專利名稱：用于治療非典型肺部感染的血管活性腸肽的生物活性物質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物的和藥理的高活性肽，用于治療非典型肺部感染(interstitial lung infection)，例如特發(fā)性肺纖維變性(idiopathic pulmonaryfibrosis，IPF)、過(guò)敏性肺炎(hypersensitive pneumonia)或者彌漫性泛細(xì)支氣管炎(diffused panbronchiolitis)。本發(fā)明用來(lái)治療上述感染的肽包含至少一種非常能保存且特殊的氨基酸序列，這種氨基酸序列明顯在同樣的肺部感染的發(fā)病機(jī)理(pathogenesis)起了重要的作用?？梢宰C明，包含上述這些序列的已知的天然肽“血管活性腸肽(Vasoactive IntestinalPeptide，VIP)”和“垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(Pituitary AdenylateCyclase-Activating Polypeptide，PACAP)”組成活性劑，它們可以成功運(yùn)用于治療特發(fā)性肺纖維變性和過(guò)敏性肺炎。此外本發(fā)明公開(kāi)了對(duì)于治療非典型肺部感染有用的組分。
背景技術(shù)：
非典型肺部感染非典型疾病是肺部慢性炎癥反應(yīng)的一種異種組。非典型肺部感染以不同的形式存在，例如特發(fā)性肺纖維變性(IPF)、過(guò)敏性肺炎，或者彌漫性泛細(xì)支氣管炎。在疾病過(guò)程中出現(xiàn)的病理生理過(guò)程通過(guò)組織損傷和夸張的組織修復(fù)的結(jié)合現(xiàn)象而特性化，這些現(xiàn)象是在程序化瘢疤形成中保持正常的細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)發(fā)生的。這個(gè)反應(yīng)的典型特征包含重復(fù)的組織破壞和劇烈的蛋白水解活性，它改變細(xì)胞外基質(zhì)組分的構(gòu)成。這些過(guò)程導(dǎo)致細(xì)胞免疫應(yīng)答延遲以及強(qiáng)烈地誘導(dǎo)間質(zhì)組織的生長(zhǎng)。
細(xì)胞因子，例如腫瘤壞死因子α，以及其它生長(zhǎng)因子比如“轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGFbeta)“已經(jīng)被長(zhǎng)期與這些過(guò)程結(jié)合起來(lái)了。通過(guò)它對(duì)間質(zhì)組織生長(zhǎng)強(qiáng)烈的刺激作用以及基于它改變細(xì)胞免疫過(guò)程的能力，TGFbeta可能是最重要的生長(zhǎng)因子。
已知如果增加TGFbeta的產(chǎn)生，那么它將在動(dòng)物模型中引起嚴(yán)重的肺纖維變性。這個(gè)生長(zhǎng)因子顯著提高的過(guò)剩表達(dá)在人類肺纖維變性中也被觀察到。TGFbeta的免疫改變作用也是有名的。它包括阻礙干擾素γ因子的產(chǎn)生，抑制依靠干擾素γ的免疫反應(yīng)，以及誘導(dǎo)免疫抑制的CD8+淋巴細(xì)胞。實(shí)際上近年來(lái)已經(jīng)被觀察到，在患者中隨著程序化纖維變性，細(xì)胞免疫也產(chǎn)生了變化，而且它獨(dú)立于最初的組織損傷。最近的研究顯示，在特發(fā)性肺纖維變性中的程序化瘢疤形成是與細(xì)胞因子平衡變化相結(jié)合，細(xì)胞因子向產(chǎn)生所謂的“T輔助細(xì)胞類型2“反應(yīng)方向變化。這個(gè)反應(yīng)是通過(guò)所謂的Th2細(xì)胞因子的增加，例如白細(xì)胞介素4(IL-4)、IL-10和IL-13，和通過(guò)干擾素γ產(chǎn)生的減少直至完全喪失而特性化的，干擾素γ是所謂的“T輔助細(xì)胞類型1“反應(yīng)主要調(diào)節(jié)因子。與纖維組織形成中慢性炎癥反應(yīng)相反，肺間質(zhì)的急性炎癥，例如細(xì)菌感染產(chǎn)生的后果，是通過(guò)T輔助細(xì)胞類型1和T輔助細(xì)胞類型2細(xì)胞因子的同步生產(chǎn)而特性化的，例如干擾素γ、IL-12和IL-4。此外還發(fā)生了TGFbeta的生產(chǎn)增加，這也許是激活的傷口愈合的標(biāo)志。
由于通常特發(fā)性肺纖維變性在后期才被識(shí)別，因此疾病中的早期細(xì)胞內(nèi)過(guò)程是幾乎不可觀察到的。傷口愈合的強(qiáng)度直接通過(guò)炎癥機(jī)制影響，而炎癥機(jī)制引起細(xì)胞外基質(zhì)組分和其它細(xì)胞內(nèi)組分轉(zhuǎn)換的提高。慢性炎癥通常通過(guò)感染產(chǎn)生，并導(dǎo)致病理上過(guò)度增加的傷口愈合反應(yīng)。即使人們知道引起炎癥的介質(zhì)，目前在市場(chǎng)上并不存在藥物，借助于它人們可以成功治療器官纖維變性。通過(guò)病理上作用組織的結(jié)構(gòu)重調(diào)，百萬(wàn)人口死于這種生命必需的器官系統(tǒng)的緩慢損壞。這個(gè)過(guò)程被描寫(xiě)為纖維變性，并通過(guò)纖維增生機(jī)制(fibroproliferative mechanism)引發(fā)和控制。現(xiàn)今唯一的解決方案是器官移植，但與之相隨的是高風(fēng)險(xiǎn)和高成本。
