專利名稱：趨化因子受體活性的四氫吡喃基環(huán)戊基雜環(huán)酰胺調(diào)節(jié)劑的制作方法
背景技術(shù)：
趨化因子是具有強力趨化活性的小的(70-120個氨基酸)前炎性細(xì)胞因子的家族。趨化因子為由吸引至炎癥部位的各種細(xì)胞例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞釋放的趨化性細(xì)胞因子(在Schall，Cytokine，3，165-183(1991)和Murphy，Rev.Immun.，12，593-633(1994)中綜述)。這些分子最初通過四種保守的半胱氨酸定義并基于第一個半胱氨酸對的排布分為兩個亞家族。在CXC-趨化因子家族中，它包括IL-8、GROα、NAP-2和IP-10，這兩種半胱氨酸被單一氨基酸分開，而在CC-趨化因子家族中，它包括RANTES、MCP-1、MCP-2、MCP-3、MIP-1α、MIP-1β和嗜兩性粒細(xì)胞趨化因子(eotaxin)，這兩個殘基是相鄰的。
α-趨化因子，例如白介素-8(IL-8)、嗜中性細(xì)胞活化蛋白-2(NAP-2)和黑素瘤細(xì)胞生長刺激活性蛋白(MGSA)，主要為中性粒細(xì)胞的趨化因子，而β-趨化因子，例如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、MCP-2、MCP-3和嗜兩性粒細(xì)胞趨化因子為巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、T-細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的趨化因子(Deng等，Nature，381，661-666(1996))。
趨化因子通過多種細(xì)胞類型分泌并且結(jié)合在存在于白細(xì)胞和其他的細(xì)胞上的特異性G-蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)(在Horuk，TrendsPharm.Sci.，15，159-165(1994)中綜述)。這些趨化因子受體形成GPCRs的亞家族，后者目前由15個已鑒定的成員和一些孤獨的膜組成。不像混棲化學(xué)引誘物例如C5a、fMLP、PAF和LTB4的受體那樣，趨化因子受體更選擇性地在白細(xì)胞亞型上表達(dá)。因此，特異性趨化因子的生成提供特殊白細(xì)胞亞型的反射增進(jìn)機(jī)制。
在結(jié)合它們的同源配體上，趨化因子受體通過有關(guān)的三聚化G蛋白傳導(dǎo)胞內(nèi)信號，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣濃度迅速增加。至少有7種人趨化因子受體結(jié)合具有下面已確證類型的β-趨化因子或者對其有反應(yīng)CCR-1(或者“CKR-1”或者“CC-CKR-1”)[MIP-1α、MIP-1β、MCP-3、RANTES](Ben-Barruch等，J.Biol.Chem.，270，22123-22128(1995)；Beote等，Cell，72，415-425(1993))、CCR-2A和CCR-2B(或者“CKR-2A”/”CKR-2A”或者“CC-CKR-2A”/”CC-CKR-2A”)[MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4]、CCR-3(或者“CKR-3”或者“CC-CKR-3”)[嗜兩性粒細(xì)胞趨化因子、嗜兩性粒細(xì)胞趨化因子2、RANTES、MCP-2、MCP-3](Rollins等，Blood，90，908-928(1997))、CCR-4(或者“CKR-4”或者“CC-CKR-4”)[MIP-1α、RANTES、MCP-1](Rollins等，Blood，90，908-928(1997))、CCR-5(或者“CKR-5”或者“CC-CKR-5”)[MIP-1α、RANTES、MIP-1β](Sanson等，Biochemistry，35，3362-3367(1996))和Duffy-血-群抗原[RANTES、MCP-1](Chaudhun等，J.Biol.Chem.，269，7835-7838(1994))。β-趨化因子包括嗜兩性粒細(xì)胞趨化因子、MIP(“巨噬細(xì)胞炎性蛋白”)、MCP(“單核細(xì)胞化學(xué)引誘物蛋白”)和在其他趨化因子中的(“調(diào)節(jié)-向上-激活，正常T表達(dá)和分泌的”)RANTES。
趨化因子受體例如CCR-1、CCR-2、CCR-2A、CCR-2B、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CXCR-3、CXCR-4已作為重要的介質(zhì)參與炎性和免疫調(diào)節(jié)紊亂和疾病，包括哮喘、鼻炎和變應(yīng)性疾病，以及自身免疫病理學(xué)例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化。在CCR-5基因上的32-堿基對剔除的同源的人似乎對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎不太易感(Gomez等，Arthritis & Rheumatism，42，989-992(1999))。嗜酸性粒細(xì)胞在變應(yīng)性炎癥中的作用的綜述由Kita，H等，J.Exp.Med.183，2421-2426(1996)提供。趨化因子在變應(yīng)性炎癥中的作用的一般綜述由Lustger，A.D.，New England J.Med.，338(7)，426-445(1998)提供。
趨化因子的亞型為單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的有效化學(xué)誘導(dǎo)物。這些中鑒定最充分的為MCP-1(單核細(xì)胞化學(xué)誘導(dǎo)物蛋白-1)，其初級受體為CCR2。各種物種，包括嚙齒動物和人，在對炎性刺激的反應(yīng)中，會在多種細(xì)胞類型中產(chǎn)生MCP-1，并且刺激單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞亞型中的趨化性。具體地說，MCP-1產(chǎn)生與炎癥部位的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤相關(guān)。通過小鼠體內(nèi)同源重組消除MCP-1或者CCR2導(dǎo)致對巰基乙酸注射和單核細(xì)胞增生李司忒氏菌(Listeria monocytogenes)感染的應(yīng)答的單核細(xì)胞反射增進(jìn)的顯著減弱(Lu等，J.Exp.Med.187，601-608(1998)；Kurihara等，J.Exp.Med.186，1757-1762(1997)；Boring等，J.Clin.Invest.，100，2552-2561(1997)；Kuziel等，Proc.Natl.Acad.Sci.，94，12053-12058(1997))。另外，這些動物顯示由注射血吸蟲或者分枝桿菌抗原誘導(dǎo)的單核細(xì)胞浸潤進(jìn)入肉芽腫性病變部位的減少(Boring等，J.Clin.Invest.，100，2552-2561(1997)；Warmington等，Am.J.Path.，154，1407-1416(1999))。這些數(shù)據(jù)提示MCP-1誘導(dǎo)的CCR2激活在單核細(xì)胞對炎癥部位的反射增進(jìn)中起主要作用，并且這種活性的拮抗作用應(yīng)產(chǎn)生足夠的免疫應(yīng)答抑制以在免疫炎性疾病和自身免疫疾病中產(chǎn)生治療效果。
因此，調(diào)節(jié)趨化因子受體例如CCR-2受體的藥物在這樣的紊亂和疾病中應(yīng)是有用的。
另外，單核細(xì)胞對血管壁上炎性病變的反射增進(jìn)是致動脈粥樣化斑塊形成的主要原因。在高膽固醇血癥中血管壁損傷后，MCP-1通過內(nèi)皮細(xì)胞和血管內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生和分泌。作為對釋放的MCP-1的應(yīng)答，對損傷部位反射增進(jìn)的單核細(xì)胞浸潤血管壁并分化為泡沫細(xì)胞。目前幾個小組已證實與維持高脂肪食物喂飼的APO-E-/-、LDL-R-/-或者Apo B轉(zhuǎn)基因小鼠回交的MCP-1-/-或者CCR-2-/-小鼠中主動脈病變大小、巨噬細(xì)胞含量和壞死均減弱(Boring等，Nature，394，894-897(1998)；Gosling等，J.Clin.Invest.，103，773-778(1999))。因此，通過修復(fù)單核細(xì)胞反射增進(jìn)和動脈壁上的分化，CCR2拮抗劑可以抑制動脈粥樣硬化病變形成和病理學(xué)的發(fā)展。
發(fā)明概述本發(fā)明還涉及化合物，它們是趨化因子受體活性的調(diào)節(jié)劑并且用于預(yù)防或者治療某些炎性和免疫調(diào)節(jié)紊亂和疾病、變應(yīng)性疾病、特異反應(yīng)性疾病包括過敏性鼻炎、皮炎、結(jié)膜炎和哮喘，以及自身免疫病理學(xué)疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化。本發(fā)明也涉及含這些化合物的藥用組合物和這些化合物及組合物在預(yù)防或者治療涉及趨化因子受體的此類疾病中的用途。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及式I的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體 其中A、B、X和D定義如下，條件是A、B、X和D不能同時為相應(yīng)的CR8R8、CR2R2、CR4和CR3，并且當(dāng)至少A、B或X之一不為相應(yīng)的CR8R8、CR2R2或CR4時，D只能為氮，A獨立地選自-CR8R8、-CO-、-NR8-和-O-，其中R8獨立地選自氫、C1-6烷基、C0-4烷基COR11，且其中R11選自羥基、氫、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基可未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基的取代基取代；
B選自-CR2R2、-O-、-SO-、-SO2-、-NSO2R14-、-NCOR13-、-NCONR12R12-和-CO-，其中R2獨立地選自氫、C1-6烷基、氟、羥基、雜環(huán)、-NHCOR13、-NHSO2R14和-O-C1-6烷基，且其中R12選自氫、C1-6烷基、芐基、苯基、C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基可未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基的取代基取代，且其中R13選自氫、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基、C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基可未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基的取代基取代，且其中R14選自羥基、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基、C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基可未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基的取代基取代，且其中所述雜環(huán)未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基、C1-3烷氧基和三氟甲基的取代基取代；X獨立地選自碳原子或氮原子；D可為碳原子，且當(dāng)B、X或D之一不為相應(yīng)的CR2R2、碳原子和碳原子時，則D還可為氮原子；Y選自-O-、-NR12-、-S-、-SO-、-SO2-、-CR11R11-、NSO2R14-、-NCOR13-、-NCONR12R12-、-CR11COR11-、-CR11OCOR13-和-CO-；R1選自氫、-C1-6烷基、-C0-6烷基-O-C1-6烷基、-C0-6烷基-S-C1-6烷基、-(C0-6烷基)-(C3-7環(huán)烷基)-(C0-6烷基)、羥基、雜環(huán)、-CN、-NR12R12、-NR12COR13、-NR12SO2R14、-COR11、-CONR12R12和苯基，其中所述烷基和環(huán)烷基未取代或被1-7個取代基取代，所述取代基獨立地選自(a)鹵素，
(b)羥基，(c)-O-C1-3烷基，(d)三氟甲基，(f)C1-3烷基，(g)-O-C1-3烷基，(h)-COR11，(i)-SO2R14，(j)-NHCOCH3，(k)-NHSO2CH3，(l)-雜環(huán)，(m)＝O，(n)-CN，其中所述苯基和雜環(huán)未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基、C1-3烷氧基和三氟甲基的取代基取代；R3選自(a)氫，(b)任選被1-3個氟取代的C1-3烷基，(c)任選被1-3個氟取代的-O-C1-3烷基，(d)羥基，(e)氯，(f)氟，(g)溴，(h)苯基，(i)雜環(huán)，和(j)不存在、氧，或者當(dāng)與R3相連的Z為氮時則為氫；R4選自(a)氫，(b)任選被1-3個氟取代的C1-3烷基，
(c)任選被1-3個氟取代的-O-C1-3烷基，(d)羥基，(e)氯，(f)氟，(g)溴，(h)苯基，(i)雜環(huán)，和(j)不存在、氧，或者當(dāng)與R4相連的Z為氮時則為氫；R5選自(a)C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，并任選被羥基取代，(b)-O-C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，(c)-CO-C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，(d)-S-C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，(e)-吡啶基，所述吡啶基未取代或被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代，(f)氟，(g)氯，(h)溴，(i)-C4-6環(huán)烷基，(j)-O-C4-6環(huán)烷基，(k)苯基，所述苯基未取代或被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代，(l)-O-苯基，所述苯基未取代或被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代，(m)-C3-6環(huán)烷基，其中所述環(huán)烷基未取代或被1-6個氟取代，(n)-O-C3-6環(huán)烷基，其中所述環(huán)烷基未取代或被1-6個氟取代，(o)-雜環(huán)，
(p)-CN，和(q)-COR11；R15選自(a)氫，和(b)C1-6烷基，所述烷基未取代或被1-3個獨立選自鹵素、羥基、-CO2H、-CO2C1-6烷基和-O-C1-3烷基的取代基取代；R16選自(a)氫，(b)C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代；(c)氟，(d)-O-C1-3烷基，其中所述烷基未取代或被1-3個氟取代，和(e)C3-6環(huán)烷基，(f)-O-C3-6環(huán)烷基，(g)羥基，(h)-COR11，(i)-OCOR13，或者R15和R16可通過C2-4烷基鏈或C0-2烷基-O-C1-3烷基鏈連接在一起形成5-7元環(huán)；R17選自(a)氫，(b)C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代，(c)COR11，(d)羥基，和(e)-O-C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代，
或者R16和R17通過C1-4烷基鏈或C0-3烷基-O-C0-3烷基鏈連接在一起形成3-6元環(huán)；R18選自(a)氫，和(b)C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，(c)氟，(d)-O-C3-6環(huán)烷基，和(e)-O-C1-3烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，或者R16和R18通過C2-3烷基鏈連接在一起形成5-6元環(huán)，其中所述烷基未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代，或者R16和R18通過C1-2烷基-O-C1-2烷基鏈連接在一起形成6-8元環(huán)，其中所述烷基未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代，或者R16和R18通過-O-C1-2烷基-O-鏈連接在一起形成6-7元環(huán)，其中所述烷基未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代，n選自0、1和2；虛線代表單鍵或雙鍵。
本發(fā)明化合物的又一方面包括式Ia的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體 其中R1、R3、R5、R15、R16、R18、A、B、D、X和Y如本文定義。
本發(fā)明化合物的再一方面包括式Ib的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體 其中R1、R3、R5、R16、A、B、D和X如本文定義。
本發(fā)明化合物的另一方面包括式Ic的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體 其中R1、R3、R5和R16如本文定義。
本發(fā)明化合物的另一方面還包括式Id的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體 其中R3、R5和R16如本文定義。
本發(fā)明化合物的再一方面還包括式Ie的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體 其中R3、R5、R16和D如本文定義。
本發(fā)明化合物的另一方面還包括式If的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體 其中R3、R5、R16和D如本文定義。
本發(fā)明化合物的另一方面還包括式Ig的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體 其中R3、R5和R16如本文定義。
本發(fā)明化合物的另一方面還包括式Ih的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體 其中R3、R5和R16如本文定義。
在本發(fā)明化合物的另一個方面中，Y選自-O-、-CH2-、-S-、-SO-和-SO2-。
在本發(fā)明的另一個方面中，R1選自(1)未取代或被1-6個取代基取代的-C1-6烷基，其中所述取代基獨立地選自(a)鹵素，(b)羥基，(c)-O-C1-3烷基，(d)三氟甲基，和(e)-COR11，(2)未取代或被1-6個取代基取代的-C0-6烷基-O-C1-6烷基-，其中所述取代基獨立地選自(a)鹵素，(b)三氟甲基，和(c)-COR11，(3)未取代或被1-7個取代基取代的-(C3-5環(huán)烷基)-(C0-6烷基)，其中所述取代基獨立地選自(a)鹵素，(b)羥基，
(c)-O-C1-3烷基，(d)三氟甲基，和(e)-COR11，(4)未取代或被1-3個取代基取代的苯基或雜環(huán)，其中所述取代基獨立地選自(a)鹵素，(b)羥基，(c)-O-C1-3烷基，(d)三氟甲基，和(e)-COR11。
在本發(fā)明的另一個方面中，R1為未取代或被1-5個取代基取代的C1-6烷基，其中所述取代基獨立地選自(a)羥基，和(b)氟。
在本發(fā)明的再一個方面中，R1選自(a)異丙基，(b)-CH(OH)CH3，和(c)-CH2CF3。
在本發(fā)明的另一個方面中，當(dāng)D為氮原子時，R3不存在、為氫或氧。
在本發(fā)明的再一個方面中，當(dāng)D為碳原子時，R3選自(a)氫，(b)鹵素，(c)羥基，(d)C1-3烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代，(e)-COR11，(f)-CONR12R12，
(g)-雜環(huán)，(h)-NR12-SO2-NR12R12，(i)-NR12-SO2-R14，(j)-SO2-NR12R12，(k)-硝基，和(l)-NR12R12。
在本發(fā)明的另一個方面中，當(dāng)D為氮時，R3不存在或為氫。
在本發(fā)明的再一個方面中，當(dāng)D為碳時，R3選自(a)氟，(b)三氟甲基，(c)氫。
在本發(fā)明的另一個方面中，當(dāng)D為氮時，R3不存在。
在本發(fā)明的另一個方面中，當(dāng)D為碳時，R3選自(a)氟，(b)氫。
在本發(fā)明的再一個方面中，當(dāng)X為氮時，R4不存在、為氫或氧。
在本發(fā)明的再一個方面中，當(dāng)X為氮時，R4不存在。
在本發(fā)明的又一個方面中，當(dāng)X為碳原子時，R4選自(a)氫，(b)三氟甲基，和(c)鹵素。
在本發(fā)明的再一個方面中，X為碳原子，R4為氫。
在本發(fā)明的另一個方面中，R5選自(a)被1-6個氟取代的C1-3烷基，(b)氯，(c)溴，(d)未取代或被一個或多個選自鹵素和三氟甲基的取代基取代的-O-苯基，
(e)未取代或被一個或多個選自鹵素和三氟甲基的取代基取代的苯基和(f)被1-6個氟取代的-O-C1-3烷基。
在本發(fā)明的又一個方面中，R5選自(a)三氟甲基，(b)三氟甲氧基，(c)溴，和(d)氯。
在本發(fā)明的再一個方面中，R5選自三氟甲基和三氟甲氧基。
在本發(fā)明的另一個方面中，R15為氫或甲基。
在本發(fā)明的再一個方面中，R16選自(a)氫，(b)未取代或被1-6個氟取代的C1-3烷基，(c)-O-C1-3烷基，和(d)氟，和(e)羥基。
在本發(fā)明的又一個方面中，R16選自(a)氫，(b)三氟甲基，(c)甲基，(d)甲氧基，(e)乙氧基，(f)乙基，(g)氟，和(h)羥基。
在本發(fā)明的再一個方面中，R16選自(a)氫，(b)甲基，
(c)甲氧基。
在本發(fā)明的另一個方面中，R18選自(a)氫，(b)甲基，和(c)甲氧基；在本發(fā)明的再一個方面中，R16和R18通過-CH2CH2-鏈或-CH2CH2CH2-鏈連接在一起形成環(huán)戊基環(huán)或環(huán)己基環(huán)。
本發(fā)明的代表性化合物包括實施例中描述的那些化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體。
本發(fā)明的化合物在環(huán)戊基環(huán)的1-和3-位具有至少兩個不對稱中心。取決于分子上各種取代基的性質(zhì)，可存在其他的不對稱中心。每一這樣的不對稱中心獨立產(chǎn)生兩個光學(xué)異構(gòu)體，并且打算將混合物中所有可能的光學(xué)異構(gòu)體和非對映體和作為純的或者部分純的化合物均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明化合物的一個方面的構(gòu)型為下述的其中環(huán)戊基環(huán)上的取代基(酰胺和胺單元)為順式的化合物 本發(fā)明化合物的另一個方面的絕對構(gòu)型為方向如下所示的那些化合物 其中含有胺取代基的碳指定為(R)絕對構(gòu)型，而含有酰氨亞基的碳可根據(jù)R1的優(yōu)先次序指定為(S)或(R)絕對構(gòu)型。例如，如果R為異丙基，則含有酰氨亞基的碳上的絕對立體化學(xué)為(S)，原因是在環(huán)戊基環(huán)上酰氨和胺單元優(yōu)選順式排列。
如本領(lǐng)域已知的，通過在此公開的方法學(xué)的合適的改進(jìn)，可以實現(xiàn)非對映體和對映體的獨立合成或者它們的色譜分離。如果必要，用含已知絕對構(gòu)型的不對稱中心的試劑，通過它們衍生的結(jié)晶產(chǎn)物或者結(jié)晶中間體的X-射線結(jié)晶學(xué)，可以測定它們的絕對立體化學(xué)。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員所領(lǐng)會，本文所用的鹵或鹵素包括氯，氟、溴和碘。同樣，C1-8烷基中的C1-8定義為直鏈或支鏈排列的具有1、2、3、4、5、6、7或8個碳原子的基團(tuán)，這樣C1-8烷基具體包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基和辛基。同樣，C0烷基中的C0定義為存在直接共價鍵。本文所用的術(shù)語“雜環(huán)”意指包括以下基團(tuán)苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、肉啉基、呋喃基、咪唑基、二氫吲哚基、吲哚基、indolazinyl、吲唑基、異苯并呋喃基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、萘吡啶基(naphthpyridinyl)、噁二唑基、噁唑基、氧雜環(huán)丁烷基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并吡啶基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氫吡喃基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮雜環(huán)丁烷基、1，4-二噁烷基、氮雜環(huán)庚烷基(hexahydroaxepinyl)哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并噁唑基、二氫呋喃基、二氫咪唑基、二氫吲哚基、二氫異噁唑基、二氫異噻唑基、二氫噁二唑基、二氫噁唑基、二氫吡嗪基、二氫吡唑基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氫喹啉基、二氫四唑基、二氫噻二唑基、二氫噻唑基、二氫噻吩基、二氫三唑基、氮雜環(huán)丁烷基(dihydroazetidinyl)、亞甲二氧基苯甲?；?、四氫呋喃基和四氫噻吩基及其氮氧化物。
