專利名稱：促紅細(xì)胞生成素在中風(fēng)康復(fù)中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了不同劑量促紅細(xì)胞生成素(EPO)的給藥方案以促進(jìn)局部缺血性發(fā)作如中風(fēng)后的康復(fù)。
背景技術(shù)：
術(shù)語(yǔ)中風(fēng)是指由于顱內(nèi)或顱外血管的阻塞或破裂而引起腦功能的突發(fā)性損傷。其通常是在腦內(nèi)或通往大腦的一根或多根血管破裂或被血栓、粥樣硬化斑塊或某些其它顆粒阻塞時(shí)發(fā)生。結(jié)果，導(dǎo)致大腦神經(jīng)細(xì)胞缺氧并在數(shù)分鐘內(nèi)死亡。死亡的腦細(xì)胞不能再生并被充滿液體的腔體所替代，這種被稱為梗塞。在中風(fēng)中，一些腦細(xì)胞不可逆并迅速的死亡。其它細(xì)胞例如缺血灶周圍的那些，也可能遭受急性損傷并在數(shù)小時(shí)內(nèi)處于免疫缺乏狀態(tài)(Compromised State)。本領(lǐng)域還可知，腦損傷在最初的局部缺血性發(fā)作后還可能持續(xù)數(shù)天。
由于病人通常在中風(fēng)發(fā)作后不能迅速到達(dá)急診室，需要甚至在有時(shí)發(fā)作后的首次給藥時(shí)也有效的新療法。
概述本發(fā)明提供了局部缺血性發(fā)作后EPO的給藥方案以及對(duì)發(fā)作患者的治療方法。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案就是用以促進(jìn)局部缺血性發(fā)作后康復(fù)的促紅細(xì)胞生成素的給藥方案，包括給予所需患者治療有效量的EPO，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是治療局部缺血性發(fā)作患者的方法，包括給予所述患者治療有效量的EPO，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種促進(jìn)患者局部缺血性發(fā)作后功能恢復(fù)的方法，包括給予所述患者治療有效量的EPO，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
在另外一個(gè)方面，本發(fā)明還涉及在減少局部缺血性發(fā)作6小時(shí)之內(nèi)最初接觸EPO的患者的梗塞面積的方法，包括給予患者每劑量大約1500IU/kg至大約4500IU/kg的EPO，其中在最初接觸EPO后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
在進(jìn)一步的方面中，本發(fā)明還涉及抑制患者局部缺血性發(fā)作后CNS中的細(xì)胞凋亡或炎癥，包括給予所述患者治療有效量的EPO，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
在本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方案中，在局部缺血性發(fā)作后的大約24小時(shí)給予第一劑量EPO。在本發(fā)明的另外一些優(yōu)選實(shí)施方案中，在第一劑量后的大約24小時(shí)給予第二劑量。優(yōu)選，在局部缺血性發(fā)作后的大約24小時(shí)給予第一劑量EPO，在局部缺血性發(fā)作后的大約48小時(shí)給予第二劑量。進(jìn)一步而言，可以在局部缺血性發(fā)作后的大約20至大約60小時(shí)之內(nèi)給予第三劑量EPO。優(yōu)選，在第二劑量后的大約8至24小時(shí)之內(nèi)給予第三劑量EPO。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案包括給藥方案和治療方法，其中EPO的每次給藥包括皮下、肌內(nèi)、靜脈或腹腔內(nèi)注射EPO。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案還包括給藥方案和治療方法，其中EPO的每次給藥劑量選自大約500IU/kg至大約10000IU/kg。在一個(gè)實(shí)施方案中，特別是減少局部缺血性發(fā)作6小時(shí)之內(nèi)最初接觸EPO的患者的梗塞面積中，EPO的每次給藥劑量為大約1500IU/kg至大約4500IU/kg。優(yōu)選，EPO的每次給藥劑量選自大約1800IU/kg至大約4000IU/kg。更優(yōu)選，EPO的每次給藥劑量選自大約2000IU/kg至大約3000IU/kg。最優(yōu)選，EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。在另一實(shí)施方案中，EPO的每次給藥劑量選自大約2500IU/kg至大約5000IU/kg。優(yōu)選，至少一次EPO的給藥劑量為大約2500IU/kg。更優(yōu)選，EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。
在本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方案中，局部缺血性發(fā)作是中風(fēng)。特別是，局部缺血性發(fā)作是CNS損傷如病灶性局部缺血性中風(fēng)或急性局部缺血性中風(fēng)。
本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)一步包括給藥方案和治療方法，其中促紅細(xì)胞生成素是長(zhǎng)效EPO。
附圖概述所附附示了本發(fā)明的一些方面。附圖概述如下附

圖1顯示了單天給藥對(duì)梗塞面積或功能性結(jié)果無(wú)效。方框-須線(Box-whisker)示意圖(A)和(B)表示了在發(fā)生阻塞時(shí)以及在阻塞后1小時(shí)給藥右啡烷和EPO，其與用載體治療的動(dòng)物相比，對(duì)于減少7天(A)梗塞面積或改善(B)功能性結(jié)果無(wú)效；附圖2顯示了多天給藥促紅細(xì)胞生成素能減少梗塞面積并改善功能性結(jié)果。遭受中腦動(dòng)脈閉塞(MCAO)的鼠在阻塞后0小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)用EPO進(jìn)行治療，其與用載體進(jìn)行治療的動(dòng)物相比，圖(A)顯示在2500IU/kg，梗塞面積有顯著的減少，和圖(B)顯示在2500和5000IU/kg，功能性結(jié)果有顯著的改善(*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001)；附圖3顯示了EPO的延緩性多天給藥改善功能性結(jié)果而不依賴于梗塞面積減少。在MCAO后6小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)給藥EPO，是2500或5000IU/kg，對(duì)(A)梗塞面積都沒(méi)有影響；然而(B)這兩個(gè)劑量水平對(duì)功能性結(jié)果都有顯著的改善(*p＜0.05；**p＜0.01)；附圖4顯示了在阻塞一開(kāi)始至晚至24小時(shí)給藥EPO均能改善功能性結(jié)果。在阻塞后推遲EPO的首劑量整整24小時(shí)，隨后在48小時(shí)給予第二劑量的給藥方案，在(A)減少梗塞面積上無(wú)效，但(B)具有顯著改善的功能性結(jié)果(*p＜0.01)。
