專利名稱：組織蛋白酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般而言涉及蛋白質(zhì)活性的抑制劑，并特別涉及組織蛋白酶的抑制劑。
背景技術(shù)：
許多組織蛋白酶屬于半胱氨酸蛋白酶的木瓜蛋白酶超家族。這些蛋白酶在結(jié)締組織的正常生理學(xué)降解以及病理降解中發(fā)揮作用。組織蛋白酶在細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解和更新以及再造中起著舉足輕重的作用。這些組織蛋白酶天然地存在于多種組織中。迄今為止，許多組織蛋白酶已經(jīng)從許多來源中得到鑒定和測序，例如，組織蛋白酶B、F、H、L、K、S、W和Z已經(jīng)得到克隆。此外，在1996年5月9日出版的KhepriPharmaceuticals公司的PCT申請WO 96/13523中公開了組織蛋白酶K的序列，該申請的全文在此引為參考。組織蛋白酶L與正常的溶菌酶蛋白質(zhì)水解以及若干病態(tài)(包括但不限于黑素瘤轉(zhuǎn)移)存在復(fù)雜的關(guān)系。組織蛋白酶S與阿爾茨海默氏病和某些自體免疫紊亂(包括但不限于青少年發(fā)作糖尿病、多發(fā)性硬化、慢性天皰瘡、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、重癥肌無力、全身性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和橋本氏甲狀腺炎)、變應(yīng)性紊亂(包括但不限于哮喘)、以及外源性免疫反應(yīng)(包括但不限于器官移植排斥或者組織移植排斥)存在復(fù)雜的關(guān)系。在腫瘤中發(fā)現(xiàn)升高的組織蛋白酶B水平和酶的重新分布，表明該酶在腫瘤發(fā)病和轉(zhuǎn)移中起一定作用。此外，異常的組織蛋白酶B活性與某類疾病狀態(tài)(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、卡氏肺囊蟲、急性胰炎、炎性氣道疾病和骨與關(guān)節(jié)病癥)存在復(fù)雜的關(guān)系。
已知半胱氨酸蛋白酶抑制劑如E-64(反-環(huán)氧琥珀酰-L-亮氨酰胺-(4-胍基)丁烷)可有效抑制骨吸收。參閱Delaisse，J.M.等人，1987，Bone，8305-313，其全文在此引為參考。最近，對組織蛋白酶K進(jìn)行了克隆并發(fā)現(xiàn)其特異性地表達(dá)于破骨細(xì)胞中。參閱Tezuka，K.等人，1994，J Biol Chem，2691106-1109；Shi G.P.等人，1995，F(xiàn)EBS Lett，357129-134；Bromme，D.和Okamoto，K.，1995，BiolChem Hoppe Seyler，376379-384；Bromme D.等人，1996，J BiolChem，2712126-2132；Drake，F(xiàn).H.等人，1996，J Biol Chem，27112511-12516，其全文在此引為參考。與該克隆同時(shí)存在的是，描繪了常染色體隱性病癥和致密性成骨不全癥(其特征在于骨吸收縮小的骨硬化表型)與存在于該組織蛋白酶K基因中的突變相關(guān)。迄今為止，已知在組織蛋白酶K基因中鑒定的所有突變都可以導(dǎo)致失活的蛋白質(zhì)。參閱Gelb，B.D.等人，1996，Science，2731236-1238；Johnson，M.R.等人，1996，Genome Res，6105O-1055，其全文在此引為參考。因此，組織蛋白酶K似乎與破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收相關(guān)。
將組織蛋白酶K合成為37kDa前酶原，該前酶原被局限于溶菌酶層，并且通常認(rèn)為它在低pH值下會(huì)被自動(dòng)活化成成熟的27kDa酶。參閱McQueney，M.S.等人，1997，J Biol Chem，27213955-13960；Littlewood-Evans，A.等人，1997，Bone，2081-86，其全文在此引為參考。組織蛋白酶K與在氨基酸水平上有56％的序列同一性的組織蛋白酶S最緊密相關(guān)。組織蛋白酶K的S2P2底物專一性與組織蛋白酶S相似，對于帶正電荷的殘基(例如精氨酸)和疏水性殘基(例如苯丙氨酸或者亮氨酸)而言分別在P1和P2位上優(yōu)先。參閱Bromme，D.等人，1996，J Biol Chem，2712126-2132；Bossard，M.J.等人，1996，J Biol Chem，27112517-12524，其全文在此引為參考。組織蛋白酶K在廣泛的pH范圍內(nèi)有活性，在pH值4～8下具有顯著的活性，由此使它在pH值為約4～5的破骨細(xì)胞的吸收腔中具有優(yōu)良的催化活性。
人類I型膠原，骨中的主要膠原，是組織蛋白酶K的優(yōu)良底物。參閱Kafienah，W.等人，1988，Biochem J，331727-732，其全文在此引為參考。對組織蛋白酶K使用反義寡核苷酸的體外試驗(yàn)已經(jīng)顯示了減少了的體外骨吸收，這可能是由于組織蛋白酶K mRNA翻譯的減少所導(dǎo)致的。參閱Inui，T.等人，1997，J Biol Chem，2728109-8112，其全文在此引為參考。已經(jīng)對組織蛋白酶K的晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析。參閱McGrath，M.E.等人，1997，Nat Struct Biol，4105-109；Zhao，B.等人，1997，Nat Struct Biol，4109-11，其全文在此引為參考。同樣，已經(jīng)開發(fā)了基于肽的選擇性的組織蛋白酶K的抑制劑。參閱Bromme，D.等人，1996，Biochem J，31585-89；Thompson，S.K.等人，1997，Proc Natl Acad Sci USA，9414249-14254，其全文在此引為參考。因此，組織蛋白酶K抑制劑能夠降低骨吸收。這些抑制劑可用于治療涉及骨吸收的病癥，例如骨質(zhì)疏松癥。
發(fā)明概述本發(fā)明提供在需要治療和/或預(yù)防的哺乳動(dòng)物中能夠治療和/或預(yù)防組織蛋白酶依賴狀態(tài)或者疾病態(tài)的化合物。本發(fā)明提供下面的通式化合物 其中R4是具有吸電子性質(zhì)的非氫取代基，其與R1、R2和R2一起足以將水介質(zhì)中氮的pKa降至小于6，其中R1是結(jié)合于組織蛋白酶活性部位的S1亞位點(diǎn)的取代基，和其中R2是結(jié)合于組織蛋白酶活性部位的S2亞位點(diǎn)的取代基，和其中R3是結(jié)合于組織蛋白酶活性部位的S3亞位點(diǎn)的取代基。
更具體而言，本發(fā)明提供下面的通式化合物 其中R1是結(jié)合于組織蛋白酶活性部位的S1亞位點(diǎn)的取代基，和其中R2是結(jié)合于組織蛋白酶活性部位的S2亞位點(diǎn)的取代基，和其中R3是結(jié)合于組織蛋白酶活性部位的S3亞位點(diǎn)的取代基。
為了描述蛋白酶抑制劑的活性部位，已經(jīng)提出了專門的命名法。參閱美國專利號(hào)6,333,402，在此引入作為參考。從底物的易斷開的鍵的氨基側(cè)鏈上的殘基處開始，并從該鍵處離開，殘基被命名為P1、P2和P3等。將跟在易裂開的鍵之后的殘基稱為P1’、P2’和P3’等。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，具有非常不同整體結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)抑制劑的主鏈在P3和P3’之間的區(qū)域非常類似，同時(shí)對于P2、P1和P1’而言是尤其高度類似的。人們通常認(rèn)為各蛋白酶活性部位具有亞位點(diǎn)S1和S2等以及亞位點(diǎn)S1’和S2’等，S1和S2容納底物或者抑制劑的殘基P1和P2等的側(cè)鏈基團(tuán)，S1’和S2’容納底物或者抑制劑的P1和P2等的側(cè)鏈基團(tuán)。S亞位點(diǎn)和P側(cè)鏈基團(tuán)之間的相互作用產(chǎn)生蛋白酶對于底物的特異性和抑制劑對于蛋白酶的特異性。這種命名法通常涉及蛋白酶的非肽抑制劑，其中與蛋白酶亞位點(diǎn)S1和S2等相互作用的非肽區(qū)域?qū)⒎謩e被稱為P1和P2等。
二肽組織蛋白酶抑制劑中的P2-P3酰胺鍵可以被取代的乙胺殘基所替換。R1、R2、R2和R4的吸電子性能集合起來使得P4胺在生理pH值下變成非堿性的。由此，該片段能夠與組織蛋白酶整個(gè)木瓜蛋白酶族中保守的組織蛋白酶甘氨酸形成重要的中性氫鍵。
酰胺和苯胺都能夠與羰基形成氫鍵，但是具有新陳代謝的傾向。乙胺本身是堿性的并且在生物系統(tǒng)中被質(zhì)子化，產(chǎn)生一個(gè)能夠降低與目標(biāo)酶結(jié)合的電荷。具有充分吸電子的R4(或者更具體而言為三氟乙胺)時(shí)，胺不被質(zhì)子化并且胺與組織蛋白酶活性部位中的受體氧形成更強(qiáng)的氫鍵。在組織蛋白酶中，重要的受體氧位于活性部位的S2和S3亞位點(diǎn)之間；在組織蛋白酶K中受體氧是Gly66。該殘基是在蛋白質(zhì)的這個(gè)整個(gè)木瓜蛋白酶族之中的保守殘基，并包括組織蛋白酶B、F、H、K、L、L2、O、S、W和Z、falcipain、falcipain-1和falcipain-2。因此，使用非堿性乙胺連接子連接與組織蛋白酶S2和S3亞位點(diǎn)結(jié)合的抑制劑片段，能夠產(chǎn)生比使用相應(yīng)酰胺更為有效的抑制作用。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及具有下面化學(xué)式的物質(zhì)的組合物 和具有不超過70個(gè)各自獨(dú)立地選自C、O、N、S、P、F、Cl、Br或者I的非氫原子；其中R4是非氫的吸電子取代基，從而使得其與R1、R2和R2一起使氮的堿性降低至pKa小于6；
其中組合物分子與組織蛋白酶相互作用，使得化學(xué)式中的CH-NH區(qū)域與組織蛋白酶在S2和S3之間有利地進(jìn)行相互作用，R1與組織蛋白酶活性部位的S1而非S3有利地進(jìn)行相互作用，R2與組織蛋白酶活性部位的S2而非S3有利地進(jìn)行相互作用，以及R2與組織蛋白酶活性部位的S3而非S2或者S1有利地進(jìn)行相互作用。
在本發(fā)明的一組技術(shù)方案中，組織蛋白酶選自組織蛋白酶B、F、H、K、L、L2、O、S、W和Z。在本發(fā)明的一個(gè)亞組中，組織蛋白酶選自組織蛋白酶K、L、S和B。在本發(fā)明的另一個(gè)亞組中，組織蛋白酶是組織蛋白酶L。在本發(fā)明的另一個(gè)亞組中，組織蛋白酶是組織蛋白酶S。在本發(fā)明的另一個(gè)亞組中，組織蛋白酶是組織蛋白酶B。在本發(fā)明另一個(gè)亞組中，組織蛋白酶是組織蛋白酶F。
在本發(fā)明的一組技術(shù)方案中，R4并不分別與組織蛋白酶活性部位的亞位點(diǎn)S2、S3和S1有利地進(jìn)行相互作用。在本發(fā)明的另一類中，R4選自-CF3、-CH2F、-CF2R5和-CHFR5，其中R5是任選地被1～4個(gè)取代基取代的C1-6烷基、芳基或者雜芳基，這些取代基選自鹵素、C1-3烷基、C1-3烷氧基、羥基、羥基烷基、酮、氰基、雜環(huán)基、C3-8環(huán)烷基、SOmC1-3烷基、NH2、NO2或者O(C＝O)C1-3烷基，其中m是0～2的整數(shù)。
在本發(fā)明的一組技術(shù)方案中，R2具有至少一個(gè)同時(shí)滿足以下三個(gè)距離標(biāo)準(zhǔn)的碳原子或者硫原子，該距離標(biāo)準(zhǔn)為它在組織蛋白酶Cα26的7范圍內(nèi)、在組織蛋白酶Cα68的8.5范圍內(nèi)和在組織蛋白酶Cα134的7范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一類中，R2包括非極性區(qū)域。在本發(fā)明的另一類中，R2包括親油的區(qū)域。
在本發(fā)明的一組技術(shù)方案中，R1包括穩(wěn)定地與組織蛋白酶活性部位的亞位點(diǎn)S1配合的區(qū)域，具有至少一個(gè)在組織蛋白酶Cα25的5范圍內(nèi)的碳原子。在本發(fā)明的另一類中，R1是非免疫原性的。
在本發(fā)明的一組技術(shù)方案中，R2具有至少一個(gè)同時(shí)滿足以下兩個(gè)距離標(biāo)準(zhǔn)的碳原子或者硫原子，該距離標(biāo)準(zhǔn)為它在組織蛋白酶Cα66的7范圍內(nèi)和在組織蛋白酶Cα60的7范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一類中，R2包括非極性區(qū)域。在本發(fā)明的另一類中，R2包括親油的區(qū)域。
在本發(fā)明的一組技術(shù)方案中，氮的pKa小于6并且與組織蛋白酶甘氨酸66的組織蛋白酶酰胺羰基形成一個(gè)氫鍵。
在本發(fā)明的一組技術(shù)方案中，化合物具有小于1000道爾頓的分子量。在本發(fā)明的一組技術(shù)方案中，化合物與組織蛋白酶的半胱氨酸25形成共價(jià)鍵。在本發(fā)明的一組技術(shù)方案中，化合物與組織蛋白酶的活性部位結(jié)合，在純化的酶活性測定中IC50小于10微摩爾。
在本發(fā)明的一組技術(shù)方案中，在權(quán)利要求1中所示的仲胺氮在水介質(zhì)中的pKa小于5。
在本文中使用的術(shù)語“親油的”，是指一種作為單獨(dú)實(shí)體的化合物，與溶解于水相比更易溶于非極性溶劑(例如環(huán)己烷)。術(shù)語“親油基”，在上下文中它連接在分子上，是指具有高烴含量的分子的一個(gè)區(qū)域，從而使得基團(tuán)對非極性溶劑或者脂質(zhì)產(chǎn)生高親合力。親油基可以是，例如少于30個(gè)碳原子的烷基鏈或者環(huán)烷基鏈(優(yōu)選為正烷基)。更進(jìn)一步來說，親油基包括連接于天然形成的和合成的芳香和非芳香部分的烷基鏈，例如脂肪酸、酯和醇以及其它脂類分子。親油分子的其它實(shí)例是籠形結(jié)構(gòu)(例如金剛烷和巴克敏斯特富勒烯)和芳香烴(例如苯、苝、菲、蒽、萘、芘、 和四并苯)。在此使用的術(shù)語“親油基”特別包括烷基鏈、環(huán)烷基鏈、芳環(huán)或者雜芳環(huán)的碳原子和連接的氫原子。在此使用的術(shù)語“親油基”還包括二價(jià)硫原子。
術(shù)語“基本上同源的”，當(dāng)連同氨基酸序列一起使用時(shí)，是指在序列上基本相同或者類似的序列，這引起構(gòu)象同源性并且由此引起類似的生物活性。該術(shù)語并不打算隱含共同的序列起源。一般“基本上同源的”序列是在次序上，至少在任何已知涉及期望活性的區(qū)域上，至少有50％的序列相同，更優(yōu)選至少80％相同。最優(yōu)選除了末端基團(tuán)之外，至多有五個(gè)殘基不同。優(yōu)選在序列上的異差至少在上述區(qū)域內(nèi)為“保守的變形”形式。
“保守的變形”被定義為(a)如下文定義的氨基酸的保守置換；和(b)在末端、在中間區(qū)域邊界、在環(huán)內(nèi)或者其它相對高活動(dòng)性的部分(例如通過X射線衍射分析或者NMR無法清楚解析的所示部分)，氨基酸的單個(gè)或多重插入或者消去。優(yōu)選除了在末端之外，至多約五個(gè)氨基酸在特定位點(diǎn)被插入或者消去，以及已知變形是在含有對活性而言重要的結(jié)合部位的外部區(qū)域。
保守置換在此定義為在以下五組中的一組內(nèi)進(jìn)行交換，五組為(1)小的脂肪族非極性或者輕微極性的殘基丙氨酸(Ala)、絲氨酸(Ser)和蘇氨酸(Thr)(脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly))；(2)極性帶負(fù)電荷的殘基和它們的酰胺天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酸(Glu)和谷氨酰胺(Gln)；(3)極性的帶正電荷的殘基組氨酸(His)、精氨酸(Arg)和賴氨酸(Lys)；(4)大的脂肪族非極性殘基蛋氨酸(Met)、亮氨酸(Leu)、異亮氨酸(Ile)和纈氨酸(Val)(半胱氨酸(Cys))；和(5)大的芳香殘基苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)和色氨酸(Trp)。殘基Pro、Gly和Cys用圓括號(hào)括起是因?yàn)樗鼈兙哂刑貏e的構(gòu)象作用。Cys參與二硫鍵的形成。甘氨酸賦予鏈以撓性。脯氨酸賦予鏈以剛性和破壞α-螺旋。這些殘基在多肽某些區(qū)域可能是基本的殘基，但是在其它地方是可替換的。半保守置換被定義為在上述(1)～(5)組的兩組間的交換，上述五組可以限定為超群(a)，包括上述的組(1)、(2)和(3)，或者限定為超群(b)，包括上述的組(4)和(5)。
在此使用的術(shù)語“組織蛋白酶”是指屬于木瓜蛋白酶族的酶，即其中酶的活性形式以類似于木瓜蛋白酶的方式進(jìn)行折疊(在NCBIConserved Domain數(shù)據(jù)庫中為Conserved Domain smart00645.7，http//www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/cddsrv.cgi？uid＝15045)。在此僅僅涉及人類、鼠、兔、靈長類動(dòng)物、大鼠和小鐮瘧原蟲中的組織蛋白酶。人類組織蛋白酶特別包括組織蛋白酶B、F、H、K、L、L2、O、S、W和Z；還特別包括鼠、兔、靈長類動(dòng)物和大鼠中的酶，這些酶與最相似的在先所述人類組織蛋白酶相比顯示出超過80％序列同一性(比較酶的活性形式)。還特別包括小鐮瘧原蟲中的falcipain、falcipain-1和falcipain-2，和與這些酶最相似的，顯示出超過80％序列同一性的任何其它小鐮瘧原蟲酶，同樣比較酶的活性形式。
組織蛋白酶中的特定的氨基酸殘基(例如甘氨酸66)或者Cα(例如Cα66)是指通過用于組織蛋白酶K活性形式和

圖1給出的基本序列比對的殘基編號(hào)的組合。此序列比對用于如圖中標(biāo)記的人類組織蛋白酶和falcipains的蛋白質(zhì)活性形式的相關(guān)部分。在附圖中，給出了本文中涉及的一些關(guān)鍵殘基編號(hào)，編排成為垂直于上述比對的序列的形式。涉及的其它殘基編號(hào)可以通過沿最接近的編號(hào)殘基計(jì)算或者通過直接參考組織蛋白酶K序列得到。編號(hào)以人類組織蛋白酶的KSWISSPROT主索引登記#P43235為基準(zhǔn)而獲得，其中鏈中的第一殘基，蛋白質(zhì)的活性形式(在#P43235中殘基編號(hào)為115)在此重置為殘基號(hào)碼1。在此序列比對被用來統(tǒng)一組織蛋白酶K殘基對于另一個(gè)人類組織蛋白酶和falcipains的參考。對小鼠、兔、靈長類動(dòng)物和大鼠組織蛋白酶中的殘基的參考被使用缺省參數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)的基本序列比對所隱含，達(dá)到最高度同源的以下具體限定的序列中2256** 6 6670 680* ***
組織蛋白酶KYPYVG---------QEESCMYNPT-------------------GKAAKCR組織蛋白酶BYESHVGCRPYSIPPCEHHVNGSRPPCTGEGDTPKCSKICEPGYSPTYKQD組織蛋白酶FYSYQG---------HMQSCNFSAE-------------------KAKVYlN組織蛋白酶HYPYQG---------KDGYCKFQPG-------------------KAIGFVK組織蛋白酶LYPYEA---------TEESCKYNPK-------------------YSVANDT組織蛋白酶OYPFKA---------QNGLCHYFSG-------------------SHSGFSI組織蛋白酶SYPYKA---------MDQKCQYDSK-------------------YRAATCS組織蛋白酶WYPFQGK--------VRAHRCHPKKY------------------QKVAWIQ組織蛋白酶ZNNYQAKDQECDKFNQCGTCNEFKE-------------------CHAIRNY組織蛋白酶L2YPYVA--------VDEICKYRPE-------------------NSVANDTFalcipainYKYKAK--------DDMFCLNYRC-------------------KRKVSLSFalcipain2YPYVSN--------LPETCNLKRC-------------------NERYTIKFalcipain3YPYVSD--------APNLCNIDRC-------------------TEKYGIK134*
組織蛋白酶KCNS-----DNLNHAVLAVGYGIQKG-------------------------組織蛋白酶BGEMMG------GHAIRILGWGVENG-------------------------組織蛋白酶FCSP-----WLIDHAVLLVGYGNRSD-------------------------組織蛋白酶HCHKTP---DKVNHAVLAVGYGEKNG-------------------------組織蛋白酶LCSS-----EDMDHGVLVVGYGFESTE---------------------SDN組織蛋白酶QGE--------ANHAVLITGFDKTGS-------------------------組織蛋白酶SCT------QNVNHGVLVVGYGDLNG-------------------------組織蛋白酶WCDP-----QLVDHSVLLVGFGSVKSEEGIWAETVSS-----QSQPQPPHP組織蛋白酶ZDTT------YINHVVSVAGWGISDG-------------------------組織蛋白酶L2CSS-----KNLDHGVLVVGYGFEGAN--------------------SNNFalcipainSEE-------LNHSVLLVGYGQVEKTKLNYNNKIQTYNTKENSNQPDDNIFalcipain2GA------A-PNHAVILVGYGMKDIYNEDTG---------------RMEKFalcipain3GD------E-LNHAVMLVGFGMKEIVNPLTK---------------KGEK209*組織蛋白酶KNKHWIIKNSWGENWGNKGYILMARNKN-------NACGIANLASFPKM--組織蛋白酶BTPYWLVANSWNTDWGDNGFFKILRGQD--------HCGIESEVVAGIPRT組織蛋白酶FVPFWAIKNSWGTDWGEKGYYYLHRGSG--------ACGVNTMASSAVVD-組織蛋白酶HIPYWIVKNSWGPQWGMNGYFLIERGK--------NMCGLAACASYPIPLV組織蛋白酶LNKYWLVKNSWGEEWGMGGYVKMAKDRR-------NHCGIASAASYPTV--組織蛋白酶OTPYWIVRNSWGSSWGVDGYAHVKMGSN--------VCGIADSVSSIFV--組織蛋白酶SKEYWLVKNSWGHNFGEEGYIRMARNKG-------NHCGLASFPSYPEI--組織蛋白酶WTPYWILKNSWGAQWGEKGYFRLHRGSN--------TCGiTKFPLTARVQK組織蛋白酶ZTEYWIVRNSWGEPWGERGWLRIVTSTYKDGKGARYNLAIEEHCTFGDPIV組織蛋白酶L2SKYWLVKNSWGPEWGSNGYVKIAKDKN-------NHCGIATAASYPNV--FalcipainIYYWIIKNSWSKKWGENGFMRLSRNKNGD----NVFCGIGEEVFYPIL--Falcipain2FYYYIIKNSWGSDWGEGGYINLETDENGY----KKTCSIGTEAYVPLLE-Falcipain3HYYYIIKNSWGQQWGERGFINIETDESGL----MRKCGLGTDAFIPLIE-組織蛋白酶K------------(SEQ ID NO1)組織蛋白酶BD-----------(SEQ ID NO2)組織蛋白酶F------------(SEQ ID NO3)組織蛋白酶H------------(SEQ ID NO4)組織蛋白酶L------------(SEQ ID NO5)組織蛋白酶O------------(SEQ ID NO6)組織蛋白酶S------------(SEQ ID NO7)組織蛋白酶WPDMKPRVSCPP-(SEQ ID NO8)組織蛋白酶Z------------(SEQ ID NO9)組織蛋白酶L2------------(SEQ ID NO10)Falcipain------------(SEQ ID NO11)Falcipain2------------(SEQ ID NO12)Falcipain3------------(SEQ ID NO13)圖1
定義術(shù)語“有利地”，如在本文中用于術(shù)語“有利地相互作用”，是指制作分子模型計(jì)算的有利結(jié)果，其中將配體分子的計(jì)算機(jī)模型置入組織蛋白酶計(jì)算機(jī)模型的活性部位，產(chǎn)生配體組織蛋白酶配合物，并且使用標(biāo)準(zhǔn)分子力學(xué)力場，例如MMFF94s配體組織蛋白酶配合物的能量最小化(T.A.Halgren，Journal of Computational Chemistry(1999)，20，720-729頁)。配體進(jìn)入活性部位之內(nèi)的初始布局，也稱為“對接”這樣進(jìn)行，以便最適宜地使配體酶在配體取代基和本文所述酶的亞位點(diǎn)之間發(fā)生相互作用。對于所研究的組織蛋白酶(除去非蛋白質(zhì)原子)，如果其X射線晶體結(jié)構(gòu)是可獲得的，那么活性部位的計(jì)算機(jī)模型基于X射線晶體結(jié)構(gòu)(例如，對于組織蛋白酶K，Protein Databank入口為1MEM)；或者如果X射線晶體結(jié)構(gòu)是不可獲得的，就可以使用以最相似的組織蛋白酶為基準(zhǔn)的同源性構(gòu)造結(jié)構(gòu)，對于該最相似的組織蛋白酶，其X射線晶體結(jié)構(gòu)是可獲得的；或者僅僅直接使用其X射線結(jié)構(gòu)是可獲得的最相似的組織蛋白酶。在能量最小化開始時(shí)，還沒有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)原子以適應(yīng)于配體，但是在能量最小化期間，允許具有至少一個(gè)原子在配體6之內(nèi)的整個(gè)蛋白質(zhì)側(cè)鏈隨著能量最小化的進(jìn)行而移動(dòng)。在能量最小化期間，不允許酶的主鏈原子產(chǎn)生移動(dòng)?？梢允褂盟倪B續(xù)電介質(zhì)溶劑，但是可以另外使用標(biāo)準(zhǔn)的分子力學(xué)能量最小化的缺省參數(shù)和運(yùn)轉(zhuǎn)狀態(tài)，它與SchrodingerInc的軟件程序宏觀模型中采用的缺省參數(shù)和運(yùn)轉(zhuǎn)狀態(tài)相似?！澳Ｐ椭谱饔?jì)算的有利結(jié)果”是指在能量最小化完成后，在配體和活性部位之間沒有不良的空間相互作用，以及在配體和活性部位之間存在穩(wěn)定能量的氫鍵和親油相互作用。如果相信配體與半胱氨酸-25的活性部位硫形成共價(jià)鍵，那么能量最小化可以包括提交計(jì)算的在模擬配體組織蛋白酶配合物中的共價(jià)鍵。如本文中要求的配體和組織蛋白酶之間的相互作用基于配體組織蛋白酶配合物的幾何結(jié)構(gòu)，該幾何結(jié)構(gòu)由上述能量最小化產(chǎn)生。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，配體取代基和S2之間有利的相互作用需要取代基的至少一個(gè)碳原子或者二價(jià)硫原子同時(shí)滿足以下三個(gè)距離條件它在組織蛋白酶Cα26的7范圍內(nèi)，在組織蛋白酶Cα68的8.5范圍內(nèi)和在組織蛋白酶Cα134的7范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，配體取代基和S2之間有利的相互作用需要取代基親油基的至少一個(gè)原子在殘基67、68和134中兩個(gè)殘基的原子的5.5范圍內(nèi)。在本發(fā)明更進(jìn)一步的實(shí)施方案中僅僅涉及組織蛋白酶B，配體取代基和S2之間有利的相互作用需要在取代基和組織蛋白酶B的谷氨酸209之間具有氫鍵。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，配體取代基和S3之間有利的相互作用需要取代基的至少一個(gè)碳原子或者二價(jià)硫原子同時(shí)滿足以下兩個(gè)距離它在組織蛋白酶Cα66的5.5范圍之內(nèi)，并且它在組織蛋白酶籠的7范圍之內(nèi)。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，配體取代基和S3之間有利的相互作用需要取代基親油基的至少一個(gè)原子在Cα66和殘基60或者61原子的5.5范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，配體取代基和S3之間有利的相互作用需要取代基親油基的至少一個(gè)原子在殘基60或者61的5.5范圍內(nèi)。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，配體取代基和S1之間有利的相互作用需要取代基的至少一個(gè)碳原子在Cα25的5范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，配體取代基和S1之間有利的相互作用，需要在殘基25的活性部位半胱氨酸硫和配體親電子碳之間有一個(gè)共價(jià)鍵，優(yōu)選為羰基碳或者腈碳。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，配體的化學(xué)式中CH-NH區(qū)域和S2與S3間的組織蛋白酶之間有利的相互作用，需要該化學(xué)式的N在Gly66的肽氧的4范圍內(nèi)，以及該化學(xué)式的C(僅僅涉及直接與R4相連的C)在Cα66的5.5范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，配體化學(xué)式中CH-NH區(qū)域和S2與S3間的組織蛋白酶之間有利的相互作用，需要讓該化學(xué)式的NH氫鍵連結(jié)到殘基66的酰胺0上。