纖維增生反應(yīng)影響身體的所有器官。在肺的氣體交換組織中人們知道它作為肺纖維變性，在肝中作為肝硬化，在腎中作為腎小球硬化癥。這些狀況被集體稱作纖維增生的疾病。在纖維變性中健康的組織會(huì)逐步被結(jié)締組織和支持組織代替。這個(gè)過(guò)程以病理上加速的組織細(xì)胞生長(zhǎng)為基礎(chǔ)，而這通常是普通傷口愈合過(guò)程負(fù)責(zé)。因此人們將纖維增生疾病定義為沒(méi)有控制的加速傷口愈合的疾病。在纖維變性中功能器官組織被替換至完全的器官功能喪失。
現(xiàn)今人們知道多于150種不同的機(jī)制，通過(guò)它們的影響可能產(chǎn)生肺的損害，它能在自身再引起纖維增生的傷口愈合。
慢性感染、有機(jī)或者無(wú)機(jī)來(lái)源的粉末暴露、不同的藥物和自身免疫機(jī)制屬于引起疾病的機(jī)制。盡管如此，纖維變性過(guò)程是自我獨(dú)立的過(guò)程。輕微的炎癥可能導(dǎo)致纖維變性過(guò)程驚人的加速。慢性病毒病可能是頻率最高的程序性纖維變性的原因，雖然有免疫抑制的治療。相類似的是慢性細(xì)菌和真菌感染，帶或者不帶胃的打嗝反應(yīng)，它可能引起支氣管末端的慢性炎癥，這直接影響鄰近肺胞的慢性傷口愈合過(guò)程。在細(xì)胞水平，代表抗原的細(xì)胞，例如樹(shù)突細(xì)胞，在提到的疾病的病理生理中起了重要的作用。通過(guò)機(jī)能亢進(jìn)它強(qiáng)大激活比如T淋巴細(xì)胞，這導(dǎo)致慢性的免疫激活。因此這些物質(zhì)對(duì)于治療上述疾病是理想的，它們可以對(duì)樹(shù)突細(xì)胞的過(guò)度活性進(jìn)行抑制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明第一次說(shuō)明了VIP、PACAP和某些物質(zhì)臨床前的/細(xì)胞的和臨床的關(guān)系，這些物質(zhì)具有VIP或者PACAP的生物活性，用于治療非典型肺部感染，例如發(fā)性肺纖維變性(IPF)、過(guò)敏性肺炎，或者彌漫性泛細(xì)支氣管炎。
VIP和PACAP在中心神經(jīng)系統(tǒng)各種不同的區(qū)域合成，例如在特殊的腦部地區(qū)，比如海馬或者腦皮層，以及在外周神經(jīng)節(jié)。VIP還被免疫細(xì)胞釋放。
血管活性腸肽(VIP)VIP是由28個(gè)氨基酸組成的肽，并且顯示以下的氨基酸序列(從N端到C端)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID第1號(hào))。
健康的人含有VIP的濃度為大約40pg/ml血清。
VIP是分布廣泛的神經(jīng)激素，它控制非常多的生理效果，例如腸胃分泌、腸胃平滑肌的放松或者脂肪細(xì)胞的脂肪分解。在生理?xiàng)l件下VIP是神經(jīng)內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)物?？萍嘉墨I(xiàn)中的報(bào)道顯示了VIP在健康以及在惡性細(xì)胞中涉及生長(zhǎng)和繁殖的調(diào)節(jié)作用(Hultgardh et al.Growth-inhibitory properties of vasoactive intestinal polypeptide.Regul.Pept.22，267-274.1988)。生物效果通過(guò)特殊受體調(diào)節(jié)(VIP-R)，它們位于不同細(xì)胞類型的表面(Ishihara et al.，F(xiàn)unctional expression and tissue distributionof a novel receptor for vasoactive intestinal polypeptide.Neuron 8，811-819.1992)。通過(guò)誘導(dǎo)自身受體，VIP影響在成神經(jīng)細(xì)胞瘤、乳癌、肺癌和腸癌中惡性細(xì)胞的生長(zhǎng)(Moody et al.，Proc.Natl.Acad.Scid.USA，90，4345，1993)。在某些情況下VIP根據(jù)劑量誘導(dǎo)細(xì)胞分裂(Wollmannet al.，Brain Res.，624，339，1993)。VIP以及生物作用相似物和衍生物展示了在平滑肌上的放松作用(Maruno et al.，VIP inhibits basal andhistamine-stimulated proliferation of human airway smooth muscle cells.Am.J.Physiol.268，L1047-L1051，1995)，顯示了支氣管舒張活性并沒(méi)有強(qiáng)烈的心血管副作用，在哮喘、在高血壓、陽(yáng)萎、局部缺血和在神經(jīng)疾病，例如早老性癡呆中有效果(e.g.WO 9106565，EP 0536741，US3,880,826，EP 0204447，EP 0405242，WO 9527496，EP 0463450，EP0613904，EP 0663406，WO 9735561，EP 0620008)。