本文中使用的短語“藥學(xué)上可接受的”指這些化合物、材料、組合物和/或劑型，它們在合理的醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)，適用于與人體和動物組織接觸而沒有過度的毒性、刺激性、變應(yīng)性應(yīng)答或者其他的問題或者復(fù)雜性，與合適的效益/風(fēng)險比相匹配。
如本文中使用的，“藥學(xué)上可接受的鹽”指衍生物，其中通過制備它們的酸性或者堿性鹽修飾母體化合物。藥學(xué)上可接受的鹽的實例包括(但不限于)堿性殘基例如胺的礦物酸或者有機(jī)酸鹽、酸性殘基例如羧酸的堿或者有機(jī)鹽等。藥學(xué)上可接受的鹽包括所形成母體化合物例如非毒性無機(jī)或者有機(jī)酸的常規(guī)非毒性鹽或者季銨鹽。例如，這樣的常規(guī)非毒性鹽包括衍生自無機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的那些鹽；和由有機(jī)酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、枸櫞酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羥乙磺酸等制備的鹽。
通過常規(guī)化學(xué)方法，自含堿性或者酸性部分的母體化合物可制備本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽。通常，在水或者在有機(jī)溶劑中，或者在兩者的混合物中，通過使這些化合物的游離的酸或者堿形式與化學(xué)計算量的合適的堿或者酸反應(yīng)，可制備這樣的鹽；通常，優(yōu)選非水介質(zhì)例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或者乙腈。在例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack PublishingCompany，Easton，PA，1985，第1418頁中可發(fā)現(xiàn)合適的鹽。
本發(fā)明的例證為在實施例和本文中公開的化合物的用途。
本發(fā)明中的具體的化合物包括選自實施例的標(biāo)題化合物的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體。
所研究的化合物用于調(diào)節(jié)需要這樣調(diào)節(jié)的患者體內(nèi)趨化因子受體活性的方法，所述方法包括給予有效量的所述化合物。
本發(fā)明涉及前述化合物作為趨化因子受體活性調(diào)節(jié)劑的用途。具體地說，這些化合物用作趨化因子受體尤其是CCR-2的調(diào)節(jié)劑。
通過本領(lǐng)域已知的方法學(xué)，例如由Van Riper等，J.Exp.Med.，177，851-856(1993)公開的趨化因子結(jié)合試驗可以證實作為趨化因子受體活性的調(diào)節(jié)劑的本發(fā)明的化合物的用途，所述趨化因子結(jié)合試驗可容易地用來測量CCR-2結(jié)合。
通過測量125I-MCP-1對包括單核細(xì)胞、THP-1細(xì)胞在內(nèi)的各種細(xì)胞類型的內(nèi)源性CCR-2受體的抑制作用，或者在真核細(xì)胞內(nèi)的已克隆受體的異種表達(dá)后，確定CCR-2結(jié)合試驗中的受體親和力。把細(xì)胞懸浮于結(jié)合緩沖液(50mM HEPES，pH7.2，5mM MgCl2，1mMCaCl2和0.50％BSA)中并在室溫下于1小時內(nèi)加入到受試化合物或者DMSO及125I-MCP-1中以使結(jié)合。然后在GFB濾膜上收集細(xì)胞，用25mM含500mM NaCl的HEPES緩沖液沖洗并定量細(xì)胞結(jié)合的125I-MCP-1。
在趨化性試驗中，采用分離自靜脈全血或者leukophoresed的血的排除了PBMC的T細(xì)胞進(jìn)行趨化性并且通過Ficoll-Hypaque離心純化，隨后用神經(jīng)氨酸酶處理的綿羊紅細(xì)胞進(jìn)行玫瑰花瓣試驗。一旦分離后，用含0.1mg/ml BSA的HBSS沖洗細(xì)胞并在1×107個細(xì)胞/ml下懸浮。于37℃在暗處用2μM Calcieh-AM(Molecular Probes)熒光標(biāo)記細(xì)胞30分鐘。把已標(biāo)記的細(xì)胞沖洗兩次并在RPMI 1640中在5×106個細(xì)胞/ml下用含0.1mg/ml BSA的L-谷氨酰胺(無酚紅)懸浮。把在相同的培養(yǎng)基中于10ng/ml稀釋的MCP-1(Peprotech)或者培養(yǎng)基單獨加入到底部孔(27μl)中。用DMSO或者用各種濃度的受試化合物預(yù)溫育15分鐘后，將單核細(xì)胞(15,0000個細(xì)胞)加入到濾膜(30μl)的頂部。將等濃度的受試化合物或者DMSO加入到底部孔中以防止通過擴(kuò)散稀釋。于37℃在5％CO2下溫育60分鐘后，移去濾膜并用含0.1mg/mlBSA的HBSS沖洗頂部以除去未遷移至濾膜上的細(xì)胞。在化學(xué)引誘物不存在下測量自發(fā)遷移(化學(xué)激活現(xiàn)象)。
具體地說，在上面提到的試驗中，下面實施例的化合物具有結(jié)合CCR-2受體的活性，通常具有約小于1μM的IC50。這樣的結(jié)果是在用作趨化因子受體活性調(diào)節(jié)劑的化合物內(nèi)在活性的指標(biāo)。
哺乳動物趨化因子受體提供用于干擾或者促進(jìn)哺乳動物例如人體內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞和/或淋巴細(xì)胞功能的靶標(biāo)。抑制或者促進(jìn)趨化因子受體功能的化合物特別用于調(diào)節(jié)治療目的的嗜酸性粒細(xì)胞和/或淋巴細(xì)胞功能。因此，抑制或者促進(jìn)趨化因子受體功能的化合物將用于治療、預(yù)防、改善、控制或者減少各種各樣的炎性和免疫調(diào)節(jié)紊亂和疾病、變應(yīng)性疾病、包括過敏性鼻炎、皮炎、結(jié)膜炎和哮喘在內(nèi)的特異反應(yīng)性疾病以及自身免疫病理學(xué)例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化的風(fēng)險。
例如，可以給予抑制哺乳動物趨化因子受體(例如人趨化因子受體)一種或者多種功能的本發(fā)明化合物以抑制(即減少或者預(yù)防)炎癥。結(jié)果，一種或者多種炎癥過程，例如白細(xì)胞遷移、趨化、胞吐作用(例如，酶、組胺的胞吐作用)或者炎性介質(zhì)釋放受到抑制。
除靈長類例如人以外，按照本發(fā)明的方法可治療各種其他的哺乳動物。例如，可治療哺乳動物，包括(但不限于)牛、綿羊、山羊、馬、犬、貓、豚鼠、大鼠或者其他的牛、綿羊、馬、犬、貓、嚙齒動物或者海洋動物物種。然而，這一方法也可在其他的物種中實踐，例如鳥類(例如雞)。
采用本發(fā)明的化合物可治療與炎癥和感染有關(guān)的疾病和病癥。在一個優(yōu)選的實施方案中，疾病和病癥是一種為調(diào)節(jié)炎性應(yīng)答而淋巴細(xì)胞的作用被抑制或者促進(jìn)的疾病。
可用趨化因子受體功能抑制劑治療的人或其他物種的疾病或病癥包括(但不限于)炎性或變應(yīng)性疾病和病征，包括呼吸道變應(yīng)性疾病如哮喘(特別是支氣管哮喘)、過敏性鼻炎、過敏性肺疾病、過敏性肺炎、嗜酸性肺炎(例如呂弗勒氏綜合征、慢性嗜酸性肺炎)、遲發(fā)型過敏、間隙肺疾病(ILD)(例如特發(fā)性肺纖維化或與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的ILD、全身性紅斑狼瘡、關(guān)節(jié)強硬性脊椎炎、全身性硬皮癥、斯耶革倫氏綜合征、多肌炎或皮膚肌炎)；全身性過敏反應(yīng)或過敏性應(yīng)答、藥物過敏(例如對青霉素、頭孢菌素過敏)、昆蟲蟄傷性過敏；自身免疫疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、全身性紅斑狼瘡、重癥肌無力、青少年糖尿病發(fā)作；腎小球性腎炎、自身免疫性甲狀腺炎、貝切特氏疾??；移植排斥(例如在移植術(shù)中)，包括同種異體移植物排斥或移植物抗宿主疾??；炎性腸疾病例如克朗氏病和潰瘍性結(jié)腸炎；椎關(guān)節(jié)?。挥财げ?；牛皮癬(包括T-細(xì)胞介導(dǎo)的牛皮癬)和炎性皮膚病例如皮炎、濕疹、特異反應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、蕁麻疹；脈管炎(例如引起壞死的、皮膚的和過敏性脈管炎)；嗜酸性肌炎、嗜酸性筋膜炎；伴有皮膚或器官白血球浸潤的癌癥。可治療其中不合需要的炎性應(yīng)答被抑制的其他疾病或病征，包括(但不限于)再灌注損傷、動脈粥樣硬化、某些血液學(xué)惡性病變、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的毒性(例如膿毒性休克、嗜兩性粒細(xì)胞趨化因子性休克)、多肌炎、皮膚肌炎。
人或其他物種的可用趨化因子受體功能調(diào)節(jié)劑治療的疾病或病癥包括(但不限于)免疫抑制，例如在患有免疫缺陷綜合癥如AIDS或其他的病毒感染的個體，經(jīng)歷引起免疫抑制放射療法、化學(xué)療法、用于自身免疫疾病的療法或藥物療法(例如皮質(zhì)類固醇療法)的個體中；由于先天性的受體功能缺陷或其他原因引起的免疫抑制；和感染疾病例如牛皮癬病，包括(但不限于)蠕蟲感染例如線蟲(園線蟲)、(鞭蟲病、蟯蟲病、蛔蟲病、鉤蟲、類圓線蟲病、旋毛蟲病、絲蟲病)、吸蟲(吸蟲)(血吸蟲病、華支睪吸蟲病)、絳蟲(絳蟲)(棘球蚴病、牛肉絳蟲病、囊尾蚴病)、內(nèi)臟蠕蟲、內(nèi)臟蚴蟲偏頭痛(例如弓蛔蟲)、嗜酸性胃腸炎(例如異尖屬sp.、Phocanema sp.)和皮膚幼蟲偏頭痛(巴西鉤口線蟲、犬鉤口線蟲)。另外，上述炎性、變應(yīng)性和自身免疫疾病的治療也期待趨化因子受體功能的促進(jìn)劑，如果人們期待傳遞足夠的化合物以通過誘導(dǎo)趨化因子受體內(nèi)在化引起在細(xì)胞上的受體表達(dá)減少或者以導(dǎo)致細(xì)胞遷移的錯誤指向的方式傳遞化合物。
本發(fā)明化合物因此用于治療、預(yù)防、改善、控制或減少各種各樣的炎性和免疫調(diào)節(jié)紊亂和疾病、變應(yīng)性病癥、特異反應(yīng)性病癥以及自身免疫病理學(xué)的風(fēng)險。在具體的實施方案中，本發(fā)明涉及本發(fā)明化合物用于治療、預(yù)防、改善、控制或減少自身免疫疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或牛皮癬關(guān)節(jié)炎的風(fēng)險的用途。
另一方面，本發(fā)明可用于評價趨化因子受體包括CCR-2的推定的特異性激動劑或拮抗劑。因此，本發(fā)明涉及這些化合物在制備和實施調(diào)節(jié)趨化因子受體活性的化合物的篩選實驗中的用途。例如，本發(fā)明的化合物用于分離受體突變體，后者是優(yōu)越的篩選更有效的化合物的工具。另外，本發(fā)明的化合物用于建立或確定其他的化合物與趨化因子受體的結(jié)合位點，例如通過競爭性抑制。本發(fā)明的化合物也用于評價趨化因子受體包括CCR-2的推定的特異性調(diào)節(jié)劑。如本領(lǐng)域所認(rèn)識到的，以上趨化因子受體的特異性激動劑和拮抗劑的充分評價因缺乏可利用的對這些受體具有高結(jié)合親和力的非肽基(代謝抗性)化合物而受到阻礙。因此，本發(fā)明化合物是用于這些目的的可以購買獲得的商業(yè)產(chǎn)品。
本發(fā)明另外涉及用于制備在人和動物調(diào)節(jié)趨化因子受體活性的藥物的方法，所述方法包括使本發(fā)明的化合物與藥用載體或稀釋劑混合。
本發(fā)明另外涉及本發(fā)明化合物在治療、預(yù)防、改善、控制或減少由逆轉(zhuǎn)錄病毒，特別是皰疹病毒或人免疫缺陷病毒(HIV)引起的感染的風(fēng)險和治療及延遲跟著發(fā)生的病理疾病例如AIDS的發(fā)作中的用途。治療AIDS或者預(yù)防或治療由HIV引起的感染被定義為包括(但不限于)治療范圍廣泛的HIV感染狀態(tài)AIDS、ARC(AIDS相關(guān)復(fù)征)、有癥狀和無癥狀兩者、實際上或潛在地暴露于HIV。例如，本發(fā)明化合物用于治療在被懷疑經(jīng)例如血液輸入、器官移植、體液置換、咬合、意外針狀物刺入或者在手術(shù)期間暴露于患者血液引起的暴露于HIV后由HIV引起的感染。
在本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明化合物可用于抑制靶細(xì)胞的趨化因子結(jié)合于趨化因子受體例如CCR-2的方法，所述方法包括使靶細(xì)胞與一定量的有效抑制趨化因子與趨化因子受體結(jié)合的化合物接觸。
用以上方法治療的受治療者為哺乳動物，優(yōu)選為人，男性或女性，其中趨化因子受體活性的調(diào)節(jié)是需要的。如本文中使用的“調(diào)節(jié)”是指包括拮抗作用、激動作用、部分拮抗作用、反向激動作用和/或部分激動作用。在本發(fā)明的一個優(yōu)選方面，調(diào)節(jié)指趨化因子受體活性的拮抗作用。術(shù)語“治療有效量”意欲被研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其他臨床醫(yī)師探尋的對組織、系統(tǒng)、動物或人產(chǎn)生生物學(xué)或醫(yī)學(xué)應(yīng)答的本發(fā)明化合物的量。
如本文中使用的術(shù)語“組合物”是指包括包含以特定量存在的特定成分的產(chǎn)物以及直接或間接由以特定量存在的特定成分的組合產(chǎn)生的任何產(chǎn)物?！八帉W(xué)上可接受的”意指載體、稀釋劑或賦形劑，必須與制劑中的其他成分相適配并且對其接受者無害。
術(shù)語“給予”和/或“給出”化合物應(yīng)理解為意指需要治療的個體提供本發(fā)明的化合物。
如本文中使用的，術(shù)語“治療”指治療和預(yù)防或預(yù)防性治療以上提及的病癥。
調(diào)節(jié)趨化因子受體活性因而用于治療、預(yù)防、改善、控制或減少炎性和免役調(diào)節(jié)紊亂和疾病，包括哮喘和變應(yīng)性疾病，以及自身免疫病理學(xué)如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化和以上指出的那些病理學(xué)的風(fēng)險的聯(lián)合療法通過本發(fā)明化合物和已知用于這些用途的其他化合物的聯(lián)合來闡述。
例如，在治療、預(yù)防、改善、控制或減少炎癥的風(fēng)險中，本發(fā)明化合物可與抗炎或鎮(zhèn)痛藥例如阿片激動劑、脂氧合酶抑制劑如5-脂氧合酶的抑制劑、環(huán)加氧酶抑制劑如環(huán)加氧酶-2抑制劑、白介素抑制劑如白介素-1抑制劑、NMDA拮抗劑、氧化氮抑制劑或氧化氮合成的抑制劑、非甾體抗炎藥或抑制細(xì)胞因子的抗炎藥一起使用，例如，與化合物如對乙酰氨基酚、阿司匹林、可待因、依那西普(embrel)、芬太尼、布洛芬、吲哚美辛、酮咯酸、嗎啡、萘普生、非那西丁、吡羅昔康、甾體鎮(zhèn)痛藥、舒芬太尼、舒林酸、替尼達(dá)普等一起使用。相似地，本發(fā)明化合物可與疼痛緩解藥；增效劑如咖啡因、H2-拮抗劑、西甲硅油、氧化鋁或氫氧化鎂；減充血藥如去氧腎上腺素、苯丙醇胺、偽麻黃堿、羥甲唑啉、腎上腺素、萘甲唑啉、賽洛唑啉、丙己君或左-脫氧-麻黃堿；鎮(zhèn)咳藥如可待因、氫可酮、卡拉美芬、噴托維林或右美沙芬(dextramethorphan)；利尿藥和鎮(zhèn)靜性或非鎮(zhèn)靜性抗組胺藥一起給藥。
同樣地，本發(fā)明化合物可與用于治療/預(yù)防/抑制或改善本發(fā)明化合物是有用的疾病或病癥的其他藥物聯(lián)合使用。這樣的其他藥物可以通過途徑和以常規(guī)使用的量，與本發(fā)明化合物同時或連續(xù)給藥。當(dāng)本發(fā)明化合物與一種或多種其他藥物同時使用時，除本發(fā)明化合物以外，還包含這樣的其他藥物的藥用組合物為優(yōu)選。因此，本發(fā)明的藥用組合物除包括本發(fā)明化合物以外，還包括那些還包含一種或多種其他活性成分的藥用組合物。
可與本發(fā)明化合物聯(lián)合給藥(或者分開給藥或者以在相同的藥用組合物中給藥)的其他活性成分的實例包括(但不限于)(a)VLA-4拮抗劑例如在US5510332、WO95/15973、WO96/01644、WO96/06108、WO96/20216、WO96/22966、WO96/31206、WO96/40781、WO97/03094、WO97/02289、WO98/42656、WO98/53814、WO98/53817、WO98/53818、WO98/54207和WO98/58902中描述的那些；(b)甾體類例如倍氯米松、甲潑尼龍、倍他米松、潑尼松、地塞米松和氫化可的松；(c)免役抑制劑例如環(huán)胞菌素、他克莫司、雷帕霉素和其他的FK-506型免役抑制劑；(d)抗組胺藥(H1-組胺拮抗劑)例如溴苯那敏、氯苯那敏、右氯苯那敏、曲普利啶、氯馬斯汀、苯海拉明、二苯拉林、曲吡那敏、羥嗪、甲地嗪、異丙嗪、阿利馬嗪、阿扎他定、賽庚啶、安他唑啉、非尼拉明、美吡拉敏、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、地氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、去乙氧羰基氯雷他定(descarboethoxyloratadine)等；(e)非甾體抗哮喘藥例如β2-激動劑(特布他林、奧西那林、非諾特羅、異他林、沙丁胺醇、比托特羅和吡布特羅)、茶堿、色甘酸二鈉、阿托品、異丙托溴銨、白三烯拮抗劑(扎魯司特、孟魯司特、普侖司特、伊拉司特、泊比司特、SKB-106203)、白三烯生物合成抑制劑(齊留通、BAY-1005)；(f)非甾體抗炎藥(NSAIDs)例如丙酸衍生物(阿明洛芬、苯噁洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非諾洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、噁丙嗪、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫噁洛芬)、乙酸衍生物(吲哚美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、環(huán)氯茚酸、雙氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋羅芬酸、異丁芬酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美丁、齊多美辛和佐美酸)、滅酸類衍生物(氟芬那酸、甲氧芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸和托芬那酸)、聯(lián)苯羧酸衍生物(二氟尼柳和氟苯柳)、昔康類(伊索昔康、吡羅昔康、舒多昔康和替諾昔康)、水楊酸酯類(乙酰水楊酸、柳氮磺吡啶)和吡唑酮類(阿扎丙宗、bezpiperylon、非普拉宗、莫非布宗、羥布宗、保泰松)；(g)環(huán)加氧酶-2(COX-2)抑制劑；(h)磷酸二酯酶IV型(PDE-IV)抑制劑；(i)趨化因子受體尤其是CCR-1、CCR-2、CCR-3、CXCR-3和CCR-5的其他的拮抗劑；(j)降低膽固醇藥物例如HMG-CoA還原酶抑制劑(洛伐他汀、辛伐他汀和普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、羅蘇伐他汀和其他的他汀類)、螯合劑(考來烯胺和考來替泊)、膽固醇吸收抑制劑(依澤替米貝)、煙酸、非諾貝酸衍生物(吉非貝齊、氯貝丁酯、非諾貝特和苯扎貝特)和丙丁酚；(k)抗糖尿病藥例如胰島素、磺酰脲類、雙胍類(二甲雙胍)、α-葡萄糖苷酶抑制劑(阿卡波糖)和格列酮類(曲格列酮和吡格列酮)；(l)干擾素β的制劑(干擾素β-1α、干擾素β-1β)；(m)其他的化合物例如5-氨基水楊酸和它們的前藥、抗代謝藥例如硫唑嘌呤和6-巰基嘌呤以及細(xì)胞毒的癌化學(xué)治療藥物。
本發(fā)明化合物與第二種活性成分的重量比率可以變化并且依每一種成分的有效劑量而定。通常使用每一種成分的有效劑量。因此，例如，當(dāng)本發(fā)明的化合物與NSAID聯(lián)合時，本發(fā)明化合物與NSAID的重量比率通常在約1000∶1-約1∶1000，優(yōu)選為約200∶1-約1∶200的范圍內(nèi)。本發(fā)明的化合物與其他活性成分的聯(lián)合通常也在上述范圍內(nèi)，但是在每一種情況中，應(yīng)使用每一種活性成分的有效劑量。
在這樣的聯(lián)合中，本發(fā)明的化合物與其他活性藥物可以分開或一起給藥。另外，一種成分可在給予其他藥物之前、同時或隨后給藥。
本發(fā)明化合物可通過口服、非腸道(例如肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、ICV、腦池內(nèi)注射或灌輸、皮下注射或埋入)，通過吸入噴霧、鼻、陰道、直腸、舌下或局部給藥途徑給藥，并且可單獨或一起，以包含常規(guī)非毒性藥學(xué)上可接受的載體、佐劑和適合于每一種給藥途徑的媒介物的合適的劑量單位制劑配制。除了治療溫血動物例如小鼠、大鼠、馬、牛、綿羊、犬、貓、猴等，本發(fā)明的化合物有效用于人中。
用于給予本發(fā)明的化合物的藥用組合物可便利地以劑型存在并且可通過藥學(xué)領(lǐng)域熟知的任何方法制備。所有的方法包括使活性成分與構(gòu)成一種或多種輔助成分的載體混合在一起的步驟。通常，通過使活性成分與液體載體或細(xì)分的固體載體或兩者均勻和緊密地混合在一起，然后如果必要，使產(chǎn)物成型為所需的制劑來制備藥用組合物。在藥用組合物中，活性的本發(fā)明化合物以足以對疾病的過程或病癥產(chǎn)生所需作用的量被包括在內(nèi)。如本文中使用的術(shù)語“組合物”是指包括包含以特定量存在的特定成分的產(chǎn)物以及其直接或間接由以特定量存在的特定成分的組合產(chǎn)生的任何產(chǎn)物。
包含活性成分的藥用組合物可以適合于口服用途，例如作為片劑、糖錠劑、錠劑、含水或油懸浮劑、可分散粉末或顆粒、乳劑、硬或軟膠囊或者糖漿劑或酏劑的形式存在。按照對藥用組合物制備領(lǐng)域已知的任何方法可制備打算用于口服用途的組合物，并且這樣的組合物可包含一種或多種選自甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑的物質(zhì)，以提供藥學(xué)上精致的和適口的制劑。片劑包含與非毒性藥學(xué)上可接受的適合于制備片劑的賦形劑混合在一起的活性成分。這些賦形劑可為例如惰性稀釋劑如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；制粒和崩解劑例如玉米淀粉或藻酸；粘合劑例如淀粉、明膠或阿拉伯膠和潤滑劑例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。片劑可為未包衣的或者它們可通過已知技術(shù)包衣以延遲在胃腸道中的崩解和吸收，并且因此提供較長時間的持續(xù)作用。例如，可使用時間延遲原料如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它們也可通過在美國專利4256108、4166452和4265874號中描述的技術(shù)包衣，以形成用于控制釋放的滲透治療片劑。
用于口服用途的制劑也可作為其中活性成分與惰性固體稀釋劑如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合在一起的硬明膠膠囊，或作為其中活性成分與水或油介質(zhì)例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合在一起的軟明膠膠囊存在。
含水懸浮液包含與適合于制備含水懸浮液的賦形劑混合在一起的活性原料。這樣的賦形劑為懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥基-丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或甜味劑可為天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或者環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或者環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物例如十七碳乙烯氧基十六烷醇的縮合產(chǎn)物，或者環(huán)氧乙烷與衍生于脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯，或者環(huán)氧乙烷與衍生于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物例如聚乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。含水懸浮液也可包含一種或多種防腐劑例如乙基或正丙基、對-羥基苯甲酸酯，一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑例如蔗糖或糖精。
通過把活性成分懸浮于植物油例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油中，或懸浮于礦物油例如液體石蠟中，可配制油狀懸浮液。油狀懸浮液可包含增稠劑例如黃蠟、硬石蠟或鯨蠟醇?？杉尤肜缫陨详U述的那些甜味劑和矯味劑以提供可口的口服制劑。通過加入抗氧化劑例如抗壞血酸，這些組合物可被防腐。