除非另作說明，本文中使用的“烷基”指的是包括具有1～10個(gè)碳原子的支鏈和直鏈的飽和脂族烴基團(tuán)。例如，C1～C10，如在“C1～C10烷基”中，定義為包括在直鏈、支鏈或者環(huán)狀排列中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10個(gè)碳原子的基團(tuán)。例如，“C1～C10烷基”特別包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基等。
除非另作說明，“烷氧基”表示如上述定義的烷基，其中所述烷基通過氧橋連接。
除非另作說明，術(shù)語“環(huán)烷基”或者“碳環(huán)”是指碳原子總數(shù)為3～8個(gè)或者此范圍內(nèi)任何數(shù)目的環(huán)狀烷烴環(huán)(即環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基或者環(huán)辛基)。
本文中使用的“芳基”是指在各環(huán)中有最高達(dá)12個(gè)原子的任何穩(wěn)定的單環(huán)或者二環(huán)碳環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳香環(huán)。上述芳基單元的實(shí)例包括苯基、萘基、四氫萘基、2，3-二氫化茚基、聯(lián)苯基、菲基、蒽基或者苊基?？梢岳斫猓诜蓟〈嵌h(huán)的取代基并且一個(gè)環(huán)是非芳環(huán)的情況中，連接是通過芳環(huán)進(jìn)行的。
本文中使用的術(shù)語“雜芳基”表示各環(huán)中具有最高達(dá)10個(gè)原子的穩(wěn)定的單環(huán)、二環(huán)或者三環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳香環(huán)并且含有1～4個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子。在此定義范圍內(nèi)的雜芳基基團(tuán)包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、二氫吲哚基、吲哚基、中氮茚基(indolazinyl)、吲唑基、異苯并呋喃基、異氮雜茚基、異喹啉基、異噻唑基、異唑基、萘并吡啶基、二唑基、唑基、唑啉、異唑啉、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并唑基、二氫吲哚基、二氫喹啉基、亞甲基二氧基苯、苯并噻唑基、苯并噻吩基、喹啉基、異喹啉基、唑基和四氫喹啉基。在其中雜芳基取代基是二環(huán)取代基并且一個(gè)環(huán)是非芳香環(huán)或者不包含雜原子的情況下，應(yīng)當(dāng)理解，分別通過芳環(huán)或者通過包含環(huán)的雜原子進(jìn)行連接。如果雜芳基含有氮原子，應(yīng)當(dāng)理解該定義中也包含其相應(yīng)的N-氧化物。
如熟練的技術(shù)人員所理解，本文中使用的“鹵代”或者“鹵素”意指包括氯、氟、溴和碘。術(shù)語“酮”是指羰基(C＝O)。本文中使用的術(shù)語“烷氧基”指的是通過氧原子連接到分子的剩余部分上的烷基部分，其中烷基如上所定義。烷氧基的實(shí)例包括甲氧基和乙氧基等。
術(shù)語“羥基基烷基”是指被一個(gè)或兩個(gè)羥基取代的1～6個(gè)碳原子的直鏈單價(jià)烴基或者3～6個(gè)碳原子的支鏈單價(jià)烴基，條件是如果存在兩個(gè)羥基，它們不在同一碳原子上。代表性的實(shí)例包括但不限于羥甲基、2-羥乙基、2-羥丙基和3-羥丙基等。
除非另作說明，本文中使用的術(shù)語“雜環(huán)”或者“雜環(huán)基”表示含有1～4個(gè)選自O(shè)、N、S、SO或者SO2的雜原子的5～10元非芳族環(huán)，并包括二環(huán)基團(tuán)。因此，“雜環(huán)基”包括但不限于以下基團(tuán)哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫吡喃基、二氫哌啶基和四氫噻吩基等。如果雜環(huán)含有氮，可以理解此定義中也包含其相應(yīng)的N-氧化物。
本發(fā)明還包括式I化合物的N-氧化物衍生物和受保護(hù)的衍生物。
例如，當(dāng)式I化合物含有可氧化的氮原子時(shí)，可以通過本領(lǐng)域熟知的方法將氮原子轉(zhuǎn)化成N-氧化物。還有當(dāng)式I化合物含有例如羥基、羧基、巰基或者任何含有氮原子的基團(tuán)時(shí)，這些基團(tuán)可以用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基進(jìn)行保護(hù)。適當(dāng)保護(hù)基的綜合列表可以在T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley & Sons，Inc.，1981中得到，其公開的全部內(nèi)容在此引入作為參考。式I化合物受保護(hù)的衍生物可以通過本領(lǐng)域熟知的方法制備。
在本發(fā)明范圍內(nèi)還包括藥物組合物，藥物組合物包括如上所述的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明還預(yù)期包含一種藥物組合物，它包括藥學(xué)上可接受的載體和任何在本申請中明確公開的化合物。根據(jù)包含在此的教導(dǎo)，本發(fā)明的這些和其它方面將會(huì)是顯而易見的。
本發(fā)明化合物藥學(xué)上可接受的鹽包括無機(jī)或者有機(jī)酸形式的本發(fā)明化合物的常規(guī)無毒鹽。例如，常規(guī)的無毒鹽包括由無機(jī)酸得到的鹽，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸等的鹽，以及由有機(jī)酸制備的鹽，例如醋酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸(pamoic)、馬來酸、羥基馬來酸、苯基乙酸、谷氨酸、安息香酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙酰氧基-安息香酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙基二磺酸、草酸、羥乙磺酸和三氟乙酸等的鹽。Berg等人，＂Pharmaceutical Salts＂，J.Pharm.Sci.，1977，661-19對上述藥學(xué)上可接受的鹽以及其它一般藥學(xué)上可接受的鹽的制備進(jìn)行了更為全面地描述，在此引入作為參考。本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，可以利用常規(guī)化學(xué)方法由含有堿性或者酸性部分的本發(fā)明化合物進(jìn)行合成。通常，堿性化合物的鹽或者通過離子交換色譜法，或者通過在適當(dāng)溶劑或者多種溶劑組合中，使游離堿與化學(xué)計(jì)算量或者與過量的形成期望鹽的無機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)制備得到。類似地，酸性化合物的鹽通過酸性化合物與適宜的無機(jī)或者有機(jī)堿反應(yīng)形成。
本發(fā)明化合物為組織蛋白酶抑制劑，并且因此具有治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物組織蛋白酶依賴性疾病或者狀態(tài)的用途，哺乳動(dòng)物優(yōu)選是人類。
特別地，本發(fā)明化合物為組織蛋白酶K抑制劑，并且因此具有治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物的組織蛋白酶K依賴性疾病或者狀態(tài)的用途，哺乳動(dòng)物優(yōu)選是人類。
“組織蛋白酶依賴性疾病或者狀態(tài)”是指依賴一種或多種組織蛋白酶活性的病理學(xué)狀態(tài)?！敖M織蛋白酶K依賴性疾病或者狀態(tài)”是指依賴一種或多種組織蛋白酶K活性的病理學(xué)狀態(tài)。與組織蛋白酶K活性相關(guān)的疾病包括骨質(zhì)疏松癥、腎上腺糖皮質(zhì)激素誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥、佩吉特氏病、骨代謝異常升高、牙周病、牙齒損失、骨折、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假體周圍骨自溶癥、不完全的成骨作用、肥胖癥、動(dòng)脈粥樣硬化癥、慢性阻塞性肺病、青少年發(fā)作糖尿病、多發(fā)性腦脊髓硬化癥、慢性天皰瘡、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、重癥肌無力、全身性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和橋本氏甲狀腺炎、哮喘、外源性免疫反應(yīng)、寄生蟲感染、癌癥、轉(zhuǎn)移性骨疾病、惡性高鈣血癥或者多發(fā)性骨髓瘤。在用本發(fā)明要求的化合物治療這些狀態(tài)中，需要的治療劑量將根據(jù)具體疾病而不同，并且熟練的技術(shù)人員可以很容易地對其進(jìn)行確定。雖然治療和預(yù)防都可以在本發(fā)明范圍得到預(yù)期，但是這些狀態(tài)的治療是優(yōu)選的用途。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是一種在需要抑制組織蛋白酶活性的哺乳動(dòng)物中抑制組織蛋白酶活性的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的如上所述任何化合物或者任何藥物組合物。
實(shí)施方案的一類是方法，其中組織蛋白酶活性是組織蛋白酶K活性。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是一種在需要治療或預(yù)防組織蛋白酶依賴狀態(tài)的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防組織蛋白酶依賴狀態(tài)的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的如上所述任何化合物或者任何藥物組合物。
實(shí)施方案的一類是方法，其中組織蛋白酶活性是組織蛋白酶K活性。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是一種在需要抑制骨損失的哺乳動(dòng)物中抑制骨損失的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的如上所述任何化合物或者任何藥物組合物。本發(fā)明的另一實(shí)施方案是一種在需要降低骨損失的哺乳動(dòng)物中降低骨損失的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的如上所述任何化合物或者任何藥物組合物。組織蛋白酶K抑制劑在骨吸收抑制中的應(yīng)用在文獻(xiàn)中是已知的。參閱Stroup G.B.等人，“Potent and selective inhibition of human cathepsin Kleadsto inhibition of bone resorption in vivo in a nonhumanprimate”，J.Bone Miner.Res.，161739-1746，2001；和Votta，B.J.等人，“Peptide aldehyde inhibitors of cathepsin Kinhibit boneresorption bone resorption both in vivo and in vitro”，J.BoneMiner.Res.，121396-1406，1997。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是一種在需要治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的任何如上所述化合物或者任何上述藥物組合物。組織蛋白酶K抑制劑在骨質(zhì)疏松癥治療或者預(yù)防中的應(yīng)用在文獻(xiàn)中是已知的。參閱Saftig P.等人，“Impaired osteoclast bone resorption leadsto osteoporosis in cathepsin K-deficient mice”，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，9513453-13458，1998。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是一種在需要治療或預(yù)防風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎狀態(tài)的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎狀態(tài)的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的如上所述任何化合物或者任何藥物組合物。在文獻(xiàn)中，已知關(guān)節(jié)周圍骨的漸進(jìn)破壞是風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)病人中關(guān)節(jié)機(jī)能障礙和關(guān)節(jié)無力的主要原因。參閱Goldring SR，“Pathogenesis of bone erosions in rheumatoid arthritis”，Curr.Opin.Rheumatol.，14406-10，2002。對來自具有RA病人的關(guān)節(jié)組織進(jìn)行分析，已經(jīng)證明組織蛋白酶K陽性破骨細(xì)胞是介導(dǎo)與風(fēng)濕性滑液損害有關(guān)的病灶骨吸收的細(xì)胞類型。參閱Hou，W-S等人，“Comparision of Cathepsin K and S expression within theRheumatoid and Osteoarthritic Synovium”，ArthritisRheumatism，46663-74，2002。此外，全身性骨損失是導(dǎo)致與嚴(yán)重RA有關(guān)的病狀的主要原因。在具有慢性RA的病人中，殿部和脊柱骨折頻率基本上得到增加。參閱Gould等人，“Osteoclastic activationis the principal mechanism leading to secondary osteoporosisin rheumatoid arthritis”，J.Rheumatol.，251282-9，1998。組織蛋白酶K抑制劑在關(guān)節(jié)下骨吸收和全身性骨損失的治療或者預(yù)防中的應(yīng)用，表示一種在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎加重中藥理學(xué)介入的合理方法。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是一種在需要治療或預(yù)防骨關(guān)節(jié)炎的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)行的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的如上所述任何化合物或者任何藥物組合物。在文獻(xiàn)中，已知骨關(guān)節(jié)炎(OA)在關(guān)節(jié)中帶有明確的變化，包括關(guān)節(jié)軟骨表面侵蝕、關(guān)節(jié)周圍軟骨內(nèi)骨化/骨贅增生和軟骨下骨硬化和孢囊形成，參閱Oettmeier，R & Abendroth，K，“Osteoarthritis and bone:osteologictypes of osteoarthritis of the hip”，Skeletal Radiol.，18165-74，1989。最近，已經(jīng)提出了軟骨下骨硬化可能促使OA開始和進(jìn)行。當(dāng)關(guān)節(jié)響應(yīng)重復(fù)的脈沖式負(fù)載時(shí)，變硬的軟骨下骨只能較小地減弱和散布通過關(guān)節(jié)的壓力，使得該壓力在關(guān)節(jié)軟骨表面的機(jī)械應(yīng)力更大。這反過來也促進(jìn)了軟骨磨損和纖化。參閱Radin EL和RoseRM，“Role of subchondral bone in the initiation and progressionof cartilage damage”，Clin.Orthop.，21334-40，1986。通過用抗吸收試劑(例如組織蛋白酶K抑制劑)抑制過多的關(guān)節(jié)下骨吸收，將導(dǎo)致軟骨下骨代謝受到抑制，由此可能會(huì)對進(jìn)行性O(shè)A產(chǎn)生有利的影響。除上述假設(shè)之外，最近，在采自O(shè)A病人滑膜和關(guān)節(jié)軟骨樣品的滑液成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞相似細(xì)胞和軟骨細(xì)胞中確定了組織蛋白酶K的蛋白質(zhì)表達(dá)。參閱Hou，W-S等人，“Comparison of Cathepsin Kand S expression within the Rheumatoid and OsteoarthriticSynovium”，Arthritis Rheumatism，46663-74，2002；和Dodd RA等人，“Expression of Cathepsin K messenger RNA in giant cellsand their precursors in human osteoarthritic synovialtissues”，Arthritis Rheumatism，421588-93，1999；和Konttinen等人，“Acidic cysteine endoproteinase cathepsin K in thedegeneration of the superficial articular hyaline cartilagein osteoarthritis”，Arthritis Rheumatism，46953-60，2002。由此，這些新近的研究涉及組織蛋白酶K在伴有骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)行的關(guān)節(jié)軟骨II型膠原破壞中的作用。由此，如本發(fā)明所述的組織蛋白酶K抑制劑在骨關(guān)節(jié)炎治療或者預(yù)防中的應(yīng)用包括兩種不同的機(jī)制，一種機(jī)制是抑制破骨細(xì)胞驅(qū)動(dòng)的軟骨下骨代謝，和第二種機(jī)制是直接抑制具有OA的病人的滑膜和軟骨中的II型膠原變性。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是一種在需要治療癌癥的哺乳動(dòng)物中治療癌癥的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的如上所述任何化合物或者任何藥物組合物。在文獻(xiàn)中已知組織蛋白酶K在人類乳癌中進(jìn)行表達(dá)。參閱Littlewood-Evans AJ等人，“The osteoclast-associatedprotease cathepsin K is expressed in human breast carcinoma”，Cancer Res，57(23)5386-90，1997年12月1日。
本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)例是任何如上所述化合物在制備藥物中的用途，藥物用于在需要其的哺乳動(dòng)物中治療和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥。本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)例是任何如上所述化合物在制備藥物中的用途，藥物用于治療和/或預(yù)防骨損失、骨吸收、骨折、轉(zhuǎn)移性骨疾病和/或與組織蛋白酶功能相關(guān)的病癥。
本發(fā)明化合物可以向哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人類給藥，單獨(dú)給藥或者優(yōu)選與藥學(xué)上可接受的載體或者稀釋劑聯(lián)合給藥，在藥物組合物中，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥物實(shí)踐，任選與已知的輔劑聯(lián)合給藥，輔劑例如是明礬?；衔锟梢钥诜o藥或者胃腸外給藥，包括靜脈內(nèi)的、肌內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、皮下的、直腸的和局部的給藥途徑。
在用于口服使用的片劑情況下，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉，并且通常加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對于膠囊形式的口服給藥，有益的稀釋劑包括乳糖和干玉米淀粉。為了口服使用根據(jù)本發(fā)明的治療化合物，選擇的化合物可以通過以下方式給藥，例如以片劑或者膠囊形式，或者形成水溶液或者懸浮液。對于以片劑或者膠囊形式口服給藥，藥物活性成分可以與口服的、無毒的、藥學(xué)上可接受的惰性載體聯(lián)合使用，惰性載體例如是乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、磷酸氫鈣、硫酸鈣、甘露醇和山梨糖醇等；對于以液態(tài)形式口服給藥，口服的藥物組分可以與任何口服的、無毒的、藥學(xué)上可接受的惰性載體聯(lián)合使用，惰性載體例如乙醇、甘油和水等。此外，當(dāng)期望或者需要時(shí)，混合物中也可以加入合適的粘合劑、潤滑劑、崩解劑和著色劑。適當(dāng)?shù)恼澈蟿┌ǖ矸?、明膠、天然糖類(例如葡萄糖或者β-乳糖)、玉米甜味劑、天然樹膠和合成樹膠(例如阿拉伯膠、西黃蓍膠或者海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇和石蠟等。用于這些劑型的潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉和氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、皂土和黃原膠等。當(dāng)要求水懸浮液口服使用時(shí)，將活性成分與乳化劑和懸浮劑組合使用。如果需要，可以加入某些甜味劑和/或增香劑。對于肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)使用，通常制備活性成分的無菌液，以及應(yīng)當(dāng)對溶液的pH值進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)和緩沖。對于靜脈內(nèi)使用，應(yīng)該對溶質(zhì)的總濃度進(jìn)行控制，以便使得制劑等滲。
本發(fā)明化合物還可以以脂質(zhì)體輸送系統(tǒng)的形式進(jìn)行給藥，脂質(zhì)體輸送系統(tǒng)例如是小單層囊、大單層囊和多層囊。脂質(zhì)體可以由多種磷脂，例如膽固醇、十八胺或者卵磷脂形成。
本發(fā)明化合物也可以通過利用單克隆抗體作為個(gè)體載體而得到遞送，其中化合物分子被偶聯(lián)到單克隆抗體上。本發(fā)明化合物也可以與作為目標(biāo)藥物載體的可溶性聚合物偶聯(lián)。上述聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、多羥基丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、多羥基-乙基天冬酰胺-苯酚或者棕櫚?；〈木垩趸蚁?聚賴氨酸。此外，本發(fā)明化合物可以被偶聯(lián)到一類在達(dá)到藥物的控釋中有用的可生物降解的聚合物上，可生物降解的聚合物例如是聚丙醇酸、聚乙醇酸、聚丙醇酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε-己內(nèi)酯、多羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和交聯(lián)的或者兩親性的水凝膠嵌段共聚物。