發(fā)明詳述下述本發(fā)明實(shí)施例的目的不在于詳盡描述或?qū)⒈景l(fā)明限至如下詳述中所公開(kāi)的具體實(shí)施例中。然而，所述的實(shí)施例能幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員理解本發(fā)明原理和實(shí)踐。如果下文中沒(méi)有特別提及的話，以下說(shuō)明書(shū)中參考的每份專利、公開(kāi)的專利申請(qǐng)和公開(kāi)出版物均全部引入作為參考文獻(xiàn)以用于任何和所有目的。
本發(fā)明提供了促進(jìn)局部缺血性發(fā)作后康復(fù)的促紅細(xì)胞生成素的給藥方案，包括給予所需患者治療有效量的EPO，其中在局部缺血性發(fā)作后大約8至大約26小時(shí)內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后大約8至大約26小時(shí)內(nèi)給予第二劑量EPO。
如本文中所使用的，″局部缺血性發(fā)作″在患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的血流和/或氧輸送暫時(shí)性或永久性減少時(shí)發(fā)生，并可能導(dǎo)致?lián)p傷如非灌注區(qū)域的壞死或梗塞。局部缺血性發(fā)作包括但不限于，急性CNS損傷如中風(fēng)、外傷如外傷性腦或脊髓損傷、短暫腦缺血發(fā)作、梗塞、缺血-再灌注損傷、視網(wǎng)膜損害、及由于器官、組織或細(xì)胞移植或其它外科手術(shù)造成的局部缺血。具體而言，對(duì)于本發(fā)明的目的，局部缺血性發(fā)作是腦局部缺血性發(fā)作，尤其是顱血流的中斷。更具體而言，局部缺血性發(fā)作是中風(fēng)，包括但不限于病灶性局部缺血性中風(fēng)或急性局部缺血性中風(fēng)。
如本文中所使用的，缺血-再灌注是指流至器官如大腦的血流被中斷，和隨后通常突然性的血流恢復(fù)。
來(lái)自急性局部缺血性中風(fēng)的損傷是動(dòng)態(tài)的。損傷在開(kāi)始發(fā)作后將持續(xù)數(shù)天。多種機(jī)制導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞和支持細(xì)胞死亡區(qū)域的擴(kuò)大，包括離子平衡的喪失、自由基損害、興奮性中毒、細(xì)胞凋亡和炎癥(1)。在最初損傷后的幾星期至幾個(gè)月內(nèi)重建和重塑機(jī)制是有效的，目的在于對(duì)已經(jīng)發(fā)生的損害補(bǔ)償至某一程度(2)。所有造成損害和促進(jìn)康復(fù)的事件提供了治療介入的機(jī)會(huì)。所需的治療是一種能阻斷引發(fā)細(xì)胞死亡的機(jī)制或增強(qiáng)康復(fù)或理論上兩者均可的方法?？赡艿闹委熀蜻x者是屬于天然造血細(xì)胞因子促紅細(xì)胞生成素系列的具有紅細(xì)胞生成活性的分子。
近來(lái)，促紅細(xì)胞生成素由于其在非造血系統(tǒng)中的效果包括在神經(jīng)系統(tǒng)(4)中的功能已經(jīng)引起了相當(dāng)?shù)淖⒁?。?dāng)促紅細(xì)胞生成素受體被局限于神經(jīng)元亞型以及星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞(7，8)時(shí)，通過(guò)星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)缺氧(5，6)響應(yīng)而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中局部產(chǎn)生并釋放促紅細(xì)胞生成素。這些細(xì)胞類型中促紅細(xì)胞生成素的功能仍不清楚，但它已經(jīng)顯示出能阻斷體外編程性細(xì)胞死亡，由許多不同的刺激素包括谷氨酸鹽、缺氧(9)和血清撤除(10)誘導(dǎo)，表明其能通過(guò)阻斷細(xì)胞凋亡(11)促進(jìn)細(xì)胞存活。除了促紅細(xì)胞生成素的神經(jīng)保護(hù)作用，其被報(bào)道還可用于調(diào)節(jié)炎癥(12)，即另一個(gè)中風(fēng)治療的潛在靶點(diǎn)。進(jìn)一步而言，促紅細(xì)胞生成素已經(jīng)顯示出能減少動(dòng)物CNS損傷模型，包括中風(fēng)(14)、脊髓損傷(15)、外傷性腦損傷(14)和視網(wǎng)膜損害(16)模型中的損害，且近來(lái)顯示還具有缺血預(yù)適應(yīng)(6)的保護(hù)效應(yīng)。
促紅細(xì)胞生成素在CNS中的功能已經(jīng)引起了相當(dāng)?shù)淖⒁?，特別歸功于其被報(bào)道的神經(jīng)保護(hù)作用。促紅細(xì)胞生成素限制CNS損傷模型中的有關(guān)損害的能力與表明其具有在疾病過(guò)程中起到某些機(jī)制的潛力的數(shù)據(jù)相結(jié)合，使得促紅細(xì)胞生成素成為用于治療神經(jīng)系統(tǒng)急性疾病包括中風(fēng)的有吸引力的候選者。然而促紅細(xì)胞生成素引發(fā)這些保護(hù)效應(yīng)的確切機(jī)制尚不清楚，促紅細(xì)胞生成素減少中風(fēng)(10)、脊髓損傷(15)、和視網(wǎng)膜損傷(16)模型中的細(xì)胞凋亡的數(shù)據(jù)表明其阻斷細(xì)胞凋亡的能力是關(guān)鍵功能。假設(shè)細(xì)胞凋亡在最初局部缺血性發(fā)作后能持續(xù)數(shù)天，在損傷后的數(shù)天之內(nèi)連續(xù)給藥促紅細(xì)胞生成素是必需的，以最佳化治療效果。然而迄今為止，沒(méi)有從事于該問(wèn)題的臨床前研究，據(jù)報(bào)道在評(píng)估促紅細(xì)胞生成素治療局部缺血性中風(fēng)(19)的導(dǎo)向性臨床研究中，促紅細(xì)胞生成素持續(xù)給藥超過(guò)數(shù)天的結(jié)果呈陽(yáng)性。