VIP受體被發(fā)現(xiàn)在氣管和細(xì)支氣管的上皮。它們也產(chǎn)生在巨噬細(xì)胞、毛細(xì)管周圍，在氣管和細(xì)支氣管的結(jié)締組織，在肺靜脈和動(dòng)脈的泡壁和被覆。神經(jīng)纖維肽顯示在肺中對(duì)VIP的合成負(fù)責(zé)(Dey et al.，Localization of VIP-immunoreactive nerves in airways and pulmonaryvessels of dogs，cat，and human subiects.Cell and Tissue Research 220，231-238.1981；Said，S.I.Vasoactive intestinal polypeptide(VIP)inasthma.Ann.N.Y.Acad.Sci.629，305-318.1991)。VIP減少了肺部組織的抵抗(Hamasaki et al.，Releaxant action of VIP on cat pulmonary arterycomparison with acetylcholine，isoproterenol，and PGE1.J.Appl.Physiol.54，1607-1611.1983；Iwabuchi et al.，Vasoactive intestinal peptide causesnitric oxide-dependent pulmonary vasodilation in isolated rat lung.Respiration 64，54-58.1997；Saga；T.and Said，S.I.Vasoactive intestinalpeptide relaxes isolated strips of human bronchus，pulmonary artery anlung parenchyma.Trans.Assoc.Am.Physicians.97，304-310.1984)。進(jìn)一步的研究顯示肺中VIP-R非常高的表達(dá)率，這是通過(guò)放射性標(biāo)記的VIPs的高吸收率標(biāo)明(Rader et al.，123I-labelled vasoactive intestinal peptidereceptor scintigraphy in patients with colorectal cancer.Br.J.Cancer 78，1-5.1998；Raderer et al.，Iodine-123-vasoactive intestinal peptide receptorscanning in patients with pancreatic cancer.J.Nucl.Med.39，1570.1998；Raderer et al.，Value of peptide receptor scintigraphy using(123)I-vasoactive intestinal peptide and(111)In-DTPA-D-Phel-octreotidein 194 carcinoid patientsVienna University Experience，1993 to 1998.J.Clin.Oncol.18，1331-1336.2000；Virgolini et al.，Vasoactive intestinalpeptide receptor scintigraphy.J.Nucl.Med.36，1732-1739.1995)。
垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)PACAP是由38個(gè)氨基酸組成的神經(jīng)肽，并且具有以下的氨基酸序列(從N端到C端)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys(SEQ ID第2號(hào))。
兩種形式的肽被鑒定了PACAP-38和C末端縮短的PACAP-27。PACAP-27顯示出與VIP 68％的同源性，它具有以下的氨基酸序列(從N端到C端)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu(SEQ ID第3號(hào))。
PACAP是腺苷酸環(huán)化酶的強(qiáng)大刺激物，并由此誘導(dǎo)不同細(xì)胞種類的3，5-環(huán)腺苷酸(cAMP)?；钚詣┳鳛橄虑鹉X的荷爾蒙、神經(jīng)傳遞素、神經(jīng)調(diào)節(jié)器、血管擴(kuò)張劑以及向神經(jīng)因子。PACAP刺激胰島素的釋放。作為向神經(jīng)因子，PACAP促成胚胎發(fā)生時(shí)期大腦的發(fā)展。在完全發(fā)展好的大腦中，PACAP顯示出作為神經(jīng)保護(hù)因子，在多處受傷時(shí)阻止神經(jīng)元降解。PACAP廣泛分布于大腦和周邊器官，特別是在胰腺、生殖腺以及呼吸道。三個(gè)PACAP受體被描述。受體類型I具有對(duì)于PACAP很高的親合力(和對(duì)于VIP非常低的親合力)，然而受體類型II對(duì)于PACAP和VIP的親合力是相似的。另一種PACAP特殊受體PAC1存在。
在本發(fā)明中，我們描寫(xiě)已知活性劑的用處，它適合于在藥物合成中為了預(yù)防和/或治療非典型肺病(disorder)，例如先天肺纖維變性、過(guò)敏性肺炎或者彌漫性泛細(xì)支氣管炎。
令人驚奇的是，被發(fā)現(xiàn)，具有非常能保存的十肽氨基酸序列Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID第4號(hào))的肽是樹(shù)狀細(xì)胞成熟的高效抑制劑，并且如果給患有先天肺纖維變性、過(guò)敏性肺炎或者彌漫性泛細(xì)支氣管炎的患者它們是高效的。優(yōu)先使用的物質(zhì)包含所述氨基酸序列，和包含全部10-60，優(yōu)先地10-38，最優(yōu)先地10-28或者10-27個(gè)氨基酸，以及擁有相同生物特性的物質(zhì)例如VIP和PACAP，它們也包含上述氨基酸序列。