本發(fā)明化合物也可用于與已知的用于治療或者預(yù)防以下疾病的試劑聯(lián)用，所述疾病包括骨質(zhì)疏松癥、腎上腺糖皮質(zhì)激素誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥、佩吉特氏病、骨代謝異常升高、牙周病、牙齒損害、骨折、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假體周圍骨自溶癥、骨脆癥病、肥胖癥、動(dòng)脈粥樣硬化癥、慢性阻塞性肺病、青少年發(fā)作糖尿病、多發(fā)性腦脊髓硬化癥、慢性天皰瘡、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、重癥肌無力、全身性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和橋本氏甲狀腺炎、哮喘、外源性免疫反應(yīng)、寄生蟲感染、癌癥、轉(zhuǎn)移性骨疾病、惡性高鈣血癥或者多發(fā)性骨髓瘤。本發(fā)明公開的化合物與其它對治療或者預(yù)防骨質(zhì)疏松癥或者其它骨病癥有用的試劑的組合，同樣包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠辨別哪些試劑組合將會(huì)有用，這基于藥物的特性以及所涉及的疾病。上述試劑包括以下試劑有機(jī)雙膦酸酯、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、破骨細(xì)胞質(zhì)子三磷酸腺苷酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、整聯(lián)蛋白受體拮抗劑、成骨細(xì)胞合成代謝劑(例如PTH)和藥學(xué)上可接受的鹽及其混合物。優(yōu)選的組合為本發(fā)明化合物和有機(jī)雙膦酸酯。另一優(yōu)選的組合為本發(fā)明化合物和雌激素受體調(diào)節(jié)劑。另一優(yōu)選的組合為本發(fā)明化合物和雄激素受體調(diào)節(jié)劑。另一優(yōu)選的組合為本發(fā)明化合物和成骨細(xì)胞合成代謝劑。
“有機(jī)雙膦酸酯”包括但不限于下面化學(xué)式的化合物 其中n是0～7的整數(shù)，并且其中A和X獨(dú)立地選自H、OH、鹵素、NH2、SH、苯基、C1-C30烷基、C3-C30支鏈烷基或者環(huán)烷基、含有兩個(gè)或三個(gè)N的雙環(huán)結(jié)構(gòu)、C1-C30取代烷基、C1-C10烷基取代的NH2、C3-C10支鏈烷基或者環(huán)烷基取代的NH2、C1-C10二烷基取代的NH2、C1-C10烷氧基、C1-C10烷基取代的硫基、噻吩基、鹵代苯硫基、C1-C10烷基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯烷基、咪唑基、咪唑并吡啶基和芐基，使得當(dāng)n是0時(shí)，A和X都不選自H或者OH；或者A和X與碳原子或者跟它們相連的原子合起來形成C3-C10環(huán)。
在上述化學(xué)式中，烷基可以是直鏈、支鏈或者環(huán)狀的烷基，以選擇充足的原子用于化學(xué)式為條件。C1-C30取代烷基可以包含多種取代基，取代基的非限制性實(shí)例包含以下取代基，選自苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯烷基、咪唑酮基、NH2、C1-C10烷基取代的或者二烷基取代的NH2、OH、SH和C1-C10烷氧基。
對于A和/或X取代基，上述化學(xué)式也包含復(fù)雜的碳環(huán)結(jié)構(gòu)、芳香結(jié)構(gòu)和雜原子結(jié)構(gòu)，這些結(jié)構(gòu)的非限制性實(shí)例包括萘基、喹啉基、異喹啉基、金剛烷基和氯代苯硫基。
雙膦酸酯的藥學(xué)上可接受的鹽和雙膦酸酯衍生物在此也是有效的。這些鹽的非限制性實(shí)例包含以下鹽，選自堿金屬鹽、堿土金屬鹽(alkaline metal)、銨鹽和單-、二-、三-或者四-C1-C30烷基取代的銨鹽。優(yōu)選的鹽選自鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽和銨鹽。更優(yōu)選鈉鹽。衍生物的非限制性實(shí)例包含選自酯類、水合物和酰胺的衍生物。
應(yīng)當(dāng)注意，在此涉及本發(fā)明治療劑中使用的術(shù)語“雙膦酸酯”和“雙膦酸酯類”的含義還包括雙膦酸酯、雙膦酸和二膦酸，以及這些物質(zhì)的鹽和衍生物。除非明確說明，在涉及雙膦酸酯中的具體命名法的使用并不意味著對本發(fā)明范圍的限制。因?yàn)槭炀毜钠胀夹g(shù)人員當(dāng)前應(yīng)用混合命名法，所以除非在本文其它處另有說明，否則涉及本發(fā)明雙膦酸酯化合物的特定重量或百分比是以酸的活性重量為基礎(chǔ)計(jì)算的。例如，短語“對于以阿侖膦酸活性重量為基礎(chǔ)的約5mg骨吸收抑制雙膦酸酯，選自阿侖膦酸酯、其藥學(xué)上可接受的鹽及其混合物”是指選擇的雙膦酸酯化合物的量以5mg阿侖膦酸為基準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算的。
在此有效的雙膦酸酯的非限制性實(shí)例包括以下Alendronate(又名阿侖膦酸)、阿侖膦酸鈉、阿侖膦酸鈉三水合物或者4-氨基-1-羥基亞丁基-1，1-二膦酸單鈉三水合物。
Alendronate描述于美國專利4,922,007中，Kieczykowski等人，公開于1999年5月1日；美國專利5,019,651，Kieczykowski等人，公開于1991年5月28日；美國專利5,510,517，Dauer等人，公開于1996年4月23日；美國專利5,648,491，Dauer等人，公開于1997年7月15日，它們的全文在此引入作為參考。
環(huán)庚基氨基亞甲基-1，1-二膦酸，YM 175，Yamanouchi(伊卡膦酸，以前稱為cimadronate)，如Isomura等人的公開于1990年11月13日的美國專利4,970,335所述，其全文在此引入作為參考。
1，1-二氯亞甲基-1，1-二磷酸(氯膦酸)和二鈉鹽(氯膦酸鹽，Procter和Gamble)，描述于比利時(shí)專利672,205(1966)和J.Org.Chem，32，4111(1967)中，在此它們兩個(gè)的全文都引入作為參考。
1-羥基-3-(1-吡咯烷基)-亞丙基-1，1-二膦酸(EB-1053)。
1-羥基乙烷-1，1-二磷酸(依替膦酸)。
1-羥基-3-(N-甲基-N-戊基氨基)亞丙基-1，1-二膦酸，又名BM-210955，Boehringer-Mannheim(伊班膦酸)，描述于1990年5月22日公開的美國專利編號(hào)4,927,814中，其全文在此引入作為參考。
1-羥基-2-咪唑并(1，2-a)吡啶-3-基乙叉(米諾膦酸)。
6-氨基-1-羥基亞己基-1，1-二膦酸(奈立膦酸)。
3-(二甲基氨基)-1-羥基亞丙基-1，1-二膦酸(奧帕膦酸)。
3-氨基-1-羥基亞丙基-1，1-二膦酸(帕米膦酸)。
-1，1-二膦酸(吡膦酸)，描述于美國專利編號(hào)4,761,406中，其全文在此引入作為參考。
1-羥基-2-(3-吡啶基)-亞乙基-1，1-二膦酸(利塞膦酸)。
(4-氯苯基)硫甲烷-1，1-二膦酸(替魯膦酸)，如美國專利4,876,248中所述，其全文在此引入作為參考。
1-羥基-2-(1H-咪唑-1-基)-亞乙基-1，1-二膦酸(唑來膦酸)。
雙膦酸鹽的非限制性實(shí)例包含阿侖膦酸、cimadronate、氯膦酸、依替膦酸、伊班膦酸、伊卡膦酸、米諾膦酸、奈立膦酸、奧帕膦酸、帕米膦酸、吡膦酸、利塞膦酸、替魯膦酸和唑來膦酸，及其藥學(xué)上可接受的鹽或酯類。尤其優(yōu)選的雙膦酸鹽是阿侖膦酸鹽，特別是阿侖膦酸的鈉、鉀、鈣、鎂或者銨鹽。優(yōu)選的雙膦酸酯的具體示例是阿侖膦酸鈉鹽，特別是水合阿侖膦酸鈉鹽。鹽可以與整摩爾數(shù)的水或者非整摩爾數(shù)的水進(jìn)行水合。優(yōu)選雙膦酸酯的另一個(gè)具體示例是水合阿侖膦酸鈉鹽，特別是當(dāng)水合鹽是阿侖膦酸單鈉三水合物時(shí)。
應(yīng)當(dāng)認(rèn)可，可以使用兩種或更多雙膦酸酯活性物質(zhì)的混合物。
有機(jī)雙膦酸酯的精確劑量將隨以下條件而變化，包括劑量給藥方案、選擇的具體雙膦酸酯、哺乳動(dòng)物或者人類的年齡、性別和狀態(tài)、要進(jìn)行治療的病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及其它相關(guān)的醫(yī)療和物理因素。因此，精確的藥學(xué)有效量不能預(yù)先規(guī)定，以及可以由護(hù)理者或者臨床醫(yī)生即時(shí)確定。適宜的量可以根據(jù)動(dòng)物模型和人類臨床研究，通過常規(guī)試驗(yàn)得到確定。通常，對雙膦酸酯的適宜量進(jìn)行選擇以取得骨吸收抑制作用，即給藥骨吸收抑制量的雙膦酸酯。對于人類，雙膦酸酯的有效口服劑量一般為約1.5～約6000μg/kg體重，和優(yōu)選約10～約2000μg/kg體重。對于阿侖膦酸單鈉三水合物，一般人類給藥劑量通常為約2毫克/天～約40毫克/天，優(yōu)選為約5毫克/天～約40毫克/天。對于阿侖膦酸單鈉三水合物，美國目前批準(zhǔn)的用于預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的劑量是5毫克/天，用于治療骨質(zhì)疏松癥的劑量是10毫克/天，用于治療陰囊炎性癌的劑量是40毫克/天。
在另一種給藥方案中，雙膦酸酯可以每隔一段時(shí)間給藥而不是按天給藥，例如每周一次給藥、每周兩次給藥、每兩周給藥和每月兩次給藥。在每周一次的給藥方案中，阿侖膦酸單鈉三水合物將按35毫克/周或者70毫克/周的劑量給藥。
“選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑”是指不考慮機(jī)制，可以干擾或者抑制雌激素結(jié)合至受體的化合物。雌激素受體調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包含但不限于雌激素、孕激素、雌二醇、 洛昔芬、雷洛昔芬、拉索昔芬、TSE-424、他莫昔芬、艾多昔芬、LY353381、LY117081、托瑞米芬、氟維司群、4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯、4，4’-二羥基二苯甲酮-2，4-二硝基苯基-腙和SH646。
“雌激素受體β調(diào)節(jié)劑”是一種選擇性地激動(dòng)或者反激動(dòng)雌激素受體β的化合物(ER□激動(dòng) ER□經(jīng) ER□介導(dǎo)作用促進(jìn)色氨酸羥化酶基因的轉(zhuǎn)錄(TPH，血清素合成中的關(guān)鍵酶))。雌激素受體β激動(dòng)劑的實(shí)例在以下PCT國際公開中可以得到，公開于2001年11月8日的WO01/82923，和公開于2002年5月20日的WO 02/41835，它們的全文都在此引入作為參考。
“雄激素受體調(diào)節(jié)劑”是指不考慮機(jī)制，干擾或者抑制雄激素結(jié)合至受體的化合物。雄激素受體調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包含非那雄胺和其它5α-還原酶抑制劑、尼魯米特、氟他米特、比卡魯胺、利阿唑和乙酸阿比特龍。
“破骨細(xì)胞質(zhì)子三磷酸腺苷酶抑制劑”是指質(zhì)子三磷酸腺苷酶的抑制劑，發(fā)現(xiàn)于破骨細(xì)胞的頂膜上，并且據(jù)報(bào)道，其在骨吸收過程中起著顯著的作用。此質(zhì)子泵表示骨吸收抑制劑設(shè)計(jì)的誘人目標(biāo)，這些抑制劑可能對骨質(zhì)疏松癥和相關(guān)代謝疾病的治療和預(yù)防有效。參閱C.Farina等人，“Selective inhibitors of the osteoclast vacuolarproton ATPase as novel bone antiresorptive agents”，DDT，4163-172(1999)，其全文在此引入作為參考。
“HMG-CoA還原酶抑制劑”是指3-羥基-3-甲基戊二酰-CoA還原酶。對HMG-CoA還原酶具有抑制活性的化合物可以通過使用現(xiàn)有技術(shù)中眾所周知的驗(yàn)定法容易地得到鑒定。例如，參閱美國專利4,231,938第6欄和WO 84/02131第30～33頁中描述或者列舉的驗(yàn)定法。當(dāng)在此使用時(shí)，術(shù)語“HMG-CoA還原酶抑制劑”和“HMG-CoA還原酶的抑制劑”具有相同的含義。
可以應(yīng)用的HMG-CoA還原酶抑制劑的實(shí)例包括但不限于洛伐他汀(MEVACOR，參閱美國專利號(hào)4,231,938、4,294,926和4,319,039)、辛伐他汀(ZOCOR，參閱美國專利號(hào)4,444,784、4820,850和4,916,239)、普伐他汀(PRAVACHOL，參閱美國專利號(hào)4,346,227、4,537,859、4,410,629、5,030,447和5,180,589)、氟伐他汀(LESCOL，參閱美國專利號(hào)5,354,772、4,911,165、4,929,437、5,189,164、5,118,853、5,290,946和5,356,896)、阿托伐他汀(LIP1TOR，參閱美國專利號(hào)5,273,995、4,681,893、5,489,691和5,342,952)和西立伐他汀(亦稱rivastatin和BAYCHOL，參閱美國專利號(hào)5,177,080)。這些化合物的結(jié)構(gòu)式和另外可以用于本發(fā)明方法中的HMG-CoA還原酶抑制劑如下所述，M.Yalpani，“Cholesterol Lowering Drugs”，85～89頁的第87頁，1996年2月5日，和美國專利號(hào)4,782,084以及4,885,314。在此使用的術(shù)語HMG-CoA還原酶抑制劑包含所有藥學(xué)上可接受的內(nèi)酯和開放酸形式(即其中內(nèi)酯環(huán)開放形成游離酸)，以及具有HMG-CoA還原酶抑制活性的化合物的鹽和酯形式，和因此上述鹽、酯、開放酸和內(nèi)酯形式的用途都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。內(nèi)酯部分及其相應(yīng)的開放酸形式的實(shí)例如下結(jié)構(gòu)I和II所示。
內(nèi)酯 開環(huán)酸I II在可以存在開環(huán)酸形式的HMG-CoA還原酶抑制劑中，鹽形式和酯形式可以優(yōu)選由開環(huán)酸形成，并且所有這些形式都包含在在此使用的術(shù)語“HMG-CoA還原酶抑制劑”的含義內(nèi)。優(yōu)選HMG-CoA還原酶抑制劑選自洛伐他汀和辛伐他汀，和最優(yōu)選辛伐他汀。在此，關(guān)于HMG-CoA還原酶抑制劑的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”將意指用于本發(fā)明化合物的無毒鹽，它們通常通過游離酸與適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)或者無機(jī)堿進(jìn)行反應(yīng)制備，尤其是由陽離子形成的那些鹽，陽離子例如鈉、鉀、鋁、鈣、鋰、鎂、鋅和四甲銨，以及由胺形成的鹽，胺例如氨、乙二胺、N-甲基葡萄糖胺、賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸、膽堿、N，N’-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、二乙醇胺、普魯卡因、N-芐基苯乙胺、1-對氯芐基-2-四氫吡咯-1’-基-甲基苯并咪唑、二乙胺、哌嗪和三羥甲基氨基甲烷。HMG-CoA還原酶抑制劑的鹽形式的更進(jìn)一步實(shí)例可以包含但不限于，醋酸鹽、苯磺酸鹽苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、灑石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、乙二胺四乙酸鈣鹽、右旋樟腦磺酸、碳酸鹽、氯化物、棒酸鹽(clavulanate)、檸檬酸鹽、二鹽酸化物、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、依托酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇?；⑸⑺猁}、己基間苯二酸鹽(hexylresorcinate)、哈胺(hydrabamine)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、異硫代硫酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽(lactobionate)、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、硫酸二甲酯、粘酸鹽(mucate)、萘磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、乙二酸鹽、撲酸鹽(pamaote)、棕櫚酸鹽、泛酸鹽(panthothenate)、磷酸鹽/磷酸氫鹽、多聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、堿式醋酸鹽、琥珀酸鹽、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、8-氯茶堿鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘化物和戊酸鹽。
所述HMG-CoA還原酶抑制劑化合物的酯類衍生物可以作為前藥，當(dāng)將其吸收到恒溫動(dòng)物血液中去時(shí)，可以以一定方式裂開以釋放藥物形式和使藥物提供改善的治療效能。
如上所使用，“整聯(lián)蛋白受體拮抗劑”是指選擇性拮抗、抑制或者抵消生理配體結(jié)合至αvβ3整聯(lián)蛋白的化合物，是指選擇性拮抗、抑制或者抵消生理配體結(jié)合至αvβ5整聯(lián)蛋白的化合物，是指選擇性拮抗、抑制或者抵消生理配體結(jié)合至αvβ3整聯(lián)蛋白和αvβ5整聯(lián)蛋白的化合物，和是指拮抗、抑制或者抵消在毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的特定整聯(lián)蛋白的化合物。該術(shù)語也涉及αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β1整聯(lián)蛋白拮抗劑。術(shù)語還涉及αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1α5β1、α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白的任意組合的拮抗劑。H.N.Lode等人，PNAS USA，961591-1596，1999年，在自發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移的根除中，已經(jīng)觀察到血管原性αv整聯(lián)蛋白拮抗劑和腫瘤特異性抗體細(xì)胞因子(白細(xì)胞介素-2)融合蛋白之間的協(xié)同效應(yīng)。他們的結(jié)果表明這種聯(lián)用對于癌癥和轉(zhuǎn)移性腫瘤生長的治療有效。αvβ3整聯(lián)蛋白受體拮抗劑通過與所有現(xiàn)有藥物不同的新機(jī)理抑制骨吸收。整聯(lián)蛋白是介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-底物相互作用的異源二聚的橫跨膜粘著受體。α和β整聯(lián)蛋白亞單位非共價(jià)相互作用，和以二價(jià)陽離子依賴性方式結(jié)合細(xì)胞外底物配體。破骨細(xì)胞上最大量的整聯(lián)蛋白是αvβ3(＞107/破骨細(xì)胞)，它們看來似乎在細(xì)胞骨架組織中起著限速的作用，細(xì)胞骨架組織對細(xì)胞遷移和極化是重要的。αvβ3拮抗作用選自骨吸收抑制作用、再狹窄抑制作用、黃斑變性抑制作用、關(guān)節(jié)炎抑制作用和癌癥以及轉(zhuǎn)移性腫瘤抑制作用。
“成骨細(xì)胞合成代謝劑”是指構(gòu)造骨的制劑，例如甲狀旁腺激素(PTH)。已經(jīng)表明在動(dòng)物和人類中間歇給藥甲狀旁腺激素(PTH)或者它的氨基末端片段及其類似物，可以預(yù)防、阻止、部分逆轉(zhuǎn)骨損失和刺激骨生成。詳述涉及D.W.Dempster等人，“Anabolicactionsof parathyroid hormone on bone”，Endocr Rev，14690-709，1993。研究已經(jīng)表明甲狀旁腺激素在刺激骨生成并且從而提高骨質(zhì)量和強(qiáng)度中的臨床益處。結(jié)果由RM Neer等人報(bào)道，New Eng J Med，3441434-1441，2001。
此外，甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白質(zhì)片段或者其類似物，例如PTHrP-(1-36)已經(jīng)表明具有有效的抗鈣尿作用[參閱M.A.Syed等人，“Parathyroid hormone-related protein-(1-36)stimulatesrenal tubular calcium reabsorption in normal human volunteersimplications for the pathogenesis of humoral hypercalcemia ofmalignancy”，JCEM，861525-1531(2001)]，并且也可以作為治療骨質(zhì)疏松癥的合成代謝劑。
如果配制成固定劑量，這種組合產(chǎn)品使用如下所述劑量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物和其它在其批準(zhǔn)劑量范圍內(nèi)的藥學(xué)活性劑。當(dāng)組合制劑不適宜時(shí)，本發(fā)明化合物可以另外與已知的藥學(xué)上可接受的試劑順序使用。
與本發(fā)明化合物有關(guān)的術(shù)語“給藥”及其變形(例如，“用藥”化合物)，是指將化合物或者化合物的前體藥物引入到需要治療的動(dòng)物體系中。當(dāng)本發(fā)明化合物或者其前體藥物與于一種或多種其它活性劑(例如細(xì)胞毒素劑等)組合提供時(shí)，“給藥”及其變形都理解為包含化合物或者其前體藥物和其它試劑的并流引入和順序引入。在本發(fā)明范圍內(nèi)包括本發(fā)明化合物的前體藥物。通常，前體藥物是本發(fā)明化合物的功能性衍生物，在體內(nèi)易于轉(zhuǎn)換成需要的化合物。因此，在本發(fā)明治療方法中，術(shù)語“給藥”應(yīng)該包含多種所述狀態(tài)的治療，使用明確公開的化合物或者使用可以不必明確公開的化合物，但是在給藥患者后，該化合物在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成指定的化合物。適當(dāng)前體藥物衍生物的選擇和制備的常規(guī)步驟描述于，例如，“Design of Prodrugs”，主編H.Bundgaard，Elsevier，1985，其全文在此引入作為參考。這些化合物的代謝產(chǎn)物包含當(dāng)將本發(fā)明化合物引入生物環(huán)境時(shí)所產(chǎn)生的活性中心。
在本文中使用的術(shù)語“組合物”包含包括規(guī)定量的指定成分的產(chǎn)品，以及任何直接或者間接地由規(guī)定量的指定成分組合得到的產(chǎn)品。
本文中使用的術(shù)語“治療有效量”是指活性物質(zhì)或者藥物制劑的量，該量能夠在組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或者人類中引起生物反應(yīng)或者藥物反應(yīng)，該反應(yīng)是研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)療醫(yī)生或者其它臨床醫(yī)生所尋求的反應(yīng)。
本文中使用的術(shù)語疾病的“治療”包括預(yù)防疾病，即造成疾病的臨床癥狀不在哺乳動(dòng)物中發(fā)展，哺乳動(dòng)物可能暴露于疾病或者易感染疾病，但是又沒有經(jīng)歷或者顯示疾病癥狀；抑制疾病，即阻止或者降低疾病或者其臨床癥狀的發(fā)展；或者減輕疾病，即導(dǎo)致疾病或者其臨床癥狀消退。
在本文中使用的術(shù)語“骨吸收”是指一個(gè)過程，經(jīng)該過程破骨細(xì)胞降解骨。
本發(fā)明還包含對骨質(zhì)疏松癥或者其它骨骼病癥的治療有用的藥物組合物，包括給藥治療有效量的本發(fā)明化合物，含有或者不含有藥學(xué)上可接受的載體或者稀釋劑。本發(fā)明適宜的組合物包含包括本發(fā)明化合物和藥理學(xué)上可接受的載體的水溶液，例如鹽水，其pH值水平例如為7.4。溶液可以通過局部彈丸注射引入到患者血液中。
當(dāng)將根據(jù)本發(fā)明的化合物給藥進(jìn)入受試驗(yàn)的人時(shí)，每日劑量通常由開藥醫(yī)師確定，同時(shí)劑量通常依據(jù)個(gè)體患者的年齡、體重和反應(yīng)以及患者癥狀的嚴(yán)重程度而不同。
在一個(gè)示范性應(yīng)用中，將適宜量的化合物給藥到對依賴于組織蛋白酶的病癥進(jìn)行治療的哺乳動(dòng)物。本發(fā)明的口服劑量，當(dāng)用來產(chǎn)生所需要的效果時(shí)，為約0.01毫克/千克體重/天(mg/kg/天)～約100mg/kg/day，優(yōu)選0.01～10mg/kg/day，和最優(yōu)選0.1～5.0mg/kg/day。對于口服給藥，組合物優(yōu)選以片劑形式提供，其中含有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100和500毫克活性成分，以根據(jù)癥狀調(diào)整給藥至進(jìn)行治療的患者的劑量。藥劑一般含有約0.01mg～約500mg活性成分，優(yōu)選約1mg～約100mg活性成分。對于靜脈內(nèi)給藥，在恒速輸液期間，最優(yōu)選的劑量為約0.1～約10mg/kg/min。有利地，本發(fā)明化合物可以以單一日劑量給藥，或者每日總劑量可以分為每日兩次、三次或者四次劑量給藥。此外，對于本發(fā)明化合物，優(yōu)選可以以鼻內(nèi)形式給藥，經(jīng)局部使用合適的鼻內(nèi)載體，或者經(jīng)透過皮膚路線，利用那些本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的皮膚表層貼片形式。以透過皮膚輸送系統(tǒng)形式給藥，劑量給藥當(dāng)然將持續(xù)整個(gè)給藥方案，而不是間歇?jiǎng)┝拷o藥。
本發(fā)明化合物可以與其它用于治療組織蛋白酶介導(dǎo)的狀態(tài)的試劑組合使用。上述組合的單個(gè)組分可以在治療期間分成不同次數(shù)給藥，或者以分開或者單一組合的形式并行給藥。因此本發(fā)明應(yīng)理解為包含所有上述聯(lián)合治療或者輪流治療的方案，并且術(shù)語“給藥”應(yīng)當(dāng)相應(yīng)地進(jìn)行理解。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明化合物與其它可用于治療組織蛋白酶介導(dǎo)的病癥的試劑的組合的范圍，原則上包含任何與可用于治療與雌激素功能相關(guān)病癥的藥物組合物的組合。