自然或天然的促紅細(xì)胞生成素是能通過(guò)調(diào)節(jié)紅系前體細(xì)胞(3)的分化、增殖和存活來(lái)控制紅細(xì)胞生成的30-kDa糖蛋白。如本文中所使用及在權(quán)利要求中所定義的，術(shù)語(yǔ)″EPO″應(yīng)包括那些通過(guò)天然促紅細(xì)胞生成素受體介導(dǎo)具有刺激紅細(xì)胞生成能力的多肽和蛋白。術(shù)語(yǔ)″EPO″包括自然或天然的促紅細(xì)胞生成素以及重組人促紅細(xì)胞生成素(r-HuEPO)。還包括在術(shù)語(yǔ)EPO范圍之內(nèi)的有促紅細(xì)胞生成素類似物、促紅細(xì)胞生成素同種型、擬促紅細(xì)胞生成素、促紅細(xì)胞生成素片斷、促紅細(xì)胞生成素混和蛋白、融合蛋白寡聚體和上述多聚體、上述同系物、上述糖基化模式變體、上述擬肽和突變蛋白、以及進(jìn)一步包括不管是通過(guò)合成或工業(yè)制造方法，包括但不限于，重組(無(wú)論是產(chǎn)自cDNA還是基因組DNA)、合成、轉(zhuǎn)基因和基因活性方法獲得的那些，以及進(jìn)一步包括含上述列舉物小修飾體的那些促紅細(xì)胞生成素分子。設(shè)計(jì)和合成如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的擬肽的方法，記載于美國(guó)專利Nos.4,833,092、4,859,765中；4,853,871和4,863,857所公開(kāi)的內(nèi)容在此均全部引入作為參考并用于所有目的。另外，具有紅細(xì)胞生成活性的多肽和蛋白、具有促進(jìn)紅細(xì)胞生成能力的小分子也包括在術(shù)語(yǔ)EPO的范圍之內(nèi)，例如，具有促紅細(xì)胞生成素活性的化合物，如通過(guò)上游激活反應(yīng)刺激促紅細(xì)胞生成素產(chǎn)生的分子。
特別優(yōu)選的EPO分子是能刺激哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞生成的那些。促紅細(xì)胞生成素的具體實(shí)例包括α-紅細(xì)胞生成素(EPREX、ERYPO、PROCRIT)、新紅細(xì)胞生成刺激蛋白(NESPTM、ARANESPTM和α-darbepoetin)如專利申請(qǐng)EP640619中記載的重組人促紅細(xì)胞生成素(Epoetin)的高糖基化類似物。其它預(yù)期的EPO分子也在本發(fā)明范圍之內(nèi)包括人促紅細(xì)胞生成素類似物(如記載于國(guó)際專利申請(qǐng)WO 99/66054中的人血清白蛋白融合蛋白)、記載于國(guó)際專利申請(qǐng)WO 99/38890中的促紅細(xì)胞生成素突變體、產(chǎn)自記載于美國(guó)專利5,688,679中的人促紅細(xì)胞生成素基因ApaI限制性片斷的ω-促紅細(xì)胞生成素、記載于國(guó)際專利申請(qǐng)WO 99/11781和EP1064951中的經(jīng)改變的糖基化人促紅細(xì)胞生成素、記載于WO 98/05363、WO 01/76640或美國(guó)專利5,643,575中的PEG結(jié)合的促紅細(xì)胞生成素類似物。經(jīng)修飾用于內(nèi)源性人促紅細(xì)胞生成素表達(dá)的細(xì)胞系的具體實(shí)例記載于國(guó)際專利申請(qǐng)WO 99/05268和WO 94/12650中。通常優(yōu)選的EPO形式是純化的重組人EPO(r-HuEPO)，普遍以商標(biāo)EPREX、ERYPO、PROCRIT或ARANESPTM制造和銷售。本段中所有提及的每份專利和公開(kāi)的專利申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容均在此引入作為參考并用于任何和所有目的。
EPO的長(zhǎng)效形式也是被預(yù)期的并可能優(yōu)選成為本發(fā)明某些實(shí)施方案中用作給藥區(qū)段中第二和第三次接觸給藥。如本文中所使用的，″長(zhǎng)效EPO″包括具有增長(zhǎng)的循環(huán)半衰期的EPO緩釋組合物和制劑，典型的通過(guò)修飾如減少免疫原性和清除率獲得，并且EPO被包裹在高分子微球中。″長(zhǎng)效EPO″的實(shí)例包括但不限于，記載于PCT公開(kāi)WO2002049673(Burg et al.)中的具有聚乙二醇(PEG)的促紅細(xì)胞生成素共軛物，記載于PCT公開(kāi)WO 02/32957(Nakamura et al.)中的PEG-修飾的EPO，記載于PCT公開(kāi)WO 94/28024(Chyi etal.)中的具有紅細(xì)胞生成活性和具有至少一種與非抗原性聚合物共價(jià)連接的經(jīng)氧化的碳水化物部分的糖蛋白共軛物和其它使用SCM-PEG、SPA-PEG和SBA-PEG制得的PEG-EPO。這些公開(kāi)的專利申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容均在此全部引入作為參考并用于所有目的。
優(yōu)選的聚乙二醇部分是甲氧基聚乙二醇(mPEG)部分。該部分優(yōu)選使用甲氧基聚乙二醇類的琥珀酰亞胺酯衍生物加入。優(yōu)選的甲氧基聚乙二醇類的琥珀酰亞胺酯衍生物的實(shí)例包括下式的羧甲基化聚乙二醇(SCM-PEG)的琥珀酰亞胺酯， (R是C1-8烷基；n是整數(shù))SCM-PEG下式的聚(乙二醇)丙酸(SPA-PEG)的琥珀酰亞胺酯衍生物，其中R是C1-8烷基；n是整數(shù)，(R-(OCH2CH2)n-O-CH2CH2-CO-OSu)；和下式的聚(乙二醇)丁酸(SPA-PEG)的琥珀酰亞胺酯衍生物，其中R是C1-8烷基；n是整數(shù)(R-(OCH2CH2)n-O-CH2CH2CH2-CO-OSu)。
制備SCM-PEG、SPA-PEG和SBA-PEG的方法是本領(lǐng)域公知的。例如，授予Harris等的美國(guó)專利No.5672662記載的PEG酸的活性酯類和具有單個(gè)丙酸或丁酸部分而沒(méi)有其它酯鏈的相關(guān)聚合物。SCM-PEG的制備記載于，如Veronese等的(1989)，Journal ofControlled Release，110145-54中。