在大體上我們發(fā)現(xiàn)，類似與VIP和PACAP的肽和多肽具有所述治療的效果和效率，它們包含以下的氨基酸序列(A)n-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-(B)m其中A，B代表每個(gè)天然的氨基酸以及A和B是相互獨(dú)立的；n，m是從0-25的替換值，n和m是相互獨(dú)立的。m的值優(yōu)先為4-18，更優(yōu)先為5-15，最優(yōu)先為10-15。
多肽或者肽，其中(A)n(如果n＞2)包含三肽序列His-Ser-Asp(SEQID第14號(hào))和/或Phe-Thr-Asp(SEQ ID第13號(hào))在N末端方向以上特殊的十肽序列，具有提高的活性。
多肽顯示特別提高的活性，其中(A)n(如果n＞2)是(X)0-Phe-Thr-Asp-(Y)p并且(X)o(如果o＞2)是(X’)q-His-Ser-Asp-(X”)r，其中X，Y，X’，X”代表天然的氨基酸；和o，p是從0-11的替換值，以及r，q是從0-4的替換值。優(yōu)先的o和p的值是0-8，更優(yōu)先的值是1-5。優(yōu)先的r的值是0-2。
包含所描述通用公式的優(yōu)先例子擁有以下氨基酸序列His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(VIP，SEQ ID第1號(hào))His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys(PACAP-38，SEQ ID第2號(hào))His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu(PACAP-27，SEQ ID第3號(hào))綜上所述，本發(fā)明涉及以下物體使用一種物質(zhì)來(lái)制備治療非典型肺部感染，例如先天肺纖維變性或者過(guò)敏性肺炎的藥物，以及所述藥物在患者中的使用，所述物質(zhì)擁有VIP或者PACAP的生物活性。
為讓本發(fā)明之上述和其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能更明顯易懂，下文特舉一較佳實(shí)施例，并配合所附圖式，作詳細(xì)說(shuō)明如下。


圖1-11顯示出VIP在人體樹(shù)狀細(xì)胞成熟上的效果。
具體實(shí)施例方式
根據(jù)發(fā)明，有治療效果的適合的物質(zhì)是具有象VIP或者PACAP同樣生物活性的物質(zhì)，以及比指定的肽和多肽高或者低的生物活性。根據(jù)發(fā)明，具有同樣或者更高生物活性的物質(zhì)優(yōu)先。所有歸算在這個(gè)組中的物質(zhì)包含氨基酸序列Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID第4號(hào))。
本發(fā)明涉及發(fā)表的肽和多肽的衍生物，它們具有相同的生物活性。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“相同的生物活性”涉及生物的，生理學(xué)的或者治療的活性或者功能性，與所述的肽和多肽的相關(guān)特性比較，優(yōu)先與VIP或者PACAP的相關(guān)特性比較。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“衍生物”涉及肽物質(zhì)，它或多或少是直接從相應(yīng)的肽例如VIP或者PACAP衍生而來(lái)的，以及例如通過(guò)增加、刪除、突變或者修飾的改變得到的，但這些并不改變?cè)茧牡纳锾匦??？墒褂玫腣IP的衍生物是例如發(fā)表在WO 8905857，WO 9106565，EP0663406和WO 9729126(Fmoc保護(hù)的VIP)。根據(jù)發(fā)明，術(shù)語(yǔ)涉及指定的肽和多肽聯(lián)合物，它由原始肽或者多肽組成，并且連結(jié)在親脂性物質(zhì)上，例如脂質(zhì)體。VIP-脂質(zhì)體發(fā)表在例如WO 9527496或者WO9735561，并且在生物可用性和保護(hù)防止蛋白質(zhì)水解方面擁有提高的優(yōu)勢(shì)。另外，術(shù)語(yǔ)也涉及片段和修飾的片段，例如被削短的片段。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“相似物”涉及結(jié)構(gòu)和組成不同于發(fā)明的肽或者多肽的物質(zhì)，優(yōu)先不同于VIP，但是并沒(méi)有改變生物特性。VIP相似物可以是自然的或者合成的肽，也可以不是肽。根據(jù)發(fā)明，VIP相似物是肽。發(fā)表的VIP相似物的例子可以在EP 0325044(環(huán)肽)、EP 0225020(鏈肽)、EP 0536741(環(huán)VIP修飾)、EP 0405242、EP 0184309和EP 0613904中找到。此術(shù)語(yǔ)也包括VIP或者PACAP相似物，它們不同于VIP或者PACAP，但是有類似于VIP的結(jié)構(gòu)。根據(jù)發(fā)明，PACAP本身以及它的削短形式PACAP-27可以是這樣的相似物。優(yōu)先的VIP/PACAP相似物是包含一個(gè)或多個(gè)普遍氨基酸序列的肽。