適合于通過加入水制備含水懸浮液的可分散粉末和顆粒提供與分散劑或潤濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合在一起的活性成分。合適的分散或潤濕劑和懸浮劑通過以上已經(jīng)提及的那些舉例說明。也可存在另外的賦形劑，例如甜味劑、矯味劑和著色劑。
本發(fā)明的藥用組合物也可以水包油乳劑的形式存在。油相可為植物油例如橄欖油或花生油，或者礦物油例如液體石蠟或這些油的混合物。合適的乳化劑可為天然存在的樹膠例如阿拉伯膠或黃蓍膠、天然存在的磷脂例如豆油、卵磷脂和衍生于脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯例如脫水山梨醇單油酸酯，和所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯。乳劑也可包含甜味劑和矯味劑。
糖漿劑和酏劑也可用甜味劑例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制。這樣的制劑也可包含濕潤劑、防腐劑和矯味劑及著色劑。
藥用組合物可以以滅菌可注射含水或油狀懸浮液的形式存在。按照已知技術(shù)，使用以上已經(jīng)提及的那些合適的分散劑或甜味劑和懸浮劑可配制這個懸浮液。滅菌可注射制劑也可為在非毒性非腸道可接受的稀釋劑或溶劑中的滅菌可注射溶液劑或懸浮液，例如作為在1，3-丁二醇中的溶液劑。在可接受的媒介物和溶劑中，可使用的為水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的固定油被常規(guī)用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，可使用任何品牌的固定油，包括合成的單-或二甘油酯。另外，發(fā)現(xiàn)脂肪酸例如油酸在注射劑的制備中具有用途。
本發(fā)明的化合物也可以用于直腸給藥的栓劑形式給藥。通過把藥物與合適的非刺激性賦形劑混合可制備這些組合物，該賦形劑在常溫下為固體但是在直腸溫度下為液體并且因此在直腸熔化以釋放藥物。這樣的原料為可可脂和聚乙二醇。
對于局部使用，使用包含本發(fā)明的化合物的霜劑、軟膏劑、凝膠劑、溶液劑或懸浮液等。(為了這個應(yīng)用的目的，局部應(yīng)用應(yīng)包括口腔洗劑和漱口水)。
本發(fā)明的藥用組合物和方法可另外包括如本文中指出的通常用于治療上面提到的病理病癥的其他的治療活性化合物。
在治療、預(yù)防、改善、控制或減少需要趨化因子受體調(diào)節(jié)的病癥的風(fēng)險中，合適的劑量水平通常為約每天0.01-500mg/kg患者體重，其可以單或多劑量給藥。優(yōu)選地，劑量水平為每天約0.1-約250mg/kg，更優(yōu)選為每天約0.5-約100mg/kg。合適的劑量水平可為每天約0.01-250mg/kg、約每天0.05-100mg/kg，或每天約0.1-50mg/kg。在這個范圍內(nèi)，劑量水平可為每天0.05-0.5、0.5-5或5-50mg/kg。為了口服給藥，組合物優(yōu)選以包含1.0-1000mg的活性成分，優(yōu)選2.0-500，更優(yōu)選3.0-200，特別是1、5、10、15、20、25、30、50、75、100、125、150、175、200、250、300、400、500、600、750、800、900和1000mg的活性成分的片劑形式提供，根據(jù)癥狀調(diào)節(jié)給予所治療患者的劑量?；衔锟砂凑彰刻?-4次，優(yōu)選每天1或2次的方案給藥。
然而，應(yīng)理解對于任何具體患者的具體的劑量水平和給藥頻率可以改變并且將依多種因素而定，包括所使用的具體化合物的活性、所述化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時間長度，年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥方式和次數(shù)、排泄速率、藥物聯(lián)合、具體病癥的嚴(yán)重性和宿主經(jīng)歷的療法。
在以下的方案和實施例中說明了多種制備本發(fā)明化合物的方法。原料或者購自商品，或者通過文獻(xiàn)描述的已知方法制備，或按照本文所描述的方法制備。本發(fā)明還提供了制備如上定義的式I化合物的多種方法，所述方法包括制備式(II)、式(III)和式(IV)化合物，或式(VI)和式(IV)化合物，或式(VI)和式(V)化合物的多種不同順序， 其中R1、R3、R4、R5、R6、R16、R17、R18、A、B、C、D和Y如式I中定義，并且R20代表氫或作為保護(hù)基團(tuán)的烷基如甲基、乙基、叔丁基或芐基，R21代表氫或胺保護(hù)基團(tuán)(Greene，T；Wuts，P.G.M.Protective Groups in Organic Synthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán))，JohnWiley & Sons，Inc.，New York，NY 1991)如Boc或三氟乙酰基(trifluoroacetate)，R22代表氫或保護(hù)基團(tuán)如叔丁基，或如-SO2R9、-CO2R9或CONR9R9的基團(tuán)，R23代表保護(hù)基團(tuán)如三氟乙?；?。如式I中定義，式III和式VI中虛線所表示的兩個碳原子之間的鍵代表單鍵或雙鍵。流程1中闡述了一種使用式II、式III和式IV中間體構(gòu)造目標(biāo)化合物I的一般方法。在標(biāo)準(zhǔn)的酰氨鍵形成的反應(yīng)條件(如在堿如N，N-二異丙基乙基胺和催化劑如DMAP存在下的PyBrop)下，將酸IIIa與胺IV偶合，得到中間體1-1。除去Boc保護(hù)基團(tuán)，得到胺1-2。在氫硼化物如三乙酰氧基硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉的存在下，用酮II將1-2還原性烷基化，隨后得到式Ia化合物。值得注意的是，當(dāng)R16、R17或R18不為氫時，由還原性胺化步驟得到非對映異構(gòu)體的混合物(Eliel，E.E.，Wilen，S.H.，Stereochemistry of Organic Compound(有機(jī)化合物的立體化學(xué))，John Wiley & Sons，Inc.，New York)。根據(jù)分離物的性質(zhì)，可通過正相、反相或手性柱層析將其分離為各組分?？蛇M(jìn)一步用醛將式Ia化合物還原性烷基化或者例如用鹵代烷將式Ia化合物烷基化，制備成式I化合物。
流程1 另一種可選擇的構(gòu)造順序見流程1A，所述流程包括式II、式III和式IV的化合物。在氫硼化物如三乙酰氧基硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉的存在下，用酮II將胺IIIb還原性烷基化，得到仲胺1-3。可使用各種保護(hù)基團(tuán)中的任一種來完成胺基的保護(hù)，這種保護(hù)基團(tuán)包括三氟乙酰胺基(R23＝COCF3)，該基團(tuán)可通過在堿(如三乙胺)存在下用三氟乙酸酐處理引入。隨后根據(jù)R20的性質(zhì)使用恰當(dāng)?shù)臈l件將所得化合物VI的酯官能團(tuán)解離。例如可通過使用催化劑如Pd/C氫解分解芐酯，得到式VIa的化合物。在標(biāo)準(zhǔn)的酰氨鍵形成的反應(yīng)條件(如在堿如N，N-二異丙基乙基胺和催化劑如DMAP存在下的PyBrop)下，將酸VIa與胺IV偶合，得到中間體1-4?；蛘?，可將酸VIa轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的酰氯，隨后在堿如三乙胺的存在下用胺IV處理，得到1-4。根據(jù)保護(hù)基團(tuán)的性質(zhì)，可采用多種方法除去保護(hù)基團(tuán)(R23)，得到化合物Ia。例如可用過量的硼氫化鈉處理，或者用堿(如氫氧化鋰)處理可除去三氟乙?；鶊F(tuán)。
流程1A 或者，流程1A的中間體1-3可由流程1B中所示的方法更直接地得到。在這種情況下，在氫硼化物如三乙酰氧基硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉的存在下，用酮II將胺IIIc還原性烷基化，得到仲胺1-3a。用堿(如LDA)處理，隨后生成1-3a的烯醇化物，所述烯醇化物可用各種親電試劑(包括但不限于鹵代烷、醛、酮)烷基化?？墒褂昧鞒?A中描述的相同步驟繼續(xù)將得到的化合物1-3轉(zhuǎn)化為式I或式Ia化合物。
流程1B 除了流程1和流程1A-1B，式I化合物還可使用式V和式VI中間體制備(流程2)。根據(jù)該途徑，使用EDC或EDC和HOAt將式VIa的酸與伯胺V偶合，或者通過首先與草酰氯形成酰氯和其他方法等。如果B具有保護(hù)基團(tuán)R22，則將得到的酰胺2-1去保護(hù)，例如如果BR22為O-叔丁基，則可使用TFA或HCl的二噁烷溶液除去叔丁基。去保護(hù)之后，或者如果不需要去保護(hù)，用多聚甲醛(或其他甲醛源)和酸催化劑(如TsOH)處理完成環(huán)化，得到中間體1-4(流程1A)?；蛘撸捎锰减Ｂ忍幚?-1，得到化合物1-4。然后按照上文所述的方法轉(zhuǎn)化為最終的趨化因子調(diào)節(jié)劑。
流程2 環(huán)戊烷核心化合物III可以多種方法制備。其中的一種見述于流程3、3a和3b。根據(jù)流程3，將市售的純手性內(nèi)酰胺3-1氫化，隨后在適合的催化劑(例如N，N-二甲氨基吡啶)存在下用二碳酸二叔丁酯處理該飽和的3-2。在適合的醇R20-OH的存在下將酰氨鍵堿性催化解離，得到相應(yīng)的酯IIId。優(yōu)選在質(zhì)子惰性溶劑(如二噁烷)中用酸(如HCl)除去BOC保護(hù)基團(tuán)，得到鹽形式的胺IIIe。當(dāng)該胺與1，1-二苯基甲亞胺混合時，形成相應(yīng)的席夫堿3-4，通過簡單的濾除氯化銨可得到純凈形式的席夫堿3-4。
流程3 由酯3-4與強堿(如LDA)形成的烯醇化物可與鹵代烷R1-X和醛R1aCHO或酮R1aR2aCO反應(yīng)，分別得到中間體3-5、3-6和3-7、3-8(流程3A)。這些反應(yīng)制備了相應(yīng)的順式-(3-5和3-7)和反式-(3-6和3-8)非對映異構(gòu)體，該非對映異構(gòu)體可通過適當(dāng)?shù)膶游龇蛛x。在大多數(shù)情況下，可通過在去活硅膠上的正相快速層析成功地進(jìn)行分離。
流程3A 隨后用酸(如HCl)處理所需的順式非對映異構(gòu)體3-5和3-7以助于亞氨基團(tuán)的水解，可以叔丁氧基羰基酰胺的形式適當(dāng)?shù)乇Ｗo(hù)得到的化合物IIIf中的氨基(流程3B)。隨后將中間體IIIg中的酯基解離而得到酸IIIh。采用的方法取決于酯的性質(zhì)，例如可通過氫解解離芐酯，可在酸性條件下解離叔丁酯，可在酸性或堿性條件下水解烷基酯。
流程3B 值得注意的是，在流程1中可用化合物IIIh代替IIIa，在流程1A中可用IIIf代替IIIb，在流程1B中可用IIIe代替IIIc(唯一的區(qū)別在于環(huán)戊烷環(huán)定義為完全飽和的)。制備III類型化合物的另一種方法見流程3C。根據(jù)該路線，在酸催化劑存在下使用適合的醇(例如甲醇或芐醇)將市售的IIIi轉(zhuǎn)化為酯IIIj。用Boc2O處理保護(hù)IIIj中的胺得到IIIk。使用堿(如六甲基二甲硅烷基胺鋰(lithiumhexamethyldisilazide)(LiHMDS))和親電試劑(如鹵代烷)烷基化，得到IIIl，其中得到的主要非對映異構(gòu)體通常為順-1，3-異構(gòu)體?？稍谶@時或下面的步驟之后使用柱層析分離順/反異構(gòu)體。如果需要，使用催化劑(如Pd/C)氫化得到IIIm。如果R20為芐基，則氫化IIIm直接得到IIIn。否則，可使用各種條件(例如用氫氧化鈉處理)將IIIm水解得到IIIn。
流程3C 可采用多種方法制備式V的胺。一種方法見流程4。在堿(如NaH)存在下用R22BH(如氨、甲磺酰胺、叔丁基硫醇、叔丁醇)處理氟化物4-1(購自商品或按照試驗部分詳細(xì)描述的方法制備)，親核芳族取代得到4-2。隨后可在各種條件下(例如使用Raney鎳和氫氣或使用硼烷)將氰基還原，得到胺Va。
流程4
式IV類型的胺的制備基于各自的結(jié)構(gòu)，詳細(xì)的制備方法可見實驗部分。
式II類型的化合物通常購自商品，但是有時需要制備。例如，流程5中的化合物IIa(其中X為CH2、S、O或NP(P＝保護(hù)基團(tuán))，且R17和R18均為氫)購自商品?？赏ㄟ^用堿(如LDA)去質(zhì)子化并用鹵代烷烷基化容易地將該化合物轉(zhuǎn)化為具有R16基團(tuán)的IIb，其中R16為烷基(涉及四氫吡喃-4-酮的公開方法參見J.Am.Chem.Soc.，1991，113，2079-2089)。可通過上述流程所示的方法將式IIb化合物結(jié)合在最終的目標(biāo)化合物中。
流程5 酮IIc(其中R16為烷氧基)的詳細(xì)合成見流程5A。根據(jù)該流程，用間氯過苯甲酸的甲醇溶液處理市售的5，6-二氫-4-甲氧基-2H-吡喃(5-1)，直接轉(zhuǎn)化為5-2。在堿(如氫化鈉)存在下用適當(dāng)?shù)柠u代烷R25X將該仲醇烷基化，得到醚5-3。在酸性條件下將該縮醛去保護(hù)，得到所需的酮IIc。采用這種方法，可合成多種3-烷氧基衍生物。更詳細(xì)的細(xì)節(jié)以及實施例見述于實驗部分。
流程5A 或者，可根據(jù)流程5C以不對稱的方式制備中間體5-2?？赏ㄟ^用苯甲酸酐捕獲用堿(如KHMDS)處理生成的烯醇化物從酮IId制備烯醇式苯甲酸酯5-4。按照Yian Shi等(J.Org.Chem.，2001，66，1818-1826)描述的條件可完成不對稱氧化，得到主要為單一異構(gòu)體的5-6。在單釜中通過酸(如CSA)的甲醇溶液處理，發(fā)生環(huán)氧化物的開環(huán)和二甲基縮醛的生成，得到5-2a。通過適當(dāng)選擇糖催化劑5-5可得到對映異構(gòu)體中的一種。
流程5B 以下為用于制備在以下實施例中使用的或可替代在以下實施例中使用的并非市售的化合物的化合物的代表性方法。
在某些情況中，實施上述反應(yīng)流程的順序可以改變以便利于反應(yīng)或避免不需要的反應(yīng)產(chǎn)物。提供以下實施例的目的僅為進(jìn)一步闡述本發(fā)明，而不是對公開的發(fā)明加以限制。
濃縮溶液通常在減壓下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上進(jìn)行?？焖賹游鲈诠枘z(230-400目)上實施。除非另外指明，否則MPLC指中壓液相色譜并且在硅膠固定相上實施。除非另外指明，否則NMR光譜在CDCl3溶液中得到。偶合常數(shù)(J)以赫茲(Hz)表示。縮寫乙醚(醚)、三乙胺(TEA)、N，N-二異丙基乙胺(DIEA)。
中間體1
步驟A 往冷卻的(0℃)2-氟-5-三氟甲基苯甲腈(5.23g，27.7mmol)的THF(140ml)溶液中快速滴加叔丁醇鉀(3.88g，34.6mmol)在35ml THF中的懸浮液。讓該反應(yīng)混合物緩慢升至室溫并攪拌過夜。減壓濃縮該反應(yīng)混合物，隨后加入乙醚和1N的HCl溶液并分離各層。先后用飽和NaHCO3溶液、鹽水洗滌醚層，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過MPLC(硅膠，25％乙酸乙酯/己烷)純化，得到5.25g(78％)白色晶體狀固體。
H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.84(d，J＝2.0Hz，1H)，7.73(dd，J＝8.5，2.0Hz，1H)，7.27(d，J＝9.0Hz)，1.55(s，9H).
步驟B 往按照步驟A中描述的方法制備的腈(7.6g，31mmol)的甲醇(100ml)溶液中加入氫氧化銨溶液(28-30％，25ml)和Raney2800鎳(在水中的漿狀物，約3.5g)。在50psi的氫氣下使用帕爾(Parr)裝置將得到的混合物攪拌24小時。隨后該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，先后用乙醇和水洗滌。在減壓下將該濾液濃縮至干，通過快速層析[硅膠，5-10％梯度(增量1％)的(10％氫氧化銨溶液(28-30％)/甲醇)的DCM溶液]純化如此得到的殘留物，得到5.5g(71％)無色油狀的1-[2-叔丁氧基-5-(三氟甲基)苯基]甲胺，該產(chǎn)物存儲在冰箱時結(jié)晶。
H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.56(d，J＝2.0Hz，1H)，7.44(dd，J＝8.5，2.0Hz，1H)，7.12(d，8.5Hz，1H)，3.90(s，2H)，2.70(br s，2H)，1.51(s，9H).
中間體2 方法A步驟A 將(1R，4S)-4-氨基-環(huán)戊-2-烯甲酸(127g，1.0mol)、水(250ml)、碳酸氫鈉(168g，2.0mol)和THF(750ml)的混合物攪拌30分鐘，隨后加入固體Boc2O(230g，1.05mol)。將該混合物攪拌過周末，濾除不溶物，并在0℃下濃縮。往該殘留物中加入2N的鹽酸(約500ml)，直到pH為3。過濾收集得到的沉淀，水洗，真空干燥過夜。得到白色固體狀的所需酸(227g，100％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)5.95(m，1H)，5.79(m，1H)，4.80(br s，1H)，3.45(m，1H)，2.50(m，1H)，1.79(m，1H)，1.44(s，9H).
步驟B 在50lb的氫氣下在帕爾搖動器(Parr shaker)中將在500ml甲醇中的該酸(步驟A，方法A，中間體2)(227g，1.0mol)和10％的Pd/C(5.0g)氫化1小時。濾除催化劑，蒸發(fā)濾液。將殘留物溶于二氯甲烷，經(jīng)無水硫酸鈉干燥。過濾后，蒸發(fā)濾液并真空干燥。得到淺黃色固體狀的標(biāo)題化合物(226.0g，99％)。對C11H19NO4的LC-MS計算值230；實測值230[M+H+]。
步驟C 往機(jī)械攪拌的該酸(步驟B，方法A，中間體2)(226.0g，1.0mol)的DMF(500ml)溶液中加入固體碳酸鉀(210g，1.5mol)。將得到的混合物攪拌20分鐘，一次性加入純凈的(neat)的芐基溴(118ml，1.0mol)。觀察到發(fā)生了放熱反應(yīng)。在室溫下攪拌3小時后，將全部混合物轉(zhuǎn)移至冰水混合物(1000ml)中。用乙醚(2×800ml)萃取粗產(chǎn)物。合并的醚層經(jīng)水洗、硫酸鈉干燥，過濾和蒸發(fā)，得到黃色固體。將該固體與4N HCl/二噁烷(400ml)混合，攪拌過夜并濃縮。過濾收集得到的固體，用乙醚洗滌并真空干燥。得到鹽酸鹽形式的標(biāo)題化合物(140g，55％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)5.15(s，2H)，3.65(m，1H)，3.02(q，J＝8Hz，1H)，2.50(m，1H)，2.15(m，1H)，2.05(m，2H)，1.90(m，1H)，1.75(m，1H).
步驟D 將該氨基芐酯鹽酸鹽(步驟C，方法A，中間體2)(127g，0.5mol)懸浮于500ml二氯甲烷中。加入二苯亞胺(91g，0.5mol)。將得到的混合物攪拌過夜，濾除無機(jī)鹽。濾液經(jīng)水和鹽水洗滌、經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾和濃縮。將殘留物溶解在200ml甲苯中，蒸發(fā)。再重復(fù)1次該步驟。得到褐色油狀的(1S，3R)-3-[(二苯基亞甲基)氨基]環(huán)戊烷甲酸芐酯(178g)，該產(chǎn)品無需進(jìn)一步純化可用于下一步驟。
1H NMR(400MHz，CDCl3)1.80(m，1H)，1.95(m，2H)，2.15(m，2H)，2.50(m，1H)，2.89(m，1H)，3.61(m，1H)，5.20(s，2H)，7.18(d，2H)，7.38(m，8H)，7.47(m，3H)，7.64(d，2H).
步驟E 在氮氣氣氛下將在300ml THF中的原料席夫堿芐酯(步驟D，方法A，中間體2)(76.6g，200mmol)冷卻至-78℃。在攪拌的同時，在20分鐘內(nèi)加入LDA的庚烷溶液(2.0M，110ml，220mmol)。在-78℃下將該混合物攪拌30分鐘，隨后加入68ml異丙基碘(440mmol)的THF(50ml)溶液，將得到的混合物攪拌30分鐘。通過移走冷卻浴將反應(yīng)溫度升高至0℃。攪拌2小時后，蒸發(fā)整個混合物以除去THF。將殘留物溶解在乙醚(1000ml)中，用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物溶解于500ml THF中，與400ml 1N的HCl混合，攪拌1小時，在50℃下部分濃縮以除去THF。用己烷萃取該水溶液3次，用飽和碳酸鈉水溶液調(diào)至堿性(pH大于9)，并與Boc2O(53g)的二氯甲烷(500ml)溶液混合。將得到的混合物攪拌30分鐘。分離有機(jī)相，水相用二氯甲烷萃取3次。合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。該殘留物通過快速層析(10％乙酸乙酯/己烷)純化，得到標(biāo)題化合物，該化合物為順式和反式異構(gòu)體的混合物(約1∶1，24g)。在MPLC(5％乙酸乙酯/己烷)上進(jìn)一步純化，得到純的順式異構(gòu)體(洗脫較快的異構(gòu)體，5.0g)和反式異構(gòu)體(洗脫較慢的異構(gòu)體，4.3g)。對C21H31NO4的ESI-MS計算值361；實測值362(M+H)。
步驟F 將上述順式Boc-氨基酯(1.25g，3.45mmol)與20ml 4N的HCl/二噁烷攪拌1小時，蒸發(fā)并在高真空下干燥，得到(1S，3R)-3-氨基-1-異丙基環(huán)戊烷甲酸芐酯鹽酸鹽(1.05g，100％)。對C16H23NO2的ESI-MS計算值261；實測值262(M+H)。
步驟G 將上述氨基酯(鹽酸鹽，1.05g，3.45mmol)、四氫-4H-吡喃-4-酮(1.0g，10mmol)、分子篩(4，1.0g)、DIEA(0.78g，6mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(1.33g，6mmol)在30ml二氯甲烷中的混合物攪拌過夜。用飽和碳酸鈉溶液猝滅該反應(yīng)，并濾除不溶物。用二氯甲烷萃取該粗產(chǎn)物，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并在高真空下干燥。該粗產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化用于下一步驟。
步驟H 往粗制的氨基酯(步驟G，方法A，中間體2)(6.85g，19.84mmol)、三乙胺(5.6ml，39.68mmol)和DCM(50ml)的混合物中緩慢加入TFAA(6.91ml，49.6mmol)。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，隨后用1N的HCl和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，真空濃縮。通過MPLC(20/80，乙酸乙酯/己烷)純化該粗產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物(3.7g，42％)。對C23H31F3NO4的LC-MS計算值442；實測值442[M+H+]。
步驟I 在氫氣囊(hydrogen balloon)提供的氫氣氣氛中將該酰胺(步驟H，方法A，中間體2)(4.7g，10.7mmol)、10％的Pd/C(500mg)和甲醇(50ml)的混合物攪拌2小時，隨后通過硅藻土過濾并真空濃縮，得到目標(biāo)酸(3.92g，99+％)。對C16H25F3NO4的LC-MS計算值352；實測值352[M+H+]。
方法B步驟A 往磁力攪拌的Boc-氨基酸(步驟A，方法A，中間體2)(159g，0.7mol)的DMF(500ml)溶液中加入固體碳酸鉀(138g，1.0mol)。將得到的混合物攪拌20分鐘，隨后一次性加入純凈的芐基溴(84ml，0.7mol)。觀察到放熱反應(yīng)發(fā)生。在室溫下攪拌過夜后，將全部混合物轉(zhuǎn)移至冰水混合物(1000ml)中。用乙酸乙酯(2×800ml)萃取粗產(chǎn)物。用水洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到褐色油狀物。將該物質(zhì)與4N HCl/二噁烷(350ml)混合，攪拌直到?jīng)]有氣泡出現(xiàn)。加入500ml乙醚，過濾收集沉淀并用乙醚和己烷洗滌。得到鹽酸鹽形式的所需產(chǎn)物(164g，93％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)7.38(m，5H)，6.25(m，1H)，5.94(m，1H)，5.20(s，2H)，4.32(br s，1H)，3.80(br s，1H)，2.67(m，1H)，2.14(m，1H).
步驟B 往該氨基酯鹽酸鹽(步驟A，方法B，中間體2)(38g，150mmol)、四氫-4-H-吡喃-4-酮(15g，150mmol)、DIEA(20.6g，160mmol)和分子篩(4，20g)在200ml二氯甲烷中的混合物中分多次加入三乙酰氧基硼氫化鈉(42.4g，200mmol)。加完后，在室溫下將該混合物攪拌過夜，用飽和碳酸鈉水溶液猝滅，并通過硅藻土過濾。用二氯甲烷萃取3次該粗產(chǎn)物，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。殘留物通過快速層析純化(10％[aq.NH4OH/MeOH 1/9]/DCM)。將所需部分合并并蒸發(fā)。將殘留物與THF混合并蒸發(fā)，再溶解于甲苯并蒸發(fā)，真空干燥，得到淺褐色油狀物(38g，84％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)7.38(m，5H)，5.98(m，1H)，5.85(m，1H)，3.98(m，3H)，3.54(m，1H)，3.40(m，2H)，2.82(m，1H)，2.44(m，1H)，1.90(m，1H)，1.79(m，2H)，1.70(m，1H)，1.44(m，2H).