SPA-PEG包括mPEG-SPA(甲氧基-PEG-琥珀酰亞胺丙酸酯)。SBA-PEG包括mPEG-SBA(甲氧基-PEG-琥珀酰亞胺丁酸酯)?；钚跃酆衔锶鏢BA-PEG和SPA-PEG，均商業(yè)可得并可得自如ShearwaterPolymers，Inc.，Huntsville，Alabama，U.S.A。
SCM-PEG(R-(OCH2CH2)n-O-CH2-CO-OSu；R是C1-8烷基；n是整數(shù))包括羧甲基化的PEG(mPEG-SCM)的甲氧基-PEG-琥珀酰亞胺酯。根據(jù)Greenwald et al.的報(bào)道，SCM-PEG″與蛋白反應(yīng)可形成穩(wěn)定的酰胺，但也報(bào)道了tl/2水解[Shearwater Polymers，Huntsville，AL，Jan 1996 catalog，p 46]在pH8時(shí)＜1分鐘，從而最小化了其在含水溶液中用于蛋白修飾的有效性...″(Bioconjugate Chem.，7(6)，638-641，1996)。
現(xiàn)在，SCM-PEG通?？梢杂扇鏒elmar Chemicals，Inc，Quebec，Canada合成。
SCM-PEG、SPA-PEG和SBA-PEG主要與賴氨酸的伯氨基和N-氨基末端反應(yīng)。SCM-PEG5K、SPA-PEG和SBA-PEG5K分別與EPO的反應(yīng)顯示如下，其中OSu代表n-羥基琥珀酰亞胺，和m是1-4，n是整數(shù)
為了研究促紅細(xì)胞生成素可能對(duì)于CNS的急性損傷包括中風(fēng)的治療是有效的，并且還可能抑制對(duì)遲發(fā)神經(jīng)毒性如細(xì)胞凋亡和炎癥的響應(yīng)過(guò)程的假說(shuō)，申請(qǐng)人試驗(yàn)了一些給藥方案，目的在于最佳化促紅細(xì)胞生成素在病灶性局部缺血性中風(fēng)中的活性。申請(qǐng)人在本文中顯示了在數(shù)天內(nèi)倍劑量給藥能使患永久性中腦動(dòng)脈閉塞的鼠的梗塞面積減少并改善功能性結(jié)果。另外，促紅細(xì)胞生成素的延緩給藥，甚至是在阻塞后的大約24小時(shí)給藥，也能改善功能性結(jié)果而不依賴于梗塞面積的減少。申請(qǐng)人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)促紅細(xì)胞生成素以2500IU/kg的多天給藥方案對(duì)于改善遭受MCAO鼠的結(jié)果是最有效的。在這些研究中，所發(fā)現(xiàn)的梗塞面積的減少相對(duì)小些(30％)，由于壞死被認(rèn)為是造成病灶性局部缺血性中風(fēng)(20)的永久性模型中梗塞量的細(xì)胞死亡的基本方法，因此不必驚訝于具有抗細(xì)胞凋亡作用機(jī)制的分子。
因而，本發(fā)明提供了一種治療患者局部缺血性發(fā)作的方法，包括給予所需患者治療有效量的促紅細(xì)胞生成素，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量促紅細(xì)胞生成素，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量促紅細(xì)胞生成素。優(yōu)選，對(duì)局部缺血性發(fā)作患者的治療包括促進(jìn)局部缺血性發(fā)作造成的任何后果如神經(jīng)學(xué)損害或梗塞的康復(fù)。在一個(gè)方面，局部缺血性發(fā)作的康復(fù)通過(guò)梗塞面積的減少來(lái)表示。在另一個(gè)方面，局部缺血性發(fā)作的康復(fù)通過(guò)患者功能性結(jié)果的改善來(lái)表示，如來(lái)自由行為評(píng)分系統(tǒng)評(píng)估的一個(gè)或多個(gè)分?jǐn)?shù)的改善。本發(fā)明所提供的治療結(jié)果可通過(guò)使用本領(lǐng)域公知的評(píng)定方法進(jìn)行評(píng)估，包括但不限于醫(yī)學(xué)成像系統(tǒng)如核磁共振成像(MRI)、CTA(計(jì)算機(jī)斷層血管造影術(shù))和CT掃描(計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù))、神經(jīng)學(xué)試驗(yàn)、須觸試驗(yàn)和足錯(cuò)試驗(yàn)(19)。
本發(fā)明還提供了抑制患者局部缺血性發(fā)作后CNS中細(xì)胞凋亡或炎癥的方法，包括給予所需患者治療有效量的促紅細(xì)胞生成素，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量促紅細(xì)胞生成素，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量促紅細(xì)胞生成素。
結(jié)果證明促紅細(xì)胞生成素的早期給藥是必需的，以獲得梗塞面積的減少。如果治療在阻塞后6小時(shí)開(kāi)始的話就無(wú)效了。特別是，在阻塞一開(kāi)始、24小時(shí)和48小時(shí)時(shí)以2500IU/kg的劑量給予多天劑量的促紅細(xì)胞生成素會(huì)導(dǎo)致減少30％的梗塞面積，而這些沒(méi)有在5000IU/kg或1250IU/kg的劑量水平上發(fā)現(xiàn)。因此，本發(fā)明提供了一種減少在局部缺血性發(fā)作6小時(shí)之內(nèi)最初接觸促紅細(xì)胞生成素的患者的梗塞面積的方法，包括給予所述患者每劑量在大約1500IU/kg至大約4500IU/kg之內(nèi)的促紅細(xì)胞生成素，其中在最初接觸促紅細(xì)胞生成素的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量促紅細(xì)胞生成素，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量促紅細(xì)胞生成素。
如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)″接觸″是指單次劑量、重復(fù)的個(gè)人劑量或在單次給藥后盡可能相對(duì)持續(xù)給藥，如長(zhǎng)效EPO，用法如含EPO的透皮貼劑或EPO植入物的植入。
另外，申請(qǐng)人現(xiàn)在驚奇的發(fā)現(xiàn)當(dāng)在損傷后大約24小時(shí)時(shí)給藥EPO，對(duì)遭受永久性MCAO的鼠有顯著的功能性改善。因而，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種促進(jìn)患者局部缺血性發(fā)作后功能康復(fù)的方法，包括給予所述患者治療有效量的EPO，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
