專利名稱：用作蛋白激酶抑制劑的化合物和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一類新的化合物、含有這些化合物的藥物組合物和使用這些化合物來治療或預(yù)防與激酶活性異?；蚴д{(diào)有關(guān)的疾病或病癥，特別是與Abl、BCR-Abl、Bmx、CSK、TrkB、FGFR3、Fes、Lck、B-RAF、C-RAF、MKK6、SAPK2α和SAPK2β激酶異常激活有關(guān)的疾病或病癥的方法。
背景技術(shù)：
蛋白激酶代表一大族蛋白質(zhì)，它們在調(diào)節(jié)各種各樣的細(xì)胞過程和保持對細(xì)胞功能的控制中起重要的作用。這些激酶的部分非限定性例子包括受體酪氨酸激酶如神經(jīng)生長因子受體、trkB和成纖維細(xì)胞生長因子受體，F(xiàn)GFR3；非-受體酪氨酸激酶如Abl和融合激酶BCR-Abl、Lck、Csk、Fes、Bmx和c-src；以及絲氨酸/蘇氨酸激酶如c-RAF、sgk、MAP激酶(例如，MKK4、MKK6等)、SAPK2α和SAPK2β。已經(jīng)在許多疾病中觀察到了異常的激酶活性，包括良性和惡性增殖性疾病以及由不合適的免疫和神經(jīng)系統(tǒng)激活所導(dǎo)致的疾病。
本發(fā)明的新化合物可以抑制一種或多種蛋白激酶活性，因此預(yù)期可用于治療激酶相關(guān)性疾病。
發(fā)明概述一方面，本發(fā)明提供式I化合物及其N-氧化物衍生物、前藥衍生物、保護(hù)的衍生物、單一的異構(gòu)體及其異構(gòu)體混合物和這些化合物的可藥用鹽和溶劑化物(例如水合物) 其中W選自CH和N；Y選自C、S和S(O)；Z是二價(jià)基團(tuán)，選自-Y(O)NR5-和-NR5Y(O)-；其中Y選自C、S和S(O)；并且R5選自氫和C1-12烷基；R1選自氫、鹵素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和-NR6R7；其中R6選自氫和C1-6烷基；R7選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；或者R6和R7與R6和R7共同連接的氮一起形成C3-6雜環(huán)烷基或C5-10雜芳基；其中R7或R6和R7組合基團(tuán)中的任何芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基均可以是未取代的或被1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代鹵素、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵素取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素取代的C1-6烷氧基、-XNR8R8、-XC(O)NR8R8、-XC(O)NR8XOR8、-XS(O)0-2NR8R8、-XS(O)0-2R8、-XNR8S(O)0-2R8、-XNR8C(O)R8、-XNR8SR8、-XP(O)NR8R8、-XCR8(OR8)R8、-XOC(O)R8、-XOR8和-XOR9；其中X是鍵或C1-12亞烷基，R8獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基，R9選自C6-10芳基和C5-10雜芳基。
R2選自氫和C1-6烷基；
R3選自氫、羥基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、巰基、鹵素、硝基和氰基；n為0、1或2；R4選自氫、鹵素、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、鹵素取代的C1-6烷基、C1-12烷氧基、鹵素取代的C1-12烷氧基和-XR10；其中X為鍵或C1-6亞烷基，R10選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R10中的任何芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基是未取代的或被選自下列的基團(tuán)所取代鹵素、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、鹵素取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基和鹵素取代的C1-6烷氧基；m為1、2或3；并且其中苯環(huán)A和B可獨(dú)立地具有最多4個(gè)由-N＝替代的-C＝基。
第二方面，本發(fā)明提供包含式I化合物或其N-氧化物衍生物、單一的異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物；或其可藥用鹽，和一種或多種合適的賦形劑的藥物組合物。
第三方面，本發(fā)明提供治療動(dòng)物、包括人的疾病的方法，其中抑制激酶活性，特別是抑制Abl、BCR-Abl、Bmx、CSK、TrkB、FGFR3、Fes、Lck、B-RAF、C-RAF、MKK6、SAPK2α和/或SAPK2β活性可預(yù)防、抑制或改善疾病的病理和/或癥狀，該方法包括給予動(dòng)物治療有效量的式I化合物或其N-氧化物衍生物、單一的異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物或其可藥用鹽。
第四方面，本發(fā)明提供式I化合物在制備用于治療動(dòng)物疾病的藥物中的用途，其中在所述疾病中，激酶活性，特別是Abl、BCR-Abl、Bmx、CSK、TrkB、FGFR3、Fes、Lck、B-RAF、C-RAF、MKK6、SAPK2α和/或SAPK2B活性對該疾病的病理和/或癥狀起作用。
第五方面，本發(fā)明提供制備式I化合物及其N-氧化物衍生物、前藥衍生物、保護(hù)的衍生物、單一的異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物和可藥用鹽的方法。
發(fā)明詳述定義作為基團(tuán)或其它基團(tuán)，例如鹵素取代的烷基和烷氧基的結(jié)構(gòu)元素的“烷基”可以是直鏈或支鏈的。C1-4-烷氧基包括甲氧基、乙氧基等。鹵素取代的烷基包括三氟甲基、五氟乙基等。除非另外說明，“烷基”可以任選地被-O-間斷或任選地被-OH取代。
“芳基”是指含有6-10個(gè)環(huán)碳原子的單環(huán)或稠合雙環(huán)芳香環(huán)。例如，芳基可以是苯基或萘基，優(yōu)選苯基。
“亞芳基”是指由芳基衍生的二價(jià)基團(tuán)?！半s芳基”如芳基所定義并且其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子為雜原子。例如，雜芳基包括吡啶基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯、咪唑基、苯并-咪唑基、嘧啶基、呋喃基、唑基、異唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、噻吩基等。
“環(huán)烷基”是指含有指定環(huán)原子數(shù)的飽和或部分飽和的單環(huán)、稠合的雙環(huán)或橋接的多環(huán)。例如，C3-10環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。
“雜環(huán)烷基”是指本申請中所定義的環(huán)烷基，條件是所述的一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳由選自-O-、-N＝、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-的部分所代替，其中R為氫、C1-4烷基或氮保護(hù)基。例如，本申請中用于描述本發(fā)明化合物的C3-8雜環(huán)烷基包括嗎啉基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮、1，4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸-8-基等。
“鹵素”優(yōu)選表示氯或氟，但也可以是溴或碘。
“治療”是指減輕或緩和疾病和/或其并發(fā)癥的方法。
優(yōu)選的
具體實(shí)施例方式
的說明融合蛋白BCR-Abl是導(dǎo)致Abl原致癌基因與Bcr基因融合的相互易位的結(jié)果。因此，BCR-Abl能夠通過增加促有絲分裂活性改變B-細(xì)胞。該增加導(dǎo)致對細(xì)胞凋亡的敏感性降低，并改變CML祖細(xì)胞的粘著力和歸巢。本發(fā)明提供治療與激酶有關(guān)的疾病，特別是與Abl、BCR-Abl、Bmx、CSK、TrkB、FGFR3、Fes、Lck、B-RAF、C-RAF、MKK6、SAPK2α和/或SAPK2β激酶有關(guān)的疾病的化合物、組合物和方法。例如，與BCR-Abl有關(guān)的白血病和其它增殖性疾病可通過抑制野生型和突變型BCR-Abl進(jìn)行治療。
在一個(gè)
具體實(shí)施例方式
中，涉及如下式I化合物，其中W為N；Y為C；Z為選自-C(O)NR5-和-NR5C(O)-的二價(jià)基團(tuán)；其中R5選自氫和C1-6烷基；在另一具體實(shí)施方式
中，R1選自氫、鹵素、羥基和-NR6R7；其中R6選自氫和C1-6烷基；R7選自C6-10芳基和C5-10雜芳基；或者R6和R7與R6和R7共同連接的氮一起形成C3-8雜環(huán)烷基；其中R7或R6和R7組合基團(tuán)中的任何芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基均可以是未取代的或被1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代鹵素、氰基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、鹵素取代的C1-6烷基、鹵素取代的C1-6烷氧基、-XNR8R8、-XC(O)NR8R8、-XC(O)NR8XOR8、-XS(O)2NR8R8、-XSR8、-XNR8S(O)2R8、-XNR8C(O)R8、-XOC(O)R8、-XOR8和-XOR9；其中X為鍵或C1-6亞烷基，R8為氫或C1-6烷基，R9為C6-10芳基；在另一具體實(shí)施方式
中，R2選自氫和C1-6烷基；R3為C1-6烷基；n為1；并且R4選自鹵素、鹵素取代的C1-6烷基和-XR10；其中X為鍵或C1-6亞烷基，R10選自C5-10雜芳基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R10上的任一雜芳基或雜環(huán)烷基是未取代的或被C1-6烷基取代的；并且m為1、2或3。
在另一
具體實(shí)施例方式
中，Z為選自-C(O)NH-和-NHC(O)-的二價(jià)基團(tuán)。
在另一
具體實(shí)施例方式
中，R1選自氫、鹵素、羥基和-NHR7；其中R7選自苯基和吡啶基；或者R6和R7與R6和R7共同連接的氮一起形成嗎啉-4-基；其中R7或R6和R7組合基團(tuán)中的任何芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基均可以是未取代的或被1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代鹵素、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、二甲基氨基、氨基、氨基羰基、甲基-氨基羰基、氨基磺酰基、1-羥基-乙基、羥基甲基、乙酰氧基-甲基、甲硫基、苯氧基、甲基-羧基-甲基、丁基-氨基-磺酰基、甲基、異丙烯基、甲氧基-乙基-氨基-羰基、1-羥基-1-甲基-乙基、甲基-磺?；?氨基和甲基-羰基-氨基；并且R3為氫或甲基。
在另一
具體實(shí)施例方式