這里的肽的例子是組氨酸異亮氨酸肽、組氨酸甲硫氨酸肽、“人類生長(zhǎng)釋放因子”(GRF)、PACAP、分泌素和胰高血糖素。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定的形態(tài)”涉及衍生物或者相似物，但是為了得到在血液和血漿中增強(qiáng)的穩(wěn)定性和增加的半衰期，原始的肽已經(jīng)被修飾。在肽通過(guò)酶活性被削成片段的情況下，這種的穩(wěn)定的形態(tài)是優(yōu)先的?？赡艿姆€(wěn)定的形態(tài)是環(huán)肽或者多肽，例如環(huán)VIP或者環(huán)PACAP、融合蛋白，優(yōu)先Fc-融合蛋白或者嵌釘多肽例如嵌釘VIP或者PACAP。合成此類多肽的方法是在當(dāng)今技術(shù)中已知的。多肽和蛋白質(zhì)可以通過(guò)附加上化學(xué)基團(tuán)而被保護(hù)，抵制蛋白質(zhì)水解。這樣的附加可以阻止蛋白水解酶與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)入物理接觸，從而防止降解。聚乙二醇就是這樣的一種結(jié)構(gòu)，它已經(jīng)被證明防止蛋白質(zhì)水解(Sada et al.，J.Fermentation Bioengineering71137-139，1991)。除了防止蛋白質(zhì)水解分裂外，生物學(xué)上活躍蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)在一定的情況下提供另外的優(yōu)勢(shì)，例如穩(wěn)定性和循環(huán)時(shí)間的提高或者免疫原性的降低。(US 4,179,337；Abuchowski et al.，Enzymes as drugs.；J.S.Holcerberg andJ.Roberts，eds.pp.367-383，1981；Francis，F(xiàn)ocus on Growth Factors 34-10；EP 0 401 384)此處所用的術(shù)語(yǔ)“融合蛋白”涉及一種物質(zhì)，特別是在穩(wěn)定形態(tài)下，它由根據(jù)發(fā)明的多肽構(gòu)成，優(yōu)先VIP或者VIP衍生物或相似物，例如PACAP，并與另外的肽或者蛋白質(zhì)融合。這樣的蛋白質(zhì)優(yōu)先是免疫球蛋白分子，更優(yōu)先它的片段，最優(yōu)先IgG分子的Fc部分，優(yōu)先IgG1分子。Fc和VIP融合蛋白質(zhì)發(fā)表在WO 200024278并且提供在血液和血漿中提高的半衰期。Fc-PACAP和Fc-PACAP-27可以引用作為進(jìn)一步的例子。
根據(jù)發(fā)明的物質(zhì)可以在合成藥物或者診斷程序中使用，這樣可以鑒定個(gè)體的病理特性。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”涉及哺乳動(dòng)物，特別是人類。物質(zhì)被使用在藥物組分和制備構(gòu)成，在這之中通常使用在藥物接受的載體和溶劑中。在本發(fā)明中描寫(xiě)的制備和物質(zhì)運(yùn)用的方法都可以在“Remington’sPharmaceutical Sciences”Mack Publishing Co.，Easton PA中找到。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“藥物上接受的支持介質(zhì)”涉及惰性的，非毒性的固體或者液體填料。
為了吸入，物質(zhì)應(yīng)該優(yōu)先作為氣霧劑利用。氣霧劑及其合成方法是在當(dāng)今技術(shù)中已知的。如果在直接治療肺部癥狀必要的條件下，使用吸入器具的氣霧劑和包含本發(fā)明中的肽或者多肽的氣霧劑，例如VIP或者PACAP是優(yōu)先的。
根據(jù)發(fā)明，物質(zhì)的治療劑量可以是每天一次或者是很少的劑量通過(guò)多次供給應(yīng)用。
聯(lián)合治療發(fā)明的化合物可以用單獨(dú)物質(zhì)的形式或者與進(jìn)一步的活性劑相聯(lián)合的形式給患者使用，這些活性劑是例如鈣水道阻塞活性劑(硫氮草酮)，免疫抑制物質(zhì)(波尼松龍)，抗菌劑比如抗生素或者抗菌素，它們特定有效抵抗葡萄狀球菌、假單胞菌、伯克霍爾德氏菌、血友病細(xì)菌、鏈球菌或者其它肺里的細(xì)菌，beta-腎上腺素受體阻止物質(zhì)以及血管緊縮素受體拮抗物或者血管緊縮素再生酶抑制劑(ramipril，雷米普利)，抗增生物質(zhì)(atorvastatin，阿托伐他汀)，內(nèi)皮素受體拮抗物(Bosentan，Altrasentan，Sitaxsentan，Enrasentan，BMS 193884，Darusentan，TBC 3711，BSF 208075，BSF 302146，SPP 301)，或者其它抗增生物質(zhì)(D-24851，Imatinib mesylate)。本發(fā)明也涉及已經(jīng)發(fā)表的肽與至少上述一種藥物的聯(lián)合治療。
令人驚奇的是，被發(fā)現(xiàn)，在上文和權(quán)利要求中定義的肽和多肽，特別是VIP和PACAP，是人體樹(shù)狀細(xì)胞成熟的抑制劑并且在治療先天肺纖維變性、過(guò)敏性肺炎或者彌漫性泛細(xì)支氣管炎中顯示出有益效果。