因此，本發(fā)明范圍包含本發(fā)明要求的化合物與第二試劑組合的用途，第二試劑選自有機(jī)雙膦酸酯、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、破骨細(xì)胞質(zhì)子三磷酸腺苷酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、整聯(lián)蛋白受體拮抗劑、成骨細(xì)胞合成代謝劑(例如PTH)和藥學(xué)上可接受的鹽及其混合物。
根據(jù)包含在本文中的教導(dǎo)，本發(fā)明的這些和其它方面將是顯而易見的。
補(bǔ)充以上所述，對本發(fā)明一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案的詳細(xì)說明進(jìn)行闡述。雖然任何與本文中所述相似或者等效的方法和材料可以用于本發(fā)明實(shí)踐或者試驗(yàn)中，但是優(yōu)選現(xiàn)在所述的方法和材料。根據(jù)說明書和根據(jù)權(quán)利要求書，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將是顯而易見的。在說明書和附屬的權(quán)利要求中，除非上下文清楚地指明，否則單數(shù)形式包含多個(gè)對象。除非另外定義，所有在本文中使用的技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語，具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。所有在本說明書中引用的專利和出版物都引入作為參考。
上述說明書僅僅是為了說明的目的存在，并不打算將本發(fā)明限定為明確公開的形式，而是通過附加于此的權(quán)利要求進(jìn)行限定。
方案本發(fā)明化合物可以根據(jù)方案1得到制備，如下所示。由此可以將α-氨基酯加入到鹵代烷酮中形成縮醛胺，縮醛胺在脫水劑存在下可以脫水形成亞胺，脫水劑例如是TiCl4、MgSO4或者異丙基三氟醋酸鹽。用還原劑(例如氰基硼氫化鈉或者硼氫化鈉)還原亞胺形成胺。酯水解和與適當(dāng)取代的氨基乙腈形成酰胺，提供本發(fā)明化合物。如果D系統(tǒng)上的取代基是鹵素，就與適宜的硼酸發(fā)生鈀催化的Suzuki偶合而提供本發(fā)明另外的化合物。另外，與適宜的胺進(jìn)行銅催化或者鈀催化的Buchwald偶合而提供本發(fā)明另外的化合物。另外，與適宜的胺形成酰胺，繼之以鈀催化羧基化作用提供本發(fā)明另外的化合物。
方案1 本發(fā)明化合物也可以根據(jù)方案2得到制備，如下所示。酮或者醛可以與氨基醇進(jìn)行縮合產(chǎn)生環(huán)狀的縮醛胺。用三當(dāng)量的格氏試劑或者有機(jī)鋰試劑進(jìn)行處理將提供適當(dāng)烷基化的氨基醇。用鉻系統(tǒng)(例如瓊斯氧化或者H5IO6/CrO3)氧化醇，或者通過二步氧化作用(例如NaClO后，繼之以草酰氯/DMSO/Et3N)氧化醇將提供相應(yīng)的羧酸。進(jìn)行縮氨酸偶合和如方案1所述的Suzuki反應(yīng)將提供本發(fā)明化合物。
方案2 本發(fā)明化合物也可以根據(jù)方案3得到制備，如下所示。酮或者醛可以與氨基醇進(jìn)行縮合產(chǎn)生無環(huán)的縮醛胺。用多倍當(dāng)量的格氏試劑或者有機(jī)鋰試劑進(jìn)行處理將提供適當(dāng)烷基化的氨基醇。此醇可以通過方案2中描述的方法轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。
方案3 本發(fā)明化合物也可以根據(jù)方案4得到制備。適當(dāng)取代的醋酸鹽可以用適宜的堿(包括但不限于LDA、KHMDS、NaH或者nBuLi)進(jìn)行烯醇化，和用多聚甲醛處理以產(chǎn)生二醇。使用氟化試劑(例如DAST)可將此二醇轉(zhuǎn)化為二氟化物。Curtius重排后對該酯進(jìn)行水解，于是將形成胺。此胺可以取代適當(dāng)取代的α-溴酯以形成α-氨基酯。α-氨基酯可以通過方案1中描述的方法轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。
方案4 本發(fā)明化合物也可以根據(jù)方案5得到制備，如下所示。醛或者半縮醛可以與氨基醇進(jìn)行縮合同時(shí)恒沸除去水，將氨基醇中醇部分用適宜的保護(hù)基進(jìn)行保護(hù)。用格氏試劑或者有機(jī)鋰試劑處理產(chǎn)生的亞胺將提供適當(dāng)烷基化的氨基醇。醇保護(hù)基能因此得到除去，而醇可以轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物，或者通過方案2中所述的方法，或者首先進(jìn)行Suzuki反應(yīng)，繼之以用H5IO6/CrO3氧化醇和然后進(jìn)行縮氨酸偶合。
方案5 本發(fā)明化合物也可以根據(jù)方案6得到制備，如下所示。α-氨基酸的縮氨酸偶合描述于方案1、2或者5中，與α-氨基酰胺進(jìn)行偶合，然后對產(chǎn)生的伯酰胺進(jìn)行脫水(Voegel，J.J.；Benner，S.A.，Helv.Chez.Aacta，1996，79，1863)將形成本發(fā)明化合物。
方案6 在起初方案2、3和5中使用的一些氨基醇的合成描述于方案7～11中。例如，(2S)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊-1-醇的合成在以下方案7中得到描述，其中R＝Me。從適宜的雙保護(hù)天冬氨酸開始，使用標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)步驟可以將羧基還原成醇(即，酸酐形成后繼之以用NaBH4還原)。2-氨基-4-甲基戌烷-1，4-二醇(R＝Me)的保護(hù)形式然后可以通過適當(dāng)?shù)腉rignard反應(yīng)或者有機(jī)鋰化反應(yīng)得到生成。最后，使用氟化劑(例如DAST)可以將羥基部分轉(zhuǎn)化成期望的氟。此醇的保護(hù)或者無保護(hù)形式然后可以根據(jù)方案1、2、3和5轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。
方案7 4-氟代亮氨酸也可以根據(jù)方案8得到合成。將4，5-脫氫亮氨酸轉(zhuǎn)化成(4S)-4-(2-甲基丙-2-烯基)-1，3-唑烷-2-酮，如下方案所述。然后用氫氟化試劑(例如HF-吡啶)對此中間體進(jìn)行處理，產(chǎn)生(4S)-4-(2-氟-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮。然后進(jìn)行堿性水解(即Ba(OH)2或者NaOH)產(chǎn)生(2S)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊烷-1-醇。
方案8 4，4-二氟-L-正纈氨酸的合成描述于以下方案9中，其中R＝Me。從適宜的雙保護(hù)絲氨酸開始，可以使用試劑(例如(PhO)3P+MeI-)進(jìn)行碘化。
合成碘化物的鋅化可以使用Zn-Cu對和TMSCl進(jìn)行。然后合成的鋅酸鹽可以與烷酰氯發(fā)生鈀催化偶聯(lián)反應(yīng)，生成酮。
最后，使用氟化劑(例如DAST)可以將酮部分轉(zhuǎn)化成期望的二氟衍生物。然后，此氨基酸或者氨基醇的保護(hù)或者無保護(hù)形式可以根據(jù)方案1、2、3和5轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。
方案9 用于本發(fā)明的氨基醇還可以根據(jù)方案10得到合成。將帶保護(hù)基的氨基酸用還原劑(例如NaBH4)還原，有或者沒有助劑(例如LiCl)，在一種溶劑(例如EtOH)或者混合溶劑系統(tǒng)(例如EtOH和THF)中進(jìn)行。然后根據(jù)保護(hù)基的性質(zhì)，將氨基保護(hù)基用適當(dāng)?shù)姆椒ǔァ?br> 方案10 用于本發(fā)明的(2S，4S)-2-氨基-5，5，5-三氟-4-甲基戊-1-醇的合成描述于方案11中。N-苯甲?；?5，5，5-三氟亮氨酸(Ojiima等人，J.Org.Chem.，1989，54，4511-4522)可以與酸的水溶液(例如6MHCl)在回流條件下進(jìn)行水解。然后將氨基酸鹽酸鹽轉(zhuǎn)化成N-乙?；?5，5，5-三氟亮氨酸，并且氨基手性中心通過酶催化法得到拆分(Synthetic Communications，1996，26，1109-1115)。然后對分離的5，5，5-三氟-L-亮氨酸用保護(hù)基(例如氨基甲酸芐酯)進(jìn)行保護(hù)，和對羧基進(jìn)行酯化。然后在4-位的兩個(gè)非對應(yīng)異構(gòu)體通過閃式柱色譜得到分離。然后將其中一種對映異構(gòu)體，(2S，4S)保護(hù)的氨基酸轉(zhuǎn)化成氨基醇，如方案10所示。
方案11 其中R5是氫并且R6是芳基或者雜芳基的本發(fā)明化合物也可以根據(jù)方案12得到制備，如下所示。芳基或者雜芳基醛與用適宜保護(hù)基對其中醇部分進(jìn)行了保護(hù)的氨基醇進(jìn)行縮合，然后用Grignard試劑或者有機(jī)鋰試劑對產(chǎn)生的亞胺進(jìn)行處理，Grignard或者有機(jī)鋰試劑為化學(xué)式鹵代-(D)n-Li或者鹵代-(D)n-MgX(其中D如發(fā)明概述中定義)，繼之以除去氧保護(hù)基形成烷基化的氨基醇。然后將烷基化的氨基醇轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物，或者通過方案2中所述的方法，或者通過首先與式R7-B(OH)2的硼酸酯進(jìn)行Suzuki反應(yīng)，然后用適宜的氧化劑(例如H5IO6/CrO3)氧化醇而產(chǎn)生酸，和最后在如先前所述的縮氨酸偶合條件下，用氨基乙腈對酸進(jìn)行處理。
方案12 本發(fā)明化合物也可以根據(jù)方案13得到制備，如下所示。在碘化鈉存在下，在適宜的有機(jī)溶劑(例如二甲基甲酰胺)中，適當(dāng)N-保護(hù)的氨基酸衍生物與氧雜環(huán)丁烷甲苯磺酸鹽發(fā)生反應(yīng)，形成相應(yīng)的氧雜環(huán)丁烷酯，將氧雜環(huán)丁烷酯用乙硼烷處理形成原酸酯。除去氨基保護(hù)基而產(chǎn)生胺，胺與式R6CHO(其中R6是芳基或者雜芳基)的醛或者與式R6C(OH)(OR)(其中R是烷基)的半縮醛在如上所述反應(yīng)條件下發(fā)生縮合，形成亞胺。用格氏試劑或者有機(jī)鋰試劑在如上所述反應(yīng)條件下處理亞胺而形成N-烷基化衍生物。除去原酸酯形成相應(yīng)的羧酸，然后該羧酸通過與氨基乙腈在縮氨酸偶合條件下發(fā)生縮合，繼之以進(jìn)行如上所述Suzuki反應(yīng)，轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。
方案13 本發(fā)明化合物也可以如方案14中所示的方法得到制備。含有合適R1、R2、R2、R4和R6基團(tuán)的芳基鹵可以與雙(四甲基乙二醇化)二硼偶合產(chǎn)生芳基四甲基乙二醇化物。后者可以與R7-溴化物在Suzuki條件下偶合形成本發(fā)明化合物。
方案14 本發(fā)明化合物也可以根據(jù)方案15得到制備，如下所示。在方案1、2或者5中描述的適當(dāng)取代的氨基酸與α-氨基酯、醇或者酮發(fā)生縮氨酸偶合，將形成本發(fā)明化合物。在α-氨基醇的情況下，氧化產(chǎn)品醇將形成作為本發(fā)明化合物的酮。在α-氨基酯的情況下，水解產(chǎn)品酯，繼之以與適宜的胺形成酰胺，將形成作為本發(fā)明化合物的酰胺。
方案15 方案1、2、6和15中所示的酸也可以如方案16所示得到制備。適當(dāng)取代的芐基溴、芐基碘或者芐基三氟甲磺酸化物(可以是手性或者外消旋的)可以與α-氨基酯在堿性條件下進(jìn)行偶合。然后用堿的水溶液對其進(jìn)行水解，形成酸，后者可以轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的實(shí)施例。
方案16 以下實(shí)施例描述了所選擇的本發(fā)明化合物的合成。這些實(shí)施例是本文中要求專利保護(hù)的發(fā)明的具體示例，并且不能解釋為對本發(fā)明范圍的限制。表1描述了實(shí)施例，當(dāng)與對于實(shí)施方案為活性的組織蛋白酶的活性部位結(jié)合時(shí)，是怎樣滿足如本文中所述的距離標(biāo)準(zhǔn)的。
實(shí)施例1N1-(氰甲基)-N2-(2，2，2-三氟-1-苯基乙基)-L-亮氨酸酰胺的合成 向L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(975mg，5.37mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中，加入2，2，2-三氟苯乙酮(0.75mL，5.34mmol)和二異丙基乙胺(3.5mL，20mmol)。滴加加入溶于0.45mL二氯甲烷溶液的TiCl4(0.55mL，5.0mmol)，和攪拌混合物過夜。然后另外加入TiCl4(O.4mL，3.6mmol)，并且攪拌混合物3h。加入NaCNBH3(1050mg，16.7mmol)的甲醇(20mL)溶液，并且攪拌混合物2h。倒入1N NaOH中以及用乙酸乙酯(2×)萃取。有機(jī)相用1N NaOH和鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥并進(jìn)行蒸發(fā)。經(jīng)ISCO柱色譜(30％～90％的乙酸乙酯/己烷梯度)純化，形成甲基N-(2，2，2-三氟-1-苯乙基)-L-白酸酯。
向室溫下的甲基N-(2，2，2-三氟-1-苯乙基)-L-白酸酯(150mg，0.50mmol)的2∶1THF/MeOH溶液中加入1M LiOH。攪拌混合物整夜并進(jìn)行濃縮。將殘余物在乙酸乙酯和pH值3.5的磷酸鹽緩沖液之間進(jìn)行分配。用鹽水洗滌有機(jī)相，用MgSO4干燥和進(jìn)行濃縮，產(chǎn)生N-(2，2，2-三氟-1-苯基乙基)-L-亮氨酸。
把N-(2，2，2-三氟-1-苯基乙基)-L-亮氨酸(149mg，0.50mmol)、氨基乙腈鹽酸鹽(102mg，1.1mmol)和PyBOP(260mg，0.50mmol)混合物溶于DMF(5mL)中。加入三乙胺(0.3mL，2.1mmol)并且攪拌混合物過夜，然后倒入pH值為3的磷酸鹽緩沖液中，并用3∶1乙醚/乙酸乙酯進(jìn)行萃取。將有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并進(jìn)行蒸發(fā)。經(jīng)ISCO柱色譜(乙酸乙酯/己烷梯度為20％～50％)純化，形成N1-(氰甲基)-N2-(2，2，2-三氟-1-苯基乙基)-L-亮氨酸酰胺，為1∶1的非對應(yīng)異構(gòu)體混合物。
MS(+APCI)313.9[M+1]。
實(shí)施例2N2-[1-(-4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺的合成 使用實(shí)施例1的方法，制備得到N2～[1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺。
MS(-ESI)403.9，405.9[M-1]-實(shí)施例3N1-(氰甲基)-N2-{[4’-((甲磺?；?)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基][4-((甲磺?；?)苯基]甲基}-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟1N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]亞甲基}-L-亮氨酸甲酯將(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲酮(202mg，0.59mmol)、L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(328mg，2.0mmol)和樟腦磺酸(52mg，0.22mmol的甲苯溶液使用Dean-Stark阱回流18小時(shí)。在真空下除去溶劑，和使用EtOAc和己烷作為洗脫液，用色譜法對所得殘余物進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物與開始物質(zhì)(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]甲酮比例為1∶1的混合物。
步驟2N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]甲基}-L-亮氨酸甲酯向得自步驟1的比例為1∶1的N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]亞甲基}亮氨酸甲酯和(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲酮(185mg，～0.2mmol)混合物的乙酸/甲醇(1∶3，4mL)溶液中，使用固體加料漏斗分批加入硼氫化鈉(～400mg)，在兩天內(nèi)(夜間停止加入)每30分鐘加入一次。反應(yīng)混合物在EtOAc和水之間得到分配，用Na2SO4對有機(jī)層進(jìn)行干燥并進(jìn)行濃縮。所得混合物通過色譜法得到純化，使用EtOAc和己烷作為洗脫液。得到N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]甲基}-L-亮氨酸甲酯，為無色膠，和(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]甲醇，為白色固體。
步驟3N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]甲基}-L-亮氨酸向得自步驟2的N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]甲基}-L-亮氨酸甲酯(81mg，0.17mmol)的THF(1mL)和MeOH(0.5mL)溶液中，加入1NLiOH(0.3mL，0.3mmol)。在室溫下攪拌所得混合物18小時(shí)，然后在EtOAc和水之間進(jìn)行分配，加入1N HCl(0.5mL)。將有機(jī)層用Na2SO4干燥，過濾并真空濃縮，產(chǎn)生無色膠狀的標(biāo)題化合物。
步驟4N2-{(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]甲基}-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺向冷卻至-10℃的N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]甲基}-L-亮氨酸(76mg，0.17mmol)(得自步驟3)、HATU(146mg，0.38mmol)和氨基乙腈鹽酸鹽(52mg，0.56mmol)的DMF(1.1mL)溶液中，加入N，N-二異丙基乙胺(0.13mL，0.75mmol)。使反應(yīng)在室溫下進(jìn)行18h并且將它在EtOAc和水之間進(jìn)行分配。有機(jī)層用Na2SO4干燥、過濾和在真空下進(jìn)行濃縮。粗制品經(jīng)色譜法使用EtOAc和己烷作為洗脫液進(jìn)行純化，產(chǎn)生無色膠狀的標(biāo)題化合物。
步驟5N1-(氰甲基)-N2-{[4-((甲磺?；?)苯基][4’-(甲硫基)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]甲基}-L-亮氨酸酰胺將來自步驟4的N2-{(4-溴苯基)[4-((甲磺?；?)苯基]甲基}-N’-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺(72mg，0.15mmol)和4-(甲硫基)苯基硼酸(37mg，0.22mmol)的乙二醇二甲醚(1mL)和2M碳酸鈉水溶液的多相混合物在真空下脫氣，和用氮?dú)鉀_洗。
向此混合物中加入[1，1’-雙(二苯膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)的二氯甲烷配合物(19mg，0.023mmol)，繼之以進(jìn)行脫氣和用氮?dú)馀趴?。將反?yīng)混合物在有效攪拌下在85℃加熱16小時(shí)。將反應(yīng)混合物在EtOAc和25％w/v的NH4OAc水溶液之間進(jìn)行分配。有機(jī)層用Na2SO4干燥、過濾和在真空下進(jìn)行濃縮。粗制品經(jīng)色譜法使用EtOAc和己烷作為洗脫液進(jìn)行純化，產(chǎn)生無色膠狀的標(biāo)題化合物。
步驟6N1-(氰甲基)-N2-{[4’-(甲硫基)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基][4-((甲磺?；?)苯基]甲基}-L-亮氨酸酰胺向N1-(氰甲基)-N2-{[4-((甲磺?；?)苯基][4’-(甲硫基)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]甲基}-L-亮氨酸酰胺(63mg，0.12mmol)、鎢酸鈉二水合物(2mg，0.006mmol)和四丁基硫酸氫銨(4mg，0.01mmol)溶液中，加入30％w/v過氧化氫水溶液(100μL，0.9mmol)，在室溫下攪拌所得的混合物10分鐘。反應(yīng)混合物在EtOAc和水之間進(jìn)行分配，加入1MNaHSO3(～3∶1)。用Na2SO4干燥有機(jī)層、過濾和在真空下進(jìn)行濃縮。粗制品經(jīng)色譜法使用EtOAc和己烷作為洗脫液進(jìn)行純化，產(chǎn)生無色膠狀的標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)568.2[M+1]+。
實(shí)施例4N1-(氰甲基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
步驟1(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基戊烷-2-胺向室溫下的L-亮氨醇(6.0g)二氯甲烷(100mL)溶液中加入三乙胺(11mL)、DMAP(0.1g)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(8.5g)。在室溫下攪拌混合物2小時(shí)，然后加入水。將有機(jī)層進(jìn)行分離，以及更進(jìn)一步用二氯甲烷萃取水溶液。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥和在真空下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物，該殘余物原樣用于下一反應(yīng)。1H NMR(CD3COCD3)δ3.48(m，2H)，3.32(m，1H)，2.76(m，1H)，1.78(m，1H)，1.22-1.02(m，2H)，0.88(m，15H)，0.06(s，6H)。
步驟2(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基-N-[(1E)-2，2，2三氟亞乙基]戊烷-2-胺將來自步驟1的(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基戊-2-胺(50g)和三氟乙醛甲基半縮醛(35mL)的甲苯(300mL)溶液加熱回流16小時(shí)，在此期間在Dean-Stark阱中收集水。在真空下蒸發(fā)溶劑，和將殘余物在SiO2上進(jìn)行純化，使用己烷和乙酸乙酯(9∶1)作為洗脫液，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.88(m，1H)，3.76-3.45(m，3H)，1.60-1.25(m，3H)，0.88(m，15H)，0.06(s，3H)，0.04(s，3H).
步驟3(2S)-2-{(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4-甲基戊烷-1-醇將n-BuLi(2.5M己烷溶液，42mL)加入到-70℃的1，4-二溴苯(25.8g)的THF溶液中，并且攪拌混合物25分鐘。然后加入(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基-N-[(1E)-2，2，2-三氟亞乙基]戊烷-2-胺(31g)的THF(30mL)溶液，并且攪拌混合物1.5小時(shí)。然后在強(qiáng)烈攪拌下，將其緩緩倒入乙酸乙酯(500mL)、水(2L)、冰(300g)和氯化銨(100g)的混合物中。將有機(jī)層進(jìn)行分離，以及更進(jìn)一步用乙酸乙酯(2×500mL)對水溶液進(jìn)行萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥和在真空下除去溶劑得到殘余物，該殘余物照此使用。將由上所得殘余物溶于THF(250mL)中，并且將溶液冷卻至0℃。將叔丁基氟化銨(110mL)的1MTHF溶液滴加加入，并且使混合物反應(yīng)4小時(shí)。在強(qiáng)烈攪拌下，將其倒入乙酸乙酯(300mL)、水(2L)和氯化銨(100g)中。將有機(jī)層進(jìn)行分離，以及更進(jìn)一步用乙酸乙酯(2×100mL)萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥和在真空下蒸發(fā)溶劑得到殘余物，將該殘余物在SiO2上進(jìn)行純化，使用梯度乙酸乙酯和己烷(1∶5～1∶4)洗脫液，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.6(2H，d)，7.45(2H，d)，4.55(1H，m)，3.65-3.7(1H，m)，3.5-3.55(1H，m)，3.25-3.35(1H，m)，2.6-2.7(1H，m)，2.25-2.35(1H，m)，1.65-1.75(1H，m)，1.3-1.4(1H，m)，1.2-1.3(1H，m)，0.75-0.9(6H，dd).
步驟4(2S)-4-甲基-2-({(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-(甲硫基)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}氨基)戊烷-1-醇將氮?dú)饬魍ㄟ^懸浮液15分鐘，該懸浮液由來自步驟3的溴化物(27.7g)、4-(甲硫基)苯基硼酸(15.7g)、2M Na2CO3(100mL)和正丙醇(500mL)組成。然后加入Pd(OAc)2和PPh3比例為1∶3的混合物(3.5g)，和將反應(yīng)升溫至70℃并且在氮?dú)庀聰嚢?小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋并倒入水(2L)和冰(500g)中。將乙酸乙酯層分離，以及更進(jìn)一步用乙酸乙酯(200mL)萃取水層。將合并的乙酸乙酯萃取物用0.5N NaOH(2×200mL)、NH4Cl水溶液和鹽水洗滌，并用硫酸鎂干燥。除去溶劑留下殘余物，在SiO2通過色譜法純化該殘余物，使用梯度乙酸乙酯和己烷(1∶4～1∶3)和再一次用梯度丙酮和甲苯(1∶10)洗脫。將殘余物溶于熱己烷(200mL)中，并且在攪拌下使溶液冷卻至0℃。對獲得的固體進(jìn)行過濾和干燥，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.7(2H，d)，7.65(2H，d)，7.6(2H，d)，7.35(2H，d)，4.5-4.6(1H，m)，3.7(1H(OH)，m)，3.5-3.6(1H，m)，3.3-3.4(1H，m)，2.7(1H，m)，2.5(3H，s)，2.3-2.4(1H(NH)，m)，1.65-1.75(1H，m)，1.2-1.4(3H，m)，0.8-0.9(6H，dd).