中，R4選自鹵素、三氟甲基和-XR10；其中X為鍵或亞甲基；R10選自咪唑基、哌嗪基和嗎啉-4-基；其中任何雜芳基或雜環(huán)烷基都是未取代的或被甲基取代的。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物選自4-(3-三氟甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺；4-(4-三氟甲基-1-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氨磺?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-[3-(1-羥基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氨基甲酰基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氨磺?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-[3-(1-羥基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[5-(3-氟-5-三氟甲基-苯甲?；被?-2-甲基-苯基]-酰胺；4-羥基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-(4-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-羥基甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；乙酸3-(7-{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基氨基甲?；鶀-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基氨基)-芐酯；吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(4-三氟甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺；4-(4-三氟甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[4-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺；4-(4-三氟甲氧基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-苯基]-酰胺；4-(3-溴-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺；4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-溴-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-甲硫基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-(吡啶-3-基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-(3-苯氧基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-(3-羥基甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-丁基氨磺?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(4-氟-2-甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氯-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-間-甲苯基氨基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氰基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；乙酸3-(7-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲酰基氨基]-苯基氨基甲?；鶀-7H-環(huán)戊二烯并嘧啶-4-基氨基)-芐酯；4-(3-異丙烯基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-[3-(2-甲氧基-乙基氨基甲?；?-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-[3-(1-羥基-1-甲基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-[3-(1-羥基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[5-(3-氟-5-三氟甲基-苯甲?；被?-2-甲基-苯基]-酰胺；4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲酰基氨基)-苯基]-酰胺；4-羥基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲酰基氨基)-苯基]-酰胺；4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-[3-(1-羥基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-羥基甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-乙酰基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲酰基氨基)-苯基]-酰胺；4-(3-氨磺酰基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(4-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-甲基氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-乙酰基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-嗎啉-4-基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-嗎啉-4-基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[5-(3-氟-5-三氟甲基-苯甲?；被?-2-甲基-苯基]-酰胺；4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸(3-{[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-甲基}-苯基)-酰胺；和4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-3-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺。
其它優(yōu)選的式I化合物詳述于下文實(shí)施例和表I中。
藥理學(xué)和實(shí)用性本發(fā)明化合物調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性并因此可用于治療蛋白質(zhì)酪氨酸激酶，特別是Abl、BCR-Abl、Bmx、CSK、TrkB、FGFR3、Fes、Lck、B-RAF、C-RAF、MKK6、SAPK2α和SAPK2β激酶對疾病的病理和/或癥狀起作用的疾病或病癥。
Abelson酪氨酸激酶(即Abl、c-Abl)參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)、細(xì)胞對基因毒應(yīng)激的應(yīng)答和在細(xì)胞環(huán)境中通過整聯(lián)蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)傳遞信息?？偟膩碚f，Abl蛋白質(zhì)似乎是作為細(xì)胞組件起復(fù)合的作用，其整合來自各種胞外和胞內(nèi)的信號并影響細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的結(jié)果。Abelson酪氨酸激酶包括亞型衍生物如嵌合融合(癌基因蛋白)BCR-Abl(具有失調(diào)的酪氨酸激酶活性)或v-Abl。BCR-Abl是95％慢性骨髓性白血病(CML)和10％急性淋巴細(xì)胞白血病的致病關(guān)鍵。STI-571(Gleevec)是致癌性BCR-Abl酪氨酸激酶的抑制劑并用于治療慢性骨髓性白血病(CML)。然而，CML發(fā)病危險(xiǎn)期的一些患者由于BCR-Abl激酶的突變而對STI-571耐受。目前已報(bào)道了超過22種突變，最常見的是G250E、E255V、T315I、F317L和M351T。
本發(fā)明化合物抑制abl激酶，特別是v-abl激酶。本發(fā)明化合物也抑制野生型BCR-Abl激酶和突變的BCR-Abl激酶并因此適于治療Bcr-abl-陽性癌癥和腫瘤疾病，如白血病(特別是慢性骨髓性白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病，尤其是發(fā)現(xiàn)它們是以細(xì)胞凋亡為作用機(jī)制的)，并且還顯示出對白血病干細(xì)胞亞組的影響，而且也可能用于取出所述細(xì)胞(例如，骨髓取出)后體外純化這些細(xì)胞并在清除癌細(xì)胞后再將細(xì)胞植入(例如，再植入純化的骨髓細(xì)胞)。
Trk族的神經(jīng)營養(yǎng)受體(trkA、trkB、trkC)促進(jìn)神經(jīng)和非神經(jīng)組織的存活、生長和分化。TrkB蛋白在小腸和結(jié)腸的神經(jīng)內(nèi)分泌型細(xì)胞、胰腺的α細(xì)胞、淋巴結(jié)和脾的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞以及表皮的顆粒層中表達(dá)(Shibayama和Koizumi，1996)。TrkB蛋白的表達(dá)與Wilms腫瘤和成神經(jīng)細(xì)胞瘤的有害進(jìn)展有關(guān)。此外，TkrB在癌性前列腺細(xì)胞中表達(dá)而不在正常細(xì)胞中表達(dá)。trk受體信號傳遞途徑的下游包括通過Shc、激活的Ras、ERK-1和ERK-2基因激活MAPK的級聯(lián)反應(yīng)和PLC-γ傳導(dǎo)途徑(Sugimoto等人，2001)。
Tec族激酶Bmx是一種非-受體蛋白質(zhì)-酪氨酸激酶，其控制哺乳動(dòng)物上皮癌細(xì)胞的增殖。
成纖維細(xì)胞生長因子受體3(FGFR3)顯示對骨生長的下調(diào)作用并且抑制軟骨細(xì)胞增殖。致死性發(fā)育異常是由成纖維細(xì)胞生長因子受體3的不同突變引起的，其中一個(gè)突變體TDII FGFR3具有酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)活性，其激活轉(zhuǎn)錄因子Stat1，導(dǎo)致細(xì)胞周期抑制劑的表達(dá)、生長抑制和異常的骨發(fā)育(Su等人，Nature，1997，386，288-292)。FGFR3也常常表達(dá)在多發(fā)性骨髓瘤類型的癌癥中。
Lck在T-細(xì)胞信號傳遞中起作用。缺乏Lck基因的小鼠具有弱的胸腺細(xì)胞發(fā)育能力。Lck作為T-細(xì)胞信號傳遞的正性激活劑的功能啟示Lck抑制劑有可能用于治療自身免疫疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