步驟C 在氮氣氣氛下，往含有固體雙(三甲基甲硅烷基)胺鉀(30g，151mmol)的圓底燒瓶中加入的500ml無水THF，冷卻至-78℃。在20分鐘內(nèi)加入該氨基酯(步驟B，方法B，中間體2)(38g，126mmol)的THF(100ml)溶液。將干冰-丙酮浴換成干冰-水浴(約-15℃)。將該混合物在-15℃下攪拌1小時，隨后冷卻至-78℃。加入純凈的異丙基碘(65ml，378mmol)。將該燒瓶再次置于-15℃干冰-水浴中。幾分鐘后，形成大量的白色沉淀。將該反應(yīng)混合物再攪拌1小時，傾入冰水混合物中，用乙醚萃取3次。用水和鹽水洗滌合并的醚層，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。將殘留物溶解于二氯甲烷，再次經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。將殘留物真空干燥，與二氯甲烷(200ml)混合并在氮氣氣氛下冷卻至0℃。往該溶液中滴加吡啶(33ml，400mmol)和三氟乙酸酐(27ml，190mmol)。1小時后，用水猝滅該反應(yīng)。分離有機(jī)相并用2N鹽酸水溶液、水和鹽水洗滌。經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮后，得到的殘留物通過快速層析(20％乙酸乙酯/己烷)純化，得到淺褐色油狀物(41g，74％)。1H-NMR表明為5∶1的順/反異構(gòu)體混合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)CH＝CH順式6.06(m，1H)，5.68(m，1H)，反式5.92(m，0.2H)，5.79(m，0.2H)。對C23H28F3NO4的LC-MS計算值440；實測值440[M+H+]。
步驟D 在50lb的氫氣下在帕爾搖動器中將在乙酸乙酯(100ml)中的該不飽和芐酯(步驟C，方法B，中間體2)(41g)和10％的Pd/C(2.0g)氫化過夜。通過硅藻土墊濾除催化劑。蒸發(fā)濾液，將得到的殘留物溶于二氯甲烷，濃縮并真空干燥過夜。得到樹膠狀白色固體形式的所需酸(32.5g，100％)。對C16H24F3NO4的LC-MS計算值352；實測值352[M+H+]。
中間體3
步驟A 在50ml DCM中將(1S，3R)-3-氨基-1-異丙基環(huán)戊烷甲酸甲酯鹽酸鹽(按照與得自步驟F，方法A，中間體2的中間體相同的制備方法制備，不同之處在于用甲酯代替了芐酯，1.4g，6.1mmol)和四氫-4H-吡喃-4-酮(730mg，7.3mmol)以及三乙胺(1ml，7mmol)混合。10分鐘后，加入粉末狀的4分子篩(1g)和三乙酰氧基硼氫化鈉(5.1g，24mmol)，將得到的混合物攪拌過夜。該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，濾液用飽和NaHCO3溶液洗滌2次，隨后用鹽水洗滌1次。有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到1g(1S，3R)-1-異丙基-3-(四氫-2H-吡喃-4-基氨基)環(huán)戊烷甲酸甲酯。
對C15H27NO3的ESI-MS計算值269；實測值270(M+H)。
步驟B 在50ml DCM中將(1S，3R)-1-異丙基-3-(四氫-2H-吡喃-4-基氨基)環(huán)戊烷甲酸甲酯(1.0g，3.7mmol)與37％甲醛水溶液(3.0ml，37mmol)混合。攪拌35分鐘后，加入粉末狀的4分子篩和三乙酰氧基硼氫化鈉(3.9g，19mmol)，在氮氣氣氛下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。用DCM稀釋該反應(yīng)混合物，經(jīng)硅藻土過濾，濾液用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到1.0g(1S，3R)-1-異丙基-3-[甲基(四氫-2H-吡喃-4-基)氨基]環(huán)戊烷甲酸甲酯。對C16H29NO3的ESI-MS計算值283；實測值284(M+H)。
步驟C 用LiOH·H2O(735mg)的水(10ml)溶液處理(1S，3R)-1-異丙基-3-[甲基(四氫-2H-吡喃-4-基)氨基]環(huán)戊烷甲酸甲酯(1.0g，3.5mmol)在1∶1的THF/MeOH(20ml)中的溶液。數(shù)小時后，通過HPLC-MS分析觀察到幾乎沒有水解，因此將該反應(yīng)混合物加熱回流并攪拌2天。隨后將該反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)為約7，濃縮該混合物。將該殘留物懸浮在50％的甲醇/DCM中，過濾，濃縮濾液，得到900mg(1S，3R)-1-異丙基-3-[甲基(四氫-2H-吡喃-4-基)氨基]環(huán)戊烷甲酸，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化。對C15H27NO3的ESI-MS計算值269；實測值270(M+H)。
實施例1 步驟A 在10ml DCM中將中間體1(259mg，1.05mmol)與中間體2(334mg，0.950mmol)以及EDC(364mg，1.90mmol)混合。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌3天，隨后用DCM稀釋，并先后用水和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，濃縮。通過MPLC(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)純化，得到320.2mg(58％)產(chǎn)物。對C28H38F6N2O4的ESI-MS計算值580；實測值581(M+H)。
步驟B 將上述步驟A制備的中間體酰胺(319mg，0.549mmol)溶于4NHCl/二噁烷溶液(7ml)中，并在室溫下攪拌2小時。將該反應(yīng)混合物濃縮，得到326mg產(chǎn)物，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。對C24H30F6N2O4的ESI-MS計算值524；實測值525(M+H)。
步驟C 往如步驟B所述制備的苯酚(108mg，0.206mmol)的甲苯(6ml)溶液中加入多聚甲醛(約50mg)和TsOH·H2O(4mg，0.02mmol)。該反應(yīng)容器裝有迪安-斯達(dá)克榻分水器和冷凝器，將得到的混合物攪拌回流3小時，隨后在室溫下攪拌過夜。由于該反應(yīng)不完全，加入更多的多聚甲醛(約100mg)和TsOH·H2O(4mg)，并將該反應(yīng)混合物攪拌回流4小時。隨后濃縮該反應(yīng)混合物，殘留物通過MPLC(硅膠，55％乙酸乙酯/己烷)純化，得到61mg產(chǎn)物。對C25H30F6N2O4的ESI-MS計算值536；實測值537(M+H)。
步驟D 用LiOH·H2O(14mg，0.33mmol)的水(1ml)溶液處理得自步驟C的環(huán)化產(chǎn)物(58.2mg，0.108mmol)在1∶1的THF/甲醇(2ml)中的溶液。在60℃下將該反應(yīng)混合物攪拌6小時。由于該反應(yīng)進(jìn)行緩慢，加入更多的LiOH·H2O(14mg，0.33mmol)，同時加入的還有THF、甲醇和水各1ml，隨后在60℃下將該反應(yīng)混合物再攪拌12小時。濃縮該反應(yīng)混合物，并經(jīng)制備型TLC[硅膠，7％的(10％氫氧化銨溶液(28-30％)/甲醇)的DCM溶液]純化。在1ml DCM中用1N HCl/乙醚(75μl，0.07mmol)將該純的游離堿產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為其鹽酸鹽。蒸發(fā)溶劑后，得到32.5mg白色固體狀的目標(biāo)化合物。
對C23H31F3N2O3的ESI-MS計算值440；實測值441(M+H)。
中間體4 步驟A 在0℃下通過加料漏斗往5，6-二氫-4-甲氧基-2H-吡喃(10.0g，87.5mmol)在甲醇(200ml)中的混合物中滴加3-氯過苯甲酸(30.2g，175mmol)的甲醇(50ml)溶液。將得到的溶液攪拌5小時，使其緩慢升至室溫。減壓除去甲醇，得到白色固體。將該固體溶解于500ml二氯甲烷并冷卻至0℃。在劇烈攪拌的同時，往該混合物中分批加入過量的固體氫氧化鈣(50-60g)。繼續(xù)攪拌30分鐘，該混合物經(jīng)硅藻土塞過濾，減壓蒸發(fā)濾液，得到11.62g(82％)澄清油狀的所需產(chǎn)物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ3.88-3.80(m，2H)，3.73-3.68(m，2H)，3.54-3.48(m，1H)，3.28(s，3H)，3.27(s，3H)，2.00-1.93(m，1H)，1.82-1.77(m，1H).
步驟B 在氮氣氣氛下，往冷卻的(0℃)得自制備中間體4的步驟A的產(chǎn)物(9.40g，58.0mmol)的四氫呋喃(200ml)溶液中緩慢加入NaH(2.32g，58.0mmol)，隨后在0℃下將得到的漿狀物攪拌1小時。隨后通過注射器往該漿狀物中加入碘甲烷(7.22ml，116mmol)，將得到的混合物攪拌過夜，讓其升至室溫。用飽和氯化銨溶液(200ml)猝滅該反應(yīng)，隨后使用分液漏斗除去有機(jī)層。水層用醚(3×150ml)萃取，合并所有的有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并真空蒸發(fā)。通過快速柱純化，使用的梯度洗脫液為10-60％的乙醚/己烷，得到8.46g(83％)澄清油狀的所需產(chǎn)物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ3.98(dd，J＝2.5，12.4Hz，1H)，3.77(ddd，J＝3.5，7.1，10.8Hz，1H)，3.57(dd，J＝1.4，12.4Hz，1H)，3.50(dd，J＝2.5，11.7Hz，1H)，3.46(s，3H)，3.25(s，3H)，3.22(s，3H)，3.22-3.20(m，1H)，1.96(ddd，J＝4.7，11.8，16.5Hz，1H)，1.75(brdd，J＝1.7，14.2Hz，1H).
步驟C 用濃鹽酸(6ml)處理得自制備中間體4的步驟B的產(chǎn)物(3.0g，17mmol)的THF/水(60ml/10ml)溶液，在室溫下將得到的溶液攪拌1小時。真空濃縮該混合物以除去四氫呋喃，隨后用乙醚(6×50ml)萃取水層。合并有機(jī)相，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓蒸發(fā)，得到澄清油狀的中間體4(1.75g，79％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ4.23(ddd，J＝1.2，11.4，12.4Hz，1H)，4.15-4.09(m，1H)，3.82(dd，J＝5.95，8.7Hz，1H)，3.74(ddd，J＝5.5，8.5，13.6Hz，1H)，3.56(dd，J＝8.8，11.3Hz，1H)，3.50(s，3H)，2.61(app dd，J＝5.0，8.9Hz，2H).
中間體5 往(1S，3R)-3-氨基-1-異丙基環(huán)戊烷甲酸芐酯鹽酸鹽(制備中間體2的方法B的步驟F，1.79g，6.01mmol)、中間體4(2.35g，18.0mmol)和三乙胺(0.838ml，6.01mmol)在30ml DCM中的溶液中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(5.10g，24.0mmol)，將得到的混合物攪拌3天。用DCM稀釋該反應(yīng)混合物，并先后用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到2.61g粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物主要為兩種異構(gòu)體的混合物(由相關(guān)研究認(rèn)為是兩種順式四氫吡喃異構(gòu)體)。中間體5可以兩種異構(gòu)體的混合物的粗品形式繼續(xù)使用，或者純化分離為兩種單一的異構(gòu)體(見中間體5A和5B)繼續(xù)使用。
對C22H33NO4的ESI-MS計算值375；實測值376(M+H)。
中間體5A和5B 使用Chiralcel OD柱(2cm×25cm，Daicel Chemical Industries)將粗制的中間體5(約6.01mmol)純化并分離為兩種主要的單一異構(gòu)體，洗脫液為20％的異丙醇/庚烷。每次注射量為約50mg，需要注射45次，使用結(jié)合了Gilson Unipoint軟件的Gilson餾分收集器以自動方式進(jìn)行操作。得到920mg洗脫較快的異構(gòu)體和652mg洗脫較慢的異構(gòu)體。分別將洗脫較快和洗脫較慢的異構(gòu)體指定為中間體5A和5B。
洗脫較快的異構(gòu)體(5A)對C22H33NO4的ESI-MS計算值375；實測值376(M+H)。
較慢的洗脫異構(gòu)體(5B)對C22H33NO4的ESI-MS計算值375；實測值376(M+H)。
中間體6 步驟A 往未純化的中間體5(455mg，1.21mmol)的DCM(10ml)溶液中加入三氟乙酸酐(257μl，1.82mmol)，隨后加入三乙胺(254μl，1.82mmol)。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌2.5小時，隨后用DCM稀釋并依次用1N的HCl溶液、飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到554mg粗產(chǎn)物。通過MPLC(硅膠，40％乙酸乙酯/己烷)純化，得到405mg(71％)產(chǎn)物，該產(chǎn)物主要為兩種異構(gòu)體的混合物(兩種順式四氫吡喃異構(gòu)體)。對C24H32F3NO5的ESI-MS計算值471；實測值494(M+Na+)。
步驟B 在氣囊提供的氫氣氣氛下，將得自上面的步驟A的酯(405mg，0.859mmol)和10％的Pd/C(Degussa，80mg)在甲醇(5ml)中的混合物攪拌2小時。將該反應(yīng)混合物通過裝有微孔PTFE 0.45μm過濾器的注射器過濾，隨后濃縮，得到310mg目標(biāo)酸，該產(chǎn)物主要為兩種異構(gòu)體的混合物(兩種順式四氫吡喃異構(gòu)體)。
對C17H26F3NO5的ESI-MS計算值381；實測值404(M+Na+)。
中間體6A和6B 作為單一異構(gòu)體的中間體6A和6B分別通過中間體5A和5B使用與合成中間體6相同的步驟制備。值得注意的是雖然沒有明確地指定，中間體6A的絕對立體化學(xué)為上面兩個式子中的一個，中間體6B為另一個。
中間體6A對C17H26F3NO5的ESI-MS計算值381；實測值382(M+H)。
中間體6B對C17H26F3NO5的ESI-MS計算值381；實測值382(M+H)。
實施例2A和2B 按照與實施例1的制備幾乎相同的方法，由中間體6A和1、中間體6和1分別制備實施例2A和2B。一個不同之處在于最后的去保護(hù)步驟，以下描述了用于實施例2A的該步驟S，S或R，RS，S或R，R 將如上所示的三氟乙?；Ｗo(hù)的前體(100mg，0.177mmol)溶于3ml乙醇中，并用NaBH4(67mg，1.8mmol)處理。在室溫下將得到的反應(yīng)混合物攪拌過夜，隨后濃縮。將殘留物溶于DCM，先后用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過反相HPLC(YMC Pack Pro C18，100×20mm ID)純化，得到TFA鹽形式的產(chǎn)物。通過將其溶解于DCM，并加入約175μl 1N的HCl/乙醚，然后濃縮，將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽，得到54mg為單一立體異構(gòu)體的產(chǎn)物。采用相同的方法制備實施例2B。
實施例2A對C24H33F3N2O4的ESI-MS計算值470；實測值471(M+H)。
實施例2B對C24H33F3N2O4的ESI-MS計算值470；實測值471(M+H)。
實施例3 往得自實施例1的最終產(chǎn)物(26mg，0.051mmol)、甲醛(37％重量/體積的水溶液，40μl)和三乙胺(7μl)的DCM(1ml)溶液中加入4分子篩(粉末狀，50mg)，隨后加入三乙酰氧基硼氫化鈉(53mg，0.25mmol)。在室溫下將該反應(yīng)混合物下攪拌1小時，隨后通過硅藻土過濾。濾液先后用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。將得到的游離堿溶于DCM，用12.5μl 4N的HCl/二噁烷處理，隨后濃縮，得到15mg鹽酸鹽形式的產(chǎn)物。
對C24H33F3N2O3的ESI-MS計算值454；實測值455(M+H)。
中間體7
步驟A 往預(yù)先冷卻(-78℃)的LDA(1.5M的環(huán)己烷溶液，63.3ml，94.9mmol)的THF(95ml)溶液中滴加(1S，3R)-3-[(二苯基亞甲基)氨基環(huán)戊烷甲酸芐酯(制備中間體2的方法A的步驟D，28g，73mmol)的THF(45ml)溶液。在約-78℃下將該反應(yīng)混合物攪拌1小時10分鐘，滴加純凈的乙醛(8.16ml，146mmol)(與此同時顏色由橙色變?yōu)辄S色)。繼續(xù)攪拌30分鐘后，將冷的反應(yīng)混合物傾入400ml 10％的檸檬酸溶液中。用乙醚(400ml)萃取該混合物2次，將醚層合并，并用鹽水洗滌，經(jīng)無水NaSO4干燥，過濾并濃縮，得到22.5g粗產(chǎn)物。通過MPLC(硅膠，先后用1L20％乙酸乙酯/己烷、500ml 25％乙酸乙酯/己烷和1L 30％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化(in 4 five g batches)，分離為上端帶(top band)和下端帶(bottom band)。發(fā)現(xiàn)上端帶(6.48g)包含四種立體異構(gòu)體中的三種，下端帶包含一種異構(gòu)體，確定該異構(gòu)體具有不需要的反式環(huán)戊基立體化學(xué)。
步驟B 往步驟A得到的亞氨基酯(6.48g，15.2mmol)的THF(80ml)溶液中加入2N HCl溶液(40ml)，在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。再加入2N HCl溶液(30ml)，并用己烷洗滌2次以除去二苯甲酮。濃縮水層。往該殘留物中加入DCM和飽和NaHCO3溶液各100ml。隨后加入二碳酸二叔丁酯(6.63g，30.4mmol)，將該反應(yīng)混合物攪拌1.25小時。分離各層，用鹽水洗滌有機(jī)層，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到8.8g粗產(chǎn)物。通過MPLC(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)純化，使兩種產(chǎn)物帶分離，上端帶(1.76g)對應(yīng)于單一的反式異構(gòu)體，下端帶(2.90g)對應(yīng)于在羥基中心差向異構(gòu)的兩種順式異構(gòu)體的混合物。
步驟C 在50ml DCM中將按照步驟B制備的羥基酯(2.66g，7.32mmol)與三乙胺(2.55ml，18.3mmol)以及乙酸酐(1.73ml，18.3mmol)混合。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌2小時。隨后用DCM稀釋該反應(yīng)混合物并用2N HCl溶液、飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過MPLC(硅膠，45％乙酸乙酯/己烷)純化，得到2.84g所需產(chǎn)物。
步驟D 將得自步驟C的中間體(2.66g，6.56mmol)溶于4N HCl/1，4-二噁烷(20ml)中，在室溫下攪拌1.5小時。濃縮該反應(yīng)混合物，得到2.35g鹽酸鹽形式的粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物在HPLC上給出單峰(＞99％)，未進(jìn)行進(jìn)一步純化。
對C17H23NO4的ESI-MS計算值305；實測值306(M+H)。
步驟E 往得自步驟D的胺鹽酸鹽(1.83g，5.34mmol)、四氫-4H-吡喃-4-酮(0.74ml，8.0mmol)和三乙胺(0.74ml，5.3mmol)的DCM溶液中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(4.53g，21.4mmol)。在室溫下將得到的混合物攪拌過夜。用DCM稀釋該反應(yīng)混合物，并先后用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到2.19g粗產(chǎn)物，HPLC分析呈現(xiàn)出一個主峰(＞90％)。
對C22H31NO5的ESI-MS計算值389；實測值390(M+H)。
步驟F 往得自步驟E的產(chǎn)物(2.19g，5.62mmol)和三乙胺(1.17ml，8.43mmol)的DCM(50ml)溶液中加入三氟乙酸酐(1.19ml，8.43mmol)。在室溫下將得到的反應(yīng)混合物攪拌4小時。用DCM稀釋該混合物并先后用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到2.28g粗產(chǎn)物。通過MPLC(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)純化，得到2.07g被保護(hù)的胺。
對C24H30F3NO6的ESI-MS計算值485；實測值486(M+H)。
步驟G 在氣囊提供的氫氣氣氛下將得自步驟F的被保護(hù)的胺(2.07g，4.26mmol)和10％的Pd/C(Degussa，250mg)在30ml甲醇中的混合物攪拌2小時10分鐘。將該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾并濃縮，得到1.56g粗產(chǎn)物(中間體7)，HPLC分析呈現(xiàn)出一個單峰(＞99％)。
對C17H24F3NO6的ESI-MS計算值395；實測值396(M+H)。
實施例4A和4B 步驟A 先后用EDC(98.5mg，0.514mmol)、DMAP(約10mg)處理在5mlDCM中的中間體7(102mg，0.257mmol)和中間體1(95.3mg，0.386mmol)。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌4小時。用DCM稀釋該反應(yīng)混合物并先后用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。HPLC-MS分析表明已除去大量的三氟乙酰胺保護(hù)基團(tuán)，因此將該粗制的殘留物溶于DCM，隨后加入三氟乙酸酐(36μl)和三乙胺(36μl)。在室溫下將該混合物攪拌3天以上，但是HPLC-MS表明沒有任何改進(jìn)，因此用DCM稀釋該混合物，并先后用2N HCl和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到188mg產(chǎn)物，該產(chǎn)物直接用于下一步驟。
步驟B 將得自步驟A的粗產(chǎn)物(約0.257mmol)溶于3ml TFA。加入1滴水，在氨氣氣氛、室溫下將該混合物攪拌3小時。將該反應(yīng)混合物濃縮，得到的殘留物通過MPLC(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)純化，得到64.4mg所需的酚。
對C25H30F6N2O6的ESI-MS計算值568；實測值569(M+H)。
步驟C 在8ml苯中將得自步驟B的酚(64.4mg，0.113mmol)與多聚甲醛(約150mg)以及TsOH·H2O(約5mg)混合。該反應(yīng)容器裝有迪安-斯達(dá)克榻分水器和冷凝器，將該反應(yīng)混合物攪拌回流1.5小時，這時根據(jù)HPLC-MS分析，沒有殘留的原料。將該反應(yīng)混合物濃縮，隨后再溶于DMC并過濾。濃縮濾液，得到的殘留物通過制備型TLC(硅膠，40％乙酸乙酯/己烷)純化，使兩種產(chǎn)物帶分離(上端帶22.6mg，下端帶16.8mg)，對應(yīng)于在含羥基的碳上差向異構(gòu)的兩種非對映異構(gòu)體產(chǎn)物。
洗脫較快的異構(gòu)體對C26H30F6N2O6的ESI-MS計算值580；實測值603(M+Na+)。
洗脫較慢的異構(gòu)體對C26H30F6N2O6的ESI-MS計算值580；實測值603(M+Na+)。
步驟D 將按照步驟C描述的方法得到的洗脫較快的異構(gòu)體(22.6mg，0.0389mmol)溶于3ml乙醇，并用硼氫化鈉(23mg，0.61mmol)處理。在室溫下將得到的混合物攪拌過夜，隨后濃縮。通過制備型TLC[硅膠，12％的(10％氫氧化銨溶液(28-30％)/甲醇)的DCM溶液]純化，得到產(chǎn)物，隨后將該產(chǎn)物溶于DCM，加入26μl 1N HCl/乙醚，濃縮得到12mg鹽，將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽。
類似地將按照步驟C描述的方法得到的洗脫較慢的異構(gòu)體(16.8mg，0.0289mmol)完全去保護(hù)，并轉(zhuǎn)化為其鹽(7.4mg)。
洗脫較快的異構(gòu)體對C26H30F6N2O6的ESI-MS計算值580；實測值603(M+Na+)。
洗脫較慢的異構(gòu)體對C26H30F6N2O6的ESI-MS計算值580；實測值603(M+Na+)。
中間體8 步驟A 往冷卻的(0℃)叔丁硫醇(2.89ml，25.7mmol)和2-氟-5-(三氟甲基)苯甲腈(4.62g，24.4mmol)的THF(100ml)溶液中分成小部分加入氫化鈉(在礦物油中的60％的分散體，1.12g，28.1mmol)。隨后在氮氣氣氛下將該反應(yīng)混合物緩慢升至室溫并攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物傾入水中，并用乙醚萃取兩次。合并的醚層用鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到6.82g粗產(chǎn)物。
H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.98(br s，1H)，7.85(d，J＝8.5Hz，1H)，7.80(dd，J＝8.5Hz，2Hz，1H)，1.42(s，9H).