步驟5(2S)-4-甲基-2-({(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}氨基)戊烷-1-醇向0℃的來自步驟4的硫化物(19g)的甲苯(400mL)溶液中加入Na2WO4·2H2O(0.16g)和Bu4NHSO4(0.81g)。然后緩緩加入30％過氧化氫(12.2mL)，在室溫下攪拌混合物4.5小時(shí)。然后把化合物傾倒在冰、稀釋的硫代硫酸鈉水溶液和乙酸乙酯的混合物上。將有機(jī)層進(jìn)行分離，以及更進(jìn)一步用乙酸乙酯(2×100mL)萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥和在真空下蒸發(fā)溶劑得到殘余物，將該殘余物在SiO2上進(jìn)行純化，使用乙酸乙酯和己烷(1∶5～1∶4)作為洗脫液，得到產(chǎn)物。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.05(2H，d)，8.0(2H，d)，7.85(2H，d)，7.7(2H，d)，4.6-4.7(1H，m)，3.75(1H，m)，3.6(1H，m)，3.35-3.45(1H，m)，3.2(3H，s)，2.7-2.8(1H，m)，2.35-2.45(1H，m)，1.7-1.8(1H，m)，1.2-1.5(2H，m)，0.8-0.95(6H，dd).
步驟6N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸的制備將H5IO6/CrO3懸浮液(529mL 0.44M CH3CN溶液；參閱下面的注釋)冷卻至0℃，滴加將來自步驟3的醇(20g)的CH3CN(230mL)溶液。在0～5℃下攪拌混合物3.5小時(shí)。在劇烈攪拌下將其倒入pH值為4的Na2HPO4中，和用乙醚(3×250mL)對混合物進(jìn)行萃取。將合并的乙醚萃取物用水與鹽水(1∶1)洗滌、用NaHSO3稀溶液和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)萃取物、進(jìn)行過濾和將溶劑蒸干得到殘余物，將殘余物分成兩組以進(jìn)行下面的純化。
將由上所得的粗產(chǎn)物酸(10g)溶于醋酸異丙酯(250mL)中，將其萃取入冷0.1N NaOH(3×250mL)中。將合并的萃取物用乙醚(250mL)洗滌，然后用6N HCl將其緩緩酸化至pH值為4。用醋酸異丙酯(2×250mL)對羧酸進(jìn)行萃取，對醋酸異丙酯層進(jìn)行干燥和濃縮，得到基本上純的產(chǎn)物，將此用于下一步中。
注釋氧化劑(H5IO6/CrO3)如Tetrahedron Letters 39(1998)5323-5326所述進(jìn)行制備，但是使用HPLC級(jí)的CH3CN(含有0.5％水)；不加入水。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.05(2H，d)，7.95(2H，d)，7.8(2H，d)，7.65(2H，d)，4.45-4.55(1H，m)，3.55-3.6(1H，m)，3.2(3H，s)，2.8-3.0(broad m，NH/OH)1.95-2.05(1H，m)，1.55-1.6(2H，m)，0.9-1.0(6H，m).
步驟7N1-(氰甲基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備向來自步驟7的酸(9g)的DMF(200mL)溶液中，加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷六氟磷酸鹽(11.6g)、氨基乙腈鹽酸鹽(3.94g)，和將混合物冷卻至0℃。滴加加入三乙胺(9.9mL)，將混合物升溫至室溫并且攪拌16小時(shí)。將其倒入冰和飽和的碳酸氫鈉水溶液中，用乙醚(3×100mL)萃取。用鹽水洗滌合并的萃取物，用硫酸鎂干燥和在真空下除去溶劑。通過色譜法在SiO2上使用乙酸乙酯和己烷(1∶1)對殘余物進(jìn)行純化。然后將標(biāo)題化合物在乙醚中攪拌16小時(shí)、過濾和干燥(熔點(diǎn)140.5℃)。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.0(2H，d)，7.95(2H，d)，7.8(2H，d)，7.65(2H，d)，4.35-4.45(1H，m)，4.1-4.2(2H，m)，3.45-3.55(1H，m)，3.15(3H，s)，2.65-2.7(1H，m)，1.85-1.95(1H，m)，1.4-1.6(2H，m)，0.85-0.95(6H，m).
實(shí)施例5N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備
步驟1(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-羥基丁酸芐基酯將N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸4-芐基酯(30g)溶于乙二醇二甲醚(90mL)中，將溶液冷卻至-5℃。然后加入N-甲基嗎啉(10.32mL)，繼之以加入氯甲酸異丁酯(12.7mL)，如此使得溫度保持低于-10℃。將混合物老化0.5小時(shí)。將固體迅速過濾和用乙二醇二甲醚(90mL)進(jìn)行洗滌。向冷卻至-50℃的濾液中小心地加入硼氫化鈉(4.4g)水溶液(45mL)，按如此方式加入，以保持溫度在-30℃和-15℃之間。加入氫化物后，將水(500mL)按一定方式加入，使得溫度保持低于-15℃。將懸浮液過濾，用水(400mL)對固體進(jìn)行洗滌和干燥，得到(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-羥基丁酸芐基酯。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.3-7.45(5H，m)，5.85-5.95(1H，NH)，5.15(2H，s)，3.95-4.1(2H，m)，3.5-3.7(2H，m)，2.55-2.75(2H，m)，1.4(9H，s).
步驟2[(4S)-2-氧代-1，3-唑烷-4-基]乙酸芐基酯向步驟1的溶于二氯乙烷(925mL)的醇(95.7g)中加入吡啶(625mL)，和將混合物冷卻至0-5℃。將無水對甲苯磺酸酐(105.7g)加入，將混合物升溫至室溫并且攪拌1小時(shí)。然后將其加熱到90℃保持2小時(shí)。將混合物冷卻，用二氯甲烷(1000mL)稀釋和用1N HCl(3×600mL)洗滌。用鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥和在真空下除去溶劑。通過色譜法在SiO2對殘余物進(jìn)行純化，使用比例為1∶1的乙酸乙酯和己烷，然后使用乙酸乙酯，得到[(4S)-2-氧代-1，3-唑烷-4-基]乙酸芐基酯。
1H NMR(CD3SOCD3)δ7.8(1H，NH)，7.3-7.45(5H，m)，5.05-5.15(2H，m)，4.4-4.5(1H，m)，4.1-4.2(1H，m)，4.0-4.05(1H，m)，3.6-3.8(2H，m).
步驟3(4S)-4-(2-羥基-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮在-20℃下，將甲基溴化鎂(227mL的3M乙醚溶液)加入到甲苯(340mL)和THF(340mL)的混合物中。然后將步驟2的酯(40g)的熱THF溶液(170mL)滴加加入，保持溫度低于-10℃，放置混合物2小時(shí)。然后將混合物緩緩加入到水(1000mL)和乙酸(200mL)的混合物中，并且在室溫下攪拌混合物2小時(shí)。將水層進(jìn)行分離，和將有機(jī)層更進(jìn)一步用水(2×200mL)進(jìn)行萃取。使用二氯甲烷和連續(xù)提取器將產(chǎn)物從合并的水層中提取出來。借助于庚烷將二氯甲烷萃取液蒸干。通過色譜法在SiO2上使用乙醇和二氯甲烷(1∶30)對殘余物進(jìn)行純化，得到(4S)-4-(2-羥基-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮。
1H NMR(CD3COCD3)δ6.1-6.4(1H，NH)，4.45-4.55(1H，m)，4.1-4.2(1H，m)，3.95-4.05(1H，m)，3.7(1H，s)，1.65-1.85(2H，m)，1.25(6H，m).
步驟4(4S)-4-(2-氟-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮將得自步驟3的醇(47.8g)的二氯甲烷(100mL)溶液加入到(二乙基氨基)三氟化硫(48.5g)的二氯甲烷(500mL)溶液中。將混合物升溫至室溫和攪拌1小時(shí)。然后小心地將其加入到0℃的飽和NaHCO3水溶液(800mL)的混合物中。將有機(jī)層分離，用飽和NaHCO3水溶液洗滌。更進(jìn)一步用二氯甲烷(100mL)萃取水層，將合并的二氯甲烷層進(jìn)行干燥和濃縮。使用乙酸乙酯和己烷(1∶5)，然后使用乙酸乙酯，通過色譜法在SiO2對殘余物進(jìn)行純化，得到(4S)-4-(2-氟-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮。
1H NMR(CD3SOCD3)δ7.6(1H，NH)，4.4-4.5(1H，m)，3.95-4.05(1H，m)，3.9-3.95(1H，m)，1.8-1.95(2H，m)，1.25-1.4(6H，2s).
步驟5(2S)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊烷-1-醇。
向溶于90％乙醇水溶液(216mL)中的步驟4的氟代衍生物(21.0g)中加入氫氧化鉀(21.9g)。將混合物在回流下加熱4小時(shí)，冷卻至室溫。然后將混合物濃縮和用甲苯(3×300mL)進(jìn)行共蒸發(fā)。將殘余物溶于二氯甲烷(500mL)中并攪拌0.5小時(shí)。將懸浮液濾過硅藻土和用二氯甲烷(3×100mL)洗滌硅藻土。將濾液濃縮至干燥，得到(2S)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊-1-醇。
1H NMR(CD3OD)δ3.4-3.5(1H，m)，3.2-3.3(1H，m)，3.0-3.1(1H，m)，1.5-1.7(2H，m)，1.35(3H，s)，1.3(3H，s).
步驟6(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基戊烷-2-胺將得自步驟5的氨基醇(21.0g)溶于二氯甲烷(300mL)中，將溶液冷卻至0℃。將4-(二甲基氨基)吡啶(0.051g)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(21g)加入，然后加入三乙胺(25mL)。在室溫下攪拌混合物過夜。將反應(yīng)混合物緩緩倒入0℃的飽和氯化銨水溶液中，并用二氯甲烷(3×300mL)進(jìn)行萃取。用鹽水洗滌有機(jī)層、用硫酸鈉干燥和在真空下除去溶劑，得到(2S)-1-{[叔丁基(二甲基甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基戊烷-2-胺。
1H NMR(CD3OD)δ3.6-3.65(1H，m)，3.4-3.5(1H，m)，3.1-3.2(1H，m)，1.6-1.8(2H，m)，1.35-1.45(6H，m)，0.93(9H，s)，0.1(6H，s).
步驟7(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基-N-[(1E)-2，2，2-三氟亞乙基]戊烷-2-胺。
向溶于苯(126mL)的得自步驟6的胺(31.5g)中加入三氟乙醛甲基半縮醛(21.6mL)。在回流下加熱溶液過夜，使用Dean-Stark阱收集水。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并濃縮至干燥。在SiO2上使用4％的乙酸乙酯己烷溶液對殘余物進(jìn)行純化，得到(2S)-1-([叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基戊烷-2-胺。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.9-7.95(1H，m)，3.75-3.85(1H，m)，3.7-3.75(1H，m)，3.53-3.6(1H，m)，1.9-2.0(2H，m)，1.3-1.4(6H，m)，0.9(9H，s)，0.1(3H，s)，0.05(3H，s).
步驟8(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4-氟-4-甲基戊烷-1-醇向-75℃的1，4-二溴苯(0.26g)的THF(4mL)溶液中，加入n-BuLi(0.42mL的2.5M己烷溶液)和將混合物放置20分鐘。加入步驟7的亞胺(0.329g)的THF(2mL)溶液，和將混合物放置2小時(shí)。然后將混合物加入到水(5OmL)、NH4Cl(1g)和碎冰的混合物中。用乙酸乙酯(2×25mL)對其進(jìn)行萃取，和將合并的乙酸乙酯層干燥和蒸干。
重復(fù)相同的步驟，但是使用二溴苯(1.2g)、n-BuLi(1.84mL)和亞胺(1.38g.)，和對反應(yīng)混合物的處理如上。將合并的根據(jù)兩種制備方法得到的殘余物溶于THF(10mL)中，并且冷卻至0℃。加入正丁基氟化銨(6mL的1M THF溶液)和在+5℃下攪拌混合物16小時(shí)。然后將其倒入水(50mL)、氯化銨(1g)和碎冰的混合物中，并將有機(jī)層分離。更進(jìn)一步用乙酸乙酯(2×15mL)萃取水層，和對合并的有機(jī)層進(jìn)行干燥和濃縮。在SiO2上使用乙酸乙酯和己烷(1∶5)對殘余物進(jìn)行純化，得到(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4-氟-4-甲基戊-1-醇。
1H(CD3COCD3)δ7.65(2H，m)，7.5(2H，m)，4.5-4.6(1H，m)，3.8(1H，m)，3.6(1H，m)，3.3-3.4(1H，m)，2.85-2.0(1H，m)，2.55(1H，m)，1.7-1.9(2H，s)，1.3-1.4(6H，m).
步驟9N-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-4-氟-L-亮氨酸。
將H5IO6/CrO3懸浮液(529mL的0.44M CH3CN溶液；注釋)冷卻至0℃，和將得自步驟8的醇(1.55g)的CH3CN(5mL)溶液滴加加入。在0～5℃下攪拌混合物3.5小時(shí)。在劇烈攪拌下將其倒入pH值為4的Na2HPO4(200mL)中，和用乙醚(3×50mL)萃取混合物。將合并的乙醚萃取液用水與鹽水(1∶1)洗滌，然后用NaHSO3稀溶液和鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥和在真空下將溶劑蒸干，得到N-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-4-氟-L-亮氨酸，在下一步中照此使用。
注釋氧化劑(H5IO6/CrO3)如Tetrahedron Letters 39(1998)5323-5326所述進(jìn)行制備，但是使用HPLC級(jí)的CH3CN(含有0.5％水)；不加入水。
步驟10N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺。
將二異丙基乙胺(4.2mL)加入到0℃的得自步驟9的酸(1.5g)、1-氨基-1-環(huán)丙烷腈鹽酸鹽(1.18g)、0-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽(1.94g)和二甲基甲酰胺(5mL)懸浮液中，混合物在室溫下反應(yīng)48小時(shí)。然后將其傾倒在冰和稀氯化銨水溶液中。用乙酸乙酯和乙醚(1∶1)萃取混合物，和將合并的有機(jī)層用pH值為3的稀Na2HPO4溶液和鹽水洗滌。將溶劑蒸干，和使用乙酸乙酯和己烷(1∶2)通過色譜法在SiO2上對殘余物進(jìn)行純化，得到N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N’-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺，具有用于下一步反應(yīng)的充分純度。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.15(1H，NH)，7.6(2H，m)，7.45(2H，m)，4.35-4.45(1H，m)，3.45-3.55(1H，m)，1.9-2.1(2H，m)，1.75-1.85(1H，NH)，1.35-1.55(8H，m)，1.1-1.15(1H，m)，0.95-1.05(1H，m).
步驟11N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-(甲硫基)-1，1’-聯(lián)苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺。
讓氮?dú)饬魍ㄟ^懸浮液15分鐘，懸浮液由得自步驟10的溴化物(0.338g.)、4-(甲硫基)苯基硼酸(0.252g)、2M Na2CO3(0.8mol)和DMF(4mL)構(gòu)成。然后加入PdCl2·dppf(0.1g)，和將反應(yīng)升溫至85℃，并在氮?dú)庀聰嚢?小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋和將其倒入水(50mL)和冰中。將乙酸乙酯層分離，以及更進(jìn)一步用乙酸乙酯對水層進(jìn)行萃取。干燥合并的乙酸乙酯萃取液和在真空下除去溶劑。使用乙酸乙酯和己烷(1∶2)通過色譜法在SiO2上對殘余物進(jìn)行純化，得到N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-(甲硫基)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.15(1H，NH)，7.1-7.2(4H，m)，7.5-7.55(2H，m)，7.35-7.4(2H，m)，4.3-4.4(1H，m)，3.45-3.55(1H，m)，2.75-2.8(1H，NH)，2.5(3H，s)，1.9-2.05(2H，m)，1.3-1.5(8H，m)，1.0-1.1(1H，m)，0.85-0.95(1H，m).
步驟12N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備向0℃的得自步驟11的硫化物(0.265g)的甲苯(5mL)和二氯甲烷(5mL)溶液中加入Na2WO4·2H2O(0.002g)和n-Bu4NHSO4(0.01g)。然后緩緩加入30％過氧化氫(0.137mL)，和在室溫下攪拌混合物3小時(shí)。然后把化合物傾倒在冰、稀的硫代硫酸鈉水溶液和乙酸乙酯的混合物上。將有機(jī)層進(jìn)行分離，以及更進(jìn)一步用乙酸乙酯對水層進(jìn)行萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，和在真空下除去溶劑得到殘余物，在SiO2上純化該殘余物，使用乙酸乙酯、己烷和二氯甲烷(1∶1∶0.1)作為洗脫液。將殘余物在乙醚中進(jìn)行研磨，得到N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.2(1H，NH)，8.05-8.1(2H，m)，7.95-8.0(2H，m)，7.8(2H，m)，7.65(2H，m)，4.35-4.45(1H，m)，3.5-3.6(1H，m)，3.2(3H，s)，2.8-2.9(1H，NH)，1.9-2.1(2H，m)，1.3-1.5(8H，m)，1.05-1.15(1H，m)，0.9-1.0(1H，m).
實(shí)施例6N2-[1-(3-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺的合成 使用實(shí)施例1所述步驟，將其中2，2，2-三氟苯乙酮替代為1-(3-溴苯基)-2，2，2-三氟乙酮，制備得到標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)406.0，408.1[M+1]+.
實(shí)施例7N1-(氰甲基)-N2-[2，2，2-三氟-1-(4-哌嗪-1-苯基)乙基]-L-亮氨酸酰胺 步驟1N2-(1-{4-[4-(叔丁基羧基)哌嗪-1-基]苯基}-2，2，2-三氟乙基)-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺將N2-[1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺(實(shí)施例2)(100mg，0.25mmol)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(2.3mg，0.0025mmol)、聯(lián)苯基-2-基(二叔丁基)膦(3mg，0.01mmol)、磷酸鉀(74mg，0.35mmol)和叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(56mg，0.3mmol)的乙二醇二甲醚(0.5mL)溶液冷卻至-78℃，在高真空下抽氣3分鐘，然后將氮?dú)鈱?dǎo)入燒瓶中。然后將混合物在80℃下加熱1小時(shí)。冷卻到室溫后，直接將混合物應(yīng)用到硅膠吸附柱上和用乙酸乙酯/己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物。
步驟2N1-(氰甲基)-N2-[2，2，2-三氟-1-(4-哌嗪-1-基苯基)乙基]-L-亮氨酸酰胺向得自步驟1的化合物(139mg，0.27mmol)的1，4-二氧六環(huán)(0.5mL)溶液中加入甲磺酸(53μL，0.82mmol)，攪拌混合物過夜。加入乙酸乙酯，然后將混合物用飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌、用硫酸鎂干燥、過濾和在真空下蒸發(fā)溶劑。用93％二氯甲烷、0.6％氨水和6.4％甲醇洗脫，通過硅膠色譜法純化得到標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)412.2[M+1]+.
實(shí)施例8 N2-((1S)-1-{4’-[1-(氨基羰基)環(huán)丙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的合成步驟11-(4-溴苯基)環(huán)丙烷腈的制備向室溫下的4-溴苯基乙腈(18.0g)的22mL氫氧化鈉(水中50％W/W)溶液中，加入1-溴-2-氯乙烷(12.0mL)和芐基三甲基氯化銨(627mg)?；旌衔镌?0℃加熱過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，加入乙醚(300mL)。用水(100mL)、氯化氫(100mL，水中含10％HCl)和鹽水洗滌乙醚層。有機(jī)層用硫酸鎂干燥和在真空下除去溶劑。通過使用乙醚和己烷研磨來純化殘余物，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.60(2H，d)，7.35(2H，d)，1.74-1.80(2H，m)，1.52-1.57(2H，m).
步驟21-(4-溴苯基)環(huán)丙烷羧酸的制備向室溫下的得自步驟1的1-(4-溴苯基)環(huán)丙烷腈(13g)的乙醇(110mL)溶液中加入56mL氫氧化鈉溶液(NaOH在水中W/W為25％)。將混合物在100℃加熱過夜。將其冷卻至室溫，倒入冰和氯化氫(1N)中，以及用二氯甲烷(2×100mL)進(jìn)行萃取。用鹽水洗滌合并的萃取物，用硫酸鎂干燥和在真空下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.50(2H，d)，7.35(2H，d)，1.53-1.60(2H，m)，1.18-1.22(2H，m).
步驟31-(4-溴苯基)環(huán)丙烷甲酰胺的制備向-15℃的得自步驟2的1-(4-溴苯基)環(huán)丙烷羧酸(1.5g)的氯仿(60mL)溶液中緩緩加入氯甲酸異丁酯(900μL)和三乙胺(1.1mL)。將反應(yīng)混合物在-15℃下攪拌2小時(shí)。然后用氨氣使其飽和和在-15℃下攪拌10分鐘。容許反應(yīng)混合物在室溫下放置1小時(shí)，然后將其倒入水(60mL)中和進(jìn)行分層。用二氯甲烷(2×60mL)萃取水層。將合并的萃取物用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥和在真空下除去溶劑。通過使用乙醚和己烷揮發(fā)對殘余物進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.54(2H，d)，7.40(2H，d)，6.45(1H，bs)，5.96(1H，bs)，1.42-1.48(2H，m)，0.98-1.02(2H，m).
步驟4N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備讓氮?dú)饬魍ㄟ^得自實(shí)施例5步驟9的N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺、雙(四甲基乙二醇化)二硼(1.24g)和乙酸鉀(1.53g)的DMF(40mL)懸浮液15分鐘。然后加入催化劑[1，1’-雙(二苯膦基)-二茂鐵]二氯化鈀(II)與二氯甲烷(181mg)的配合物(1∶1)，將混合物升溫至65℃，在氮?dú)庀逻^夜。將混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯和己烷(1∶1，100mL)稀釋并倒在水(50mL)和冰(50g)上。將有機(jī)層進(jìn)行分離，以及更進(jìn)一步用乙酸乙酯和己烷(1∶1，3×50mL)進(jìn)行萃取水層。用鹽水洗滌合并的萃取液和用硫酸鎂干燥。除去溶劑得到殘余物，使用乙酸乙酯和己烷(1∶3～1∶2)，將該殘余物通過SiO2色譜進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.15(1H，bs)，7.78(2H，d)，7.50(2H，d)，4.31-4.40(1H，m)，3.47-3.54(1H，m)，2.72-2.80(2H，m)，1.32-1.48(9H，m)，1.05-1.11(1H，m)，0.87-0.95(1H，m).
步驟5N2-((1S)-1-{4’-[1-(氨基羰基)環(huán)丙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的制備將氮?dú)饬魍ㄟ^得自步驟4的硼酸鹽(150mg)、得自步驟3的1-(4-溴苯基)環(huán)丙烷甲酰胺(110mg)和2M Na2CO3(400μL)的DMF(4ml)溶液15分鐘。然后加入催化劑[1，1’-雙(二苯膦基)-二茂鐵]二氯化鈀(I)與二氯甲烷(12mg)的配合物(1∶1)，和將混合物升溫至80℃，在氮?dú)庀卤３?小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，倒入冰(10g)和飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)中，并用50％乙酸乙酯(3×30mL)萃取。用鹽水洗滌合并的萃取液和用硫酸鎂干燥。除去溶劑得到殘余物，使用乙酸乙酯和己烷(50～70％)作為洗脫液，將該殘余物通過色譜法在SiO2上進(jìn)行純化，然后通過使用乙醚揮發(fā)進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.20(1H，bs)，7.75(2H，d)，7.70(2H，d)，7.60(2H，d)，7.55(2H，d)，6.37(1H，bs)，5.87(1H，bs)，4.35-4.43(1H，m)，3.52-3.58(1H，m)，1.92-2.05(2H，m)，1.42-1.50(6H，m)，1.35-1.42(4H，m)，1.03-1.12(3H，m)，0.92-0.98(1H，m).