JNK，以及其它MAPK，在介導(dǎo)細(xì)胞對癌癥、凝血酶誘導(dǎo)的血小板凝聚、免疫缺陷疾病、自身免疫疾病、細(xì)胞死亡、過敏、骨質(zhì)疏松和心臟病產(chǎn)生反應(yīng)中起作用。與激活JNK途徑相關(guān)的病癥包括慢性骨髓性白血病(CML)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、骨關(guān)節(jié)炎、局部缺血、癌癥和神經(jīng)變性疾病。因?yàn)镴NK激活會(huì)涉及肝疾病或肝臟局部缺血，本發(fā)明化合物也可用于治療各種肝臟疾病。還報(bào)道了JNK在心血管疾病如心肌梗塞或充血性心力衰竭中的作用，已證實(shí)JNK可介導(dǎo)對各種形式的心臟應(yīng)激的肥大性反應(yīng)。已經(jīng)表明JNK級聯(lián)反應(yīng)在T-細(xì)胞激活中也起作用，包括IL-2啟動(dòng)子的激活。因此，JNK抑制劑可能在改變病態(tài)免疫反應(yīng)中有治療價(jià)值。也建立了各種癌癥中JNK激活所起的作用，啟示了JNK抑制劑在癌癥中的潛在用途。例如，結(jié)構(gòu)激活JNK與HTLV-1介導(dǎo)的腫瘤發(fā)生相關(guān)[治癌基因13135-42(1996)]。JNK在卡波濟(jì)氏肉瘤(KS)中也可能起作用。與KS增殖有關(guān)的其它細(xì)胞因子如血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、IL-6和TNFα的其它增殖作用也可通過JNK來介導(dǎo)。另外，與JNK活性相應(yīng)的p210 BCR-ABL轉(zhuǎn)化細(xì)胞中c-jun基因的調(diào)節(jié)作用啟示JNK抑制劑可用于治療慢性骨髓性白血病(CML)[Blood 922450-60(1998)]。
據(jù)信某些異常的增殖性疾病與raf表達(dá)有關(guān)，所以，相信異常的增殖性疾病會(huì)對raf表達(dá)的抑制產(chǎn)生反應(yīng)。raf蛋白質(zhì)異常高水平的表達(dá)也影響轉(zhuǎn)化和異常的細(xì)胞增殖。也相信這些異常的增殖性疾病對raf表達(dá)的抑制有反應(yīng)。例如，相信c-raf蛋白質(zhì)表達(dá)與異常的細(xì)胞增殖有關(guān)，因?yàn)橛腥藞?bào)道有60％的肺癌細(xì)胞系表達(dá)非常高水平的c-raf mRNA和蛋白質(zhì)。異常增殖性疾病的其它例子是過度增殖性疾病如癌癥、腫瘤、增生、肺纖維化、血管生成、牛皮癬、動(dòng)脈硬化和血管中平滑肌細(xì)胞的增殖，如狹窄或血管成形術(shù)后的再狹窄。Raf作為一部分的細(xì)胞信號傳遞途徑也影響以T-細(xì)胞增殖(T-細(xì)胞激活和生長)為特征的炎性疾病，如組織移植排斥、內(nèi)毒素休克和腎小球腎炎。
應(yīng)激激活的蛋白激酶(SAPK)是一族在信號傳導(dǎo)途徑倒數(shù)第二步中體現(xiàn)的蛋白激酶，其導(dǎo)致c-jun轉(zhuǎn)錄因子的激活和c-jun調(diào)節(jié)的基因的表達(dá)。具體來說，c-jun與基因的轉(zhuǎn)錄有關(guān)，所述基因與編碼因基因毒性而受損的DNA修復(fù)相關(guān)的蛋白質(zhì)。所以，抑制細(xì)胞中SAPK活性的活性劑可以防止DNA修復(fù)和使細(xì)胞對誘導(dǎo)DNA損傷或抑制DNA合成和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞增殖的活性劑敏感。
分裂素-激活的蛋白激酶(MAPK)是保守信號傳導(dǎo)途徑中的成員，其激活轉(zhuǎn)錄因子、翻譯因子和其它對各種胞外信號進(jìn)行應(yīng)答的靶分子。MAPK通過分裂素-激活的蛋白激酶激酶(MKK)在序列Thr-X-Tyr的雙重磷酸化基元處進(jìn)行磷酸化來激活。在高等真核細(xì)胞中，MAPK信號傳導(dǎo)的生理作用與細(xì)胞活動(dòng)如增殖、瘤形成、發(fā)展和分化有關(guān)。因此，通過這些途徑(特別是通過MKK4和MKK6)來調(diào)節(jié)信號傳導(dǎo)的能力可導(dǎo)致開發(fā)出用于治療和預(yù)防性治療與MAPK信號傳導(dǎo)相關(guān)的人類疾病如炎性疾病、自身免疫疾病和癌癥的方法。
Csk通過磷酸化Src酶C-末端中的單一酪氨酸殘基來下調(diào)激酶活性(Okada等人，J.Biol.Chem.26624249-24252，1991；和Bergman等人，EMBO J.112919-2924，1992)。由于這種首要的調(diào)節(jié)功能，Csk對許多生物功能包括T細(xì)胞激活、神經(jīng)發(fā)育、細(xì)胞骨架組織和細(xì)胞周期控制有直接影響。
與來自Fes族的非受體酪氨酸激酶活性相關(guān)的疾病的例子包括但不限于源于間葉細(xì)胞的腫瘤和源于造血細(xì)胞的腫瘤。
如上文所述，本發(fā)明還提供一種在需要進(jìn)行治療的個(gè)體中預(yù)防或治療上文所述的任何疾病或病癥方法，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的(參見“給藥和藥物組合物”，下文)式I化合物或其可藥用鹽。對于任何上述用途，所需劑量會(huì)根據(jù)給藥方式、被治療的特定疾病和所需的效果來進(jìn)行調(diào)整。
給藥和藥物組合物通常，可通過本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)和適宜的方式、單獨(dú)或與一種或多種治療劑一起給予治療有效量的本發(fā)明化合物。治療有效量可隨著疾病的嚴(yán)重性、患者的年齡和相對健康狀況、所用化合物的潛能和其它因素而改變。通常，以每日每公斤體重大約0.03-2.5mg的劑量系統(tǒng)給藥可獲得滿意的結(jié)果。大的哺乳動(dòng)物，例如人的每日推薦劑量在大約0.5mg-100mg的范圍內(nèi)，通常以例如每日最多4次的分劑量給藥或以緩釋劑型給藥。適宜的口服給藥單位劑型包含大約1-50mg活性組分。
本發(fā)明化合物可以通過任何常規(guī)給藥途徑以藥物組合物的形式給藥，特別是腸道給藥，例如，以片劑或膠囊劑的形式口服給藥，或非腸道給藥，例如，以注射溶液或懸浮液的形式給藥，局部給藥，例如，以洗劑、凝膠劑、軟膏劑或霜?jiǎng)┑男问浇o藥，或以鼻腔給藥制劑或栓劑的形式給藥。含有游離形式或可藥用鹽形式的本發(fā)明化合物和至少一種可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物可按照常規(guī)方法，通過混合、制粒或包衣方法制備。例如，口服組合物可以是片劑或明膠膠囊劑，它含有活性組分和a)稀釋劑，例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如，二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂鹽或鈣鹽和/或聚乙二醇；對于片劑來說還可以含有c)粘合劑，例如，硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要還可以含有d)崩解劑，例如，淀粉、瓊脂、藻酸或其鈉鹽，或泡騰劑混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑。注射組合物可以是等滲水溶液或懸浮液，并且栓劑可以由脂肪乳劑或懸浮液制備。組合物可以被滅菌和/或含有輔助劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化劑、溶解促進(jìn)劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。另外，它們還可以含有其它有治療價(jià)值的物質(zhì)。適宜的透皮用制劑包含有效量的本發(fā)明化合物和載體。載體包括有助于通過宿主皮膚吸收的藥理學(xué)上可接受的溶劑。例如，透皮吸收制劑是一種含有背襯膜、含有所述化合物并任選地含有載體和使所述化合物在較長的一段時(shí)間內(nèi)以受控和預(yù)定速度釋放到宿主皮膚的控速屏障的貯藥庫、以及確保所述透皮吸收制劑牢固地與皮膚接觸的部件的繃帶形式。也可以使用基質(zhì)透皮制劑。合適的局部用，例如皮膚和眼睛用制劑優(yōu)選為本領(lǐng)域公知的水溶液、軟膏劑、霜?jiǎng)┗蚰z劑。所述制劑可包含增溶劑、穩(wěn)定劑、張力增強(qiáng)劑、緩沖劑和防腐劑。
本發(fā)明化合物可以與一種或多種治療劑(聯(lián)用藥物)一起以治療有效量進(jìn)行給藥。例如，協(xié)同作用可與其它免疫調(diào)節(jié)劑或抗炎物質(zhì)來產(chǎn)生，例如與環(huán)孢菌素、雷帕霉素或子囊霉素或其免疫抑制劑類似物，例如環(huán)孢菌素A(CsA)、環(huán)孢菌素G、FK-506、雷帕霉素或類似化合物、皮質(zhì)類固醇、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、布喹那、來氟米特、咪唑立賓、麥考酚酸、嗎替麥考酚酯、15-脫氧精胍菌素、免疫抑制劑抗體，特別是白細(xì)胞受體的單克隆抗體例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、B7、CD45、CD58或其配體，或其它免疫調(diào)節(jié)化合物，如CTLA41g一起使用時(shí)產(chǎn)生。當(dāng)本發(fā)明化合物與其它治療劑一同給藥時(shí)，共同給藥的化合物的劑量當(dāng)然將根據(jù)一起使用的藥物類型、所使用的特定藥物、被治療的疾病等情況來進(jìn)行調(diào)整。
本發(fā)明還提供了一種聯(lián)用藥物產(chǎn)品，例如藥盒，其包含a)游離形式或可藥用鹽形式的第一種活性劑，它是本文公開的本發(fā)明化合物，和b)至少一種聯(lián)用的活性劑。該藥盒可包含用于給藥的使用說明。
本文使用的術(shù)語“聯(lián)合用藥”或“合并給藥”等意指包括將所選擇的治療劑給予同一病人，并且旨在包括治療劑不以相同途徑或相同時(shí)間給藥的治療方案。
本文所使用的術(shù)語“聯(lián)用藥物產(chǎn)品”是指由一種以上活性組分混合或組合所形成的產(chǎn)品并且包括活性成分的固定組合和不固定組合。術(shù)語“固定組合”是指活性組分例如式I化合物和聯(lián)用治療劑以單一實(shí)體或劑型同時(shí)給予患者。術(shù)語“不固定組合”是指活性組分例如式I化合物和聯(lián)用治療劑各自作為實(shí)體同時(shí)、一起或沒有具體時(shí)間限制地依次給予患者，其中所述給藥可在患者身體中提供治療有效水平的兩個(gè)化合物。后者也用于雞尾酒療法，例如給予三種或三種以上的活性組分。
制備本發(fā)明化合物的方法本發(fā)明還包括制備本發(fā)明化合物的方法。在所描述的反應(yīng)中，可能有必要保護(hù)在終產(chǎn)物中需要的反應(yīng)性官能團(tuán)，例如羥基、氨基、亞氨基、巰基或羧基，以避免它們不必要地參與反應(yīng)?？砂凑諛?biāo)準(zhǔn)實(shí)踐使用常規(guī)的保護(hù)基，例如，參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基”，John Wiley和Sons，1999，第3版。
其中R1為-NR6R7的式I化合物可按照如下反應(yīng)方案I所述進(jìn)行制備
反應(yīng)方案I 其中R1、R2、R3、R4、W、Y、Z、m和n如發(fā)明概述中關(guān)于式I所定義并且V表示甲基磺酰基或鹵素基團(tuán)，例如碘或氯，優(yōu)選氯。
