專利名稱：孤獨(dú)癥的診斷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過(guò)對(duì)對(duì)象的標(biāo)本進(jìn)行簡(jiǎn)單測(cè)試而診斷孤獨(dú)癥的方法。
背景技術(shù)：
孤獨(dú)癥是用于對(duì)象的綜合癥狀的術(shù)語(yǔ)，意指與周圍人的交流可能性差到使得該對(duì)象在其整個(gè)生命中必須由社會(huì)以不同方式照顧。
在瑞典出生的每1000人中有1-5人患有孤獨(dú)癥。其診斷難以確立，并可能需要數(shù)年才能獲得。社會(huì)和孤獨(dú)癥患者的家庭必須采取的教育學(xué)和社會(huì)措施是終生的且極為昂貴?；颊呒捌浼彝サ耐纯嗍蔷薮蟮?。迄今為止還不知道任何生物化學(xué)治療(例如使用藥物)。
孤獨(dú)癥的病理生理學(xué)涉及神經(jīng)元之間異常的通訊聯(lián)系，可能與腦中異常模式肽例如神經(jīng)肽有關(guān)。異常肽水平可能通過(guò)對(duì)脊髓液和/或血漿中低于10kDa的蛋白質(zhì)/肽的蛋白組學(xué)研究來(lái)揭示。檢測(cè)孤獨(dú)癥中肽異常水平將產(chǎn)生關(guān)于其病理生理學(xué)的新假說(shuō)，并可能有助于診斷和提示新的治療可能性。由于多數(shù)肽由較大前體分子的蛋白水解而生成，肽的異常水平可能是由異常的蛋白水解活性引起的。
關(guān)于孤獨(dú)癥已完成和可得到的生物化學(xué)研究非常之少，因?yàn)闆](méi)有可以利用的動(dòng)物模型，并且存在收集更實(shí)質(zhì)性的患者材料的實(shí)際問(wèn)題。
在現(xiàn)有技術(shù)EP-A-0 979 828中公開了一種通過(guò)測(cè)定生物液體中存在的特定肽而診斷孤獨(dú)癥的方法。據(jù)稱包含3-4個(gè)氨基酸的所述肽當(dāng)以高量存在時(shí)指示孤獨(dú)癥。
EP-A-0 969 015涉及診斷疾病如孤獨(dú)癥的方法，通過(guò)鑒定存在于組織或體液中的肽。公開的肽具有3-8個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度，并且分子量＜1081。
Green，L.A.等人在Biological Psychiatry，50609-613(2001)中公開，孤獨(dú)癥患者血漿中的催產(chǎn)素濃度不同于健康人。催產(chǎn)素-extened(OT-X)的量在孤獨(dú)癥患者中較高，而催產(chǎn)素(9個(gè)氨基酸)的量較低。
US-A-2002/0006640涉及診斷孤獨(dú)癥等的多肽和方法。
這些文件均未公開本發(fā)明的肽。
本發(fā)明概述本發(fā)明基于以下假設(shè)，即孤獨(dú)癥的基礎(chǔ)是腦和/或穿透或圍繞腦的液體即血液和腦脊液中存在異常肽模式，這些肽中的某些可能擾亂腦用于通訊聯(lián)系的信號(hào)(例如攜帶的神經(jīng)肽)。
本發(fā)明特征在于測(cè)定存在于機(jī)體標(biāo)本中的具有特定氨基酸序列的某些蛋白質(zhì)/肽的存在或缺失，所述蛋白質(zhì)/肽的分子量分別為1779+/-1Da，1865+/-1Da和2022+/-1Da。
具體而言，本發(fā)明涉及在組織標(biāo)本、體液和/或血漿標(biāo)本中測(cè)定高于正常水平的一種或多種以下的肽SKITHRIHWESASLL (SEQ.ID.NO.1)SSKITHRIHWESASLL(SEQ.ID.NO.2)SSKITHRIHWESASLLR (SEQ.ID.NO.3)在所述方法的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述肽的量大于健康對(duì)象標(biāo)本中存在量的10倍。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用ELISA技術(shù)測(cè)定各肽。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用RIA技術(shù)測(cè)定各肽。
在又一個(gè)其它的優(yōu)選實(shí)施方案中，使用SELDI-TOF-MS體系測(cè)定各肽。
在本發(fā)明的另一方面，其涉及用于測(cè)定所述肽的試劑盒，所述試劑盒包含對(duì)于某些肽的標(biāo)志，所述肽的分子量分別為1779、1865和2022。
在其優(yōu)選實(shí)施方案中，所述試劑盒包含對(duì)于一種或多種肽的標(biāo)志，所述肽是由氨基酸序列SSKITHRIHWESASLLR、SSKITHRIHWESASLL和/或SKITHRIHWESASLL編碼的。
體液在此是指任何體液，如血液、血清、血漿、脊髓液、腦脊液和淋巴。
以上特別鑒定的本發(fā)明的肽可以是稱為補(bǔ)體因子C 3的血漿蛋白的片段。
