專利名稱：芳基－甲醛肟衍生物及其作為雌激素藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及芳基芳基-甲醛肟衍生物，并且在某些方面涉及(羥基-苯基)-芳基-甲醛肟衍生物、其作為雌激素藥物的應(yīng)用及其制備的方法。
背景技術(shù)：
雌激素在哺乳動(dòng)物組織內(nèi)的多向性作用已經(jīng)被報(bào)導(dǎo)過，現(xiàn)在了解雌激素作用于許多器官系統(tǒng)[Mendelsohn和Karas，新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(New England Journal of Medicine)3401801-1811(1999)，Epperson等，身心醫(yī)學(xué)(Psychosomatic Medicine)61676-697(1999)，Crandall，婦女健康和性基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志(Journal ofWomens Health & Gender Based Medicine)81155-1166(1999)，Monk和Brodaty，癡呆和老年血認(rèn)知障礙(Dementia & GeriatricCognitive Disorders)111-10(2000)，Hum和Macrae，腦血流和代謝雜志(Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism)20631-652(2000)，Calvin，Maturitas 34195-210(2000)，F(xiàn)inking等，Zeitschrift fur Kardiologie 89442-453(2000)，Brincat，Maturitas 35107-117(2000)，Al-Azzawi，研究生醫(yī)學(xué)雜志(Postgraduate Medical Journal)77292-304(2001)]。雌激素可以以數(shù)種方式對(duì)組織施加影響?？赡艿?，描述特征最充分的作用機(jī)理是其與雌激素受體之間的相互作用導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄改變。雌激素受體是配體激活的轉(zhuǎn)錄因子且術(shù)語核激素受體超家族。該家族的其他成員包括孕酮，雄激素，糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素受體。在與配體結(jié)合時(shí)，這些受體二聚化且可以通過直接與DNA上的特定序列(稱作響應(yīng)因子)結(jié)合或者通過與其他轉(zhuǎn)錄因子(例如AP1)相互作用、，隨后直接結(jié)合特定DNA序列而激活基因轉(zhuǎn)錄[Moggs和Orphanides，EMBO報(bào)告2775-781(2001)，Hall等，生物化學(xué)雜志(Journal of BiologicalChemistry)27636869-36872(2001)，McDonnell，分子調(diào)節(jié)的原理(Principles Of Molecular Regulation)p351-361(2000)]。一類的″共調(diào)節(jié)″蛋白質(zhì)也可以與配體結(jié)合的受體相互作用且進(jìn)一步調(diào)制其轉(zhuǎn)錄活性[McKenna等.，內(nèi)分泌綜述(Endocrine Reviews)20321-344(1999)]。目前已經(jīng)證實(shí)，雌激素受體可以通過配體依賴性和非依賴性兩種方式抑制NFKB-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄[Quaedacker8等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)1421156-1166(2001)，Bhat等，類固醇生物化學(xué)和分子生物學(xué)雜志(Journal of Steroid Biochemistry & MolecularBiology)67233-240(1998)，Pelzer等，生物活性和生物物理研究通訊(Biochemical & Biophysical Research Communications)2861153-7(2001)]。
雌激素受體還可以通過磷酸化作用激活。這種磷酸化作用是由生長(zhǎng)因素如EGF介導(dǎo)的且在配體不存在條件下引起基因轉(zhuǎn)錄的改變[Moggs和Orphanides，EMBO報(bào)告2775-781(2001)，Hall等.，生物化學(xué)雜志(Journal of Biological Chemi stry)27636869-36872(2001)]。
沒有被充分刻畫特征的、雌激素可作用于細(xì)胞的方式被稱作膜受體。這種受體的存在是有爭(zhēng)議的，但已經(jīng)有適當(dāng)文獻(xiàn)稱雌激素可以引起由細(xì)胞的極快非基因組響應(yīng)。負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)導(dǎo)這些效應(yīng)的分子完整性還未被確鑿的分離出來，但有證據(jù)顯示至少與雌激素受體的核形成有關(guān)[Levin，實(shí)用生理學(xué)雜志(Journal of Applied Physiology)911860-1867(2001)，Levin，內(nèi)分泌和代謝的趨勢(shì)(Trends inEndocrinology & Metabolism)10374-377(1999)]。
目前為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)兩種雌激素受體。第一種雌激素受體在約15年前被克隆且現(xiàn)在稱作ERα[Green等，自然(Nature)320134-9(1986)]。第二種受體是在相對(duì)近期發(fā)現(xiàn)的，并且被稱作ERβ[Kuiper等.，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院匯編(Proceedings of the National Academyof Sciences of the United States of America)935925-5930(1996)]。有關(guān)ERβ的早期工作集中在確定其對(duì)不同配體的親和力上，并且事實(shí)上，集中于發(fā)現(xiàn)與ERα的某些差異上。在嚙齒動(dòng)物中已經(jīng)很好描繪出ERβ的組織分布，而它與ERα不一致。組織例如小鼠和大鼠子宮主要表達(dá)ERα，而小鼠和大鼠肺主要表達(dá)ERβ[Couse等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)1384613-4621(1997)，Kuiper等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)138863-870(1997)]。甚至在一些情況中，ERα和ERβ的分布可以被區(qū)域化。譬如，在小鼠卵巢中，ERβ高度表達(dá)在粒膜細(xì)胞內(nèi)而ERα局限在鞘和基質(zhì)細(xì)胞中[Sar和welsch，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)140963-971(1999)，F(xiàn)itzpatrick等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)1402581-2591(1999)]。然而，有實(shí)例中所述受體被共同表達(dá)，并且有體外研究的證據(jù)顯示ERα和ERβ可以形成雜二聚體[Cowley等，生物化學(xué)雜志(Journal of BiologicalChemistry)27219858-19862(1997)]。
大多數(shù)的有效內(nèi)源性雌激素為17β-雌二醇。已經(jīng)公開了大量模擬或阻斷17β-雌二醇活性的化合物。被概括具有與17β-雌二醇具有相同生物效應(yīng)的化合物被稱作″雌激素受體激動(dòng)劑″。那些當(dāng)與17β-雌二醇組合時(shí)阻斷17β-雌二醇作用的化合物被稱作″雌激素受體拮抗劑″。在實(shí)際中，雌激素受體激動(dòng)劑和雌激素受體拮抗劑活性之間存在交叉區(qū)并且某些化合物在某些組織內(nèi)充當(dāng)雌激素受體激動(dòng)劑而在其他組織內(nèi)充當(dāng)雌激素受體拮抗劑。這樣的具有混和活性的化合物稱作選擇性雌激素受體調(diào)制劑(SERMS)并且是治療上有用的藥物(例如EVISTA)[McDonnell，社會(huì)婦科調(diào)查雜志(Journal of the Societyfor Gynecologic Investigation)7S10-S15(2000)，Goldstein等，人類生殖更新(Human Re產(chǎn)物ion Update)6212-224(2000)]。同一化合物為何具有細(xì)胞特異性作用的準(zhǔn)確原因還不清楚，但受體構(gòu)型和/或共調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的環(huán)境之差異已經(jīng)被提及過。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有時(shí)雌激素受體在與配體結(jié)合時(shí)采取不同的構(gòu)型。然而，這些變化的結(jié)果和微妙之處僅僅在最近才被揭示。ERα和ERβ的三維結(jié)構(gòu)已經(jīng)通過用多種配體共結(jié)晶來解決，而且清楚地顯示螺旋12在雌激素受體拮抗劑的存在下復(fù)位，該復(fù)位在空間位阻上阻礙了受體-共調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)相互作用所需的蛋白質(zhì)序列[Pike等，Embo 184608-4618(1999)，Shiau等.，Cell 95927-937(1998)]。此外，噬菌體顯示的技術(shù)已經(jīng)被用來鑒定在不同配體存在下與雌激素受體相互作用的肽[Paige等.，Proceedings of the National Academy of Sciencesof the United States of America 963999-4004(1999)]。譬如，鑒定出一種肽，它可以辨別與完全雌激素受體激動(dòng)劑17β-雌二醇和二乙基己烯雌酚結(jié)合的ERα。一種不同的肽被證實(shí)能夠區(qū)分結(jié)合ERα和ERβ的氯米芬。這些數(shù)據(jù)表明，各配體潛在地使受體處于獨(dú)特和不可預(yù)知的似乎具有不同生物活性的構(gòu)型。
如上所述，雌激素作用于全部的生物過程。此外，當(dāng)性別差異被提出時(shí)(例如發(fā)病頻率、對(duì)刺激的反應(yīng)等)，可以解釋為與雄性和雌性之間雌激素水平的差異有關(guān)。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及芳基-甲醛肟衍生物，特別是用作雌激素藥物的那些。一方面，本發(fā)明涉及下式的芳基-甲醛衍生物 其中R1是氫，鹵素，低級(jí)烷基，CN或低級(jí)烷氧基；R2和R3一起構(gòu)成稠合芳基或雜芳基環(huán)；R4是氫，鹵素，低級(jí)烷基，CN，或低級(jí)烷氧基；R5是氫，低級(jí)烷基，或-C(O)R6；和R6是低級(jí)烷基；或其藥學(xué)可接受鹽。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，R5是H。
另一方面，本發(fā)明涉及含有至少一種上述化合物乙基藥學(xué)可接受載體的藥物組合物。
另一方面，本發(fā)明涉及上述化合物在治療或預(yù)防疾病中的應(yīng)用，所述疾病包括但不限于炎性腸病例如克羅恩氏病和結(jié)腸炎。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供芳基-甲醛肟衍生物。這些化合物適宜用作雌激素能藥物，用于治療和預(yù)防疾病，例如炎性腸病(包括克羅恩氏病和結(jié)腸炎)。一方面，本發(fā)明涉及式I的化合物
其中R1是氫，鹵素，低級(jí)烷基，CN或低級(jí)烷氧基；R2和R3一起構(gòu)成稠合芳基或雜芳基環(huán)；R4是氫，鹵素，低級(jí)烷基，CN，或低級(jí)烷氧基；R5是氫，低級(jí)烷基，或-C(O)R6；和R6是低級(jí)烷基；或其藥學(xué)可接受鹽。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，R5是H。
在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，R1是鹵素，R2和R3一起構(gòu)成5或6元稠合環(huán)，例如苯基、呋喃、噻吩，并且R4是H或鹵素。
當(dāng)本發(fā)明的化合物含有堿性部分時(shí)，可以由有機(jī)和無機(jī)酸形成藥學(xué)可接受鹽，例如，乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、杏仁酸、蘋果酸、鄰苯二甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸和類似的已知酸。當(dāng)本發(fā)明的化合物含有酸性部分時(shí)，還可以由有機(jī)和無機(jī)堿形成鹽，例如堿金屬鹽(例如，鈉、鋰或鉀)，堿土金屬鹽，銨鹽，含有1-6個(gè)碳原子的烷基銨鹽或各烷基含有1-6個(gè)碳原子的二烷基銨鹽，和各烷基含有1-6個(gè)碳原子的三烷基銨鹽。
術(shù)語″芳基″是指6-10個(gè)碳原子的碳環(huán)芳香環(huán)例如苯基。術(shù)語″雜芳基″是指含有1個(gè)或多個(gè)，例如1-3個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子的5或6元芳香環(huán)。芳基和雜芳基可以被任選取代。
在此單獨(dú)或者作為另一基團(tuán)的一部分使用的術(shù)語″烷基″，是指取代或未取代的脂族烴鏈并且包括，但不限于，含有1-12個(gè)碳原子、優(yōu)選1-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈，除非另外說明。例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基和叔丁基屬于術(shù)語″烷基″?！逋榛宥x中尤其包括任選取代的脂族烴鏈。
定義中使用的碳原子數(shù)是指碳主鏈和碳支鏈，但不包括取代基的碳原子，例如烷氧基取代基等。
在此單獨(dú)或者作為另一基團(tuán)的一部分使用的術(shù)語″鏈烯基″，是指取代或未取代的脂族烴鏈并且包括，但不限于，具有2-8個(gè)碳原子且含有至少一個(gè)雙鍵的直鏈和支鏈。優(yōu)選地，鏈烯基部分具有1或2個(gè)雙鍵。所述鏈烯基部分可以存在E或Z構(gòu)型且本發(fā)明的化合物包括這兩種構(gòu)型。特別屬于定義″鏈烯基″定義中的是那些任選取代的脂族烴鏈。與鏈烯基相連的雜原子，例如O、S或N-R1，不應(yīng)與連接了雙鍵的碳原子相連。
在此單獨(dú)或者作為另一基團(tuán)的一部分使用的術(shù)語″苯基″，是指取代或未取代的苯基。