式I化合物可通過將式2化合物與式3化合物在適宜溶劑(例如，正丁醇、乙酸等)的存在下，在60-80℃的溫度范圍內(nèi)反應(yīng)來制備，并且可持續(xù)反應(yīng)36小時(shí)直至反應(yīng)結(jié)束。
其中Y為碳的式I化合物可按照如下反應(yīng)方案II所述進(jìn)行制備
反應(yīng)方案II 其中R1、R2、R3、R4、W、Z、m和n如發(fā)明概述中關(guān)于式I所定義并且L為離去基團(tuán)。
式I化合物可通過將式4化合物與式5化合物在適宜溶劑(例如THF等)的存在下，利用三光氣或光氣和適宜的堿(例如DIEA等)，在0℃至大約90C的溫度范圍進(jìn)行反應(yīng)來制備，并且可持續(xù)反應(yīng)24小時(shí)直至反應(yīng)結(jié)束。
在下文的參考例和實(shí)施例中舉例說明了反應(yīng)方案I和II。
制備本發(fā)明化合物的其它方法本發(fā)明化合物的可藥用酸加成鹽可通過將游離堿形式的化合物與可藥用無機(jī)或有機(jī)酸反應(yīng)來制備。或者，本發(fā)明化合物的可藥用堿加成鹽可通過將游離酸形式的化合物與可藥用無機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)制備?；蛘撸}形式的本發(fā)明化合物可利用起始材料或中間體的鹽制備。
游離酸或游離堿形式的本發(fā)明化合物可分別由相應(yīng)的堿加成鹽或酸加成鹽制備，例如酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物可通過用適宜的堿(例如，氫氧化銨溶液、氫氧化鈉等)處理轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離堿。堿加成鹽形式的本發(fā)明化合物可通過用適宜的酸(例如，鹽酸等)處理轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離酸。
非氧化形式的本發(fā)明化合物可通過在適宜的惰性有機(jī)溶劑(例如乙腈、乙醇、二烷水溶液等)中，在0-80℃下，用還原劑(例如，硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉等)處理由本發(fā)明化合物的N-氧化物制備。
本發(fā)明化合物的前藥衍生物可通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法(例如，詳情見Saulnier等人(1994)，Bioorganic and Medicinal ChemistryLetters，第4卷，第1985頁)制備。例如，適宜的前藥可通過將非衍生化的本發(fā)明化合物與適宜的氨基甲?；噭?例如，1，1-酰氧基烷基羰基氯(carbanochloridate)、對硝基苯基碳酸酯等)反應(yīng)來制備。
本發(fā)明化合物的被保護(hù)衍生物可通過本領(lǐng)與普通技術(shù)人員已知的方法制備。用于產(chǎn)生保護(hù)基及其脫除的技術(shù)的詳細(xì)描述可見于T.W.Greene，“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基”，第3版，John Wiley和Sons，Inc.，1999。
在本發(fā)明化合物的制備過程中，可方便地制備或形成本發(fā)明化合物的溶劑化物(例如水合物)。本發(fā)明化合物的水合物可通過在水/有機(jī)溶劑混合物中重結(jié)晶，利用有機(jī)溶劑如二惡英、四氫呋喃或甲醇方便地制備。
本發(fā)明化合物單獨(dú)的立體異構(gòu)體可通過將化合物的外消旋混合物與旋光拆分劑反應(yīng)形成一對非對映異構(gòu)體化合物、分離非對映異構(gòu)體并重新獲得光學(xué)純對映異構(gòu)體來制備。此外，對映異構(gòu)體還可通過用手性制備HPLC分離或利用對映體純試劑得到。盡管對映異構(gòu)體的拆分可利用本發(fā)明化合物的共價(jià)非對映異構(gòu)體衍生物來進(jìn)行，但可解離的復(fù)合物(例如，非對映異構(gòu)體鹽晶體)是優(yōu)選的。非對映異構(gòu)體具有不同的物理性質(zhì)(例如，熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、溶解度、反應(yīng)性等)并且可以很容易地利用這些差異進(jìn)行分離。非對映異構(gòu)體可以通過色譜法分離，或者優(yōu)選通過建立在溶解度不同基礎(chǔ)上的分離/拆分技術(shù)進(jìn)行分離。然后通過任何不會(huì)導(dǎo)致消旋化的實(shí)用方法重新獲得光學(xué)純的對映異構(gòu)體和拆分劑。用于通過外消旋混合物拆分化合物的立體異構(gòu)體的技術(shù)的更詳細(xì)描述可見于Jean Jacques，Andre Collet，SamuelH.Wilen，“對映異構(gòu)體、外消旋體和拆分”，John Wiley和Sons，Inc.，1981。
總之，式I化合物可通過下述方法制備，該方法包括(a)反應(yīng)方案I和II中的那些方法；和(b)任選地將本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用鹽；(c)任選地將鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為非鹽形式；(d)任選地將非氧化形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用N-氧化物；(e)任選地將N-氧化物形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為其非氧化物形式；(f)任選地將異構(gòu)體混合物拆分為本發(fā)明化合物的獨(dú)立的異構(gòu)體；(g)任選地將非衍化的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用前藥衍生物；和(h)任選地將本發(fā)明化合物的前藥衍生物轉(zhuǎn)化為其非衍化形式。
當(dāng)本文中未對起始材料的制備進(jìn)行具體描述時(shí)，則所述化合物是已知的或者可通過本領(lǐng)域已知的類似方法或如下文實(shí)施例所述進(jìn)行制備。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解上述轉(zhuǎn)化僅僅是制備本發(fā)明化合物方法的代表，并可類似地使用其他公知的方法。
實(shí)施例下列實(shí)施例提供了制備中間體(參考例)和代表性的本發(fā)明化合物(實(shí)施例)的詳細(xì)描述，提供這些實(shí)施例的目的在于舉例說明而非限制本發(fā)明。
參考例14-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[4-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺樹脂 將帶有4-嗎啉基苯胺(1g，1mmol)的PAL-樹脂(Midwest Bio-Tech)、DIEA(1.04mL，6mmol)和硝基苯甲酰氯(3mmol)在CH2Cl2(10mL)中混合并將溶液在室溫下振搖16小時(shí)。過濾所得到的混合物，將樹脂用DMF(3×10mL)、CH2Cl2(3×10mL)、MeOH(3×10mL)洗滌并真空干燥。樹脂(10mg)用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(200μL)處理30分鐘。LC-MS僅顯示一個(gè)峰實(shí)測MS(M+H+)為328.1；計(jì)算MS(M+H+)為328.12。
將所得到的樹脂與SnCl2·2H2O(2.26g，10mmol)在NMP(10mL)中混合并振搖48小時(shí)。將溶液過濾，樹脂用NMP(3×10mL)、CH2Cl2(3×10mL)、MeOH(3×10mL)洗滌并真空干燥得到固體-承載的4-氨基-N-(4-嗎啉-4-基-苯基)-苯甲酰胺。該樹脂(10mg)用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(200μL)處理30分鐘。LC-MS僅顯示一個(gè)峰實(shí)測MS(M+H+)為298.1；計(jì)算MS(M+H+)為298.15。
將6-氯-7-脫氮嘌呤(300mg，2mmol)、三光氣(290mg，1mmol)和DIEA(680μL，3.9mmol)在THF(10mL)中在0℃下攪拌2小時(shí)。THF通過蒸發(fā)除去，殘余物溶解在THF(10mL)中。將溶液與4-氨基-N-(4-嗎啉-4-基-苯基)-苯甲酰胺樹脂混合并搖動(dòng)18小時(shí)。將溶液過濾，樹脂用DMF(3×10mL)、CH2Cl2(3×10mL)、MeOH(3×10mL)洗滌并真空干燥，得到4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸-4-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-苯基]-酰胺樹脂。將10mg樹脂進(jìn)一步用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(200μL)處理30分鐘。LC-MS僅顯示一個(gè)峰實(shí)測MS(M+H+)為477.10；計(jì)算MS(M+H+)為477.14。4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸甲基-[4-(3-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺樹脂和4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺可按照類似的方法，利用適宜的起始材料制備。
參考例24-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺樹脂 將4-甲基-3-硝基-苯胺PAL-樹脂(5g，5mmol)、DIEA(5.34mL，20mmol)和4-(氯甲基)-苯甲酰氯(1.89g，10mmol)在CH2Cl2(50mL)中混合并在室溫下振搖18小時(shí)。將溶液過濾，樹脂用DMF(3×50mL)、CH2Cl2(3×50mL)、MeOH(3×50mL)洗滌然后真空干燥。該樹脂(10mg)用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(200μL)處理30分鐘。LC-MS顯示一個(gè)主峰實(shí)測MS(M+H+)為305.0；計(jì)算MS(M+H+)為304.06。
將樹脂與1-甲基哌嗪(5.56mL，49.2mmol)在DMSO(50mL)中混合并在過濾前振搖過夜，用DMF(3×50mL)、CH2Cl2(3×50mL)、MeOH(3×50mL)洗滌并真空干燥。該樹脂(10mg)用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(200μL)處理30分鐘。LC-MS僅顯示一個(gè)峰實(shí)測MS(M+H+)為369.2；計(jì)算MS(M+H+)為369.18。
所得到的樹脂與SnCl2·2H2O(11.3g，50mmol)在NMP(50mL)中混合，并振搖48小時(shí)。將溶液過濾，樹脂用NMP(3×50mL)、CH2Cl2(3×50mL)、MeOH(3×50mL)洗滌并真空干燥，得到固體-承載的N-(3-氨基-4-甲基-苯基)-N-甲基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲酰胺。該樹脂(10mg)用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(200μL)處理30分鐘。LC-MS僅顯示一個(gè)峰實(shí)測MS(M+H+)為339.2；計(jì)算MS(M+H+)為339.21。