本發(fā)明詳述本發(fā)明已在一項(xiàng)利用所謂的SELDI-TOF-MS(ClphergenBiosystems Inc.Palo Alto，CA，USA)技術(shù)-一種新的蛋白組學(xué)技術(shù)的先導(dǎo)研究中得到證實(shí)，通過(guò)該技術(shù)分析并比較了4名孤獨(dú)癥兒童和4名非孤獨(dú)癥兒童的血漿的肽模式。由此發(fā)現(xiàn)，至少3種肽，每種含有15-20個(gè)氨基酸，在所有孤獨(dú)癥兒童中過(guò)量表示于分子條帶1700-2200道爾頓。由此在孤獨(dú)癥兒童血漿中所述肽的量至少10倍高于非孤獨(dú)癥兒童。


圖1顯示了獲自8名個(gè)體的8幅不同的1700-2200道爾頓條帶的質(zhì)譜曲線圖，4名無(wú)孤獨(dú)癥診斷，4名診斷為孤獨(dú)癥兒童。上面4幅為來(lái)自無(wú)孤獨(dú)癥診斷的個(gè)體的質(zhì)譜條帶，下4幅來(lái)自孤獨(dú)癥兒童。
很明顯，在孤獨(dú)癥兒童的標(biāo)本中有至少3個(gè)不同的峰出現(xiàn)，其顯著區(qū)別于無(wú)孤獨(dú)癥診斷的兒童。當(dāng)使用適宜的分子量標(biāo)志時(shí)，測(cè)定到在大約1779、1865和2022道爾頓有顯著的峰存在。不同的峰面積代表存在的各肽的量，所述量在來(lái)自孤獨(dú)癥兒童的標(biāo)本中比在來(lái)自無(wú)孤獨(dú)癥診斷的兒童的標(biāo)本中高10倍以上。
使用MS/MS質(zhì)譜測(cè)定所述肽的結(jié)構(gòu)，由此確定其氨基酸序列分別為SSKITHRIHWESASLLR(SEQ.ID.NO.1)、SSKITHRIHWESASLL(SEQ.ID.NO.2)和SKITHRIHWESASLL(SEQ.ID.NO.3)。第一種肽已知為補(bǔ)體C3f(NCBI登錄號(hào)1413205A)，第二種缺乏C-末端精氨酸，第三種進(jìn)一步缺乏N-末端絲氨酸。
所選肽在例如血漿或脊髓液標(biāo)本中的濃度可容易地通過(guò)免疫化學(xué)技術(shù)如ELISA或RIA來(lái)測(cè)定。將使用抗體，并將按照通用方案進(jìn)行對(duì)抗體和/或抗原肽的標(biāo)記，使用例如氯胺T法用于放射性標(biāo)記。
顯然，以上鑒定的這些肽在體液/組織中的高水平至少是孤獨(dú)病癥的標(biāo)志，并可容易地用于診斷孤獨(dú)癥。但是，測(cè)定這些肽高水平的存在還意味著孤獨(dú)癥的可能發(fā)病機(jī)制已被發(fā)現(xiàn)，并且這可能導(dǎo)致對(duì)孤獨(dú)癥的新治療可能性，例如通過(guò)抑制這些肽的形成。
權(quán)利要求
1.在懷疑患有孤獨(dú)癥的對(duì)象中診斷孤獨(dú)癥的方法，通過(guò)分析組織標(biāo)本、體液標(biāo)本和/或血漿標(biāo)本中是否存在高濃度的某些肽，所述肽的分子量分別為1779+/-1Da、1865+/-1Da和2022+/-1Da。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽的氨基酸序列為SKITHRIHWESASLL (SEQ.ID.NO.1)SSKITHRIHWESASLL，and/or(SEQ.ID.NO.2)SSKITHRIHWESASLLR (SEQ.ID.NO.3)。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽的量為非孤獨(dú)癥對(duì)象標(biāo)本中存在量的10倍以上。
4.權(quán)利要求1-3的方法，其中使用任何定量免疫化學(xué)方法。
5.權(quán)利要求1-3的方法，其中使用ELISA技術(shù)測(cè)定各肽。
6.權(quán)利要求1-3的方法，其中使用RIA技術(shù)測(cè)定各肽。
7.權(quán)利要求1-3的方法，其中使用SELDI-TOF-MS體系測(cè)定各肽。
8.試劑盒，包含對(duì)于某些肽的標(biāo)志，所述肽的分子量分別為1779+/-1Da、1865+/-1Da和2022+/-1Da。
9.權(quán)利要求8的試劑盒，其中所述試劑盒包含對(duì)于一種或多種肽的標(biāo)志，所述肽具有以下氨基酸序列SKITHRIHWESASLL (SEQ.ID.NO.1)SSKITHRIHWESASLL，and/or(SEQ.ID.NO.2)SSKITHRIHWESASLLR. (SEQ.ID.NO.3)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種診斷孤獨(dú)癥的方法，通過(guò)測(cè)定高濃度的某些肽的存在，分析組織標(biāo)本、體液標(biāo)本和/或血漿標(biāo)本中是否存在某些肽，所述肽的氨基酸序列分別為SKITHRIHWESASLL、SSKITHRIHWESASLL和SSKITHRIHWESASLLR，分子量分別為1779+/－1 Da、1865+/－1 Da和2022+/－1 Da。
文檔編號(hào)C07K7/08GK1795386SQ200480005823
公開日2006年6月28日 申請(qǐng)日期2004年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月4日
發(fā)明者安德斯·格魯布, 納吉·莫梅尼 申請(qǐng)人:納吉·莫梅尼