顯示的降脂活性
*P＜0.05**P＜0.01與DM比較石蓮花有效成分均具備降脂升高HDL的功能，但最佳組合成分降脂活性最佳。
2.4石蓮花有效成分對(duì)DM大鼠血清、肝、腦、胰腺中標(biāo)志過(guò)氧脂質(zhì)反應(yīng)的丙二醛(MDA)顯示降低活性(見(jiàn)表2-4-1)與正常對(duì)照組比較，DM大鼠血清、肝、腦、胰腺中含量顯著升高。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)同前。
表2-4-1 石蓮花有效成分對(duì)DM大鼠血清、肝、腦、胰腺中標(biāo)志過(guò)氧脂質(zhì)反應(yīng)的丙二醛(MDA)顯示降低活性
*P＜0.05**P＜0.01與DM比較在實(shí)驗(yàn)中DM大鼠血清、肝、腦、胰腺等組織中MDA含量顯著升高，表明DM大鼠體內(nèi)發(fā)生明顯的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。
3、最佳組合成分(EgS+EgPS)、(EgF+EgA)的人群試驗(yàn)3.1人群試驗(yàn)的設(shè)計(jì)3.1.1總?cè)藬?shù)96人，其中糖尿病患者48人，糖耐量異常者28人，正常人20名。
3.2服用(EgS+EgPS)前后人群試驗(yàn)對(duì)象糖尿病生化指標(biāo)變化(見(jiàn)表3-1)3.2.1代號(hào)說(shuō)明FBG血糖；TG甘油酸三脂、Tc膽固醇、LDL低密度脂蛋白；HDL高密度脂蛋白；HbAlc糖基化血紅蛋白；ins血清胰島素。
3.2.2最佳組合成分(EgS+EgPS)對(duì)降血糖、降HbAlc、改善與緩解并發(fā)癥尤為顯著。
表3-1 服用(EgS+EgPS)前后人群試驗(yàn)對(duì)象糖尿病生化指標(biāo)變化一覽表
3.3服用(EgF+EgA)前后人群實(shí)驗(yàn)對(duì)象糖尿病生化指標(biāo)變化(見(jiàn)表3-2)3.3.1對(duì)表3-2的說(shuō)明表中羅列糖尿病患者21人，糖耐量異常者13人，其余14人均為正常人。
3.3.2最佳組合成分(EgF+EgA)對(duì)降血脂、升高高密度脂蛋白、改善血清胰島素的分泌非常顯著。
表3-2 服用(EgF+EgA)前后人群實(shí)驗(yàn)對(duì)象糖尿病生化指標(biāo)變化一覽表
2.評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)表10 皮膚刺激性反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)
表11 皮膚刺激性強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
3.試驗(yàn)結(jié)果疤痕止癢軟化乳膏完整組中多次給藥組一次給藥組，皮膚刺激反應(yīng)總積分、皮膚刺激反應(yīng)平均分值均為0；皮膚刺激反應(yīng)強(qiáng)度均為無(wú)刺激性。破損組中多次給藥組、一次給藥組皮膚刺激反應(yīng)總積分分別為1、中間態(tài)，即可作為還原劑也可作為氧化劑，基與上述EgA配合使用則降糖降脂效果更好。
4.3石蓮花皂甙皂甙是由皂甙元與糖基組成的甙基，具有很強(qiáng)的生物活性功能，例如人參皂甙、柴胡皂甙、絞股藍(lán)皂甙，其皂甙元均含羥基、乃至不飽和羥基基團(tuán)，通常其有抗癌、提高免疫功能、耐缺氧、抗疲勞、消炎等特殊功能，也是人類(lèi)從植物界取之不盡，用之不竭的能源，況且皂甙元和糖基均富含羥基，是消除自由基的H給予體的倉(cāng)庫(kù)。
4.4石蓮花多糖(EgPS)眾所周知，人參多糖、枸杞多糖、牛膝多糖基均具有良好降糖降血脂的功能，而且對(duì)人體的免疫功能有特殊的調(diào)節(jié)作用，從表2-2-1可見(jiàn)，血清ins明顯增加，證明EgPS對(duì)胰島β-細(xì)胞具有明顯保護(hù)與修復(fù)作用。
4.5石蓮花最佳組合成份之一如表3-1所示，服用EgS+EgPS人群實(shí)驗(yàn)對(duì)象糖尿病人群實(shí)驗(yàn)表明EgS具有提高肌體免疫功能，改善與調(diào)節(jié)整體功能，糖基化血紅蛋白的第一階段的希佛堿的形成，從而逆轉(zhuǎn)為血紅蛋白與葡萄糖，有效地降低了HbAlc，最終并發(fā)癥得以改善。
4.6石蓮花最佳組合成份之二如表3-2所示，除上述降糖、降HbAlc、提升高密度脂蛋白、改善并發(fā)癥外，該組合中提升ins，降Tc、TG、LDL是非常顯著的。提升ins的分泌必須首先對(duì)β-細(xì)胞加以保護(hù)，EgA+EgF組成β-細(xì)胞的蛋白與核酸加以修飾，緩慢恢復(fù)與激活β-細(xì)胞，從而ins分泌逐步上升而降糖靈降血糖是快速的，它直接刺激胰島產(chǎn)生胰島素，乃至胰島素由于過(guò)度分泌而導(dǎo)致枯竭。
4.7總結(jié)根據(jù)近年來(lái)一些學(xué)者的研究，證實(shí)自由基代謝參與了糖尿病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程，本發(fā)明在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠血清、肝、腦、胰腺等組織中MDA含量顯著提高，表明糖尿病大鼠體內(nèi)發(fā)生了明顯的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。給與石蓮花有效成分治療后上述組織中MD含量明顯下降，有效成分改善了自由基代謝，減少了組織和血液中自由基對(duì)脂蛋白的不飽和脂肪酸殘基的攻擊，減輕并抑制了脂質(zhì)過(guò)氧化程度，因而減低了自由基在糖尿病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中所起的破壞作用，使糖尿病病理狀況得以根本改善。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)石蓮花中具有降糖、降脂活性的有效成分及其分離提取方法；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其有效成分包括石蓮花皂甙(EgS)、石蓮花黃酮(EgF)、景石酸(EgA)以及它們之間的最佳組合成分；
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述，其最佳組合為(EgS+EgF)、(EgF+EgA)，每一組合各占50％；
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的降糖活性有效成分，發(fā)現(xiàn)其降HbA1C，從保護(hù)和修復(fù)胰島β-細(xì)胞的前提下，增加血清胰島素(ins)的分泌及改善糖尿病的并發(fā)癥等用途。
全文摘要
本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)石蓮花中的景石酸(EgA)、石蓮花皂甙(EgS)、石蓮花黃酮(EgF)等與降糖活性相關(guān)的有效成分，并再次證實(shí)石蓮花多糖(EgPS)降糖、降血脂的生理活性功能。本產(chǎn)品適合于亞健康人士服用，并開(kāi)發(fā)成能預(yù)防糖耐量異常和治療糖尿病及其并發(fā)癥的保健食品或醫(yī)藥品，適于保健食品、醫(yī)藥品生產(chǎn)廠家生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H1/00GK1679655SQ200410029939
公開(kāi)日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2004年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月6日
發(fā)明者丁慶 申請(qǐng)人:丁慶