任選取代的烷基、鏈烯基和苯基可以被一個(gè)或多個(gè)取代基取代。適當(dāng)?shù)娜芜x取代基可以獨(dú)立地選自硝基，氰基，-N(R11)(R12)，鹵素，羥基，羧基，烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，雜芳基，烷氧基，芳氧基，雜芳氧基，烷基烷氧基，烷氧基羰基，烷氧基烷氧基，全氟烷基，全氟烷氧基，芳基烷基，烷基芳基，羥基烷基，烷氧基烷基，烷硫基，-S(O)2-N(R11)(R12)，-C(＝O)-N(R11)(R12)，(R11)(R12)N-烷基，(R11)(R12)N-烷氧基烷基，(R11)(R12)N-烷基芳氧基烷基，-S(O)s-芳基(其中s＝0-2)或-S(O)s-雜芳基(其中s＝0-2)。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，對(duì)于烷基、鏈烯基、鏈炔基和環(huán)烷基所優(yōu)選的取代基包括硝基，氰基，-N(R11)(R12)，鹵素，羥基，芳基，雜芳基，烷氧基，烷氧基烷基和烷氧基羰基。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，對(duì)于芳基和雜芳基來說優(yōu)選的取代基包括-N(R11)(R12)，烷基，鹵素，全氟烷基，全氟烷氧基，芳基烷基和烷基芳基。
術(shù)語鹵素包括溴、氯、氟和碘。
術(shù)語″低級(jí)烷基″是指具有1-6個(gè)碳原子的烷基，在某些優(yōu)選實(shí)施方式中1-3個(gè)碳原子。
在此使用的術(shù)語″低級(jí)烷氧基″是指基團(tuán)R-O-，其中R是1-6個(gè)碳原子的烷基，在一些優(yōu)選實(shí)施方式中1-3個(gè)碳原子。
按照本發(fā)明，本發(fā)明概括的提供化合物或物質(zhì)中的術(shù)語″提供″，或者是指直接施用所述的化合物或物質(zhì)，或者施用在體內(nèi)形成等效量的所述化合物或物質(zhì)的前藥、衍生物或類似物。
在至少部分由雌激素缺乏或過量介導(dǎo)的病癥、障礙或疾病的治療或抑制中，或者可以利用雌激素藥物治療或抑制的病癥、障礙或疾病中，本發(fā)明的化合物可以是雌激素受體調(diào)制劑。本發(fā)明的化合物特別適用于治療那些產(chǎn)生的內(nèi)源性雌激素大大減少的絕經(jīng)前、絕經(jīng)或絕經(jīng)后的患者。絕經(jīng)通常被定義為晚期自然月經(jīng)周期且其特征在于卵巢功能的停止，導(dǎo)致血液中循環(huán)雌激素的大量減少。在此，月經(jīng)還包括雌激素生成減少的狀況，這可能是手術(shù)、化學(xué)引起的，或者由導(dǎo)致卵巢功能的提前減少或停止的疾病狀態(tài)引起的。
所以，本發(fā)明的化合物有效治療或抑制骨質(zhì)疏松癥或抑制骨骼脫礦質(zhì)化，它們可能導(dǎo)致個(gè)體中的新骨骼組織的形成與舊組織吸收之間的失衡，造成骨骼的凈損失。這種骨骼缺失發(fā)生在一定范圍的個(gè)體中，特別是絕經(jīng)后婦女、經(jīng)歷兩側(cè)卵巢切除術(shù)的婦女、那些正在或已經(jīng)接受長(zhǎng)期皮質(zhì)類固醇療法的婦女、那些患有生殖腺發(fā)育不全的，和那些患有綜合癥的。在患有骨折、缺損性骨結(jié)構(gòu)的個(gè)體中和那些接受骨骼相關(guān)性手術(shù)和/或修復(fù)術(shù)植入的個(gè)體中，這些化合物也可以達(dá)到骨骼(包括牙齒和口腔骨)替代的特別要求。除了上述那些問題以外，這些化合物可以用來治療或抑制骨關(guān)節(jié)炎，低血鈣，Paget氏病，骨軟化，骨質(zhì)缺乏，多發(fā)性骨髓瘤和其他形式的對(duì)骨組織具有損害性作用的癌癥。
本發(fā)明的化合物還有效治療或抑制良性或惡性的異常組織生長(zhǎng)，包括前列腺肥大，子宮平滑肌瘤，乳腺癌，子宮內(nèi)膜異位，子宮內(nèi)膜癌，多囊性卵巢綜合癥，子宮內(nèi)膜息肉，良性乳腺疾病，腺肌瘤，卵巢癌，黑素瘤，前列腺癌，結(jié)腸癌，CNS癌，例如神經(jīng)膠質(zhì)瘤或astioblastomia。
本發(fā)明的化合物是心肺保護(hù)性的，它們有效降低膽固醇、甘油三脂、Lp(a)和LDL水平；抑制或治療高膽固醇血癥、高血脂、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、外周血管疾病、再狹窄和血管痙攣；并且抑制血管壁損傷在細(xì)胞活動(dòng)作用下導(dǎo)致發(fā)展為免疫介導(dǎo)的血管損傷。當(dāng)用雌激素類治療絕經(jīng)后患者時(shí)，這些心血管保護(hù)性質(zhì)對(duì)于抑制骨質(zhì)疏松癥并且在被指示使用雌激素療法的男性中都非常重要。
本發(fā)明的化合物也是抗氧劑，并因此適用于治療或抑制自由基誘發(fā)的疾病狀態(tài)。其中被指定批準(zhǔn)抗氧劑療法的特定情況是癌癥，中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙，阿爾茨海默氏病，骨骼疾病，衰老，炎性疾病，外周血管疾病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，自身免疫性疾病，呼吸窘迫，肺氣腫，再灌注損傷的預(yù)防，病毒性肝炎，慢性活動(dòng)性肝炎，鈍挫性結(jié)核，牛皮癬，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，成人呼吸窘迫綜合癥，中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷和休克。
本發(fā)明的化合物還有效地產(chǎn)生認(rèn)知增強(qiáng)作用，并且有效治療或抑制老年性癡呆，阿爾茨海默氏病，認(rèn)知減退，神經(jīng)變性疾病，具有神經(jīng)保護(hù)作用或認(rèn)知增強(qiáng)作用。
本發(fā)明的化合物也有效治療或抑制炎性腸病，潰瘍性直腸炎，克羅恩氏病和結(jié)腸炎；和絕經(jīng)有關(guān)的病癥，例如血管舒縮癥狀如熱潮紅類，陰道或外陰萎縮，萎縮性陰道炎，陰道干燥，瘙癢，交媾困難，排尿困難，排尿頻繁，尿失禁，尿道感染，血管舒縮癥狀，包括熱潮紅，肌痛，關(guān)節(jié)痛，失眠，過敏等；男性脫發(fā)；皮膚萎縮；痤瘡；II型糖尿??；功能不良性子宮出血；和不育癥。
本發(fā)明的化合物適合于那些閉經(jīng)具有有益作用的疾病狀態(tài)，例如白血病，子宮內(nèi)膜切除，慢性腎臟或肝臟疾病或凝血疾病或障礙。
本發(fā)明的化合物可以用作避孕藥物，特別當(dāng)與孕激素聯(lián)合使用時(shí)。
當(dāng)為治療或抑制特定的疾病狀態(tài)或障礙給藥時(shí)，應(yīng)理解有效劑量可以根據(jù)所用的具體化合物、給藥方式、病癥和被治療病癥的嚴(yán)重性，以及與被治療個(gè)體有關(guān)的多種生理因素而變化。本發(fā)明的化合物的有效給藥可以以約0.1mg/天-約1,000mg/天的口服劑量施用。優(yōu)選地，給藥應(yīng)是約10mg/天-約600mg/天，更優(yōu)選約50mg/天-約600mg/天，以單一劑量或以兩個(gè)或多個(gè)分劑量。設(shè)計(jì)的日劑量應(yīng)視給藥的途徑而變化。
所述的劑量可以以有效地使所述活性化合物定向進(jìn)入到接受者的血液內(nèi)的方式給藥，包括經(jīng)口服、經(jīng)植入、經(jīng)非腸道(包括靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)和皮下注射)、經(jīng)直腸、經(jīng)鼻內(nèi)、經(jīng)鞘內(nèi)和透皮給藥。
含有本發(fā)明的活性化合物的口服制劑可以包括任何常用口服劑型，包括片劑、膠囊、經(jīng)頰劑、糖錠劑、錠劑和口服液體、混懸液或溶液。膠囊可以含有活性化合物與惰性填充劑和/或稀釋劑的混和物，例如藥學(xué)可接受淀粉(例如玉米、土豆或木薯淀粉)、糖、人工甜味劑、粉狀纖維素，如晶體或微晶纖維素，面粉，明膠，樹膠等。適用的片劑劑型可以通過常規(guī)壓縮、濕法制粒和干法制粒法制備并采用藥學(xué)可接受稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、表面改性劑(包括表面活性劑)，助懸劑或穩(wěn)定劑，包括，但不限于，硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、藻酸、阿拉伯膠、黃原膠、檸檬酸鈉、復(fù)合硅酸鹽、碳酸鈣、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二鈣、乳糖、高嶺土、甘露糖醇、氯化鈉、滑石粉、干燥淀粉和糖粉。優(yōu)選的表面改性試劑包括肺離子和陰離子表面改性試劑。表面改性試劑的代表實(shí)例包括，但不限于，泊咯沙姆(poloxamer)188，苯扎氯銨，硬脂酸鈣，鯨蠟硬脂醇，cetomacrogol乳化蠟，脫水山梨糖醇酯，膠體二氧化硅，磷酸鹽，十二烷基硫酸鈉，硅酸鎂鋁，和三乙醇胺本發(fā)明的口服制劑可以采用標(biāo)準(zhǔn)延遲或定時(shí)釋放制劑以改變活性化合物的吸收?？诜苿┻€可以由施加在水或果汁中的活性成分組成，根據(jù)需要其中含有適當(dāng)?shù)脑鋈軇┗蛉榛瘎?br> 在某些情況中可能希望直接給予氣霧劑形式的所述化合物到呼吸道內(nèi)。
本發(fā)明的化合物還可以經(jīng)非腸道或腹膜內(nèi)給藥。這些作為游離堿或藥學(xué)可接受鹽的活性化合物的溶液或混懸液可以在水中與表面活性劑例如羥基-丙基纖維素混和制成。分散體也可以在甘油、液體聚乙二醇或其在油內(nèi)的混和物中制成。在常規(guī)儲(chǔ)存和使用條件下，這些制劑含有防止微生物生長(zhǎng)的防腐劑。
適合注射使用的藥學(xué)劑型包括滅菌水溶液或分散體和用于即時(shí)制備滅菌可注射溶液或分散體的滅菌粉末。在所有情況中，該劑型必須被滅菌且須流動(dòng)達(dá)到具有易注射性的程度。在制造和儲(chǔ)存的條件下必須穩(wěn)定并且必須對(duì)微生物如細(xì)菌和真菌的肟染具有防腐作用。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，包括，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油，丙二醇和液體聚乙二醇)，其適當(dāng)混和物和植物油。
鑒于本文的目的，透皮給藥被理解為包括所有穿過機(jī)體表面和機(jī)體通道(包括上皮和粘膜組織)的內(nèi)襯層的給藥。這樣的給藥可以利用本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽以洗劑、霜?jiǎng)⑴菽瓌?、貼劑、混懸劑、溶液劑和栓劑(直腸和陰道)給藥。
透皮給藥可以采用透皮貼劑來完成，所述貼劑含有活性化合物和對(duì)該活性化合物呈惰性的載體，載體對(duì)皮膚無毒，并且能夠使藥物經(jīng)皮膚傳輸進(jìn)入血液達(dá)到被系統(tǒng)吸收。在載體可以是任何種類的泡沫劑，例如霜?jiǎng)┖蛙浉?、硬膏劑、凝膠劑和封閉裝置。霜?jiǎng)┖蛙浉嗫梢允钦承砸后w或水包油或油包水型的半固體乳劑。硬膏劑也適宜，該硬膏劑包括吸附性粉末分散在含活性成分的石油或親水性石油中。許多閉合裝置可以用來釋放活性成分到血液中，例如半滲透膜覆蓋含有活性成分和可有可無的載體的儲(chǔ)庫，或者含有活性成分的基質(zhì)。其他閉合裝置是文獻(xiàn)中公開過的。
栓劑可以由傳統(tǒng)材料制成，包括可可脂，加入或不加入蠟，以便改變栓劑的熔點(diǎn)和甘油。可溶于水的栓劑基質(zhì)，例如不同分子量的聚乙二醇，也可以使用。
制備本發(fā)明的化合物中所用的試劑或者可以商購(gòu)，或者可以通過文獻(xiàn)所述的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
本發(fā)明的數(shù)個(gè)代表性實(shí)施例的制備在下列路線1-7中描述。


路線4
路線5
路線7 實(shí)施例14-溴萘-1-甲醛向150ml燒瓶加入1，4-二溴萘(2.0g，7.0mmol)和無水乙醚(50ml)。冷卻至0℃后滴加n-BuLi(3.1ml of 2.5M在己烷中，7.7mmol)并攪拌20分鐘，此后加入無水DMF(1.62ml，21mmol)。該反應(yīng)隨后升至室溫，1小時(shí)后用水(10ml)猝滅該反應(yīng)，攪拌10分鐘，并且用醚萃取(3x)。該醚層用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料，并且濃縮得到1.02g(62％)的產(chǎn)物，其為純的米色固體1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.80-7.85(2H，m)，8.10(1H，d，J＝7.7Hz)，8.20(1H，d，J＝7.7Hz)，8.32(1H，m).9.24(1H，m)，10.42(1H，s)。
分析C11H7BrO計(jì)算值C56.20 H3.00實(shí)測(cè)值C56.13 H2.98
實(shí)施例24-[-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-苯基]-萘-1-甲醛將4-溴萘-1-甲醛(500mg，2.13mmol)、Na2CO3(3.5ml的2N水溶液，7.0mmol)、Pd(PPh3)4(0.130g，0.11mmol)、4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)硼酸(680mg，2.55mmol)和乙二醇二甲醇(55ml)的混和物加熱回流6小時(shí)。冷卻該反應(yīng)并用EtOAc稀釋。該有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮。柱色譜(20％ EtOAc-己烷)得到510mg(66％)的產(chǎn)物，其為黃色固體1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ0.28(6H，s)，1.01(9H，s)，7.05(2H，d，J＝8.2Hz)，7.43(2H，d，J＝8.2Hz)，7.60-7.70(2H，m)，7.77(1H，t，J＝8.2Hz)，7.95(1H，d，J＝8.5Hz)，8.23(1H，d，J＝7.3Hz)，9.29(1H，d，J＝8.5Hz)，10.43(1H，s)。
實(shí)施例34-(4-羥基苯基)-1-萘甲醛肟將4-[-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-苯基]-萘-1-甲醛(510mg，1.40mmol)、羥胺鹽酸鹽(196mg，2.82mmol)和無水吡啶(0.228ml，2.82mmol)在MeOH(3.2ml)中的混和物加熱回流3小時(shí)。隨后將該混合物減壓下濃縮并溶于醚(5ml)。隨后加入含于THF中的1.0M TBAF(5.1ml，4.2mmol)且攪拌5分鐘。向該反應(yīng)加入水(5ml)且此后用EtOAc萃取。該有機(jī)物用無水Na2SO4干燥并經(jīng)過硅膠塞料。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜純化(10％MeOH-EtOAc)得到150mg(41％)的產(chǎn)物，其為白色固體mp 200.0-200.5℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.93(2H，d，J＝8.0Hz)，7.29(2H，d，J＝8.0Hz)，7.42(1H，d，J＝7.3Hz)，7.54(1H，appt，J＝7.6Hz).7.61(1H，appt，J＝7.6Hz)，7.83(1H，d，J＝7.3)，7.92(1H，d，J＝8.4Hz)，8.73(1H，d，J＝8.4Hz)，8.81(1H，s)，9.66(1H，s)，11.45(1H，s)；MS(ES I)m/z262([M-H]-)。
分析C17H13NO2計(jì)算值C，77.55；H，4.98；N，5.32實(shí)測(cè)值C，77.18；H，4.93；N，5.14