在本發(fā)明的一個(gè)相關(guān)實(shí)施例中，EPO能以第三劑量給藥患者。第三劑量?jī)?yōu)選局部缺血性發(fā)作后的大約20小時(shí)至大約60小時(shí)之內(nèi)給予。其中第三劑量可以在第二劑量后的大約8小時(shí)至大約24小時(shí)之內(nèi)給予。
如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)″功能恢復(fù)″是指患者在局部缺血性發(fā)作后的行為改善。動(dòng)物的功能恢復(fù)可以被評(píng)估，例如，使用經(jīng)改良的Hernandez-Schallert足錯(cuò)試驗(yàn)(18)，其中將動(dòng)物放置在配有0.5cm直徑金屬柱，柱間隔為2cm的網(wǎng)格上，觀察2分鐘，在此期間記錄它們前后肢落下通過(guò)間隔的次數(shù)。人體的功能恢復(fù)可以通過(guò)用于測(cè)量基本神經(jīng)系統(tǒng)功能如運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、感覺(jué)和協(xié)調(diào)，認(rèn)知功能如記憶、語(yǔ)言和方向辨別能力，和功能性能力如基本的日常生活自理能力和儀器操作能力的儀器來(lái)評(píng)估。基本神經(jīng)系統(tǒng)功能的恢復(fù)可用儀器如NIH strokeScale(NIHSS)(31)測(cè)量，認(rèn)知功能的恢復(fù)可以通過(guò)神經(jīng)心理測(cè)驗(yàn)如Boston命令試驗(yàn)、Trail-making試驗(yàn)和California語(yǔ)言學(xué)習(xí)試驗(yàn)來(lái)測(cè)量，日常生活自理能力可以通過(guò)儀器如ADCS/ADL(Alzheimer′s病臨床研究/日常生活自理能力)測(cè)量器或Bristol日常生活自理能力測(cè)量器來(lái)測(cè)量，所有試驗(yàn)在本領(lǐng)域均是公知的。
如本文中所使用的延緩性給藥的示例，不會(huì)導(dǎo)致梗塞面積的減少。對(duì)于該發(fā)現(xiàn)的一種可能性解釋就是TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)染色法不能精確的表示梗塞區(qū)域。為了證明這種可能性，對(duì)代表性動(dòng)物切片以進(jìn)行一種更廣泛的形態(tài)學(xué)分析方法與TTC分析法相比較。在TTC染色邊緣內(nèi)沒(méi)有檢測(cè)到完整的神經(jīng)元(數(shù)據(jù)顯示無(wú))，從而表明該現(xiàn)象對(duì)我們的觀察是不負(fù)責(zé)任的。因而，通過(guò)抑制遠(yuǎn)離梗塞區(qū)的區(qū)域內(nèi)延緩性細(xì)胞凋亡或可能通過(guò)增強(qiáng)內(nèi)源性重建或重塑發(fā)生，EPO的延緩性給藥改善了功能而不依賴于梗塞區(qū)域面積的減少。
如上提及的，細(xì)胞凋亡可能在局部缺血性損傷后持續(xù)發(fā)生數(shù)天。延緩性細(xì)胞凋亡發(fā)生在局部缺血性半影中，并導(dǎo)致最終的梗塞量(21，22)。其還發(fā)生在遠(yuǎn)離梗塞區(qū)的區(qū)域內(nèi)，最可能是由于供給神經(jīng)元的營(yíng)養(yǎng)缺失因而缺乏給梗塞區(qū)域的關(guān)鍵投影。由于EPO已經(jīng)顯示出對(duì)神經(jīng)元總體(10，23)是有營(yíng)養(yǎng)的，對(duì)于延緩性EPO給藥的可能解釋就是阻止解剖學(xué)上位于距梗塞區(qū)域某段距離的神經(jīng)元的延緩性細(xì)胞凋亡。這些神經(jīng)元總體的不足可用于解釋我們行為評(píng)估中所觀察到的功能性行為的保護(hù)作用。
不能排除另外一種解釋，即EPO通過(guò)支持所述重建和重塑機(jī)制如神經(jīng)突生長(zhǎng)、突觸形成、突觸強(qiáng)化或暴露而增強(qiáng)了功能恢復(fù)過(guò)程。這種功能中的改善早至7天時(shí)就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)而非新長(zhǎng)途功能連接的建立，然而兩種報(bào)道表明至少一種可塑性的開(kāi)端通過(guò)7天就已顯而易見(jiàn)了。Kawamate et al.(24)檢查了病灶型局部缺血性中風(fēng)的鼠模型中基本成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)的效應(yīng)和Stroemer et al.(25)查看了在類似模型中的d-苯丙胺治療，觀察到用藥物治療在功能性行為中有改善但并不伴隨梗塞面積的減少。值得注意的是，在這些研究中雖然對(duì)動(dòng)物的觀察達(dá)兩個(gè)月，然而通過(guò)7天行為改善就已經(jīng)是顯著的了。
免疫組織化學(xué)分析顯示了這些研究中神經(jīng)突萌發(fā)增強(qiáng)的證據(jù)，其決定于生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(GAP43)表達(dá)的增加，在阻塞后的第3天達(dá)到最高。之前EPO已經(jīng)顯示出促進(jìn)神經(jīng)突萌發(fā)(26)。收集這些數(shù)據(jù)，表明在損傷后的最初幾天內(nèi)某些修復(fù)過(guò)程被抑制，并且EPO可以作用于這些早期過(guò)程中以增強(qiáng)功能恢復(fù)。其他的組織再生過(guò)程如暴露或突觸強(qiáng)化能在相當(dāng)短的時(shí)期內(nèi)發(fā)生，但是EPO對(duì)這些事件的影響還沒(méi)有顯現(xiàn)。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能容易的決定不同情況下給藥的適宜量和方法。任何給藥劑量段的任何具體接觸量中EPO的給藥量是沒(méi)有限制的，已經(jīng)證明EPO的給藥只要基本上沒(méi)有毒性效應(yīng)，每次接觸、劑量段或多天給藥方案中EPO的任何量都可以給藥。也就是說(shuō)，要是不用于其他的目的就不必要對(duì)其進(jìn)行限制，常規(guī)治療方針表明患者接受每劑量治療有效量EPO為大約500IU/kg至大約10000IU/kg。優(yōu)選，患者接受每劑量EPO量為大約1250IU/kg至大約5000IU/kg。更優(yōu)選，患者接受每劑量EPO量為大約2500IU/kg。如上述提及的，EPO的給藥可以以任何本領(lǐng)域已知的或新發(fā)展的給藥方式。
