專利名稱：含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酸酯類化合物及其合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酯類化合物及其合成，涉及一種核苷類物質(zhì)，具體是替加氟的硫代磷酸酯衍生物。
背景技術(shù)：
科學(xué)研究表明，腫瘤組織含有較正常組織高的磷脂酶，以磷脂(酯)作藥物載體，可以提高藥物的靶向作用。磷脂(酯)本身具有廣泛的生理活性，大量的磷脂(酯)已被合成并證明具有良好的抗癌活性。核苷及其類似物在臨床上廣泛用作抗腫瘤和抗病毒藥物，但是，仍有一定的毒副作用。為了提高其療效，降低其毒性，對(duì)其結(jié)構(gòu)修飾一直是研究的熱點(diǎn)。而將它轉(zhuǎn)化為以磷脂作載體的前藥，是達(dá)到此目的的有效途徑之一。國內(nèi)外在此方面已經(jīng)有了一定的研究，部分前藥已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)。本課題組對(duì)替加氟的磷脂綴合物的合成與活性已經(jīng)進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，取得了相應(yīng)的成績。與國內(nèi)外同行相比，本課題組研究的特點(diǎn)是將羥烷基替加氟與磷?；噭┓磻?yīng)，形成含替加氟的五元磷雜戊烷衍生物，隨后通過雜原子對(duì)其親核開環(huán)，從而實(shí)現(xiàn)功能基的引入，同時(shí)形成強(qiáng)親水基氧負(fù)離子。最近，本課題組已經(jīng)完成了替加氟的硒(硫)代環(huán)甘油磷脂綴合物的合成及其硒(硫)酚對(duì)它的親核開環(huán)，合成出幾類結(jié)構(gòu)新型的替加氟的磷脂衍生物，體外活性實(shí)驗(yàn)表明，對(duì)人體膀胱癌細(xì)胞的抑制效果比原藥替加氟好(專利號(hào)ZL 02139741.4；申請(qǐng)?zhí)?00410046927.5，200410046925.6，200410046926.0)。卵磷脂是一類具有重要生理活性的天然產(chǎn)物，是典型的內(nèi)鹽式化合物，其合成是通過三甲胺對(duì)1，3，2-二氧磷雜戊烷開環(huán)實(shí)現(xiàn)，而通過胺類對(duì)替加氟的1，3，2-二氧磷雜戊烷開環(huán)還未見報(bào)道。因此，研究胺類對(duì)替加氟的1，3，2-二氧磷雜戊烷開環(huán)反應(yīng)，可以合成一類結(jié)構(gòu)新穎的替加氟的磷酯衍生物。合成這類化合物并研究它們的生物活性，對(duì)磷脂類新藥的創(chuàng)制將會(huì)具有一定的指導(dǎo)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于合成含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酯類化合物，以期解決核苷類藥物療效低，毒性大等不足。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是本發(fā)明的化合物是一種如通式所示的含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酯類化合物 其合成方法為
下面進(jìn)一步詳述本發(fā)明合成的含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酯類化合物的元素分析用Yanaco CHN CORDER MT-3型自動(dòng)元素分析儀測(cè)定。元素分析結(jié)果及理化數(shù)據(jù)見表1。
表1.2a～3c的元素分析及理化數(shù)據(jù)

說明測(cè)定2a～c比移值Rf所用的流動(dòng)相是乙酸乙酯/石油醚(1∶1)；測(cè)定3a～c比移值Rf所用的流動(dòng)相是甲醇/三氯甲烷(1∶10)；收率是柱層析后的產(chǎn)率。
用BRUKER AC-P400HE型儀測(cè)定測(cè)定1H NMR(以TMS為內(nèi)標(biāo))和31P NMR(85％H3PO4為外標(biāo))，結(jié)果見表2。
表2.2a～3c核磁共振氫譜及31PNMR譜如下2a31P NMR85.532ppm.1H NMR7.414(d，J＝6Hz，1H)，5.966-5.992(m，1H)，3.974-4.544(m，10H)，1.883-2.409(m，4H).
2b31P NMR85.543ppm.1H NMR7.423(d，J＝6Hz，1H)，5.968-5.995(m，1H)，3.977-4.548(m，10H)；1.888-2.459(m，6H).
2c31P NMR85.528ppm.1H NMR7.412(d，J＝6Hz，1H)，5.963-5.988(m，1H)，3.971-4.541(m，10H)，1.880-2.405(m，4H)，1.621-1.335(m，8H).
3a31P NMR61.199；60.584ppm.1H NMR7.377-7.442(d，J＝6Hz，1H)，5.995(s，1H)，3.650-4.250(m，10H)，3.083-3.149(q，J＝7.2Hz，6H)，1.800-2.510(m，4H)，1.395(t，J＝7.2Hz，9H).
3b31P NMR61.367；60.127ppm.1H NMR7.381-7.445(d，J＝6Hz，1H)，5.998(s，1H)，3.687-4.350(m，10H)，3.086-3.267(q，J＝7.2Hz，6H)，1.835-2.536(m，6H)，1.399(t，J＝7.2Hz，9H).
3c31P NMR61.567；61.923ppm.1H NMR7.523(d，J＝6Hz，1H)，5.963(s，1H)，3.971-4.541(m，10H)，3.124-3.267(q，J＝7.2Hz，6H)，1.880-2.405(m，4H)，1.625-1.337(m，8H)，1.398(t，J＝7.2Hz，9H).