實(shí)例圖1-11顯示出VIP在人體樹(shù)狀細(xì)胞成熟上的效果。CD 38是成熟的樹(shù)狀細(xì)胞特有的表面蛋白質(zhì)。如果表面蛋白質(zhì)出現(xiàn)的非常少，這說(shuō)明細(xì)胞還不成熟并且因此無(wú)能力完成它們的生物功能。1μmol VIP(圖5)的應(yīng)用，或者特別是9.1μmol VIP(圖9)的應(yīng)用引起CD 83表面分子的顯著下降。這樣的下降可以通過(guò)值M138.22指出-如果在9.1μmol應(yīng)用后測(cè)量-并與未被處理的細(xì)胞(圖10)的值M181.26(圖1)相比較-用熒光激活分析細(xì)胞。這個(gè)過(guò)程包括通過(guò)熒光標(biāo)記的抗體的幫助尋找細(xì)胞表面，這些抗體是針對(duì)相應(yīng)的抗原的(這里是CD 83)。VIP在CD 83分子上的效果是特性的，原因是如果應(yīng)用相同量的VIP，其它表面分子例如所謂的MHC I(見(jiàn)圖2，6和10)或者M(jìn)HC II(見(jiàn)圖3，7和11)是更少的被阻止的。這是可以如下證明的使用9.1μmolVIP時(shí)MHC I的值M170.57與未被處理細(xì)胞的MHC I的值M1 85.59相比較，以及使用9.1μmol VIP時(shí)MHC II的值M1 77.73與未被處理細(xì)胞的MHC II的值M183.94相比較。
表格未被處理的細(xì)胞CD 83 圖1

MHC I 圖2

MHC II圖3

VIP(1μM)CD 83 圖6

MHC I 圖7


MHC II圖8

VIP(9.1μM)CD 83圖10

MHC 1 圖11

MHC II圖12

使用的縮寫(xiě)VIP ＝血管活性腸肽PACAP＝垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽
IPF＝特發(fā)性肺纖維變性TGFbeta＝轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子betalcAMP ＝3，5-環(huán)腺苷酸PHI＝組氨酸異亮氨酸肽PHM＝組氨酸甲硫氨酸肽GRF＝“人體生長(zhǎng)釋放因子”肽CD 83 ＝組分化抗原83MHC I ＝主組織相容性復(fù)合體I型分子MHC II ＝主組織相容性復(fù)合體II型分子雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例揭露如上，然其并非用以限定本發(fā)明，任何熟習(xí)此技藝者，在不脫離本發(fā)明之精神和范圍內(nèi)，當(dāng)可作些許之更動(dòng)與潤(rùn)飾，因此本發(fā)明之保護(hù)范圍當(dāng)視后附之申請(qǐng)專利范圍所界定者為準(zhǔn)。
序列表<110>蒙德生技實(shí)驗(yàn)研究所(Mondobiotech Laboratories Anstalt)<120>用于治療非典型肺部感染的血管活性腸肽的生物活性物質(zhì)<130>PMB-0304 INT<150>CH 01229/03<151>2003-07-14<160>14<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>28<212>PRT<213>Homo sapiens<400>1His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn20 25<210>2<211>38<212>PRT<213>Homo sapiens<400>2His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln15 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys20 25 30Gln Arg Val Lys Asn Lys35<210>3<211>27<212>PRT<213>Homo sapiens<400>3His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln15 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu20 25<210>4
<211>10<212>PRT<213>Homo sapiens<400>4Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu15 10<210>5<211>23<212>PRT<213>Homo sapiens<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(8)<223>X is any naturally occuring amino acid residue<400>5Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys15 10 15Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn20<210>6<211>23<212>PRT<213>Homo sapiens<400>6Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys15 10 15Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn20<210>7<211>18<212>PRT<213>Homo sapiens<400>7Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys15 10 15Tyr Leu<210>8<211>23<212>PRT<213>Homo sapiens