將6-氯-7-脫氮嘌呤(1.50g，10mmol)、三光氣(1.45g，5mmol)和DIEA(3.4mL，19.5mmol)在THF(50mL)中，在0℃下攪拌3小時(shí)。通過蒸發(fā)除去THF后，殘余物溶解在THF(50mL)中，將溶液與N-(3-氨基-4-甲基-苯基)-N-甲基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲酰胺樹脂混合并搖動(dòng)18小時(shí)。將溶液過濾，樹脂用DMF(3×50mL)、CH2Cl2(3×50mL)、MeOH(3×50mL)洗滌并真空干燥，得到4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺樹脂。該樹脂(10mg)用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(200μL)處理30分鐘。LC-MS實(shí)測MS(M+H+)為518.20；計(jì)算MS(M+H+)為518.2。
參考例34-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺樹脂
將PAL-樹脂4-甲基-3-硝基-苯胺(5g，5mmol)、雙(2-氧代-3-唑烷基)次膦酰氯(5.09g，20mmol)、DIEA(3.5mL，20mmol)和3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酸(2.71g，10.0mmol)在DMF(50mL)中混合并在室溫下振搖18小時(shí)。過濾所得到的混合物，樹脂用DMF(3×50mL)、CH2Cl2(3×50mL)、MeOH(3×50mL)洗滌并真空干燥。將10mg該樹脂用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(200μL)處理30分鐘。LC-MS僅顯示一個(gè)峰實(shí)測MS(M+H+)為405.1；計(jì)算MS(M+H+)為405.11。
所得到的樹脂與SnCl2·2H2O(11.3g，50mmol)在NMP(50mL)中混合并在室溫下振搖48小時(shí)。將溶液過濾，樹脂用NMP(3×50mL)、CH2Cl2(3×50mL)、MeOH(3×50mL)洗滌并真空干燥，得到N-(3-氨基-4-甲基-苯基)-3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰胺樹脂。該樹脂(10mg)用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(200μL)處理30分鐘。LC-MS僅顯示一個(gè)峰實(shí)測MS(M+H+)為375.1；計(jì)算MS(M+H+)為375.14。
將6-氯-7-脫氮嘌呤(1.50g，10.0mmol)、三光氣(1.45g，5.00mmol)和DIEA(3.4mL，20mmol)在THF(50mL)中，在0℃下攪拌3小時(shí)。通過蒸發(fā)除去THF后，殘余物溶解在THF(50mL)中，溶液與Pal N-(3-氨基-4-甲基-苯基)-3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰胺樹脂混合(5g，5mmol)，并在室溫下振搖18小時(shí)。將溶液過濾，樹脂用DMF(3×50mL)、CH2Cl2(3×50mL)、MeOH(3×50mL)洗滌并真空干燥，得到4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺樹脂。該樹脂(10mg)用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(200μL)處理30分鐘。LC-MS僅顯示一個(gè)峰實(shí)測MS(M+H+)為554.1；計(jì)算MS(M+H+)為554.12。
參考例4參考例3的溶液相合成通過將3-硝基-4-甲基苯胺(3.00g，11.1mmol)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽(5.49g，14.4mmol)、DIEA(5.00mL，28.8mmol)和3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟-甲基-苯甲酸(2.02g，13.3mmol)在DMF(15mL)中混合并在室溫下攪拌12小時(shí)獲得。將水(150mL)加到溶液中，過濾出淡黃色的沉淀物，用水洗滌并真空干燥，得到4.3g產(chǎn)物(收率97％)。LC-MS僅顯示一個(gè)峰實(shí)測MS(M+H+)為405.1；計(jì)算MS(M+H+)為405.11。
在H2下，將淡黃色的固體與10-wt％ Pd/C(600mg)一起在MeOH(50mL)中攪拌。24小時(shí)后，過濾懸浮液，Pd/C用MeOH(3×50mL)洗滌。濃縮合并的MeOH溶液并真空干燥，得到N-(3-氨基-4-甲基-苯基)-3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰胺(3.5g，收率84％)。LC-MS僅顯示一個(gè)峰實(shí)測MS(M+H+)為375.1；計(jì)算MS(M+H+)為375.14。
將6-氯-7-脫氮嘌呤(3.9g，25.5mmol)、三光氣(3.80g，12.8mmol)和DIEA(8.9mL，51mmol)在THF(100mL)中，在0℃下攪拌3小時(shí)。通過蒸發(fā)除去THF，殘余物溶解在THF(100mL)中。將溶液與N-(3-氨基-4-甲基-苯基)-3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰胺(3.5g，9.3mmol)混合并在室溫下振搖18小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，殘余物通過硅膠柱色譜純化(2％MeOH/CH2Cl2)，得到4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基}-苯基}-酰胺(3.4g，收率65％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.07(s，1H)，10.71(s，1H)，9.62(s，1H)，8.99(s，1H)，8.62(s，1H)，8.55(s，1H)，8.46(d，J＝4.0Hz，1H)，8.24(d，J＝4.0Hz，1H)，8.18(s，1H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，1H)，6.96(d，J＝4.0Hz，1H)，2.47(s，3H)，2.37(s，3H)；ESIMS m/z 554.1(M++1)。
實(shí)施例14-(3-三氟甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-苯基]-酰胺
將如參考例1所述制備的4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-苯基]-酰胺樹脂(50mg，0.05mmol)在正丁醇(2mL)中與乙酰氯(17.8μL，0.25mmol)和3-三氟甲基-苯胺(31μL，0.25mmol)混合或僅與3-三氟甲基-苯胺HCl鹽(50mg，0.25mmol)混合，并在80℃下振搖24小時(shí)。過濾所得到的混合物，將樹脂用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(600μL)處理30分鐘然后過濾并用CH2Cl2(3×2mL)、MeOH(3×2mL)洗滌。然后將洗滌液合并在一起并濃縮。殘余物通過制備HPLC純化，得到4-(3-三氟甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺(19.0mg，收率64％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.75(s，1H)，10.16(s，1H)，10.09(s，1H)，8.69(s，1H)，8.31(s，1H)，8.22(d，J＝8.3Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.94(d，J＝8.2Hz，1H)，7.92(d，J＝3.9Hz，1H)，7.77(d，J＝7.7Hz，1H)，7.64(d，J＝8.8Hz，2H)，7.63(d，J＝6.9Hz，1H)，7.58(t，J＝8.0Hz，1H)，7.44(d，J＝7.7Hz，1H)，7.13(d，J＝4.0Hz，1H)，6.95(d，J＝9.0Hz，2H)，3.74(t，J＝4.6Hz，4H)，3.08(t，J＝4.7Hz，4H)；ESIMS m/z 602.20(M++1)。
實(shí)施例24-(4-三氟甲基-1-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺 將如參考例2所述制備的4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺樹脂(50mg，0.05mmol)在正丁醇(2mL)中與乙酰氯(17.8μL，0.25mmol)和4-(三氟甲基)苯胺(31μL，0.25mmol)混合，或僅與4-三氟甲基-苯胺鹽酸鹽(49.4mg，0.25mmol)混合并在80℃下振搖24小時(shí)。過濾所得到的混合物，將樹脂用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(600μL)處理30分鐘然后過濾并用CH2Cl2(3×2mL)、MeOH(3×2mL)洗滌。然后將洗滌液合并在一起并濃縮。殘余物通過制備HPLC純化，得到4-(4-三氟甲基-1-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(18.6mg，收率58％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.47(s，1H)，10.34(s，1H)，10.16(s，1H)，8.67(s，1H)，8.54(s，1H)，8.15(d，J＝8.5Hz，2H)，8.03(d，J＝8.0Hz，2H)，7.93(d，J＝3.9Hz，1H)，7.76(d，J＝8.6Hz，2H)，7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，7.56(d，J＝8.0Hz，2H)，7.30(d，J＝8.0Hz，1H)，7.17(d，J＝3.9Hz，1H)，4.01(s，2H)，3.80-3.20(m，8H)，2.83(s，3H)，2.46(s，3H)；ESIMS m/z 643.20(M++1)。
實(shí)施例34-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺 將如參考例3所述制備的4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺樹脂(50mg，0.05mmol)在正丁醇(2mL)中與N，N-二甲基-1，3-苯二胺二鹽酸鹽(52.3mg，0.25mmol)混合或與乙酰氯(17.8μL，0.25mmol)和苯胺混合并在80℃下振搖24小時(shí)。過濾所得到的混合物，樹脂用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(600μL)處理30分鐘然后過濾并用CH2Cl2(3×2mL)、MeOH(3×2mL)洗滌。然后將洗滌液合并在一起并濃縮。殘余物通過制備HPLC-MS純化，得到4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(23.2mg，收率71％)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.60(s，1H)，10.65(s，1H)，9.68(s，1H)，9.61(s，1H)，8.60(s，1H)，8.54(s，1H)，8.53(s，1H)，8.46(s，1H)，8.41(s，1H)，8.16(s，1H)，7.82(d，J＝3.9Hz，1H)，7.60(d，J＝8.2Hz，1H)，7.32(d，J＝3.6Hz，1H)，6.54(d，J＝8.4Hz，1H)，2.92(s，6H)，2.45(s，3H)，2.35(s，3H)；ESIMSm/z654.2(M++1)。