實(shí)施例44-(3-氟-4-甲氧基苯基)-萘-1-甲醛將4-溴萘-1-甲醛(550mg，2.34mmol)、Na2CO3(2.34ml的2N水溶液，4.68mmol)、Pd(PPh3)4(0.135g，0.12mmol)、3-氟-4-甲氧基硼酸(480mg，2.83mmol)和乙二醇二甲醇(25ml)的混和物加熱回流12小時(shí)。冷卻該反應(yīng)，用EtOAc稀釋并分離層。該有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮得到810mg粗產(chǎn)物，將其用于下步無需進(jìn)一步純化。分析樣品通過反相HPLC制備(水-CH3CN-0.1％ TFA)mp137-138℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.95(3H，s)，7.30-7.47(3H，m)，7.63-7.71(3H，m)，7.95(1H，d，J＝8.3Hz)，8.24(1H，d，J＝7.4Hz)，9.28(1H，d，J＝8.4Hz)，10.44(1H，s)。
分析C18H13FO2計(jì)算值C，77.13；H，4.67實(shí)測(cè)值C，76.23；H，4.74實(shí)施例54-(3-氟-4-羥基苯基)-萘-1-甲醛向35ml燒瓶加入4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-萘-1-甲醛(720mg-80％純，2.05mmol)和吡啶鹽酸鹽(3g，26mmol)。該混和物在195℃下加熱2小時(shí)，略冷卻，將殘余的吡啶鹽酸鹽溶于水(50ml)。該水層用乙酸乙酯萃取(3x)，用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料和濃縮得到570mg(99％)的產(chǎn)物，其為米色泡沫。該原料用于下步無需進(jìn)一步純化1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.16(2H，m)，7.35(1H，d，J＝12.00Hz)，7.60-7.80(3H，m)，7.98(2H，d，J＝8.3Hz)8.22(1H，d，J＝7.4Hz)，9.28(1H，d，J＝8.4)，10.24(1H，s)，10.43(1H，s)。
實(shí)施例64-(3-氟-4-羥基苯基)-萘-1-甲醛肟將4-(3-氟-4-羥基苯基)-萘-1-甲醛(570mg，2.13mmol)、羥胺鹽酸鹽(297mg，4.27mmol)和無水吡啶(0.35ml，4.27mmol)在MeOH(13ml)中的混和物加熱回流1.5小時(shí)。該混合物隨后用醚稀釋，用水洗滌，該有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮。通過反相HPLC純化(水-CH3CN-0.1％ TFA)得到400mg(67％)的產(chǎn)物，其為白色固體mp 187-188℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.12(2H，m)，7.28(1H，d，J＝11.4Hz)，7.45(1H，d，J＝7.4Hz)，7.53-7.64(2H，m)。7.83(1H，d，J＝7.5Hz)，7.90(1H，d，J＝7.6)，8.73(1H，d，J＝8.1Hz)，8.81(1H，s)，10.08(1H，s)，11.46(1H，s)；MSm/z282([M+H]+)。
分析C17H12FNO2計(jì)算值C，72.59；H，4.30；N，4.98實(shí)測(cè)值C，72.21；H，4.34；N，4.83。
實(shí)施例7三氟甲磺酸4，5-二氫-1-苯并噻吩-4-基酯向1000ml圓底燒瓶加入6，7-二氫-5H-苯并[b]噻吩-4-酮(7.36g，48.35mmol)，無水CH2Cl2(500ml)、2，6-二甲基吡啶(6.76ml，58.0mmol)，并且使該溶液冷卻至0℃。加入三氟甲磺酸酐(15g，53.2mmol)且使該反應(yīng)升至室溫。此后2小時(shí)后加入附加量的Tf2O(0.6g，2.1mmol)，該反應(yīng)用飽和NaHCO3猝滅。水溶液用CH2Cl2萃取(3x)，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮。柱色譜(10％ EtOAc-己烷)得到10.1g(74％)產(chǎn)物，其為紅色油1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.62(2H，m)，2.92(2H，t，J＝9.0Hz)，5.93(1H，t，J＝4.7Hz)，6.95(1H，d，J＝5.2Hz)，7.45(1H，d，J＝5.2Hz)。
實(shí)施例84-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩三氟甲磺酸4，5-二氫-1-苯并噻吩-4-基酯(9.0g，31.7mmol)、Na2CO3(39.6ml的2N水溶液，79.2mmol)、Pd(PPh3)4(1.83g，1.6mmol)、4-甲氧基硼酸(5.78mg，38.03mmol)和乙二醇二甲醇(350ml)的混和物加熱回流6小時(shí)。冷卻該反應(yīng)，用EtOAc稀釋并分離層。該有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮得到5.0g固體(1.44∶1比例的所需化合物[，7，6′，7′-四氫-[，4′]聯(lián)[苯并[b]硫代苯基])。將該原料溶于甲苯(50ml)并加入活化MnO2(4.5g)。將該混合物回流過夜，冷卻，過濾并濃縮得到5g固體(1.4∶1比例的[4，4′]聯(lián)[苯并[b]硫代苯基]所需化合物)。柱色譜(3∶97 EtOAc/己烷)分離出880mg的純產(chǎn)物1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.83(3H，s)，7.09(2H，d，J＝8.6Hz)，7.33(1H，d，J＝7.2Hz)，7.40-7.45(2H，m)，7.51(2H，d，J＝8.7Hz)，7.79(1H，d，J＝5.5Hz)，7.99(1H，d，1＝8.0Hz)。
實(shí)施例97-溴-4-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩向25ml圓底燒瓶加入4-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩(500mg，2.08mmol)、CH2Cl2(10ml)，并且將溶液冷卻-20℃(丙酮-水，CO2)。在0.5小時(shí)內(nèi)緩慢加入溴(8.33ml的0.25M儲(chǔ)備液，在CH2Cl2中，2.08mmol)，將該反應(yīng)繼續(xù)攪拌0.5小時(shí)。該反應(yīng)隨后用水洗滌，用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮得到460mg橙色油。由3∶97 EtOAc-己烷重結(jié)晶得到350mg(53％)的產(chǎn)物，其為白色晶體1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.83(3H，s)，7.10(2H，d，J＝8.0Hz)，7.31(1H，d，J＝7.9Hz)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz)，7.56(1H，d，J＝5.6Hz)，7.68(1H，d，J＝7.9Hz)，7.92(1H，d，J＝5.6Hz)。
分析C15H11BrOS計(jì)算值C56.44 H3.47實(shí)測(cè)值C56.25 H3.42實(shí)施例104-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩-7-甲醛向25ml圓底燒瓶的無水THF(10ml)中加入7-溴-4-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩(300mg，0.94mmol)，使該溶液冷卻至-78℃。滴加-BuLi(0.38ml在己烷中2.5M，0.94mmol)，將該溶液攪拌10分鐘，此后在-78℃下一次性加入無水DMF(0.15ml，1.9mmol)。將該反應(yīng)攪拌15分鐘，此后用水(10ml)猝滅和用醚萃取。合并有機(jī)相，用無水Na2SO4干燥并濃縮得到180mg(71.4％)的醛產(chǎn)物，其為黃色油。反相HPLC(CH3CN 0.1％ TFA，水0.1％ TFA)得到160mg的所需化合物和4-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩-2-甲醛的8∶3化合物，它們?yōu)橐粋€(gè)峰。收集另一副產(chǎn)物(7-溴-4-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩-2-甲醛，20mg)1H NMR(8∶3比例的所需化合物+7-溴-4-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩-2-甲醛)(300MHz，DMSO-d6)δ3.86(3H，s，預(yù)期+次要)，7.14(2H，d，J＝8.9Hz，次要)，7.14(2H，d，J＝8.6Hz，次要)，7.47(1H，d，J＝7.3Hz，次要)，7.54-7.67(4H，m，所需+次要)，7.99(1H，d，J＝5.6Hz，預(yù)期)，8.09(1H，d，J＝8.1Hz，次要)，8.19(1H，d，J＝7.5Hz)，8.41(1H，s，次要)，10.14(1H，s，次要)，10.27(1H，s，次要)。
分析C16H12O2S計(jì)算值C71.62 H4.51實(shí)測(cè)值C71.32 H4.50實(shí)施例114-(4-羥基苯基)-1-苯并噻吩-7-甲醛將10ml圓底燒瓶中62.5％純4-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩-7-甲醛(其余37.5％為4-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩-2-甲醛)(102mg，0.38mmol)和CH2Cl2(2ml)的溶液冷卻至-78℃。此后滴加BBr3(0.8ml1.0M在CH2Cl2中，0.8mmol)，此后該反應(yīng)變?yōu)樯罴t色。使該反應(yīng)升至室溫并在1小時(shí)后通過TLC監(jiān)測(cè)該反應(yīng)達(dá)到完全，通過傾入水(15ml)中猝滅。該混合物用醚稀釋，分離各層且水層進(jìn)一步用醚萃取。合并有機(jī)相，用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮得到綠色固體。反相HPLC(CH3CN 0.1％ TFA，水0.1％ TFA)得到50mg(52％)所需產(chǎn)物，其為黃色固體mp 203-204℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.96(2H，d，J＝8.5Hz)，7.50(2H，d，J＝8.5Hz)，7.56(1H，d，J＝5.6Hz)，7.62(1H，d，J＝7.5Hz)，7.97(1H，d，.J＝5.6Hz)，8.16(1H，d，J＝7.5Hz)，9.84(1H，s)，10.25(1H，s)；MS(ESI)m/z 253([M-H])分析C15H10O2S計(jì)算值C70.84 H3.96實(shí)測(cè)值C70.56 H3.99實(shí)施例124-(4-羥基苯基)-1-苯并噻吩-7-甲醛肟向200ml燒瓶加入2-溴苯硫醇(10.0g，52.9mmol)、碳酸鉀(8.05g，58.2mmol)和丙酮(85ml)。將該混合物攪拌15分鐘并滴加溴乙醛二甲縮醛(6.8ml，58.2mmol)。使該反應(yīng)進(jìn)行3天，此后經(jīng)過濾劑過濾并濃縮。色譜法(5％ EtOAc/己烷-15％ EtOAc/己烷)得到13.25g(90％)純產(chǎn)物，其為黃色油1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.20(2H，d，J＝5.8Hz)，3.30(6H，s)，4.58(1H，t，J＝5.8Hz)，7.11(1H，m)，7.40(2H，m)，7.61(1H，d，J＝8.0Hz)；分析C10H13BrO2S計(jì)算值C43.33 H4.73
實(shí)測(cè)值C43.40 H4.95實(shí)施例147-溴-1-苯并噻吩向500ml三頸燒瓶中加入15g的多磷酸(PPA)，此后加入氯苯(250ml)。在將該混合物加熱回流后，經(jīng)另一漏斗在2.5小時(shí)內(nèi)滴加(2-溴-苯基硫烷基)-甲醛二甲縮醛(8.0g在60ml氯苯中，28.9mmol)并繼續(xù)回流24小時(shí)。使該反應(yīng)冷卻后，經(jīng)硅膠塞過濾并濃縮得到6.04g琥珀色油。通過柱色譜進(jìn)一步純化(100％己烷)得到5.47g(89％)產(chǎn)物，其為澄清油1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.37(1H，t，J＝7.8Hz)，7.63(2H，m)，7.90(1H，d，J＝5.5Hz)，7.94(1H，d，J＝7.9Hz)。
分析C8H5BrS計(jì)算值C45.09 H2.36實(shí)測(cè)值C45.41 H2.37實(shí)施例157-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩向50ml圓底燒瓶加入Pd2(dba)3(107mg，0.117mmol)、KF(2.25g，3.9mmol)、4-甲氧基苯基硼酸(2.14g，14.1mmol)，并且向燒瓶吹入氮?dú)?。加入無水THF(25ml)，隨后將加入含在5ml THF中的7-溴-1-苯并噻吩(2.5g，11.73mmol)，再加入P(Cy)3(100mg，0.352mmol)。室溫下4小時(shí)后，觀察不到產(chǎn)物。加熱至60℃過夜得到約50％完成率。再加入2％ Pd2(dba)3(215mg)、0.1當(dāng)量硼酸(26mg)和THF后，該法也在2小時(shí)內(nèi)完全。冷卻該反應(yīng)，用醚稀釋，經(jīng)硅膠塞過濾并濃縮得到3.33g琥珀色油。通過柱色譜純化(load5％ EtOAc/己烷-10％EtOAc/己烷)得到2.75g(97.5％)產(chǎn)物，其為淺黃色固體mp74-75℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.84(3H，s)，7.11(2H，d，J＝8.7Hz)，7.37(1H，d，J＝7.1Hz)，7.48(1H，t，J＝7.6Hz)，7.54(1H，d，J＝5.5Hz)，7.67(2H，d，J＝8.7Hz)，7.79(1H，d，J＝5.5Hz)，7.86(1H，dd，J＝7.4Hz，0.8Hz)；MS(ESI)m/z 239([M-H])。
分析C15H12OS計(jì)算值C74.97 H5.03實(shí)測(cè)值C74.54 H4.86
實(shí)施例164-溴-7-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩45分鐘內(nèi)向7-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩(500mg，2.08mmol)在CH2Cl2(15ml)中的-20℃溶液內(nèi)加入Br2(8.33ml在CH2Cl2中的0.25M儲(chǔ)備液，2.08mmol)。將該反應(yīng)繼續(xù)攪拌0.5小時(shí)，用水洗滌，Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮得到得到660mg(100％)的產(chǎn)物，其為黃色固體。通過由含3％ EtOAc的己烷中重結(jié)晶進(jìn)行進(jìn)一步純化mp103-104℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.84(3H，s)，7.12(2H，d，J＝8.7Hz)，7.31(1H，d，J＝7.9Hz)，7.54(1H，d，J＝5.6Hz)，7.65(2H，d，J＝8.7Hz)，7.72(1H，d，J＝7.9Hz)，7.98(1H，d，J＝5.6Hz)。