步驟B 往冷卻的(0℃)按照步驟A描述的方法制備的腈(6.36g，24.5mmol)的THF(100ml)溶液中滴加BH3·THF的THF溶液(1.0M，73.5ml，73.5mmol)。將該反應(yīng)混合物升至室溫，并攪拌48小時，隨后通過滴加甲醇猝滅該反應(yīng)，直到不再產(chǎn)生氣泡。將該反應(yīng)混合物濃縮，隨后再溶解于60ml甲醇。加入無水HCl的甲醇溶液(通過往95ml甲醇中加入2.92ml亞硫酰氯制備)，隨后在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌3天。將該反應(yīng)混合物濃縮，該殘留物通過快速層析(硅膠，5-10％梯度的[10％氫氧化銨溶液(28-30％)/甲醇]的DCM溶液)純化，得到5.27g所需的胺。
對C12H16F3NS的ESI-MS計算值263；實測值264(M+H)。
中間體9 步驟A 在4ml DCM中將中間體2(112mg，0.319mmol)、中間體9(126mg，0.479mmol)和EDC(122mg，0.638mmol)混合。加入DMAP(約5mg)，在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌4小時。用DCM稀釋該混合物并先后用水、鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過MPLC(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)純化，得到127mg產(chǎn)物。
對C28H38F6N2O3S的ESI-MS計算值596；實測值597(M+H)。
步驟B 用2-硝基苯硫基氯(40mg，0.21mmol)處理得自步驟A的產(chǎn)物(127mg，0.213mmol)的AcOH(3ml)溶液，在室溫下將得到的混合物攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物濃縮，并用于步驟C。
對C30H33F6N3O5S2的ESI-MS計算值693；實測值694(M+H)。
步驟C 用硼氫化鈉(4mg)處理得自步驟B的粗產(chǎn)物(約0.213mmol)的甲醇(約3ml)溶液。在室溫下攪拌2小時后，再次加入硼氫化鈉(4mg)，2小時后，第三次加入硼氫化鈉(4mg)。繼續(xù)攪拌5分鐘后，將該反應(yīng)混合物過濾并濃縮。將殘留物溶于苯(8ml)，加入硼氫化鈉(5mg)。攪拌5分鐘后，加入多聚甲醛(約100mg)和TsOH·H2O(約25mg)，在氮氣氣氛下，在裝有迪安-斯達(dá)克榻分水器的反應(yīng)容器中將該反應(yīng)混合物攪拌回流9小時。隨后在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜，然后濃縮。HPLC-MS分析表明幾乎不存在所需的產(chǎn)物，并且主要為二硫化物產(chǎn)物(和原料)。用制備型TLC(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)分離粗產(chǎn)物。得到少量產(chǎn)物，同時還有對應(yīng)于二硫化物和硫醇的三條帶。將后三條帶合并，溶于乙醇(3ml)，冷卻至0℃，并用硼氫化鈉(10mg)處理。在氮氣氣氛下將該混合物攪拌10分鐘(這時的HPLC-MS僅顯示出對應(yīng)于所需的硫醇中間體的單峰)。加入3N HCl溶液將剩余的硼氫化鈉猝滅，并將該混合物濃縮至干，仔細(xì)操作以避免暴露于空氣。將殘留物溶于脫氧苯(8ml)，加入多聚甲醛(100mg)和TsOH·H2O(5mg)。在氮氣氣氛下，在裝有迪安-斯達(dá)克榻分水器的反應(yīng)容器中將該反應(yīng)混合物攪拌回流1.5小時。將該反應(yīng)混合物濃縮，并通過制備型TLC(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)純化。將收集的產(chǎn)物與在前面失敗的嘗試(見上)中得到的少量產(chǎn)物混合，得到91.2mg(77％)。
對C25H30F6N2O3S的ESI-MS計算值552；實測值553(M+H)。
實施例5 步驟A 將mCPBA(77％，152mg，0.680mmol)加入中間體9(75.1mg，0.136mmol)的DCM(3ml)溶液中。在室溫下將得到的反應(yīng)混合物攪拌2.25小時。稀釋該混合物，并用飽和NaHSO3溶液、飽和NaHCO3溶液(2次)和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過MPLC(硅膠，70％乙酸乙酯/己烷)純化，得到63.6mg(80％)砜。
對C25H30F6N2O5S的ESI-MS計算值584；實測值585(M+H)。
步驟B 往得自步驟A的產(chǎn)物(63.6mg，0.109mmol)的乙醇(2ml)溶液中加入硼氫化鈉(50mg，1.32mmol)。在室溫下將得到的反應(yīng)混合物攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物濃縮，殘留物通過反相HPLC(YMC Pack ProC18，100×20mm ID)純化，得到為其TFA鹽的產(chǎn)物。通過將該產(chǎn)物溶于DCM，并加入0.25ml 1N HCl/乙醚，隨后濃縮，將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽，得到36mg產(chǎn)物。
對C23H31F3N2O4S的ESI-MS計算值488；實測值489(M+H)。
實施例6A和6B 步驟A 將mCPBA(77％，4-5mg)加入中間體9(10.2mg，0.0185mmol)的DCM(1ml)溶液中。在室溫下將得到的反應(yīng)混合物攪拌2小時。用DCM稀釋該混合物，并用飽和NaHSO3溶液、飽和NaHCO3溶液(2次)和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過制備型TLC(硅膠，70％乙酸乙酯/己烷)純化，使兩種異構(gòu)體(差向異構(gòu)的亞砜)分離，得到4.9mg上端帶產(chǎn)物和3.8mg下端帶產(chǎn)物。
上端帶對C25H30F6N2O4S的ESI-MS計算值568；實測值569(M+H)。
下端帶對C25H30F6N2O4S的ESI-MS計算值568；實測值569(M+H)。
步驟B 采用與實施例5合成方法中步驟B中描述的相同方法從兩種亞砜中間體中除去三氟乙酰基保護(hù)基團(tuán)。
上端帶，步驟A對C23H31F3N2O3S的ESI-MS計算值472；實測值473(M+H)。
下端帶，步驟A對C23H31F3N2O3S的ESI-MS計算值472；實測值473(M+H)。
實施例7 按照實施例5的合成方法中步驟B中描述的相同方法除去三氟乙?；Ｗo(hù)基團(tuán)，由中間體9(5.0mg，0.0091mmol)制備實施例7，得到3.97mg其鹽酸鹽形式的產(chǎn)物。
對C23H31F3N2O2S的ESI-MS計算值456；實測值457(M+H)。
實施例8A和8B
步驟A 用EDC(311mg，1.62mmol)處理中間體7(320mg，0.810mmol)和中間體8(267mg，1.01mmol)在12ml DCM中的溶液。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。用DCM稀釋該反應(yīng)混合物，并先后用飽和(saturated)水和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過MPLC(硅膠，55％乙酸乙酯/己烷)純化，使兩種產(chǎn)品帶分離(176mg洗脫較快的異構(gòu)體，164mg洗脫較慢的異構(gòu)體)，對應(yīng)于在含羥基的碳上差向異構(gòu)的兩種異構(gòu)體產(chǎn)物。
步驟B 用2-硝基苯硫基氯(57mg，0.30mmol)處理得自步驟A的洗脫較快的異構(gòu)體(176mg，0.275mmol)的AcOH(4ml)溶液，在室溫下將得到的混合物攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物濃縮，殘留物通過MPLC(硅膠，60％乙酸乙酯/己烷)純化，得到178mg二硫化物產(chǎn)物。
對C31H33F6N3O7S2的ESI-MS計算值737；實測值738(M+H)。
采用同樣的方法將得自步驟A的洗脫較慢的異構(gòu)體(164mg，0.256mmol)轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的二硫化物(189mg)。
對C31H33F6N3O7S2的ESI-MS計算值737；實測值738(M+H)。
步驟C 在氮氣氣氛下將得自步驟B的二硫化物(178mg，0.241mmol)與硼氫化鈉(20mg，0.53mmol)混合，該二硫化物衍生自步驟A中洗脫較快的異構(gòu)體。加入乙醇(5ml)，得到的反應(yīng)混合物顏色呈現(xiàn)出深紅。在室溫下攪拌5分鐘后，滴加4N HCl/二噁烷，直到顏色由紅色變?yōu)闇\黃色并保持不變。將該反應(yīng)混合物濃縮。往該殘留物的苯(10ml)溶液中加入多聚甲醛(250mg)和TsOH·H2O(5mg)。在氮氣氣氛下，在裝有迪安-斯達(dá)克榻分水器和冷凝器的反應(yīng)容器中攪拌回流1.5小時。隨后在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。HPLC-MS分析表明反應(yīng)未進(jìn)行完全，因此，再加入多聚甲醛(250mg)和TsOH·H2O(10mg)，將該反應(yīng)混合物再攪拌回流5小時。將該反應(yīng)混合物濃縮。將殘留物溶于DCM，濾除殘留的多聚甲醛并濃縮。通過制備型TLC(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)純化，得到101mg(70％)的環(huán)化產(chǎn)物。
對C26H30F6N2O5S的ESI-MS計算值596；實測值597(M+H)。
采用相同的方法，將得自步驟B的衍生自由步驟A中洗脫較慢的異構(gòu)體的二硫化物(189mg，0.256mmol)轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的同分異構(gòu)的苯并噻嗪產(chǎn)物(153mg)。
對C26H30F6N2O5S的ESI-MS計算值596；實測值597(M+H)。
步驟D 將得自步驟C的苯并噻嗪(96.8mg，0.162mmol)溶于3ml乙醇，并用硼氫化鈉(95mg)處理，該苯并噻嗪衍生自步驟A中洗脫較快的異構(gòu)體。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜，隨后在30℃下減壓濃縮。將殘留物溶于DCM并用飽和NaHCO3溶液洗滌。用更多的DCM萃取水層，用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到65.9mg所需完全去保護(hù)的產(chǎn)物。
對C22H29F3N2O3S的ESI-MS計算值458；實測值459(M+H)。
同樣地，將得自步驟C的衍生自步驟A中洗脫較慢的異構(gòu)體的苯并噻嗪(127.6mg，0.214mmol)轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的同分異構(gòu)的完全去保護(hù)的產(chǎn)物。
對C22H29F3N2O3S的ESI-MS計算值458；實測值459(M+H)。
步驟E 將得自步驟D的苯并噻嗪(65.9mg，0.144mmol)溶于1ml甲醇并用過一硫酸氫鉀(oxone)(133mg，0.216mmol)的水(1ml)溶液處理，該苯并噻嗪衍生自步驟A中洗脫較快的異構(gòu)體。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。通過加入飽和NaSO3溶液和飽和NaHCO3溶液猝滅該反應(yīng)混合物。用DCM將得到的混合物萃取3次。合并的有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過制備型TLC[硅膠，10％的(10％氫氧化銨溶液(28-30％)/甲醇)的DCM溶液]純化，得到產(chǎn)物。用在1mlDCM中的1N HCl/乙醚(約0.25ml)將該游離堿產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為其鹽酸鹽。蒸發(fā)溶劑，得到57.2mg白色固體狀的目標(biāo)化合物。
對C22H29F3N2O5S的ESI-MS計算值490；實測值491(M+H)。
采用相同的方法將得自步驟D的衍生自步驟A中洗脫較慢的異構(gòu)體的苯并噻嗪(87.8mg，0.191mmol)氧化為其相應(yīng)的砜(75.9mg)。
對C22H29F3N2O5S的ESI-MS計算值490；實測值491(M+H)。
實施例9 往得自實施例8的衍生自步驟A中洗脫較快的異構(gòu)體的苯并噻嗪(9.6mg，0.020mmol)的DCM(0.2ml)溶液中加入三乙胺(3μl，0.02mmol)、37％甲醛(5.4μl，0.20mmol)、4分子篩粉末和三乙酰氧基硼氫化鈉(21mg，0.098mmol)。在室溫、氮氣氣氛下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。用DCM稀釋該反應(yīng)混合物，并用NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過制備型TLC[硅膠，10％的(10％氫氧化銨溶液(28-30％)/甲醇)的DCM溶液]純化，將得到的游離堿用1N HCl/乙醚轉(zhuǎn)化為其鹽酸鹽(3.2mg)(單一異構(gòu)體)。
對C23H31F3N2O5S的ESI-MS計算值504；實測值505(M+H)。
實施例10 往得自實施例8的衍生自步驟A中洗脫較慢的異構(gòu)體的苯并噻嗪(33mg，0.067mmol)的DCM(2ml)溶液中加入瓊斯試劑(6滴)。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌2.5小時，隨后用過量的異丙醇猝滅該反應(yīng)。該混合物經(jīng)硅藻土塞過濾并濃縮濾液。通過反相HPLC(YMC PackPro C18，100×20mm ID)純化，得到其TFA鹽形式的產(chǎn)物。通過溶于DCM，加入過量的1N HCl/乙醚，隨后濃縮，將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽，得到18.5mg產(chǎn)物。
對C22H27F3N2O5S的ESI-MS計算值488；實測值489(M+H)。
實施例11 步驟A 在10ml DCM中將中間體5(312mg，0.818mmol)、中間體8(280mg，1.06mmol)和EDC(314mg，1.64mmol)混合。加入DMAP(約15mg)，在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌5小時。隨后加入更多的中間體9(130mg)，并將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。用DCM稀釋該混合物并先后用水和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過MPLC(硅膠，45％乙酸乙酯/己烷)純化，得到396mg產(chǎn)物。
對C29H40F6N2O4S的ESI-MS計算值626；實測值627(M+H)。
步驟B 用2-硝基苯硫基氯(132mg，0.695mmol)處理得自步驟A的產(chǎn)物(396mg，0.632mmol)的AcOH(5ml)溶液，在室溫下將得到的混合物攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物濃縮，并通過MPLC(硅膠，65％乙酸乙酯/己烷)純化，得到449mg二硫化物。
對C31H35F6N3O6S2的ESI-MS計算值723；實測值724(M+H)。
步驟C 在氮氣氣氛下將得自步驟B的二硫化物(449mg，0.620mmol)與硼氫化鈉(47mg，1.24mmol)混合。加入預(yù)先冷卻(0℃)的乙醇(10ml)，得到的反應(yīng)混合物呈現(xiàn)出深紅色。在室溫下攪拌5分鐘后，滴加4NHCl/二噁烷，直到顏色由紅色變?yōu)闇\黃色并保持不變。將該反應(yīng)混合物濃縮。往殘留物的甲苯(10ml)溶液中加入多聚甲醛(1g)和TsOH·H2O(20mg)。該反應(yīng)容器裝有迪安-斯達(dá)克榻分水器和冷凝器，在氮氣氣氛下攪拌回流6小時。隨后在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物濃縮。將殘留物溶于DCM，濾除殘留的多聚甲醛并濃縮。通過制備型TLC(硅膠，35％乙酸乙酯/己烷)純化，得到181mg環(huán)化產(chǎn)物。
對C26H32F6N2O4S的ESI-MS計算值582；實測值583(M+H)。
步驟D 將得自步驟C的苯并噻嗪(181mg，0.311mmol)溶于5ml乙醇并用硼氫化鈉(120mg，3.1mmol)處理。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜，隨后濃縮。將殘留物溶于DCM并先后用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到154mg所需去保護(hù)的產(chǎn)物。
對C24H33F3N2O3S的ESI-MS計算值486；實測值487(M+H)。
步驟E 將得自步驟D的苯并噻嗪(153mg，0.314mmol)溶于2ml甲醇，冷卻至0℃，并用過一硫酸氫鉀(387mg，0.629mmol)的水(2ml)溶液處理。將該反應(yīng)混合物升至室溫，并攪拌5.5小時。通過加入飽和NaSO3溶液和飽和NaHCO3溶液猝滅該反應(yīng)混合物。用DCM將得到的混合物萃取4次。合并的有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。該粗產(chǎn)物混合物主要由兩種立體異構(gòu)體組成，使用Chiralcel OD柱(2cm×25cm，Daicel Chemical Industries)通過手性HPLC純化并分離為兩種單一的異構(gòu)體(29mg洗脫較快的峰和37mg洗脫較慢的峰)，洗脫液為60％異丙醇/庚烷。每次注射量為約40mg物料，需要注射3次，使用結(jié)合了Gilson Unipoint軟件的Gilson餾分收集器以自動方式進(jìn)行操作。通過溶于DCM，分別加入56μl和71μl，隨后濃縮將得到的游離堿轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的鹽酸鹽。
峰1對C24H33F3N2O5S的ESI-MS計算值518；實測值519(M+H)。
峰2對C24H33F3N2O5S的ESI-MS計算值518；實測值519(M+H)。
中間體10 步驟A
將NH4OH溶液(30％，25ml)加入2-氟-5-(三氟甲基)苯甲腈(10.5g，55.5mmol)的THF(25ml)溶液中。將該容器密閉并在60℃下攪拌3小時。濃縮該反應(yīng)混合物，隨后在乙醚和水之間分配。用鹽水洗滌醚層，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。HPLC-MS表明原料和產(chǎn)物的比率為1∶1。通過快速層析(硅膠，20-35％梯度的乙酸乙酯/己烷-以5％的增量增加)純化，得到3.55g所需苯胺。
對C8H5F3N2的ESI-MS計算值186；實測值187(M+H)。
步驟B 往2-氨基-5-(三氟甲基)苯甲腈(3.55g，19.1mmol)的乙醇(50ml)溶液中加入氫氧化銨溶液(30％，13ml)和Raney2800鎳(在水中的漿狀物，約1g)。使用帕爾裝置在50psi的氫氣下將得到的混合物攪拌21小時。隨后將該反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土過濾，先后用乙醇和水洗滌。減壓濃縮濾液至干，將這樣得到的殘留物通過快速層析[硅膠，10-20％梯度(2.5％增量)的(10％氫氧化銨溶液(28-30％)/甲醇)的DCM溶液]純化，得到2.61g(72％)白色固體形式的所需胺。
H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.37(br s，1H)，7.25(dd，J＝8.5，2.0Hz，1H)，6.76(d，J＝8.5Hz，1H)，3.75(s，2H).
中間體11 在10ml DCM中將中間體2(522mg，1.49mmol)和中間體10(353mg，1.86mmol)和EDC(571mg，2.98mmol)以及1-羥基-7-氮雜苯并三唑(399mg，2.98mmol)混合。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌2.5小時。加入DMF(2ml)以增溶這些試劑，隨后在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。由于該反應(yīng)仍未完全，加入中間體10(213mg，1.12mmol)和另外的10ml DMF，并再次將該混合物攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物部分濃縮以除去DCM。將得到的混合物在乙酸乙酯和水之間分配。有機(jī)層用水再洗滌3次，隨后用鹽水洗滌。隨后有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過MPLC(硅膠，70％乙酸乙酯/己烷)純化，得到722mg(93％)所需的酰胺。
對C24H31F6N3O3的ESI-MS計算值523；實測值524(M+H)。
實施例12 步驟A 往中間體11(301mg，0.575mmol)的DCM(10ml)溶液中加入吡啶(558μl，6.90mmol)和甲磺酰氯(445μl，5.75mmol)。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。用DCM稀釋該反應(yīng)混合物并用1N的HCl溶液、飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過MPLC(硅膠，75％乙酸乙酯/己烷)純化，得到319mg(92％)的甲磺酰胺產(chǎn)物。
對C25H33F6N3O5S的ESI-MS計算值601；實測值602(M+H)。
步驟B 在10ml甲苯中將得自步驟A的產(chǎn)物(319mg，0.530mmol)與多聚甲醛(約600mg)和pTSOH·H2O(約10mg)混合。該反應(yīng)容器裝有迪安-斯達(dá)克榻分水器和冷凝器，將該反應(yīng)混合物攪拌回流1.5小時，隨后再加入多聚甲醛(約500mg)，隨后再將該反應(yīng)混合物攪拌回流1小時。將該反應(yīng)混合物濃縮。通過MPLC(硅膠，60％乙酸乙酯/己烷)純化，得到297mg(91％)的環(huán)化產(chǎn)物。
對C26H33F6N3O5S的ESI-MS計算值613；實測值636(M+Na+)。
步驟C 將得自步驟B的產(chǎn)物(44.8mg，0.0730mmol)溶于2ml乙醇，并用硼氫化鈉(28mg，0.73mmol)處理。在室溫下將得到的反應(yīng)混合物攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物濃縮，并通過反相HPLC(YMC Pack ProC18，100×20mm ID)純化，得到其TFA鹽形式的產(chǎn)物。通過溶于DCM，加入10滴1N HCl/乙醚，隨后濃縮，將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽，得到29.1mg產(chǎn)物。
對C24H34F3N3O4S的ESI-MS計算值517；實測值518(M+H)。
實施例13 按照與實施例12類似的方法用中間體11作為原料制備實施例13，不同之處在于步驟A中用氯甲酸甲酯代替甲磺酰氯。
對C25H34F3N3O4的ESI-MS計算值497；實測值498(M+H)。
實施例14 步驟A 在6ml DCM和3ml DMF中將中間體3(102mg，0.379mmol)和中間體10(115mg，0.606mmol)與EDC(145mg，0.758mmol)以及1-羥基-7-氮雜苯并三唑(102mg，0.758mmol)混合。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物部分濃縮以除去DCM。將得到的混合物在乙醚和水之間分配。醚層用水再洗滌2次，隨后用鹽水洗滌。HPLC-MS分析表明醚層不含產(chǎn)物，產(chǎn)物存在于水層。因此用DCM將最初的水層萃取6次。隨后將合并的有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過制備型TLC[硅膠，10％的(10％氫氧化銨溶液(28-30％)/甲醇)的DCM溶液]純化，得到143mg純產(chǎn)物。
對C23H34F3N3O2的ESI-MS計算值441；實測值442(M+H)。
步驟B 往得自步驟A的產(chǎn)物(131mg，0.297mmol)的甲苯(10ml)溶液中加入1.93M碳酰氯的甲苯溶液(1.25ml，2.38mmol)。將得到的混合物攪拌回流3.5小時，隨后在室溫下攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物濃縮，并通過反相HPLC(YMC Pack Pro C18，100×20mm ID)純化，得到其TFA鹽形式的產(chǎn)物。通過溶于DCM，加入過量的1N HCl/乙醚，隨后濃縮，將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽，得到94.4mg產(chǎn)物。
對C24H32F3N3O3的ESI-MS計算值467；實測值468(M+H)。
實施例15 步驟A 往中間體11(242mg，0.463mmol)的甲苯(10ml)溶液中加入多聚甲醛(約500mg)，在裝有迪安-斯達(dá)克榻分水器和冷凝器的燒瓶中將得到的混合物攪拌回流2小時。將該反應(yīng)混合物濃縮，殘留物通過MPLC(硅膠，70％乙酸乙酯/己烷)純化，得到66mg所需產(chǎn)物。
對C25H31F6N3O3的ESI-MS計算值535；實測值536(M+H)。
步驟B 往得自步驟A的產(chǎn)物(34.4mg，0.0642mmol)的DCM(2ml)溶液中加入吡啶(13μl，0.16mmol)，隨后加入氯甲酸對硝基苯酯(26mg，0.13mmol)。在室溫下攪拌2小時后，再加入吡啶(5.2μl，0.064mmol)和氯甲酸對硝基苯酯(13mg，0.064mmol)。又過1小時后，再次加入吡啶(13μl，0.16mmol)和氯甲酸對硝基苯酯(26mg，0.13mmol)，將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。隨后往該反應(yīng)混合物中鼓入氨氣1小時，將該燒瓶密閉并將該混合物攪拌3天。用DCM稀釋該反應(yīng)混合物并用1N的HCl溶液、飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾和濃縮。通過制備型TLC(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)純化，得到13mg氨基甲酸酯產(chǎn)物。
對C26H32F6N4O4的ESI-MS計算值578；實測值579(M+H)。
步驟C 往得自步驟B的產(chǎn)物(13mg，0.022mmol)的乙醇(2ml)溶液中加入硼氫化鈉(20mg)，并在室溫下將得到的混合物攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物濃縮，得到的殘留物通過反相HPLC(YMC Pack Pro C18，100×20mm ID)純化，得到其TFA鹽形式的產(chǎn)物。通過溶于DCM，加入過量的1N HCl/乙醚，隨后濃縮，將轉(zhuǎn)化為其鹽酸鹽，得到8.7mg產(chǎn)物。
對C24H33F3N4O3的ESI-MS計算值482；實測值483(M+H)。
實施例16 按照實施例15中描述的類似方法用中間體11作為原料制備實施例16，不同之處在于步驟B中磺酰胺由氯磺酰異氰酸酯和甲酸各10當(dāng)量制備(根據(jù)Timberlake，J.W.，Ray，W.J.，Jr.，Stevens，E.D.，和Klein，C.L.J.Org Chem.(1989)，54，5824-5826中描述的步驟制備)，而不是實施例15中所示的脲。
對C23H33F3N4O4S的ESI-MS計算值518；實測值519(M+H)。
實施例17 按照合成中間體11的類似方法，然后按照實施例12的類似方法，由中間體7和中間體10制備實施例17。最終產(chǎn)物為在含羥基碳上差向異構(gòu)的兩種非對映異構(gòu)體的混合物。實施例12中所示的最后去保護(hù)步驟還同時分別從胺和羥基位置除去了三氟乙?；鸵阴；?acetate)保護(hù)基團(tuán)，無需對該步驟進(jìn)行任何改變。
對C23H32F3N3O5S的ESI-MS計算值519；實測值520(M+H)。
中間體12 步驟A 往5-三氟甲基-2-哌啶醇(pyridinal)(51.0g，307mmol)和乙酸鈉(26.2g，319mmol)的冰醋酸(200ml)溶液中加入溴(16.7ml，325mmol)，在80℃下將得到的混合物加熱2.5小時。將該反應(yīng)冷卻至室溫，隨后減壓蒸發(fā)。殘留物用飽和NaHCO3溶液中和，并用乙酸乙酯(3×200ml)萃取。合并有機(jī)相并經(jīng)MgSO4干燥，過濾并真空蒸發(fā)得到74.45g(98.7％)粗產(chǎn)物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.04(d，J＝2.6Hz，1H)，7.89(m，1H).
步驟B 在氮氣氣氛下，將步驟A中所述的產(chǎn)物(48.8g，202mmol)小批量地加入NaH(8.9g，220mmol)的無水THF(500ml)懸浮液中。該中間體完全加完后，將該反應(yīng)混合物冷卻至-78℃，并通過注射器滴加叔丁基鋰(260ml，444mmol)處理。攪拌5分鐘后，緩慢加入DMF(50.0ml，707mmol)以保持溫度低于-50℃。隨后將得到的混合物攪拌10小時，讓其升至室溫。用2N HCl猝滅該混合物，隨后用乙酸乙酯(1000ml)稀釋。分離有機(jī)層并用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，真空蒸發(fā)。將所需的產(chǎn)物從乙酸乙酯和己烷中沉淀并過濾，得到淺褐色固體(28.55g，73.8％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ10.13(s，1H)，8.21(s，2H).
步驟C 在室溫下將得自步驟B的產(chǎn)物(18.2g，95.0mmol)、甲酸鈉(7.10g，105mmol)、鹽酸羥胺(7.30g，105mmol)和甲酸(150ml)攪拌2小時，隨后回流過夜。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并置于室溫下7天。將反應(yīng)物傾入水中并用乙酸乙酯萃取3次。合并的有機(jī)層經(jīng)水(2次)、飽和NaHCO3和鹽水洗滌，經(jīng)NaSO4干燥，過濾并真空濃縮，得到褐色粉末狀的所需產(chǎn)物(17.84g，89.8％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.37(d，J＝2.7Hz，1H)，8.19(q，J＝0.7Hz，0.3？？/Hz，1H).