實(shí)施例44-(3-氨基甲酰基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺 將如參考例2所述制備的4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺樹脂(50mg，0.05mmol)在正丁醇(2mL)中與乙酰氯(17.8μL，0.25mmol)和3-氨基苯甲酰胺(34mg，0.25mmol)混合并在80C下振搖24小時(shí)。過濾所得到的混合物，樹脂用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(600μL)處理30分鐘然后過濾并用CH2Cl2(3×2mL)、MeOH(3×2mL)洗滌。然后將洗滌液合并在一起并濃縮。殘余物通過制備HPLC-MS純化，得到4-(3-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(18.5mg，收率60％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.52(s，1H)，10.31(s，1H)，9.99(s，1H)，8.60(s，1H)，8.52(d，J＝1.71Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.12(d，J＝7.59Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.98(d，J＝8.02Hz，2H)，7.87(d，J＝3.89Hz，1H)，7.59(dd，J＝17.87，9.00Hz，2H)，7.49(d，J＝7.98Hz，2H)，7.47(s，1H)，7.38(s，1H)，7.29(d，J＝8.48Hz，1H)，7.11(d，J＝3.89Hz，1H)，3.75(s，2H)，3.43-2.79(m，8H)，2.50(s，3H)，2.49(s，3H)；ESIMS m/z 618.20(M++1)。
實(shí)施例54-(3-氨磺?；?苯基氨基)-吡咯并[23-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺
將如參考例2所述制備的4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺樹脂(50mg，0.05mmol)在正丁醇(2mL)中與乙酰氯(17.8μL，0.25mmol)和3-氨基苯磺酰胺(43mg，0.25mmol)混合并在80C下振搖24小時(shí)。過濾所得到的混合物，樹脂用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(600μL)處理30分鐘然后過濾并用CH2Cl2(3×2mL)、MeOH(3×2mL)洗滌。然后將洗滌液與正丁醇合并在一起并濃縮。殘余物通過制備HPLC-MS純化，得到4-(3-氨磺?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(18.0mg，收率55％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.45(s，1H)，10.27(s，1H)，10.09(s，1H)，8.59(s，1H)，8.49(s，1H)，8.29(s，1H)，8.17(d，J＝7.95Hz，1H)，7.95(d，J＝7.94Hz，2H)，7.87(d，J＝3.85Hz，1H)，7.54(dd，J＝7.61，15.51Hz，2H)，7.52(s，1H)，7.45(d，J＝7.88Hz，2H)，7.37(s，2H)，7.25(d，J＝8.30Hz，1H)，7.11(d，J＝3.88Hz，1H)，3.69(s，2H)，3.54-3.17(m，2H)，3.01-2.93(m，6H)，2.75(s，3H)，2.41(s，3H)；ESIMS m/z 654.20(M++1)。
實(shí)施例64-[3-(1-羥基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺 將如參考例3所述制備的4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺樹脂(50mg，0.05mmol)在正丁醇(2mL)中與乙酰氯(17.8μL，0.25mmol)和3-(1-羥基乙基)苯胺(34mg，0.25mmol)混合并在80℃下振搖24小時(shí)。過濾所得到的混合物，樹脂用TFA/CH2Cl2/H2O(45/50/5)(600μL)處理30分鐘然后過濾并用CH2Cl2(3×2mL)、MeOH(3×2mL)洗滌。然后將洗滌液與正丁醇合并在一起并濃縮。殘余物通過制備HPLC-MS純化，得到4-[3-(1-羥基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(16.6mg，收率51％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.60(s，1H)，10.68(s，1H)，9.85(s，1H)，9.62(s，1H)，8.62(s，1H)，8.57(s，1H)，8.54(s，1H)，8.47(s，1H)，8.43(s，1H)，8.17(s，1H)，7.85(d，J＝4.1Hz，2H)，7.70(s，1H)，7.61(dd，J＝6.5，8.2Hz，1H)，7.35(d，J＝2.3Hz，1H)，7.33(t，J＝7.8Hz，1H)，7.09(s，1H)，7.08(d，J＝6.8Hz，1H)，4.75(q，J＝6.4Hz，1H)，2.47(s，3H)，2.36(s，3H)，1.36(d，J＝6.4Hz，3H)；ESIMS m/z655.2(M++1)。
實(shí)施例74-(3-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺 將如參考例3所述制備的4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(50mg，0.09mmol)在冰乙酸(2mL)中與3-氨基苯甲酰胺(24.5mg，0.18mmol)混合并在80℃下振搖24小時(shí)。所得到的混合物直接通過制備HPLC-MS純化，得到4-(3-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(42.9mg，收率73％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.54(s，1H)，10.65(s，1H)，9.96(s，1H)，9.68(s，1H)，8.59(d，J＝13.1Hz，1H)，8.51(s，1H)，8.50(s，1H)，8.45(s，1H)，8.41(s，1H)，8.19(d，J＝10.1Hz，2H)，8.09(d，J＝7.9Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.83(d，J＝3.9Hz，1H)，7.58(d，J＝8.2Hz，1H)，7.57(d，J＝4.7Hz，1H)，7.43(t，J＝7.9Hz，1H)，7.35(s，1H)，7.30(d，J＝8.5Hz，1H)，7.08(d，J＝3.9Hz，1H)，2.43(s，3H)，2.34(s，3H)；ESIMS m/z 654.1(M++1)。
實(shí)施例84-(3-氨磺?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺 將如參考例3所述制備的4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(50mg，0.09mmol)在冰乙酸(2mL)中與3-氨基苯磺酰胺(31mg，0.18mmol)混合并在80C下振搖24小時(shí)。所得到的混合物直接通過制備HPLC-MS純化，得到4-(3-氨磺?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺(35.3mg，收率57％)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.51(s，1H)，10.64(s，1H)，10.10(s，1H)，9.58(s，1H)，8.60(s，1H)，8.51(s，1H)，8.50(s，1H)，8.29(s，1H)，8.17(d，J＝8.1Hz，2H)，8.14(s，1H)，7.87(d，J＝3.9Hz，1H)，7.59(d，J＝1.8Hz，1H)，7.57(d，J＝7.6Hz，1H)，7.53(d，J＝5.9Hz，1H)，7.37(s，2H)，7.30(d，J＝8.5Hz，1H)，7.11(d，J＝3.9Hz，1H)，2.44(s，3H)，2.33(s，3H)；ESIMS m/z 690.1(M++1)。
通過重復(fù)上述實(shí)施例中描述的方法，利用適宜的起始材料，得到如表1所述的下列式I化合物。
表1




活性測定測定了與母本32D細(xì)胞相比本發(fā)明化合物選擇性抑制表達(dá)BCR-Abl的32D細(xì)胞(32D-p210)的細(xì)胞增殖的能力。測試選擇性抑制這些BCR-Abl轉(zhuǎn)化的細(xì)胞增殖的化合物對于表達(dá)野生型或突變型BCR-Abl的Ba/F3細(xì)胞的抗增殖活性。另外還測定了化合物抑制B-RAF的能力。
抑制細(xì)胞BCR-Abl依賴性增殖(高通量方法)所使用的鼠科細(xì)胞系是用BCR-Abl cDNA轉(zhuǎn)化的32D造血祖細(xì)胞系(32D-p210)。這些細(xì)胞保持在補(bǔ)充有青霉素50μg/mL、鏈霉素50μg/mL和L-谷氨酸200mM的RPMI/10％胎牛血清(RPMI/FCS)中。未轉(zhuǎn)化的32D細(xì)胞保持在類似條件下并加有15％WEHI條件培養(yǎng)基作為IL3源。
將50μl 32D或32D-p210細(xì)胞懸浮液以每孔5000個(gè)細(xì)胞的密度涂覆到Greiner 384孔微孔板(黑色)中。在每個(gè)孔中加入50nL的試驗(yàn)化合物(1mM，在DMSO儲備溶液中)(STI571作為陽性對照)。在37℃、5％CO2下將細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)。在各孔中加入10μL 60％的Alamar Blue溶液(Tek診斷劑)并將細(xì)胞再培養(yǎng)24小時(shí)。使用AcquestTM系統(tǒng)(Molecular Devices)測定熒光密度(530nm處激發(fā)，580nm處發(fā)射)。
抑制細(xì)胞BCR-Abl依賴性增殖將32D-p210細(xì)胞以每孔15000個(gè)細(xì)胞的密度涂覆到96孔TC板中。向各孔中加入50μL試驗(yàn)化合物的兩倍系列稀釋液(Cmax為40μM)(STI571作為陽性對照)。將細(xì)胞在37℃、5％CO2下培養(yǎng)48小時(shí)后，向各孔中加入15μL的MTT(Promega)并將細(xì)胞再培養(yǎng)5小時(shí)。通過分光光度法測定570nm處的光密度并通過量效曲線確定50％抑制作用所需的化合物的濃度，即IC50值。