分析C15H11BrOS計(jì)算值C56.44 H3.47實(shí)測(cè)值C56.83 H3.48實(shí)施例177-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩-4-甲醛向25ml圓底燒瓶中的無水THF(10ml)加入4-溴-7-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩(300mg，0.94mmol)，使該溶液冷卻至-100℃(N2，醚)。此后滴加BuLi(0.38ml在己烷中的2.5M，0.94mmol)，將該溶液攪拌10分鐘，此后在-100℃下一次性加入無水DMF(0.15ml，1.9mmol)。將該反應(yīng)攪拌15分鐘，隨后用水(10ml)猝滅并用醚萃取。合并有機(jī)相，用無水Na2SO4干燥，并濃縮得到60mg(24％)產(chǎn)物，其為黃色固體。注意該反應(yīng)還可以在-80℃(CO2，醚)下進(jìn)行得到定量收率的約60％預(yù)期的醛產(chǎn)物mp98-99℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.86(3H，s)，7.16(2H，d，J＝8.8Hz)，7.64(1H，d，J＝7.5Hz)，7.75(2H，d，J＝8.7Hz)，8.13(1H，d，J＝7.7Hz)，8.15(1H，d，J＝5.7Hz)，8.39(1H，d，J＝5.6Hz)，10.30(1H，s)；MS(ESI)m/z269([M+H]+)分析C16H12O2S計(jì)算值C71.62 H4.51實(shí)測(cè)值C71.29 H4.50
實(shí)施例187-(4-羥基苯基)-1-苯并噻吩-4-甲醛向50ml圓底燒瓶的CH2Cl2(8.5ml)中加入7-(4-甲氧基苯基)-1-苯并噻吩-4-甲醛(420mg，1.57mmol)，使該溶液冷卻至-78℃。向該溶液滴加BBr3(3.14ml的1.0M CH2Cl2溶液，3.13mmol)，該反應(yīng)變?yōu)樯罴t色。使該反應(yīng)升至室溫，導(dǎo)致該反應(yīng)變?yōu)樯罹G色且通過TLC監(jiān)測(cè)1小時(shí)內(nèi)反應(yīng)完畢。用水(15ml)猝滅該反應(yīng)后，用醚萃取并合并有機(jī)層，用無水Na2SO4干燥并濃縮得到460mg(＞95％)產(chǎn)物，其為略不純的綠色固體。反相HPLC(含0.1％ TFA的CH3CN/水)用于獲得分析樣品(120mg)，其為淺黃色固體mp202-204℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.97(2H，d，J＝8.5Hz)，7.60(1H，d，J＝7.6)，7.64(2H，d，J＝8.5Hz)，8.10(1H，d，J＝7.6Hz)，8.14(1H，d，J＝5.6Hz)，8.38(1H，d，J＝5.6Hz)，9.92(1H，s)，10.29(1H，s)；MS(ESI)m/z253([M-H])。
分析C15H10O2S計(jì)算值C70.84 H3.96實(shí)測(cè)值C69.34 H3.97實(shí)施例197-(4-羥基苯基)-1-苯并噻吩-4-甲醛肟向10ml圓底燒瓶的MeOH(1.5ml)中加入7-(4-羥基苯基)-1-苯并噻吩-4-甲醛(61.7mg，0.24mmol)、羥胺鹽酸鹽(34mg，0.49mmol)和無水吡啶(0.04ml，0.49mmol)，將其加熱回流1小時(shí)且隨后冷卻。該混合物用醚稀釋，用水洗滌和該有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，隨后經(jīng)過硅膠塞料。減壓下濃縮得到60mg的淺黃色固體并通過柱色譜純化(40％EtOAc-己烷)得到50mg(92％)產(chǎn)物，其為淺黃色固體mp230-231℃；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.93(2H，d，J＝8.55Hz)，7.38(1H，d，J＝7.63)，7.57(2H，d，J＝8.53Hz)，7.68(1H，d，J＝7.71Hz)，7.91(1H，d，J＝5.61Hz)，8.12(1H，d，J＝5.64Hz)，8.57(1H，s)，9.77(1H，s)，11.41(1H，s)；MS(ESI)m/z 270([M+H]+)。
分析C15H11NO2S計(jì)算值C66.90 H4.12 N5.20實(shí)測(cè)值C65.78 H4.16 N4.85。
實(shí)施例201-溴-2-(2，2-二甲氧基-乙氧基)-4-甲基苯向無水乙醇(40ml)、乙醇鈉(31.7ml 21％ wt.，86.94mmol)和2-溴-5-甲基酚(Gewali，Mohan B.；Ronald，BruceP.J.Org.Chem.1980，45，2224-2229)(16.25g，86.94mmol)的溶液內(nèi)加入2-溴-1，1-二甲氧基乙烷(16.17g，95.64mmol)。將該反應(yīng)加熱回流過夜，真空下減少并在水和醚之間分配。該水層用醚萃取且該有機(jī)物經(jīng)過硅膠塞料和濃縮得到8.71g(36％)的所需產(chǎn)物，其為淺黃色油1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ2.19(3H，s)，3.33(6H，s)，3.96(2H，d，J＝5.1Hz)，4.64(1H，t，J＝5.1Hz)，6.98(1H，d，J＝8.5Hz)，7.08(1H，dd，J＝8.4Hz，1.5Hz)，7.35(1H，d，J＝1.7Hz)。
實(shí)施例217-溴-4-甲基苯并呋喃向500ml圓底燒瓶中加入15.6g多磷酸(PPA)和無水氯苯(260ml)。將該混合物回流且在2小時(shí)內(nèi)滴加含在氯苯(60ml)中的1-溴-2-(2，2-二甲氧基-乙氧基)-4-甲基苯(8.11g，29.5mmol)。將該反應(yīng)加熱回流3小時(shí)，冷卻至室溫，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮。柱色譜(100％己烷)得到4.67g(75％)的產(chǎn)物，其為白色蠟質(zhì)固體mp32-33℃；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.46(3H，s)，7.02(1H，d，1＝7.9Hz)，7.16(1H，d，J＝2.2Hz)，7.43(1H，d，J＝7.9Hz)，8.10(1H，d，J＝2.2Hz)；MS(EI)m/z 210([M+])。
分析C9H7BrO計(jì)算值C51.22 H3.34實(shí)測(cè)值C50.83 H3.08實(shí)施例227-(4-甲氧基苯基)-4-甲基苯并呋喃將4-甲氧基苯基硼酸(1.51g，9.95mmol)、Na2CO3(10.66ml 2 N水溶液，21.32mmol)、Pd(PPh3)4(0.411g，0.355mmol)、7-溴-4-甲基苯并呋喃(1.5g，7.11mmol)和乙二醇二甲醇(75ml)的混和物加熱回流過夜。冷卻該反應(yīng)，用EtOAc稀釋并分離層.該有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮。柱色譜(10％ EtOAc/己烷)得到1.59g(94％)產(chǎn)物，其為白色蠟質(zhì)固體mp39-40℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.51(3H，s)，7.07(2H，d，J＝8.8Hz)，7.08(1H，d，J＝2.3Hz)，7.13(1H，d，J＝7.7Hz)，7.37(IH，d，J 7.6Hz)，7.79(2H，d，J＝8.8Hz)，8.04(1H，d，J＝2.2Hz)；MS(ESI)m/z 239([M+H]+)。
分析C16H14O2計(jì)算值C80.65 H5.92實(shí)測(cè)值C80.89 H5.85實(shí)施例237-(4-甲氧基苯基)-苯并呋喃-4-甲醛向7-(4-甲氧基苯基)-4-甲基苯并呋喃(1.27g，5.34mmol)在四氯化碳(150ml)中的溶液內(nèi)加入NBS(1.05g，5.87mmol)和AIBN(50mg)。將該溶液回流2小時(shí)，冷卻至室溫，將該固體過濾。此后濃縮溶液，加入無水CH3CN(50ml)。此后加入苯亞硒酸鉀(Syper，Ludwik；Mlochowski，Jacek Synthesis 1984，9，747-752)(1.33g，5.87mmol)，加入K2HPO4(0.93g，5.34mmol)，將該反應(yīng)加熱回流1小時(shí)，此后冷卻至室溫。使該溶液經(jīng)過硅膠塞料且該硅膠塞用30％ EtOAc/己烷洗滌，此后高(hi)真空下抽提CH3CN。色譜(100％ CH2Cl2)撤Ph2Se2副產(chǎn)物得到1.0g(75％)的產(chǎn)物，其為白色固體mp143-144℃；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.85(3H，s)，7.15(2H，d，J＝8.7Hz)，7.57(1H，d，J＝2.1Hz)，7.75(1H，d，J＝7.8Hz)，7.96(3H，appt)，8.33(1H，d，J＝2.1Hz)，8.04(1H，d，J＝2.2Hz)；MS(ESI)m/z253([M+H]+)。
分析C16H12O3計(jì)算值C76.18 H4.79實(shí)測(cè)值C75.71 H4.96實(shí)施例247-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-4-甲醛向25ml圓底燒瓶加入7-(4-甲氧基苯基)-苯并呋喃-4-甲醛(450mg，1.79mmol)在無水CH2Cl2(10ml)中的冷卻至-78℃的溶液。此后滴加BBr3(3.57ml的1.0M，在CH2Cl2中，3.57mmol)。令該反應(yīng)升至室溫和攪拌1小時(shí)。該反應(yīng)隨后用水猝滅，用醚稀釋，分離有機(jī)層且用無水Na2SO4干燥。該溶液經(jīng)過硅膠塞料和濃縮。色譜(1∶1 EtOAc/己烷)得到390mg(92％)的產(chǎn)物，其為淺綠色固體mp179-180℃；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.96(2H，d，J＝6.8Hz)，7.56(1H，d，J＝2.1Hz)，7.71(1H，d，J＝7.8Hz)，7.84(2H，d，J＝6.7Hz)，7.95(1H，d，J＝7.9Hz)，8.31(1H，d，J＝2.2Hz)，9.93(1H，s)10.22(1H，s)；MS(ESI)m/z 239([M+H]+)。
分析C15H10O3計(jì)算值C75.62 H4.23實(shí)測(cè)值C75.48 H4.29實(shí)施例257-(4-羥基苯基)-1-苯并呋喃-4-甲醛肟向15ml圓底燒瓶加入7-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-4-甲醛(250mg，1.05mmol)、羥胺鹽酸鹽(146mg，2.10mmol)、無水MeOH(6.5ml)和無水吡啶(0.17ml，2.10mmol)。隨即密封該燒瓶并加熱至68℃ 1小時(shí)，冷卻至室溫，用醚稀釋，分離層。該醚層用水洗滌，用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料，并濃縮得到250mg(94％)澄清產(chǎn)物，其為黃色固體。通過色譜進(jìn)一步純化(1∶1 EtOAc/己烷)用于分析檢驗(yàn)mp216-217℃；1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ6.92(2H，d，J＝8.7Hz)，7.36(1H，d，J＝2.1Hz)，7.49(2H，app s)，7.74(2H，d，J＝8.6Hz)，8.14(1H，d，J＝2.1Hz)，8.42(1H，s)，9.73(1H，s)11.36(1H，s)；MS(ES I)m/z 254([M+H]+)。
分析C15H11NO3計(jì)算值C71.14 H4.38 N5.53實(shí)測(cè)值C70.53 H4.32 N5.40。
實(shí)施例264-甲氧基-4-甲基-聯(lián)苯-3-酚將4-甲氧基苯基硼酸(4.55g，21.38mmol)、NaHCO3(32.1ml 2 N水溶液，64.2mmol)、Pd(PPh3)4(1.24g，1.07mmol)、5-碘-2甲基酚(Hodgson，Moore J.Chem.Soc.1926，2038)(5.0g，21.38mmol)和乙二醇二甲醇(225ml)的混和物加熱回流過夜。冷卻該反應(yīng)，用EtOAc稀釋并分離層.該有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮。色譜(30％ EtOAc/己烷)得到1.64g(36％)產(chǎn)物，其為白色固體和2g4-甲氧基聯(lián)苯，其為不希望的副產(chǎn)物mp146-147℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.13(3H，s)，3.78(3H，s)，6.94(1H，dd，J＝8.1Hz，2.7Hz)，7.00(3H，m)，7.09(1H，d，J＝8.1Hz)，7.48(1H，d，J＝9.SHz)，9.36(1H，s)。
分析C14H14O2計(jì)算值C78.48 H6.59實(shí)測(cè)值C77.71 H6.51實(shí)施例273-(2，2-二甲氧基-乙氧基)-4’-甲氧基-4-甲基-聯(lián)苯向NaH(357mg(600mg 60％，在礦物油中，用己烷洗滌3X)14.86mmol)加入干燥THF(100ml)、4′-甲氧基-4-甲基-聯(lián)苯-3-醇(1.59g，7.43mmol)和2-溴-1，1-二甲氧基乙烷(1.76g，10.40mmol)。該反應(yīng)在60℃下攪拌過夜，冷卻，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮得到1.66g(74％)的產(chǎn)物，其為白色固體mp39-40℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.17(3H，s)，3.38(6H，s)，3.79(3H，s)，4.09(2H，d，J＝5.2Hz)，4.73(1H，t，J＝5.2Hz)，7.00(2H，d，J＝8.8Hz)，7.09(1H，dd，J＝7.7Hz，1.5Hz)，7.15(1H，d，J＝1.2Hz)，7.18(1H，d，J＝7.8Hz)，7.62(2H，d，J＝8.8Hz)；MS(ESI)rnlz 303([M+H]+)。
分析C18H22O4計(jì)算值C71.50 H7.33實(shí)測(cè)值C71.46 H7.04實(shí)施例284-(4-甲氧基苯基)-7-甲基苯并呋喃將多磷酸(約0.5g)和氯苯的混和物回流并滴加含在氯苯(12ml)的3-(2，2-二甲氧基-乙氧基)-4′-甲氧基-4-甲基-聯(lián)苯(1.61g，5.33mmol)。4小時(shí)后，冷卻該反應(yīng)，經(jīng)過硅膠塞料(硅膠塞用醚洗滌)并濃縮得到1.26g(100％)的產(chǎn)物，其為淺棕色固體mp40-41℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.50(3H，s)，3.82(3H，s)，7.03(1H，d，J＝2.2Hz)，7.07(2H，d，J＝9.5Hz)，7.19(1H，d，J＝8.1Hz)，7.23(1H，d，J＝8.1Hz)，7.56(2H，d，J＝9.5Hz)，8.06(1H，d，J＝2.2Hz)。
分析C16H14O2計(jì)算值C80.14 H5.92