步驟D 往三氯氧化磷(13.4ml，144mmol)和喹啉(8.70ml，73.4mmol)的混合物中加入得自步驟C的產(chǎn)物(24.6g，131mmol)，將得到的混合物回流3小時。將反應(yīng)冷卻至100℃，然后緩慢加入水(70ml)。進(jìn)一步將該混合物冷卻至室溫，并仔細(xì)用飽和NaHCO3溶液中和。用乙酸乙酯萃取水層3次并將有機(jī)層合并，經(jīng)MgSO4干燥。過濾并真空蒸發(fā)。通過快速層析純化該粗產(chǎn)物，得到所需化合物(23.5g，87.0％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.88(d，J＝2.0Hz，1H)，8.26(d，J＝2.5Hz，1H).
步驟E 在15ml DMSO中將得自步驟D的產(chǎn)物(2.04g，9.88mmol)與甲磺酰胺(1.03g，10.9mmol)以及碳酸鉀(2.73g，19.8mmol)混合。將得到的混合物在90℃下攪拌4小時，隨后在室溫下攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物濃縮(約1mmHg，浴溫60℃)。用乙醇研磨該粗產(chǎn)物。無需進(jìn)一步純化，可將該產(chǎn)物繼續(xù)用于下面的步驟F。
對C8H6F3N3O2S的ESI-MS計算值265；實測值266(M+H)。
步驟F 往得自步驟E的產(chǎn)物(約9.88mmol)的甲醇(40ml)溶液中加入氫氧化銨溶液(30％，10ml)和Raney2800鎳(在水中的漿狀物，約500mg)。使用帕爾裝置在45psi的氫氣下將得到的混合物攪拌過夜。隨后將該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，先后用乙醇和水洗滌。減壓將濾液濃縮至干，由于HPLC分析表明僅有1個單峰以及由于在用于其層析必需的溶劑體系中的不溶解性，無需進(jìn)一步純化即可使用這樣得到的殘留物(2.29g，兩步86％)。
對C8H10F3N3O2S的ESI-MS計算值269；實測值270(M+H)。
H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.21(s，1H)，7.54(s，1H)，3.74(br s，2H)，3.12(s，3H).
實施例18 步驟A 往冷卻的(0℃)中間體2(159mg，0.452mmol)的DCM(3ml)溶液中加入草酰氯(118μl，1.36mmol)，隨后加入1滴DMF。將該反應(yīng)混合物升至室溫并攪拌1小時。減壓除去溶劑，并將殘留物溶于3ml DCM。將得到的酰氯溶液加入到冷卻的(0℃)中間體12(152mg，0.566mmol)和三乙胺(300μl，2.15mmol)在5ml DCM和1.3ml DMF(加入以溶解胺)中的溶液中。在0℃下5分鐘后，將該反應(yīng)混合物升至室溫并攪拌1小時。加入水并部分濃縮該反應(yīng)混合物以除去DCM。用乙醚將得到的混合物萃取2次。合并的醚層先后用水(2次)和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過MPLC(硅膠，80％乙酸乙酯/己烷)純化，得到198mg目標(biāo)酰胺。
對C24H32F6N4O5S的ESI-MS計算值602；實測值603(M+H)。
步驟B
在15ml甲苯中將得自步驟A的酰胺(116mg，0.193mmol)與多聚甲醛(約300mg)混合，并在裝有迪安-斯達(dá)克榻分水器和冷凝器的燒瓶中攪拌回流0.5小時。通過HPLC-MS對該反應(yīng)混合物的分析表明反應(yīng)未進(jìn)行，因此再加入多聚甲醛(約500mg)和pTsOH·H2O(約5-10mg)并重新回流1.5小時。將該反應(yīng)混合物濃縮，殘留物通過制備型TLC(硅膠，35％乙酸乙酯/己烷)純化，得到90.3mg(76％)環(huán)化產(chǎn)物。
對C25H32F6N4O5S的ESI-MS計算值614；實測值615(M+H)。
步驟C 用硼氫化鈉(55mg，1.5mmol)處理得自步驟B的環(huán)化產(chǎn)物(90mg，0.15mmol)的乙醇(4ml)溶液，并在室溫下將得到的混合物攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物濃縮，將這樣得到的殘留物溶于DCM并先后用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過制備型TLC[硅膠，7.5％的(10％氫氧化銨溶液(28-30％)/甲醇)的DCM溶液]純化，得到54.2mg產(chǎn)物，通過溶于DCM，加入105μl 1N HCl/乙醚，隨后濃縮，轉(zhuǎn)化為其鹽酸鹽。
對C23H33F3N4O4S的ESI-MS計算值518；實測值519(M+H)。
實施例19
按照合成實施例18的所示的類似方法，由中間體7和中間體12為原料制備實施例19。最終產(chǎn)物為在含羥基碳上差向異構(gòu)的兩種非對映異構(gòu)體的混合物。實施例12中所示的最后去保護(hù)步驟同時分別從胺和羥基位置除去了三氟乙酰基和乙?；Ｗo(hù)基團(tuán)，無需對該步驟進(jìn)行任何改變。
對C22H31F3N4O5S的ESI-MS計算值520；實測值521(M+H)。
實施例20 步驟A 在DCM(50ml)中將5-氯水楊醛(1.0g，6.3mmol)二苯基甲胺(1.1ml，6.4mmol)、粉末狀4分子篩(約1g)和三乙酰氧基硼氫化鈉(5.3g，25mmol)混合。在室溫下將得到的混合物攪拌24小時，隨后經(jīng)硅藻土過濾，并用飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮，得到2.0g無色泡沫狀的所需產(chǎn)物(98％)。
對C20H18ClNO的ESI-MS計算值323.11；實測值324(M+H)。
步驟B 在甲醇(50ml)中將得自步驟A的產(chǎn)物(2.0g，6.2mmol)與氫氧化鈀(20％在活性碳上，200mg)和濃鹽酸(0.5ml，6mmol)混合。在氫氣氣氛(約1大氣壓)中將得到的混合物劇烈攪拌3天，隨后濾除催化劑，減壓濃縮濾液。產(chǎn)物通過反相HPLC(C18，20-100％MeCN/H2O)純化，并通過加入2N HCl/乙醚轉(zhuǎn)化為其鹽酸鹽，得到200mg白色固體(21％)。
對C7H8ClNO的ESI-MS計算值157.03；實測值158(M+H)。
步驟C 將中間體(TFA-酸)(300mg，0.86mmol)溶于DCM(10ml)，并冷卻至0℃，隨后用草酰氯(250μl，2.9mmol)和DMF(1滴)處理。在室溫下將該溶液攪拌2小時，隨后減壓濃縮，并在高真空下干燥1小時。將得到的酰氯再溶于DCM(5ml)，并滴加至冷卻的(0℃)得自步驟B的產(chǎn)物(180mg，1.1mmol)的DCM(10ml)和三乙胺(2ml)溶液中。在室溫下將該溶液攪拌1小時，隨后減壓濃縮。將得到的殘留物溶于DCM，用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并減壓濃縮，得到440mg所需產(chǎn)物(99+％)。
對C23H30ClF3N2O4的ESI-MS計算值490.18；實測值491(M+H)。
步驟D 在苯(50ml)中將得自步驟C的產(chǎn)物(440mg，0.89mmol)與多聚甲醛(約1g)和對甲苯磺酸(50mg，0.3mmol)混合。在迪安-斯達(dá)克達(dá)分水器的存在下將得到的混合物加熱回流2.5小時。冷卻至室溫后，用乙醚稀釋反應(yīng)物，并用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并減壓濃縮，得到黃色油狀物，將黃色油狀物溶于乙醇并用硼氫化鈉(380mg，10mol)處理。在室溫下攪拌5小時后，將反應(yīng)物濃縮至干。將得到的殘留物溶于DCM中并用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并減壓濃縮得到粗產(chǎn)物，將粗產(chǎn)物通過制備型TLC(硅膠，0.5％NH4OH/4.5％MeOH/95％DCM)純化。將得到的游離堿溶于DCM，用2N HCl/乙醚處理并濃縮，得到160mg鹽酸鹽形式的所需產(chǎn)物。
對C22H31ClN2O3的ESI-MS計算值406.20；實測值407(M+H)。
中間體13 方法A步驟A 在室溫下將在乙酸乙酯(200ml)中的(1S)-(+)-2-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚-5-烯-3-酮(10.3g，94.4mmol)和10％Pd/C(0.5g)的混合物氫化。24小時后，將該反應(yīng)混合物過濾并蒸發(fā)，殘留10.4g(100％)產(chǎn)物，將該產(chǎn)物溶于250ml甲醇和HCl(12M，6ml)。在室溫下攪拌得到的混合物，直到反應(yīng)完全(72小時)。蒸發(fā)甲醇，隨后在高真空下干燥，得到灰白色固體狀的標(biāo)題化合物。
1H NMR(500MHz，D2O)δ3.70(s，3H)，3.01(m，1H)，2.38(m，1H)，2.16-1.73(m，6H).
步驟B 在室溫下往得自步驟A的中間體(10.2g，56.8mmol)在干燥的二氯甲烷(200ml)中的懸浮液中加入1，1-二苯基甲亞胺(10.2g，56.8mmol)，將得到的混合物攪拌24小時。將該反應(yīng)混合物過濾，蒸發(fā)濾液，殘留黃色油狀物，用乙醚(100ml)研磨該黃色油狀物，過濾并蒸發(fā)。重復(fù)該操作2次，以保證該產(chǎn)物不含氯化銨雜質(zhì)。在真空下將得到的油完全干燥，得到標(biāo)題化合物，無需進(jìn)一步純化。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.5-7.18(m，10H)，3.75(m，1H)，3.7(s，3H)，2.78(m，1H)，2.26-1.71(m，6H).
步驟C 在-78℃下往二異丙基胺鉀(由二異丙胺(7.7g，76mmol)和正丁基鋰(30.4ml，2.5M的己烷溶液，76mmol)制備)的四氫呋喃(120ml)溶液中加入得自步驟B的酯(18.0g，58.6mmol)。將得到的勃艮第葡萄酒色的溶液攪拌20分鐘，隨后用2-碘丙烷(14.9g，88mmol)猝滅。在3小時內(nèi)將該反應(yīng)混合物逐漸升至0℃，并在該溫度下保持3小時。用水猝滅該反應(yīng)并用乙酸乙酯萃取。用水和鹽水洗滌有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鎂干燥并濃縮，得到油狀物。往該粗制席夫堿(20.0g)的四氫呋喃(100ml)溶液中加入HCl(5.0ml，12M)。在室溫下將得到的反應(yīng)混合物攪拌3小時。除去所有的揮發(fā)物后，將該鹽酸鹽溶于二氯甲烷(250ml)，加入碳酸氫鈉的飽和溶液(250ml)和二碳酸二叔丁酯(26.0g，1.4當(dāng)量)。在室溫下將得到的混合物劇烈攪拌過夜。分離有機(jī)層，并用水和鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥并濃縮，得到油狀物。通過快速柱層析(洗脫液己烷/乙酸乙酯19∶1)純化，得到所需產(chǎn)物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)4.79(br，1H)，4.01(m，1H)，3.71(s，3H)，2.18-1.60(m，6H)，1.44(s，9H)，0.87(d，J＝6.9Hz，3H)，0.86(d，J＝6.9Hz，3H).
步驟D 往得自步驟C的酯(4.91g，17.2mmol)的甲醇(100ml)溶液中加入LiOH(3.6g，85mmol)在水(20ml)和THF(10ml)中的溶液。在80℃下將得到混合物加熱直到反應(yīng)完成(18小時)。真空除去甲醇，并將該粗產(chǎn)物溶于水/乙酸乙酯(200ml，1∶4)并冷卻至0℃。將該混合物的酸性調(diào)節(jié)至pH為6。分離乙酸乙酯層，用水和鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥并濃縮，得到油狀物。通過快速柱層析(洗脫液己烷/乙酸乙酯1∶1+2％AcOH)純化，得到(1S，3R)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-異丙基環(huán)戊烷甲酸。
1H NMR(500MHz，CDCl3)11.36(br，1H)，6.49(br，1H)，4.83(m，1H)，3.71(s，3H)，2.30-1.55(m，6H)，1.46(s，9H)，0.94(d，J＝6.9Hz，3H)，0.933(d，J＝6.9Hz，3H).
方法B步驟A 通過經(jīng)典的方法將購得的(1R，4S)-4-氨基環(huán)戊-2-烯-1-甲酸轉(zhuǎn)化為其甲酯鹽酸鹽。
步驟B
往得自步驟A的胺(6.31g，35.5mmol)在丙酮(40ml)和水(20ml)中的懸浮液中分批加入固體NaHCO3(6.6g，78mmol)。5分鐘后，加入二碳酸二叔丁酯(8.5g，39mmol)的丙酮(60ml)溶液，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物。3小時后，在真空下除去丙酮，殘留物在乙醚(500ml)和飽和的NaHCO3溶液(120ml)之間分配。進(jìn)一步用NaHCO3水溶液(1×100ml)和鹽水(1×100ml)洗滌醚層，經(jīng)無水Na2SO4干燥，濃縮并通過快速層析(15％乙酸乙酯/己烷)純化，得到產(chǎn)物。
步驟C 在-78℃下在10分鐘內(nèi)往雙(三甲基甲硅烷基)胺鋰(10.4g，62.1mmol)的四氫呋喃(100ml)溶液中加入得自步驟B的中間體(6.71g，27.8mmol)的四氫呋喃(10ml)溶液。在-78℃下將得到的溶液攪拌30分鐘，隨后一次性加入異丙基碘(3.3ml，33mmol)。將反應(yīng)溫度升至-25℃，并在該溫度下保持過夜。隨后用飽和NH4Cl溶液(250ml)猝滅該反應(yīng)。分離有機(jī)層，用乙醚(3×100ml)進(jìn)一步萃取水相。隨后用鹽水(1×100ml)洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮，通過快速層析(5-10％乙酸乙酯/己烷)純化，得到澄清油狀的產(chǎn)物(順式/反式＝4.3/1)。1H NMR(500MHz，CDCl3)順式異構(gòu)體δ5.79(s，2H)，4.75(m，1H)，3.72(s，3H)，2.28-2.20(m，2H)，2.0(dd，J＝15，4Hz，1H)，1.45(s，9H)，0.85(d，J＝6.6Hz，3H)，0.81(d，J＝7Hz，3H).
步驟D 往得自步驟C的產(chǎn)物(1.6g，5.7mmol)在THF(50ml)、甲醇(50ml)和水(10ml)中的溶液中加入LiOH·H2O(400mg)，將該反應(yīng)加熱回流過夜，直到TLC分析表明該反應(yīng)進(jìn)行完全。在真空下除去有機(jī)溶劑，用乙醚(1次)洗滌水層，隨后用濃鹽酸緩慢酸化直到pH為4。用二氯甲烷萃取該得到的懸浮液3次。合并的有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到為泡沫狀黃色固體的兩種順式/反式異構(gòu)體混合物的產(chǎn)物(1.5g)。在加熱下將該固體溶于乙酸乙酯(2ml)，用己烷(50ml)稀釋，得到澄清溶液。在1小時內(nèi)將該溶液緩慢冷卻至室溫，隨后在冷凍箱(-25℃)中保持過夜。反式異構(gòu)體和某些所需的順式異構(gòu)體結(jié)晶析出。收集母液并濃縮，得到標(biāo)題化合物(僅有順式異構(gòu)體)。1HNMR(500MHz，CDCl3)順式異構(gòu)體δ5.80(m，2H)，4.80(m，1H)，2.40-2.20(m，2H)，2.15-2.0(m，1H)，1.5(m，9H)，1.0-0.8(m，3H).
步驟E 往得自步驟D的產(chǎn)物(1g)的乙醇(30ml)溶液中加入10％的Pd/C(100mg)，在帕爾裝置中在壓力為50lb的氫氣下將得到的混合物攪拌過夜。該混合物經(jīng)硅藻土過濾并真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(1S，3R)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-異丙基環(huán)戊烷甲酸。
1HNMR(500MHz，CDCl3)11.36(br，1H)，6.49(br，1H)，4.83(m，1H)，3.71(s，3H)，2.30-1.55(m，6H)，1.46(s，9H)，0.94(d，J＝6.9Hz，3H)，0.933(d，J＝6.9Hz，3H).
實施例21
步驟A 在氮氣氣氛下往冷卻至0-5℃的6-(三氟甲基)煙酸(7g，37mmol)的THF(90ml)懸浮液中緩慢加入2.0M的BH3-Me2S的THF溶液(36.63ml，73.26mmol)。在室溫下將該反應(yīng)攪拌過周末。加入甲醇以破壞過量的BH3，隨后將該混合物攪拌30分鐘。蒸發(fā)溶劑，將殘留物溶于1％的HCl/MeOH，在50℃下加熱過夜，并在真空下濃縮。將殘留物與2N HCl以及MeOH一起加熱處理7次，在真空下濃縮。用三乙胺(10ml)處理粗產(chǎn)物，并通過硅膠柱層析(50％EA/HX)，得到所需的醇(5.36g，82.6％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.69(s，1H)，7.92(d，J＝8.0Hz，1H)，7.69(d，J＝8.0Hz，1H)，4.84(s，2H)，2.70(bs，1H，OH).
步驟B 往得自步驟A的醇(5.36g，30.26mmol)的DCM(60ml)溶液中加入三乙胺(5.06ml，36.31mmol)和DMAP(12mg)。將該反應(yīng)混合物冷卻至0℃后，往該混合物中緩慢滴加甲磺酰氯。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。真空濃縮該混合物，殘留物通過快速柱層析(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷-70％乙酸乙酯/己烷)純化，得到兩種中間體所需的甲磺酸酯(0.72g)和5-氯甲基-2-三氟甲基吡啶(4.75g)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.75(s，1H)，7.95(d，J＝8.0Hz，1H)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H)，4.67(s，2H).
對C7H5ClF3N的ESI-MS計算值195；實測值196(M+H)。
往溶于DMSO(15ml)的0.72g該甲磺酸酯和4.75g該氯化物的混合物中加入NaCN(1.33g，27mmol)。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜，隨后用DCM(10ml)稀釋。將得到的混合物通過柱層析(硅膠，50％EA/HX)純化，得到所需的腈(3.71g，73.5％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.71(s，1H)，7.95(d，J＝8.0Hz，1H)，7.77(d，J＝8.0Hz，1H)，3.80(s，2H).
步驟C 往得自步驟B的腈(3.67g，19.72mmol)的EtOH(100ml)溶液中加入NH4OH(25ml)和Raney鎳(約500mg)。在帕爾裝置中在50lb的氫氣壓力下將該反應(yīng)混合物攪拌6小時。將溶液通過硅藻土過濾并真空濃縮濾液，得到目標(biāo)胺(3.85g，100％)。對C8H9F3N2的ESI-MS計算值190.07；實測值191(M+H)。
步驟D 往冷卻的(0-5℃)得自步驟C的胺(3.85g，20.25mmol)和吡啶(93.28ml，40.5mmol)在DCM(40ml)中的混合物中緩慢加入三氟乙酸酐(4.29ml，30.4mmol)。隨后在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌3小時。真空濃縮該混合物，殘留物通過柱層析(硅膠，50％EA/HX)純化，得到所需的三氟乙酰胺(3.626g，62.6％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.57(s，1H)，7.75(d，J＝8.0Hz，1H)，7.67(d，J＝8.0Hz，1H)，6.70(br s，1H，NH)，3.68(q，J＝6.8Hz，2H)，3.03(t，J＝6.8Hz，2H).
步驟E 往冷卻的(0-5℃)得自步驟D的三氟乙酰胺(3.61g，12.61mmol)的HOAc(30ml)溶液中緩慢加入H2O2(30％，12.9ml)。將該反應(yīng)混合物在60℃下攪拌2天。加入額外的H2O2以完成反應(yīng)。真空蒸發(fā)HOAc，將殘留物在高真空下存儲過夜。隨后殘留物通過快速柱層析(硅膠，8％MeOH/DCM+0.6％NH4OH)純化，得到吡啶氮氧化物(2.78g，73％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.22(s，1H)，7.67(d，J＝8.2Hz，1H)，7.24(d，J＝8.2Hz，1H)，7.02(br s，1H，NH)，3.68(q，J＝6.8Hz，2H)，2.97(t，J＝6.8Hz，2H).
對C10H8F6N2O2的ESI-MS計算值302.05；實測值303(M+H)。
步驟F 往得自步驟E的吡啶氮氧化物(2.46g，8.14mmol)的CHCl3(40ml)溶液中加入KCN(1.325g)的水(15ml)溶液。將該反應(yīng)混合物攪拌15分鐘后，在0-5℃下緩慢加入苯甲酰氯(1.11ml，9.52mmol)的CHCl3(40ml)溶液。隨后在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。分離有機(jī)相，用DCM萃取水層3次。合并的有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并真空濃縮。殘留物通過柱層析純化(硅膠，35％-45％EA/HX)，得到目標(biāo)腈(2.18g，86％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.98(d，J＝8.2Hz，1H)，7.89(d，J＝8.2Hz，1H)，6.66(br s，1H，NH)，3.77(q，J＝6.8Hz，2H)，3.58(t，J＝6.8Hz，2H).
對C11H7F6N3O的ESI-MS計算值311.05；實測值312(M+H)。
步驟G 在115℃下將得自步驟F的腈(2.18g，7.01mmol)在濃鹽酸(100ml)中的懸浮液加熱攪拌3天。真空蒸發(fā)溶劑，將殘留物在高真空下存儲過夜，得到1.88g氨基酸鹽酸鹽，無需進(jìn)一步純化可用于下一步驟。
往上述的氨基酸鹽酸鹽(1.88g，6.99mmol)在DCM(40ml)中的懸浮液中加入EDC(4.00g，21.0mmol)。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。真空蒸發(fā)溶劑，殘留物通過柱層析(硅膠，15％MeOH/DCM)純化，得到所需內(nèi)酰胺(1.31g，86.6％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.83(d，J＝8.0Hz，1H)，7.78(d，J＝8.0Hz，1H)，7.34(br s，1H，NH)，3.68(td，J1＝6.6Hz，J2＝3.0Hz，2H)，3.58(t，J＝6.8Hz，2H).
步驟H 往冷卻的(0-5℃)得自步驟G的內(nèi)酰胺(1.31g，6.06mmol)的THF(40ml)溶液中緩慢加入BH3-Me2S的THF溶液(2.0M，15.2ml，30.3mmol)。隨后將該反應(yīng)混合物攪拌回流2小時。將得到的混合物冷卻至0℃，用甲醇猝滅，真空濃縮。殘留物用4N HCl/二噁烷處理，并在65℃下加熱4小時，隨后真空濃縮。將該步驟重復(fù)4次，得到白色粉末狀的其鹽酸鹽形式的氮雜四氫異喹啉(1.22g，約100％)。對C9H9F3N2的ESI-MS計算值202.07；實測值203(M+H)。
純化往粗產(chǎn)物(1.22g，6.03mmol)和三乙胺(3.45ml，24.73mmol在DCM(50ml)中的懸浮液中加入Boc2O(3.95g，18.10mmol)。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌2.5小時。蒸發(fā)溶劑，殘留物通過快速柱層析(硅膠，20％EA/HX-40％EA/HX)純化，得到Boc-保護(hù)的氮雜四氫異喹啉(1.04g)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.64(d，J＝8.0Hz，1H)，7.51(d，J＝8.0Hz，1H)，4.76(s，2H)，3.74(t，J＝5.5Hz，2H)，2.95(t，J＝5.5Hz，2H)，1.51(s，9H).
在室溫下在15ml 4N HCl/二噁烷中將Boc基團(tuán)解離1小時。真空蒸發(fā)溶劑，得到純的氮雜四氫異喹啉(750mg，62％)。
步驟I 往燒瓶中加入Boc-氨基酸(中間體13，1.10g，4mmol)、得自步驟H的氮雜四氫異喹啉(1.15g，4mmol)、PyBrOP(1.85g，4mmol)、DMAP(0.29g，2.4mmol)、DIEA(2.77ml，16mmol)和DCM(20ml)。在氮氣氣氛下將得到的混合物攪拌36小時。對全部混合物進(jìn)行硅膠柱層析，洗脫液為20％乙酸乙酯/己烷，得到目標(biāo)酰胺(1.5g，75％)。對C23H32F3N3O3的ESI-MS計算值455.24；實測值356(M+H-100)。將被Boc保護(hù)的中間體用4N HCl/二噁烷處理，得到相應(yīng)的胺。
步驟J 將得自步驟I的胺(65mg，0.166mmol)、四氫-4H-吡喃-4-酮(46μl，0.497mmol)、粉末狀分子篩(4，200mg)和DIEA(52mg，0.4mmol)在DCM(10ml)中的混合物攪拌30分鐘。隨后加入三乙酰氧基硼化鈉(105mg，0.497mmol)。將得到的混合物攪拌4小時，用DCM稀釋，過濾，濾液用飽和Na2CO3水溶液洗滌。水層再用DCM萃取。合并的DCM層經(jīng)Na2SO4干燥并蒸發(fā)。殘留物通過制備型TLC(1000微米)(用10％[aq.NH4OH/MeOH 1/9]/DCM展開)純化，得到游離堿形式的標(biāo)題化合物。用4N HCl/二噁烷處理形成其鹽酸鹽(22.4mg)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.65(d，J＝7.9Hz，1H)，7.54(s，，J＝7.9Hz，1H)，4.87(m，2H)，3.97(m，2H)，3.90(m，2H)，3.40(m，2H)，3.18(m，4H)，2.95(s，2H)，2.71(m，1H)，2.18(m，1H)，2.05(m，1H)，1.70-1.90(m，6H)，0.86(m，6H).