<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(5)<223>X is any naturally occuring amino acid residue<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(13)<223>X is any naturally occuring amino acid residue<400>8His Ser Asp Xaa Xaa Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln15 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu20<210>9<211>23<212>PRT<213>Homo sapiens<400>9His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln15 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu20<210>10<211>23<212>PRT<213>Homo sapiens<400>10His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln15 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu20<210>11<211>28<212>PRT<213>Homo sapiens<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(5)<223>X is any naturally occuring amino acid residue<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(13)
<223>X is any naturally occuring amino acid residue<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(24)..(28)<223>X at positions 24-27 may be any naturally occuring aminoacid residue；X at position 28 may be Hor any naturally occuring aminoacid residue<400>11His Ser Asp Xaa Xaa Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln15 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa20 25<210>12<211>38<212>PRT<213>Homo sapiens<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(5)<223>X is any naturally occuring amino acid residue<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(13)<223>X is any naturally occuring amino acid residue<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(24)..(38)<223>X is any naturally occuring amino acid residue<400>12His Ser Asp Xaa Xaa Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln15 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa20 25 30Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa35<210>13<211>3<212>PRT<213>Homo sapiens<400>13
Phe Thr Asp1<210>14<211>3<212>PRT<213>Homo sapiens<400>14His Ser Asp權(quán)利要求
1.一種物質(zhì)的用途，是制備藥物，用于治療患有肺病的患者，所述的肺病是直接或者間接與特發(fā)性肺病、過(guò)敏性肺炎或者彌漫性泛細(xì)支氣管炎有關(guān)聯(lián)，其中所述的物質(zhì)是肽或者多肽，其特征在于它包括以下氨基酸序列Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID第1號(hào))