實(shí)測(cè)值C80.14 H5.78實(shí)施例294-(4-甲氧基苯基)-苯并呋喃-7-甲醛向250ml圓底燒瓶加入4-(4-甲氧基苯基)-7-甲基苯并呋喃(600mg，2.52mmol)、CC14(70ml)、NBS(490mg，2.77mmol)和催化量的AIBN(25mg)。將該反應(yīng)回流2小時(shí)，此后令該反應(yīng)冷卻，過濾出固體，濃縮溶液。加入CH3CN(30ml)、K2HPO4(440mg，2.53mmol)和苯亞硒酸鉀(630mg，2.77mmol)，該反應(yīng)回流2小時(shí)，冷卻該反應(yīng)后，經(jīng)過硅膠塞料(用30％ EtOAc/己烷洗滌)，濃縮得到810mg的橙色固體。通過色譜進(jìn)一步純化(100％ CH2Cl2)得到500mg(78％)的產(chǎn)物，其為棕色固體mp104-105℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ3.85(3H，s)，7.14(2H，d，J＝8.8Hz)，7.20(1H，d，J＝2.2Hz)，7.56(1H，d，J＝8.0Hz)，7.69(2H，d，J＝8.8Hz)，7.91(1H，d，J＝7.7Hz)，8.26(1H，d，J＝2.2Hz)，10.36(1H，s)；HRMS(ESI+)？1z253.08622([M+H]+)。
分析C16H12O3計(jì)算值C76.18 H4.79實(shí)測(cè)值C75.61 H4.73實(shí)施例304-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-7-甲醛向100ml圓底燒瓶加入4-(4-甲氧基苯基)-苯并呋喃-7-甲醛(480mg，1.90mmol)，CH2Cl2(12ml)，并且使該反應(yīng)冷卻至-78℃。此后滴加BBr3(3.8ml 1.0 M in CH2Cl2，3.8mmol)并且使該反應(yīng)升至室溫。1.5小時(shí)后，用水(15ml)猝滅該反應(yīng)，用醚萃取(3x)，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮得到160mg(35％)的產(chǎn)物，其為泡沫。色譜(1∶1 EtOAc∶己烷)得到分析樣品mp184-185℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ6.96(2H，d，J＝8.8Hz)，7.20(1H，d，J＝2.5Hz)，7.52(1H，d，J＝7.7Hz)，7.58(2H，d，J＝8.5Hz)，7.89(1H，d，J＝7.7Hz)，8.24(1H，d，J＝2.2Hz)，9.84(1H，s)，10.35(1H，s)；HRMS(ESI+)m/z239.07027([M+H]+)。
分析C15H10O3計(jì)算值C75.62 H4.23
實(shí)測(cè)值C74.52 H4.27實(shí)施例314-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-7-甲醛肟向10ml圓底燒瓶的MeOH(3.5ml)中加入4-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-7-甲醛(100mg，0.42mmol)、羥胺鹽酸鹽(58mg，0.84mmol)和無水吡啶(0.07ml，0.84mmol)，將其回流1.5小時(shí)，隨后冷卻。該混合物此后用醚稀釋，用水洗滌和該有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，進(jìn)而經(jīng)過硅膠塞料。減壓下濃縮該溶液并通過柱色譜純化(50％ EtOAc-己烷)得到30mg(28％)的產(chǎn)物，其為淺黃色固體。分離4-(7-二甲氧基甲基苯并呋喃-4-基)-酚(60mg)，其為不希望的副產(chǎn)物，在密封燒瓶?jī)?nèi)該副產(chǎn)物(60mg，0.212mmol)通過于羥胺鹽酸鹽(15mg，0.212mmol)在MeOH(2ml)中加熱65℃過夜轉(zhuǎn)化為所需化合物。該反應(yīng)隨后用醚/水稀釋，該有機(jī)層經(jīng)過硅膠塞料并濃縮得到40mg(75％)的產(chǎn)物，其為純的白色固體mp219-220℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.92(2H，d，J＝8.6Hz)，7.11(1H，d，J＝2.2Hz)，7.34(1H，d，J＝7.8Hz)，7.50(2H，d，J＝8.6Hz)，7.61(1H，J＝7.9Hz)，8.12(1H，d，J＝2.2Hz)，8.44(1H，s)，9.72(1H，s)，11.53(1H，s)；MS(ESI)m/z254([M+H]+)。
分析C15HH11NO3計(jì)算值C71.14 H4.38 N5.53實(shí)測(cè)值C71.07 H4.41 N5.51。
實(shí)施例321-(2，2-二甲氧基-乙氧基)-4-碘-2-甲基苯向1L圓底燒瓶加入4-碘-2-甲基酚(10.0g，42.7mmol)在無水DMF(300ml)中的冷卻至0℃的溶液。此后分小份緩慢將加入NaH(3.42g 60％，在礦物油中，85.5mmol)，使該反應(yīng)升至室溫(約0.5小時(shí))，此后加入2-溴-1，1-二甲氧基乙烷(10.1ml，85.5mmol)，進(jìn)而攪拌過夜。該反應(yīng)冷卻至0℃，緩慢加入5％NaOH(300ml)，并且該混合物用醚稀釋(1.5L)。分離層且水層用醚洗滌(3×500ml)。該有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并減壓下濃縮。色譜(30％ EtOAc/己烷)得到12.49(91％)產(chǎn)物，其為澄清油1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.11(3H，s)，3.35(6H，s)，3.95(2H，d，J＝5.2Hz)，4.68(1H，t，J＝5.2Hz)，6.80(1H，d，J＝8.5Hz)，7.43-7.48(2H，m)。
分析C11H15IO3計(jì)算值C41.01 H4.69實(shí)測(cè)值C40.73 H4.62實(shí)施例335-碘-7-甲基-苯并呋喃向1L三頸燒瓶加入PPA(2.0g)、無水氯苯(300ml)，并且將該混合物回流。通過加液漏斗在2小時(shí)內(nèi)緩慢加入含在氯苯(80ml)中的1-(2，2-二甲氧基-乙氧基)-4-碘-2-甲基苯(11.16g，34.66mmol)。該反應(yīng)隨后冷卻和經(jīng)過硅膠塞料(用氯苯洗滌)并濃縮得到產(chǎn)物和4-碘-2-甲基酚的混和物。柱色譜(100％己烷)得到4.49g(53％)產(chǎn)物，其為澄清油1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.44(3H，s)，6.91(1H，d，J＝2.2Hz)，7.46(1H，brs)，7.86(1H，d，J＝1.2Hz)，8.00(1H，d，J＝2.2Hz)；MS(EI)m/z 258([M]+)。
分析CgH7IO計(jì)算值C41.89 H2.73實(shí)測(cè)值C41.46 H2.63實(shí)施例345-(4-甲氧基苯基)-7-甲基-苯并呋喃將4-甲氧基苯基硼酸(4.64g，30.54mmol)、Na2CO3(31ml 2 N水溶液，61.09mmol)、Pd(PPh3)4(0.88g，0.76mmol)、5-碘-7-甲基-苯并呋喃(3.94g，15.27mmol)和乙二醇二甲醇(160ml)的混和物回流1.5小時(shí)。冷卻該反應(yīng)，加入/水(1L/50ml)并分離層。水層進(jìn)一步用醚萃取(2×500ml)。該有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮得到6.54g褐色固體。通過1H NMR分析證實(shí)所需產(chǎn)物與4-甲氧基-聯(lián)苯為約1∶1的比例(6.54g約3.69g產(chǎn)物，99％收率)，它無法通過柱色譜分離并可以用于下步。反相HPLC(CH3CN/水/0.1％ TFA)得到分析樣品，其為白色固體mp82-83℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.52(3H，s)，3.80(3H，sX，6.97(1H，d，J＝2.1Hz)，7.12(2H，d，J 8.7Hz)，7.38(1H，s)，7.60(2H，d，J＝8.7Hz)，7.66(1H，d，J＝1.4Hz)，8.01(1H，d，J＝2.1Hz)；MS(EI)m/z 238([M]+)。
分析C16H14O2
計(jì)算值C80.65 H5.92實(shí)測(cè)值C80.52 H5.55實(shí)施例355-(4-甲氧基-苯基)-苯并呋喃-7-甲醛向5-(4-甲氧基苯基)-7-甲基-苯并呋喃(1.60g，2.83g與4-甲氧基-聯(lián)苯為1∶1比例6.72mmol)在四氯化碳(190ml)中的溶液內(nèi)加入NBS(1.32g，7.40mmol)和AIBN(50mg)。將該反應(yīng)回流2小時(shí)，冷卻至室溫，過濾出該固體。隨后濃縮該溶液且加入無水CH3CN(80ml)。此后加入苯亞硒酸鉀(2.14g，9.41mmol)和K2HPO4(1.17g，6.72mmol)，并且將該反應(yīng)加熱回流1小時(shí)，此后冷卻至室溫。該溶液在高真空下經(jīng)過硅膠塞料并濃縮。色譜(100％ CH2Cl2)得到850mg(50％)產(chǎn)物，其為白色固體mp94-95℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.82(3H，s)，7.08(2H，d，J＝8.8Hz)，7.14(1H，d，J＝2.2Hz)，7.71(2H，d，J＝8.8Hz)，8.10(1H，d，J＝1.9Hz)，8.21(1H，d，J＝2.2Hz)，8.25(1H，d，J ＝1.9Hz)，10.37(1H，s)；MS(ESI)mlz253([M+H]+)。
分析C16H12O3計(jì)算值C76.18 H4.79實(shí)測(cè)值C74.96 H4.32實(shí)施例365-(4-OH-苯基)-苯并呋喃-7-甲醛向10ml圓底燒瓶加入5-(4-甲氧基-苯基)-苯并呋喃-7-甲醛(100mg，0.395mmol)和吡啶鹽酸鹽(600mg，5.2mmol)。該混合物加熱至195℃ 1小時(shí)，略冷卻，此后加入水溶解剩余的吡啶鹽酸鹽。水溶液用EtOAc萃取，經(jīng)過硅膠塞料，并濃縮。通過柱色譜進(jìn)一步純化得到76mg(81％)的產(chǎn)物，其為黃色固體mp148-149℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.86(2H，d，J＝8.7Hz)，7.09(1H，d，J＝2.2Hz)，7.55(2H，d，J＝8.6Hz)，8.02(1H，d，J＝1.8Hz)，8.16(2H，appd)，9.56(1H，s)，10.32(1H，s)；MS(ESI)7MHz 237([M-H]-)。
分析C18H10O3計(jì)算值C75.62 H4.23實(shí)測(cè)值C74.88 H4.08
實(shí)施例375-(4-羥基苯基)-1-苯并呋喃-7-甲醛肟向10ml圓底燒瓶加入5-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-7-甲醛(76mg，0.32mmol)、羥胺鹽酸鹽(44.4mg，0.64mmol)、無水MeOH(2ml)和無水吡啶(0.06ml，0.67mmol)。將該反應(yīng)加熱至68℃且反應(yīng)進(jìn)行5分鐘。隨后該反應(yīng)冷卻至室溫，用醚稀釋，分離層。該醚層用水洗滌，用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料，并濃縮得到20mg(25％)的產(chǎn)物，其為黃色固體1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.86(2H，d，J＝8.5Hz)，7.03(1H，d，J＝2.1Hz)，7.51(2H，d，J＝8.5Hz)，7.73(1H，d，J＝1.4Hz)，7.84(1H，d，J＝1.6Hz)，8.08(1H，d，J＝2.1Hz)，8.45(1H，s)9.56(1H，s)，11.57(1H，s)；MS(ESI)m/z254([M+H]+)。
分析C15H11NO3計(jì)算值C71.14 H4.38 N5.53實(shí)測(cè)值C69.67 H4.23 N5.15。
實(shí)施例382-溴-1-(2，2-二甲氧基-乙氧基)-4-甲基苯向2L圓底燒瓶加入2-溴-4-甲基酚(25g，133.66mmol)在無水DMF(940ml)中的冷卻至0℃的溶液。分小份緩慢加入NaH(10.7g 60％，在礦物油中，267.3mmol)，令該反應(yīng)升至室溫(約0.5h)，此后加入2-溴-1，1-二甲氧基乙烷(31.6ml，267.4mmol)w。使該反應(yīng)升至室溫3小時(shí)，此后升至100℃ 4小時(shí)。冷卻該反應(yīng)，經(jīng)過硅膠塞，并濃縮。該褐色混和物用EtOAc稀釋，經(jīng)過硅膠塞料再次除去褐色固體并濃縮得到24.0g(65％)琥珀酸油1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.23(3H，s)，3.37(6H，s)，4.00(2H，d，J＝5.2Hz)，4.68(1H，t，J＝5.2Hz)，7.03(1H，d，J＝8.4Hz)，7.12(1H，dd，J＝8.4Hz，1.7Hz)，7.40(1H，d，J＝1.7Hz)。
實(shí)施例397-溴-5-甲基苯并呋喃向2L圓底燒瓶加入PPA(3g)、無水氯苯(1.0L)并且使該混合物回流，此后通過加液漏斗在2小時(shí)內(nèi)緩慢加入含在氯苯(200ml)中的2-溴-1-(2，2-二甲氧基-乙氧基)-4-甲基苯(22.9g，83.3mmol)。該反應(yīng)隨后被冷卻并經(jīng)過硅膠塞(用氯苯洗滌)，濃縮得到產(chǎn)物與4-碘-2-甲基酚的混和物。柱色譜(10％ EtOAc/己烷)得到11.54g(66％)的產(chǎn)物，其為澄清油1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.40(3H，s)，7.02(1H，d，J＝2.2Hz)，7.39(1H，s)，7.45(1H，s)，8.07(1H，d，J＝2.2Hz)。
分析C9H7BrO計(jì)算值C51.22 H3.34實(shí)測(cè)值C52.54 H3.58實(shí)施例407-(4-甲氧基苯基)-5-甲基-苯并呋喃將4-甲氧基苯基硼酸(4.76g，31.3mmol)、Na2CO3(32.6 2 N水溶液，65.2mmol)、Pd(PPh3)4(1.5g，1.3mmol)、7-溴-5-甲基苯并呋喃(5.5g，26.1mmol)和乙二醇二甲醇(275ml)的混和物加熱回流12小時(shí)。冷卻該反應(yīng)，加入醚(500ml)w且分離層。水層用醚萃取且有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料并濃縮得到7.16g褐色油。通過柱色譜進(jìn)一步純化(10％ EtOAc/己烷)得到5.62g(91％)產(chǎn)物，其為澄清油1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.44(3H，s)，3.82(3H，s)，6.94(1H，d，J＝2.2Hz)，7.108(2H，d，J＝8.8Hz)，7.30(1H，s)，7.38(1H，s)，7.81(2H，d，J＝8.8Hz)，8.00(1H，d，J＝2.2Hz)。