實(shí)施例9N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4，4-二氟-L-正纈氨酸酰胺 步驟1N-((芐氧基)羰基)-3-碘-L-丙氨酸甲酯的制備向芐氧羰基-L-絲氨酸(25g，104mmol)的乙酸乙酯(200mL)溶液中，加入重氮甲烷的乙醚溶液，直至呈現(xiàn)持續(xù)的輕微的黃色。將溶劑在真空下蒸發(fā)。向殘余物中加入N，N-二甲基甲酰胺(400mL)和甲基三苯氧基膦碘化物(50g，110mmol)。攪拌混合物15分鐘，然后加入甲醇(15mL)，然后在混合物中倒入20％硫代硫酸鈉，用乙酸乙酯∶己烷為1∶1的混合物(2L)進(jìn)行萃取。用水和鹽水(3×)洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾和在真空下將溶劑蒸發(fā)。使用乙酸乙酯和己烷，通過硅膠色譜法純化殘余物。將得到的化合物在乙醚/己烷中研磨、過濾和風(fēng)干，得到N-((芐氧基)羰基)-3-碘-L-丙氨酸甲酯。
步驟2N-((芐氧基)羰基)-氧代-L-正纈氨酸甲酯的制備將得自步驟1的N-((芐氧基)羰基)-3-碘-L-丙氨酸甲酯(10g，27.5mmol)、苯(110mL)中的鋅-銅偶(3.3g)和N，N-二甲基乙酰胺(7.4mL)在超聲浴中超聲處理2小時(shí)。經(jīng)過此期間后，加入3批1，2-二溴乙烷(0.24mL)和三甲基氯硅烷(0.17mL)。然后向該混合物中加入雙(三苯基膦)氯化鈀(0.958g，1.4mmol)和乙酰氯(2.5mL，35.2mmol)，將混合物在70℃加熱2小時(shí)。冷卻至室溫后，使用乙酸乙酯在硅藻土上過濾混合物，然后用飽和氯化銨溶液和鹽水(2×)洗滌有機(jī)層、用硫酸鎂干燥、過濾和在真空下蒸發(fā)溶劑。通過硅膠色譜法使用乙酸乙酯和己烷對殘余物進(jìn)行純化，得到N-((芐氧基)羰基)-4-氧-L-正纈氨酸甲酯。
步驟3N-((芐氧基)羰基)-4，4-二氟-L-正纈氨酸甲酯的制備向0℃下的N-((芐氧基)羰基)-4-氧-L-正纈氨酸甲酯(1.3g，4.65mmol)的二氯甲烷(20mL)和甲醇(0.019mL)溶液中緩緩加入DAST(2.46mL)。除去冰浴并用熱水浴(57℃)替換。替換熱水浴3次，然后將混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物緩緩傾倒在冷的飽和NaHCO3上，用乙酸乙酯萃取，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾和在真空下將溶劑蒸發(fā)。通過硅膠色譜法，使用乙酸乙酯和己烷純化殘余物，得到N-((芐二氟基)羰基)-4，4-二氟-L-正纈氨酸甲酯。
步驟4(1S)-3，3-二氟-1-(羥甲基)丁基氨基甲酸芐基酯的制備向N-((芐氧基)羰基)-4，4-二氟-L-正纈氨酸甲酯(1.59g，5.29mmol)的乙醇(50mL)溶液中加入氯化鋰(919mg)，攪拌混合物10分鐘。緩緩加入硼氫化鈉(820mg)，攪拌混合物2小時(shí)。然后，加入另一份硼氫化鈉(100mg)，繼續(xù)攪拌30分鐘。用水(20mL)稀釋混合物和用1N HCl慢慢地中和，繼之以加入另一等量水。用乙酸乙酯(2×)萃取混合物、用鹽水洗滌、用硫酸鎂干燥、過濾和在真空下將溶劑蒸發(fā)，得到(1S)-3，3-二氟-1-(羥甲基)丁基氨基甲酸芐基酯。
步驟5(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟戊-2-胺的制備向(1S)-3，3-二氟-1-(羥甲基)丁基氨基甲酸芐基酯(得自步驟4)的乙醇(25mL)溶液中，加入在活性炭上的鈀(10％，150mg)，在H2氣氛下(H2氣泡)攪拌混合物2h。加入二氯甲烷，在硅藻土上過濾混合物。在真空下蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶于二氯甲烷(15mL)中，將三乙胺(1mL)、N，N-二甲基氨基吡啶(10mg)和叔丁基二甲基氯代甲硅烷(844mg)加入。攪拌混合物過夜，然后加入水和鹽水。用乙酸乙酯(2×)萃取混合物、用鹽水洗滌、用硫酸鎂干燥、過濾和在真空下將溶劑蒸發(fā)，得到(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟戊烷-2-胺。
步驟6(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟-N-((1E)-2，2，2-三氟亞乙基)戊烷-2-胺的制備將得自步驟5的(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟戊烷-2-胺和三氟乙醛甲基半縮醛(80％，0.9mL)的苯(20mL)溶液用Dean-Stark儀器回流過夜。將溶劑在真空下蒸發(fā)，使用乙酸乙酯和己烷通過硅膠色譜法進(jìn)行純化殘余物，得到(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟-N-(1E)-2，2，2-三氟亞乙基)戊烷-2-胺。
步驟7(2S)-2-((1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基)氨基)-4，4-二氟戊烷-2-胺的制備向-78℃的1，4-二溴苯(330毫克)的THF(5.2mL)溶液中，加入2.5M的n-BuLi的己烷溶液(0.52mL)，將溶液老化30分鐘。然后，加入(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟-N-((1E)-2，2，2-三氟亞乙基)戊烷-2-胺(333mg)的THF(5.2mL)溶液。將混合物在-78℃下攪拌45分鐘，然后傾倒在冷的飽和氯化銨中，用乙酸乙酯(2×)萃取、用鹽水洗滌、用硫酸鎂干燥、過濾和在真空下將溶劑蒸發(fā)。將殘余物溶于冰水浴冷卻的THF(10mL)中，并且加入四正丁基氟化銨(在THF中1M，1.5mL)。在0℃下攪拌混合物1h，傾倒入冷水中，用乙酸乙酯(2×)萃取，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾和在真空下將溶劑蒸發(fā)，得到(2S)-2-(((1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基)氨基)-4，4-二氟戊-1-醇。
步驟8N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4，4-二氟-L-正纈氨酸酰胺的制備將H5IO6/CrO3懸浮液(27mL的0.44M CH3CN溶液；注釋)冷卻至0℃，滴加加入得自步驟7的醇(740mg)的CH3CN(10mL)溶液。將混合物在0℃下攪拌4小時(shí)，另外再加入H5IO6/CrO3(2×10mL的0.44MCH3CN溶液)。然后在劇烈攪拌下將混合物倒入pH值為4的Na2HPO4緩沖溶液中，用乙酸乙酯萃取混合物，用鹽水(2×)洗滌，然后用稀NaHSO3水溶液和鹽水洗滌。用硫酸鎂干燥混合物，過濾和將溶劑蒸干，得到680mg N-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-4，4-二氟-L-正纈氨酸，將其照此樣用于下一步驟。
注釋氧化劑(H5IO6/CrO3)如Tetrahedron Letters 39(1998)5323-5326所述進(jìn)行制備，但是使用HPLC級(jí)的CH3CN(含有0.5％水)；不加入水。
將三乙胺(0.42mL)加入到得自以上的酸(340mg)、1-氨基-1-環(huán)丙烷腈鹽酸鹽(227mg)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷六氟磷酸鹽(498mg)和二甲基甲酰胺(4.5mL)的混合物中，讓混合物在室溫下反應(yīng)48小時(shí)。然后將其傾倒入稀碳酸氫鈉中。用乙醚(3×)萃取混合物，將合并的有機(jī)層用鹽水(3×)洗滌，以及用硫酸鎂干燥并過濾。將溶劑蒸干，使用40％乙酸乙酯和己烷通過色譜法在硅膠上純化殘余物，得到N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4，4-二氟-L-正纈氨酸酰胺。
MS(+ESI)454.1，456.2[M+1]+.
實(shí)施例10N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-4，4-二氟-L-正纈氨酸酰胺
使用實(shí)施例9所述的步驟，將步驟8中的1-氨基-1-環(huán)丙烷腈鹽酸鹽替換為氨基乙腈鹽酸鹽，得到標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)428，430.1[M+1]+.
實(shí)施例114-氟-N1-[(2R，3S)-2-甲基-4-氧基四氫呋喃-3-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺 步驟1N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-4-氟-N1-[(2R，3S)-2-甲基-4-氧基四氫呋喃-3-基]-L-亮氨酸酰胺將三乙胺(0.63mL)加入到得自實(shí)施例5步驟9的酸(500mg)、(4S，5R)-4-氨基-5-甲基二氫呋喃-3(2H)-酮鹽酸鹽(227mg)(WO00/69855)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷六氟磷酸鹽(744mg)和二甲基甲酰胺(7mL)的混合物中，讓混合物在室溫下反應(yīng)3小時(shí)。然后將其傾倒入稀碳酸氫鈉中。用乙醚(3×)萃取混合物，用鹽水(3×)洗滌合并的有機(jī)層，以及用硫酸鎂干燥并過濾。將溶劑蒸干，通過色譜法在SiO2上使用30％乙酸乙酯和己烷進(jìn)行純化殘余物，得到標(biāo)題化合物。
步驟24-氟-N1-[(2R，3S)-2-甲基-4-氧基四氫呋喃-3-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-(甲硫基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺將得自步驟1的溴化物(200mg)、4-(甲硫基)苯基硼酸(104mg)、2M Na2CO3水溶液(0.51mL)和DMF(3mL)的混合物攪拌15分鐘。將PdCl2dppf2(17mg)冷卻至-78℃，在高真空下抽氣5分鐘，然后將氮?dú)馔ㄈ霟浚诘獨(dú)庀?，?0℃下加熱并攪拌混合物3小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用飽和氯化銨和鹽水(3×)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾和在真空下將溶劑蒸發(fā)。使用35％乙酸乙酯/己烷作為洗脫液，通過硅膠色譜法進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物。
步驟34-氟-N1-[(2R，3S)-2-甲基-4-氧基四氫呋喃-3-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺向得自步驟2的硫化物(120mg)的乙酸乙酯(2mL)溶液中加入Na2WO4·2H2O(1mg)和n-Bu4NHSO4(4mg)。然后緩緩加入30％過氧化氫(0.06mL)，在室溫下攪拌混合物2小時(shí)。然后進(jìn)一步加入過氧化氫(0.06mL)。然后將乙酸乙酯加入到混合物中，用濃Na2S2O3(2×)和鹽水洗滌該混合物，用硫酸鎂干燥，過濾和在真空下將溶劑蒸發(fā)。使用55％乙酸乙酯/己烷作為洗脫液，通過硅膠色譜法進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)559.1[M+1]+.
實(shí)施例12N1-(1-氰基-1-甲基乙基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
步驟12-氨基-2-甲基丙烷腈鹽酸鹽的制備向0℃的氯化銨(15.5g)水(50mL)溶液中加入丙酮(17mL)的乙醚(50mL)溶液。然后以某一速率緩緩加入氰化鈉(11.9g)的水(35mL)溶液，使得溫度絕不超過10℃。加入氰化物溶液后，將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后將其放置過夜。將乙醚層分離，用乙醚(2×30mL)萃取水層。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥和在真空下除去溶劑得到殘余物，將該殘余物用甲醇(80mL)進(jìn)行稀釋。在-78℃下冷卻該溶液和用氮?dú)怙柡?使用帶有塞閥和溫度計(jì)套管的Ace壓力管)。容許反應(yīng)混合物在室溫下放置兩天。通過氣流逐出將過量氨，通過蒸發(fā)除去甲醇。將殘余物溶于乙醚(50mL)并冷卻至0℃，然后加入40mL氯化氫(在乙醚中為1.0M)溶液。攪拌混合物30分鐘并且過濾，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3SOCD3)δ9.45(1H，s)，1.70(6H，s).
步驟2N1-(1-氰基-1-甲基乙基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備向得自實(shí)施例4步驟6的酸(1.2g)的DMF(30mL)溶液中，加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷六氟磷酸鹽(1.55g)、得自步驟1的2-氨基-2-甲基丙烷腈鹽酸鹽(720mg)，將混合物冷卻至0℃。將三乙胺(1.3mL)滴加加入并將混合物升溫至室溫并攪拌72小時(shí)。將其倒入冰和飽和碳酸氫鈉水溶液中，用乙醚(3×50mL)萃取。用鹽水洗滌合并的萃取物，用硫酸鎂干燥和在真空下除去溶劑。通過色譜法在SiO2上進(jìn)行純化殘余物，使用梯度乙酸乙酯和己烷(1∶2～1∶1)作為洗脫液，然后使用乙醚和己烷研磨，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.08(2H，d)，7.95(2H，d)，7.80(2H，d)，7.68(1H，bs)，7.65(2H，d)，4.32-4.42(1H，m)，3.43-3.52(1H，m)，3.20(3H，s)，2.65-2.75(1H，m)，1.90-2.00(1H，m)，1.57(3H，s)，1.52(3H，s)，1.52-1.57(1H，m)，1.40-1.50(1H，m)，0.90-0.98(6H，m).
實(shí)施例13N1-(氰甲基)-3-(1-甲基環(huán)丙基)-N2-{2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-丙氨酸酰胺 步驟1N-(二苯亞甲基)-4-亞甲基正纈氨酸甲酯在0℃下，向N-(二苯亞甲基)氨基乙酸甲酯(12.0g，47.4mmol)的THF(118mL)溶液中加入1M叔丁醇鉀THF(49mL，49mmol)溶液?；旌衔镒?yōu)槟埸S色，將混合物更進(jìn)一步攪拌～15min。加入3-溴-2-甲基丙烯(5.2mL，51.3mmol)，在室溫下攪拌混合物2天。用水猝滅后，用EtOAc萃取混合物。在硅膠上進(jìn)行色譜法并用己烷EtOAc(6∶1)進(jìn)行洗脫，形成2.2g作為較低極性組分的二烷基化產(chǎn)物。更進(jìn)一步洗脫產(chǎn)生為較高極性組分的標(biāo)題化合物。
1H NMR(丙酮-d6)δ7.62-7.18(m，10H)，4.72(s，1H)，4.64(s，1H)，4.20(dd，1H)，3.64(s，3H)，2.62(dd，1H)，2.50(dd，1H)，1.48(s，3H).
步驟2N-[(芐氧基)羰基]-4-亞甲基正纈氨酸甲酯將得自步驟1的N-(二苯亞甲基)-4-亞甲基正纈氨酸甲酯(6.2g，20.2mmol)和0.5M HCl水溶液(60mL)的混合物在室溫下攪拌過夜。將所有的混合物用Et2O(2×)進(jìn)行洗滌。冷卻至0℃后，將1M NaOH水溶液(40mL，40mmol)加入，然后將EtOAc(50mL)和氯甲酸芐基酯(4mL，28mmol)加入。將混合物在0℃下攪拌2h。然后將EtOAc層分離，用水(2×)洗滌，干燥(MgSO4)和濃縮。在硅膠上進(jìn)行色譜和用己烷EtOAc(6∶1)，然后(3∶1)進(jìn)行洗脫，產(chǎn)生作為無色油的標(biāo)題化合物。
1H NMR(丙酮-d6)δ7.40-7.25(m，5H)，6.54(d，1H)，5.06(s，2H)，4.82(s，1H)，4.78(s，1H)，4.40(m，1H)，3.68(s，3H)，2.52(dd，1H)，2.40(dd，1H)，1.74(s，3H).
步驟3N-[(芐氧基)羰基]-3-(1-甲基環(huán)丙基)-L-丙氨酸甲酯向0℃的CH2CL2(40mL)中加入二乙基鋅(2mL，19.5mmol)，然后滴加加入三氟乙酸(1.5mL，19.5mmol)的CH2CL2(8mL)溶液。攪拌15分鐘后，將二碘甲烷(1.6mL，20.0mmol)的CH2CL2(8mL)溶液加入。攪拌混合物15分鐘，產(chǎn)生透明溶液。將得自步驟2的N-[(芐氧基)羰基]-4-亞甲基正纈氨酸甲酯(2.75g，9.9mmol)加入，將混合物在室溫下攪拌過夜。用0.1M HCl水溶液(50mL)猝滅后，將CH2Cl2層分離，用稀鹽水洗滌，干燥(MgSO4)和濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物粗產(chǎn)物。
1H NMR(丙酮-d6)δ7.35(m，5H)，6.58(d，1H)，5.08(m，2H)，4.40(m，1H)，3.68(s，3H)，1.75(dd，1H)，1.62(dd，1H)，1.08(s，3H)，0.45(m，1H)，0.22(m，3H).
步驟42-羥基-1-[(1-甲基環(huán)丙基)甲基]乙基氨基甲酸芐基酯向在0℃下冷卻的得自步驟3的粗酯的EtOH(40mL)和THF(40mL)溶液中加入LiCl(1.7g)，然后加入NaBH4(1.6g)。在室溫下攪拌混合物過夜，用0.5M HCl水溶液猝滅和用EtOAc萃取。將EtOAc萃取液用稀鹽水(2×)洗滌，干燥(MgSO4)和濃縮。色譜提純產(chǎn)生2g無色油的標(biāo)題化合物。
1H NMR(丙酮-d6)δ7.35(m，5H)，5.98(d，1H)，5.06(m，2H)，3.85(m，1H)，3.72(t，1H)，3.50(m，2H)，1.60(dd，1H)，1.34(dd，1H)，1.05(s，3H)，0.40-0.15(m，4H).
步驟52-氨基-3-(1-甲基環(huán)丙基)丙-1-醇將2-羥基-1-[(1-甲基環(huán)丙基)甲基]-乙基氨基甲酸芐基酯(2.0g，7.6mmol)和10％Pd/C(200mg)在EtOH(80mL)中的混合物與2mL 1M HCl溶液在H2氣氛下(鼓泡)攪拌過夜。將催化劑濾出和將濾液濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
1H NMR(甲醇-d4)83.72(dd，1H)，3.40(dd，1H)，3.22(m，1H)，1.50-1.30(m，2H)，1.06(s，3H)，0.45-0.25(m，4H).
步驟6N1-(氰甲基)-3-(1-甲基環(huán)丙基)-N2-{2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-丙氨酸酰胺標(biāo)題化合物由得自步驟5的氨基醇進(jìn)行制備，使用與實(shí)施例5步驟6～12中所述相同的方法。
1H NMR(丙酮-d6)δ8.06(br s，1H)，8.00(d，2H)，7.94(d，2H)，7.78(d，2H)，7.62(d，2H)，4.48(m，1H)，4.12(m，2H)，3.55(m，1H)，3.16(s，3H)，1.64(m，2H)，1.10(s，3H)，0.48-0.20(m，4H).
MS(+ESI)494(MH+).
實(shí)施例14N1-(氰甲基)-N2-(2，2，2-三氟-1-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]苯基}乙基)-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟1N2-{1-[4-(羥基羰基)苯基]-2，2，2-三氟乙基}-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺將在三丁基胺(2.5mL)和水(0.6mL)中的二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(58mg，0.08mmol)、三苯基膦(155mg，0.59mmol)和N2-[1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺(實(shí)施例2，1.2g，3.0mmol)的混合物置于帶有聚四氟乙烯涂層磁棒的鋼制反應(yīng)釜中。將系統(tǒng)用一氧化碳(每次100psi)沖洗三次，最后充滿300psi壓力的此種氣體。在持續(xù)攪拌下，將反應(yīng)混合物在160℃加熱20小時(shí)。然后使系統(tǒng)冷卻至室溫，將壓力解除，將產(chǎn)生的殘余物在EtOAc和水之間進(jìn)行分配，加入鹽酸水溶液以調(diào)節(jié)pH值為2.5～3.0。用Na2SO4干燥有機(jī)層、過濾和濃縮。將粗制品經(jīng)色譜法進(jìn)行純化，使用EtOAc、己烷和乙酸作為洗脫液，產(chǎn)生黃橙色海棉狀的標(biāo)題化合物。
步驟2N1-(氰甲基)-N2-(2，2，2-三氟-1-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]苯基}乙基)-L-亮氨酸酰胺向DMF(8mL)中的得自步驟1的N2-{1-[4-(羥基羰基)苯基]-2，2，2-三氟乙基}-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺(480mg，1.3mmol)和苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基磷六氟膦酸鹽(1.35g，2.6mmol)溶液中，緩緩加入N-甲基哌嗪(0.29mL，2.6mmol)，然后加入三乙胺(0.54mL，3.9mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。將產(chǎn)生的混合物在EtOAc和水之間進(jìn)行分配，加入鹽酸水溶液以調(diào)節(jié)pH值為2.5～3.0。將有機(jī)層用Na2SO4干燥、過濾和濃縮。粗制品經(jīng)色譜法純化，使用MeOH、EtOAc和濃NH4OH作為洗脫液，產(chǎn)生白色海棉狀的標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)454.3[M+1]+.
實(shí)施例15N1-{(1S)-1-[2-(甲硫基)乙基]-2-氧代丙基}-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟1N2-(叔丁氧羰基)-N1-甲氧基-N1-甲基-L-甲硫氨酸酰胺向DMF(15mL)中的N-叔丁氧羰基-L-甲硫氨酸(1.0g，4.0mmol)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽(3.3g，8.7mmol)和N，O-二甲基羥胺鹽酸鹽(1.0g，10.2mmol)的冰冷溶液中，滴加加入三乙胺(2.2mL，15.8mmol)。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)，然后在EtOAc和半飽和NaHCO3水溶液之間進(jìn)行分配。將有機(jī)層用Na2SO4干燥、過濾和濃縮。粗制品經(jīng)色譜法進(jìn)行純化，使用EtOAc和己烷作為洗脫液，產(chǎn)生無色漿狀的標(biāo)題化合物，。
步驟2{(1S)-1-[2-(甲硫基)乙基]-2-氧代丙基}氨基甲酸叔丁基酯向冷卻至-78℃的得自步驟1的N2-(叔丁氧羰基)-N1-甲氧基-N1-甲基-L-蛋氨酸(200mg，0.68mmol)的THF溶液中加入1.4M甲基鋰的己烷溶液(1.1mL，1.5mmol)。在此溫度下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后用25％W/v乙酸銨水溶液將其冷猝滅。用EtOAc萃取混合物，用Na2SO4干燥有機(jī)層、過濾和濃縮。粗制品經(jīng)色譜法進(jìn)行純化，使用EtOAc和己烷作為洗脫液，產(chǎn)生無色膠狀的標(biāo)題化合物。
步驟3(3S)-3-氨基-5-(甲硫基)戊-2-酮鹽酸鹽向得自步驟2的{(1S)-1-[2-(甲硫基)乙基]-2-氧代丙基}氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.57mmol)中加入4.0M的在1，4-二氧六環(huán)中的氯化氫溶液(3mL，12mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。在真空中除去溶劑并所得殘余物與甲苯(2×10mL)共沸蒸餾，產(chǎn)生白色固體的標(biāo)題化合物。
步驟4N1-{(1S)-1-[2-(甲硫基)乙基]-2-氧代丙基}-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺將得自步驟3的(3S)-3-氨基-5-(甲硫基)戊-2-酮鹽酸鹽(104mg，0.57mmol)、N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸(實(shí)施例4步驟6，127mg，0.2mmol)和0-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽(187mg，0.49mmol)的DMF(1mL)懸浮液冷卻至10℃，然后將三乙胺(115μL，0.83mmol)緩緩加入。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。將產(chǎn)生的混合物在EtOAc和半飽和NaHCO3水溶液之間進(jìn)行分配。用Na2SO4干燥有機(jī)層、過濾和濃縮。粗制品經(jīng)色譜法進(jìn)行純化，使用EtOAc和己烷作為洗脫液，產(chǎn)生白色海棉狀的標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)573.5[M+1]+.
實(shí)施例16N1-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸酰胺的合成 使用實(shí)施例15步驟4所述的方法，將其中(3S)-3-氨基-5-(甲硫基)戊-2-酮鹽酸鹽替換為L-蛋氨酸酰胺鹽酸鹽，制備得到標(biāo)題化合物，以及從EtOAc和己烷(1∶2)中進(jìn)行結(jié)晶，得到白色固體的標(biāo)題產(chǎn)物。
MS(+ESI)574.3[M+1]+.
實(shí)施例17N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸的合成 步驟1N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸甲酯的合成使用實(shí)施例15步驟4所述的方法，其中將(3S)-3-氨基-5-(甲硫基)戊-2-酮鹽酸鹽替換為甲基L-甲二磺酸鹽鹽酸鹽，制備得到標(biāo)題化合物，以及從EtOAc和己烷(1∶2)中進(jìn)行結(jié)晶，得到白色固體的標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)589.3[M+1]+.