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于其中所述的肽或者多肽進(jìn)一步包含以下氨基酸序列His-Ser-Asp(SEQ ID第14號(hào))；Phe-Thr-Asp(SEQ ID第13號(hào))。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于其中所述的肽或者多肽顯示以下氨基酸序列(A)n-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-(B)m其中A，B是任意一種天然存在的氨基酸，A和B相互獨(dú)立；以及n，m是替換值，代表0-25，n和m相互獨(dú)立。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于其中，如果n＞2，(A)n表示以下序列(X)o-Phe-Thr-Asp-(Y)p其中X，Y是任意一種天然存在的氨基酸，X和Y相互獨(dú)立；以及o，p是替換值，代表0-11，o和p相互獨(dú)立。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于其中，如果o＞2，(X)n表示以下序列(X’)q-His-Ser-Asp-(X”)r其中X’，X”是任意一種天然存在的氨基酸，X’和X”相互獨(dú)立；以及r，q是替換值，代表0-4，r和q相互獨(dú)立。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于所述的肽或者多肽的序列是從以下組中選出的i.Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID第4號(hào))ii.he-Thr-Asp-X1-X2-X3-X4-X5-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID第5號(hào))；iii.Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID第6號(hào))；iv.Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID第7號(hào))；v.His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID第9號(hào))；vi.His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID第10號(hào))；vii.His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11-(X12)(SEQ ID第11號(hào))；Viii.His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(VIP，SEQ ID第1號(hào))；ix.His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu(PACAP-38，SEQ ID第2號(hào))；x.His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp--X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22(SEQ ID第12號(hào))；xi.His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys(PACAP-27，SEQ ID第3號(hào))；其中X1-X22是任意一種天然存在的氨基酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6所述的用途，其特征在于其中每個(gè)所述的肽或者多肽是具有相同生物作用的相似物或者衍生物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于其中每個(gè)所述的肽或者多肽以穩(wěn)定的形態(tài)存在。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8所述的用途，其特征在于其中所述的疾病是特發(fā)性肺纖維變性。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-8所述的用途，其特征在于其中所述的疾病是過(guò)敏性肺炎。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-8所述的用途，其特征在于其中所述的疾病是彌漫性泛細(xì)支氣管炎。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-8所述的用途，其特征在于其中具有治療活性的肽以氣霧劑的形式使用。
全文摘要
一種生物的和藥理的高活性肽，用于治療非典型肺部感染，例如特發(fā)性肺纖維變性、過(guò)敏性肺炎或者彌漫性泛細(xì)支氣管炎。本發(fā)明用來(lái)治療上述感染的肽包含至少一種非常能保存且特殊的氨基酸序列，這種氨基酸序列明顯在同樣的肺部感染的發(fā)病機(jī)理起了重要的作用?？梢宰C明，包含上述這些序列的已知的天然肽“血管活性腸肽(VIP)”和“垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)”組成活性劑，它們可以抑制人類樹(shù)狀細(xì)胞的成熟并成功運(yùn)用于治療上述肺部感染。
文檔編號(hào)C07K14/575GK1917898SQ200480024479
公開(kāi)日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2004年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月14日
發(fā)明者多利·貝斐 申請(qǐng)人:蒙德生技實(shí)驗(yàn)研究所