本發(fā)明期望EPO的多種給藥途徑可用于本發(fā)明的實(shí)踐中。優(yōu)選，每劑量EPO可以以所期望的使患者盡可能快接觸EPO的方式來(lái)給藥。也就是說(shuō)，期望多種給藥途徑，包括但不限于靜脈給藥、皮下給藥、肌內(nèi)或腹腔內(nèi)給藥。就口服制劑的有效性來(lái)講，所述的給藥途徑也是值得考慮的而且特別適于本文中所記載的第二次或隨后的EPO給藥。
對(duì)受益于給藥方案的患者不作特別的限制，可以包括人和動(dòng)物患者，優(yōu)選哺乳動(dòng)物患者。
如下的實(shí)施例用于舉例說(shuō)明本發(fā)明，但不能解釋為對(duì)它的限制。通過(guò)參考隨后所列的數(shù)據(jù)和例子可以更好的理解本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員能容易的理解它們僅僅是作為本發(fā)明的例證，完整的描述記載于它們隨后的權(quán)利要求中。
實(shí)施例1材料和方法動(dòng)物和MCAO外科手術(shù)操作中所用的動(dòng)物經(jīng)Johnson & Johnson Institutional AnimalCare和Use Committee認(rèn)可。體重在290g和320g之間的雄性斯普拉-道來(lái)氏(Sprague-Dawley)大鼠(Charles River Laboratories，Raleigh，NC)被分別關(guān)在溫度可控的環(huán)境之內(nèi)，經(jīng)過(guò)12小時(shí)(6:00-18:00)光的明暗循環(huán)，并給予食物和水a(chǎn)d libidum。用2.5％異氟烷麻醉動(dòng)物，并使其體溫維持在37℃。根據(jù)Zimmerman etal.(17)中所記載的進(jìn)行永久性MCAO。簡(jiǎn)單的說(shuō)，在腹側(cè)前開(kāi)個(gè)切口使左右頸總動(dòng)脈(CCA)直觀可見(jiàn)。使用4-0結(jié)扎絲線對(duì)右CCA進(jìn)行永久性阻塞。進(jìn)行開(kāi)顱手術(shù)，在前1mm和側(cè)3-4mm形成卵圓孔以看見(jiàn)右大腦中動(dòng)脈(MCA)。隨后，通過(guò)燒灼豆紋動(dòng)脈的遠(yuǎn)端將MCA永久性阻塞。隨后使用動(dòng)脈瘤夾將左CCA短暫性阻塞1小時(shí)。在阻塞后，用外科縫合線將切口縫合，將布比卡因(0.25％)涂于切口部位。在加溫?zé)粝?，?dòng)物從麻醉中蘇醒。
24小時(shí)后，用神經(jīng)學(xué)試驗(yàn)、須觸試驗(yàn)和足錯(cuò)試驗(yàn)對(duì)鼠進(jìn)行評(píng)估。如表1中所示，在阻塞后對(duì)遭受MCAO的鼠的損傷嚴(yán)重度評(píng)估24小時(shí)。完成三種試驗(yàn)神經(jīng)學(xué)評(píng)估、須觸試驗(yàn)和足錯(cuò)試驗(yàn)(19)。得分超出預(yù)定參數(shù)的鼠被判定具有太輕或太嚴(yán)重的缺陷，并被排除進(jìn)行進(jìn)一步的分析。神經(jīng)學(xué)得分為0或須觸得分≥1和足錯(cuò)得分≤2(無(wú)損傷)的動(dòng)物或神經(jīng)學(xué)得分≥2(嚴(yán)重?fù)p傷)的動(dòng)物被排除進(jìn)行進(jìn)一步的分析。
7天后分析動(dòng)物的梗塞面積和功能性結(jié)果。
表1.用于評(píng)估損傷的行為評(píng)分系統(tǒng)

藥物和給藥將酒石酸右啡烷(Sigma Chemicals)溶于濃度為25mg/ml的EPO載體中(4.38mg/ml NaCl，1.lmg/ml NaH2PO4，1.6mg/ml Na2HPO4，5.0mg/ml甘氨酸，0.3mg/ml溶于蒸餾水中的Tween80，Ph6.9)。在載體溶液中將重組人促紅細(xì)胞生成素(Epoetin alfa)稀釋至最終濃度。所有藥物均通過(guò)三種給藥方案之一以1ml/kg的量由尾靜脈靜脈給藥(i.v.)1)單天給藥方案-在左CCA阻塞之前(0小時(shí))迅速給藥載體、右啡烷(25mg/kg)或EPO(5000IU/kg)，隨后在1小時(shí)后在血流恢復(fù)后迅速給予第二劑量。
2)多天給藥方案-在0小時(shí)給藥載體或EPO(5000IU/kg，2500IU/kg或1250IU/kg)，在之后的24小時(shí)和48小時(shí)給予隨后的劑量。
3)延緩性多天給藥方案-在阻塞后6小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)給藥載體或EPO(5000IU/kg或2500IU/kg)，或在阻塞后24小時(shí)或48小時(shí)給藥。
梗塞面積的測(cè)定7天后將動(dòng)物處死，將大腦移出并置于冰凍PBS中。使用腦基質(zhì)(Kent Scientific)將大腦切成2mm厚的部分，隨后用2％2，3，5-氯化三苯四唑染色，腦部分用與立體顯微鏡相連的CCD照相機(jī)成像，用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)備測(cè)定梗塞面積。將所有部分的梗塞量相結(jié)合用以得到絕對(duì)梗塞量。還測(cè)定了相對(duì)梗塞量(絕對(duì)梗塞量/腦半球總量)。
行為分析使用經(jīng)改良的Hernandez-Schallert足錯(cuò)試驗(yàn)(18)評(píng)估動(dòng)物的功能康復(fù)。在該試驗(yàn)中，將動(dòng)物放置在配有0.5cm直徑金屬柱，柱間隔為2cm的網(wǎng)格上。對(duì)動(dòng)物觀察2分鐘，記錄它們前后肢落入間隔的次數(shù)。
統(tǒng)計(jì)分析使用Kruskal-Walis試驗(yàn)進(jìn)行治療組的非參數(shù)分析，隨后通過(guò)該分析比較治療組和載體對(duì)照組。
結(jié)果外科結(jié)果229只遭受MCAO的動(dòng)物用于這試驗(yàn)。其中28只在第7天分析前死亡，4只被排除用于在24小時(shí)的評(píng)估(參見(jiàn)材料和方法和表1)。在研究中，為了對(duì)照梗塞面積和梗塞位置，具有皮下受累(n-21)梗塞的動(dòng)物被排除分析。體重或體溫不同的治療組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