采用國際通用的四氮唑鹽(MTT)比色法，體外實(shí)驗(yàn)測(cè)定了化合物3a～c對(duì)人體對(duì)膀胱癌細(xì)胞T-24和胃癌細(xì)胞BGC-823抑制作用效果，本試驗(yàn)選用體外連續(xù)培養(yǎng)的T-24、BGC-823細(xì)胞株。細(xì)胞倍增時(shí)間為24～30h.其結(jié)果見表3。
表3化合物3a～c對(duì)膀胱癌細(xì)胞T-24和胃癌細(xì)胞BGC-823的抑制作用(半數(shù)置死量ID50，μg/ml)

從表3可知，化合物3a～c具有良好的抗腫瘤活性。進(jìn)一步的活性研究正在進(jìn)行中。
含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酯類化合物是一類未見文獻(xiàn)報(bào)道新化合物。其合成是通過“兩步一鍋煮”，以無水苯為溶劑，65℃下，以碘粉作催化劑使2-N，N-二乙基氨基-1，3，2-二氧磷雜環(huán)戊烷依次和羥烷基替加氟及硫粉反應(yīng)合成中間體2a～c，然后再在無水苯中，它們分別和三乙胺在65℃下反應(yīng)，生成含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酯類化合物3a～c。它們的結(jié)構(gòu)通過31P NMR、1H NMR及元素分析確證。
具體實(shí)施例方式
1、替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酯類化合物的合成1.1中間體2a～c的合成在25ml無水苯中依次加入3-羥乙基替加氟732mg(3.0mmol)、2-(N，N-二乙基氨基)-1，3，2-二氧磷雜環(huán)戊烷978mg(6.0mmol)和76mg(0.3mmol)碘粉，氮?dú)獗Ｗo(hù)，油浴65℃攪拌(攪拌速度為800轉(zhuǎn)/分鐘)24小時(shí)，然后加入192mg(6.0mmol)硫粉，繼續(xù)攪拌0.5小時(shí)，旋轉(zhuǎn)去掉溶劑，殘留物柱層析(乙酸乙脂/石油醚＝1/1)分離得化合物無色粘稠液體(2a)638mg。按此方法可制得2b、2c。
1.2含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酸酯類化合物的合成將183mg(0.5mmol)化合物2a溶解在10ml苯中，加入1.012g(10mmol)三乙胺，65℃油浴攪拌，TLC至原料基本消失，減壓去掉溶劑和過量的三乙胺，剩余物柱層析(甲醇/三氯甲烷＝1/10)分離得化合物(3a)407mg。按此方法可制得3b、3c。
2、抗腫瘤活性測(cè)定用含10％新生小牛血清的RPIM 1640培養(yǎng)基(完全培基)將胃癌細(xì)胞BGC-823培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，用含0.25％胰酶、0.02％EDTA的消化液消化成單個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)，接種細(xì)胞于96孔培養(yǎng)板，每孔5000個(gè)細(xì)胞，包括5個(gè)劑量組，每組6個(gè)平行孔，在37℃，100％相對(duì)濕度，含5％CO2、95％空氣的培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)。
差量法稱取待測(cè)樣品30mg，以3mlDMSO溶解，加入二次去離子水至總體積為30ml，即母液濃度為1000ug/ml。
試驗(yàn)組換新的含不同濃度待測(cè)樣品的培養(yǎng)基10ug/ml取母液0.12ml和11.82ml完全培基加到6個(gè)培養(yǎng)板孔中；20ug/ml取母液0.24ml和11.76ml完全培基加到6個(gè)培養(yǎng)板孔中；50ug/ml，100ug/ml，200ug/ml以類似的方法配制。對(duì)照組則換成12ml完全培基。
細(xì)胞在37℃，100％相對(duì)濕度，含5％CO2、95％空氣的培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后，每孔加入20ul新配制的含0.2mg/mlMTT的無血清培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。
小心地吸去上層清液，每孔加入100ulDMSO，輕輕振蕩使代謝產(chǎn)生的結(jié)晶物完全溶解后在570nm波長處用酶標(biāo)儀測(cè)出OD值。
致謝本文工作得到國家自然科學(xué)基金(20372020)資助。
權(quán)利要求
1.一種含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酸酯類化合物，其特征在于該化合物的通式為
2.一種如權(quán)利要求1所述的替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酯類化合物合成方法，其特征在于通過“兩步一鍋煮”，以無水苯為溶劑，65℃下，以碘粉作催化劑使2-N，N-二乙基氨基-1，3，2-二氧磷雜環(huán)戊烷依次和羥烷基替加氟及硫粉反應(yīng)合成中間體2a～c，然后在無水苯中，它們和三乙胺在65℃下發(fā)生開環(huán)反應(yīng)，生成含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酸酯類化合物3a～c，反應(yīng)式為
全文摘要
含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酸酯類化合物及其合成涉及一種核苷類物質(zhì)。該化合物的結(jié)構(gòu)式如通式所示，化合物的合成，是通過“兩步一鍋煮”，以無水苯為溶劑，65℃下，以碘粉作催化劑，使2－N，N－二乙基氨基－1，3，2－二氧磷雜環(huán)戊烷依次和羥烷基替加氟及硫粉反應(yīng)合成中間體2a～c，然后再在在無水苯中，它們分別和三乙胺在65℃下反應(yīng)，生成含替加氟的內(nèi)鹽式硫代磷酯類化合物3a～c。本發(fā)明化合物3a～c對(duì)人體膀胱癌T－24及胃癌細(xì)胞具有良好的抑制效果。因此，結(jié)構(gòu)的修飾是提高替加氟活性的有效途徑之一。
文檔編號(hào)C07H19/00GK1660874SQ200410047110
公開日2005年8月31日 申請(qǐng)日期2004年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月28日
發(fā)明者許新華, 張秋林, 李言杰, 陳雄, 張青麗 申請(qǐng)人:湖南大學(xué)