對細(xì)胞周期分布的影響將32D和32D-p210細(xì)胞以每孔2.5×106個(gè)細(xì)胞并存在于5mL培養(yǎng)基中的形式加入6孔TC板中并以1或10μM的濃度加入試驗(yàn)化合物(STI571作為對照)。然后，在37℃、5％CO2下培養(yǎng)細(xì)胞24或48小時(shí)。用PBS洗滌2ml細(xì)胞懸浮液，在70％EtOH中固定1小時(shí)并用PBS/EDTA/RNase A處理30分鐘。加入碘化丙錠(Propidium iodide Cf＝10μg/ml)并在FACScaliburTM系統(tǒng)(BD Biosciences)上通過流式細(xì)胞儀測定熒光強(qiáng)度。本發(fā)明試驗(yàn)化合物顯示對32D-p210細(xì)胞具有細(xì)胞凋亡作用但不誘導(dǎo)32D母本細(xì)胞凋亡。
對細(xì)胞BCR-Abl自磷酸化的作用使用c-abl特異性捕獲抗體和抗磷酸酪氨酸抗體用捕獲Elisa測定BCR-Abl的自磷酸化作用。將32D-p210細(xì)胞以每孔2×105個(gè)細(xì)胞并存在于50μL培養(yǎng)基中的形式加入96孔TC板中。每孔加入50μL試驗(yàn)化合物的兩倍系列稀釋液(Cmax為10μM，STI571作為陽性對照)。在37℃、5％CO2下培養(yǎng)細(xì)胞90分鐘。然后，細(xì)胞在冰上用150μL含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的溶胞緩沖液(50mM Tris-HCl，pH7.4，150mM NaCl，5mM EDTA，1mM EGTA和1％NP-40)處理1小時(shí)。將50μL細(xì)胞溶解產(chǎn)物加到96孔光學(xué)板中，該板事先用抗-abl特異性抗體涂覆并封閉。在4℃下培養(yǎng)該板4小時(shí)。用TBS-吐溫20緩沖液洗滌后，加入50μL堿性磷酸酶結(jié)合的抗-磷酸酪氨酸抗體并將該板在4℃下培養(yǎng)過夜。用TBS-吐溫20緩沖液洗滌后，加入90μL發(fā)光底物并用AcquestTM系統(tǒng)(Molecular Devices)定量測定發(fā)光情況。所測試的本發(fā)明化合物以劑量依賴性方式抑制表達(dá)BCR-Abl的細(xì)胞的增殖并抑制細(xì)胞BCR-Abl的自磷酸化。
對表達(dá)突變型BCR-Abl的細(xì)胞增殖的影響測試本發(fā)明化合物對表達(dá)野生型或突變型BCR-Abl的Ba/F3細(xì)胞(G250E、E255V、T315I、F317L、M351T)的抗增殖作用，這些細(xì)胞對STI571耐受或?qū)ζ涿舾行越档?。?0、3.3、1.1和0.37μM的濃度如上所述(培養(yǎng)基中不含IL3)測試這些化合物對表達(dá)突變型-BCR-Abl的細(xì)胞和未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的抗增殖作用。由如上所述獲得的量效曲線確定對未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞沒有毒性的化合物的IC50值。
B-RAF測試本發(fā)明化合物抑制B-RAF活性的能力。在黑色壁和透明底的384孔MaxiSorp板(NUNC)中進(jìn)行測定。在DPBS中稀釋底物IκBα(1∶750)并在各孔中加入15μL。在4℃下將板培養(yǎng)過夜并在EMBLA板洗滌器上用TBST(25mM Tris，pH8.0，150mM NaCl和0.05％吐溫-20)洗滌3次。在室溫下，將板用Superblock(15μL/孔)封閉3小時(shí)，用TBST洗滌3次并適當(dāng)干燥(pat-dried)。將含有20μM ATP(10μL)的測定緩沖液加到各孔中，然后加入100nL或500nL化合物。將B-RAF在測定緩沖液中稀釋(1μL稀釋至25μl)中并將10μl稀釋的B-RAF加到各孔中(0.4μg/孔)。在室溫下將該板培養(yǎng)2.5小時(shí)。通過用TBST洗滌該板6次來終止激酶反應(yīng)。在Superblock中稀釋Phosph-IκBα(Ser32/36)抗體(1∶10,000)并將15μL加到各孔中。將板在4℃下培養(yǎng)過夜并用TBST洗滌6次。在Superblock中稀釋AP-結(jié)合的山羊-抗-小鼠IgG(1∶1,500)并將15μL加到各孔中。在室溫下培養(yǎng)該板1小時(shí)并用TBST洗滌6次。在各孔中加入15μL Attophos AP底物并在室溫下培養(yǎng)15分鐘。使用熒光強(qiáng)度Nanxin BBT陰離子(505二色性鏡)在Acquest或Analyst GT上讀板。
Upstate Kinase ProfilerTM-放射-酶學(xué)過濾器結(jié)合測定法評價(jià)本發(fā)明化合物抑制各種激酶(激酶的部分非限定性例子包括BMX、CSK、TrkB、FGFR3、Fes、Lck、B-RAF、C-RAF、MKK6、SAPK2α和SAPK2β)的能力。按照常規(guī)方法以10μM的最終濃度一式兩份地測試化合物。需要注意的是激酶緩沖液組合物和底物隨“Upstate KinaseProfilerTM”中激酶的不同而進(jìn)行變化。在置于冰上的eppendorf中混合激酶緩沖液(2.5μL，10倍濃度，需要時(shí)含有MnCl2)、活性激酶(0.001-0.01單位；2.5μL)、存在于激酶緩沖液中的特異性或多聚(Glu4-Tyr)肽(5-500μM或0.01mg/ml)以及激酶緩沖液(50μM；5μl)。加入Mg/ATP混合物(10μL；67.5(或33.75)mM MgCl2、450(或225)μM ATP和1μCi/μl[γ-32P]-ATP(3000Ci/mmol))并在約30℃下將反應(yīng)產(chǎn)物保溫約10分鐘。將反應(yīng)混合物(20μl)點(diǎn)在2cm×2cm P81(磷酸纖維素，用于帶正電的肽底物)或Whatman No.1(用于多聚(Glu4-Tyr)肽底物)方形紙上。用0.75％磷酸洗滌該方形紙4次，每次5分鐘，然后用丙酮洗滌一次，洗滌5分鐘。將該方形紙轉(zhuǎn)移到閃爍管中，加入5ml閃爍混合液并用Beckman閃爍計(jì)數(shù)器測定摻入肽底物中的32P(cpm)。計(jì)算每個(gè)反應(yīng)的抑制百分?jǐn)?shù)。
游離形式或可藥用鹽形式的式I化合物顯示出有價(jià)值的藥理特性，例如，如本申請?bào)w外試驗(yàn)所示。例如，式I化合物對野生型BCR-Abl以及G250E、E255V、T315I、F317L和M351T BCR-Abl突變型優(yōu)選顯示1×10-10到1×10-5M的IC50，優(yōu)選小于100nM。
例如4-(3-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(實(shí)施例7)對野生型、G250E、E255V、T315I、F317L和M351T BCR-Abl的IC50分別為5nM、47nM、31nM、115nM、9nM和5nM。10μM濃度時(shí)，化合物對Abl、BCR-Abl、Bmx、CSK、TrkB、FGFR3、Fes、Lck、B-RAF、C-RAF、MKK6、SAPK2α和SAPK2β激酶的抑制活性大于50％，優(yōu)選大于75％。例如，4-(3-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(實(shí)施例7)顯示的抑制百分?jǐn)?shù)為Bmx(100％)、c-Raf(99％)、CSK(100％)、Fes(98％)、FGFR3(95％)、Lck(96％)、MKK6(98％)、SAPK2α(100％)、SAPK2β(100％)和TrkB(98％)；4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺(實(shí)施例3)對野生型、G250E、E255V、T315I、F317L和M351TBCR-Abl的IC50分別為22nM、170nM、220nM、370nM、50nM和29nM。化合物對B-Raf的IC50為32nM。10μM濃度時(shí)，化合物顯示的抑制百分?jǐn)?shù)為Bmx(100％)、c-Raf(83％)、CSK(90％)、Fes(82％)、Lck(95％)、SAPK2β(95％)和TrkB(100％)。
可以理解的是，本文所述的實(shí)施例和具體實(shí)施方式
僅僅是出于舉例說明的目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以據(jù)此進(jìn)行各種修飾或改變，并且這些修飾和改變均包括在本申請的精神和范圍內(nèi)以及所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。本文中引證的所有公開出版物、專利和專利申請的全部內(nèi)容均引入本文作為參考。
權(quán)利要求
1.式I化合物及其可藥用鹽、水合物、溶劑化物和異構(gòu)體 其中W選自CH和N；Y選自C、S和S(O)；Z是二價(jià)基團(tuán)，選自-Y(O)NR5-和-NR5Y(O)-；其中Y選自C、S和S(O)；并且R5選自氫和C1-12烷基；R1選自氫、鹵素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和-NR6R7；其中R6選自氫和C1-6烷基；R7選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；或者R6和R7與R6和R7共同連接的氮一起形成C3-8雜環(huán)烷基或C5-10雜芳基；其中R7或R6和R7組合基團(tuán)中的任何芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基均可以是未取代的或被1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代鹵素、氰基、硝基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵素取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素取代的C1-6烷氧基、-XNR8R8、-XC(O)NR8R8、-XC(O)NR8XOR8、-XS(O)0-2NR8R8、-XS(O)0-2R8、-XNR8S(O)0-2R8、-XNR8C(O)R8、-XNR8SR8、-XP(O)NR8R8、-XCR8(OR8)R8、-XOC(O)R8、-XOR8和-XOR9；其中X是鍵或C1-12亞烷基，R8獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基，R9選自C6-10芳基和C5-10雜芳基；R2選自氫和C1-6烷基；R3選自氫、羥基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、巰基、鹵素、硝基和氰基；n為0、1或2；R4選自氫、鹵素、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、鹵素取代的C1-6烷基、C1-12烷氧基、鹵素取代的C1-12烷氧基和-XR10；其中X為鍵或C1-6亞烷基，R10選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R10中的任何芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基均是未取代的或被選自下列的基團(tuán)所取代鹵素、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、鹵素取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基和鹵素取代的C1-6烷氧基；m為1、2或3；并且其中苯環(huán)A和B可獨(dú)立地具有最多4個(gè)由-N＝替代的-C＝基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中W是N；Y是C；Z為選自-C(O)NR5-和-NR5C(O)-的二價(jià)基團(tuán)；R5選自氫和C1-6烷基；R1選自氫、鹵素、羥基和-NR6R7；其中R6選自氫和C1-6烷基；R7選自C6-10芳基和C5-10雜芳基；或者R6和R7與R6和R7共同連接的氮一起形成C3-8雜環(huán)烷基；其中R7或R6和R7組合基團(tuán)中的任何芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基均可以是未取代的或被1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代鹵素、氰基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、鹵素取代的C1-6烷基、鹵素取代的C1-6烷氧基、-XNR8R8、-XC(O)NR8R8、-XC(O)NR8XOR8、-XS(O)2NR8R8、-XSR8、-XNR8S(O)2R8、-XNR8C(O)R8、-XOC(O)R8、-XOR8和-XOR9；其中X是鍵或C1-6亞烷基，R8為氫或C1-6烷基，R9為C6-10芳基；R2為氫或C1-6烷基；R3為C1-6烷基；n為1；并且R4選自鹵素、鹵素取代的C1-6-烷基和-XR10；其中X為鍵或C1-6亞烷基，R10選自C5-10雜芳基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R10中的任何雜芳基或雜環(huán)烷基均是未取代的或被C1-6烷基取代的；并且m為1、2或3。