實(shí)施例417-(4-甲氧基苯基)-苯并呋喃-5-甲醛向7-(4-甲氧基苯基)-5-甲基-苯并呋喃(4.66g，19.58mmol)在四氯化碳(560ml)中的溶液內(nèi)加入NBS(3.83g，21.54mmol)和AIBN(75mg)。使該溶液回流4小時(shí)，冷卻至室溫，減半，過濾出固體。濃縮溶液得到黃色固體并加入無水CH3CN(230ml)。隨后加入苯亞硒酸鉀(5.34g，23.5mmol)和K2HPO4(4.09g，23.48mmol)，使該反應(yīng)回流1.5小時(shí)，此后升至室溫。該溶液隨后經(jīng)過硅膠塞料并在高真空下濃縮。色譜(100％CH2Cl2)得到3.3g(67％)產(chǎn)物，其為淺橙色固體mp79-80℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.85(3H，s)，7.13(2H，d，J＝8.8Hz)，7.23(1H，d，J＝2.2Hz)，7.88(2H，d，J＝8.8Hz)，8.02(1H，d，J＝1.4Hz)，8.23(2H，m)，10.13(1H，s)；MS(ESI)m/z253([M+H]+)。
分析C16H12O3計(jì)算值C76.18 H4.79實(shí)測(cè)值C75.44 H4.85實(shí)施例427-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-5-甲醛向10ml圓底燒瓶加入7-(4-甲氧基苯基)-苯并呋喃-5-甲醛(0.50g，1.98mmol)和吡啶鹽酸鹽(1.2g，5.2mmol)。將該混合物加熱至190℃ 2小時(shí)，略冷卻，此后加入水(10ml)溶解剩余的吡啶鹽酸鹽。水溶液用EtOAc(3X)萃取，經(jīng)過硅膠塞料，并濃縮得到450mg(96％)的粗產(chǎn)物，其為淺黃色泡沫。該反應(yīng)的粗產(chǎn)物與第二批次合并(1g規(guī)模的反應(yīng))并且通過柱色譜純化(1∶1 EtOAc/己烷)得到760mg的產(chǎn)物，其為黃色固體mp154-155℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.95(2H，d，J＝8.6Hz)，7.21(1H，d，J＝2.2Hz)，7.76(2H，d，J＝8.6Hz)，7.98(1H，d，J＝1.5Hz)，8.19(1H，d，J＝1.5Hz)，8.22(1H，d，J＝2.2Hz)，9.81(1H，s)，10.12(1H，s)；MS(ESI)m/z237([M-H]-)。
分析C15H10O3計(jì)算值C75.62 H4.23實(shí)測(cè)值C75.19 H4.01實(shí)施例437-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-5-甲醛肟向25ml圓底燒瓶加入7-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-5-甲醛(400mg，1.68mmol)、羥胺鹽酸鹽(234mg，3.36mmol)、無水MeOH(10.4ml)和無水吡啶(0.272ml，3.36mmol)。將該反應(yīng)隨后加熱至68℃且使該反應(yīng)回流1小時(shí)。該反應(yīng)隨后冷卻至室溫，用醚稀釋，分離層。該醚層用水洗滌，用無水Na2SO4干燥，經(jīng)過硅膠塞料，并濃縮得到410mg(96％)產(chǎn)物，其為黃色固體。粗產(chǎn)物通過1H NMR純化(檢測(cè)到～4％ cis異構(gòu)體)和LC-MS(單峰)mp192-194℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.92(2H，d，J＝8.6Hz)，7.05(1H，d，J＝2.2Hz)，7.69-7.72(3H，m)，7.79(1H，d，J＝1.4Hz)，8.09(1H，d，J＝1.1Hz)，8.27(1H，s)，9.74(1H，s)，11.14(1H，s)；MS(ESI)m/z 254([M+H]+)。
分析C15H11NO3
計(jì)算值C71.14 H4.38 N5.53實(shí)測(cè)值C70.82 H4.22 N5.45。
實(shí)施例44用本發(fā)明的代表實(shí)例來評(píng)估其與17β-雌二醇競(jìng)爭(zhēng)ERα和ERβ兩者的性能。該試驗(yàn)方法為人們提供了測(cè)定特定化合物是否結(jié)合雌激素受體(并且因此是“雌激素的”)且是否對(duì)ERα或ERβ具有選擇性的方法。下表中給出了數(shù)值并且報(bào)告IC50。17β-雌二醇作為對(duì)比的標(biāo)準(zhǔn)參考物使用。所用方法簡(jiǎn)單描述如下。制備表達(dá)人ERα或ERβ的雌激素受體配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(D，E，& F)的大腸桿菌的粗溶胞產(chǎn)物。將兩種受體和化合物稀釋在補(bǔ)加1mM EDTA的1X Dulbecco′s PBS(DPBS)中。采用高結(jié)合標(biāo)記微量滴定平板，100uL的受體(1uG/孔)結(jié)合2nM[H]-17β-雌二醇和不同濃度的化合物。室溫下5-15小時(shí)后，該平板用DPBS/1mM EDTA洗滌并通過液體閃爍計(jì)數(shù)法測(cè)定結(jié)合放射性。該IC50被定義為總17β-雌二醇結(jié)合作用降低至50％時(shí)的化合物濃度。所得結(jié)果如下表所述。
表.1-(4′-羥基-苯基)-芳基-甲醛肟衍生物 在標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中獲得的結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明的化合物是雌激素化合物，一些化合物對(duì)于ERβ受體具有強(qiáng)烈的優(yōu)選親和力。本發(fā)明的化合物從對(duì)ERβ具有比對(duì)ERα高的優(yōu)選親和力直至對(duì)兩種的受體具有等同的親和力。所以，本發(fā)明的化合物應(yīng)至少部分基于其這樣的受體親和力選擇性能而跨越一個(gè)活性范圍。此外，由于各種新的受體配體復(fù)合物是獨(dú)特的，因而其與多種共調(diào)節(jié)蛋白的相互作用也是獨(dú)特的，本發(fā)明的化合物將依賴它們所處的細(xì)胞背景表現(xiàn)出不同的調(diào)控行為。譬如，在某些細(xì)胞類型中，化合物可以充當(dāng)雌激素激動(dòng)劑，而在其他組織內(nèi)充當(dāng)拮抗劑。具有這樣活性的化合物有時(shí)被稱作SERMs(選擇性雌激素受體調(diào)制劑)。然而，與許多雌激素不同，多種SERMs不會(huì)使子宮濕重增加。這些化合物在子宮內(nèi)是抗雌激素的，并且可以完全拮抗雌激素激動(dòng)劑在子宮組織中的營(yíng)養(yǎng)作用。然而，這些化合物在骨骼、心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中成為雌激素激動(dòng)劑。由于這些化合物的組織選擇性本質(zhì)，它們能有效治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的與雌激素缺乏(在某些組織如骨骼或心血管中)或雌激素的過量(在子宮或乳腺中)引起或有關(guān)的疾病狀態(tài)或綜合癥。
除上述細(xì)胞特異性調(diào)控作用以外，本發(fā)明的化合物還具有成為一種受體型的激動(dòng)劑而對(duì)另一種受體型是拮抗劑的潛在性。譬如，已經(jīng)證實(shí)所述的化合物可以是ERβ的拮抗劑，同時(shí)是ERα的激動(dòng)劑(Meyers，Marvin J.；Sun，Jun ；Carlson，Kathryn E.；Katzenellenbogen，BenitaS.；Katzenellenbogen，John A..R Med.Chez.(1999)，42(13)，2456-2468)。此類ERSAA(雌激素受體選擇性激動(dòng)劑拮抗劑)的活性用于在藥理學(xué)上區(qū)分這個(gè)系列的化合物中的雌激素活性。
標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法很容易用來測(cè)定指定試驗(yàn)化合物的活性性能。下列實(shí)施例簡(jiǎn)單概括了數(shù)種代表性試驗(yàn)方法。用于SERMs的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法公開在美國(guó)專利4,418,068和5,998,402。
實(shí)施例45大鼠子宮營(yíng)養(yǎng)/抗子宮營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)方法可以在未成熟大鼠子宮營(yíng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)(4天)中測(cè)定所述化合物的雌激素和抗雌激素性質(zhì)，該實(shí)驗(yàn)早已由L.J.Black和R.L.Goode公開在LifeSciences，26，1453(1980)中。未成熟Sprague Dawley大鼠(雌性，18天齡)分6組測(cè)試。動(dòng)物通過每天ip注射10uG化合物、100uG化合物(100uG化合物+1uG17β-雌二醇)進(jìn)行處理以檢查抗雌激素性，和1uG 17β-雌二醇，并且用50％ DMSO/50％鹽水作為注射載體。在第4天，通過CO2窒息法處死動(dòng)物并取出子宮和抽提過量脂質(zhì)，除去所有流體并測(cè)定濕重。將一個(gè)洞角的小切片提交給組織學(xué)分析，并且剩余物用來分離全RNA，從而評(píng)估補(bǔ)體成分3基因表達(dá)。
實(shí)施例466周的卵巢切除的大鼠試驗(yàn)方法-骨骼和心臟保護(hù)作用從Taconic Farm獲得手術(shù)后1天的卵巢切除(ovx)或假性卵巢切除的(sham ovx)的雌性Sprague Dawley CD大鼠(體重范圍240-275g)。將它們室內(nèi)圈養(yǎng)在3或4只鼠/籠中，室內(nèi)時(shí)間表為12/12(光照/黑暗)并且隨意供給食物(Purina 5K96C大鼠飼料)和水。在所有研究中動(dòng)物在到達(dá)后第1天開始進(jìn)行處理且每周給藥7天共6周。在各研究中一組年齡匹配的假性手術(shù)大鼠不接受任何處理，它們用作完整、雌激素飽滿的對(duì)照組。
所有處理是在含1％吐溫80的普通鹽水中配制為預(yù)定濃度，使該處理體積為0.1mL/100g體重。將17β-雌二醇溶解在玉米油(20μg/mL)中且皮下給藥，0.1mL/只鼠。所有劑量以三周間隔、根據(jù)組的平均體重測(cè)量進(jìn)行調(diào)整。
處理開始后5周和研究結(jié)束前1周時(shí)，評(píng)估各大鼠的骨礦物質(zhì)密度(BMD)。用XCT-960M(pQCT；Stratec Medizintechnik，Pforzheim，Germany)評(píng)估麻醉大鼠中脛骨近端的總密度和小梁密度。按照下列方法進(jìn)行測(cè)量掃描之前15分鐘時(shí)，腹膜內(nèi)注射45mg/kg氯胺酮、8.5mg/kg噻拉嗪和1.5mg/kg乙酰丙嗪麻醉大鼠。
使右后爪穿過直徑為25mm的聚碳酸酯管且將踝關(guān)節(jié)以90°和膝關(guān)節(jié)以180°輕扣在丙烯酸框架上。該聚碳酸酯管被固定到滑動(dòng)平臺(tái)上，使其保持在垂直于pQCT的穿孔。調(diào)整該平臺(tái)使股骨的遠(yuǎn)端和脛骨的近端處于掃描區(qū)域內(nèi)。進(jìn)行長(zhǎng)度為10mm和線分辨率為0.2mm的二維跟蹤檢查。在監(jiān)測(cè)器上顯示跟蹤視圖之后，定位在脛骨的近端。從距離該點(diǎn)3.4mm處開始pQCT掃描。該pQCT掃描為1mm厚，具有0.140mm大小的voxel(三維象素)，并且由穿過切片的145個(gè)投影組成。
該pQCT掃描完成后，圖像顯示在監(jiān)測(cè)器上。描繪包括脛骨但排除股骨的感興趣區(qū)域。利用反復(fù)算法自動(dòng)除去軟組織。剩余骨骼的密度(總密度)以mg/cm3報(bào)告。以同心螺旋方式剝離骨骼外部55％的皮。剩余骨骼的密度(小梁密度)以mg/cm3報(bào)告。BMD評(píng)估以后，大鼠用二氧化碳窒息法安樂死且收集血液用于膽固醇測(cè)定。取出子宮且測(cè)定重量。用單向方差分析和Dunnet試驗(yàn)比較統(tǒng)計(jì)。
實(shí)施例47MCF-7/ERE抗增殖試驗(yàn)方法試驗(yàn)化合物的儲(chǔ)備液(通常為0.1M)是在DMSO中制備，隨后用DMSO稀釋10-100倍制成1或10mM的工作溶液。把該DMSO儲(chǔ)備液儲(chǔ)存在4℃(0.1M)或-20℃(＜0.1M)中。用生長(zhǎng)培養(yǎng)基使MCF-7細(xì)胞在1周內(nèi)傳代2次[D-MEM/F-12培養(yǎng)基，其中含有10％(v/v)熱滅活胎牛血清，1％(v/v)青霉素-鏈霉素，和2mM glutaMax-1]。該細(xì)胞保持在排氣燒瓶?jī)?nèi)，該燒瓶被置于5％ CO2/95％加濕空氣恒溫箱內(nèi)和37℃下。處理前1天，將該細(xì)胞與生長(zhǎng)培養(yǎng)基一起以25,000/孔鋪板在96孔平板中并在37℃下溫育過夜。
該細(xì)胞在37℃下用50μl/孔的在試驗(yàn)培養(yǎng)基[無酚紅D-MEM/F-12培養(yǎng)基，其中含有10％(v/v)熱滅活炭提胎牛血清，1％(v/v)青霉素-鏈霉素，2mM glutaMax-1，1mM丙酮酸鈉]中1∶10稀釋的腺病毒5-ERE-tk-熒蟲素酶感染2小時(shí)。隨后該孔用150uλ的試驗(yàn)培養(yǎng)基洗滌1次。最后，該細(xì)胞在37℃下與8孔/處理的重復(fù)試樣和150uλ/孔的載體(＜0.1％ v/v DMSO)或與用試驗(yàn)培養(yǎng)基稀釋≥1000倍的化合物處理24小時(shí)。
試驗(yàn)化合物的初步篩選是以單一劑量的1μM完成，其單獨(dú)(激動(dòng)模式)或與0.1nM 17β-雌二醇(EC8O；拮抗模式)組合進(jìn)行。各96孔平板還包括一個(gè)載體對(duì)照組(0.1％ v/v DMSO)和一個(gè)激動(dòng)劑對(duì)照組(或0.1或1nM17β-雌二醇)。劑量-反應(yīng)試驗(yàn)采取激動(dòng)模式和/或拮抗模式以從10-14至10-5M的對(duì)數(shù)(log)增量實(shí)施。根據(jù)這些劑量-反應(yīng)曲線，分別得到EC50和IC50值。各處理組中終孔含有5ui的3×10-5M ICI-182，780(10-6M終濃度)作為ER激動(dòng)劑對(duì)照。
處理之后，該細(xì)胞在搖動(dòng)器上用25μl/孔的1X細(xì)胞培養(yǎng)溶解試劑(Promega Corporation)溶解15分鐘。把該細(xì)胞溶解產(chǎn)物(20μl)轉(zhuǎn)移到96孔發(fā)光計(jì)平板上，并且在MicroLumat LB 96 P發(fā)光計(jì)(EG & GBerthold)中用100μl/孔的熒蟲素酶底物(Promega Corporation)測(cè)定熒蟲素酶活性。在注射底物之前，對(duì)各孔進(jìn)行1秒背景測(cè)量。注射底物后，經(jīng)1秒延遲測(cè)定10秒熒蟲素酶活性。將該數(shù)據(jù)從發(fā)光計(jì)中轉(zhuǎn)移到Macintosh個(gè)人電腦中且用JMP軟件(SAS Institute)分析；該程序減去從各孔熒蟲素酶測(cè)量所讀取的背景，并且隨后測(cè)定各處理的平均和標(biāo)準(zhǔn)偏差。
熒蟲素酶數(shù)據(jù)通過對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，并且用Huber M-估計(jì)器向下-加權(quán)(down-weight)外偏轉(zhuǎn)換(outying transformed)的觀察結(jié)果。JMP軟件用來根據(jù)單向ANOVA(Dunnett試驗(yàn))分析轉(zhuǎn)換和加權(quán)數(shù)據(jù)?；衔锾幚砼c激動(dòng)模式中載體的對(duì)照結(jié)果比較，或者與拮抗模式中陽性激動(dòng)劑對(duì)照結(jié)果(0.1nM 17β-雌二醇)比較。對(duì)于初始單劑量試驗(yàn)，如果化合物處理的結(jié)果明顯不同于適當(dāng)?shù)膶?duì)照結(jié)果(p＜0.05)，則該結(jié)果報(bào)告為相對(duì)于17β-雌二醇對(duì)照計(jì)的百分比[即，((化合物-載體對(duì)照)/(17β-雌二醇對(duì)照-載體對(duì)照))×100]。JMP軟件還用于從非線性劑量-反應(yīng)曲線測(cè)定EC50和/或IC50值。