步驟2N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸向得自步驟1的N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸甲酯(100mg，0.17mmol)的THF(2mL)和甲醇(0.5mL)冰冷溶液中，滴加加入1.0N LiOH(0.25mL，0.25mmol)，在室溫下攪拌所得的溶液18小時(shí)。溶液在EtOAc和水之間進(jìn)行分配，加入1N HCl(1mL)。用Na2SO4干燥有機(jī)層、過濾和濃縮。粗制品經(jīng)色譜法純化，使用EtOH、EtOAc和AcOH作為洗脫液，產(chǎn)生白色海棉狀的標(biāo)題化合物，將該化合物從EtOAc和己烷(6mL，1∶2)中進(jìn)行結(jié)晶，得到白色固體。
MS(+ESI)575.0[M+1]+.
實(shí)施例18N1-[(1S)-1-氰基-3-(甲硫基)丙基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成 將得自實(shí)施例16的N1-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸(350mg，0.6mmol)和吡啶(85μL，1.05mmol)的1，4-二氧六環(huán)溶液冷卻至10℃。然后，將三氟醋酐滴加加入(65μL，0.46mmol)和將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物在EtOAc和水之間得到分配。用Na2SO4干燥有機(jī)層、過濾和濃縮。粗制品經(jīng)色譜法進(jìn)行純化，使用EtOAc和己烷作為洗脫液，產(chǎn)生無色膠狀的標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)556.3[M+1]+.
實(shí)施例19N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-N1-甲基-L-蛋氨酸的合成 將DMF中的得自實(shí)施例17的N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸(100mg，0.17mmol)、鹽酸甲胺(35mg，0.52mmol)和O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽(150mg，0.39mmol)懸浮液冷卻至10℃，并且然后將三乙胺(110μL，0.79mmol)緩緩加入。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物18小時(shí)。將產(chǎn)生的混合物在EtOAc和半飽和NaHCO3水溶液之間進(jìn)行分配。用Na2SO4干燥有機(jī)層、過濾和濃縮。粗制品經(jīng)色譜法進(jìn)行純化，使用EtOAc和己烷作為洗脫液，產(chǎn)生白色海棉狀的標(biāo)題化合物，將該化合物從EtOAc和己烷中結(jié)晶而產(chǎn)生白色固體。
MS(+ESI)588.1[M+1]+.
實(shí)施例20(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯-N-(1-氰基環(huán)丙基)丁酰胺的合成
步驟1(2S)-2-氨基-4，4-二氯丁酸乙酯向25mL冰冷乙醇中，滴加加入乙酰氯(2.0mL，28mmol)。然后將(S)-2-氨基-4，4-二氯丁酸(1.0g，5.8mmol)[根據(jù)Chem.-Ztg，114，249-251(1990)和Synthesis，1996，1419制備得到]一次性加入。將混合物回流18h，濃縮和將殘余物在飽和NaHCO3溶液和二氯甲烷之間進(jìn)行分配。將有機(jī)物分離干燥(Na2SO4)、過濾和濃縮，產(chǎn)生油狀殘余物，將該殘余物通過硅膠柱進(jìn)行純化，用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，產(chǎn)生純的標(biāo)題化合物。
步驟2(2S)-2-{(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯丁酸乙酯將(2S)-2-氨基-4，4-二氯丁酸乙酯(298mg，1.49mmol)、三氟醋酸(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基酯(862mg，2.2mmol)[根據(jù)J.Am.Chem.Soc.，1983，105，2343-2350制備得到]和二異丙基乙胺(284mg，2.2mmol)在60℃和N2氣氛下均勻加熱6小時(shí)。將混合物在NaHCO3溶液和乙酸乙酯之間進(jìn)行分配。將有機(jī)層分離、干燥(Na2SO4)、過濾和濃縮。通過ISCO柱色譜(乙酸乙酯/己烷梯度為2％～15％)進(jìn)行純化而提供標(biāo)題化合物，為87∶13的非對應(yīng)異構(gòu)體混合物。
MS(+APCI)438.8[M+1]和440.8[M+3].
步驟3(2S)-2-{(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯丁酸向(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯丁酸乙酯(325mg，0.74mmol)的THF(5mL)溶液中加入三甲基硅醇鉀(178mg，1.39mmol)。將混合物在室溫下攪拌1.5小時(shí)，然后進(jìn)行濃縮。將殘余物在乙酸乙酯和1N HCl之間進(jìn)行分配。將有機(jī)層分離、干燥(Na2SO4)、過濾和濃縮，得到油狀的標(biāo)題化合物，將該化合物照此樣用于下一步中。
MS(-APCI)407.9[M-1].
步驟4(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯-N-(1-氰基環(huán)丙基)丁酰胺將(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯丁酸(275mg，0.67mmol)、1-氨基-1環(huán)丙烷腈鹽酸鹽(159mg，1.34mmol)和HATU偶合劑(305mg，0.8mmol)的混合物溶于DMF(4mL)中。將三乙胺(0.3mL，2.1mmol)加入，攪拌混合物過夜，然后將其倒入NaHCO3溶液和乙酸乙酯中。將有機(jī)層分離，用鹽水、1N HCl和鹽水洗滌。將有機(jī)層分離、干燥(Na2SO4)、過濾和濃縮，產(chǎn)生393mg油，該油經(jīng)柱色譜純化，用6∶3∶1的甲苯∶乙酸乙酯∶二氯甲烷洗脫。用乙醚揮發(fā)純產(chǎn)物得到白色固體的作為85∶15非對映異構(gòu)體混合物的標(biāo)題化合物。
MS(-APCI)471.9[M-1].
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)“主要異構(gòu)體”，δ8.95(s，1H)，7.61(d，2H，7.38(d，2H)，6.19(dd，1H)，4.38-4.25(m，1H)，3.45-3.38(bs，2H)，2.5-2.3(m，2H)，1.43-1.32(m，2H)，1.02-0.95(m，1H)，0.75-0.68(m，1H).
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)“次要異構(gòu)體”，δ8.89(s，1H)，7.65-7.61(m，1H)，7.43(d，1H)，6.23-6.19(m，1H)，4.38-4.25(m，1H)，3.45-3.38(bs，2H)，2.5-2.3(m，2H)，1.43-1.32(m，2H)，1.02-0.95(m，1H)，0.75-0.68(m，1H).
實(shí)施例21N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-{(1S)-2，2-二氟-1-[4-(3-甲基-2-噻吩基)苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺。
步驟1(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-N-[(1Z)-2，2-二氟亞乙基]-4-戊烷-2-胺的制備將在苯中的(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基戊烷-2-胺(實(shí)施例4步驟1，8.5g，36.8mmol)和二氟乙醛乙基半縮醛(5.0g，39.7mmol)混合物用Dean-stark阱回流過夜。將溶劑在真空下除去。將殘余物通過短二氧化硅柱和用己烷EtOAc(10∶1)進(jìn)行洗脫，產(chǎn)生淺黃色油狀的標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.72(m，1H)，6.12(dt，1H)，3.70(dd，1H)，3.54(dd，1H)，3.36(m，1H)，1.48(m，2H)，1.32(m，1H)，0.95-0.78(m，15H)，0.06(s，3H)，0.02(s，3H).
步驟2(2S)-1-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙基]氨基}-4-甲基戊烷-1-醇的制備將n-BuLi(2.5M己烷溶液，1.43mL)加入到-70℃的1，4-二溴苯(884毫克)的THF溶液中，并且將混合物攪拌15分鐘。然后將(2S)-1-([叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基-N-[(1E)-2，2-二氟亞乙基]戊-2-胺(1.0g)的THF(8.5mL)溶液，并且將混合物攪拌1.5小時(shí)。然后在劇烈攪拌下將其緩緩倒入冰冷的飽和氯化銨溶液中。將其用3份乙酸乙酯進(jìn)行萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥和在真空下蒸發(fā)溶劑得到殘余物，將該殘余物在SiO2上進(jìn)行純化，使用己烷和乙酸乙酯梯度(90∶10～75∶25)洗脫液，得到標(biāo)題化合物。將由上所得的化合物(200毫克)溶于CH3CN(4mL)中，將溶液冷卻至0℃。將HF-吡啶(40□M)滴加加入和使混合物反應(yīng)16小時(shí)。將其倒入飽和碳酸氫鈉溶液中，將乙酸乙酯加入和將其劇烈搖動(dòng)。將有機(jī)層進(jìn)行分離，以及更進(jìn)一步用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥和在真空下將溶劑除去得到殘余物，將該殘余物在SiO2上進(jìn)行純化，使用己烷和乙酸乙酯梯度(80∶20～60∶40)洗脫液，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.6(2H，d)，7.45(2H，d)，6.0(1H，dt)，4.25(1H，m)，3.65(1H，t)，3.5-3.55(1H，m)，3.3-3.35(1H，m)，2.55-2.65(1H，m)，2.15-2.25(1H，m)，1.6-1.7(1H，m)，1.3-1.4(1H，m)，1.2-1.3(1H，m)，0.9(3H，d)，0.8(3H，d).
步驟3N-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙基]-L-亮氨酸的制備將H5IO6/CrO3懸浮液(5.5mL的0.40M CH3CN溶液；參閱下面的注釋)冷卻至0℃，和將得自步驟2的醇(250mg)的CH3CN(3.7mL)溶液滴加加入。將混合物在0～5℃下攪拌3.5小時(shí)。經(jīng)過此階段后，將2.0mL氧化劑加入。1.5小時(shí)后，在劇烈攪拌下將其倒入Na2HPO4緩沖溶液(10mL中含0.4g)中，將混合物用乙醚(3×20mL)進(jìn)行萃取。將合并的乙醚萃取物用水與鹽水(1∶1)洗滌、用稀NaHSO3溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)萃取液用硫酸鎂干燥、過濾和將溶劑蒸干得到殘余物，不經(jīng)更進(jìn)一步純化該殘余物即可使用。
注釋氧化劑(H5IO6/CrO3)如Tetrahedron Letters 39(1998)5323-5326所述進(jìn)行制備，但是使用HPLC級(jí)的CH3CN(含有0.5％水)；沒有加入水。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.55(2H，d)，7.4(2H，d)，6.05(1H，dt)，3.95-4.05(1H，m)，3.45(1H，t)，2.7-3.0(寬m，NH/OH)，1.85-1.95(1H，m)，1.5(2H，t)，0.95(3H，d)，0.9(3H，d).
步驟4N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-L-亮氨酸酰胺的制備向得自步驟3的酸(258mg)的DMF(2mL)溶液中，加入O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽(337mg)和1-氨基環(huán)丙烷腈鹽酸鹽(175mg)。攪拌1分鐘以后，將二異丙基乙胺(0.45mL)滴加加入和將混合物攪拌16小時(shí)。將其倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中，和用乙酸乙酯(3×15mL)進(jìn)行萃取。將合并的萃取物用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥和在真空下將溶劑除去。通過色譜法在SiO2上使用己烷和乙酸乙酯(80∶20～50∶50)對殘余物進(jìn)行純化。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.05(1H，m)，7.55(2H，d)，7.4(2H，d)，6.05(1H，dt)，3.95-4.05(1H，m)，3.25-3.3(1H，m)，2.4-2.45(1H，m)，1.8-1.9(1H，m)，1.4-1.55(2H，m)，0.95-1.1(2H，m)，0.95(6H，t).
步驟5N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-{(1S)-2，2-二氟-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基]苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備向得自步驟4的芳基溴化物(5.23g)和雙(四甲基乙二醇化)二硼(3.8g)的DMF(60mL)溶液中加入乙酸鉀(3.7g)和PdCl2dppf(309mg)。使氮?dú)饬魍ㄟ^懸浮液1分鐘。將反應(yīng)混合物在80℃下加熱16h。使其冷卻至室溫并轉(zhuǎn)入分液漏斗中。將飽和NaHCO3(～120mL)溶液和EtOAc(100mL)加入。將有機(jī)層進(jìn)行分離，以及更進(jìn)一步用2份EtOAc(2×50mL)對水層進(jìn)行萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌、用Na2SO4干燥并濃縮。將粗物質(zhì)在硅膠上進(jìn)行純化(己烷/EtOAc為80∶20～50∶50)，得到期望的硼酸鹽。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.15(bs，NH)，7.72(2H，d)，7.40(2H，d)，6.02(1H，dt)，3.95(1H，m)，3.25(1H，q)，2.38(1H，m)，1.72(1H，m)，1.27-1.50(16H，m)，0.85-1.05(8H，m).
步驟6N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-{(1S)-2，2-二氟-1-[4-(3-甲基-2-噻吩基)苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備。
在可密封的微波管中，使氮?dú)饬魍ㄟ^懸浮液1分鐘，該懸浮液由得自步驟5的芳基硼酸鹽(200mg)、2-溴-3-甲基噻吩(115mg)、2MNa2CO3(0.65mL)、DMF(4.3mL)和PdCl2dppf(11mg)構(gòu)成。然后將混合物在微波(SmithCreator)中加熱500秒(固定維持時(shí)間關(guān)閉)，加熱至120℃(吸收水平高)。將其冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋和將其倒入飽和碳酸氫鈉溶液中。將乙酸乙酯層進(jìn)行分離，以及更進(jìn)一步用乙酸乙酯(2×15mL)萃取水層。將合并的乙酸乙酯萃取液用鹽水洗滌和用硫酸鎂干燥。除去溶劑得到殘余物，將該殘余物通過色譜法在SiO2上進(jìn)行純化，使用己烷和乙酸乙酯梯度(己烷/EtOAc為80∶20～50∶50)。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.13(bs，NH)，7.50(4H，s)，7.37(1H，d)，6.97(1H，d)，6.05(1H，t)，4.00(1H，m)，3.30(1H，m)，2.42(1H，m)，2.32(3H，s)，1.85(1H，m)，1.40-1.53(2H，m)，1.30-1.40(2H，m)，0.85-1.03(8H，m).
實(shí)施例22N1-(1-氰基甲苯基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成 向N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸(實(shí)施例4步驟6，21mg，0.046mmol)的DMF混合物中加入2-苯基氨基乙腈鹽酸鹽(8.6mg，0.051mmol)。將N-甲基嗎啉(41μL，0.368mmol)和環(huán)化的三聚體點(diǎn)50％的N-丙基膦酸酐(55μL，0.092mmol)順序加入，將混合物攪拌過夜。揮發(fā)物在GenevacHT-4中得到蒸發(fā)。將殘余物溶于CH2Cl2(5mL)中，用BTMA碳酸鹽硅膠處理30分鐘和將其通過SiOH SPE筒(500mg)過濾。用大孔樹脂A-21處理溶液，并且再過濾一次。將溶液濃縮，得到1∶1的差向異構(gòu)體混合物。
MS(-ESI)556.0[M-1]-實(shí)施例23N1-(氰基環(huán)丙基)-N2-{(1S)-2，2-二氟-1-[2’，4’-二氟-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
使用實(shí)施例21所述的步驟，將其中步驟6中的2-溴-3-甲基噻吩替換為1-溴-2，4-二氟代苯，得到白色固體的標(biāo)題化合物。
MS(+API)448.1[M+1]+.
實(shí)施例24步驟43-氧代-4-[(N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰)氨基]氮雜環(huán)庚不庚烷-1-羧酸芐基酯的合成 步驟13-羥基-4-[(N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰)氨基]氮雜環(huán)庚烷-1-羧酸芐基酯向N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)-1，1’-聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸(實(shí)施例4步驟6，605mg，1.37mmol)、4-氨基-3-羥基氮雜環(huán)庚烷-1-羧酸芐基酯(WO 0134565，J.Med.Chem.，44，1380，2001，326mg，1.23mmol)和PyBOP(724mg，1.39mmol)的10mL DMF溶液中加入三乙胺(0.45mL，3.2mmol)，將混合物攪拌1h，升溫至室溫1h，然后在NaHCO3和乙醚之間進(jìn)行分配。將有機(jī)相用pH值為3.5的磷酸鹽緩沖液洗滌，然后用鹽水洗滌，用MgSO4干燥。通過硅膠色譜法(梯度為65％乙酸乙酯己烷～100％乙酸乙酯)進(jìn)行純化，提供了作為同分異構(gòu)體混合物的標(biāo)題化合物。
步驟23-氧代-4-[(N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰)氨基]氮雜環(huán)庚烷-1-羧酸芐基酯向0℃的3-羥基-4-[(N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰)氨基]氮雜環(huán)庚烷-1-羧酸芐基酯(98mg，0.14mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入Dess-Martin過碘烷(periodinane)。將混合物升溫至室溫，攪拌15h，然后在乙酸乙酯和1M NaOH之間進(jìn)行分配。將有機(jī)相用鹽水洗滌和用MgSO4干燥。通過硅膠色譜法(梯度為40％～70％乙酸乙酯己烷)進(jìn)行純化，提供了作為非對應(yīng)異構(gòu)體混合物的標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)688.4[M+1]+實(shí)施例25N1-[3-氧代-1-(吡啶-2-基磺?；?氮雜環(huán)庚烷-4-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟1N1-[3-羥基氮雜環(huán)庚烷-4-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺使芐基3-羥基-4-[(N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰)氨基]氮雜環(huán)庚烷-1-羧酸酯(實(shí)施例24步驟1，710mg，1.03mmol)和10％ Pd/C(490mg)的2∶1 EtOH∶EtOAc(80mL)溶液充滿氫氣，和在氫氣鼓泡下攪拌2h。將反應(yīng)混合物濾過硅藻土和進(jìn)行濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
步驟2N1-[3-羥基-1-(吡啶-2-基磺?；?氮雜環(huán)庚烷-4-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺向0℃的N1-(3-羥基氮雜環(huán)庚烷-4-基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺(567mg，1.02mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入三乙胺(0.25mL，1.8mmol)和2-吡啶磺酰氯(204mg，1.15mmol)。將混合物升溫至室溫保持1h，然后將其在二氯甲烷和NaHCO3之間進(jìn)行分配。將有機(jī)相用鹽水洗滌，濾過棉紗并進(jìn)行濃縮。通過硅膠色譜法(梯度為70％乙酸乙酯己烷～100％乙酸乙酯)進(jìn)行純化，得到作為同分異構(gòu)體混合物的標(biāo)題化合物。
步驟3N1-[3-氧代-1-(吡啶-2-基磺?；?氮雜環(huán)庚烷-4-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺向室溫的N1-[3-羥基-1-(吡啶-2-基磺酰基)氮雜環(huán)庚烷-4-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺?；?)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺(460mg，0.73mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入Dess-Martin過碘烷。將混合物攪拌1h，然后用二氯甲烷稀釋，用1MNaOH洗滌，然后用鹽水洗滌。將有機(jī)相濾過棉紗和進(jìn)行濃縮。通過硅膠色譜法(梯度為60％乙酸乙酯己烷～100％乙酸乙酯)進(jìn)行純化，得到作為非對應(yīng)異構(gòu)體混合物的標(biāo)題化合物。
MS(+ESI)695.3[M+1]+實(shí)施例26N2-{(4-溴苯基)(4-甲氧基苯基)甲基}-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺的合成
步驟1(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲醇將1，4-二溴苯(9.1g，38mmol)的THF(80mL)溶液冷卻至-78℃，將正丁基鋰(16mL，2.5M己烷溶液)滴加加入。15分鐘后，將對甲氧基苯甲醛(5g，37mmol，在4.5mL THF中)滴加加入。再經(jīng)過20分鐘后，將反應(yīng)混合物用甲醇(5mL)和飽和氯化銨水溶液(100mL)猝滅。將反應(yīng)混合物用三份100mL乙酸乙酯進(jìn)行萃取，以及將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌(50mL)。用硫酸鎂干燥有機(jī)層和在減壓下濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物，可以直接用于下一步中。
步驟2N-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸甲酯將(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲醇(1.15g，3.9mmol)與四丁溴化銨(130mg，0.4mmol)一起溶于二氯甲烷(4mL)中，。然后將48％氫溴酸水溶液(3.3mL)加入，將反應(yīng)混合物劇烈攪拌40小時(shí)。將產(chǎn)物在水(20mL)和二氯甲烷(30mL)之間進(jìn)行分配和用硫酸鎂進(jìn)行干燥。將有機(jī)層濃縮至大約10mL，和將L-亮氨酸甲酯(游離堿)以二氯甲烷(20mL)溶液的形式加入，繼之以將三乙胺(3mL)加入。將反應(yīng)混合物在35℃下攪拌20分鐘(出現(xiàn)白色沉淀)。在乙醚(50mL)和水(30mL)中對反應(yīng)進(jìn)行調(diào)整。將兩相分離，用飽和氯化銨水溶液(30mL)和鹽水(30mL)洗滌有機(jī)層。用硫酸鎂干燥和在減壓下濃縮后，制備得到N-(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸甲酯，并在硅膠上使用10％乙酸乙酯、90％己烷進(jìn)行純化。
步驟3N-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸向室溫下的60mL的在大約2∶1∶1 THF/MeOH/水中的N-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸甲酯(1.25g，3mmol)溶液中，加入氫氧化鋰一水合物(250mg，6mmol)。攪拌整夜混合物并進(jìn)行濃縮。將殘余物在二氯甲烷(50mL)和pH值為3.5的磷酸鹽緩沖液(50mL)之間進(jìn)行分配。將水相分離和用兩份50mL二氯甲烷洗滌。將有機(jī)相用硫酸鈉干燥和在減壓下濃縮，得到一種固體，該固體在極少量冷的二氯甲烷中研磨得到N-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸。
步驟4N2-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺將N-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸(149mg，0.37mmol)和氨基乙腈鹽酸鹽(87mg，0.73mmol)的混合物溶于5mL二甲基甲酰胺中。將HATU(153mg，0.403mmol)一次性加入，然后加入三乙胺(0.18mL，1.31mmol)。將混合物攪拌過夜，然后將其倒入pH值為4的磷酸鹽緩沖液(40mL)中和用乙酸乙酯(50mL)進(jìn)行萃取。用三份50mL水洗滌有機(jī)相，用硫酸鈉干燥和在減壓下濃縮。在硅膠上純化(30％乙酸乙酯/己烷)提供了N2-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺。
MS(+ESI)443.9[M+1].