單天給藥方案EPO的單天給藥方案用于減少梗塞量和改善功能性結(jié)果的能力已經(jīng)被試驗(yàn)。當(dāng)在阻塞后7天分析時(shí)，用右啡烷(25mg/kg)或EPO(5000IU/kg)治療的動(dòng)物相比較于用載體治療的，在梗塞量或功能性結(jié)果上沒(méi)有顯示出差異(附圖1)。當(dāng)在阻塞后24小時(shí)分析時(shí)，右啡烷減少了梗塞量(未顯示數(shù)據(jù))。
多天給藥方案試驗(yàn)在阻塞時(shí)和阻塞后24小時(shí)和48小時(shí)給予EPO多天劑量的效果。以2500IU/kg的EPO多天治療將導(dǎo)致絕對(duì)梗塞面積(附圖2A)和具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜.05)的相對(duì)梗塞面積(數(shù)據(jù)未顯示)均減少30％。而在5000IU/kg或1250IU/kg的劑量水平上均不能觀察到梗塞面積的減少。行為分析顯示，與用載體治療的動(dòng)物相比，5000IU/kg時(shí)功能恢復(fù)顯著改善61％，在2500IU/kg時(shí)為65％(分別為p＜.01和p＜.001，附圖2B)。EPO在1250IU/kg時(shí)對(duì)功能性結(jié)果無(wú)效。
延緩性多天給藥方案已知在中風(fēng)發(fā)生后將中風(fēng)患者迅速送入急救室通常是不現(xiàn)實(shí)和不可能的。本發(fā)明證明了在輔助中風(fēng)康復(fù)中EPO治療的延緩發(fā)生是有效的。在本發(fā)明中，阻塞后EPO的最初劑量被延緩了6小時(shí)，隨后在24小時(shí)和48小時(shí)給藥。對(duì)于6小時(shí)的治療延緩，無(wú)論是5000IU/kgEPO劑量還是2500IU/kg EPO劑量都不能導(dǎo)致梗塞面積(附圖3)的顯著減少。意料不到是，在5000IU/kg和2500IU/kg的劑量水平下，其功能分相對(duì)于載體分別增加了46％(p＜.05)和56％(p＜.01)。當(dāng)?shù)谝惶斓慕o藥劑量被清除，在損傷后的24小時(shí)和48小時(shí)給藥，也能觀察到類似的結(jié)果(附圖4)即相對(duì)于載體，其在5000IU/kg(49％)和2500IU/kg(68％)梗塞面積沒(méi)有減少，在功能性結(jié)果上顯著改善。
與用載體治療的動(dòng)物相比，EPO的多天給藥方案減少了梗塞面積并改善了功能性結(jié)果。延緩EPO的最初劑量至梗塞后24小時(shí)對(duì)于改善功能性結(jié)果是有效的，但不能減少梗塞面積。單天給藥方案對(duì)于梗塞面積或功能性結(jié)果均無(wú)效。
這些工作支持了先前報(bào)道的EPO在急性局部缺血性中風(fēng)動(dòng)物模型中的有效性。而且，這些數(shù)據(jù)證明了能延長(zhǎng)有效的用于EPO改善功能性結(jié)果的治療時(shí)間窗，并證明了當(dāng)考慮EPO用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療時(shí)該給藥方案是重要的。
然而上述說(shuō)明僅教導(dǎo)了本發(fā)明的原理，其中的實(shí)施例用于舉例說(shuō)明，能理解的是本發(fā)明的實(shí)踐包括了所有通常的變化、改變和/或修飾，它們均包括在如下權(quán)利要求及其等同體的范圍之內(nèi)。
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權(quán)利要求
1.一種用于促進(jìn)局部缺血性發(fā)作后康復(fù)的促紅細(xì)胞生成素的給藥方案，包括給予所需患者治療有效量的EPO，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
2.權(quán)利要求1的給藥方案，其中在局部缺血性發(fā)作后大約24小時(shí)給予第一劑量EPO。
3.權(quán)利要求2的給藥方案，其中在第一劑量后的大約24小時(shí)給予第二劑量。
4.權(quán)利要求1的給藥方案，進(jìn)一步包括在局部缺血性發(fā)作后的大約20小時(shí)至大約60小時(shí)之內(nèi)給予患者第三劑量EPO。
5.權(quán)利要求4的給藥方案，其中在第二劑量后的大約8至24小時(shí)之內(nèi)給予第三劑量EPO。
6.上述權(quán)利要求任一的給藥方案，其中至少一次劑量的EPO是通過(guò)皮下、肌內(nèi)、靜脈或腹腔內(nèi)途徑給藥。
7.上述權(quán)利要求任一的給藥方案，其中EPO的每次給藥劑量選自大約500IU/kg至大約10000IU/kg。
8.權(quán)利要求7的給藥方案，其中EPO的每次給藥劑量選自大約2500IU/kg至大約5000IU/kg。
9.權(quán)利要求7的給藥方案，其中EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。
10.上述權(quán)利要求任一的給藥方案，其中局部缺血性發(fā)作是中風(fēng)。
11.權(quán)利要求10的給藥方案，其中至少一次EPO的給藥劑量為大約2500IU/kg。
12.權(quán)利要求11的給藥方案，其中EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。
13.上述任一權(quán)利要求的給藥方案，其中促紅細(xì)胞生成素是長(zhǎng)效EPO。
14.一種治療局部缺血性發(fā)作患者的方法，包括給予所述患者治療有效量的EPO，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
15.權(quán)利要求14的方法，其中在局部缺血性發(fā)作后大約24小時(shí)給予第一劑量EPO。
16.權(quán)利要求15的方法，其中在第一劑量后的大約24小時(shí)給予第二劑量。
17.權(quán)利要求14的方法，進(jìn)一步包括在局部缺血性發(fā)作后的大約20小時(shí)至大約60小時(shí)之內(nèi)給予患者第三劑量EPO。
18.權(quán)利要求16的方法，其中在第二劑量后的大約8至24小時(shí)之內(nèi)給予第三劑量EPO。
19.權(quán)利要求14-18的方法，其中EPO的每次給藥包括通過(guò)皮下、肌內(nèi)、靜脈或腹腔內(nèi)注射EPO。