實(shí)施例48LDL氧化作用的抑制-抗氧化活性豬主動(dòng)脈得自屠宰場(chǎng)，洗滌，轉(zhuǎn)移到冷凍的PBS中，并且收獲主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞。為了收獲該細(xì)胞，束結(jié)出主動(dòng)脈的脈間管且夾住主動(dòng)脈的一端。將新鮮的、滅菌過濾的0.2％膠原酶(Sigma TypeI)置于脈管中并將脈管的另一端夾住形成封閉體系。主動(dòng)脈在37℃下溫育15-20分鐘，此后收集膠原酶溶液并在2000xg下離心5分鐘。將各沉淀團(tuán)懸浮在7mL的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基由無酚紅DMEM/Ham′s F12培養(yǎng)基補(bǔ)加炭提FBS(5％)、NuSerum(5％)、L-谷酰胺(4mM)、青霉素-鏈霉素(1000U/ml，100，μg/ml)和慶大霉素(75μg/ml)組成，將其接種在100mm培養(yǎng)皿內(nèi)并在37℃和5％ CO2下溫育。20分鐘后，該細(xì)胞用PBS洗滌且加入新鮮培養(yǎng)基，在24小時(shí)時(shí)重復(fù)該操作。細(xì)胞在約1周后融合。按慣例每周加入2次內(nèi)皮細(xì)胞，并且當(dāng)融合時(shí)，用胰蛋白酶作用且以1∶7比例接種。12.5μg/mL LDL的細(xì)胞介導(dǎo)的氧化作用是在被評(píng)估化合物(5μM)的存在下在37℃下進(jìn)行4小時(shí)。結(jié)果表示為通過TBARS(硫代巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì))方法測(cè)定的對(duì)氧化過程的抑制百分率，該方法用來分析游離的醛類化合物(Yagi K.，Biochem Med 15212-216(1976))。
實(shí)施例49D12下丘腦細(xì)胞試驗(yàn)方法從RCF17母體細(xì)胞系次級(jí)克隆D12大鼠下丘腦細(xì)胞并冷凍儲(chǔ)存。它們一般在DMEM∶F12(1∶1)、glutaMAX-1(2mM)、青霉素(100U/ml)-鏈霉素(100mg/ml)和10％胎牛血清(FBS)中生長(zhǎng)。將該細(xì)胞平板在含有2-10％炭提FBS的無酚紅培養(yǎng)基(DMEMF12，glutaMAX，青霉素-鏈霉素)以次級(jí)融合密度(1-4×106細(xì)胞/150mm皿)鋪板。24小時(shí)后向該細(xì)胞再次加入含有2％抽提血清的培養(yǎng)基。對(duì)于激動(dòng)活性的試驗(yàn)，細(xì)胞用10nM 17β-雌二醇或不同劑量的試驗(yàn)化合物(1mM或1μM-1mM的范圍)處理。對(duì)于拮抗活性的試驗(yàn)，該細(xì)胞用0.1nM 17β-雌二醇在存在或不存在不同劑量(100μM-1mM)試驗(yàn)化合物的條件下處理。對(duì)照皿也用DMSO處理作為陰性對(duì)照。加入激素后48小時(shí)，實(shí)施細(xì)胞溶解和結(jié)合試驗(yàn)過程。
對(duì)于各結(jié)合試驗(yàn)過程，將100-150mg蛋白質(zhì)與10nM3H-R5020+100倍過量的R5020在150ml體積中溫育。在96孔平板中準(zhǔn)備一式三份反應(yīng)(三個(gè)反應(yīng)存在R5020，三個(gè)反應(yīng)不存在R5020)。首先加入蛋白質(zhì)提取物，隨后加入3H-R5020或3H-R5020+100x未標(biāo)記R5020。該反應(yīng)在室溫下進(jìn)行1-2小時(shí)。通過加入100ml在TE pH 7.4中的冷5％炭(NoritSX-4)、0.5％葡聚糖69K(Pharmacia)終止該反應(yīng)。室溫下5分鐘后，通過離心分離(5分鐘，1000RCF，4℃)結(jié)合和未結(jié)合的配體。取出上清液(-150ml)且轉(zhuǎn)移到閃爍瓶?jī)?nèi)。此后加入閃爍液(Beckman ReadyProtein+)，在閃爍計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)樣本1分鐘。
實(shí)施例50CNS視前區(qū)中的孕酮受體將六十(60)天齡雌性Sprague-Dawley大鼠切除卵巢。把該動(dòng)物圈養(yǎng)在動(dòng)物養(yǎng)護(hù)設(shè)備中同時(shí)采取12小時(shí)光照、12小時(shí)黑暗的光周期，同時(shí)該動(dòng)物隨意獲得自來水和鼠科飼料。
將卵巢切除的動(dòng)物隨后分組，這些組被注射載體(50％ DMSO，40％PBS，10％乙醇載體)、17β-雌二醇(200ng/kg)或被試驗(yàn)的化合物。其他動(dòng)物在注射17β-雌二醇之前1小時(shí)注射試驗(yàn)化合物，以評(píng)估這種化合物的拮抗性質(zhì)。s.c.注射后6小時(shí)，用致死劑量的CO2處死動(dòng)物并收集和冷凍它們的腦部。
在-16℃的低溫恒溫箱上切取從動(dòng)物收集的組織并收集在硅烷涂層的玻片上。封固有切片的玻片隨后在保持42℃的玻片加熱器上干燥并儲(chǔ)存在-80℃的去濕玻片箱內(nèi)。加工之前，令去濕玻片箱緩慢升至室溫(-20℃下12-16小時(shí)；4℃下2小時(shí)；室溫下1小時(shí))從而消除玻片上的凝聚形成，并且由此減少組織和RNA降解。干燥玻片負(fù)載在金屬固定架上，此后在4％低聚甲醛(pH 9.0)中后固定5分鐘并按照上述方法處理。
使含有大鼠PRcDNA 9的815bp片段(配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域)的質(zhì)粒線性化并用來產(chǎn)生S 35-UTP標(biāo)記探針，它與一部分的大鼠PRmRNA互補(bǔ)。加工的固定切片的玻片與20ml的雜交混和物雜交并在55℃加濕房?jī)?nèi)溫育過夜，該雜交混和物含有核探針(4-6×106DPM/玻片)和50％甲酰胺。清晨，將玻片置于浸漬在2xSSC(0.15MNaCl，0.015M檸檬酸鈉；pH7.0)/10mM DTT中的金屬框架上。將框架全部轉(zhuǎn)移到大容器中并用2xSSC/10mM DTT在RT下洗滌15分鐘同時(shí)輕輕攪拌。此后玻片在Rnase緩沖液37℃下洗滌30分鐘，37℃下用RNase A(2mg/ml)處理30分鐘，并且在室溫下1X SSC洗滌15分鐘。此后，玻片在65℃下0.1X SSC中洗滌(2×30分鐘)以便除去非特異性標(biāo)記，室溫下0.1X SSC漂洗15分鐘和用梯度系列的醇∶醋酸銨(70％，95％，和100％)脫水。將空氣干燥的玻片置于X射線膜對(duì)面達(dá)3天，隨后照像處理。將來自所有動(dòng)物的玻片一起進(jìn)行雜交，洗滌，暴光和照像處理以消除試驗(yàn)中條件變化導(dǎo)致的差異。
實(shí)施例51大鼠熱潮紅-CNS效應(yīng)手術(shù)后得到卵巢切除的雌性、60天齡的Sprague-Dawley大鼠。手術(shù)至少在第一次處理之前8天實(shí)施。將動(dòng)物在12小時(shí)光照/黑暗周期下分別圈養(yǎng)且隨意給予標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料和水。
在每個(gè)研究中包括兩個(gè)對(duì)照組。劑量是基于mg/kg平均組體重、在含10％DMSO的芝麻油(sc研究)中或在含1.0％吐溫80的鹽水(po研究)中制備。以0.01-10mg/kg平均組體重范圍的劑量給動(dòng)物施用試驗(yàn)化合物。各試驗(yàn)中包括載體和乙炔雌二醇(EE)對(duì)照(0.1mg/kg，sc或0.3mg/kg，po)對(duì)照組。當(dāng)測(cè)試化合物的拮抗活性時(shí)，sc研究或po研究中EE分別以0.1或0.3mg/kg聯(lián)合給藥。施用該試驗(yàn)化合物最遲至測(cè)定尾皮膚溫度的當(dāng)天。
4天研究的累積階段后，每天用感興趣的化合物處理1次動(dòng)物。它們是10只動(dòng)物/處理組?；衔锏氖┯猛ㄟ^向頸背中sc注射0.1ml或口服(po)0.5ml體積。處理第3天，皮下植入嗎啡小丸(75mg硫酸嗎啡)。處理的第5天，植入1或2個(gè)附加嗎啡小丸。第8天，給約半數(shù)的動(dòng)物注射氯胺酮(80mg/kg，肌肉內(nèi))并將與MacLab數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)(APIInsturments，Milord，MA)連接的熱偶極輕扣在距尾根約1英寸的尾部。該系統(tǒng)能夠連續(xù)測(cè)量尾部皮膚溫度。測(cè)量15分鐘基線溫度，此后sc施用納洛酮(1.0mg/kg)(0.2ml)以阻斷嗎啡的作用并在此后1小時(shí)時(shí)測(cè)定尾部皮膚溫度。第9天，給余下的動(dòng)物安裝裝置并按照類似方法分析。
實(shí)施例52隔離大鼠主動(dòng)脈環(huán)的血管舒縮功能將Sprage-Dawley大鼠(240-260g)分為4組1.正常非卵巢切除(完整)的組2.卵巢切除(ovex)、載體處理的組3.卵巢切除的17β-雌二醇處理(1mg/kg/天)的組4.用試驗(yàn)化合物處理的卵巢切除的動(dòng)物(即，1mg/kg/天)動(dòng)物是在處理之前約3周被切除卵巢。各動(dòng)物通過胃飼管接受1mg/kg/天的懸浮于含1％吐溫-80的蒸餾去離子水中的硫酸17β-硫酸雌二醇或試驗(yàn)化合物。載體處理的動(dòng)物接受適當(dāng)體積的藥物處理組中所用的載體。
通過吸入CO2安樂死法和驅(qū)血法處死動(dòng)物。迅速取出其胸廓主動(dòng)脈且置于37℃生理溶液中，該溶液含有下列組合物(mM)NaCl(54.7)，KCl(5.0)，NaHCO3(25.0)，MgCl22H2O(2.5)，D-葡萄糖(11.8)和CaCl2(0.2)，向該溶液中吹入氣體CO2-O2，95％/5％，最終pH為7.4。除去外表面的外膜并將血管切為2-3mm寬的環(huán)。將環(huán)懸浮在10mL組織浴內(nèi)且一端連接在浴池的底部，而另一端連接應(yīng)力傳感器。將1克的休止張力施加在該環(huán)上。令其環(huán)平衡1小時(shí)，獲得信號(hào)并分析。
平衡之后，暴露環(huán)以增加苯福林的濃度(10-8-10-4M)并且記錄張力。隨后用新鮮緩沖液漂洗浴池3次。沖刷后，向該組織浴中加入200mML-NAME且平衡30分鐘。此后重復(fù)苯福林濃度反應(yīng)曲線。
實(shí)施例53八臂徑向迷宮-認(rèn)知增強(qiáng)作用使用抵達(dá)時(shí)重量為200-250g的雄性Sprague-Dawley、CD大鼠(Charles River，Kingston，NY)。1周內(nèi)，圈養(yǎng)大鼠，每籠4只，它們隨意獲取標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)飼料和水。籠養(yǎng)在集中室內(nèi)，該室保持在22℃且具有12小時(shí)光照/黑暗周期且光照在6:00 AM開始。習(xí)慣該設(shè)施后，將動(dòng)物單獨(dú)籠養(yǎng)且保持在自由進(jìn)食重量的85％。一旦達(dá)到穩(wěn)定重量，令大鼠適應(yīng)8臂徑向迷宮。
迷宮的結(jié)構(gòu)是改自Peele和Baron(Pharmacology，Biochemistry，和Behavior，29143-150，1988)。該迷宮高度升至75.5cm且由圓形區(qū)域組成，該圓形區(qū)域周圍是自中心徑向外展的8個(gè)臂，徑向臂彼此等距離。各個(gè)臂是長(zhǎng)58cm×高13cm。每次任務(wù)開始之前用透明有機(jī)玻璃圓柱體隔擋以將動(dòng)物圈在迷宮的中央部分。迷宮的每個(gè)臂安裝有三套與數(shù)據(jù)采集單元接口的光電池，該數(shù)據(jù)采集單元隨后與計(jì)算機(jī)相連。光電場(chǎng)用來追蹤大鼠在迷宮中的運(yùn)動(dòng)。丸粒喂食器位于各徑臂末端處飼料杯上方，在指定任務(wù)中徑臂的外部光電場(chǎng)被第一次被激活時(shí)分發(fā)兩個(gè)45mg的巧克力粒。迷宮位于實(shí)驗(yàn)室中并有黑白幾何圖形張貼在各墻壁上以起到視覺提示的作用。在所有訓(xùn)練和試驗(yàn)過程中，可聽見白噪音(～70db)。
訓(xùn)練過程由5個(gè)階段組成，各階段每天任務(wù)持續(xù)5或10分鐘。在將大鼠置于迷宮的中央部分時(shí)和取出圓柱體開始任務(wù)時(shí)之間插入10秒的時(shí)間延遲。第I階段中，將成對(duì)的限食大鼠置于迷宮上10分鐘并將45mg巧克力食物粒撒在迷宮的全部8個(gè)臂。第II階段，將各大鼠分別置于迷宮上長(zhǎng)達(dá)10分鐘的周期，并且將食物粒自中間的光電池撒播到各徑臂的食物杯。第III階段中，將各大鼠置于迷宮上長(zhǎng)達(dá)10分鐘的周期，并且將食物粒僅僅定位在各徑臂的食物杯中和四周。第IV階段中，允許各大鼠在10分鐘內(nèi)從各徑臂收集2個(gè)食物粒。重復(fù)進(jìn)入到徑臂內(nèi)被視為錯(cuò)誤。以這種方式每天訓(xùn)練大鼠直至它們獲得判斷表現(xiàn)并且在連續(xù)3天的訓(xùn)練中全部錯(cuò)誤小于或等于2。完全習(xí)慣和訓(xùn)練的時(shí)間約為3周。
試驗(yàn)化合物在磷酸鹽緩沖鹽水中制備并給予1ml/kg的體積。東莨菪堿HBr(0.3mg/kg s.c.)充當(dāng)損害試劑，導(dǎo)致錯(cuò)誤率增高(記憶的喪失)。在指定試驗(yàn)的當(dāng)天首次暴露迷宮之前30分鐘，試驗(yàn)化合物經(jīng)腹膜內(nèi)與東莨菪堿同時(shí)給藥。
為了評(píng)估試驗(yàn)化合物，設(shè)計(jì)一個(gè)重復(fù)測(cè)量的8×8平衡拉丁方，從而用最少量的動(dòng)物獲得高的試驗(yàn)效率。進(jìn)行8次試驗(yàn)任務(wù)，每周2次，并且各任務(wù)中隨機(jī)化8個(gè)處理組(載體，東莨菪堿，3個(gè)劑量的試驗(yàn)化合物與東莨菪堿組合)。各處理與其他每個(gè)處理的時(shí)間相同。所以，每次處理的剩余作用可以進(jìn)行評(píng)價(jià)并從直接處理效應(yīng)中去除。根據(jù)ANOVA，采用調(diào)整方式的Dunnett雙側(cè)試驗(yàn)進(jìn)行多重比較。
在首次暴露過程中的5分鐘內(nèi)無法完成4次正確選擇的動(dòng)物，或者在第2次暴露結(jié)束時(shí)無法完成共8次選擇的動(dòng)物，被視為″超時(shí)″該任務(wù)。任何給予一個(gè)以上劑量的試驗(yàn)化合物后″超時(shí)″的動(dòng)物被排除在分析之外。
實(shí)施例54神經(jīng)保護(hù)作用對(duì)初級(jí)皮質(zhì)神經(jīng)元培養(yǎng)物中細(xì)胞的時(shí)間依賴性死亡的抑制利用Monyer等1989，Brain Research 483347-354所述方法的改進(jìn)方案從0-1天齡的大鼠腦部制備初級(jí)皮質(zhì)神經(jīng)元。使分散的腦部組織在DMEM/10％ PDHS(妊娠供體馬血清)中生長(zhǎng)3天且隨后用阿糖胞苷(ARC)處理2天除去污染的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。第5天，除去ARC培養(yǎng)物并置于DMEM/10％ PDHS中。使用之前進(jìn)一步將神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)4-7天。