對C23H32F3N3O2的ESI-MS計算值439.24；實測值440(M+H)。
實施例22 步驟A 往冷卻至0℃的煙酸(20.0g，104mmol)在苯(120ml)中的懸浮液中加入亞硫酰氯(38.19ml，523.3mmol)。將該反應(yīng)混合物回流5小時。隨后在真空下蒸發(fā)SO2、HCl、溶劑和過量的亞硫酰氯。將為酰氯的殘留物溶于DCM(150ml)并在冰水浴中冷卻至0℃。往該酰氯溶液中緩慢加入二異丙胺(58.67ml，418.6mmol)。隨后在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑，殘留物通過快速柱層析(25％乙酸乙酯/己烷)純化，得到所需的二異丙基酰胺(19.97g，69.6％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.69(s，1H)，7.85(d，J＝8.0Hz，1H)，7.74(d，J＝8.0Hz，1H)，3.66(br d，2H)，1.38(br d，12H).
對C13H17F3N2O的ESI-MS計算值274.13；實測值275(M+H)。
步驟B 往火焰干燥(flame-dried)的1000ml圓底燒瓶中加入無水乙醚(150ml)。將該溶液冷卻至-78℃，隨后依次加入二異丙胺(24.46ml，174.5mmol)、2.5M正丁基鋰的己烷溶液(69.8ml，175mmol)和得自步驟A的酰胺(31.8g，116mmol)的無水乙醚(150ml)溶液。在-78℃下將該反應(yīng)混合物攪拌2.5小時，隨后緩慢加入DMF(27.03ml，290.75mmol)。將該反應(yīng)繼續(xù)攪拌2小時后，將該混合物升至室溫并攪拌1小時。隨后用10％的檸檬酸猝滅該混合物，用乙醚萃取3次。合并的醚層用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，濃縮。粗產(chǎn)物通過快速柱層析(30/70乙酸乙酯/己烷)純化，得到需要的醛(34.69g，98.7％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.17(s，1H)，8.75(s，1H)，8.12(s，1H)，3.6(m，2H)，1.62(d，J＝7.8Hz，2H)，1.19(d，J＝7.8Hz，2H).
步驟C 往得自步驟B的醛(34.69g，114.8mmol)的乙醇(400ml)溶液中分批加入硼氫化鈉(4.34g，115mmol)。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌2小時。在0℃下通過加入2N HCl破壞過量的硼氫化鈉，蒸發(fā)乙醇溶劑，得到目標(biāo)醇，該目標(biāo)醇無需進(jìn)一步純化用于下一步驟。對C14H19F3N2O2的ESI-MS計算值304.14；實測值305(M+H)。
步驟D 在110℃下將得自步驟C的醇(34.94g，114.8mmol)在6NHCl(500ml)中的懸浮液回流2小時。真空濃縮該反應(yīng)混合物，殘留物在水和DCM之間分配。用三乙胺將pH值從2-3調(diào)節(jié)為7。水部分用DCM萃取2次，合并的有機(jī)部分用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮。殘留物通過快速柱層析(硅膠，30％EA/HX)純化，得到所需的內(nèi)酯(15.97g，68.5％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.29(s，1H)，7.92(s，1H)，5.48(s，2H).
步驟E 將得自步驟D的內(nèi)酯(15.97g，78.62mmol)和鄰苯二甲酰亞胺鉀(15.72g，84.91mmol)在DMF中的混合物加熱回流5小時。用冰水猝滅該反應(yīng)，并用6N HCl將pH由10調(diào)節(jié)至約4。過濾分離生成的白色固體，得到目標(biāo)羧酸(24.6g，83.7％)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ9.20(s，1H)，7.93(m，2H)，7.86(m，2H)，7.55(s，1H)，5.48(s，2H).
對C16H9F3N2O4的ESI-MS計算值350.05；實測值351(M+H)。
步驟F 往新的2000ml燒杯中加入40％(重量/體積)氫氧化鉀(211ml)和乙醚(650ml)。將該混合物冷卻至0℃后，在手工攪動下分批往該兩相溶液中加入亞硝基甲脲(46.39g，450mmol)，直到所有的固體溶解。將形成的溶液在-78℃下冷凍，水層作為固體從乙醚部分中分離。將形成的在乙醚中的CH2N2與KOH顆粒一起置于容器中，并在冷凍箱中儲存過夜。
往冷卻至0℃的得自步驟E的酸(10.51g，30.0mmol)在DCM中的懸浮液中依次緩慢加入三乙胺(5.44ml，39.0mmol)和氯甲酸異丁酯(5.06ml，39.0mmol)。在0℃下將該反應(yīng)混合物攪拌2小時，用飽和NaHCO3溶液、冰水和冷的冰鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮，得到混合酸酐。將形成的酸酐溶于乙醚中并冷卻至0℃。往冷卻至0℃的該混合酸酐的溶液中加入上面制備的CH2N2。在0℃下將該反應(yīng)混合物攪拌過夜，并緩慢升至室溫讓CH2N2蒸發(fā)。隨后蒸發(fā)溶劑，殘留物用乙酸乙酯/己烷氚化(tritiated)，得到白色固體狀的重氮酮(8.12g，72.4％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，7.92(m，2H)，7.81(m，2H)，7.52(s，1H)，5.94(s，1H).5.23(s，2H)，對C17H9F3N4O3的ESI-MS計算值374.06；實測值375(M+H)。
步驟G 往10％的AgNO3(6.0g，35.3mmol)的水(60ml)溶液中緩慢加入10％的NaOH。過濾形成的Ag2O，用水洗滌3次并真空干燥。將形成的Ag2O懸浮于水(500ml)中，與Na2CO3(4.00g，37.7mmol)和Na2S2O3(10.42g，65.90mmol)混合。在55℃下將得自步驟F的重氮酮中間體(8.00g，21.37mmol)在二噁烷(200ml)中的懸浮液分批加入上面的混合物中，在55℃下將該反應(yīng)攪拌2小時。濾除固體后，用6N HCl將pH調(diào)節(jié)為4。用乙酸乙酯萃取該溶液，得到目標(biāo)化合物(6.33g，80％)。對C17H13F3N2O5的ESI-MS計算值382.08；實測值383(M+H)。
步驟H 將得自步驟G的中間體(3.31g，8.66mmol)和12N HCl(50ml)的混合物加熱回流3天。蒸發(fā)溶劑，得到所需的氨基酸，無需進(jìn)一步純化可用于下一步驟。
步驟I
在室溫下將得自步驟H的氨基酸與EDC(9.50g，49.8mmol)在DCM(200ml)中混合物攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑，殘留物通過柱層析(硅膠，10％MeOH/DCM)純化，得到所需內(nèi)酰胺(985mg，27.4％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.60(s，1H)，7.55(s，1H)，6.67(br s，1H)，4.65(s，2H)，3.72(s，2H).
對C9H7F3N2O的ESI-MS計算值216.05；實測值217(M+H)。
步驟J 往冷卻的(0-5℃)得自步驟I的內(nèi)酰胺(980mg，4.53mmol)的THF(40ml)溶液中緩慢加入BH3-Me2S的THF溶液(2.0M，11.34ml，22.67mmol)。隨后將該反應(yīng)混合物攪拌回流3小時。將得到的混合物冷卻至0℃，用甲醇猝滅，真空濃縮。殘留物用4N HCl/二噁烷處理，在65℃下加熱4小時，隨后真空濃縮。將該步驟重復(fù)3次，得到白色粉末狀的鹽酸鹽形式的所需氮雜四氫異喹啉(1.33g，約100％)。對C9H9F3N2的ESI-MS計算值202.07；實測值203(M+H)。
純化往上述粗制的氮雜四氫異喹啉(1.33g)和三乙胺(3.90ml，27.86mmol)在DCM中的懸浮液中加入Boc2O(3.65g，16.7mmol)。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌3小時。蒸發(fā)溶劑，殘留物通過快速柱層析(硅膠，20％EA/HX-40％EA/HX)純化，得到Boc保護(hù)的氮雜四氫異喹啉(696mg)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.51(s，1H)，7.44(s，1H)，4.65(s，2H)，3.72(t，J＝5.4Hz，2H)，2.92(t，J＝5.4Hz，2H)，1.53(s，9H).
在室溫下在25ml 4N HCl/二噁烷中將Boc基團(tuán)解離1.5小時。真空蒸發(fā)溶劑，得到純的氮雜四氫異喹啉(434mg，32.6％)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.62(s，1H)，7.74(s，1H)，4.50(s，2H)，3.59(t，J＝6.2Hz，2H)，3.23(t，J＝6.2Hz，2H).
對C9H9F3N2的ESI-MS計算值202.07；實測值203(M+H)。
步驟K 往燒瓶中加入Boc-氨基酸(中間體13，493mg，1.82mmol)、得自步驟J的氮雜四氫異喹啉(434mg，1.82mmol)、PyBrOP(847.6mg，1.818mmol)、DMAP(133mg，1.09mmol)、DIEA(1.267ml，7.27mmol)和DCM。在氮氣氣氛下將得到的混合物攪拌48小時，用DCM稀釋，用飽和NaHCO3洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮。殘留物通過制備型TLC(硅膠，1000微米，38％乙酸乙酯/己烷)純化，得到Boc保護(hù)的氨基酰胺(64.5mg，7.8％)。對C23H32F3N3O3的ESI-MS計算值455.24；實測值356(M+H-100)和400(M+H-56)。在室溫下用4N HCl/二噁烷(3ml)將Boc保護(hù)的中間體處理3小時，得到所需氨基酰胺(55.8mg)。
步驟L 將得自步驟L的氨基酰胺(55.6mg，0.142mmol)、四氫-4H-吡喃-4-酮(40μl，0.43mmol)、分子篩(4，150mg)、DIEA(49.5μl，0.4mmol)在DCM(5ml)中的混合物攪拌30分鐘。隨后加入三乙酰氧基硼氫化鈉(90mg，0.43mmol)。將得到的混合物攪拌過周末，用DCM稀釋，過濾，并用飽和Na2CO3水溶液洗滌。分離各層，用DCM萃取水層。合并的DCM層經(jīng)Na2SO4干燥并濃縮。殘留物通過制備型TLC(1000微米，用8％[aq.NH4OH/MeOH 1/9]/DCM展開)純化，得到游離堿形式的標(biāo)題化合物。通過用4N HCl/二噁烷處理，形成其鹽酸鹽(43.5mg)。對C23H32F3N3O2的ESI-MS計算值439.24；實測值440(M+H)。
實施例23 步驟A 往按照實施例22的合成的步驟D制備的所述內(nèi)酯(5.80g，28.6mmol)的乙醇(60ml)溶液中加入硼氫化鈉(2.38g，62.8mmol)。將該反應(yīng)攪拌4小時。用甲醇/水(1∶1)猝滅該反應(yīng)，用4N HCl/二噁烷(2次)破壞過量的硼氫化鈉，真空蒸發(fā)溶劑。用三乙胺中和殘留物并通過柱層析(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷-60％乙酸乙酯/己烷)純化，得到所需二醇(5.46g，92.3％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.66(s，1H)，7.80(s，1H)，4.90(s，2H)，4.85(s，2H).
對C8H8F3NO2的ESI-MS計算值207.05；實測值208(M+H)。
步驟B 或 往得自步驟A的二醇(5.46g，26.4mmol)的DCM(150ml)溶液中加入三乙胺(13.23ml，94.9mmol)和DMAP(20mg)。冷卻至0℃后，用甲磺酰氯(6.73ml，87.0mmol)緩慢處理該反應(yīng)混合物。隨后在0℃下將該反應(yīng)混合物攪拌1.5小時。蒸發(fā)溶劑，殘留物通過快速柱層析(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷-60％乙酸乙酯/己烷)純化，得到氯甲磺酸酯(chloromesylate)(5.34mg，82.7％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.72(s，1H)，7.81(s，1H)，5.45(s，2H)，4.70(s，2H)，3.15(s，3H).
對C9H9ClF3NO3S的ESI-MS計算值302.99；實測值304(M+H)。
步驟C 往聯(lián)亞氨基二甲酸二叔丁酯(Di-ter-butylhydrazodiformate)(4.07g，17.5mmol)的THF(40ml)溶液中加入叔丁醇鉀(3.93g，35.0mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時后，緩慢加入得自步驟B的氯甲磺酸酯(5.32g，17.5mmol)的THF(40ml)溶液。將該反應(yīng)混合物連續(xù)攪拌1小時。真空蒸發(fā)溶劑，殘留物通過柱層析(硅膠，25％乙酸乙酯/己烷-30％乙酸乙酯/己烷)純化，得到7-三氟甲基-1，4-二氫吡啶并[3，4-d]噠嗪-2，3-二甲酸二叔丁酯(4.53g，83.9％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.55(s，1H)，7.50(s，1H)，5.17(m，2H)，4.20(m，2H)，1.50(s，18H).
對C18H24F3N3O4的ESI-MS計算值403.17；實測值404(M+H)。
步驟D
將得自步驟C的產(chǎn)物(4.53g，11.24mmol)的4N HCl/二噁烷(55ml，225mmol)攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑，得到7-三氟甲基-1，2，3，4-四氫吡啶并[3，4-d]噠嗪鹽酸鹽(2.98g，100％)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.63(s，1H)，7.78(s，1H)，4.80(s，2H)，4.48(s，2H).
對C8H8F3N3的ESI-MS計算值203.07；實測值204(M+H)。
步驟E 往中間體2(250mg，0.712mmol)的DCM(100ml)溶液中加入2M草酰氯在DCM(0.427μl，0.854mmol)和DMF(約50μl)中的溶液。將該反應(yīng)混合物攪拌4小時并濃縮。將殘留物置于高真空中2小時，并溶于DCM(10ml)中。在0℃下將形成的酰氯加入得自步驟D的產(chǎn)物(267mg，0.854mmol)和三乙胺(456μl，3.28mmol)在DCM(10ml)中的溶液中。該反應(yīng)混合物攪拌16小時并濃縮。殘留物首先通過快速柱層析(硅膠，8％[aq.NH4OH/MeOH 1/9]/DCM)純化，隨后通過制備型TLC(100微米)(用5％MeOH/DCM展開)，得到7-三氟甲基-1，2，3，4-四氫吡啶并[3，4-d]噠嗪酰胺(39.5mg，10.3％)和另一結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)體(42.3mg，11.1％)。對C24H30F6N4O3的LC-MS計算值536.22；實測值537(M+H)。
步驟F 往7-三氟甲基-1，2，3，4-四氫吡啶并[3，4-d]噠嗪酰胺(39.5mg，0.0736mmol)的乙醇(5ml)溶液中加入硼氫化鈉(26mg，0.687mmol)。將該反應(yīng)攪拌過夜。用甲醇猝滅該反應(yīng)，用4N HCl/二噁烷破壞過量的硼氫化鈉。真空蒸發(fā)溶劑，殘留物通過制備型TLC(100微米)(用10％[aq.NH4OH/MeOH 1/9]/DCM展開)純化，得到游離堿形式的標(biāo)題化合物。用4N HCl/二噁烷處理生成其鹽酸鹽(30.2mg)。對C22H31F3N4O2的LC-MS計算值440.24；實測值441(M+H)。
實施例24 步驟A 通入氮氣鼓泡10分鐘后，往2-氯-5-三氟甲基吡啶(100g，551mmol)和氰化鋅(97g，826mmol)在DMF(200ml)中的混合物中加入四(三苯基膦)合鈀(0)(10g，8.65mmol)。將該反應(yīng)混合物在80℃下攪拌過夜，用乙酸乙酯稀釋，通過硅藻土過濾，在乙酸乙酯和水之間分配。水層用乙酸乙酯萃取2次，合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮。殘留物通過快速柱層析(硅膠，5％乙酸乙酯/己烷)純化，得到目標(biāo)腈(22.7g，23.9％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.01(s，1H)，8.14(d，J＝8Hz，1H)，7.88(d，J＝8Hz，1H).
步驟B 在110℃下將得自步驟A的腈(20.5g，119.1mmol)和濃鹽酸(190ml)的懸浮液回流過夜。在真空下蒸發(fā)水和過量的HCl。將殘留物懸浮在水(60ml)中，用DCM萃取該懸浮液4次。將合并的DCM萃取物經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮，得到所需的羧酸(25.07g，＞100％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.97(br s，1H)，9.03(s，1H)，8.42(d，J＝8Hz，1H)，8.36(d，J＝8Hz，1H).
對C7H4F3NO2的LC-MS計算值191.02；實測值192(M+H)。
步驟C 按照與實施例22中步驟A中詳細(xì)描述的相同方法由得自步驟B的酸制備標(biāo)題二異丙基酰胺。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.83(s，1H)，8.00(d，J＝8.2Hz，1H)，7.58(d，J＝8.2Hz，1H)，3.65(m，2H)，1.57(s，6H)，1.20(s，6H).
對C13H17F3N2O的LC-MS計算值274.13；實測值275(M+H)。
步驟D 按照與實施例22(步驟B、C和D)中詳細(xì)描述的相同方法由得自步驟C的二異丙基酰胺制備標(biāo)題內(nèi)酯。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.20(s，1H)，8.21(s，1H)，5.50(s，2H).
對C8H4F3NO2的LC-MS計算值203.02；實測值204(M+H)。
步驟E 按照與實施例23(步驟A、B、C和D)中詳細(xì)描述的相同方法由得自步驟D的內(nèi)酯制備3-三氟甲基-5，6，7，8-四氫吡啶并[2，3-d]噠嗪。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.86(s，1H)，8.14(s，1H)，4.49(s，2H)，4.45(s，2H).
步驟F 按照與實施例23(步驟E和F)中詳細(xì)描述的相同方法由3-三氟甲基-5，6，7，8-四氫吡啶并[2，3-d]噠嗪制備實施例24。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.71(s，1H)，7.72(s，1H)，4.86(m，2H)，4.20(m，2H)，3.97(m，3H)，3.40(m，2H)，3.18(m，1H)，2.77(m，1H)，2.58(br s，1H)，2.46(m，1H)，2.25(m，1H)，1.92-1.78(m，5H)，1.61(m，1H)，1.41(m，2H)，1.27(m，1H)，0.92-0.82(m，6H).
對C22H31F3N4O2的LC-MS計算值440.24；實測值441(M+H)。
實施例25 步驟A 往2-氯-5-三氟甲基吡啶(66g，360mmol)的無水DMF(100ml)溶液中加入2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(0.44g，2mmol)、三丁基乙烯基錫(115g，0.36mol)和二氯·二(三苯基膦)合鈀(4.0g)。將反應(yīng)容器抽真空，并用氮氣吹掃3次，隨后在85℃下將該反應(yīng)混合物加熱過夜。LC-MS分析表明轉(zhuǎn)化不完全。再加入二氯·二(三苯基膦)合鈀(4.0g)。將混合物再次加熱過夜，冷卻至室溫，頃入冰水中，并用乙醚萃取3次。合并的醚層用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)。殘留物通過FC(10％乙酸乙酯/己烷)純化，得到油狀的所需產(chǎn)物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.80(s，1H)，7.87(d，J＝5.9Hz，1H)，7.42(d，J＝8.2Hz，1H)，6.85(dd，J＝6.6Hz，1H)，6.32(d，J＝17.2Hz，1H)，5.60(d，J＝10.8Hz，1H).
步驟B 在85℃下將2-乙烯基-5-三氟甲基吡啶(步驟A，實施例25)(10.2g，60mmol)和聯(lián)亞氨基二甲酸二叔丁酯(9.2g，40mmol)在苯(50ml)中的混合物加熱4天。除去苯，殘留物通過FC(10％乙酸乙酯/己烷)純化，得到相應(yīng)的一元加成物(LC-MS404)和二元加成物(LC-MS634)的混合物。進(jìn)一步通過MPLC(10％乙酸乙酯/己烷)純化，得到所需的環(huán)加成產(chǎn)物(0.5g，洗脫較快)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.56(s，1H)，8.38(br s，1H)，4.58(m，1H)，3.30(m，2H)，3.00(m，1H)，1.56(s，9H)，1.47(s，9H).
步驟C 將雙-Boc環(huán)狀肼(步驟B，實施例25)(480mg，1.2mmol)與5ml 4NHCl/二噁烷混合12小時，蒸發(fā)并真空干燥，得到黃色固體(280mg)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)8.65(d，J＝1.0Hz，1H)，7.82(d，J＝1.5Hz，1H)，3.82(t，J＝6.7Hz，2H)，3.41(t，J＝6.4Hz，2H).
對C8H8F3N3的LC-MS計算值203；實測值204(M+H)。
步驟D 往攪拌的原料酸(中間體2，526mg，1.5mmol)的二氯甲烷(4ml溶液中加入草酰氯溶液(2N，10ml，2.0mmol)和DMF(100μl)。在氮氣氣氛下將該混合物攪拌1小時，真空除去溶劑和過量的草酰氯。將殘留物溶于新的二氯甲烷(5ml)中，并加入到環(huán)狀肼(步驟C，實施例25)(280mg，0.91mmol)和DIEA(0.9ml，5mmol)在二氯甲烷(10ml)中的混合物中。將該混合物攪拌1小時，用硅膠柱層析，洗脫液為10％[aq.NH4OH/MeOH 1/9]/二氯甲烷。得到褐色固體狀的標(biāo)題化合物(802mg，＞100％)，該化合物被原料酸污染(通過LC-MS分析得知)。該物質(zhì)無需進(jìn)一步分離用于下一步驟。對C24H30F6N4O3的LC-MS計算值536；實測值537(M+H)。
步驟E 將粗制的偶合產(chǎn)物(步驟D，實施例25)(約800mg)溶于40ml乙醇并用硼氫化鈉(370mg，10mmol)處理。不再有氣泡生成后，LC-MS分析表明轉(zhuǎn)化率約為50％。再加入硼氫化鈉(200mg)。將該混合物攪拌6小時，用甲醇和4N HCl/二噁烷猝滅。除去溶劑，將殘留物通過一段短的硅膠柱(洗脫液為10％[aq.NH4OH/MeOH1/9]/DCM)。進(jìn)一步通過制備型TLC純化，得到兩種組分。發(fā)現(xiàn)洗脫較快的異構(gòu)體為原料TFA酰胺(步驟D，實施例25，110mg)。洗脫較慢的異構(gòu)體為所需產(chǎn)物(182mg)。對C22H31F3N4O2的LC-MS計算值440；實測值441(M+H)。
實施例26 步驟A 將3，4-二甲基三氟甲苯(3.48g，20mmol)溶于四氯化碳，加入N-溴琥珀酰亞胺(7.7g，43mmol，2.2當(dāng)量)和AlBN(200mg)。將該溶液回流4小時，冷卻至冰溫度(ice temperature)。加入己烷，濾除琥珀酰亞胺。隨后將濾液濃縮至干，并通過快速層析，洗脫液為5-10％乙酸乙酯的己烷溶液，得到2.2g產(chǎn)物和一些一溴化產(chǎn)物。
NMR(500MHz，CDCl3)δ7.65(broad s，1H)；7.63(d，J＝8，1H)；7.57(d，J＝8，1H)；4.68(s，4H)；MS(ES)m/z400.3[MH+].
步驟B 將聯(lián)亞氨基二甲酸二叔丁酯(1.53g，6.6mmol)溶于丁醇(40ml)中，加入叔丁醇鉀(1.48g，13.2mmol)。將該混合物攪拌1小時，加入3，4-雙(溴甲基)三氟甲苯(2.2g，6.6mmol)，隨后將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。濾除KBr沉淀，并將濾液濃縮至干。濾除形成的晶體(600mg)并用己烷洗滌。濃縮濾液，殘留物通過層析(5-10％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到600mg產(chǎn)物。
步驟C 將得自步驟B的二叔丁氧基羰基化合物(500mg，1.24mmol)溶于THF(1ml)，加入4N HCl/二噁烷(20ml)，將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。加入乙醚，濾除沉淀，得到300mg 6-三氟甲基-1，2，3，4-四氫酞嗪。
NMR(500MHz，CD3OD)δ7.63，(d，J＝8，1H)；7.61(s，1H)；7.45(d，J＝8，1H)；4.41(s，4H)；3.54(m，1H)；3.27(m，4H)；2.93(m，1H)；2.61(m，2H)；1.62(m，2H)；1.30(m，14H)；0.90(t，J＝6.7，3H).
MS(ES)m/z203.1[MH+].