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中Z為選自-C(O)NH-和-NHC(O)-的二價(jià)基團(tuán)。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中R1選自氫、鹵素、羥基和-NHR7；其中R7選自苯基和吡啶基；或者R6和R7與R6和R7共同連接的氮一起形成嗎啉-4-基；其中R7或R6和R7組合基團(tuán)中的任何芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基均可以是未取代的或被1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代鹵素、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、二甲基氨基、氨基、氨基羰基、甲基-氨基羰基、氨基磺酰基、1-羥基-乙基、羥基甲基、乙酰氧基-甲基、甲硫基、苯氧基、甲基-羧基-甲基、丁基-氨基-磺?；⒓谆?、異丙烯基、甲氧基-乙基-氨基-羰基、1-羥基-1-甲基-乙基、甲基磺?；?氨基和甲基-羰基-氨基；并且R3為氫或甲基。
5.權(quán)利要求2的化合物，其中R4選自鹵素、三氟甲基和-XR10；其中X為鍵或亞甲基；R10選自咪唑基、哌嗪基和嗎啉-4-基；其中任何雜芳基或雜環(huán)烷基均是未取代的或被甲基取代的。
6.權(quán)利要求1的化合物，選自4-(3-三氟甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺；4-(4-三氟甲基-1-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氨磺酰基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-[3-(1-羥基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-(3-氨基甲酰基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-(3-氨磺?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-[3-(1-羥基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[5-(3-氟-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基)-2-甲基-苯基]-酰胺；4-羥基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-(4-氨基甲酰基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-羥基甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；乙酸3-(7-{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基氨基甲?；鶀-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基氨基)-芐酯；吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(4-三氟甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺；4-(4-三氟甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[4-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺；4-(4-三氟甲氧基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺；4-(3-溴-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[3-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基甲?；?-苯基]-酰胺；4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-溴-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-甲硫基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(吡啶-3-基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-苯氧基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-羥基甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-丁基氨磺?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(4-氟-2-甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氯-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-間-甲苯基氨基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-氰基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；乙酸3-(7-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基氨基甲?；鶀-7H-環(huán)戊二烯并嘧啶-4-基氨基)-芐酯；4-(3-異丙烯基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-[3-(2-甲氧基-乙基氨基甲?；?-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-[3-(1-羥基-1-甲基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-[3-(1-羥基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[5-(3-氟-5-三氟甲基-苯甲?；被?-2-甲基-苯基]-酰胺；4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-羥基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-[3-(1-羥基-乙基)-苯基氨基]-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-羥基甲基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-甲磺酰基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-乙酰基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-氨磺酰基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(4-氨基甲酰基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；4-(3-甲基氨基甲?；?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基]-苯基}-酰胺；4-(3-乙?；被?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-嗎啉-4-基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺；4-嗎啉-4-基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸[5-(3-氟-5-三氟甲基-苯甲?；被?-2-甲基-苯基]-酰胺；4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸(3-{[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-甲基}-苯基)-酰胺；和4-(3-二甲基氨基-苯基氨基)-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-甲酸{2-甲基-3-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵠-苯基}-酰胺。
7.一種包含治療有效量的權(quán)利要求1的化合物和可藥用賦形劑的藥物組合物。
8.一種治療動(dòng)物疾病的方法，其中抑制激酶活性可預(yù)防、抑制或改善疾病的病理和/或癥狀，該方法包括給予動(dòng)物治療有效量權(quán)利要求1的化合物。
9.權(quán)利要求8的方法，其中的激酶選自Abl、BCR-Abl、Bmx、CSK、TrkB、FGFR3、Fes、Lck、B-RAF、C-RAF、MKK6、SAPK2α和/或SAPK2β激酶。
10.權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療動(dòng)物疾病的藥物中的用途，其中，Abl、BCR-Abl、Bmx、CSK、TrkB、FGFR3、Fes、Lck、B-RAF、C-RAF、MKK6、SAPK2α和/或SAPK2β的激酶活性對所述疾病的病理和/或癥狀起作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類新的化合物、含有這些化合物的藥物組合物和使用這些化合物來治療或預(yù)防與激酶活性異常或失調(diào)有關(guān)的疾病或病癥，特別是與Abl、BCR－Abl、Bmx、CSK、TrkB、FGFR3、Fes、Lck、B－RAF、C－RAF、MKK6、SAPK2α和SAPK2β激酶異常激活有關(guān)的疾病或病癥的方法。
文檔編號C07D471/02GK1842529SQ200480024575
公開日2006年10月4日 申請日期2004年8月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月28日
發(fā)明者丁強(qiáng), N·S·格雷, 李兵, 劉異, 宇野哲郎 申請人:Irm責(zé)任有限公司