對(duì)照初級(jí)神經(jīng)元培養(yǎng)證實(shí)，培養(yǎng)物中第12-18天之間出現(xiàn)進(jìn)行性細(xì)胞死亡。在第9天將試驗(yàn)化合物加入到保持在DMEM和10％ PDHS內(nèi)的6種培養(yǎng)物中并保持其余培養(yǎng)物作為對(duì)照中之后，在第12和16天時(shí)對(duì)12種培養(yǎng)物進(jìn)行乳酸脫氫酶(LD)水平的評(píng)估。利用Wroblewski等1955，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.90210-213所述方法的改進(jìn)方案測(cè)試LD。LD是胞質(zhì)酶，它在臨床和基礎(chǔ)研究中一般用于測(cè)定組織生存力。培養(yǎng)基LD的增加直接與細(xì)胞死亡有關(guān)。
對(duì)由低血糖引發(fā)的細(xì)胞毒性的神經(jīng)保護(hù)作用將得自ATCC的C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞鋪板在含有FBS的RPMI培養(yǎng)基中并在FALCON 25cm2組織培養(yǎng)瓶中的濃度為1×10<6>細(xì)胞/ml。低血糖發(fā)作之前4小時(shí)，拋棄維持培養(yǎng)基，將單層在適當(dāng)培養(yǎng)基中洗滌2次，隨后在37℃下在無血清或無血清加試驗(yàn)化合物的條件下培養(yǎng)4小時(shí)。在添加適當(dāng)葡萄糖處理之前用Kreb′s環(huán)er磷酸鹽緩沖液洗滌2次。RPMI培養(yǎng)基含有2mg葡萄糖/ml，燒瓶分為6組，每組分別接受100％葡萄糖(2mg/ml)、80％葡萄糖(1.6mg/ml)、60％葡萄糖(1.2mg/ml)或0％葡萄糖(緩沖液)或補(bǔ)充試驗(yàn)化合物。將所有燒瓶溫育20小時(shí)且隨后用臺(tái)盼藍(lán)評(píng)估總的、活的和死亡的細(xì)胞數(shù)目。
對(duì)抗興奮毒性氨基酸的神經(jīng)保護(hù)作用將5個(gè)含有SK-N-SH成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞的培養(yǎng)皿用試驗(yàn)化合物處理，并且取5個(gè)培養(yǎng)皿用RPMI培養(yǎng)基處理。4小時(shí)后，所有細(xì)胞用NMDA(500mu M)處理5分鐘。隨后測(cè)定總的活細(xì)胞和死亡細(xì)胞。
對(duì)抗氧-葡萄糖喪失的神經(jīng)保護(hù)作用分析固縮核測(cè)定細(xì)胞凋亡皮質(zhì)神經(jīng)炎是從E18大鼠胎兒制備且鋪板在8孔室玻片上，該玻片用聚-D-賴氨酸(10ng/ml)和血清預(yù)涂層，鋪板密度為100,000細(xì)胞/孔。將細(xì)胞鋪板在含有10％FCS的高葡萄糖DMEM中并保持在37℃和10％CO2/90％空氣的恒溫箱中。次日，用補(bǔ)充B27的含高葡萄糖DMEM的培養(yǎng)基更新除去血清，且使細(xì)胞保持在恒溫箱內(nèi)，無需進(jìn)一步更換培養(yǎng)基直至試驗(yàn)當(dāng)天。第6天，將玻片分為兩組；對(duì)照組和OGD組。對(duì)照組中的細(xì)胞接受含葡萄糖和定制B27的DMEM(無抗氧劑)。OGD組中的細(xì)胞接受含定制B27的非葡萄糖DMEM，使其在真空下脫氣15分鐘。在氣密室內(nèi)向細(xì)胞吹入90％N2/10％ CO210分鐘且在37℃下培養(yǎng)6小時(shí)。6小時(shí)后，對(duì)照和OGD細(xì)胞均用在含DMEM的定制B27的葡萄糖內(nèi)含載體(DMSO)或試驗(yàn)化合物的培養(yǎng)基更換。使細(xì)胞返回到37℃的含氧量正常的恒溫箱內(nèi)。24小時(shí)后，4℃下使細(xì)胞在4％PFA中固定10分鐘且用Topro(熒光核結(jié)合染料)染色。用激光掃描細(xì)胞計(jì)數(shù)器通過測(cè)定固縮核來評(píng)價(jià)細(xì)胞凋亡。
LDH釋放的測(cè)定作為細(xì)胞死亡的指征皮質(zhì)神經(jīng)炎是從E18大鼠胎兒制備且鋪板在48孔培養(yǎng)平板上，該平板用聚-D-賴氨酸(10ng/ml)和血清預(yù)涂層，鋪板的密度為150,000細(xì)胞/孔。將細(xì)胞鋪板在含有10％FCS的高葡萄糖DMEM中并保持在37℃和10％CO2/90％空氣的恒溫箱中。次日，用補(bǔ)充B27的含高葡萄糖DMEM的培養(yǎng)基更新除去血清。第6天，將細(xì)胞分為2組；對(duì)照組和OGD組。對(duì)照組中的細(xì)胞接受含葡萄糖和定制B27的DMEM(無抗氧劑)。OGD組中的細(xì)胞接受含定制B27的非葡萄糖DMEM，將其在真空下脫氣15分鐘。在氣密室內(nèi)向細(xì)胞吹入90％N2/10％CO210分鐘且在37℃下培養(yǎng)6小時(shí)。6小時(shí)后，對(duì)照和OGD細(xì)胞均用在含DMEM和定制B27的葡萄糖內(nèi)含載體(DMSO)或試驗(yàn)化合物的培養(yǎng)基更換。使細(xì)胞返回到37℃的含氧量正常的恒溫箱內(nèi)。24小時(shí)后，通過測(cè)定細(xì)胞向細(xì)胞培養(yǎng)基中釋放的LDH(乳酸脫氫酶)來評(píng)價(jià)細(xì)胞死亡。對(duì)于LDH試驗(yàn)，將一份的501培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到96孔平板中。加入140μl 1M磷酸鉀緩沖液(pH 7.5)和100μl 0.2mg/ml NADH之后，把平板置于黑暗中室溫下20分鐘。通過加入10μl的丙酮酸鈉引發(fā)該反應(yīng)。340nM下在Thermomax平板讀數(shù)器(Molecular Devices)中立刻讀取平板。每6秒記錄吸光度共5分鐘，吸光度是NADH的一個(gè)指數(shù)并且表示NADH消失率的斜率用來計(jì)算LDH活性。
LDH活性(U/ml)＝(AA/min)(TCF)(20)(0.0833)/(.78)其中0.0833＝比例常數(shù)0.78＝儀器光程長(zhǎng)度(cm)實(shí)施例55HLA大鼠試驗(yàn)方法-克羅恩氏病和炎性腸道疾病雄性HLA-B27大鼠得自Taconic且不受限制地獲得食物(PMI Lab飼料5001)和水。研究開始時(shí)，大鼠為22-26周齡。
每天給大鼠皮下施用一個(gè)下面所列的制劑共7天。每組中有5只大鼠且在安樂死之前2小時(shí)給予末次劑量。
●載體(50％ DMSO/50％ Dulbecco氏PBS)●17α-乙炔基-17β-雌二醇(10μg/kg)●試驗(yàn)化合物每天觀察糞便質(zhì)量并按照下列等級(jí)分級(jí)腹瀉＝3；軟便＝2；正常糞便＝1。在試驗(yàn)過程結(jié)束時(shí)，收集血清并儲(chǔ)存在-70℃。準(zhǔn)備一部分的結(jié)腸用于組織學(xué)分析并且其他節(jié)段用于分析髓過氧化物酶活性。
采用下面的方法測(cè)定髓過氧化物酶活性。收獲接觸組織并快速冷凍在液氮中。使用全結(jié)腸的代表性樣本以確保樣本之間的一致性。將組織儲(chǔ)存在-80℃下直至使用為止。此后，稱量組織的重量(約500mg)并將其在1∶15 w/v的5mM H2KPO4(pH 6)洗滌緩沖液中勻漿。該組織在20,000xg和2-8℃下在Sorvall RC 5B離心45分鐘使其沉降。隨后棄去上清液。把組織重新懸浮并在2.5ml(1∶5 w/v)的50mM H2KPO4和10mMEDTA和0.5％ Hex溴化銨中勻漿以協(xié)助溶解細(xì)胞內(nèi)的MPO。將組織冷凍在液氮中，在37℃水浴中融化并超聲15秒以確保膜溶解。該過程被重復(fù)3次。隨后將樣本在冰上保持20分鐘且在12,000xg和2-8℃下離心15分鐘。按照這些步驟分析上清液。
試驗(yàn)混和物是通過向反應(yīng)管中加入2.9ml的50mM H2KPO4和0.167含0.0005％ H2O2的O-聯(lián)茴香胺/ml制成。當(dāng)過氧化氫降解時(shí)，O-聯(lián)茴香胺被氧化且在460nm下以濃度依賴方式吸收。加熱該混和物25℃。將100(100)μL的組織上清液加入到該反應(yīng)管內(nèi)，在25℃下培養(yǎng)1分鐘，此后取1ml轉(zhuǎn)移到一次性塑料比色杯內(nèi)。460nm下相對(duì)于空白每2分鐘反應(yīng)時(shí)間測(cè)定OD，該空白樣含有2.9ml反應(yīng)化合物和100μl的0.5％溴化銨溶液。
通過對(duì)比吸光度@460和由純化人MPO 31.1單位/瓶繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析酶活性。將MPO重構(gòu)并用含10mM EDTA和0.5％Hex溴化銨的50mM H2KPO4連續(xù)稀釋至四個(gè)已知濃度。相對(duì)于該曲線對(duì)比樣本的吸光度以判斷活性。
組織學(xué)分析按照下列方法進(jìn)行。將結(jié)腸組織浸漬在10％中性緩沖福爾馬林中。將各結(jié)腸標(biāo)本分為4個(gè)評(píng)估樣本。福爾馬林固定的組織在真空滲濾處理器中加工以便石蠟包埋。將樣本切片為5μm且隨后用蘇木精和曙紅(H & E)染色，以便采用Boughton-Smith后改進(jìn)的等級(jí)進(jìn)行盲法組織學(xué)評(píng)估。分級(jí)完畢之后，揭曉樣本，并且將數(shù)據(jù)制表且通過多重平均比較模型化的ANOVA線性進(jìn)行分析。
在此引用的所有專利、文獻(xiàn)和其他文章在此全文引入作為參考。
權(quán)利要求
1.式(1)的化合物 其中R1是氫，鹵素，低級(jí)烷基，CN或低級(jí)烷氧基；R2和R3一起構(gòu)成稠合芳基或雜芳基環(huán)；R4是氫，鹵素，低級(jí)烷基，CN，或低級(jí)烷氧基；R5是氫，低級(jí)烷基，或-C(O)R6；和R6是低級(jí)烷基；或其藥學(xué)可接受鹽。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R4是氫或鹵素。
3.權(quán)利要求1或2的化合物或其中R1是鹵素。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的化合物，其中R2和R3一個(gè)構(gòu)成5-或6-元環(huán)。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R2和R3一起構(gòu)成苯基、呋喃或噻吩環(huán)。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的化合物，其中R1是F和R4是氫或F。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的化合物，其中各R5是H。
8.權(quán)利要求1的化合物，它是下列之一(a)4-(4-羥基苯基)-1-萘甲醛肟；(b)4-(3-氟-4-羥基苯基)-萘-1-甲醛肟；(c)4-(4-羥基苯基)-1-苯并噻吩-7-甲醛肟；(d)7-(4-羥基苯基)-1-苯并噻吩-4-甲醛肟；(e)7-(4-羥基苯基)-1-苯并呋喃-4-甲醛肟；(f)4-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-7-甲醛肟；(g)5-(4-羥基苯基)-1-苯并呋喃-7-甲醛肟；或(h)7-(4-羥基苯基)-苯并呋喃-5-甲醛肟。
9.一種藥物組合物，其中含有權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受鹽，和藥學(xué)可接受載體。
10.一種在需要其的哺乳動(dòng)物中抑制骨質(zhì)疏松癥的方法，包括給該哺乳動(dòng)物提供有效量的權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)定義的式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
11.一種在需要其的哺乳動(dòng)物中抑制骨關(guān)節(jié)炎、低血鈣、高血鈣、Paget氏病、骨軟化癥、骨質(zhì)缺乏、多發(fā)性骨髓瘤或?qū)墙M織具有有害作用的癌癥的其他形式的方法，包括給該哺乳動(dòng)物提供有效量的權(quán)利要求1-8定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
12.一種在需要其的哺乳動(dòng)物中抑制良性和惡性異常組織生長(zhǎng)的方法，包括給該哺乳動(dòng)物提供有效量的權(quán)利要求1-8定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
13.權(quán)利要求12的方法，其中該異常組織生長(zhǎng)是前列腺肥大，子宮平滑肌瘤，乳腺癌，子宮內(nèi)膜異位，子宮內(nèi)膜癌，多囊性卵巢綜合癥，子宮內(nèi)膜息肉，良性乳腺疾病，子宮內(nèi)膜異位，卵巢癌，黑素瘤，前列腺癌，結(jié)腸癌和CNS癌。
14.一種在需要其的哺乳動(dòng)物中降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)或LDL水平；或抑制高膽固醇血癥、高血脂、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、外周血管疾病、再狹窄或血管痙攣；或抑制血管壁免受導(dǎo)致免疫介導(dǎo)的血管損傷的細(xì)胞活動(dòng)損害的方法，包括給該哺乳動(dòng)物提供有效量的權(quán)利要求1-8定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
15.一種在哺乳動(dòng)物中抑制自由基誘發(fā)的疾病狀態(tài)的方法，包括給該哺乳動(dòng)物提供有效量的權(quán)利要求1-8定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
16.一種在需要其的哺乳動(dòng)物中提供認(rèn)知增強(qiáng)作用或神經(jīng)保護(hù)作用；或者治療或抑制老年性癡呆、阿爾茨海默氏病、認(rèn)知衰退或神經(jīng)變性障礙的方法，包括給該哺乳動(dòng)物提供有效量的權(quán)利要求1-8定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
17.一種在需要其的哺乳動(dòng)物中抑制炎性腸病、潰瘍性直腸炎、克羅恩氏病、結(jié)腸炎、熱潮紅類、陰道或外陰萎縮、萎縮性陰道炎、陰道干燥、瘙癢、交媾困難、排尿困難、排尿頻繁、尿失禁、尿道感染、血管舒縮癥狀、男性脫發(fā)、皮膚萎縮、痤瘡、II型糖尿病、功能不良性子宮出血和不育癥的方法，包括給該哺乳動(dòng)物提供有效量的權(quán)利要求1-8定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
18.一種在需要其的哺乳動(dòng)物中抑制白血病，子宮內(nèi)膜切除，慢性腎臟或肝臟疾病或凝血疾病或障礙的方法，包括給該哺乳動(dòng)物提供有效量的權(quán)利要求1-8定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供具有式(I)的結(jié)構(gòu)的雌激素受體調(diào)制劑，其中R
文檔編號(hào)C07D333/52GK1791570SQ200480013445
公開日2006年6月21日 申請(qǐng)日期2004年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月16日
發(fā)明者R·E·梅肖, S·T·科恩 申請(qǐng)人:惠氏公司