步驟D 將叔丁氧基羰基氨基環(huán)戊烷甲酸，中間體13(165mg，0.6mmol)和得自步驟C的6-三氟甲基-1，2，3，4-四氫酞嗪(121mg，6mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，加入2-氯-1-甲基碘化吡啶鎓(230mg，0.9mmol)和三乙胺(250μl，185mg，1.5mmol)。將該混合物攪拌過夜，并用鹽水洗滌。干燥二氯甲烷層并蒸發(fā)。層析分離得到兩種所需的同分異構(gòu)的酰胺。
步驟E 按照上面的實施例22步驟K-L中描述的相同方法制備最后的類似物。
實施例27 步驟A 在室溫下將2-羥基-6-三氟甲基吡啶(5.00g，30.66mmol)和NBS(11.46g，64.38mmol)在DMF(20ml)中的混合物攪拌過夜。用乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)混合物，用水(2次)和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮。殘留物通過快速柱層析(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)純化，得到標(biāo)題二溴吡啶酮(10.05g，100％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.15(s，1H).
對C6H2Br2F3NO的LC-MS計算值318.85；實測值322(M+H+2)。
步驟B 往得自步驟A的二溴吡啶酮(10g，3116mmol)和亞硝酸銀(5.73g，20.77mmol)在苯(40ml)中的懸浮液中加入碘甲烷(2.33ml，37.39ml)。在50℃、氮氣氣氛下在暗處將該反應(yīng)混合物攪拌24小時。用苯稀釋該反應(yīng)混合物，過濾。濾液用5％的NaHCO3和水(2次)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮。殘留物通過快速柱層析(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)純化，得到3，5-二溴-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶(6.71g，64.3％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.07(s，1H)，4.02(s，3H).
步驟C 往火焰干燥的100ml圓底燒瓶中加入無水THF(15ml)。將該溶液冷卻至-78℃，隨后依次加入二異丙胺(460μl，3.28mmol)、2.5M正丁基鋰的己烷溶液(1.31ml，3.28mmol)和3，5-二溴-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶(1.00g，2.99mmol)的無水THF(10ml)溶液。在-78℃下將該反應(yīng)混合物攪拌10分鐘，隨后緩慢加入甲酸甲酯(276μl，4.49mmol)。將反應(yīng)繼續(xù)攪拌2小時后，將該混合物升至室溫并攪拌30分鐘。隨后用飽和氯化銨溶液猝滅該混合物，用乙酸乙酯萃取，用水和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥并濃縮。殘留物通過快速柱層析(硅膠，15％乙酸乙酯/己烷)純化，得到3，5-二溴-2-甲氧基-6-(三氟甲基)異煙堿醛(isonicotinaldehyde)(985mg，90.5％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.10(s，1H)，4.11(s，3H).
步驟D 往3，5-二溴-2-甲氧基-6-(三氟甲基)異煙堿醛(980mg，2.7mmol)的乙醇(10ml)溶液中加入硼氫化鈉(102mg，2.7mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌20分鐘，濃縮，殘留物通過快速柱層析(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)純化，得到[3，5-二溴-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基]甲醇(717mg，72.8％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ5.10(s，2H)，4.05(s，3H)，2.32(br s，1H).
步驟E 往[3，5-二溴-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基]甲醇(880mg，2.41mmol)的THF(3ml)溶液中加入60％的氫化鈉(107mg，2.65mmol)。在反應(yīng)不再產(chǎn)生氣泡后，在室溫下將反應(yīng)攪拌30分鐘。加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(434mg，2.89mmol)的溶液，隨后將該反應(yīng)攪拌1小時。蒸發(fā)溶劑，殘留物通過快速柱層析(硅膠，20％乙酸乙酯/己烷)純化，得到所需的TBS醚(113g，97％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ5.03(s，2H)，4.05(s，3H)，0.95(s，9H)，0.19(s，6H).
對C14H20Br2F3NO2Si的LC-MS計算值476.96；實測值480(M+H+2)。
步驟F 往冷卻至-78℃的得自步驟E的TBS醚(2.68g，3.41mmol)的THF(50ml)溶液中加入2.0M苯基鋰的環(huán)己烷溶液(1.705ml，3.41mmol)。將該反應(yīng)攪拌5分鐘后，加入10％的檸檬酸的THF溶液。用乙醚稀釋該混合物，用水和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮。殘留物通過快速柱層析(硅膠，10％-15％乙酸乙酯/己烷)純化，得到3-溴-4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶(2.52g，100％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.52(s，1H)，4.74(s，2H)，4.08(s，3H)，0.99(s，9H)，0.17(s，6H).
對C14H21BrF3NO2Si的LC-MS計算值399.05；實測值400和402(M+H和M+H+2)。
步驟G 用氮氣將3-溴-4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶(2.51g，6.27mmol)、烯丙基三丁基錫(2.92ml，9.41mmol)、四(三苯基膦)合鈀(0)(750mg，0.627mmol)和甲苯(15ml)的混合物吹掃數(shù)次。將該反應(yīng)混合物攪拌回流過夜。過濾并真空濃縮。殘留物通過柱層析(硅膠，100％己烷-5％乙酸乙酯/己烷)純化，得到3-烯丙基-4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶(2.62g，100％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.55(s，1H)，5.85(m，1H)，4.93-5.11(m，2H)，4.74(s，2H)，4.04(s，3H)，3.37(d，J＝5Hz，2H)，0.99(s，9H)，0.17(s，6H).
步驟H 在室溫下將3-烯丙基-4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶(2.62g，7.25mmol)、N-甲基嗎啉氮氧化物(849mg，7.25mmol)、四氧化鋨(4％重量的水溶液，10ml，400mg)在丙酮/水(4∶1)(100ml)中的混合物攪拌過夜。用亞硫酸氫鈉(3.50g，36mmol)猝滅反應(yīng)。蒸發(fā)丙酮后，用水稀釋該混合物，用DCM萃取。有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮。將殘留物與高碘酸鈉(1.86g，8.7mmol)在MeOH/水(1∶1)(60ml)中攪拌30分鐘。過濾并濃縮。殘留物在乙酸乙酯與水之間分配，用乙酸乙酯萃取水層。合并的有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并真空濃縮。殘留物通過柱層析(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)純化，得到[4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙醛(1.61g，61％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.68(t，J＝1.5Hz，1H)，7.46(s，1H)，4.67(s，2H)，4.01(s，3H)，3.76(d，J＝5Hz，2H)，0.96(s，9H)，0.13(s，6H).
步驟I 將[4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙醛(1.55g，4.26mmol)、氨基二苯基甲烷(1.11ml，6.40mmol)和粉末狀分子篩(4，2.80g)在DCM(20ml)中的混合物攪拌30分鐘。隨后加入三乙酰氧基硼氫化鈉(132mg，0.625mmol)。將得到的混合物攪拌過夜，用DCM稀釋，過濾并用飽和Na2CO3水溶液洗滌。分離各層，用DCM萃取該水溶液。合并的DCM層經(jīng)Na2SO4干燥并蒸發(fā)。殘留物通過柱層析(硅膠，100％DCM)純化，得到N-二苯甲基-2-[4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙胺(1.42g，62.8％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.48(s，1H)，7.18-7.38(m，10H)，4.84(s，1H)，4.78(s，2H)，3.81(s，3H)，2.77(m，4H)，1.62(br s，1H)，0.97(s，9H)，0.12(s，6H).
對C29H37F3N2O2Si的LC-MS計算值530.26；實測值531(M+H)。
步驟J 往N-二苯甲基-2-[4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-2-甲氧基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙胺(1.39g，2.62mmol)和中間體13(712mg，2.62mmol)在乙醇(100ml)中的混合物中加入Pd/C。將該反應(yīng)混合物置于帕爾裝置，并在壓力為40lb的氫氣下攪拌過夜。反應(yīng)物通過硅藻土過濾并真空濃縮。將殘留物與在DCM(30ml)中的EDC(1.51g，7.86mmol)、中間體13(100mg，0.37mmol)、DMAP(40mg)和DIEA(913μl，5.24mmol)混合。將該混合物攪拌過夜，用DCM稀釋，用水和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并真空濃縮。殘留物通過柱層析(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)純化，得到目標(biāo)酰胺(598mg，37％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.50(s，1H)，5.98(br s，1H)，4.73(s，2H)，4.03(m，4H)，3.46(q，2H)，2.85(t，J＝7Hz，2H)，1.75-1.95(m，4H)，1.55(m，2H)，1.44(m，11H)，0.96(s，9H)，0.82(m，6H)，0.13(s，6H).
步驟K 往得自步驟J的酰胺(595mg，0.963mmol)的THF(10ml)溶液中加入四丁基氟化銨(1.06ml，1.059mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌15分鐘并真空濃縮。殘留物通過快速柱層析(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)純化，得到去保護(hù)的醇(427mg，88％)。
步驟L 往得自步驟K的醇(100mg，0.199mmol)和三乙胺(166ml，1.192mmol)的DMSO(1ml)溶液中加入三氧化硫吡啶絡(luò)合物(127mg，0.795mmol)的DMSO(3ml)溶液。將該反應(yīng)混合物攪拌20分鐘，用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮。隨后將殘留物與三乙基硅烷(318μl，1.99mmol)的DCM(5ml)溶液混合，冷卻至-78℃，加入三氟化硼-乙醚合物(50μl，0.398mmol)。在-78℃下將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，隨后在室溫下攪拌20分鐘，隨后用Na2CO3猝滅，濃縮。殘留物通過制備型TLC(1000微米)(用30％乙酸乙酯/己烷展開)純化，得到(1R，3S)-3-異丙基-3-{[5-甲氧基-7-三氟甲基-3，4-二氫-2，6-萘啶-2(1H)-基]羰基}環(huán)戊基氨基甲酸叔丁酯(51.5mg，53.4％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.05(s，1H)，4.66-4.90(m，3H)，4.02(s，3H)，3.80(m，2H)，3.77(m，1H)，2.75(m，2H)，2.04-2.30(m，4H)，1.80(m，2H)，1.60(m，1H)，1.43(s，9H)，0.88(m，6H).
對C24H34F3N3O4的LC-MS計算值485.25；實測值386(M+H-100)。在室溫下用4N HCl/二噁烷(0.5ml)處理Boc保護(hù)的中間體過夜，得到(1R，3S)-3-異丙基-3-{[5-甲氧基-7-三氟甲基-3，4-二氫-2，6-萘啶-2(1H)-基]羰基}環(huán)戊胺(41.5mg)。
步驟M
按照實施例22的步驟L中詳細(xì)描述的方法由(1R，3S)-3-異丙基-3-{[5-甲氧基-7-三氟甲基-3，4-二氫-2，6-萘啶-2(1H)-基]羰基}環(huán)戊胺制備實施例27。
對C24H34F3N3O3的LC-MS計算值469.26；實測值470(M+H)。
實施例28 往實施例7的產(chǎn)物(25.4mg，0.0468mmol)、碘化鈉(7.0mg，0.047mmol)的乙腈(2ml)溶液中緩慢加入三甲基甲硅烷基氯(5.1mg，0.047mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，濃縮，殘留物通過制備型TLC(1000微米)(用8％的[NH4OH溶液/MeOH 1/9]/DCM展開)純化，得到游離堿形式的標(biāo)題化合物。通過用4N HCl/二噁烷處理得到其鹽酸鹽(13.7mg)。對C23H32F3N3O3的LC-MS計算值455.24；實測值456(M+H)。
中間體14 步驟A
在室溫下用2.32g(101mmol)鈉處理1-芐基-3-氧代哌啶-4-甲酸乙酯(5.0g，16.79mmol)與苯甲脒(2.01g，16.79mmol)的無水乙醇(150ml)溶液，在100℃下將得到的混合物攪拌3小時。減壓蒸發(fā)溶劑，得到的固體用MeOH(10ml)和乙醚(200ml)處理。將產(chǎn)物2.56g(42％)過濾并用乙醚洗滌。無需進(jìn)一步純化。
1H NMR(CDCl3，400MHz)7.92(d，2H)，7.50-7.52(m，3H)，7.28-7.41(m，5H)，3.75(s，2H)，3.50(s，2H)，2.79(t，2H)，2.62(t，2H).
對C20H19N3O的LC-MS的計算值318.38；實測值318.4[M+H]+。
步驟B 在0℃下用氯甲酸1-氯乙酯(1.80ml，1.26mmol)處理得自步驟A的產(chǎn)物(0.4g，1.26mmol)的DCM(10ml)懸浮液，將該混合物攪拌15分鐘。隨后在90℃下將該混合物攪拌2小時，再加入0.5當(dāng)量的氯甲酸酯試劑。30分鐘后，蒸發(fā)溶劑。用MeOH(10ml)處理得到的白色固體，并在65℃下攪拌1小時。蒸發(fā)溶劑，得到白色固體狀的產(chǎn)物(鹽酸鹽)。標(biāo)題化合物的進(jìn)一步純化可依次通過N-Boc保護(hù)和層析兩個步驟來完成。用HCl/乙酸乙酯除去Boc基團(tuán)，得到0.185g標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)7.78(d，2H)，7.67(d，1H)，7.52(t，2H)，4.20(s，2H)，3.49(t，2H)，2.78(t，2H).
實施例29 在氮氣氣氛下，往中間體2(0.1g，0.28mmol)的無水DCM(2.0ml)溶液中加入草酰氯，在室溫下將得到的混合物攪拌2小時。蒸發(fā)溶劑并真空干燥得到的油狀物。將干燥的酰氯溶于DCM(2.0ml)，用中間體14(0.168g，0.53mmol)的TEA(2ml)溶液處理。18小時后，用水猝滅該反應(yīng)，并用DCM萃取。通過快速層析，得到15.0mg三氟乙酰基保護(hù)的胺，按照上述方法用NaBH4去保護(hù)。反相純化得到5.6mg實施例29所需產(chǎn)物。對C27H36N4O3的LC-MS計算值465.60，實測值465.6[M+H]+。
權(quán)利要求
1.一種式I的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體， 其中A、B、X和D定義如下A獨立地選自-CR8R8、-CO-、-NR8-和-O-，其中R8獨立地選自氫、C1-6烷基、C0-4烷基COR11，且其中R11選自羥基、氫、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基的取代基取代；B選自-CR2R2-、-O-、-SO-、-SO2-、-NSO2R14-、-NCOR13-、-NCONR12R12-和-CO-，其中R2獨立地選自氫、C1-6烷基、氟、羥基、雜環(huán)、-NHCOR13、-NHSO2R14和-O-C1-6烷基，其中R12選自氫、C1-6烷基、芐基和苯基以及C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基的取代基取代，其中R13選自氫、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基的取代基取代，其中R14選自羥基、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基的取代基取代，且其中所述雜環(huán)未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基、C1-3烷氧基和三氟甲基的取代基取代；X為碳或氮；D為碳，或當(dāng)B、X和D之一不為相應(yīng)的CR2R2、碳和碳時，則D為碳或氮；條件是A、B、X和D不能同時為相應(yīng)的CR8R8、CR2R2、CR4和CR3，并且當(dāng)至少A、B或X之一不為相應(yīng)的CR8R8、CR2R2或CR4時，D只能為氮，其中R8、R2、R4和R3如下定義；Y選自-O-、-NR12-、-S-、-SO-、-SO2-、-CR11R11-、NSO2R14-、-NCOR13-、-NCONR12R12-、-CR11COR11-、-CR11OCOR13-和-CO-；R1選自氫、-C1-6烷基、-C0-6烷基-O-C1-6烷基、-C0-6烷基-S-C1-6烷基、-(C0-6烷基)-(C3-7環(huán)烷基)-(C0-6烷基)、羥基、雜環(huán)、-CN、-NR12R12、-NR12COR13、-NR12SO2R14、-COR11、-CONR12R12和苯基，其中所述烷基和所述環(huán)烷基未取代或被1-7個取代基取代，其中所述取代基獨立地選自(a)鹵素，(b)羥基，(c)-O-C1-3烷基，(d)三氟甲基，(f)C1-3烷基，(g)-O-C1-3烷基，(h)-COR11，(i)-SO2R14，(j)-NHCOCH3，(k)-NHSO2CH3，(l)-雜環(huán)，(m)＝O，和(n)-CN，且其中所述苯基和雜環(huán)未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基、C1-3烷氧基和三氟甲基的取代基取代；R3選自(a)氫，(b)任選被1-3個氟取代的C1-3烷基，(c)任選被1-3個氟取代的-O-C1-3烷基，(d)羥基，(e)氯，(f)氟，(g)溴，(h)苯基，(i)雜環(huán)，和(j)不存在、氧，或者當(dāng)與R3相連的Z為氮時則為氫；R4選自(a)氫，(b)任選被1-3個氟取代的C1-3烷基，(c)任選被1-3個氟取代的-O-C1-3烷基，(d)羥基，(e)氯，(f)氟，(g)溴，(h)苯基，(i)雜環(huán)，和(j)不存在、氧，或者當(dāng)與R4相連的Z為氮時則為氫；R5選自(a)C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，并任選被羥基取代，(b)-O-C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，(c)-CO-C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，(d)-S-C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，(e)-吡啶基，所述吡啶基未取代或被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代，(f)氟，(g)氯，(h)溴，(i)-C4-6環(huán)烷基，(j)-O-C4-6環(huán)烷基，(k)苯基，所述苯基未取代或被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代，(1)-O-苯基，所述苯基未取代或被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代，(m)-C3-6環(huán)烷基，其中所述環(huán)烷基未取代或被1-6個氟取代，(n)-O-C3-6環(huán)烷基，其中所述環(huán)烷基未取代或被1-6個氟取代，(o)-雜環(huán)，(p)-CN，和(q)-COR11；R15選自(a)氫，和(b)C1-6烷基，所述烷基未取代或被1-3個獨立選自鹵素、羥基、-CO2H、-CO2C1-6烷基和-O-C1-3烷基的取代基取代；R16選自(a)氫，(b)C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代；(c)氟，(d)-O-C1-3烷基，其中所述烷基未取代或被1-3個氟取代，和(e)C3-6環(huán)烷基，(f)-O-C3-6環(huán)烷基，(g)羥基，(h)-COR11，和(i)-OCOR13，或者R15和R16可通過C2-4烷基鏈或C0-2烷基-O-C1-3烷基鏈連接在一起形成5-7元環(huán)；R17選自(a)氫，(b)C1-6烷基，其中所述烷基可未取代或被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代，(c)COR11，(d)羥基，和(e)-O-C1-6烷基，其中所述烷基可未取代或被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代，或者R16和R17通過C1-4烷基鏈或C0-3烷基-O-C0-3烷基鏈連接在一起形成3-6元環(huán)；R18選自(a)氫，和(b)C1-6烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，(c)氟，(d)-O-C3-6環(huán)烷基，和(e)-O-C1-3烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個氟取代，或者R16和R18通過C2-3烷基鏈連接在一起形成5-6元環(huán)，其中所述烷基未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代，或者R16和R18通過C1-2烷基-O-C1-2烷基鏈連接在一起形成6-8元環(huán)，其中所述烷基未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代，或者R16和R18通過-O-C1-2烷基-O-鏈連接在一起形成6-7元環(huán)，其中所述烷基未取代或被1-3個獨立地選自鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代，n選自0、1和2；虛線代表單鍵或雙鍵。
2.由式Ia所代表權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體， 其中R1、R3、R5、R15、R16、R18、A、B、D、X和Y如權(quán)利要求1中定義。
3.由式Ib所代表權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體， 其中R1、R3、R5、R16、A、B、D和X如權(quán)利要求1中定義。
4.由式Ic所代表權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體， 其中R1、R3、R5和R16如權(quán)利要求1中定義。
5.由式Id所代表權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體， 其中R3、R5和R16如權(quán)利要求1中定義。
6.由式Ie所代表權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體， 其中R3、R5、R16和D如權(quán)利要求1中定義。
7.由式If所代表權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體， 其中R3、R5、R16和D如權(quán)利要求1中定義。
8.由式Ig所代表權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體， 其中R3、R5和R16如權(quán)利要求1中定義。
9.由式Ih所代表權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和它們各自的非對映體， 其中R3、R5和R16如權(quán)利要求1中定義。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中Y選自-O-、-CH2-、-S-、-SO-和-SO2-。
11.權(quán)利要求1的化合物，其中R1選自(1)未取代或被1-6個取代基取代的-C1-6烷基，其中所述取代基獨立地選自(a)鹵素，(b)羥基，(c)-O-C1-3烷基，(d)三氟甲基，和(e)-COR11，(2)未取代或被1-6個取代基取代的-C0-6烷基-O-C1-6烷基-，其中所述取代基獨立地選自(a)鹵素，(b)三氟甲基，和(c)-COR11，(3)未取代或被1-7個取代基取代的-(C3-5環(huán)烷基)-(C0-6烷基)，其中所述取代基獨立地選自(a)鹵素，(b)羥基，(c)-O-C1-3烷基，(d)三氟甲基，和(e)-COR11，和(4)未取代或被1-3個取代基取代的苯基或雜環(huán)，其中所述取代基獨立地選自(a)鹵素，(b)羥基，(c)-O-C1-3烷基，(d)三氟甲基，和(e)-COR11。
12.權(quán)利要求11的化合物，其中R1為未取代或被1-5個取代基取代的C1-6烷基，其中所述取代基獨立地選自(a)羥基，和(b)氟。
13.權(quán)利要求12的化合物，其中R1選自(a)異丙基，(b)-CH(OH)CH3，和(c)-CH2CF3。
14.權(quán)利要求1的化合物，其中D為氮，且R3不存在、為氫或氧。
15.權(quán)利要求14的化合物，其中D為氮，且R3不存在或為氫。
16.權(quán)利要求15的化合物，其中D為氮，且R3不存在。
17.權(quán)利要求1的化合物，其中D為碳，且R3選自(a)氫，(b)鹵素，(c)羥基，(d)C1-3烷基，其中所述烷基未取代或被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代，(e)-COR11，(f)-CONR12R12，(g)-雜環(huán)，(h)-NR12-SO2-NR12R12，(i)-NR12-SO2-R14，(j)-SO2-NR12R12，(k)-硝基，和(l)-NR12R12。
18.權(quán)利要求16的化合物，其中D為碳，且R3選自(a)氟，(b)三氟甲基，和(c)氫。
19.權(quán)利要求18的化合物，其中D為碳，且R3為(a)氟，或(b)氫。
20.權(quán)利要求1的化合物，其中X為氮，且R4不存在、為氫或氧。
21.權(quán)利要求20的化合物，其中X為氮，且R4不存在。
22.權(quán)利要求20的化合物，其中X為碳，且R4選自(a)氫，(b)三氟甲基，和(c)鹵素。
23.權(quán)利要求22的化合物，其中X為碳，且R4為氫。
24.權(quán)利要求1的化合物，其中R5選自(a)被1-6個氟取代的C1-3烷基，(b)氯，(c)溴，(d)未取代或被一個或多個選自鹵素和三氟甲基的取代基取代的-O-苯基，(e)未取代或被一個或多個選自鹵素和三氟甲基的取代基取代的苯基，和(f)被1-6個氟取代的-O-C1-3烷基。
25.權(quán)利要求24的化合物，其中R5選自(a)三氟甲基，(b)三氟甲氧基，(c)溴，和(d)氯。
26.權(quán)利要求25的化合物，其中R5選自三氟甲基和三氟甲氧基。
27.權(quán)利要求1的化合物，其中R15為氫或甲基。
28.權(quán)利要求1的化合物，其中R16選自(a)氫，(b)未取代或被1-6個氟取代的C1-3烷基，(c)-O-C1-3烷基，(d)氟，和(e)羥基。
29.權(quán)利要求28的化合物，其中R16選自(a)氫，(b)三氟甲基，(c)甲基，(d)甲氧基，(e)乙氧基，(f)乙基，(g)氟，和(h)羥基。
30.權(quán)利要求29的化合物，其中R16選自(a)氫，(b)甲基，和(c)甲氧基。
31.權(quán)利要求1的化合物，其中R18選自(a)氫，(b)甲基，和(c)甲氧基。
32.一種或多種權(quán)利要求1的化合物，所述化合物選自 和
33.權(quán)利要求1的化合物，其中R16和R18通過-CH2CH2-鏈或-CH2CH2CH2-鏈連接在一起形成環(huán)戊基環(huán)或環(huán)己基環(huán)。
34.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含惰性載體和權(quán)利要求1的化合物。
35.一種調(diào)節(jié)哺乳動物體內(nèi)趨化因子受體活性的方法，所述方法包括給予有效量的權(quán)利要求1的化合物。
36.一種用于治療、改善、控制或減少炎性和免疫調(diào)節(jié)紊亂或疾病的風(fēng)險的方法，所述方法包括給予患者有效量的權(quán)利要求1的化合物。
37.一種用于治療、改善、控制或減少類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的風(fēng)險的方法，所述方法包括給予患者有效量的權(quán)利要求1的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中A、B、D、X、Y、n、R
文檔編號C07D403/14GK1826334SQ200480013280
公開日2006年8月30日 申請日期2004年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月18日
發(fā)明者S·D·戈布爾, A·帕斯特納克, S·G·米爾斯, 周昌友, 楊立虎 申請人:麥克公司