組織蛋白酶結(jié)合實(shí)施例1～26中每個(gè)實(shí)施例都服從以下過程在電腦生成的模型中，化合物在組織蛋白酶K活性部位被能量最小化。組織蛋白酶K電腦生成的模型基于蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫入口1MEM的晶體結(jié)構(gòu)，已經(jīng)將氫加入到該晶體結(jié)構(gòu)上，但是在能量最小化開始時(shí)沒有進(jìn)行非氫的能量最小化(因此蛋白質(zhì)側(cè)鏈保持X射線晶體結(jié)構(gòu)的幾何構(gòu)型)?；衔锏慕Y(jié)合方向根據(jù)以下設(shè)想進(jìn)行確定1)共價(jià)鍵在S1和化合物中被標(biāo)記為“1”的親電碳原子之間得以形成。結(jié)合用于本發(fā)明的化學(xué)式，這確定了對應(yīng)于R1和R2的分子片段；2)對于對應(yīng)于本發(fā)明化學(xué)式的化合物片斷，胺上的氫原子與Gly66上的氧原子形成氫鍵，因此在這兩個(gè)原子之間的距離小于4A；3)對應(yīng)于R2和R2的化合物片段，根據(jù)化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)上的標(biāo)記碳原子，分別處于組織蛋白酶亞位點(diǎn)S2和S3中。例如，化學(xué)結(jié)構(gòu)中被標(biāo)記為“2”的碳原子位于S2中，而標(biāo)記為“3”的碳原子位于S3中，這樣使得距離表1中組織蛋白酶Cα的距離在表1給出距離的一埃范圍內(nèi)。雖然這些放置是人工和近似操作，但是對它們進(jìn)行有意地放置以產(chǎn)生有利的相互作用。對于作為外消旋混合物的合成化合物，對應(yīng)于本發(fā)明化學(xué)式的對映異構(gòu)體被用于計(jì)算。使用軟件MacroModel與MMFFs力場，能量最小化得以進(jìn)行。化合物的所有原子都被允許移動(dòng)，但是對于組織蛋白酶K，僅僅具有在化合物6范圍內(nèi)的原子的蛋白質(zhì)側(cè)鏈允許移動(dòng)；在這種情況下，整個(gè)側(cè)鏈都可以移動(dòng)。對用于能量最小化的缺省參數(shù)進(jìn)行選擇，同時(shí)連續(xù)溶劑對應(yīng)于水。能量最小化的結(jié)果對于化合物是有利的在配體和組織蛋白酶K活性部位之間不存在不良的空間相互作用，并且活性部位和配體之間的有利相互作用(親油相互作用和氫鍵結(jié)合)由表1中給出的距離得到證實(shí)。表1給出的距離取自如上所述由化合物和組織蛋白酶K形成的能量最小化的配體-酶配合物。標(biāo)記為“Gly66氫鍵”的欄給出了形成于化合物胺上的氫與Gly 66上的氧之間的氫鍵的距離。表1中R2下的三個(gè)欄都以對應(yīng)于組織蛋白酶中的一個(gè)Cα的Cα標(biāo)記為標(biāo)題；這些欄給出了在組織蛋白酶中標(biāo)明的Cα和化合物結(jié)構(gòu)中標(biāo)記為“2”的碳原子之間的距離。類似地，表1中“R2”下的兩個(gè)欄給出了在組織蛋白酶中標(biāo)明的Cα和化合物結(jié)構(gòu)中標(biāo)記為“3”的碳原子之間的距離。形成于組織蛋白酶中殘基25的半胱氨酸的硫和該化合物結(jié)構(gòu)中標(biāo)記為“1”的親電碳原子之間的共價(jià)鍵，確保了與該化合物結(jié)構(gòu)中標(biāo)記為“1”的碳原子的距離＜5。由此，實(shí)施例1～26滿足在本文中所述的距離標(biāo)準(zhǔn)。
表1.從組織蛋白酶K中的原子至實(shí)施例1～26中的原子的距離(以表示)。參閱正文。

純化的酶試驗(yàn)公開于本申請中的化合物在下面試驗(yàn)中顯示出活性。此外，公開于本申請的化合物相對于先前公開的化合物具有增強(qiáng)的藥理學(xué)分布。
組織蛋白酶K試驗(yàn)制備得到試驗(yàn)化合物在二甲基亞砜(DMSO)中的從500μM直到0.0085μM的系列稀釋物。然后將2μL取自各稀釋物的DMSO加入到50μL試驗(yàn)緩沖液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO))和25μL在試驗(yàn)緩沖溶液中的人類組織蛋白酶K(0.4nM)中。將試驗(yàn)溶液在搖動(dòng)板上混合5～10秒鐘并且在室溫下培養(yǎng)15分鐘。將在25μL評(píng)測緩沖液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到評(píng)測溶液中。通過分光熒光測定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，對香豆素離去基團(tuán)(AMC)的水解跟蹤10分鐘。通過將實(shí)驗(yàn)值擬合至關(guān)于劑量反應(yīng)曲線的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)模型，計(jì)算得到抑制作用百分比。
組織蛋白酶L試驗(yàn)制備得到試驗(yàn)化合物在二甲基亞砜(DMSO)中的從500μM直至0.0085μM的系列稀釋物(1/3)。然后將2μL取自各稀釋物的DMSO加入到50μL試驗(yàn)緩沖液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO)和25μL在試驗(yàn)緩沖液溶液中的人類組織蛋白酶L(0.5nM)中。將試驗(yàn)溶液在搖動(dòng)板上混合5～10秒鐘并在室溫下培養(yǎng)15分鐘。將在25μL評(píng)測緩沖液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到評(píng)測溶液中。通過分光熒光測定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，對香豆素離去基團(tuán)(AMC)的水解跟蹤10分鐘。通過將實(shí)驗(yàn)值擬合至關(guān)于劑量反應(yīng)曲線的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)模型，計(jì)算得到抑制作用百分比。
組織蛋白酶B試驗(yàn)制備得到試驗(yàn)化合物在二甲基亞砜(DMSO)中中從500μM至0.0085μM的系列稀釋物(1/3)。然后將2μL取自各稀釋物的DMSO加入到50μL試驗(yàn)緩沖液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO)和25μL在試驗(yàn)緩沖液溶液中的人類組織蛋白酶B(4.0nM)中。將試驗(yàn)溶液在搖動(dòng)板上混合5～10秒鐘并在室溫下培養(yǎng)15分鐘。將在25μL評(píng)測緩沖液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到評(píng)測溶液中。通過分光熒光測定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，對香豆素離去基團(tuán)(AMC)的水解跟蹤10分鐘。通過將實(shí)驗(yàn)值擬合至關(guān)于劑量反應(yīng)曲線的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)模型，計(jì)算得到抑制作用百分比。
組織蛋白酶S試驗(yàn)制備得到試驗(yàn)化合物在二甲基亞砜(DMSO)中從500μM至0.0085μM的系列稀釋物(1/3)。然后將2μL取自各稀釋物的DMSO加入到50μL試驗(yàn)緩沖液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO)和25μL在試驗(yàn)緩沖液溶液中的人類組織蛋白酶S(20nM)中。將試驗(yàn)溶液在搖動(dòng)板上混合5～10秒鐘和在室溫下培養(yǎng)15分鐘。將在25μL評(píng)測緩沖液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到評(píng)測溶液中。通過分光熒光測定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，對香豆素離去基團(tuán)(AMC)的水解跟蹤10分鐘。通過將實(shí)驗(yàn)值擬合至關(guān)于劑量反應(yīng)曲線的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)模型，計(jì)算得到抑制作用百分比。
序列表<110>Merck Frosst.
Bayly，ChristopherBlack.CameronMcKay，Daniel<120>組織蛋白酶抑制劑<130>MCO78Y<150>60/498,017<151>2003-08-27<160>13<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>215<212>PRT<213>人<400>1Ala Pro Asp Ser Val Asp Tyr Arg Lys Lys Gly Tyr Val Thr Pro Val1 5 10 15Lys Asn Gln Gly Gln Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ser Val Gly20 25 30Ala Leu Glu Gly Gln Leu Lys Lys Lys Thr Gly Lys Leu Leu Asn Leu35 40 45Ser Pro Gln Asn Leu Val Asp Cys Val Ser Glu Asn Asp Gly Cys Gly50 55 60Gly Gly Tyr Met Thr Asn Ala Phe Gln Tyr Val Gln Lys Asn Arg Gly65 70 75 80Ile Asp Ser Glu Asp Ala Tyr Pro Tyr Val Gly Gln Glu Glu Ser Cys85 90 95
Met Tyr Asn Pro Thr Gly Lys Ala Ala Lys Cys Arg Gly Tyr Arg Glu100 105 110Ile Pro Glu Gly Asn Glu Lys Ala Leu Lys Arg Ala Val Ala Arg Val115 120 125Gly Pro Val Ser Val Ala Ile Asp Ala Ser Leu Thr Ser Phe Gln Phe130 135 140Tyr Ser Lys Gly Val Tyr Tyr Asp Glu Ser Cys Asn Ser Asp Asn Leu145 150 155 160Asn His Ala Val Leu Ala Val Gly Tyr Gly Ile Gln Lys Gly Asn Lys165 170 175His Trp Ile Ile Lys Asn Ser Trp Gly Glu Asn Trp Gly Asn Lys Gly180 185 190Tyr Ile Leu Met Ala Arg Asn Lys Asn Asn Ala Cys Gly Ile Ala Asn195 200 205Leu Ala Ser Phe Pro Lys Met210 215<210>2<211>254<212>PRT<213>人<400>2Leu Pro Ala Ser Phe Asp Ala Arg Glu Gln Trp Pro Gln Cys Pro Thr1 5 10 15Ile Lys Glu Ile Arg Asp Gln Gly Ser Cys Gly Ser Cys Met Ala Phe20 25 30Gly Ala Val Glu Ala Ile Ser Asp Arg Ile Cys Ile His Thr Asn Ala35 40 45His Val Ser Val Glu Val Ser Ala Glu Asp Leu Leu Thr Cys Cys Gly50 55 60Ser Met Cys Gly Asp Gly Cys Asn Gly Gly Tyr Pro Ala Glu Ala Trp65 70 75 80Asn Phe Trp Thr Arg Lys Gly Leu Val Ser Gly Gly Leu Tyr Glu Ser85 90 95His Val Gly Cys Arg Pro Tyr Ser Ile Pro Pro Cys Glu His His Val100 105 110
Asn Gly Ser Arg Pro Pro Cys Thr Gly Glu Gly Asp Thr Pro Lys Cys115 120 125Ser Lys Ile Cys Glu Pro Gly Tyr Ser Pro Thr Tyr Lys Gln Asp Lys130 135 140His Tyr Gly Tyr Asn Ser Tyr Ser Val Ser Asn Ser Glu Lys Asp Ile145 150 155 160Met Ala Glu Ile Tyr Lys Asn Gly Pro Val Glu Gly Ala Phe Ser Val165 170 175Tyr Ser Asp Phe Leu Leu Tyr Lys Ser Gly Val Tyr Gln His Val Thr180 185 190Gly Glu Met Met Gly Gly His Ala Ile Arg Ile Leu Gly Trp Gly Val195 200 205Glu Asn Gly Thr Pro Tyr Trp Leu Val Ala Asn Ser Trp Asn Thr Asp210 215 220Trp Gly Asp Asn Gly Phe Phe Lys Ile Leu Arg Gly Gln Asp His Cys225 230 235 240GlyIle Glu Ser Glu Val Val Ala Gly Ile Pro Arg Thr Asp245 250<210>3<211>214<212>PRT<213>人<400>3Ala Pro Pro Glu Trp Asp Trp Arg Ser Lys Gly Ala Val Thr Lys Val1 5 10 15Lys Asp Gln Gly Met Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Val Thr Gly20 25 30Asn Val Glu Gly Gln Trp Phe Leu Asn Gln Gly Thr Leu Leu Ser Leu35 40 45Ser Glu Gln Glu Leu Leu Asp Cys Asp Lys Met Asp Lys Ala Cys Met50 55 60Gly Gly Leu Pro Ser Asn Ala Tyr Ser Ala Ile Lys Asn Leu Gly Gly65 70 75 80Leu Glu Thr Glu Asp Asp Tyr Ser Tyr Gln Gly His Met Gln Ser Cys85 90 95
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Val Ala Asn Ile Thr lle Tyr Asp Glu Glu Ala Met Val Glu Ala Val115 120 125Ala Leu Tyr Asn Pro Val Ser Phe Ala Phe Glu Val Thr Gln Asp Phe130 135 140Met Met Tyr Arg Thr Gly Ile Tyr Ser Ser Thr Ser Cys His Lys Thr145 150 155 160Pro Asp Lys Val Asn His Ala Val Leu Ala Val Gly Tyr Gly Glu Lys165 170 175Asn Gly Ile Pro Tyr Trp Ile Val Lys Asn Ser Trp Gly Pro Gln Trp180 185 190Gly Met Asn Gly Tyr Phe Leu Ile Glu Arg Gly Lys Asn Met Cys Gly195 200 205Leu Ala Ala Cys Ala Ser Tyr Pro Ile Pro Leu Val210 215 220<210>5<211>220<212>PRT<213>人<400>5Ala Pro Arg Ser Val Asp Trp Arg Glu Lys Gly Tyr Val Thr Pro Val1 5 10 15Lys Asn Gln Gly Gln Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ala Thr Gly20 25 30Ala Leu Glu Gly Gln Met Phe Arg Lys Thr Gly Arg Leu Ile Ser Leu35 40 45Ser Glu Gln Asn Leu Val Asp Cys Ser Gly Pro Gln Gly Asn Glu Gly50 55 60Cys Asn Gly Gly Leu Met Asp Tyr Ala Phe Gln Tyr Val Gln Asp Asn65 70 75 80Gly Gly Leu Asp Ser Glu Glu Ser Tyr Pro Tyr Glu Ala Thr Glu Glu85 90 95Ser Cys Lys Tyr Asn Pro Lys Tyr Ser Val Ala Asn Asp Thr Gly Phe100 105 110Val Asp Ile Pro Lys Gln Glu Lys Ala Leu Met Lys Ala Val Ala Thr115 120 125
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Asn Val Asn His Gly Val Leu Val Val Gly Tyr Gly Asp Leu Asn Gly165 170 175Lys Glu Tyr Trp Leu Val Lys Asn Ser Trp Gly His Asn Phe Gly Glu180 185 190Glu Gly Tyr Ile Arg Met Ala Arg Asn Lys Gly Asn His Cys Gly Ile195 200 205Ala Ser Phe Pro Ser Tyr Pro Glu Ile210 215<210>8<211>249<212>PRT<213>人<400>8Val Pro Phe Ser Cys Asp Trp Arg Lys Val Ala Gly Ala Ile Ser Pro1 5 10 15Ile Lys Asp Gln Lys Asn Cys Asn Cys Cys Trp Ala Met Ala Ala Ala20 25 30Gly Asn Ile Glu Thr Leu Trp Arg Ile Ser Phe Trp Asp Phe Val Asp35 40 45Val Ser Val His Glu Leu Leu Asp Cys Gly Arg Cys Gly Asp Gly Cys50 55 60His Gly Gly Phe Val Trp Asp Ala Phe Ile Thr Val Leu Asn Asn Ser65 70 75 80Gly Leu Ala Ser Glu Lys Asp Tyr Pro Phe Gln Gly Lys Val Arg Ala85 90 95His Arg Cys His Pro Lys Lys Tyr Gln Lys Val Ala Trp Ile Gln Asp100 105 110Phe Ile Met Leu Gln Asn Asn Glu His Arg Ile Ala Gln Tyr Leu Ala115 120 125Thr Tyr Gly Pro Ile Thr Val Thr Ile Asn Met Lys Pro Leu Gln Leu130 135 140Tyr Arg Lys Gly Val Ile Lys Ala Thr Pro Thr Thr Cys Asp Pro Gln145 150 155 160Leu Val Asp His Ser Val Leu Leu Val Gly Phe Gly Ser Val Lys Ser165 170 175
Glu Glu Gly Ile Trp Ala Glu Thr Val Ser Ser Gln Ser Gln Pro Gln180 185 190Pro Pro His Pro Thr Pro Tyr Trp Ile Leu Lys Asn Ser Trp Gly Ala195 200 205Gln Trp Gly Glu Lys Gly Tyr Phe Arg Leu His Arg Gly Ser Asn Thr210 215 220Cys Gly Ile Thr Lys Phe Pro Leu Thr Ala Arg Val Gln Lys Pro Asp225 230 235 240Met Lys Pro Arg Val Ser Cys Pro Pro245<210>9<211>242<212>PRT<213>人<400>9Leu Pro Lys Ser Trp Asp Trp Arg Asn Val Asp Gly Val Asn Tyr Ala1 5 10 15Ser Ile Thr Arg Asn Gln His Ile Pro Gln Tyr Cys Gly Ser Cys Trp20 25 30Ala His Ala Ser Thr Ser Ala Met Ala Asp Arg Ile Asn Ile Lys Arg35 40 45Lys Gly Ala Trp Pro Ser Thr Leu Leu Ser Val Gln Asn Val Ile Asp50 55 60Cys Gly Asn Ala Gly Ser Cys Glu Gly Gly Asn Asp Leu Ser Val Trp65 70 75 80Asp Tyr Ala His Gln His Gly Ile Pro Asp Glu Thr Cys Asn Asn Tyr85 90 95Gln Ala Lys Asp Gln Glu Cys Asp Lys Phe Asn Gln Cys Gly Thr Cys100 105 110Asn Glu Phe Lys Glu Cys His Ala Ile Arg Asn Tyr Thr Leu Trp Arg115 120 125Val Gly Asp Tyr Gly Ser Leu Ser Gly Arg Glu Lys Met Met Ala Glu130 135 140Ile Tyr Ala Asn Gly Pro Ile Ser Cys Gly Ile Met Ala Thr Glu Arg145 150 155 160
Leu Ala Asn Tyr Thr Gly Gly Ile Tyr Ala Glu Tyr Gln Asp Thr Thr165 170 175Tyr Ile Asn His Val Val Ser Val Ala Gly Trp Gly Ile Ser Asp Gly180 185 190Thr Glu Tyr Trp Ile Val Arg Asn Ser Trp Gly Glu Pro Trp Gly Glu195 200 205Arg Gly Trp Leu Arg Ile Val Thr Ser Thr Tyr Lys Asp Gly Lys Gly210 215 220Ala Arg Tyr Asn Leu Ala Ile Glu Glu His Cys Thr Phe Gly Asp Pro225 230 235 240Ile Val<210>10<211>221<212>PRT<213>人<400>10Leu Pro Lys Ser Val Asp Trp Arg Lys Lys Gly Tyr Val Thr Pro Val1 5 10 15Lys Asn Gln Lys Gln Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ala Thr Gly20 25 30Ala Leu Glu Gly Gln Met Phe Arg Lys Thr Gly Lys Leu Val Ser Leu35 40 45Ser Glu Gln Asn Leu Val Asp Cys Ser Arg Pro Gln Gly Asn Gln Gly50 55 60Cys Asn Gly Gly Phe Met Ala Arg Ala Phe Gln Tyr Val Lys Glu Asn65 70 75 80Gly Gly Leu Asp Ser Glu Glu Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Val Asp Glu85 90 95Ile Cys Lys Tyr Arg Pro Glu Asn Ser Val Ala Asn Asp Thr Gly Phe100 105 110Thr Val Val Ala Pro Gly Lys Glu Lys Ala Leu Met Lys Ala Val Ala115 120 125Thr Val Gly Pro Ile Ser Val Ala Met Asp Ala Gly His Ser Ser Phe130 135 140
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Val Gly Tyr Gly Gln Val Glu Lys Thr Lys Leu Asn Tyr Asn Asn Lys165 170 175Ile Gln Thr Tyr Asn Thr Lys Glu Asn Ser Asn Gln Pro Asp Asp Asn180 185 190Ile Ile Tyr Tyr Trp Ile Ile Lys Asn Ser Trp Ser Lys Lys Trp Gly195 200 205Glu Asn Gly Phe Met Arg Leu Ser Arg Asn Lys Asn Gly Asp Asn Val210 215 220Phe Cys Gly Ile Gly Glu Glu Val Phe Tyr Pro Ile Leu225 230 235<210>12<211>222<212>PRT<213>小鐮瘧原蟲<400>12Asp Arg Ile Ala Tyr Asp Trp Arg Leu His Gly Gly Val Thr Pro Val1 5 10 15Lys Asp Gln Ala Leu Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ser Val Gly20 25 30Ser Val Glu Ser Gln Tyr Ala Ile Arg Lys Leu Phe Leu Phe Ser Glu35 40 45Gln Glu Leu Val Asp Cys Ser Val Lys Asn Ash Gly Cys Tyr Gly Gly50 55 60Tyr Ile Thr Asn Ala Phe Asp Asp Met Ile Asp Leu Gly Gly Leu Cys65 70 75 80Ser Gln Asp Asp Tyr Pro Tyr Val Ser Asn Leu Pro Glu Thr Cys Asn85 90 95Leu Lys Arg Cys Asn Glu Arg Tyr Thr Ile Lys Ser Tyr Val Ser Ile100 105 110Pro Asp Asp Lys Phe Lys Glu Ala Leu Arg Tyr Leu Gly Pro Ile Ser115 120 125Ile Ser Ile Ala Ala Ser Asp Asp Phe Ala Phe Tyr Arg Gly Gly Phe130 135 140Tyr Asp Gly Glu Cys Gly Ala Ala Pro Asn His Ala Val Ile Leu Val145 150 155 160
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Gly Glu Lys His Tyr Tyr Tyr Ile Ile Lys Asn Ser Trp Gly Gln Gln180 185 190Trp Gly Glu Arg Gly Phe Ile Asn Ile Glu Thr Asp Glu Ser Gly Leu195 200 205Met Arg Lys Cys Gly Leu Gly Thr Asp Ala Phe Ile Pro Leu Ile Glu210 215 220
權(quán)利要求
1.一種化合物，其具有如下化學(xué)式 并且具有不超過70個(gè)各自獨(dú)立地選自C、O、N、S、P、F、Cl、Br或者I的非氫原子；其中R4是非氫的吸電子取代基，這樣以致其與R1、R2和R2一起使氮的堿性降低至pKa小于6；其中化合物的分子與組織蛋白酶相互作用，從而使得化學(xué)式中的CH-NH區(qū)域有利地與S2和S3之間的組織蛋白酶進(jìn)行相互作用，R1有利地與組織蛋白酶活性部位的活性部位S1而非活性部位S3進(jìn)行相互作用，R2有利地與組織蛋白酶的S2而非S3進(jìn)行相互作用，以及R2有利地與組織蛋白酶活性部位的S3而非S2或者S1進(jìn)行相互作用。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中組織蛋白酶選自組織蛋白酶B、F、H、K、L、L2、O、S、W或者Z。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中組織蛋白酶選自組織蛋白酶K、L、S或者B。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R4有利地不分別與組織蛋白酶活性部位的亞位點(diǎn)S2、S3和S1相互作用。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R2具有至少一個(gè)同時(shí)滿足以下三個(gè)距離標(biāo)準(zhǔn)的碳原子或者硫原子，其中所述的距離標(biāo)準(zhǔn)為它在組織蛋白酶的Cα26的7范圍內(nèi)、在組織蛋白酶的Cα68的8.5范圍內(nèi)以及在組織蛋白酶的Cα134的7范圍內(nèi)。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R3具有至少一個(gè)同時(shí)滿足以下兩個(gè)距離標(biāo)準(zhǔn)的碳原子或者硫原子，其中所述的距離標(biāo)準(zhǔn)為它在組織蛋白酶Cα66的5.5范圍內(nèi)以及在組織蛋白酶Cα60的7范圍內(nèi)。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中所述的氮具有小于6的pKa值并且所述的氮與組織蛋白酶的甘氨酸66的組織蛋白酶酰胺羰基形成一個(gè)氫鍵。
8.權(quán)利要求1的化合物，其中R2包括非極性區(qū)域。
9.權(quán)利要求1的化合物，其中R2包括親油的區(qū)域。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中R3包括非極性區(qū)域。
11.權(quán)利要求1的化合物，其中R3包括親油的區(qū)域。
12.權(quán)利要求1的化合物，其中權(quán)利要求1中所示的仲胺的氮在水介質(zhì)中的pKa小于5。
13.權(quán)利要求1的化合物，其中R4是選自-CF3、-CH2F、-CF2R5和-CHFR5的基團(tuán)，其中R5是任選地被1～4個(gè)取代基取代的C1-6烷基、芳基或者雜芳基，所述取代基選自鹵素、C1-3烷基、C1-3烷氧基、羥基、羥基烷基、酮、氰基、雜環(huán)基、C3-8環(huán)烷基、SOmC1-3烷基、NH2、NO2或者O(C＝O)C1-3烷基；和m是0～2的整數(shù)。
14.權(quán)利要求1的化合物，其中R1包括穩(wěn)定地與組織蛋白酶活性部位的亞位點(diǎn)S1配合的區(qū)域，并且在組織蛋白酶Cα25的5范圍內(nèi)具有至少1個(gè)碳原子。
15.權(quán)利要求14的化合物，其中組織蛋白酶選自組織蛋白酶B、F、H、K、L、L2、O、S、W或者Z。
16.權(quán)利要求14的化合物，其中化合物與組織蛋白酶的半胱氨酸25的硫形成共價(jià)鍵。
17.權(quán)利要求14的化合物，其中R1是非免疫原性的。
18.權(quán)利要求14的化合物，其中化合物與組織蛋白酶的活性部位結(jié)合，在純化的酶測定中具有小于10微摩爾的IC50。
19.權(quán)利要求14的化合物，其中與化合物的親電羰基碳形成一個(gè)共價(jià)鍵。
20.權(quán)利要求1的化合物，其中在化合物和組織蛋白酶之間沒有形成共價(jià)鍵。
21.藥物組合物，包括與藥學(xué)上可接受的載體組合的如權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所定義的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
22.如權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)所定義的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽在制造藥物中的用途，其中所述的藥物用于抑制組織蛋白酶活性、或者治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中的組織蛋白酶依賴性的狀態(tài)、或者抑制或減少哺乳動(dòng)物中的骨損失、或者治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物中的骨質(zhì)疏松癥、或者治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物中的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎狀態(tài)、或者治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物中骨關(guān)節(jié)炎的進(jìn)行、或者治療哺乳動(dòng)物中的癌癥。
23.用于藥物治療中的如權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
24.一種用于治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物中的組織蛋白酶依賴狀態(tài)、或者抑制或減少哺乳動(dòng)物中的骨損失、或者治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物中的骨質(zhì)疏松癥、或者治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物中的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎狀態(tài)、或者治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物中骨關(guān)節(jié)炎的進(jìn)行，或者治療哺乳動(dòng)物中的癌癥的方法，其包括向哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的如權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類右式(I)所表示的新化合物，其中R
文檔編號(hào)C07C317/40GK1842515SQ200480024520
公開日2006年10月4日 申請日期2004年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月27日
發(fā)明者C·拜利, C·布拉克, D·J·麥凱 申請人:默克弗羅斯特加拿大有限公司