20.權(quán)利要求14-18任一的方法，其中EPO的每次給藥劑量選自大約500IU/kg至大約10000IU/kg。
21.權(quán)利要求20的方法，其中EPO的每次給藥劑量選自大約2500IU/kg至大約5000IU/kg。
22.權(quán)利要求21的方法，其中EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。
23.權(quán)利要求14-18任一的方法，其中局部缺血性發(fā)作是中風(fēng)。
24.權(quán)利要求23的方法，其中至少一次EPO的給藥劑量為大約2500IU/kg。
25.一種促進(jìn)患者局部缺血性發(fā)作后功能恢復(fù)的方法，包括給予所述患者治療有效量的EPO，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
26.權(quán)利要求25的方法，其中在局部缺血性發(fā)作后大約24小時(shí)給予第一劑量EPO。
27.權(quán)利要求26的方法，其中在第一劑量后的大約24小時(shí)給予第二劑量。
28.權(quán)利要求25的方法，進(jìn)一步包括在局部缺血性發(fā)作后的大約20小時(shí)至大約60小時(shí)之內(nèi)給予患者第三劑量EPO。
29.權(quán)利要求28的方法，其中在第二劑量后的大約8至24小時(shí)之內(nèi)給予第三劑量EPO。
30.權(quán)利要求28-32任一的方法，其中EPO的每次給藥包括通過(guò)皮下、肌內(nèi)、靜脈或腹腔內(nèi)注射EPO。
31.權(quán)利要求28-32任一的方法，其中EPO的每次給藥劑量選自大約500IU/kg至大約10000IU/kg。
32.權(quán)利要求31的方法，其中EPO的每次給藥劑量選自大約2500IU/kg至大約5000IU/kg。
33.權(quán)利要求32的方法，其中EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。
34.權(quán)利要求28-32任一的方法，其中局部缺血性發(fā)作是中風(fēng)。
35.權(quán)利要求34的方法，其中至少一次EPO的給藥劑量為大約2500IU/kg。
36.權(quán)利要求35的方法，其中EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。
37.一種減少在局部缺血性發(fā)作6小時(shí)之內(nèi)最初接觸EPO的患者的梗塞面積的方法，包括給予患者每劑量大約1500IU/kg至大約4500IU/kg的EPO，其中在最初接觸EPO后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
38.權(quán)利要求37的方法，其中在局部缺血性發(fā)作后大約24小時(shí)給予第一劑量EPO。
39.權(quán)利要求38的方法，其中在第一劑量后的大約24小時(shí)給予第二劑量。
40.權(quán)利要求37的方法，進(jìn)一步包括在局部缺血性發(fā)作后的大約20小時(shí)至大約60小時(shí)之內(nèi)給予患者第三劑量EPO。
41.權(quán)利要求40的方法，其中在第二劑量后的大約8至24小時(shí)之內(nèi)給予第三劑量EPO。
42.權(quán)利要求37-41任一的方法，其中EPO的每次給藥包括通過(guò)皮下、肌內(nèi)、靜脈或腹腔內(nèi)注射EPO。
43.權(quán)利要求37-41任一的方法，其中EPO的每次給藥劑量選自大約1800IU/kg至大約4000IU/kg。
44.權(quán)利要求43的方法，其中EPO的每次給藥劑量選自大約2000IU/kg至大約3000IU/kg。
45.權(quán)利要求44的方法，其中EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。
46.權(quán)利要求37-41任一的方法，其中局部缺血性發(fā)作是中風(fēng)。
47.權(quán)利要求46的方法，其中至少一次EPO的給藥劑量為大約2500IU/kg。
48.權(quán)利要求47的方法，其中EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。
49.一種抑制患者局部缺血性發(fā)作后CNS中的細(xì)胞凋亡或炎癥的方法，包括給予所述患者治療有效量的EPO，其中在局部缺血性發(fā)作后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第一劑量EPO，隨后在第一劑量后的大約8小時(shí)至大約26小時(shí)之內(nèi)給予第二劑量EPO。
50.權(quán)利要求49的方法，其中在局部缺血性發(fā)作后大約24小時(shí)給予第一劑量EPO。
51.權(quán)利要求50的方法，其中在第一劑量后的大約24小時(shí)給予第二劑量。
52.權(quán)利要求51的方法，進(jìn)一步包括在局部缺血性發(fā)作后的大約20小時(shí)至大約60小時(shí)之內(nèi)給予患者第三劑量EPO。
53.權(quán)利要求52的方法，其中在第二劑量后的大約8至24小時(shí)之內(nèi)給予第三劑量EPO。
54.權(quán)利要求49的方法，其中EPO的每次給藥包括通過(guò)皮下、肌內(nèi)、靜脈或腹腔內(nèi)注射EPO。
55.權(quán)利要求49的方法，其中EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。
56.權(quán)利要求49的方法，其中局部缺血性發(fā)作是中風(fēng)。
57.權(quán)利要求56的方法，其中至少一次EPO的給藥劑量為大約2500IU/kg。
58.權(quán)利要求57的方法，其中EPO的每次給藥劑量為大約2500IU/kg。
全文摘要
本發(fā)明證明了EPO在促進(jìn)患者局部缺血性發(fā)作后康復(fù)中的有效性。本發(fā)明還證明了在治療局部缺血性中風(fēng)中最初使用EPO的機(jī)會(huì)的期限要長(zhǎng)于先前所知道的。
文檔編號(hào)C07K14/505GK1764470SQ200480008333
公開(kāi)日2006年4月26日 申請(qǐng)日期2004年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月27日
發(fā)明者M·戈?duì)柕? M·J·倫茨, K·J·羅德斯, N·蒂魯馬萊, F·法雷爾, L·喬利菲 申請(qǐng)人:詹森藥業(yè)有限公司